海帶凝集素粗提取液的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種海帶凝集素粗提取液的提取方法，其特征在于：所述的方法按照以下步驟進(jìn)行：將海帶用過(guò)濾海水洗凈，吸去海帶表面水分后，將海帶冷凍至-20℃，然后在40-60℃的溫度下進(jìn)行烘干，并將烘干后的海帶研成粉末，取pH為7.5-8.0的TBS緩沖液，將海帶粉末放入TBS緩沖液中進(jìn)行浸泡，混合的液料比為15:1-25：1，浸泡時(shí)間為15h-20h，在5000r/min、4℃的條件下上離心機(jī)離心30min，取上清液，獲得海帶凝集素粗提取液。利用該種方法，能夠獲得較高凝集活性的海帶凝集素粗提取液。
【專利說(shuō)明】海帶凝集素粗提取液的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)或糖蛋白的提取方法，特別是一種海帶凝集素的提取方法。
【背景技術(shù)】[0002]凝集素(lectin)是一類具有糖專一性，可促使細(xì)胞凝集的蛋白質(zhì)或糖蛋白，其具有凝集細(xì)胞，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，抑制血小板凝集等多種生物活性。海帶Haminariajaponica Aresch)隸屬于褐藻門海帶科、海帶屬，又名昆布；它具有分布廣、藻體大、生長(zhǎng)快等特點(diǎn)，是海藻中個(gè)體較大、質(zhì)柔味美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的海藻。關(guān)于褐藻門中的海藻，人們對(duì)其中的裙帶菜和海帶凝集素的分離及部分性質(zhì)進(jìn)行了研究。另外人們對(duì)其他藻類，如千島鹿角菜、孔石莼、腸滸苔、江蘺、角叉菜、海蘿等進(jìn)行了分離純化。海帶凝集素的提取工藝對(duì)于研究其分離純化及生物活性是一個(gè)關(guān)鍵的問(wèn)題。目前在國(guó)內(nèi)外對(duì)凝集素的提取工藝研究日益增多，人們研究了槲寄生凝集素粗品提取工藝，韭菜凝集素的提取工藝與活性測(cè)定，白樺茸凝集素提取工藝的優(yōu)化，桑葉凝集素的提取工藝優(yōu)化的研究等等，但尚未見到有關(guān)海帶凝集素提取工藝的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種能夠獲得較高凝集活性的海帶凝集素粗提取液的方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種海帶凝集素粗提取液的提取方法，其特征在于:所述的方法按照以下步驟進(jìn)行:
將海帶用過(guò)濾海水洗凈，吸去海帶表面水分后，將海帶冷凍至-20°C，然后在40-60°C的溫度下進(jìn)行烘干，并將烘干后的海帶研成粉末，取PH為7.5-8.0的TBS緩沖液，將海帶粉末放入TBS緩沖液中進(jìn)行浸泡，混合的液料比為15:1-25:1，浸泡時(shí)間為15h-20h，在5000r/min、4°C的條件下上離心機(jī)離心30min,取上清液,獲得海帶凝集素粗提取液。
[0005]本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn):
傳統(tǒng)的從其他藻類中提取凝集素的方法，雖然能夠成功的提取出藻類凝集素，由于其工藝條件并沒(méi)有經(jīng)過(guò)太多的細(xì)致實(shí)驗(yàn)和比較，因此所提取出的凝集素的凝集活性相對(duì)較低，而本發(fā)明將能夠影響最終產(chǎn)物(凝集素)凝集活性的各種工藝條件分別進(jìn)行單因素研究，并將最后的研究結(jié)果進(jìn)行正交試驗(yàn)，最終確定出提取海帶凝集素的最佳工藝條件，應(yīng)用本發(fā)明所公開的方法進(jìn)行海帶凝集素的提取，可以最大程度的保證最終產(chǎn)物的凝集活性，因此可以說(shuō)本發(fā)明為目前海帶凝集素的提取提供了最佳方案，為今后海帶凝集素的研究奠定了良好的研究基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0006]下面將說(shuō)明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。[0007]—種海帶凝集素粗提取液的提取方法，按照以下步驟進(jìn)行:首先取新鮮的海帶，將其用過(guò)濾海水洗凈，并用紗布貨濾紙吸去海帶表面水分，將海帶進(jìn)行冷凍，當(dāng)海帶溫度降至_20°C后，在40-60°C的溫度下進(jìn)行烘干，其中50°C為最佳烘干溫度；并將烘干后的海帶研成粉末，取PH為7.5-8.0的TBS (Tris-HCl)緩沖液，其中PH為7.7為最佳酸堿度；將海帶粉末放入TBS緩沖液中進(jìn)行浸泡，混合的液料比為15-25:1，浸泡時(shí)間為15-20h，其中最佳的液料比為20:1，最佳的浸泡時(shí)間為20h ;為了獲得更好的效果，在浸泡的過(guò)程中最好能夠不斷攪拌，然后將混合溶液在5000r/min、4°C的條件下上離心機(jī)離心30min，取上清液，獲得海帶凝集素粗 提取液。
【權(quán)利要求】
1.一種海帶凝集素粗提取液的提取方法，其特征在于:所述的方法按照以下步驟進(jìn)行: 將海帶用過(guò)濾海水洗凈，吸去海帶表面水分后，將海帶冷凍至-20°C，然后在40-60°C的溫度下進(jìn)行烘干，并將烘干后的海帶研成粉末，取PH為7.5-8.0的TBS緩沖液，將海帶粉末放入TBS緩沖液中進(jìn)行浸泡，混合的液料比為15:1-25:1，浸泡時(shí)間為15h-20h，在5000r/min、4°C的條 件下上離心機(jī)離心30min,取上清液,獲得海帶凝集素粗提取液。
【文檔編號(hào)】C07K1/14GK103665120SQ201310580566
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】李丹彤, 李悅, 尹建鵬, 李帥, 李曉麗 申請(qǐng)人:大連海洋大學(xué), 李丹彤