用于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機理的化學分子的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及式I-XXI之一的化合物；包含至少一種這樣的化合物的藥物組合物；和至少一種這樣的化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療由至少一種剪接異常引起的遺傳疾病。
【專利說明】用于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機理的化學分 子
[0001] 本申請是申請日為2009年1月12日、申請?zhí)枮?00980106361. 1、發(fā)明名稱為"用 于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機理的化學分子"的中國發(fā)明專利申請的分案申 請。

【技術領域】
[0002] 本專利申請要求2008年1月10日提交的法國專利申請FR08/50144的優(yōu)先權，它 通過參考并入本文。
[0003] 本發(fā)明涉及新的吲哚衍生的化合物，其用于制備可用于治療剪接過程的變化引起 的疾病的組合物。

【背景技術】
[0004] 已經知道某些吲哚衍生的化合物例如玫瑰樹堿衍生物和氮雜-玫瑰樹堿衍生物 作為嵌入分子用于校正基因表達，尤其是DNA復制中的功能異常。它們已經被更具體地描 述用于治療癌癥、白血病或AIDS等疾?。ň唧w參見專利FR2, 627, 493, FR2, 645, 861，F(xiàn)R2, 4 36, 786)。
[0005] 關于AIDS的現(xiàn)有治療，目的在于減少HIV感染的患者的病毒負載的各種方案，利 用預期會抑制病毒逆轉錄酶的酶活性或參與病毒蛋白成熟的蛋白酶的酶活性的分子。關 于逆轉錄酶抑制劑，它們在性質上可以是核苷的（NRTIs)、非核苷的（NNRTIs)或核苷酸的。 使用這些化合物的目的是阻止生成逆轉錄病毒基因組的DNA拷貝，并從而阻止整合進入宿 主細胞的基因組中。蛋白酶抑制劑（Pis)會阻礙病毒蛋白的適當成熟，并造成具有改變的 感染能力的不完整顆粒的生成。存在另一類抗逆轉錄病毒的化合物，使用它阻止病毒進入 細胞的能力。這些進入的抑制劑可以是干擾病毒糖蛋白gp41或gpl20與⑶4細胞膜融合 的肽，或靶向HIV細胞共受體CCR5和CXCR4的分子。還已經利用類似于HIV整合酶的細胞 蛋白的缺失，開發(fā)抑制該酶活性的新的抗-HIV分子。盡管許多整合酶抑制劑處于臨床試驗 期，還沒有分子可在市場上得到。
[0006] 關于癌癥，超過90%源自上皮細胞的惡性轉化，在大多數(shù)病例中，癌癥患者死亡不 是由于原發(fā)性腫瘤，而是由于源自原發(fā)性腫瘤的轉移。導致轉移和它們的后續(xù)侵入的該惡 化進展最初包含細胞粘附的喪失和能力性的增加，因而允許侵入細胞從起始部位逃逸和遷 移到靶組織。在大量的病例中，腫瘤進展機理似乎與異常剪接有關，后者導致具有原-致癌 活性的同種型的形成。目前，不存在具有抗侵入功能的分子。這突出了缺乏真正有力的抗 擊轉移的工具。目前在市場上也缺乏這類分子，使它們具有最高級別的經濟潛力。
[0007] 假肥大性肌營養(yǎng)不良（DMD)是一種嚴重的疾病，它源自肌養(yǎng)蛋白基因中的突變。 該蛋白的缺失導致骨骼肌和心肌的退化。目前構思出幾種治療策略，包括所謂的外顯子跳 躍，它的原理是從肌養(yǎng)蛋白切掉攜帶突變的內部外顯子，從而生成更短的、但是有功能的肌 養(yǎng)蛋白。
[0008] 核纖維蛋白?。↙aminopathy)是導致令人不滿意的生活質量的病癥，需要昂貴的 護理，且在許多病例中，會導致過早死亡（即，橫紋肌組織的核纖維蛋白病和特征在于過早 老化的核纖維蛋白?。?。核纖維蛋白病是由核纖層蛋白（普遍存在的位于細胞核中的蛋 白）和它們的分子伴侶中的功能變化造成的。大多數(shù)早衰或過早老化綜合癥病例是由在 外顯子11中（即在特異性地編碼核纖層蛋白A的基因部分中）發(fā)生的復發(fā)性新生點突變 (c. 1824CXT，"G608G"）造成。已經證實，該突變會改變剪接機理，并導致生成截短的核纖 層蛋白A前體（"progerin"，核纖層蛋白Δ50，ρ. V607_Q656del)，對殘余的野生型蛋白發(fā) 揮顯性負效應。
[0009] 在所有這些病理狀態(tài)（pathology)中，剪接過程起著關鍵的作用。該細胞內 剪接過程包括，消除前信使RNA中的內含子，以生成可以被細胞的翻譯機理使用的成 熟信使RNA (SHARP，Cell，vol. 77, p. 805-815, 1994)。在選擇性剪接的情況下，相同的 前體可以是編碼具有不同功能的蛋白的信使RNA的來源（BLACK，Annu. Rev. Biochem. vol. 72, p. 291-336, 2003)。5'和3'剪接位點的精確選擇因而是產生多樣性和可以根據(jù)組 織類型或在生物發(fā)育過程中調節(jié)基因表達的機理。參與該選擇的因子包括稱作SR的蛋白 兩家族，其特征在于存在一個或兩個RNA識別基序（RRM)和稱作RS結構域的富含精氨酸和 絲氨酸殘基的結構域（MANLEY & TACKE, Genes Dev.，vol. 10, ρ· 1569-1579, 1996)。通過結 合被稱作ESE (外顯子剪接增強子）或ISE (內含子剪接增強子）的前-mRNA的短外顯子或 內含子序列，SR蛋白能以劑量依賴性的方式激活次佳的剪接位點，并確保包含外顯子（GRA VELEY，RNA，vol. 6, p. 1197-1211，2000)。選擇性剪接中SR蛋白的活性是特異性的，在對應的 基因失活的情況下是致命的（WANG等人，Mol. Cell, vol. 7, p. 331-342, 2001)。
[0010] 人基因組的測序和EST(已表達序列標志）庫的分析已經揭示，65%的基因以 選擇性剪接的變體形式表達（EWING & GREEN, Nat. Genet.，vol. 25, ρ· 232-234, 2000 ; JOHNSON等人，Science, vol. 302, p. 2141-2144, 2003)。該機理因而是可以影響參與調 節(jié)剪接的因子的修飾和影響該調節(jié)必需的序列的突變的有利靶標。目前，據(jù)估計大約 50 %的引起遺傳疾病的點突變會誘導異常剪接。這些突變可以通過滅活或建立剪接位 點來干擾剪接，但是也通過修飾或產生調節(jié)元件例如特定基因中的剪接增強子或剪接 沉默子來干擾剪接（CARTEGNI 等人，Nat. Rev. Genet.，vol. 3, ρ· 285-298, 2002 ;TAZI 等 人，TIBS, vol. 40, ρ· 469-478, 2005)。
[0011] 目前開發(fā)的校正這些剪接缺陷的策略依賴于各類分子的應用（TAZI等人，同 上，2005)。
[0012] 一種策略是針對開發(fā)新的分子來校正或消除異常剪接，例如，依賴于干擾這類剪 接的蛋白的過表達（NISSM-RAFINIA 等人，Hum. Mol. Genet.，vol. 9, ρ· 1771-1778, 2000 ; H0FINANN 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.，vol. 97, ρ· 9618-9623, 2000)。
[0013] 其它策略依賴于反義寡核苷酸（SAZANI等人，Nat.Biotechnol.，vol. 20，ρ· 12 28-1233,2002;SAZANI & K0LE，Prog. Mol. Subcell· Biol·，vol. 31，ρ· 217-239, 2003)或 PNA(CARTEGNI 等人，Nat. Struct. Biol.，vol. 10, ρ· 120-125, 2003)的應用，它們分別能抑 制或激活剪接事件。
[0014] 另一種策略依賴于影響目標前-mRNA的剪接效率的化合物的鑒定（ANDREASSI等 人，Hum. Mol. Genet.，vol. 10, ρ· 2841-2849, 2001)。
[0015] 最后，已經描述了基于使用反式剪接來替換突變型外顯子的策略（LIU等人，Nat. Biotechnol. , vol. 20, p. 47-52, 2002) 〇
[0016] 上述開發(fā)校正或消除異常剪接的策略的缺點之一是它們的生產成本。的確，生產 必須修飾以提高它們的穩(wěn)定性的反義寡核苷酸和PNA分子的成本很高。
[0017] 上述開發(fā)策略的另一個缺點是，它們需要使用表達載體，例如，用于基于使用反式 剪接的策略。
[0018] 申請人:提交的要求法國優(yōu)先權FR0310460和FR0400973的國際申請W005023255， 公開了吲哚衍生物用于治療與細胞中前信使RNA剪接過程有關的疾病的用途。
[0019] 因而，最近證實，某些吲哚衍生物可以特別有效地治療轉移癌和AIDS (BAKK0UR等 人，PLoS Pathogens, vol. 3, ρ· 1530-1539, 2007)。
[0020] 但是，所述的化合物具有含有4個環(huán)的扁平結構，其具有嵌入DNA堿基之間的缺 點，因而可以導致細胞毒性。
[0021] 為了使這些吲哚衍生物嵌入DNA堿基之間的風險最小化，本發(fā)明人開發(fā)了可以特 別有效地治療與剪接過程有關的疾病的新的化合物，而它們以令人驚奇的方式，具有明顯 小于現(xiàn)有技術的吲哚衍生物的細胞毒性。另外，這些化合物能選擇性地抑制某些剪接事件。


【發(fā)明內容】

[0022] 本發(fā)明的第一個目的因而涉及下式（I)-(XXI)之一的化合物：

【權利要求】
1. 一種化合物，其具有下式（la)或（Ilia): 其中，
? XI代表氮原子或CR10基團，其中R10選自氫原子或NR11R12或0R11基團，其中R11 和R12彼此獨立地代表氫原子、C1-C3烷基或三氟甲基；
? R1代表氫原子、NR11R12或0R12基團，其中R11和R12如上面所定義，當R1代表 NR11R12或0R12基團，XI代表CH基團； ? Y1代表氮原子或CR13基團，其中R13選自氫原子或 基團； ? R2代表氫、鹵素或氧原子以形成羰基、或C1-C3烷基或三氟甲基、NR14R15基團、 S02R14R15基團或C( = 0)NR14R15基團，其中R14和R15彼此獨立地代表： ?氫原子，或 ?直鏈的或支鏈的C1-C10烷基，其中一個或多個碳原子可以被氮原子置換，所述烷基 被一個或多個-0H和/或=0基團和/或諸如下述的取 代的或未取代的基團任選地取代：
?當Y1代表CR13基團，其中R13代表
基團時，R2代表氫原子； ?R3代表氫原子或氧原子以形成羰基、或C1-C3烷基或三氟甲基、或如上面定義的 NR14R15 基團、S02R14R15 或C( = 0)NR14R15 基團，當 R2 代表鹵素原子、NR14R15、S02R14R15 或C( = 0)NR14R15基團時，且當Y1代表CR13基團，其中R13代.
基團 時，R3代表氫原子；
? R4代表氫原子或C1-C3烷基或C( = 0)NR14R15基團，當R5或R6不是氫原子時，R4 代表氫原子或C1-C3烷基；
? R5代表氫原子、C( = 0)NR14R15基團或 基團，當R4或R6不是氫原 子時，R5代表氫原子； ?R6代表氫原子或C( = 0)NR14R15基團或 基團，當R5不是氫原子時 或當R4不是氫原子或C1-C3烷基時，R6代表氫原子； ?R21代表氫原子或甲基； 所述化合物的藥學上可接受的鹽、其異構體和/或它們的混合物。
2. -種化合物，所述化合物選自： ?N- (4-甲氧基-苯基）-2- [6- (Ν' - (4-甲氧基-苯基煙酰氨基）-吡啶-2-基氨基）-己 基氨基]-煙酰胺； ? 2- (2-二甲氨基-乙氨基）-Ν- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (3-二甲氨基-丙氨基）-Ν- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (3-二乙氨基-丙氨基）-Ν- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (4-羥基-丁氨基）-Ν- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ?Ν- (4-三氟甲氧基-苯基）-2- [6- (Ν' - (4-三氟甲氧基-苯基煙酰氨基）-吡啶-2-基 氨基）_己基氨基]-煙酰胺； ? Ν- (3-二乙氨基-丙基）-3-[3- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ·Ν-(3-甲基-丁基）-3-甲基-4-[3-(4-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰 胺； ? (Ν-二乙氨基）-3-(1-{3-[4(4-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯 基} -1H-1，2, 3-三唑-4-基）-甲胺； ? 2-溴-N-(4-二甲氨基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-氯-N- (4-二甲氨基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (2-二甲氨基-乙氨基）-N- (4-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (2-二甲氨基-乙氨基）-N- (4-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-二乙氨基-乙氨基）-N- (4-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-二甲氨基-丙氨基）-N- (4-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-(4-羥基-丁氨基）-N-(4-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-(3-咪唑-1-基-丙氨基）-N-(4-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-氯-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2-溴-N-(4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-咪唑-1-基-丙氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (2-二乙氨基-乙氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-二甲氨基-丙氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-二乙氨基-丙氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (4-羥基-丁氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (6-氨基-己基氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (3-咪唑-1-基-丙氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (4-二乙氨基-1-甲基-丁氨基）-N- (4-三氟甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ?N- (4-吡啶基）-2- [6- (Ν' - (4-吡啶基苯甲酰氨基）-苯基氨基）-1-羥基丁氨基]-苯 甲酰胺； ? 2-(3-二乙氨基-丙氨基）-Ν_批陡-4-基-煙酰胺； ? 2- (3-咪唑-1-基-丙氨基）-Ν-吡啶-4基-煙酰胺； ? Ν- (3-二乙氨基-丙基）-3-[3- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ? 3-(1-{3-[3_甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2, 3-三 唑-4-基）-丙-1-醇； ?Ν- (3-二乙氨基-丙基）-3-甲基-4-[3- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲 酰胺； ? Ν- (3-甲基-丁基）-4-[3- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ? 3-(1-{4-[3_甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2, 3-三 唑-4-基）-丙-1-醇； ? (Ν-二乙氨基）-3- (1- {3- [3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯基} -1Η-1，2, 3-三 唑-4-基）-甲胺； ? 3-(1-{4-[3_甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2, 3-三 唑-4-基）-丙-1-醇； ? Ν- (3-二乙氨基-丙基）-4-[4- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?Ν- (3-二乙氨基-丙基）-3-甲基-4-[4- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲 酰胺； ·Ν-(3-甲基-丁基）-3-甲基-4-[4-(3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰 胺； ? (Ν-二乙氨基）-3-(1-{4-[4-(3_甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯 基} -1Η-1，2, 3-三唑-4-基）-甲胺； ? 3-(l-{4-[3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯基2, 3-三 唑-4-基）-丙-1-醇； ? N- (3-二乙氨基-丙基）-3-[4- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ? N- (3-甲基-丁基）-3-[4- (3-甲氧基苯甲酰氨基）-苯基氨基]-苯甲酰胺； ? 2-氯-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (3-二甲氨基-丙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2-溴-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺； ? 2-溴-N-(3-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-氯-N-吡啶-4-基-煙酰胺； ? 2- (2-二甲氨基-乙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (2-二乙氨基-乙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (3-二乙氨基-丙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (4-羥基-丁氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (5-羥基-戊基氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (6-氨基-己基氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2-(3-咪唑-1-基-丙氨基）-N-(3-甲氧基-苯基）-煙酰胺； ? 2- (2-二甲氨基-乙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (2-二乙氨基-乙氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-(4-羥基-丁氨基）-N-(3-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2- (4-二乙氨基-1-甲基-丁氨基）-N- (3-甲氧基-苯基）-苯甲酰胺； ? 2-(2-二乙氨基-乙氨基）-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺； ? 2-(2-二乙氨基-乙氨基）-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺； ? 2-(3-二乙氨基-丙氨基）-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺； ? 2- (3-咪唑-1-基-丙氨基）-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺； ? 2-(2-二乙氨基-乙氨基）-N_批陡-4-基-煙酰胺；和 ? 2- (3-二甲氨基-丙氨基）-N-吡啶-4-基-煙酰胺。
3. -種藥物組合物，其中所述藥物組合物包含權利要求1的至少一種化合物，和任選 的藥學上可接受的載體。
4. 權利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療 與細胞中前信使RNA的剪接過程有關的疾病，所述疾病是由剪接過程的改變引起的遺傳疾 病，所述疾病選自：Frasier綜合癥，與染色體17有關的額顳葉癡呆，利氏綜合癥，非典型囊 性纖維化病，與Tau蛋白突變有關的阿爾茨海默病，影響活運動神經元基因的肌萎縮，與血 清素剪接的失調有關的抑郁癥，和乳腺癌、結腸癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、子宮癌。
5. 權利要求4的應用，其中所述疾病是癌癥，該癌癥選自：乳腺癌、結腸癌、胰腺癌、肝 癌、前列腺癌和子宮癌。
6. 權利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療 與細胞中前信使RNA的剪接過程有關的疾病，其中所述疾病與老化一起出現(xiàn)，所述疾病選 自：動脈粥樣硬化、胰島素抵抗的II型糖尿病、白內障、骨質疏松癥和皮膚老化。
7. 權利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療 與細胞中前信使RNA的剪接過程有關的疾病，其中所述疾病是病毒起源的疾病。
8. 權利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療 與細胞中前信使RNA的剪接過程有關的疾病，其中所述疾病是AIDS。
9. 權利要求1中至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治療 與基因突變有關的疾病，該疾病可以通過外顯子跳躍進行治療。
10. 權利要求1中至少一種化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于在受試者中治 療與基因突變有關的疾病，該疾病是假肥大性肌營養(yǎng)不良。
【文檔編號】C07C233/75GK104086482SQ201410299552
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2009年1月12日 優(yōu)先權日:2008年1月10日
【發(fā)明者】J·塔澤, D·格里爾森, F·馬于托-貝茨爾, P·魯 申請人:國家科研中心, 居里研究所, 蒙彼利埃第二科學與技術大學