一種分子伴侶TSPcpn47和編碼此分子伴侶的多核苷酸的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種分子伴侶TSPcpn47和編碼該分子伴侶的多核苷酸，該分子伴侶TSPcpn47來(lái)源于高溫棲熱菌的噬菌體TSP4，能起到穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用并防止蛋白質(zhì)凝聚、變性，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，其核苷酸序列可用于構(gòu)建生產(chǎn)此分子伴侶的基因工程菌株。
【專利說(shuō)明】—種分子伴侶TSPcpn47和編碼此分子伴侶的多核苷酸
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種分子伴侶TSPcpn47和編碼此分子伴侶的多核苷酸，分子伴侶在生物體內(nèi)起著穩(wěn)定新生蛋白、輔助其他蛋白質(zhì)正確折疊，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]分子伴侶是一類在進(jìn)化上非常保守的蛋白質(zhì)家族，它能非特異性結(jié)合不同結(jié)構(gòu)、大小和功能的蛋白質(zhì)并催化介導(dǎo)這些蛋白質(zhì)形成特定的構(gòu)象，在生物體內(nèi)起著穩(wěn)定新生蛋白、輔助其他蛋白質(zhì)正確折疊、組裝、轉(zhuǎn)運(yùn)甚至降解的作用，在脅迫條件下，分子伴侶起到穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用并防止蛋白質(zhì)凝聚、變性，還具有修復(fù)變性蛋白的功能，對(duì)蛋白質(zhì)功能的發(fā)揮具有重要意義。
[0003]第一個(gè)分子伴侶----核質(zhì)蛋白(nucleoplasmin)是Laskey等人于1978年在
非洲爪蟾卵的浸出液中發(fā)現(xiàn)的，他們通過(guò)研究組蛋白與DNA結(jié)合形成核小體的過(guò)程中，必須依靠一種酸性核蛋白(nucleoplasmin)的參與才能完成它們的裝配。體外試驗(yàn)也表明，只有將組蛋白與過(guò)量的酸性核蛋白混合，才能令其與后加入的DNA組裝最終形成核小體結(jié)構(gòu)，但形成的核小體中并沒(méi)有酸性核蛋白。當(dāng)僅有DNA與組蛋白存在時(shí)，并不能自我組裝成核小體結(jié)構(gòu)，而是形成沉淀。
[0004]迄今為止發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)的分子伴侶都屬于熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)的范疇,大致可主要分為伴侶素家族(chaperonin, Cpn )、熱休克蛋白7 O家族(HSP 70 family)、熱休克蛋白9 O家族(HSP 90 family)以及熱休克 蛋白100家族等保守的蛋白家族，目前還沒(méi)有來(lái)源于棲熱菌噬菌體的分子伴侶的報(bào)道，分子伴侶因其可以提高蛋白質(zhì)(酶)的穩(wěn)定性而使其在工業(yè)上具有應(yīng)用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種分子伴侶TSPcpn47，該分子伴侶TSPcpn47來(lái)源于高溫棲熱菌的噬菌體TSP4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種編碼分子伴侶TSPcpn47的多核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0007]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明獲得的棲熱菌噬菌體TSP4的分子伴侶TSPcpn47，能夠單獨(dú)的行使分子伴侶功能，即幫助變性的蛋白復(fù)性，并且防止其它蛋白在高溫、酸性等條件下變性，可利用于在高溫等環(huán)境下協(xié)助功能蛋白保持其活性，減少蛋白變性，對(duì)保護(hù)功能蛋白的生理活性具有重要作用，其核苷酸序列可以用于構(gòu)建能催化形成以上產(chǎn)物的基因工程菌株。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】[0008]圖1是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47基因的克隆片段電泳示意圖；
圖2是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47基因保守結(jié)構(gòu)域分析示意圖；
圖3是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47基因、pET_28a(+)的酶切示意圖，其中泳道I為分子伴侶TSPcpn47基因的酶切膠回收產(chǎn)物，泳道2為pET_28a(+)，泳道3為Marker ；
圖4是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47基因表達(dá)蛋白的SDS-PAGE分析檢測(cè)電泳圖，其大小為為29000道爾頓，其中泳道I為Protein Marker ;泳道2為Ro_pET28a破碎后的上清；泳道3Ro-pET28a-7S/7/7破碎后的上清；泳道4為Ro_pET28a破碎后的沉淀；泳道5為Ro-m2Sa-TSPcpn47破碎后的沉淀。
[0009]圖5是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47純化SDS-PAGE分析檢測(cè)電泳圖，其中泳道I 為 Protein Marker ;泳道 2 為 vEYI&ArTSPcpM/ Rosetta 破碎后的上清；泳道 3 為X>E\2Sa-TSPcpn47/ Rosetta破碎后的上清過(guò)His_trap柱；泳道4為IOmM咪唑洗脫液；泳道5為150mM咪唑洗脫液；泳道6為500mM咪唑洗脫液；泳道7為500mM咪唑洗脫液；
圖6是本發(fā)明蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖；
圖7是本發(fā)明磷酸鹽濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖；
圖8是本發(fā)明溫度對(duì)分子伴侶TSPcpn47活性的影響；
圖9是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47對(duì)GFP熒光強(qiáng)度恢復(fù)的幫組作用；
圖10是本發(fā)明分子伴侶TSPcpn47對(duì)GFP熱穩(wěn)定性的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此，本實(shí)施例中方法如無(wú)特殊說(shuō)明的均按常規(guī)方法操作，所用試劑如無(wú)特殊說(shuō)明的采用常規(guī)試劑或按常規(guī)方法配置的試劑。
[0011]實(shí)施例1:分子伴侶TSPcpn47基因的擴(kuò)增(以棲熱菌噬菌體TSP4基因組DNA為模 板)
(1)TSP4噬菌體分子伴侶TSPcpn47基因擴(kuò)增所用引物序列如下:
正向引物:5’ - CGGAATTCATGGCACTCTTATCTAAC -3’
反向引物:5’ - ACATCTCGAGCCATGAGGCCACCTCCT -3’
(2)擴(kuò)增體系如下:
表1:擴(kuò)增反應(yīng)體系組分
【權(quán)利要求】
1.一種分子伴侶TSPcpn47，其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示。
2.編碼權(quán)利要求1所述分子伴侶TSPcpn47的多核苷酸，其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所 示。
【文檔編號(hào)】C07K14/005GK103435689SQ201310364132
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月20日
【發(fā)明者】林連兵, 巴頓, 薛寒, 魏云林, 季秀玲, 張琦 申請(qǐng)人:昆明理工大學(xué)