一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，該方法包括以下步驟：⑴原料預(yù)處理：將黑果枸杞果實(shí)去雜、水洗，得到處理后的黑果枸杞果實(shí)；⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液；⑶將甲酸甲醇溶液加入到黑果枸杞果實(shí)中進(jìn)行常溫浸提，得到提取液；⑷提取液經(jīng)過濾、蒸發(fā)濃縮，得到黑果枸杞花色苷浸膏；⑸大孔吸附樹脂的處理；⑹將黑果枸杞花色苷浸膏復(fù)溶后上處理后的大孔吸附樹脂，收集流出液；⑺流出液經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品；⑻將花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中進(jìn)行分離，即得純度≥90%的花色苷單體；最后，所述花色苷單體經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。本發(fā)明分離效果好、耗時短、成本低。
【專利說明】一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種分離制備花色苷單體的方法，尤其涉及一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黑果枸杞Iycium ruthenicum Murray)為爺科(Solanaceae)枸杞屬多年生灌木，具有顯著的生理活性。藏醫(yī)典籍《晶珠本草》和《四部醫(yī)典》均記載:黑果枸杞味甘、性平、清心熱、用于治療心熱病、心臟病、月經(jīng)不調(diào)、停經(jīng)的病癥?！毒S吾爾藥志》記載:黑果枸杞果實(shí)可治療尿道結(jié)石、癬疥、牙齦出血等病癥，民間則用做滋補(bǔ)強(qiáng)壯、明目以及降壓藥。黑果枸杞中含有豐富的花色苷素類(Anthocyanins)天然色素、花色素和總多酚等，有較強(qiáng)的抗氧化活性，是一種藥食兩用的植物，近年來頗受廣大消費(fèi)者的青睞。
[0003]花色苷是一種天然的水溶性色素，屬于類黃酮化合物，廣泛存在于植物的花和果實(shí)中，具有預(yù)防血栓、抗癌、抗氧化、抗真菌、抗突變、延緩衰老等重要的生理活性，可作為天然色素、天然抗氧化劑以及營養(yǎng)補(bǔ)充劑加以應(yīng)用。在食品安全問題日益受到人們重視的情況下?；ㄉ兆鳛橐环N天然染料，其低毒性、色彩自然艷麗及資源可再生等特點(diǎn)使其在食品、化妝品及藥品行業(yè)得到逐步應(yīng)用。
[0004]目前關(guān)于花色苷的分離，主要采用高速逆流色譜(HSCCC)，其局限性是可看到的色譜峰較少，分離效果差，分離時間長；而高速逆流色譜在分離花青素類物質(zhì)時，由于花青素的極性較大故分離體系中需要添加甲基叔丁基醚和正丁醇，這兩種高極性的試劑在后續(xù)濃縮過程中很難除去，即使能夠除去也需要高溫，這將使花青素受到損失。再則高速逆流色譜為一個開放的分離系統(tǒng)，其中的化學(xué)試劑尤其是甲基叔丁基醚很容易揮發(fā)出來對操作人員造成危害，并易污染環(huán)境。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種分離效果好、耗時短、成本低的從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法。
[0006]為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟:
⑴原料預(yù)處理:將黑果枸杞果實(shí)挑選去雜，用水沖洗，洗去表面浮土，得到處理后的黑果枸杞果實(shí)；
⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液:將200 mL甲酸與9800 mL甲醇混合均勻即得；⑶將所述步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實(shí)中，在室溫避光狀態(tài)下按I g:1飛mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為廣3次，每次12~24 h，合并得到提取液；⑷所述提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在4(T50°C進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇；
(5)大孔吸附樹脂的處理:將D-101大孔吸附樹脂用體積濃度為95%的甲醇浸泡24小時，然后用體積濃度為95%的甲醇進(jìn)行洗滌，再用去離子水清洗；將該大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗至柱中顆粒干凈，不再沉降為止，即得處理后的大孔吸附樹脂；
(6)將所述黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2 %的甲酸復(fù)溶后上所述處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以4飛倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以3飛倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液；
⑴所述流出液經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇；
⑶將所述花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為25~40°C、流速為15~25 mL/min、進(jìn)樣量為20(T600 mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素-3，5-O-diglucosides,矮牽牛-3-0_rutinoside (trans-p-coumaroyl)-5-0-glucosides ;然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為25~40°C、流速為0.6~1.0 mL/min、進(jìn)樣量為10 ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度> 90%的花色苷單體；最后，所述花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。
[0007]所述步驟(7)和步驟(8)中減壓濃縮的條件均是指4(T50°C水浴,轉(zhuǎn)速45~55 r.p.m,真空泵壓力為0.06~0.08MPa。
[0008]所述步驟(8)中真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-45'55 °C，真空度為10-?5Pa。
[0009]所述步驟(8)中高效液相色譜分離的條件是指流動相分別為A相:Α:體積濃度為10%的甲酸溶液中含有體積濃度為0.1%的三氟乙酸，B相:含有體積濃度為15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脫程序?yàn)?0~30 min, 3 %~11.5 % B相，線性梯度;30~40 min, 11.5 %B相，等度洗脫；40^60 min, 11.5 %~15.5 % B相，線性梯度;60~70 min, 15.5 %~16 % B相，線性梯度;70^80 min, 16 %~23 % B相，線性梯度;80~100 min, 23 %~3 % B相，線性梯度。
[0010]所述步驟(8)中半制備色譜分離的條件是指流動相分別為A相:含有體積濃度為50%的乙腈的甲醇，B相:體積濃度為5 %甲酸的水溶液；一次純化程序?yàn)?(T25 min, 85 %~65 °從相，線性梯度；25~35 min, 65 %~63 %A相，線性洗脫；35~50 min, 63 %~55 %A相，線性洗脫;50~70 min, 55 %~85 %八相，線性洗脫;二次純化程序?yàn)?流動相分別為A相:50 %甲醇水溶液，B相:5 %甲酸溶液，進(jìn)行等度洗脫。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明采用高效半制備色譜來分離制備花色苷單體。由于高速逆流色譜的檢測器為UV檢測器，而高效半制備色譜的檢測器為UV-ViS檢測器，花青素的最大吸收波長在可見光區(qū)(525 nm左右)，因此，一些含量相對較少的花青素的色譜峰在高速逆流上沒有被檢測到，但在高效半制備色譜上卻可以檢測到，有效提高了分離效果，所得到的花色苷單體純度達(dá)到了 97%以上(參見圖2、圖3)，并且可大量制備。
[0012]2、由于高速逆流色譜制備一次樣品，從泵入固定相到分離結(jié)束，耗時往往較長，有時長達(dá)數(shù)小時，而本發(fā)明采用高效半制備色譜則只需要幾十分鐘，大大縮短了分析時間，一次分離得到的樣品含量高。由圖1可知，高效半制備色譜在60min內(nèi)即實(shí)現(xiàn)了對黑果枸杞兩種花色苷單體的分離制備，分離時間短且分離效果好。[0013]3、本發(fā)明在甲醇中加入甲酸，目的是維持一個酸性環(huán)境，使花青素處于烊鹽離子狀態(tài)以維持花色苷的結(jié)構(gòu)，防止花色苷降解。
[0014]4、本發(fā)明所用試劑無毒，成本低、安全且操作簡便，所得產(chǎn)品可在食品、化妝品及藥品行業(yè)得到逐步應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0016]圖1為本發(fā)明高效半制備色譜分離黑果枸杞花色苷圖。
[0017]其中LI 為矮牽牛素-3，5-0-diglucosides, L2 為矮牽牛-3-0-rutinoside (trans-p-coumaroyl)-5_0-glucosides)o
[0018]圖2為本發(fā)明矮牽牛素_3，5-0-diglucosides的液相圖譜。
[0019]圖3 為本發(fā)明矮牽牛-3-0-rutinoside (trans-p-coumaroyl) -5-0-glucosides的液相圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)施例1 一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟: ⑴原料預(yù)處理:將黑果枸杞果實(shí)挑選去雜，用水沖洗，洗去表面浮土，得到處理后的黑
果枸杞果實(shí)。
[0021]⑵配制體積濃度 為2%甲酸甲醇溶液:將200 mL甲酸與9800 mL甲醇混合均勻即得。
[0022]⑶將步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實(shí)中，在室溫避光狀態(tài)下按I g:1 mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為I次，每次12 h，合并得到提取液。
[0023]⑷提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40°C進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇。
[0024](5)大孔吸附樹脂的處理:將D-101大孔吸附樹脂用體積濃度為95%的甲醇浸泡24小時，然后用體積濃度為95%的甲醇進(jìn)行洗滌，再用去離子水清洗；將該大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗至柱中顆粒干凈，不再沉降為止，即得處理后的大孔吸附樹脂。
[0025](6)將黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2 %的甲酸復(fù)溶后上處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以4倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以3倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液。
[0026](7)流出液在40°C水浴、轉(zhuǎn)速45 r.p.m、真空泵壓力為0.06MPa的條件下經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇。
[0027](8)將花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為25°C、流速為15 mL/min、進(jìn)樣量為200mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素_3，5-0-diglucosides,矮牽牛-3-0-rutinoside (trans-p-coumaroyl) -5-0-glucosides ;然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為25°C、流速為0.6 mL/min、進(jìn)樣量為10 ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度> 90%的花色苷單體；最后，花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。
[0028]其中:減壓濃縮的條件是指40°C水浴，轉(zhuǎn)速45 r.p.m，真空泵壓力為0.06MPa。
[0029]真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-45 °C，真空度為10 Pa。
[0030]高效液相色譜分離的條件是指流動相分別為A相:A:體積濃度為10%的甲酸溶液中含有體積濃度為0.1%的三氟乙酸，B相:含有體積濃度為15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脫程序?yàn)?0~30 min, 3 %~11.5 % B相，線性梯度；30~40 min, 11.5 9^相，等度洗脫;40~60 min, 11.5 %~15.5 % B相，線性梯度；60~70 min, 15.5 %~16 % B相，線性梯度；70~80 min, 16 %~23 % B相，線性梯度;80~100 min, 23 %~3 % B相，線性梯度。
[0031]半制備色譜分離的條件是指流動相分別為A相:含有體積濃度為50 %的乙腈的甲醇，B相:體積濃度為5 %甲酸的水溶液；一次純化程序?yàn)?(T25 min, 85 %~65 °從相，線性梯度;25~35 min,65 %~63 %八相，線性洗脫;35~50 min,63 %~55 %八相，線性洗脫;50~70min, 55 %~85 °從相，線性洗脫；二次純化程序?yàn)?流動相分別為A相:50 %甲醇水溶液，B相:5 %甲酸溶液，進(jìn)行等度洗脫。
[0032]實(shí)施例2 —種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟:
⑴原料預(yù)處理同實(shí)施例1。
[0033]⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液同實(shí)施例1。
[0034]⑶將步驟⑵所得 的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實(shí)中，在室溫避光狀態(tài)下按I g:5mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為3次，每次24 h，合并得到提取液。
[0035]⑷提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在50°C進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇。
[0036](5)大孔吸附樹脂的處理同實(shí)施例1。
[0037](6)將黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2 %的甲酸復(fù)溶后上處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以6倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以6倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液。
[0038](7)流出液在50°C水浴、轉(zhuǎn)速55 r.p.m、真空泵壓力為0.08MPa的條件下經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇。
[0039](8)將花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為40°C、流速為25 mL/min、進(jìn)樣量為400 mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素_3，5-0-diglucosides,矮牽牛-3-0-rutinoside (trans-p-coumaroyl)-5-0-glucosides ;然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為40°C、流速為1.0 mL/min、進(jìn)樣量為10 ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度> 90%的花色苷單體；最后，花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。
[0040]其中:減壓濃縮的條件是指50°C水浴，轉(zhuǎn)速55 r.p.m，真空泵壓力為0.08MPa。
[0041]真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-55 °C，真空度為15 Pa。
[0042]高效液相色譜分離的條件同實(shí)施例1。
[0043]半制備色譜分離的條件同實(shí)施例1。
[0044]實(shí)施例3 —種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟:
⑴原料預(yù)處理同實(shí)施例1。[0045]⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液同實(shí)施例1。
[0046]⑶將步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實(shí)中，在室溫避光狀態(tài)下按I g:3mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為2次，每次18 h，合并得到提取液。
[0047]⑷提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45°C進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇。
[0048](5)大孔吸附樹脂的處理同實(shí)施例1。
[0049](6)將黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2 %的甲酸復(fù)溶后上處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以5倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以5倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液。
[0050](7)流出液在45 °C水浴、轉(zhuǎn)速50 r.p.m、真空泵壓力為0.07MPa的條件下經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇。
[0051](8)將花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為35°C、流速為20 mL/min、進(jìn)樣量為600 mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素_3，5-0-diglucosides,矮牽牛-3-0-rutinoside (trans-p-coumaroyl) -5-0-glucosides ;然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為35°C、流速為0.8 mL/min、進(jìn)樣量為10 ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度> 90%的花色苷單體；最后，花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。
[0052]其中:減壓濃縮的 條件是指45°C水浴，轉(zhuǎn)速50 r.p.m，真空泵壓力為0.07MPa。
[0053]真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-50 °C，真空度為12 Pa。
[0054]高效液相色譜分離的條件同實(shí)施例1。
[0055]半制備色譜分離的條件同實(shí)施例1。
[0056]上述實(shí)施例f 3中，冷凍干燥設(shè)備為LGJ-10B冷凍干燥機(jī)；大孔樹脂為D-101來自于南開大學(xué)化工廠；甲醇、甲酸和乙腈溶液均為色譜純，均來自于山東濟(jì)寧化工廠。
[0057]高效液相色譜系統(tǒng):HPLC/DAD系統(tǒng)為Dionex系統(tǒng)(Sunnyvale，CA，USA)，配有P680 HPLC 泵；UltiMate 3000 自動進(jìn)樣器；TCC-100 柱溫箱；Dionex PDA 100 檢測器。色譜柱為 C18 ODS 80 Ts QA (150X4.6 mm，5 um 1.d, Tosoh, Tokyo, Japan)，保護(hù)柱為 C18柱(10X4.6 mm, 5 um Kromasil C18)。
[0058]高效半制備色譜系統(tǒng):半制備色譜系統(tǒng)為SHIMADZU LC-8A系統(tǒng)，色譜柱為shim-pack PRC-ODS (L)制備色譜柱，檢測器為UV-Vis檢測器。
【權(quán)利要求】
1.一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟: ⑴原料預(yù)處理:將黑果枸杞果實(shí)挑選去雜，用水沖洗，洗去表面浮土，得到處理后的黑果枸杞果實(shí)； ⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液:將200 mL甲酸與9800 mL甲醇混合均勻即得； ⑶將所述步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實(shí)中，在室溫避光狀態(tài)下按I g:1飛mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為f 3次，每次12~24 h，合并得到提取液； ⑷所述提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在4(T50°C進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇； (5)大孔吸附樹脂的處理:將D-101大孔吸附樹脂用體積濃度為95%的甲醇浸泡24小時，然后用體積濃度為95%的甲醇進(jìn)行洗滌，再用去離子水清洗；將該大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗至柱中顆粒干凈，不再沉降為止，即得處理后的大孔吸附樹脂； (6)將所述黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2%的甲酸復(fù)溶后上所述處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以4飛倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以3飛倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液； ⑴所述流出液經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇； ⑶將所述花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為25~40°C、流速為15~25 mL/min、進(jìn)樣量為20(T600 mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素-3，5-O-diglucosides,矮牽牛-3-0_rutinoside (trans-p-coumaroyl)-5-0-glucosides ;然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為25~40°C、流速為0.6~1.0 mL/min、進(jìn)樣量為10 ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度> 90%的花色苷單體；最后，所述花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于:所述步驟(7)和步驟⑶中減壓濃縮的條件均是指4(T50°C水浴,轉(zhuǎn)速45、5 r.p.m,真空泵壓力為0.06~0.08MPa。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于:所述步驟⑶中真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為_45'55 °C，真空度為10-15 Pa。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于:所述步驟⑶中高效液相色譜分離的條件是指流動相分別為A相:Α:體積濃度為10%的甲酸溶液中含有體積濃度為0.1%的三氟乙酸，B相:含有體積濃度為15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脫程序?yàn)?0~30 min, 3 %~11.5 % B相，線性梯度；30~40 min, 11.5 %B相，等度洗脫；40~60 min, 11.5 %~15.5 % B相，線性梯度;60~70 min, 15.5 %~16 % B相，線性梯度;70~80 min, 16 %~23 % B相，線性梯度;80~100 min, 23 %~3 % B相，線性梯度。
5.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實(shí)中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于:所述步驟⑶中半制備色譜分離的條件是指流動相分別為A相:含有體積濃度為50 %的乙腈的甲醇，B相:體積濃度為5 %甲酸的水溶液；一次純化程序?yàn)?(T25 min, 85 %~650從相，線性梯度；25~35 min, 65 %~63 °從相，線性洗脫；35~50 min, 63 %~55 %八相，線性洗脫;50~70 min, 55 %~85 %八相，線性洗脫;二次純化程序?yàn)?流動相分別為A相:50 %甲醇水溶液，B 相:5 %甲酸溶液，進(jìn)行等度洗脫。
【文檔編號】C07H17/065GK103626814SQ201310658409
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月9日
【發(fā)明者】索有瑞, 胡娜, 丁晨旭, 張秋龍 申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所