從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物及其方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物及其方法和用途，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）、式（Ⅱ）所示。干燥的靈芝粉碎后加入乙醇加熱回流提取，減壓濃縮至無(wú)醇味，加水分散后用乙酸乙酯萃取，經(jīng)回收溶劑得乙酸乙酯萃取物以及水相部分；乙酸乙酯萃取物用甲醇完全溶解，以硅膠為載體，干燥后，濕法上樣，用硅膠柱色譜分離純化，收集目標(biāo)物層析液，減壓濃縮干后，甲醇溶解，過濾，濾液用C18反相色譜填料高壓制備分離，收集相對(duì)應(yīng)的色譜峰，濃縮收集液至干分別得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ兩種白色粉末產(chǎn)物，該兩種化合物可作為在制備抗菌藥物中的用途。
【專利說(shuō)明】從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物及其方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化合物及其提取方法和用途，具體涉及從靈芝中提取分離的兩種 具有藥理活性的化合物及其方法和用途，屬于植物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝是一類大型真菌，屬于層菌綱非褶菌目靈芝科靈芝屬，在我國(guó)藥用已有2000 多年的歷史。周朝《列子》一書中就有"朽壤之上，有菌者芝"的記載；中國(guó)最早的本草學(xué)專 著《神農(nóng)本草經(jīng)》將靈芝列為上品，根據(jù)其形態(tài)和顏色分為赤芝、黑芝、青芝、白芝、黃芝和紫 芝六種，并分別描述了各自的性味和主治；對(duì)靈芝"滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本"作用的論述更可見 于歷代醫(yī)藥學(xué)專著中，如《新修本草》、《名醫(yī)別錄》、《本草綱目》等，可見我國(guó)古代學(xué)者對(duì)靈 芝的重視。近三十年來(lái)，中外學(xué)者對(duì)靈芝(主要是赤芝）的、菌絲體、抱子粉和發(fā)酵液進(jìn)行了 廣泛深入的研究，極大促進(jìn)了靈芝的發(fā)展。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，靈芝的藥效已逐漸得 到證實(shí)，通過對(duì)靈芝的生物活性物質(zhì)研究，發(fā)現(xiàn)靈芝中主要含三萜類、多糖類、留體類、生物 堿類、苯并啦酮類、脂肪酸類等化學(xué)成分類型，具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、降血糖、降血脂、抗腫瘤、神經(jīng) 保護(hù)、增進(jìn)肝臟合成血清蛋白質(zhì)、防止衰老等功效。由于靈芝還具有極其重要的經(jīng)濟(jì)意義， 因而廣泛被人們所重視，同時(shí)科研領(lǐng)域也涌現(xiàn)出對(duì)靈芝的化學(xué)成分（藥效物質(zhì)基礎(chǔ)）及其藥 理研究的高潮。
[0003] 靈芝中三萜類化合物，味苦，并多為高度氧化的羊毛留燒型衍生物，也存在羽扇 豆燒型三萜（如Lupen)，按照分子中含有的C原子數(shù)可以分為C24 (如靈芝酮A，靈芝酮B 等），C27 (如赤芝酸A，B，C等）和C30 (如靈芝酸A，靈芝酸B，靈芝酸C等）三大基本骨架， 也可依據(jù)它的側(cè)鏈和功能團(tuán)的差異分為五種基本結(jié)構(gòu)類型。自1982年Kubota等首次從赤 芝中分離獲得三萜類新型化合物，至1991年從靈芝屬中共分離到近140種三萜新化合物， 并在其藥理作用及其作用機(jī)制上進(jìn)行綜述。相關(guān)專利申請(qǐng)及文獻(xiàn)報(bào)道如下： 1、"靈芝三萜類化合物的提取"，《上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版)》2013年02期，公開 了用氯仿回流提取木屑栽培靈芝，氯份提取濃縮液經(jīng)碳酸氫鈉溶液萃取，鹽酸酸化后，析出 絮狀沉淀.沉淀再用氯仿提取，經(jīng)減壓干燥得提取物粗品，三次提取實(shí)驗(yàn)得率為0.41%?0 .93%。粗品對(duì)Salkowski，Lieberman,磷鶴酸和香草醒等試劑呈三廠類特有的陽(yáng)性反應(yīng)， 初步可以肯定此提取粗品為三萜類化合物。
[0004] 2、中國(guó)專利CN102311475A公開了從一種從靈芝中分離出的新化合物及其制備方 法和醫(yī)藥用途，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：其制備方法為：將靈芝用醇或醇溶液提取一次或2次以 上，過濾，收集濾液，再減壓濃縮干燥，獲得醇提取物；將醇提取物加水，以石油醚萃取脫脂 后，再以乙酸乙酯萃取，獲得的乙酸乙酯萃取液再以飽和NaHCO 3水溶液萃取，取乙酸乙酯相 蒸干，獲得粗品；將獲得的粗品進(jìn)行色譜分離純化，得到上述化合物。本發(fā)明所述的化合物 能作為治療腫瘤的藥物。

【權(quán)利要求】
1. 從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式（I)、式（II)所示：
化學(xué)名稱為：30，70，150 -二輕基-11-撰基-羊毛留燒_8_稀-24 - 20內(nèi)醋；
化學(xué)名稱為：30，70，120-三羥基-11，15-二羰基-羊毛甾烷-8-烯-24 - 20內(nèi)酯。
2. 如權(quán)利要求1所述的從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物，其特征在于：所述兩種 化合物為10%硫酸乙醇顯色呈紫紅色的三萜類化合物。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物，其特征在于：式 (I)所示化合物的電噴霧電離質(zhì)譜ESI-MS顯示：正離子483. 27[M+Na]+，943. 57[2M+Na]+; 1403. 86[3M+Na]+;負(fù)離子495. 25[M-C1] _，即該化合物分子量為460 ;且高分辨質(zhì)譜給出的 準(zhǔn)分子離子峰為：483. 1125 [M+Na]+，計(jì)算值為483. 1118[M+Na]+，分子式為C27H4006。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物，其特征在于：式 (II)所示化合物的電噴霧電離質(zhì)譜ESI-MS顯示：正離子497. 27[M+Na]+，971. 28[2M+Na]+; 負(fù)離子473. 70[M-Hr，即該化合物分子量為474 ;且高分辨質(zhì)譜給出的準(zhǔn)分子離子峰為： 473. 7123 [M-H]'計(jì)算值為 473. 7115[M-Hr，分子式為C27H3807。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物的方法，其特征在于： 具體工藝步驟是： A. 將干燥的靈芝粉碎后用8-10倍重量濃度為85%的乙醇加熱回流提取3-5次，每次 2小時(shí)，減壓濃縮至無(wú)醇后，將得到的濃縮液體按體積比1:5-10倍加水進(jìn)行分散處理； B. 將水分散體用等體積乙酸乙酯萃取3-5次，回收溶劑得乙酸乙酯萃取物及水相部 分； C.將乙酸乙酯萃取物用甲醇完全溶解，然后以硅膠為載體，干燥后，濕法上樣，用硅膠 柱色譜分離純化，收集目標(biāo)物層析液，減壓濃縮干后，用甲醇溶解，過濾，濾液用C18反相色 譜填料高壓制備分離，收集相對(duì)應(yīng)的色譜峰，濃縮收集液至干分別得到化合物I和化合物 II兩種白色粉末產(chǎn)物。
6. 如權(quán)利要求5所述的從靈芝中提取分離的藥用化合物的方法，其特征在于：所述硅 膠柱色譜分離：A:二氯甲烷B:甲醇，A:B(20:1) - (10:1)V/V為流動(dòng)相。
7. 如權(quán)利要求5或6所述的從靈芝中提取分離的藥用化合物的方法，其特征在于：所 述C18反相色譜填料高壓制備分離：A:乙腈B:0. 2%V/V乙酸水，A:B30:70V/V為流動(dòng)相； 檢測(cè)波長(zhǎng)252nm。
8. -種如權(quán)利要求1所述的從靈芝中提取分離的兩種藥用化合物在作為制備抗菌藥 物中的用途。
【文檔編號(hào)】C07J19/00GK104478983SQ201410838991
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】李波, 李啟發(fā), 夏柯, 文煥松, 劉丁 申請(qǐng)人:成都普思生物科技有限公司