用于制備具有改善性能的抗體的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)具有改善性能的含有Fc的多肽的方法和組合物。
【專利說明】用于制備具有改善性能的抗體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)含有Fe的多肽的方法及其組合物，所述含有Fe的多肽可用作人或動物治療劑。
【背景技術(shù)】
[0002]治療性蛋白經(jīng)常如下實現(xiàn)它們的治療益處:與內(nèi)源性蛋白或生理學(xué)組分接合或結(jié)合以實現(xiàn)期望的應(yīng)答。例如，單克隆抗體經(jīng)常通過兩個結(jié)合事件實現(xiàn)它們的治療益處。首先，抗體的可變結(jié)構(gòu)域結(jié)合靶細(xì)胞上的特定蛋白，例如，癌細(xì)胞的表面上的CD20。這隨后招募效應(yīng)細(xì)胞諸如天然殺傷(NK)細(xì)胞，該天然殺傷(NK)細(xì)胞結(jié)合抗體的恒定區(qū)(Fe)并破壞該抗體所結(jié)合的細(xì)胞。這個過程(被稱為抗體依賴性的細(xì)胞細(xì)胞毒性(ADCC))取決于IgGl重鏈的Fe結(jié)構(gòu)域中Asn 297的特異性N-糖基化事件，Rothman等人，Mol.1mmunol.26:1113-1123 (1989)。缺乏這種N-糖基化結(jié)構(gòu)的抗體仍然結(jié)合抗原，但不可介導(dǎo)ADCC，顯然是由于抗體的Fe結(jié)構(gòu)域?qū)K細(xì)胞表面上Fe受體Fe Y RIIIa的親和力降低。
[0003]不僅N-糖基化的存在在抗體的效應(yīng)子功能中起作用，N-連接的寡糖的特定組成對其最終功能也是重要的。巖藻糖的缺乏或雙天線的(bisecting)N-乙?；咸前返拇嬖谂c ADCC 的效能正相關(guān)，Rothman (1989), Umana 等人，Nat.Biotech.17: 176-180(1999)，Shields 等人，T.Biol.Chem.277: 26733-26740 (2002)，和 Shinkawa 等人，LBiol.Chem.278: 3466-3473 (2003)。也有證據(jù)表明，F(xiàn)e區(qū)的唾液酸化與靜脈內(nèi)免疫球蛋白(IVIG)的抗炎性能正相關(guān)。參見，例如，Kaneko等人，Science.313: 670-673，2006;Nimmer jahn 和 Ravetch.，T.Exp.Med., 204: 11-15，2007。
[0004]鑒于特異性N-糖基化在抗體的功能和效能中的實用性，用于改變抗體中N-連接的寡糖的組成以修飾它們的功能的方法是合乎需要的。具體地，合乎需要的是，改變N-連接的寡糖的組成，以便給含有Fe的肽(諸如抗體)賦予增加的或增強(qiáng)的活化免疫細(xì)胞的能力。這樣的抗體可以用于治療感染性疾病或腫瘤疾病以及充當(dāng)疫苗的佐劑。
[0005]酵母和其它真菌宿主是用于制備重組蛋白的重要生產(chǎn)平臺。酵母是真核生物，并因此與高等真核生物共有共同的進(jìn)化過程，包括許多在分泌途徑中發(fā)生的翻譯后修飾。糖工程改造中的最新進(jìn)展已經(jīng)產(chǎn)生了具有遺傳修飾的糖基化途徑的酵母菌株巴斯德畢赤酵母iPichiapastoris)的細(xì)胞系,所述糖基化途徑允許它們進(jìn)行一系列酶反應(yīng),所述酶反應(yīng)模擬人類中的糖基化過程。參見，例如，美國專利號7, 029，872、7，326，681和7，449，308，它們描述了用于在低等真核宿主細(xì)胞中生產(chǎn)與它們的人相應(yīng)物基本上相同的重組糖蛋白的方法。象從前述方法在酵母中生產(chǎn)的那些聚糖一樣，人樣唾液酸化的雙天線復(fù)合物N-連接的聚糖已經(jīng)表現(xiàn)出用于生產(chǎn)治療性糖蛋白的實用性。因此，用于進(jìn)一步改變或改進(jìn)酵母(諸如巴斯德畢赤酵母)中的抗體生產(chǎn)的方法是合乎需要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明包括一種在有此需要的對象中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含的α _2，3-連接的唾液酸的量與親本多肽中α _2，3-連接的唾液酸的量相比增加。在一個實施方案中，所述對象具有傳染性疾病或腫瘤疾病，或處于發(fā)展傳染性疾病或腫瘤疾病的風(fēng)險中。
[0007]在一個實施方案中，通過在含有Fe的多肽的Fe區(qū)中引入一個或多個突變，增加α -2，3-連接的唾液酸的量(與親本多肽中α -2，3_連接的唾液酸的量相比)。
[0008]在一個實施方案中，通過在具有α-2，3唾液酸轉(zhuǎn)移酶的宿主細(xì)胞中表達(dá)含有Fe的多肽，增加α _2，3-連接的唾液酸的量(與親本多肽中α-2，3-連接的唾液酸的量相比)。在另一個實施方案中，通過在已經(jīng)用編碼α-2，3唾液酸轉(zhuǎn)移酶的核酸轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達(dá)含有Fe的多肽，增加α-2，3-連接的唾液酸的量(與親本多肽中α-2，3_連接的唾液酸的量相比)。在一個實施方案中，所述宿主細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。在一個實施方案中，所述宿主細(xì)胞是低等真核宿主細(xì)胞。在一個實施方案中，所述宿主細(xì)胞是真菌宿主細(xì)胞。在一個實施方案中，所述宿主細(xì)胞是畢赤酵母屬物種。在一個實施方案中，所述宿主細(xì)胞是巴斯德畢赤酵母。
[0009]在一個實施方案中，通過在含有Fe的多肽的Fe區(qū)中引入一個或多個突變，和通過在已經(jīng)用編碼α _2，3唾液酸轉(zhuǎn)移酶的核酸轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達(dá)含有Fe的多肽，增加α -2，3-連接的唾液酸的量(與親本多肽中α -2，3_連接的唾液酸的量相比)。
[0010]在一個實施方案中，本發(fā)明包括一種在有此需要的對象中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N- 聚糖中的唾液酸殘基含有α -2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地經(jīng)由α-2，3連接進(jìn)行連接。在一個實施方案中，所述對象具有傳染性疾病或腫瘤疾病，或處于發(fā)展傳染性疾病或腫瘤疾病的風(fēng)險中。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal(1_4)GlcNAc(2_4)Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在以上實施方案中的任一個中，所述SA可以是NANA或NGNA，或NANA或NGNA的類似物或衍生物。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):NANA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述N-聚糖缺乏巖藻糖。在另一個實施方案中，所述N-聚糖還包含核心巖藻糖。
[0011 ] 在一個實施方案中，本發(fā)明包括一種在有此需要的對象中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基含有α -2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlcNAc(1_4)Man(>=3)GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_3)Gal (1_3) GlcNAc (1_3) Man3GlcNAc2。在以上實施方案中的任一個中，所述SA可以是NANA或NGNA，或NANA或NGNA的類似物或衍生物。在一個實施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地經(jīng)由α-2，3連接進(jìn)行連接。
[0012]在一個實施方案中，本發(fā)明包括一種治療對象中的腫瘤疾病(腫瘤)的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基含有α-2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地 經(jīng)由α-2，3連接進(jìn)行連接。在一個實施方案中，所述對象具有傳染性疾病或腫瘤疾病，或處于發(fā)展傳染性疾病或腫瘤疾病的風(fēng)險中。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在以上實施方案中的任一個中，所述SA可以是NANA或NGNA，或NANA或NGNA的類似物或衍生物。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含由NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2組成的N-連接的寡糖。在一個實施方案中，所述N-聚糖缺乏巖藻糖。在另一個實施方案中，所述N-聚糖還包含核心巖藻糖。
[0013]在以上鑒別的實施方案中的任一個中，所述Fe多肽可以是包含唾液酸化的N-聚糖的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，所述Fe多肽包含在與全長重鏈抗體的Asn297位點對應(yīng)的位置處的N-聚糖，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述Fe多肽是包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO: 7或基本上由其組成的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽包含SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或由其組成，具有一個或多個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽包含SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或由其組成，具有I個、2個、3個或4個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述親本多肽包含SEQ ID NO:6或SEQ IDNO:7的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置243處的突變的抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述突變是F243A。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置264處的突變的抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述突變是V264A。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置243和264處的突變的抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述突變是F243A和V264A。
[0014]在一個實施方案中，與親本含F(xiàn)e的多肽相比，所述含有Fe的多肽具有下述性能中的一種或多種:增加的效應(yīng)子功能、增加的招募免疫細(xì)胞的能力和增加的炎癥性能。
[0015]本發(fā)明還包括一種在有此需要的對象中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含N-聚糖，其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，所述唾液酸殘基排它地通過α -2，3連接進(jìn)行連接。在一個實施方案中，所述對象具有傳染性疾病或腫瘤疾病，或處于發(fā)展傳染性疾病或腫瘤疾病的風(fēng)險中。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)=SA2Gal(1_4)GlcNAc(2_4)Man3GlcNAc20在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含由SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2組成的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在以上實施方案中的任一個中，所述SA可以是NANA或NGNA，或NANA或NGNA的類似物或衍生物。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80% 或 90% 的 N-聚糖包含由 NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2 組成的 N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)。在一個實施方案中，所述N-聚糖缺乏巖藻糖。在另一個實施方案中,所述N-聚糖還包含核心巖藻糖。
[0016]本發(fā)明還包括一種在有此需要的對象中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述對象施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述含有Fe的多肽中的唾液酸殘基含有α-2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽包含SEQID NO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或由其組成，具有一個或多個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽包含SEQ ID Ν0:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列，具有I個、2個、3個或4個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述親本多肽包含SEQ ID Ν0: 6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)=NANA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地經(jīng)由α -2，3連接進(jìn)行連接。
[0017]本發(fā)明還包括，包含含有Fe的多肽的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地經(jīng)由α -2，3連接進(jìn)行連接。
[0018]本發(fā)明還包括，包含含有Fe的多肽的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基含有α -2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一個實施方案中，至少其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal (1_4)GlcNAc (2_4)Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，至少其中所述含有Fe的多肽上的至少 30%、40%、50%、60%、70%、80%或 90% 的 N-聚糖包含由 SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2組成的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在一個實施方案中，至少其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含由NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2組成的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu)。在一個實施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基排它地經(jīng)由α _2，3連接進(jìn)行連接。在一個實施方案中，所述N-聚糖缺乏巖藻糖。在另一個實施方案中，所述N-聚糖還包含核心巖藻糖。
[0019]在涉及藥物制劑的任一個實施方案中，所述含有Fe的多肽可以是包含唾液酸化的N-聚糖的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，所述Fe多肽包含在與全長重鏈抗體的Asn297位點對應(yīng)的位置處的N-聚糖，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的抗體或抗體片段，具有一個或多個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或基本上由其組成的抗體或抗體片段，具有I個、2個、3個或4個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。在一個實施方案中，所述親本多肽包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置243和264處的突變的抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。在一個實施方案中，所述突變是F243A和V264A。在一個實施方案中，與親本含F(xiàn)e的多肽相比，所述含有Fe的多肽具有下述性能中的一種或多種:增加的效應(yīng)子功能、增加的招募免疫細(xì)胞的能力和增加的炎癥性能。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1顯示了不同抗體在4T1-Luc2模型中的抗腫瘤效力(通過腫瘤體積的減小)。
[0021]圖2顯 示了不同抗體在4T1-Luc2模型中的抗腫瘤效力(通過腫瘤體積的減小)。
[0022]圖3顯示了不同抗體在4T1-Luc2模型中的腫瘤生長抑制(TGI)。
[0023]圖4顯示了得自用不同抗體治療的植入腫瘤的小鼠的向肺組織的癌癥轉(zhuǎn)移的圖像。
[0024]圖5顯示了 α 2，3唾液酸化的Fe在如實施例4所述的AIA模型中的作用。
【具體實施方式】
[0025]定義
本文中使用的術(shù)語“G0”指不含半乳糖或巖藻糖的復(fù)合雙天線寡糖，Gl cNAc2Man3Gl cNAc2。
[0026]本文中使用的術(shù)語“G1”指不含巖藻糖且含有一個半乳糖基殘基的復(fù)合雙天線寡糖，GalGlcNAc2Man3GlcNAc2。
[0027]本文中使用的術(shù)語“G2”指不含巖藻糖且含有兩個半乳糖基殘基的復(fù)合雙天線寡糖，Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。
[0028]本文中使用的術(shù)語“G0F”指含有核心巖藻糖且不含半乳糖的復(fù)合雙天線寡糖，GlcNAc2Man3GlcNAc2F。
[0029]本文中使用的術(shù)語“GIF”指含有核心巖藻糖和一個半乳糖基殘基的復(fù)合雙天線寡糖，GalGlcNAc2Man3GlcNAc2F。[0030]本文中使用的術(shù)語“G2F”指含有核心巖藻糖和兩個半乳糖基殘基的復(fù)合雙天線寡糖，Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2F。
[0031]本文中使用的術(shù)語“Man5”指如下顯示的寡糖結(jié)構(gòu):
【權(quán)利要求】
1.一種在有此需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括:給所述受試者施用治療有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基含有α-2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA(1_4)Gal(1_4)GlcNAc (2—4)Man3GlcNAc2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受試者具有傳染性疾病或腫瘤疾病，或處于發(fā)展傳染性疾病或腫瘤疾病的風(fēng)險中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任一項所述的方法，其中所述Fe多肽是抗體或抗體片段。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任一項所述的方法，其中所述Fe多肽是基本上由SEQIDNO:6或SEQ ID NO:7組成的抗體片段。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任一項所述的方法，其中所述含有Fe的多肽是包含SEQIDNO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或基本上由其組成的抗體或抗體片段，具有一個或多個突變，所述突變導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置243和264處的突變的抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。
8.根據(jù)權(quán)利要求1- 7中的任一項所述的方法，其中與親本含F(xiàn)e的多肽相比，所述含有Fe的多肽具有下述性能中的一種或多種: a)增加的效應(yīng)子功能 b)增加的招募免疫細(xì)胞的能力，和 c)增加的炎癥性能。
9.一種包含含有Fe的多肽的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸殘基含有α-2，3連接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):SA (H) Ga I (H) GI cNAc (2_4) Man3G IcNAc20
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含選自以下的N-連接的寡糖結(jié)構(gòu):NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。
11.根據(jù)權(quán)利要求9-10中的任一項所述的藥物制劑，其中與親本含F(xiàn)e的多肽相比，所述含有Fe的多肽具有下述性能中的一種或多種: (a)增加的效應(yīng)子功能； (b)增加的招募免疫細(xì)胞的能力；和 (c)增加的炎癥性能。
12.根據(jù)權(quán)利要求9-11中的任一項所述的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽是基本上由SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7組成的抗體片段。
13.根據(jù)權(quán)利要求9-11中的任一項所述的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽包含SEQID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由其組成，具有一個或多個導(dǎo)致與親本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸量的突變。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物制劑，其中所述含有Fe的多肽是包含在Fe區(qū)的位置243和264處的突變的 抗體或抗體片段，其中所述編號是根據(jù)Kabat中的EU索引。
【文檔編號】C07K16/00GK104011076SQ201280065393
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2012年10月26日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月31日
【發(fā)明者】T.A.斯塔德海姆, D.庫亞, D.札 申請人:默沙東公司