一種從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，該方法包括如下工藝步驟：（1）將西紅花藥材以95%乙醇溶液浸泡提取，收集濾液；（2）將濾液濃縮至干；（3）取濃縮干的固體與纖維素酶質(zhì)量比1:1加入pH5.2醋酸-醋酸鈉緩沖液中，放入水浴恒溫振蕩器中轉(zhuǎn)化反應(yīng)24-36小時(shí)；（4）經(jīng)酶解轉(zhuǎn)化后的沉淀濾紙過濾、干燥；（5）干燥后的固體加入DMF熱溶，濾液冷凍析晶；（6）冷凍析晶固體過濾、干燥，得純度高達(dá)98.5%以上的西紅花酸單體。本發(fā)明生產(chǎn)周期短，操作簡便，工藝簡單穩(wěn)定，成本易控制，生產(chǎn)過程中不使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿，對環(huán)境不破壞，純化分離出來的單體西紅花酸純度高，可作為含量測定的對照品使用。
【專利說明】一種從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從植物中分離與純化化合物單體的方法，具體涉及一種從西紅花 中提取分離及純化西紅花酸單體的方法，屬于化合物單體的分離純化【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 西紅花為鳶尾科植物番紅花的干燥柱頭。多年生草本植物，高10-15cm，葉線形。 花頂生，花被6，淡紫色，長4-6cm，雄蕊3，雌蕊1，子房下位，花柱細(xì)長，黃色柱頭3，伸出花被 筒外后下垂，深紅色，頂端略膨大。蒴果。性微寒，味甘。能活血化瘀、涼血解毒、解郁安神。 用于治療經(jīng)閉、產(chǎn)后淤阻、溫毒發(fā)斑、憂郁痞悶、驚悸發(fā)狂等病癥。
[0003] 西紅花酸在西紅花藥材中含量很少，而西紅花苷系類在西紅花藥材中含量較多， 如何才能得到大量的較高純度的西紅花酸，通過對西紅花酸與西紅花苷系類的結(jié)構(gòu)式進(jìn)行 比較發(fā)現(xiàn)，西紅花苷系類化合物為西紅花酸的結(jié)構(gòu)上接了一些不同數(shù)目的葡萄糖，那么通 過轉(zhuǎn)化酶解掉葡萄糖就可以得到含量較少的西紅酸，西紅花酸結(jié)構(gòu)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于包括如下工藝步驟： (1) 提取 取西紅花藥材，加入體積百分比濃度為95%的乙醇溶液，加入量按照藥材重量：乙醇溶 液體積=lKg: 10L計(jì)算，室溫浸泡提取3-4次，每次2小時(shí)，過濾，收集、合并濾液； (2) 濃縮 將步驟（1)收集、合并的濾液，旋蒸減壓回收乙醇，濃縮后的固體轉(zhuǎn)移至容器中50°C鼓 風(fēng)干燥5-8小時(shí)，得濃縮至干固體，待下一步處理； (3) 酶解轉(zhuǎn)化 取步驟（2)干燥后的固體，并與纖維素酶以質(zhì)量比1:1加入到pH5. 2的醋酸-醋酸鈉 緩沖液中，然后置于溫度50°C、頻率60r/min的水浴恒溫振蕩器中轉(zhuǎn)化反應(yīng)24-36小時(shí)，反 應(yīng)完成后放置至室溫，轉(zhuǎn)化物析出并沉淀；所述醋酸-醋酸鈉緩沖液的體積用量為干燥固 體質(zhì)量的30倍； (4) 固體過濾、干燥 將步驟（3)酶解轉(zhuǎn)化后的沉淀用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥5-8小時(shí) 至干； (5) DMF結(jié)晶、過濾 將步驟（4)干燥后的固體加入為其重量30倍體積的DMF中，放入50°C水浴鍋中熱溶 后，溶液濾紙過濾，濾液再放入冰箱中冷凍析晶； (6) 產(chǎn)品回收 將步驟（5)冷凍析晶溶液用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥，得純度98%以 上的西紅花酸單體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于： 步驟（3)中所述pH5. 2醋酸-醋酸納緩沖液的配制方法為：取7. 9mL 0. 2mol的醋酸鈉 溶液，加入到2. lmL 0. lmol的醋酸溶液中，即可得lOmLpH等于5. 2的醋酸-醋酸鈉溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于： 步驟（5)中所述冷凍析晶的溫度為-5°C?-20°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于：包 括如下工藝步驟： (1) 提取 取西紅花藥材50g，加入500mL體積百分比濃度為95%的乙醇溶液，浸泡提取3次，每 次2小時(shí)，過濾，收集、合并濾液； (2) 濃縮 將步驟（1)收集、合并的濾液，旋蒸減壓回收乙醇，濃縮后的固體轉(zhuǎn)移至容器中50°C鼓 風(fēng)干燥5-8小時(shí)，得濃縮至干固體8克，待下一步處理； (3) 酶解轉(zhuǎn)化 取步驟（2)干燥后的固體8克與8克纖維素酶，加入240mL pH5. 2醋酸-醋酸鈉緩沖 液中，置于溫度50°C、頻率60r/min的水浴恒溫振蕩器中轉(zhuǎn)化反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完成后放置 至室溫，轉(zhuǎn)化物析出并沉淀； (4) 固體過濾、干燥 將步驟（3)酶解轉(zhuǎn)化后的沉淀用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥5-8小時(shí) 至干，得干燥后的固體3克； (5) DMF結(jié)晶、過濾 將步驟（4 )干燥后的固體3克加入150mL DMF中，放入50 °C水浴鍋中熱溶，溶液濾紙過 濾，濾液再放入_5°C?_20°C冰箱中冷凍析晶； (6) 產(chǎn)品回收 將步驟（5)冷凍析晶溶液用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥，得到西紅花 酸單體1. 3克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)3天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為1. 3/50X 100%=2. 6% ; 利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測得結(jié)果為99. 08%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于：包 括如下工藝步驟： (1) 提取 取西紅花藥材250g，加入2500mL體積百分比濃度為95%的乙醇溶液，浸泡提取3次， 每次2小時(shí)，過濾，收集、合并濾液； (2) 濃縮 將步驟（1)收集、合并的濾液，旋蒸減壓回收乙醇，濃縮后的固體轉(zhuǎn)移至容器中50°C鼓 風(fēng)干燥5-8小時(shí)，得濃縮至干固體47克，待下一步處理； (3) 酶解轉(zhuǎn)化 取步驟（2)干燥后的固體47克與47克纖維素酶，加入1410mL pH5. 2醋酸-醋酸鈉緩 沖液中，置于溫度50°C、頻率60r/min的水浴恒溫振蕩器中轉(zhuǎn)化反應(yīng)30小時(shí)，反應(yīng)完成后放 置至室溫，轉(zhuǎn)化物析出并沉淀； (4) 固體過濾、干燥 將步驟（3)酶解轉(zhuǎn)化后沉淀用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥5-8小時(shí)至 干，得干燥后的固體17克； (5) DMF結(jié)晶、過濾 將步驟（4)干燥后的固體17克加入510mL DMF中，放入50°C水浴鍋中熱溶，溶液濾紙 過濾，濾液放入-5 °C?-20 °C冰箱中冷凍析晶； (6) 產(chǎn)品回收 將步驟（5)冷凍析晶溶液用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥，得到西紅花 酸單體7. 2克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)4天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為7. 2/250X 100%=2. 88% ; 利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測得結(jié)果為98. 90%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從西紅花中分離純化西紅花酸單體的方法，其特征在于：包 括如下工藝步驟： (1)提取 取西紅花藥材l〇〇〇g，加入10L體積百分比濃度為95%的乙醇溶液，浸泡提取4次，每 次2小時(shí)，過濾，收集、合并濾液； (2) 濃縮 將步驟（1)收集、合并的濾液，旋蒸減壓濃縮回收乙醇，得濃縮至近干固體，轉(zhuǎn)移至容器 中鼓風(fēng)干燥得干燥固體202克，待下一步處理； (3) 酶解轉(zhuǎn)化 取步驟（2)干燥后的固體202克與202克纖維素酶，加入6060mLpH5. 2醋酸-醋酸鈉 緩沖液中，放入水浴恒溫振蕩器中，調(diào)溫度50°C、頻率60r/min，設(shè)置轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間為36小 時(shí)，反應(yīng)完成后放置至室溫，轉(zhuǎn)化物析出并沉淀； (4) 固體過濾、干燥 將步驟（3)酶解轉(zhuǎn)化后的沉淀用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥5-8小時(shí) 至干，得干燥后的固體71克； (5) DMF結(jié)晶、過濾 將步驟（4)中干燥后的固體71克加入2130mL DMF，放入50°C水浴鍋中熱溶，溶液濾紙 過濾，濾液放入-5 °C?-20 °C冰箱中析晶； (6) 產(chǎn)品回收 將步驟（5)冷凍析晶溶液用濾紙過濾，固體放入鼓風(fēng)干燥箱中50°C干燥，得到西紅花 酸單體29. 5克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)6天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為29. 5/1000X 100%=2. 95% ; 利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測得結(jié)果為99. 10%。
【文檔編號】C07C57/13GK104480154SQ201410839877
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】白蘭輝, 文煥松, 陳沖, 夏柯, 劉丁 申請人:成都普思生物科技有限公司