一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,包括:(1)將七肽7AAP溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇七肽復(fù)合水凝膠微球,磷鎢酸POM溶于蒸餾水中;(2)室溫下取1-10ml POM水溶液加入到10-50μl 7AAP溶液中,稍微震蕩,靜置陳化2-12h,得到七肽復(fù)合水凝膠微球。本發(fā)明的操作簡便、反應(yīng)條件溫和,所使用的原材料無毒無污染,具有優(yōu)良的生物相容性;所得到的7AAP/POM復(fù)合水凝膠微球,粒徑較均一,形態(tài)較規(guī)整,同時(shí)還具有很好的溫度敏感性。
【專利說明】一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于多肽自組裝領(lǐng)域,特別涉及一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多肽是生物體內(nèi)固有的大分子,具有良好的生物可降解性和生物相容性。多肽自組裝是指在適當(dāng)條件下氨基酸殘基之間通過非共價(jià)鍵相互作用自發(fā)組合形成的一類結(jié)構(gòu)明確、構(gòu)造穩(wěn)定、具有某種理化性能的分子聚集體或超分子結(jié)構(gòu)。自從1992年,美國麻省理工學(xué)院的張曙光偶然從酵母蛋白中發(fā)現(xiàn)了能夠自組裝的離子短肽(由8?16個(gè)氨基酸構(gòu)成)以來,一系列的可自組裝的離子短肽被發(fā)現(xiàn)或者被設(shè)計(jì)出來,得到了各種各樣的自組裝結(jié)構(gòu),包括纖維、膜和水凝膠等。多肽或短肽自組裝成的納米材料在生物醫(yī)學(xué)工程中具有廣泛的潛在應(yīng)用,包括作為創(chuàng)傷修復(fù)的支架、組織工程支架、藥物釋放載體等。
[0003]七肽7AAP是一種新型多肽,其序列為IIe-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe,分子結(jié)構(gòu)見圖1,它對抑制生物體合成黑色素起著關(guān)鍵作用。7AAP分子中含有游離的氨基,故在酸性條件下帶正電,POM是一種常用的生化試劑,被應(yīng)用于沉淀蛋白質(zhì)、植物堿和某些氨基酸,它在水溶液中帶負(fù)電。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,該方法操作簡單、反應(yīng)條件溫和,所使用的原材料無毒無污染,生物相容性好,并且復(fù)合膠體微球具有很好的溫度敏感性。
[0005]本發(fā)明的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,包括:
[0006](I)將七肽7AAP溶于1,I, I, 3,3,3,-六氟_2_丙醇七肽復(fù)合水凝膠微球,磷鎢酸POM溶于蒸餾水中;
[0007](2)室溫下取1-1Oml POM水溶液加入到10-50 μ 17AAP溶液中,稍微震蕩,靜置陳化2-12h,得到七肽復(fù)合水凝膠微球。
[0008]步驟(I)中所述的七妝序列為Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe。
[0009]步驟(I)中所述的POM結(jié)構(gòu)為Keggin-type結(jié)構(gòu)。
[0010]步驟(2)中所述的POM水溶液的濃度為0.025X 1(Γ3-0.8X l(T3g/ml,7AAP溶液的濃度為 0.03-0.48g/ml。
[0011]步驟⑵中所述的POM水溶液的pH范圍為1-7。
[0012]步驟⑵中靜置陳化容器為5.0ml的EP管。.
[0013]本發(fā)明中改變復(fù)合水凝膠微球制備過程中的各種參數(shù),可以制得不同粒徑的復(fù)合水凝膠微球。
[0014]本發(fā)明的復(fù)合水凝膠微球粒徑較均一,形態(tài)較規(guī)整,同時(shí)還具有很好的溫度敏感性。而且可以通過改變復(fù)合水凝膠微球制備過程中的各種參數(shù)控制復(fù)合水凝膠微球的粒徑。相信該復(fù)合水凝膠微球通過進(jìn)一步包裹殼體將成功應(yīng)用于載體藥物釋放等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
[0015]有益效果
[0016](I)本發(fā)明的操作簡便、反應(yīng)條件溫和,所使用的原材料無毒無污染,具有優(yōu)良的生物相容性;
[0017](2)本發(fā)明所得到的復(fù)合水凝膠微球分散性好,粒徑較均一,形態(tài)較規(guī)整,同時(shí)還具有很好的溫度敏感性的優(yōu)點(diǎn)。
[0018](3)本發(fā)明制備復(fù)合水凝膠微球的方法,可以對微球的粒徑進(jìn)行有效的控制。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1為七肽7AAP的結(jié)構(gòu)式;
[0020]圖2為7AAP與POM在不同pH條件下自組裝得到的復(fù)合水凝膠微球的SEM圖:(a)pH = 3 ; (b) pH = 4 ; (c) pH = 5 ; (d) pH = 6 ;
[0021 ] 圖3為7AAP (a)、POM(b)還有7AAP/P0M(c)復(fù)合水凝膠微球的紅外光譜圖;
[0022]圖4為不同pH條件下7AAP與POM自組裝反應(yīng)液的濁度曲線圖;
[0023]圖5為pH = 3時(shí)制備的7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球在不同溫度下的濁度變化曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合具體實(shí)施例,進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解,這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解,在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后,本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改,這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
[0025]實(shí)施例1
[0026](I)配制7AAP溶液:將0.010g7AAP在室溫下溶解于盛有100 μ 11,I, 1,3,3,3,_六氟-2-丙醇的EP管中,超聲60s ;
[0027](2)配制POM溶液;將0.0065g POM溶解于盛有50mL蒸餾水的EP管中,超聲60s ;調(diào)節(jié)pH至I ;
[0028](3)制備7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球:用移液槍吸取1.0mL POM溶液加入盛有10.0 μ 17ΑΑΡ溶液的EP管中,用手稍微震蕩,靜置陳化2h即得到7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球。
[0029]實(shí)施例2
[0030](I)配制7AAP溶液:將0.01(^74八?在室溫下溶解于盛有10(^11,I, 1,3,3,3,_六氟-2-丙醇的EP管中,超聲60s ;
[0031](2)配制POM溶液;將0.0065gP0M溶解于盛有50ml蒸餾水的EP管中,超聲60s ;調(diào)節(jié)pH至4 ;
[0032](3)制備7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球:用移液槍吸取5mlP0M溶液加入盛有10.0 μ 17ΑΑΡ溶液的EP管中,用手稍微震蕩,靜置陳化6h即得到7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球。
[0033]實(shí)施例3
[0034](I)配制7AAP溶液:將0.010g7AAP在室溫下溶解于盛有100 μ 11,I, 1,3,3,3,_六氟-2-丙醇的EP管中,超聲60s ;
[0035](2)配制POM溶液;將0.0065g POM溶解于盛有50mL蒸餾水的EP管中,超聲60s ;調(diào)節(jié)pH至5 ;
[0036](3)制備7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球:用移液槍吸取1.0ml POM溶液加入盛有20.0 μ 17ΑΑΡ溶液的EP管中,用手稍微震蕩,靜置陳化2h即得到7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球。
[0037]實(shí)施例4
[0038](I)配制7AAP溶液:將0.010g7AAP在室溫下溶解于盛有100 μ 11,I, 1,3,3,3,_六氟-2-丙醇的EP管中,超聲60s ;
[0039](2)配制POM溶液;將0.0065g POM溶解于盛有50ml蒸餾水的EP管中,超聲60s ;調(diào)節(jié)pH至7 ;
[0040](3)制備7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球:用移液槍吸取1ml POM溶液加入盛有
50.0 μ 17ΑΑΡ溶液的EP管中,用手稍微震蕩,靜置陳化12h即得到7AAP/P0M復(fù)合水凝膠微球。
【權(quán)利要求】
1.一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,包括: (1)將七肽7AAP溶于1,I,I, 3,3,3,-六氟-2-丙醇七肽復(fù)合水凝膠微球,磷鎢酸POM溶于蒸餾水中; (2)室溫下取1-1OmlPOM水溶液加入到10-50 μ I 7ΑΑΡ溶液中,稍微震蕩,靜置陳化2_12h,得到七肽復(fù)合水凝膠微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,其特征在于:步驟(I)中所述的七妝序列為 I le-Gln-Ser-Pro-Hi s-Phe-Phe。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,其特征在于:步驟(I)中所述的POM結(jié)構(gòu)為Keggin-type結(jié)構(gòu)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,其特征在于:步驟⑵中所述的POM水溶液的濃度為0.025 X 10_3-0.8 X 10_3g/ml,7AAP溶液的濃度為0.03-0.48g/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,其特征在于:步驟(2)中所述的POM水溶液的pH范圍為1-7。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種七肽復(fù)合水凝膠微球的制備方法,其特征在于:步驟(2)中靜置陳化容器為5.0ml的EP管。
【文檔編號】C07K17/08GK104371021SQ201410648158
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月14日
【發(fā)明者】朱利民, 肖瑞秋, 聶華麗, 公曉 申請人:東華大學(xué)