一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷a的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，包括準備提取溶劑準備階段、混合階段、升溫提取階段、過濾離心階段、大孔樹脂吸附分離階段、分子膜分離階段、濃縮階段、放置階段、固液分離階段、溶劑漂洗階段、二次固液分離以及干燥，其中分子膜分離階段是將解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A的溶液合并收集。通過本發(fā)明的提取方法能使提取的萊鮑迪苷A純度達到97%以上，且該方法工藝路線簡單，對設備要求不高，而且具有低能耗、高產(chǎn)出、萊鮑迪苷A純度穩(wěn)定、徹底去除后苦味等優(yōu)點，適合工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點。
【專利說明】一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法
[0001]

【技術領域】
[0002]本發(fā)明屬于生物提取【技術領域】，具體涉及一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法。

【背景技術】
[0003]甜菊糖苷是從甜菊葉中提取分離得到的一種高甜度低熱能、味質好、且安全無毒的天然低熱糖源，其甜度為蔗糖的150?300倍，可以替代糖精或蔗糖，應用于各種食品、飲料中。甜菊糖苷還可以防止糖尿病、肥胖癥及小兒齲齒等疾病，是患者的理想甜味劑。但甜菊糖的苦味一直影響它的推廣和運用，日本和韓國采用轉移酶和水解酶化的方法來改變甜菊糖的后苦味；不足的是帶來的副作用往往是甜度倍數(shù)下降，成本增高。同樣造成應用上的困難。但隨著天然甜味劑市場需求的逐步增大，越來越多的企業(yè)開始關注研究和解決甜菊的后苦味，人們試圖提煉精致高純度的萊鮑迪苷A的甜菊產(chǎn)品，去掉口感不好的成分甜菊雙甙和杜克甙，這樣甜度可高達350-400倍，同時除掉了甜菊的后苦味。目前韓國、馬來西亞、美國、中國等的一些企業(yè)都可以將萊鮑迪苷A提純到80%以上，但由于各自工藝和方法的差異，普遍存在轉化率低，成本高，有效成分控制不穩(wěn)定等弊端。


【發(fā)明內容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中工藝復雜、提取純度低的不足，提出一種工藝簡單、成本低以及純度高的從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法。
[0005]技術方案:本發(fā)明所述的一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，包括如下步驟:
(1)準備提取溶劑準備階段；
(2)混合階段:將甜菊葉與上述提取溶劑按質體比1:10?20混合；
(3)升溫提取階段:將上述混合物加熱升溫至80?90°C，并保溫1.5-2.0小時；
(4)過濾離心階段:將提取混合物先通過目數(shù)為300目的布袋過濾器，再通過轉速為4000轉\分鐘的碟片離心機，離心至澄清，冷卻至40°C以下；
(5)大孔樹脂吸附分離階段:將冷卻后的提取過濾澄清液上大孔吸附樹脂吸附，水洗后再用50%-80%乙醇解吸；
(6)分子膜分離階段:將上述解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A純度達85%以上的溶液合并收集；
(7)濃縮階段:將收集液用刮板濃縮器減壓濃縮至比重為1.1?1.5 ;
(8)放置階段:將濃縮液在40°C以下的溫度放置12-24小時，萊鮑迪苷A充分析出；
(9)固液分離階段:用離心或板框壓濾的方法進行固液分離，過濾濾材孔徑大于400
目； (10)溶劑漂洗階段:將分離的固體物用95%-100%的乙醇水溶液，按固體物質量的2-4倍進行漂洗15-30分鐘；
(11)二次固液分離:用離心或板框壓濾的方法進行再次固液分離，過濾濾材孔徑大于400 目；
(12)干燥:將分離的固形物用烘干或噴霧干燥的方法進行干燥。
[0006]作為優(yōu)化，步驟(I)所述提取溶劑為乙醇與水的混合物。
[0007]進一步的優(yōu)化，所述提取溶劑為乙醇與水按照溶劑的比例按1: 10?100%混合。
[0008]作為優(yōu)化，步驟(6)所述分子膜為組合膜，具體是1000-5000分子量卷式超濾膜、100-600分子量卷式納濾膜，HPLC跟蹤分析膜濾液中萊鮑迪苷A的純度。
[0009]有益效果:通過本發(fā)明的提取方法能使提取的萊鮑迪苷A純度達到97%以上，且該方法工藝路線簡單，對設備要求不高，而且具有低能耗、高產(chǎn)出、萊鮑迪苷A純度穩(wěn)定、徹底去除后苦味等優(yōu)點，適合工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為實施例1中的萊鮑迪苷A對照品溶液HPLC圖譜及分析表；
圖2為實施例1中的萊鮑迪苷A膜濾液HPLC圖譜及分析表；
圖3為實施例1中的萊鮑迪苷A樣品溶液HPLC圖譜及分析表；
圖4為實施例2中的萊鮑迪苷A對照品溶液HPLC圖譜及分析表；
圖5為實施例2中的萊鮑迪苷A膜濾液HPLC圖譜及分析表；
圖6為實施例2中的萊鮑迪苷A樣品溶液HPLC圖譜及分析表；
圖7為實施例3中的萊鮑迪苷A對照品溶液HPLC圖譜及分析表；
圖8為實施例3中的萊鮑迪苷A膜濾液HPLC圖譜及分析表；
圖9為實施例3中的萊鮑迪苷A樣品溶液HPLC圖譜及分析表。

【具體實施方式】
[0011]下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明:
實施例1
一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，包括如下步驟:
(1)提取溶劑準備階段:乙醇與水的比例為20%；
(2)混合階段:甜菊葉與乙醇混合溶劑按質體比1:15 ；
(3)升溫提取階段:上述混合物加熱升溫至85°C，并保溫1.5小時；
(4)過濾離心階段:提取混合物先通過目數(shù)為300目的布袋過濾器，再通過轉速為4000轉\分鐘的碟片離心機，離心至澄清，冷卻至40°C以下；
(5)大孔樹脂吸附分離階段:冷卻后的提取過濾澄清液上大孔吸附樹脂吸附，水洗后，用65%乙醇解吸；
(6)分子膜分離階段:解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A純度達85%以上的溶液合并收集；
(7)濃縮階段:收集液用刮板濃縮器減壓濃縮至比重為1.25 ；
(8)放置階段:濃縮液在40°C以下的溫度放置15小時，萊鮑迪苷A充分析出； (9)固液分離階段:用離心方法進行固液分離，濾材孔徑450目；
(10)漂洗提純階段:將分離的固體物用95%的乙醇水溶液，按固體物質量的3倍進行漂洗20分鐘；
(11)二次固液分離:過濾濾材孔徑450目；
(12)干燥:將分離的固形物用烘干的方法干燥。
[0012]通過上述提取工藝，經(jīng)HPLC的檢測最終的純度高于97%，具體分析圖譜及分析結果見附圖1-3。
[0013]實施例2
一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，包括如下步驟:
(1)提取溶劑準備階段:乙醇與水的比例為80%；
(2)混合階段:甜菊葉與乙醇混合溶劑按質體比1:20 ；
(3)升溫提取階段:上述混合物加熱升溫至90°C，并保溫2小時；
(4)過濾離心階段:提取混合物先通過目數(shù)為300目的布袋過濾器，再通過轉速為4000轉\分鐘的碟片離心機，離心至澄清，冷卻至40°C以下；
(5)大孔樹脂吸附分離階段:冷卻后的提取過濾澄清液上大孔吸附樹脂吸附，水洗后，用75%乙醇解吸；
(6)分子膜分離階段:解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A純度達85%以上的溶液合并收集；
(7)濃縮階段:收集液用刮板濃縮器減壓濃縮至比重為1.35 ；
(8)放置階段:濃縮液在40°C以下的溫度放置20小時，萊鮑迪苷A充分析出；
(9)固液分離階段:用離心方法進行固液分離，濾材孔徑450目；
(10)漂洗提純階段:將分離的固體物用100%的乙醇，按固體物質量的3倍進行漂洗30分鐘；
(11)二次固液分離:過濾濾材孔徑450目；
(12)干燥:將分離的固形物用噴霧干燥的方法干燥。
[0014]通過上述提取工藝，經(jīng)HPLC的檢測最終的純度高于97%，具體分析圖譜及分析結果見附圖4-6。
[0015]實施例3
一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，包括如下步驟:
(1)提取溶劑準備階段:乙醇與水的比例為60%；
(2)混合階段:甜菊葉與乙醇混合溶劑按質體比1:18 ；
(3)升溫提取階段:上述混合物加熱升溫至90°C，并保溫2小時；
(4)過濾離心階段:提取混合物先通過目數(shù)為300目的布袋過濾器，再通過轉速為4000轉\分鐘的碟片離心機，離心至澄清，冷卻至40°C以下；
(5)大孔樹脂吸附分離階段:冷卻后的提取過濾澄清液上大孔吸附樹脂吸附，水洗后，用80%乙醇解吸；
(6)分子膜分離階段:解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A純度達85%以上的溶液合并收集；
(7)濃縮階段:收集液用刮板濃縮器減壓濃縮至比重為1.40 ； (8)放置階段:濃縮液在40°C以下的溫度放置22小時，萊鮑迪苷A充分析出；
(9)固液分離階段:用離心方法進行固液分離，濾材孔徑450目；
(10)漂洗提純階段:將分離的固體物用100%的乙醇，按固體物質量的3倍進行漂洗30分鐘；
(11)二次固液分離:過濾濾材孔徑450目；
(12)干燥:將分離的固形物用噴霧干燥的方法干燥。
[0016]通過上述提取工藝，經(jīng)HPLC的檢測最終的純度高于97%，具體分析圖譜及分析結果見附圖7-9。
【權利要求】
1.一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)準備提取溶劑準備階段； (2)混合階段:將甜菊葉與上述提取溶劑按質體比1:10?20混合； (3)升溫提取階段:將上述混合物加熱升溫至80?90°C，并保溫1.5-2.0小時； (4)過濾離心階段:將提取混合物先通過目數(shù)為300目的布袋過濾器，再通過轉速為4000轉\分鐘的碟片離心機，離心至澄清，冷卻至40°C以下； (5)大孔樹脂吸附分離階段:將冷卻后的提取過濾澄清液上大孔吸附樹脂吸附，水洗后再用50%-80%乙醇解吸； (6)分子膜分離階段:將上述解吸液用分子膜分離，HPLC跟蹤分析，將含有萊鮑迪苷A純度達85%以上的溶液合并收集； (7)濃縮階段:將收集液用刮板濃縮器減壓濃縮至比重為1.1?1.5 ; (8)放置階段:將濃縮液在40°C以下的溫度放置12-24小時，萊鮑迪苷A充分析出； (9)固液分離階段:用離心或板框壓濾的方法進行固液分離，過濾濾材孔徑大于400目； (10)溶劑漂洗階段:將分離的固體物用95%-100%的乙醇水溶液，按固體物質量的2-4倍進行漂洗15-30分鐘； (11)二次固液分離:用離心或板框壓濾的方法進行再次固液分離，過濾濾材孔徑大于400 目； (12)干燥:將分離的固形物用烘干或噴霧干燥的方法進行干燥。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，其特征在于:步驟(1)所述提取溶劑為乙醇與水的混合物。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，其特征在于:所述提取溶劑為乙醇與水按照溶劑的比例按1:10?100%混合。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種從甜菊葉中提取分離萊鮑迪苷A的方法，其特征在于:步驟(6)所述分子膜為組合膜，具體是1000-5000分子量卷式超濾膜、100-600分子量卷式納濾膜，HPLC跟蹤分析膜濾液中萊鮑迪苷A的純度。
【文檔編號】C07H1/08GK104262428SQ201410551259
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權日:2014年10月17日
【發(fā)明者】陳少云, 余祖兵, 周建海, 冒小云, 顧和英, 顧丹彤 申請人:南通海天生物科技有限公司