乙型肝炎病毒(hbv)表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開用于減少HBV?mRNA、DNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的反義化合物和方法。此類方法、化合物以及組合物適用于治療、預(yù)防或改善HBV相關(guān)疾病、病癥或病狀。
【專利說明】乙型肝炎病毒(HBV)表達(dá)的調(diào)節(jié)
[0001]序列表
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[0003]領(lǐng)域
[0004]在某些實(shí)施方案中，提供用于抑制乙型肝炎病毒(HBV)mRNA及蛋白質(zhì)在動物體內(nèi)的表達(dá)的方法、化合物及組合物。所述方法、化合物及組合物適用于治療、預(yù)防或改善HBV相關(guān)疾病及病癥。
[0005]背景
[0006]乙型肝炎為由被污染的物質(zhì)(如血液及血液制品)、被污染的針以胃腸外方式傳播、性傳播及由受感染或攜帶者母體垂直傳播至其后代的病毒性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization)估計,在世界范圍內(nèi)有超過20億人已受感染,其中每年有約400萬急性病例，每年有100萬例死亡，以及3.5-4億個慢性攜帶者(World HealthOrganization:Geographic Prevalence of Hepatitis B Prevalence, 2004.http://www.wh0.1nt/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm)。
[0007]病毒HBV為僅感染人及非人靈長類動物的雙鏈?zhǔn)雀涡圆《?。病毒主要在肝臟中進(jìn)行復(fù)制，且以較少程度在腎臟、胰臟、骨髓及脾中進(jìn)行復(fù)制(Hepatitis B virus biology.Microbiol Mol Biol Rev.64:2000; 51-68.) ?病毒及免疫標(biāo)記可在血液中檢測出，且特征性抗原-抗體型態(tài)隨時間推移演變。首先可檢測的病毒標(biāo)記為HBsAg，繼而為乙型肝炎e抗原(HBeAg)及HBV DNA。滴度在潛伏期期間可較高，但HBVDNA及HBeAg水平在疾病發(fā)作時開始下降且在臨床疾病最高點(diǎn)時可能不可檢測(Hepatitis B virus infection-naturalhistory and clinical consequen`ces.N Engl J Med..350:2004;1118-1129)。HBeAg為可在血液中檢測出的病毒標(biāo)記并且與活性病毒復(fù)制有關(guān)，且因此與高病毒負(fù)荷及感染性有關(guān)(Hepatitis B e antigen-the dangerous end game of hepatitis B.N Engl JMed.347:2002; 208-210)?？?HBsAb和抗-HBcAb (IgG)的存在指示先前受感染的個體的恢復(fù)和免疫力。
[0008]當(dāng)前由美國肝病研究協(xié)會(AmericanAssociation for the Study of LiverDiseases, AASLD)及歐洲肝臟研究協(xié)會(European Association for the Study of theLiver, EASL)推薦的用于慢性HBV感染的療法包括干擾素a (INF α )、聚乙二醇化干擾素a-2a(Peg_IFN2a)、恩替卡韋(entecavir)及泰諾福韋(tenofovir)。核苷及核苷酸療法(即恩替卡韋和泰諾福韋)成功地降低病毒負(fù)荷，但HBeAg血清轉(zhuǎn)化率和HBsAg喪失率甚至低于使用IFNa療法所獲得的速率。還使用其它類似療法，包括拉米夫定(lamivudine，3TC)、替比夫定(telbivudine, LdT)及阿德福韋(adefovir),但一般對于核苷/核苷酸療法而言，抗性的出現(xiàn)會限制治療功效。
[0009]因此，在本領(lǐng)域中需要發(fā)現(xiàn)和開發(fā)新的抗病毒療法。另外，需要能夠提高HBeAg和HBsAg血清轉(zhuǎn)化率的新的抗-HBV療法。新近臨床研究已發(fā)現(xiàn)血清轉(zhuǎn)化與HBeAg降低(Fried等(2008) Hepatology47:428)及 HBsAg 降低(Moucari 等(2009) Hepatology49:1151)之間的相關(guān)性。抗原水平的降低可允許免疫學(xué)控制HBV感染，因?yàn)楦呖乖奖徽J(rèn)為會誘導(dǎo)免疫耐受。當(dāng)前用于HBV的核苷療法能夠顯著降低HBV的血清水平，但對HBeAg及HBsAg水平幾乎無影響。
[0010]反義技術(shù)作為減少特定基因產(chǎn)物表達(dá)的有效手段而出現(xiàn)且因此可證明在多種治療、診斷及研究應(yīng)用中獨(dú)特地適用于調(diào)節(jié)HBV表達(dá)(參見美國專利公布號2008/0039418和2007/0299027)。反義療法與核苷療法的不同之處在于其可直接靶向HBV抗原的轉(zhuǎn)錄物且因此降低血清HBeAg及HBsAg水平。由于在HBV感染時產(chǎn)生多種重疊轉(zhuǎn)錄物，所以單個反義寡聚物除HBeAg和HBsAg之外還有可能減少HBV DNA。因此，反義技術(shù)作為減少某些基因產(chǎn)物表達(dá)的有效手段而出現(xiàn)且因此可證明在多種治療、診斷及研究應(yīng)用中獨(dú)特地適用于調(diào)節(jié) HBV0
[0011]概述
[0012]本發(fā)明提供調(diào)節(jié)HBV mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)的方法、化合物及組合物。在某些實(shí)施方案中，適用于調(diào)節(jié)HBV mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)的化合物為反義化合物。在某些實(shí)施方案中，反義化合物為反義寡核苷酸。
[0013]在某些實(shí)施方案中，可在細(xì)胞或組織中進(jìn)行調(diào)節(jié)。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞或組織處于動物體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，動物為人。在某些實(shí)施方案中，HBVmRNA水平降低。在某些實(shí)施方案中，HBV DNA水平降低。在某些實(shí)施方案中，HBV蛋白水平降低。在某些實(shí)施方案中，HBV抗原水平降低。在某些實(shí)施方案中，HBV S-抗原(HBsAg)水平降低。在某些實(shí)施方案中，HBV e-抗原(HBeAg)水平降低。所述降低可以時間依賴性方式或以劑量依賴性方式出現(xiàn)。
[0014]還提供適用于預(yù)防、治療及改善疾病、病癥及病狀的方法、化合物及組合物。在某些實(shí)施方案中，所述HBV相關(guān)疾病、病癥及病狀為肝臟疾病。在某些實(shí)施方案中，所述肝臟疾病、病癥及病狀包括黃疸、 肝癌、肝臟炎癥、肝纖維化、炎癥、肝硬化、肝衰竭、彌漫性肝細(xì)胞炎癥性疾病、噬血細(xì)胞綜合征、血清肝炎、HBV病毒血癥及與肝臟疾病相關(guān)的移植。在某些實(shí)施方案中，所述HBV相關(guān)疾病、病癥及病狀為過度增生性疾病、病癥及病狀。在某些實(shí)施方案中，所述過度增生性疾病、病癥及病狀包括癌癥以及相關(guān)惡性病和轉(zhuǎn)移。在某些實(shí)施方案中，所述癌癥包括肝癌和肝細(xì)胞癌(HCC)。
[0015]所述疾病、病癥及病狀可共同具有一個或多個風(fēng)險因素、成因或結(jié)果。產(chǎn)生肝臟疾病或過度增生性疾病的某些風(fēng)險因素及成因包括逐漸變老；使用煙草；暴露于日光及電離輻射；與某些化學(xué)物質(zhì)接觸；感染某些病毒及細(xì)菌；某些激素療法；癌癥家族史；使用酒精；及某些生活方式選擇，包括不良膳食、缺乏身體運(yùn)動和/或超重。與產(chǎn)生肝臟疾病或過度增生性疾病有關(guān)的某些癥狀及結(jié)果包括但不限于:流行性感冒樣疾病、虛弱、疼痛、頭痛、發(fā)燒、食欲喪失、腹瀉、黃疸、惡心及嘔吐、身體肝區(qū)疼痛、黏土色或灰色糞便、全身發(fā)癢及尿色深。
[0016]在某些實(shí)施方案中，治療方法包括向有需要的個體施用HBV反義化合物。在某些實(shí)施方案中，治療方法包括向有需要的個體施用HBV反義寡核苷酸。
[0017]詳述
[0018]應(yīng)了解，以上一般描述及以下詳述僅具例示性及說明性而不限制如所要求的本發(fā)明。在本文中，除非另外特別說明，否則單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)。除非另外說明，否則本文所用的“或”的使用意謂“和/或”。此外，術(shù)語“包括(including)”以及其它形式，如“包括(includes) ”及“包括(included) ”的使用不具限制性。并且，除非另外特別說明，否則如“元件”或“組件”的術(shù)語涵蓋包括一個單位的元件和組件以及包括超過一個亞單位的元件和組件。
[0019]本文所用的章節(jié)標(biāo)題僅用于組織目的而不被視為限制所述標(biāo)的物。本申請中引用的所有文獻(xiàn)或文獻(xiàn)的部分(包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍及論文)關(guān)于本文所論述的文獻(xiàn)部分明確地以引用方式特此并入以及以引用方式特此整體并入。
[0020]定義
[0021]除非提供具體定義，否則關(guān)于本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)所用的命名及本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的工序及技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知且常用的。可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行化學(xué)合成及化學(xué)分析。在允許的情況下，貫穿本公開中所提及的所有專利、申請、公布的申請及其它公布、可經(jīng)由數(shù)據(jù)庫(如美國國家生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI))獲得的GENBANK登錄號及相關(guān)序列信息及其它數(shù)據(jù)關(guān)于本文所論述的文獻(xiàn)部分以引用方式并入本文以及以引用方式整體并入本文。
[0022]除非另外指示，否則以下術(shù)語具有以下含義:
[0023]“2’ -O-甲氧基乙基”(又為2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖環(huán)的2’位上的O-甲氧基-乙基修飾。2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖為修飾的糖。
[0024]“2’ -MOE核苷”(又為2’ -O-甲氧基乙基核苷)意謂包含2’ -MOE修飾的糖部分的核苷。
[0025]“2’ -取代的核苷”意謂在呋喃糖基環(huán)的2’位上包含除H或OH以外的取代基的核苷。在某些實(shí)施方案中，2’取代的核苷包括具有雙環(huán)糖修飾的核苷。
[0026]“3’目標(biāo)位點(diǎn)”是指目標(biāo)核酸中與具體反義化合物的3’最末端核苷酸互補(bǔ)的核苷酸。
[0027]“5’目標(biāo)位點(diǎn)”是指目標(biāo)核酸中與具體反義化合物的5’最末端核苷酸互補(bǔ)的核苷酸。
[0028]“5-甲基胞嘧啶”意謂用連接至5位的甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為修飾的核酸堿基。
[0029]“約”意謂在值±7%的范圍內(nèi)。舉例來說，如果指出“化合物將HBV抑制至少約70%”，那么表示63%至77%范圍內(nèi)的HBV水平被抑制。
[0030]“可接受的安全性概況”意謂在臨床上可接受的限度內(nèi)的副作用型態(tài)。
[0031]“活性藥劑”意謂藥物組合物中在向個體施用時提供治療益處的物質(zhì)。舉例來說，在某些實(shí)施方案中，靶向HBV的反義寡核苷酸為活性藥劑。
[0032]“活性目標(biāo)區(qū)”意謂一種或多種活性反義化合物所靶向的目標(biāo)區(qū)?！盎钚苑戳x化合物”意謂降低目標(biāo)核酸水平或蛋白質(zhì)水平的反義化合物。
[0033]“急性乙型肝炎感染”在暴露于乙型肝炎病毒的人開始產(chǎn)生病毒性肝炎的體征和癥狀時產(chǎn)生。這被稱作潛伏期的時段平均為90天，但可短至45天或長達(dá)6個月。對于大多數(shù)人，這感染將引起輕度至中度不適，但會因身體免疫反應(yīng)成功戰(zhàn)勝病毒而自行消失。然而，有些人，尤其是免疫系統(tǒng)受損的那些人，如患有AIDS、進(jìn)行化學(xué)療法、服用免疫抑制藥物或服用類固醇的人會因急性HBV感染而產(chǎn)生極嚴(yán)重的問題，且進(jìn)展成更嚴(yán)重的病狀，如爆發(fā)性肝衰竭。
[0034]“同時施用”是指兩種藥劑以這兩者的藥理學(xué)作用在患者體內(nèi)同時顯現(xiàn)的任何方式共同施用。同時施用不需要這兩種藥劑于單一藥物組合物中、以相同劑型或通過相同施用途徑來施用。這兩種藥劑的作用本身無需同時顯現(xiàn)。這些作用僅需重疊一段時間而無需共同延長。
[0035]“施用”意謂向個體提供藥劑，且包括但不限于由醫(yī)學(xué)專業(yè)人員施用及自行施用。
[0036]“藥劑”意謂在向動物施用時可提供治療益處的活性物質(zhì)?！暗谝凰巹币庵^本文所述的治療性化合物。舉例來說，第一藥劑可為靶向HBV的反義寡核苷酸?！暗诙巹币庵^本文所述的第二治療性化合物(例如靶向HBV的第二反義寡核苷酸)和/或非HBV治療性化合物。
[0037]“改善”是指減輕病狀或疾病嚴(yán)重性的至少一個指標(biāo)。指標(biāo)的嚴(yán)重性可通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的主觀或客觀度量來確定。
[0038]“動物”是指人或非人動物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、貓、豬，及非人靈長
類動物，包括但不 限于猴及黑猩猩。
[0039]“抗體”是指特征在于與抗原以某種方式特異性反應(yīng)的分子，其中抗體與抗原各自利用另一者來定義。抗體可指的是完全抗體分子或其任何片段或區(qū)域，如重鏈、輕鏈、Fab區(qū)及F。區(qū)。
[0040]“反義活性”意謂可歸于反義化合物與其目標(biāo)核酸雜交的任何可檢測或可測量活性。在某些實(shí)施方案中，反義活性為目標(biāo)核酸或由所述目標(biāo)核酸編碼的蛋白質(zhì)的量或表達(dá)的減少。
[0041]“反義化合物”意謂能夠與目標(biāo)核酸經(jīng)由氫鍵進(jìn)行雜交的寡聚化合物。反義化合物的實(shí)例包括單鏈和雙鏈化合物，如反義寡核苷酸、siRNA, shRNA, snoRNA、miRNA及衛(wèi)星重復(fù)序列。
[0042]“反義抑制”意謂在與目標(biāo)核酸互補(bǔ)的反義化合物存在下目標(biāo)核酸水平相較于在不存在反義化合物下的目標(biāo)核酸水平有所減少。
[0043]“反義機(jī)制”為所有涉及化合物與目標(biāo)核酸的雜交的機(jī)制，其中雜交的結(jié)果或效果為目標(biāo)降解或目標(biāo)占有，伴隨阻礙涉及例如轉(zhuǎn)錄或剪接的細(xì)胞機(jī)構(gòu)。
[0044]“反義寡核苷酸”意謂具有允許與目標(biāo)核酸的相應(yīng)區(qū)域或區(qū)段雜交的核酸堿基序列的單鏈寡核苷酸。
[0045]“堿基互補(bǔ)性”是指反義寡核苷酸的核酸堿基與目標(biāo)核酸中的相應(yīng)核酸堿基進(jìn)行準(zhǔn)確堿基配對(即雜交)的能力，且由相應(yīng)核酸堿基之間的沃森-克里克(Watson-Crick)、霍氏(Hoogsteen)或反霍氏氫鍵結(jié)合介導(dǎo)。
[0046]“雙環(huán)糖”意謂由兩個非偕位碳原子橋連修飾的呋喃糖環(huán)。雙環(huán)糖為修飾的糖。
[0047]“體重”是指動物的全身重量，包括所有組織(包括脂肪組織)。
[0048]“帽結(jié)構(gòu)”或“末端帽部分”意謂已并入反義化合物任一末端處的化學(xué)修飾。
[0049]“cEt”或“限制性乙基”意謂包含連接4’ -碳與2’ -碳的橋基的雙環(huán)糖部分，其中所述橋基具有下式:4’ -CH(CH3)-0-2’。[0050]“限制性乙基核苷”(又為cEt核苷)意謂包含含4’ -CH(CH3)-O^'橋的雙環(huán)糖部分的核苷。
[0051]“化學(xué)相異區(qū)”是指反義化合物中以某種方式在化學(xué)上不同于同一反義化合物的另一區(qū)的區(qū)域。舉例來說，具有2’ -O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域在化學(xué)上與具有無2’ -O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域不同。
[0052]“嵌合反義化合物”意謂具有至少2個化學(xué)相異區(qū)的反義化合物，每一位置具有多個亞單位。
[0053]“慢性乙型肝炎感染”在人最初患有急性感染，但接著不能抗擊感染時出現(xiàn)。疾病變成慢性抑或完全消退主要取決于受感染的人的年齡。出生時受感染的約90%嬰兒將進(jìn)展成慢性疾病。然而，隨著人年齡的增長，慢性感染的風(fēng)險降低，因此20%至50%的兒童及不到10%的年齡較大的兒童或成人將由急性感染進(jìn)展成慢性感染。慢性HBV感染為本發(fā)明的實(shí)施方案的主要治療目標(biāo)，但本發(fā)明的ASO組合物還能夠治療HBV相關(guān)病狀，如炎癥、纖維化、硬化、肝癌、血清肝炎及其它病狀。
[0054]“共同施用”意謂向個體施用兩種或更多種藥劑。兩種或更多種藥劑可在單個藥物組合物中，或可在單獨(dú)的藥物組合物中。所述兩種或更多種藥劑可各自經(jīng)由相同或不同的施用途徑來施用。共同施用涵蓋并行或依序施用。
[0055]“互補(bǔ)性”意謂第一核酸與第二核酸的核酸堿基之間配對的能力。
[0056]“順應(yīng)”意謂個體對所推薦的療法的依從性。
[0057]“包含(comprise) ”、“包含(comprises) ” 及“包含(comprising) ” 應(yīng)理解為意指包括所述步驟或要素或步驟或要素的群組，但不排除任何其它步驟或要素或步驟或要素的群組。
[0058]“連續(xù)的核酸堿基”意謂彼此緊鄰的核酸堿基。
[0059]“治愈”意謂恢復(fù)健康的方法或過程或針對疾病所開出的治療。
[0060]“脫氧核糖核苷酸”意謂在核苷酸的糖部分的2’位上具有氫的核苷酸。脫氧核糖核苷酸可被多種取代基中的任一種修飾。
[0061]“設(shè)計”或“被設(shè)計來”是指設(shè)計與所選核酸分子特異性雜交的寡聚化合物的方法。
[0062]“稀釋劑”意謂組合物中缺乏藥理學(xué)活性，但為藥學(xué)上必需或所需的成分。舉例來說，在注射的藥物中，稀釋劑可為液體，例如生理鹽水溶液。
[0063]“劑量單位”意謂提供藥劑的形式，例如丸劑、片劑或本領(lǐng)域中已知的其它劑量單位。
[0064]“劑量”意謂單次施用中或指定時段內(nèi)提供的藥劑的指定量。在某些實(shí)施方案中，可以兩次或更多次快速注射(bolus)、片劑或注射來施用劑量。舉例來說，在某些實(shí)施方案中，在需要皮下施用時，所需劑量需要不易由單次注射提供的體積。在所述實(shí)施方案中，可使用兩次或更多次注射來達(dá)成所需劑量。在某些實(shí)施方案中，可以兩次或更多次注射施用劑量以使個體的注射部位反應(yīng)減至最小。在其它實(shí)施方案中，藥劑通過經(jīng)長時段或連續(xù)輸注來施用。劑量可被規(guī)定為每小時、每天、每周或每個月的藥劑的量。
[0065]“給藥方案”為被設(shè)計以達(dá)成一種或多種所需作用的劑量的組合。
[0066]“持續(xù)時間”意謂活性或事件持續(xù)的時段。在某些實(shí)施方案中，治療的持續(xù)時間為施用藥劑的劑量的時段。[0067]“有效量”在調(diào)節(jié)活性或治療或預(yù)防病狀的情況下意謂向需要所述調(diào)節(jié)、治療或防治的受試者以單次劑量或一系列劑量的一部分形式施用有效調(diào)節(jié)所述效應(yīng)，或治療或防治或改善所述病狀的活性成分的量。有效量將視以下因素而變化:所治療受試者的健康及身體狀況、所治療受試者的分類學(xué)群組、組合物的配制、醫(yī)學(xué)病況的評估及其它相關(guān)因素。
[0068]“功效”意謂產(chǎn)生所需效果的能力。
[0069]“表達(dá)”包括基因密碼信息借以轉(zhuǎn)化成細(xì)胞中存在且起作用的結(jié)構(gòu)的所有功能。所述結(jié)構(gòu)包括但不限于轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯的產(chǎn)物。
[0070]“完全互補(bǔ)”或“ 100%互補(bǔ)”意謂第一核酸的各核酸堿基在第二核酸中皆具有互補(bǔ)核酸堿基。在某些實(shí)施方案中，第一核酸為反義化合物且目標(biāo)核酸為第二核酸。
[0071]“完全修飾的基元”是指反義化合物所包含的連續(xù)核苷序列中基本上各核苷均為具有均一修飾的糖修飾的核苷。
[0072]“間隔體(gapmer)”意謂具有多個支持核糖核酸酶H裂解的核苷的內(nèi)部區(qū)域位于具有一個或多個核苷的外部區(qū)域之間的嵌合反義化合物，其中構(gòu)成內(nèi)部區(qū)域的核苷在化學(xué)上與構(gòu)成外部區(qū)域的核苷不同。內(nèi)部區(qū)域可稱為“間隔區(qū)”且外部區(qū)域可稱為“翼區(qū)”。
[0073]“間隔加寬”意謂反義化合物具有位于具有I至6個具有修飾的糖部分的核苷酸的5’與3’翼段之間的具有12個或超過12個連續(xù)的2’-脫氧核糖核苷酸的間隔段。
[0074]“HBV”意謂哺乳動物乙型肝炎病毒，包括人乙型肝炎病毒。所述術(shù)語涵蓋乙型肝炎病毒，尤其人乙型肝炎病毒的地理基因型，以及乙型肝炎病毒的地理基因型的變異病毒株。
[0075]“HBV抗原”意謂任何乙型肝炎病毒抗原或蛋白質(zhì)，包括核心蛋白，如“乙型肝炎核心抗原”或“HBcAG”及“乙型肝炎E抗原”或“HBeAG”，及包膜蛋白，如“HBV表面抗原”或“HBsAg” 或 “HBsAG”。
`[0076]“乙型肝炎E抗原”或“HBeAg”或“HBeAG”為分泌的非微粒形式的HBV核心蛋白。HBV抗原HBeAg與HBcAg共有主要氨基酸序列，因此在T細(xì)胞水平上展示交叉反應(yīng)性。HBeAg不為病毒組裝或復(fù)制所需，但研究表明其可為發(fā)生慢性感染所需。新生兒HBeAg陰性突變體感染常引起爆發(fā)的急性而非慢性HBV感染(Terezawa等(1991)Pediatr.Res.29:5), M用WHeAg陰性突變體使幼年土撥鼠感染會引起低得多的慢性WHV感染率(Cote等(2000)Hepatology31:190)。HBeAg可能通過經(jīng)由缺失或克隆無能使核心特異性T細(xì)胞失活而充當(dāng)耐受原(Milich等(1998) J.1mmunol.160:8102)。在抗病毒療法及HBeAg血清轉(zhuǎn)化時HBV病毒負(fù)荷及抗原減少與T細(xì)胞的抑制性受體程序化死亡-1 (PD-1 ;又稱為rocDi)(活化的T細(xì)胞的負(fù)向調(diào)節(jié)因子)的表達(dá)減少之間存在正相關(guān)(Evans等(2008)H印atology48:759)。
[0077]“HBV mRNA”意謂由乙型肝炎病毒表達(dá)的任何信使RNA。
[0078]“HBV核酸”或“HBV DNA”意謂編碼HBV的任何核酸。舉例來說，在某些實(shí)施方案中，HBV核酸包括不限于編碼HBV基因組或其部分的任何病毒DNA序列、自病毒DNA轉(zhuǎn)錄的任何RNA序列，包括編碼HBV蛋白質(zhì)的任何mRNA序列。
[0079]“HBV蛋白”意謂由乙型肝炎病毒分泌的任何蛋白質(zhì)。所述術(shù)語涵蓋各種HBV抗原，包括核心蛋白，如“肝炎E抗原”、“HBeAg”或“HBeAG”，及包膜蛋白，如“HBV表面抗原”或 “HBsAg”。
[0080]“HBV表面抗原”或“HBsAg”或“HBsAG”為感染性HBV病毒粒子的包膜蛋白，但還分泌為非感染性粒子，其血清水平比HBV病毒粒子高1000倍。受感染的人或動物的HBsAg血清水平可高達(dá) 1000 μ g/mL (Kann 和 Gehrlich (1998) Topley&Wilson’ s Microbiologyand Microbial Infections,第9版，745)。在急性HBV感染中，HBsAg在血清中的半衰期或血清tl/2為8.3天(Chulanov等(2003) J.Med.Virol.69:313)。由脊髓樹突狀細(xì)胞內(nèi)化HBsAg會抑制共刺激分子(即B7)上調(diào)并且抑制T細(xì)胞刺激能力(den Brouw等(2008)Immunologyl26:280),且受慢性感染的患者的樹突狀細(xì)胞在HBsAg存在下還展示缺乏共刺激分子的表達(dá)、IL-12分泌及對T細(xì)胞的刺激(Zheng等(2004) J.Viral Hepatitisll: 217)。CHB患者的HBsAg特異性⑶8細(xì)胞展示改變的四聚體結(jié)合。這些⑶8細(xì)胞并非無變應(yīng)性，但可具有賦予部分耐受性或忽視性的TCR拓?fù)?Reignat等(2002) J.Exp.Med.195:1089)。此外，在Peg-1FNa 2a療法期間在第24周血清HBsAg降低>llog對于持續(xù)病毒學(xué)反應(yīng)(SVR-定義為治療后I年內(nèi)不可由PCR檢測到HBV DNA)具有高預(yù)測值(92%) (Moucari等(2009)Hepatology49:1151)。
[0081]“乙型肝炎相關(guān)病狀”或“HBV相關(guān)病狀”意謂由乙型肝炎感染、暴露或疾病惡化、由乙型肝炎感染、暴露或疾病所引起、與其相關(guān)、與其有關(guān)或可歸因于乙型肝炎感染、暴露或疾病的任何疾病、生物學(xué)病狀、醫(yī)學(xué)病狀或事件。術(shù)語乙型肝炎相關(guān)病狀包括慢性HBV感染、炎癥、纖維化、硬化、肝癌、血清肝炎、黃疸、肝癌、肝臟炎癥、肝纖維化、肝硬化、肝衰竭、彌漫性肝細(xì)胞炎癥性疾病、噬血細(xì)胞綜合征、血清肝炎、HBV病毒血癥、與肝臟疾病相關(guān)的移植，以及在結(jié)合針對乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒抗原的存在的陽性測試或針對乙型肝炎病毒抗原特異性抗體的存在的陽性測試時，具有可包括以下任一種或全部的癥狀的病狀:流行性感冒樣疾病、虛弱、疼痛、頭痛、發(fā)燒、食欲喪失、腹瀉、惡心及嘔吐、身體肝區(qū)疼痛、黏土色或灰色糞便、全身發(fā)癢及尿色深。
[0082]“雜交”意謂互補(bǔ)核酸分子的退火。在某些實(shí)施方案中，互補(bǔ)核酸分子包括但不限于反義化合物與核酸目標(biāo)。在某些實(shí)施方案中，互補(bǔ)核酸分子包括但不限于反義寡核苷酸與核酸目標(biāo)。
[0083]“鑒別患有HBV感染的動物”意謂鑒別已診斷感染有HBV的動物；或鑒別具有包括但不限于以下的HBV感染的任一癥狀的動物:慢性HBV感染、炎癥、纖維化、硬化、肝癌、血清肝炎、黃疸、肝癌、肝臟炎癥、肝纖維化、肝硬化、肝衰竭、彌漫性肝細(xì)胞炎癥性疾病、噬血細(xì)胞綜合征、血清肝炎、HBV 病毒血癥、與肝臟疾病相關(guān)的移植，以及在結(jié)合針對乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒抗原的存在的陽性測試或針對乙型肝炎病毒抗原特異性抗體的存在的陽性測試時，具有可包括以下任一種或全部的癥狀的病狀:流行性感冒樣疾病、虛弱、疼痛、頭痛、發(fā)燒、食欲喪失、腹瀉、惡心及嘔吐、身體肝區(qū)疼痛、黏土色或灰色糞便、全身發(fā)癢及尿色深。
[0084]“緊鄰”意謂緊鄰元件之間不存在介入元件。
[0085]“個體”意謂選用于治療或療法的人或非人動物。
[0086]“個體順應(yīng)性”意謂個體對于所推薦或開出的療法的依從性。
[0087]“誘導(dǎo)”、“抑制”、“增強(qiáng)”、“升高”、“增加”、“降低”或其類似術(shù)語一般表示兩種狀態(tài)之間的定量差異。所述術(shù)語可指兩種狀態(tài)之間具統(tǒng)計顯著性的差異。舉例來說，“有效抑制HBV的活性或表達(dá)的量”意謂處理的樣品中HBV的活性水平或表達(dá)水平與未處理的細(xì)胞中HBV的活性水平或表達(dá)水平在定量上有所不同，且可能具統(tǒng)計顯著性。所述術(shù)語適用于例如表達(dá)水平及活性水平。[0088]“抑制HBV”意謂降低HBV mRNA、DNA和/或蛋白質(zhì)的水平或表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，相較于在不存在HBV反義化合物(如反義寡核苷酸)下HBV mRNA、DNA和/或蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，HBV在靶向HBV的反義化合物(包括靶向HBV的反義寡核苷酸)存在下得到抑制。
[0089]“抑制表達(dá)或活性”是指降低、阻斷表達(dá)或活性且不一定指示完全消除表達(dá)或活性。
[0090]“注射部位反應(yīng)”意謂個體的注射部位處皮膚的炎癥或異常發(fā)紅。
[0091]“核苷間鍵”是指核苷之間的化學(xué)鍵。
[0092]“腹膜內(nèi)施用”意謂經(jīng)由輸注或注射于腹膜中來施用。
[0093]“靜脈內(nèi)施用”意謂施用至靜脈內(nèi)。
[0094]“延長的”反義寡核苷酸為相對于本文所公開的反義寡核苷酸具有一個或多個額外核苷的反義寡核苷酸。
[0095]“連接的脫氧核苷”意謂由磷酸酯連接形成核苷酸的被脫氧核糖取代的核酸堿基(A、G、C、T、U)。
[0096]“連接的核苷”意謂由核苷間鍵連接在一起的相鄰核苷。
[0097]“鎖核酸”或“LNA”或“LNA核苷”意謂在核苷糖單位的4’位與2’位之間具有連接兩個碳原子，從而形成雙環(huán)糖的橋基的核酸單體。所述雙環(huán)糖的實(shí)例包括但不限于 A) a -L-亞甲氧基(4’ -CH2-0-2’) LNA ; (B) β -D-亞甲氧基(4’ -CH2-0_2’) LNA ； (C)亞乙氧基(4，-(CH2)2-0-2，)LNA ; (D)氨氧基(4，-CH2-O-N(R)-2’)LNA ;及(E)氧氨基(4’ -CH2-N(R) -0-2’) LNA,如下文所描繪。
[0098]
【權(quán)利要求】
1.一種化合物，其包含修飾的寡核苷酸，所述修飾的寡核苷酸由10至30個連接的核苷組成并具有包含核酸堿基序列SEQ ID NO:5至310、321至802、804至1272或1288至1350、1364至1372、1375、1376以及1379中任何一個的至少8個連續(xù)核酸堿基的核酸堿基序列。
2.一種化合物，其包含修飾的寡核苷酸，所述修飾的寡核苷酸由10至30個連接的核苷組成，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQID NO:1至少96%互補(bǔ)。
4.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQID NO:1至少97%互補(bǔ)。
5.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQID NO:1至少98%互補(bǔ)。
6.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQID NO:1至少99%互補(bǔ)。
7.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQID NO: 1100%互補(bǔ)。
8.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其由單鏈的修飾的寡核苷酸組成。
9.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中至少一個核苷間鍵是修飾的核苷間鍵。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中每個核苷間鍵均為硫代磷酸酯核苷間鍵。
11.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸中的至少一個核苷包含修飾的糖。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中所述至少一個修飾的糖是雙環(huán)糖。
13.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中至少一個修飾的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
14.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中所述修飾的糖包含2’-O(CH2)2-OCH3基團(tuán)。
15.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中所述修飾的糖包含4’-CH(CH3)-0-2’基團(tuán)。
16.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中至少一個核苷包含修飾的核酸堿基。
17.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述修飾的核酸堿基是5-甲基胞嘧啶。
18.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
19.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述間隔段由6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個或16個連接的核苷組成。
20.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由2個至3個連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由3個至4個連接的核苷組成；其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間，其中每個翼段的每個核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每個核苷間鍵均為硫代磷酸酯鍵。
21.如權(quán)利要求20所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由3個連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由3個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間，其中每個翼段的每個核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每個核苷間鍵均為硫代磷酸酯鍵。
22.如權(quán)利要求21所述的化合物，其中所述5’翼段的所述3個連接的核苷中的每一個均包含2’-0_甲氧基乙基糖，并且所述3’翼段的所述3個連接的核苷中的每一個均包含限制性乙基糖。
23.如權(quán)利要求21所述的化合物，其中所述5’翼段的所述3個連接的核苷按5’至3’方向包含2’ -O-甲氧基乙基糖、限制性乙基糖以及限制性乙基糖，并且所述3’翼段的所述3個連接的核苷按5’至3’方向包含限制性乙基糖、限制性乙基糖以及2’ -O-甲氧基乙基糖。
24.如權(quán)利要求20所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由2個連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由4個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間，其中每個翼段的每個核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每個核苷間鍵均為硫代磷酸酯鍵。
25.如權(quán)利要求24所述的化合物，其中所述5’翼段的所述2個連接的核苷按5’至3’方向包含2’-0_甲氧基乙基糖和限制性乙基糖，并且所述3’翼段的所述4個連接的核苷按5’至3’方向包含限制性乙基糖、2’ -O-甲氧基乙基糖、限制性乙基糖以及2’ -O-甲氧基乙基糖。
26.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由5個連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由5個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
27.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； 5’翼段，其由4個連接的核苷組成；以及 3’翼段，其由4個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
28.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成；.5’翼段，其由3個連接的核苷組成；以及 .3’翼段，其由3個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
29.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； .5’翼段，其由2個連接的核苷組成；以及 .3’翼段，其由2個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
30.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； .5’翼段，其由3個連接的核苷組成；以及 .3’翼段，其由4個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間并且其中每個翼段的每個核苷均包含修飾的糖。
31.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸包含: 間隔段，其由10個連接的脫氧核苷組成； .5’翼段，其由I個至5個連接的核苷組成；以及 .3’翼段，其由I個至5個連接的核苷組成； 其中所述間隔段位于所述5’翼段與所述3’翼段之間，其中每個翼段的每個核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖；并且其中每個核苷間鍵均為硫代磷酸酯鍵。
32.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸由20個連接的核苷組成。
33.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸由16個連接的核苷組成。
34.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸由15個至30個連接的核苷組成。
35.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸由18個至22個連接的核苷組成。
36.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸由20個至30個連接的核苷組成。
37.一種化合物，其包含修飾的寡核苷酸，所述修飾的寡核苷酸由10個至30個連接的核苷組成并與SEQ ID NO:1在以下核苷酸范圍內(nèi)互補(bǔ):1至20、10至29、10至56、13至38、.13 至 35、19 至 38、25 至 47、25 至 50、25 至 56、43 至 68、43 至 63、55 至 74、58 至 73、58 至.74,58 至 77、58 至 79、58 至 80、58 至 84、59 至 74、59 至 75、59 至 80、60 至 75、60 至 76、60至 79、61 至 76、61 至 77、61 至 80、62 至 77、63 至 84、68 至 114、101 至 123、98 至 123、113 至.138,116 至 138,131 至 150,137 至 162,152 至 186,158 至 177,167 至 186,191 至 215,196至 224,196 至 215,196 至 218,199 至 228,199 至 218,199 至 224,200 至 224,205 至 224、`206 至 228、218 至 237、224 至 243、233 至 264、242 至 `263、243 至 262、244 至 263、245 至 274,245 至 260,245 至 `264,246 至 266,247 至 266,247 至 269,247 至 270,245 至 `267,251 至 267、245 至 266、250 至 269、251 至 266、`251 至 268、251 至 269、245 至 269、245 至 266、 245 至 `261、`250 至 265、250 至 266、250 至 267、250 至 268、`250 至 `269、251 至 270、252 至 267,253 至 268,253 至 `269,253 至 `272,253 至 274,254 至 269,254 至 270,254 至 `274,255 至 `270、255 至 271、255 至 274、255 至 401、255 至 400、255 至 274、255 至 273、255 至 272、 255 至 271、`256 至 271、`2`56 至 275、255 至 276、256 至 272、256 至 `276、253 至 `275、256 至 279,257 至 276,258 至 273,259 至 274,260 至 `279,262 至 281,262 至 321,262 至 315,262 至 312、265 至 `312、266 至 288、266 至 291、266 至 285、`281 至 321、281 至 303、290 至 321、 290 至 312、292 至 `311、290 至 312、`293 至 312、293 至 315、293 至 321、`296 至 321、302 至 `321,324 至 343、339 至 361、339 至 `367、348 至 367、342 至 367、358 至 392、358 至 378、360 至 392、360 至 383、`360 至 388、360 至 385、362 至 381、`366 至 388、369 至 `388、366 至 385、 366 至 392、370 至 `389、370 至 392、`380 至 399、382 至 401、384 至 433、`384 至 400、384 至 `401,385 至 401、405 至 424、409 至 `428、405 至 428、411 至 426、411 至 427、411 至 430、411 至 431,411 至 437,412 至 431,411 至 426,411 至 427,412 至 428,412 至 431,412 至 427、 413 至 433、413 至 432、`413 至 428、413 至 429、413 至 432、413 至 433、414 至 `427、415 至 427,414 至 429,414 至 430,414 至 433,415 至 `428,415 至 429,415 至 430,415 至 431,415 至 434、416 至 `431、416 至 432、416 至 429、416 至 435、417 至 432、417 至 433、417 至 436、 418 至 433、418 至 435、418 至 434、`418 至 437、419 至 435、`419 至 434、420 至 435、419 至 `432,419 至 434,421 至 `436,422 至 437,422 至 441,423 至 `436,425 至 465,454 至 `473,454 至 472,457 至 476,457 至 `472,457 至 473,454 至 `476,455 至 472,457 至 485,458 至 `485、 458 至 483、458 至 `477、458 至 473、459 至 485、`460 至 485、463 至 498、463 至 485、466 至 485,463 至 `482,457 至 491,458 至 491,459 至 491,460 至 491,463 至 `491,466 至 491,472 至 491、472 至 493、473 至 492、475 至 491、459 至 494、460 至 494、`463 至 494、466 至 494、 `467 至 498、472 至 494、475 至 `494、457 至 473、457 至 `472、458 至 494、454 至 494、457 至 494,457 至 473,485 至 513,470 至 493,476 至 519,485 至 519,500 至 519,512 至 534,512 至 550、524 至 546、536 至 559、548 至 567、`548 至 570、550 至 570、548 至 594、`554 至 573、 548 至 `576、`560 至 594、584 至 606、611 至 `645、617 至 363、`623 至 `642、617 至 645、639 至 754,639 至 658,639 至 `654,641 至 `656,642 至 657,643 至 658,642 至 754,653 至 `672,662 至 `685、665 至 685，665 至 689、668 至 687、670 至 754、670 至 706、670 至 685、670 至 686、 `670 至 689、`671 至 690、`671 至 691、671 至 686、671 至 `687、672 至 `693、672 至 `697、672 至 707,672 至 687,672 至 `688,673 至 688,674 至 `693,678 至 693,679 至 694,679 至 `707,679 至 698、679 至 `701、679 至 702、679 至 707、680 至 695、`680 至 699、679 至 699、681 至 706、 681 至 696、`682 至 `697、682 至 706、`682 至 707、682 至 702、682 至 `701、`683 至 698、684 至 `699,685 至 700、686 至 701、687 至 `754、688 至 704、689 至 709、689 至 710、690 至 705、`679 至 705、679 至 710、`679 至 706、690 至 710、691 至 `710、690 至 754、690 至 `706、684 至 703、 687 至 705、`687 至 702、687 至 703、687 至 706、688 至 703、688 至 `704、688 至 705、689 至 `704,689 至 705、689 至 708、690 至 705、690 至 706、690 至 709、691 至 706、692 至 711、`693 至 716、693 至 712、`695 至 715、697 至 716、697 至 `716、690 至 716、724 至 `746、724 至 752、.724 至 754、724 至 758、733 至 752、738 至 754、738 至 753、739 至 758、739 至 754、739 至.775,739 至 754,740 至 754,742 至 785,742 至 773,757 至 776,757 至 785,790 至 815,793至 812、811 至 833、811 至 844、814 至 833、811 至 906、820 至 839、822 至 844、822 至 867、.823 至 842、845 至 864、845 至 867、854 至 906、845 至 909、845 至 906、854 至 876、863 至.882,863 至 885、878 至 900、887 至 906、899 至 918、899 至 933、899 至 958、905 至 927、905至 933,914 至 933,936 至 958,936 至 955,945 至 964,951 至 970,951 至 985,951 至 1044、.951 至 1024,951 至 1056,951 至 997,960 至 985,963 至 1044,963 至 1024,963 至 997,972 至.1015,1025 至 1044、1031 至 1056、1037 至 1056、1046 至 1083、1049 至 1068、1070 至 1089、.1070 至 1095、1082 至 1101、1081 至 1134,1081 至 1143,1082 M 1101,1088 M 1107,1088 M.1134,1094 至 1119,1097 至 1119,1112 至 1134,1118 至 1143,1118 至 1146,1088 至 1146、.1121 至 1140、1127 至 1146、1127 至 1193、1150 至 1193、1156 至 1187、1165 至 1187、1170 至.1192,1171 至 1191,1172 至 1191,1176 至 1192,1176 至 1285,1177 至 1192,1176 至 1191、.1203 至 1297、1206 至 1228,1206 M 1255,1209 M 1228,1215 M 1255,1245 M 1265,1251 M .1280.1262至 1285,1251 至 1285,1259 至 1296,1259 至 1290,1259 至 1287,1261 至 1296、.1261 至 1285,1261 至 1276,1261 至 1277,1261 至 1280,1262 M 1296,1262 M 1277,1262 M.1278.1262至 1281,1263 至 1278,1263 至 1279,1263 至 1282,1264 至 1279,1264 至 1280、.1264 至 1283、1264 至 1297、1265 至 1280、1265 至 1281,1265 M 1284,1266 M 1281,1266 M.1282,1266 至 1285,1267 至 1282,1267 至 1283,1268 至 1283,1268 至 1284,1268 至 1296、.1269 至 1284,1269 至 1285,1269 至 1288,1270 至 1285,1271 至 1290,1271 至 1296,1277 至.1296,1261 至 1290,1262 至 1290,1268 至 1290,1263 至 1305,1259 至 1305,1259 至 1305、.1266 至 1305,1259 至 1302,1275 至 1294,1281 至 1306,1281 至 1324,1281 至 1336,1282 至.1301,1286 至 1306、1290 至 1324、1293 至 1318、1290 至 1324、1293 至 1315、1296 至 1315、.1311 至 1336,1311 至 1333、1326 至 1345、1353 至 1381,1359 M 1378,1395 M 1414,1498 M.1532,1498 至 1523,1498 至 1535,1510 至 1529,1515 至 1535,1515 至 1563,1515 至 1596、.1515 至 1605、1515 至 1602、1515 至 1540,1515 M 1535,1518 M 1605、1518 至 1602、1518 至.1537,1521 至 1563,1521 至 1540,1550 至 1655,1550 至 1563,1550 至 1569,1553 至 1578、.1553 至 1599、1553 至 1590、1565 至 1584、1571 至 1595,1577 M 1605,1577 M 1606,1577 M.1592,1577 至 1593,1577 至 1596,1578 至 1593,1578 至 1594,1578 至 1597,1578 至 1598、.1571 至 1598、1579 至 1594、1579 至 1594、1579 至 1598,1580 M 1595,1580 M 1596,1580 M.1599,1580 至 1605、1580 至 1602、1581 至 1596、1581 至 1597、1581 至 1600、1582 至 1597、.1582 至 1598、1582 至 1601、1582 至 1602,1553 M 1655,1583 M 1598、1583 至 1599、1583 至.1602,1584 至 1599,1584 至 1600,1584 至 1603,1585 至 1600,1585 至 1601,1585 至 1604、.1586 至 1601,1586 M 1602、1586 至 1605、1587 至 1602、1587 至 1603,1587 M 1606,1588 M.1603、1588 至 1604、1589 至 1604、1589 至 1605、1590 至 1605、1590 至 1606、1591 至 1606、.1586 至 1652、1642 至 1664、1651 至 1720,1651 至 1673,1655 M 1679,1695 M 1720,1716 M.1738,1743 至 1763,1743 至 1768,1764 至 1783,1773 至 1792,1777 至 1796,1777 至 1800、.1778 至 1800、1778 至 1793、1778 至 1794,1778 M 1797,1779 M 1798、1779 至 1797、1779 至.1796,1779 至 1795,1779 至 1794,1780 至 1799,1780 至 1796,1780 至 1795,1781 至 1797、.1781 至 1796,1781 至 1796,1781 至 1800,1781 至 1797,1782 M 1799,1782 M 1797,1782 M`1798、1783 至 1798、1783 至 1799、1784 至 1800、1784 至 1799、1779 至 1799、1778 至 1889、`1778 至 1794,1779 M 1795、1780 至 1799、1785 至 1800、1794 至 1813,1806 M 1837,1806 M`1828,1806 至 1825、1809 至 1828、1812 至 1843、1812 至 1837、1812 至 1831、1815 至 1843、`1815 至 1844,1815 至 1840,1815 至 1834,1818 至 1837,1821 至 1840,1821 至 1844,1821 至`1837,1822 至 1843、1822 至 1839、1822 至 1837、1823 至 1843、1823 至 1838、1824 至 1839、`1827 至 1846、1861 至 1884,1861 至 1880,1865 M 1885,1866 M 1881、1867 至 1882、1867 至`1886、1868 至 1883、1869 至 1885、1869 至 1884、1870 至 1885、1871 至 1886、1872 至 1887、`1874 至 1889,1876 M 1895、1888 至 1914、1888 至 1908、1891 至 1910,1891 M 1914,1895 M`1938,1895 至 1935,1913 至 1935,1898 至 1920,1907 至 1929,1913 至 1935,1918 至 1934、`1919 至 1938、1919 至 1934、1921 至 1934,1928 M 1956,1957 M 1976、2035 至 2057、2083 至`2141,2230 至 2261,2368 至 2393,2381 至 2397,2368 至 2394,2379 至 2394,2381 至 2396、`2368 至 2397,2368 至 2396,2420 至 2439,2458 至 2476,2459 至 2478,2819 至 2838,2818 至`2838、2873至2892或3161至3182，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1至少90%互補(bǔ)。
38.一種化合物，其包含修飾的寡核苷酸，所述修飾的寡核苷酸由10個至30個連接的核苷組成并且其所具有的核酸堿基序列包含具有至少8個連續(xù)核酸堿基且與以下核酸堿基的等長部分100%互補(bǔ)的部分:1至20、10至29、10至56、13至38、13至35、19至38、25至 47、25 至 50、25 至 56、43 至 68、43 至 63、55 至 74、58 至 73、58 至 74、58 至 77、58 至 79、58至 80、58 至 84、59 至 74、59 至 75、59 至 80、60 至 75、60 至 76、60 至 79、61 至 76、61 至 77、`61 至 80、62 至 77、63 至 84、68 至 114、101 至 123、98 至 123、113 至 138、116 至 138、131 至`150,137 至 162,152 至 186,158 至 177,167 至 186,191 至 215,196 至 224,196 至 215,196至 218,199 至 228,199 至 218,199 至 224,200 至 224,205 至 224,206 至 228,218 至 237、`224 至 243、233 至 264、242 至 263、243 至 262、244 至 263、245 至 274; 245 至 260、245 至`264,246 至 266,247 至 266,247 至 269,247 至 270,245 至 267,251 至 267,245 至 266,250至 269、251 至 266、251 至 268、251 至 269、245 至 269、245 至 266、245 至 261、250 至 265、`250 至 266、250 至 267、250 至 268、250 至 269、251 至 270、252 至 267、253 至 268、253 至`269,253 至 272,253 至 274,254 至 269,254 至 270,254 至 274,255 至 270,255 至 271,255至 274,255 至 401,255 至 400,255 至 274,255 至 273,255 至 272,255 至 271,256 至 271、`256 至 275、255 至 276、256 至 272、256 至 276、253 至 275、256 至 279、257 至 276、258 至`273,259 至 274,260 至 279,262 至 281,262 至 321,262 至 315,262 至 312,265 至 312,266 至`288,266 至 291,266 至 285,281 至 321,281 至 303,290 至 321,290 至 312,292 至 311,290 至`312,293 至 312,293 至 315,293 至 321,296 至 321,302 至 321,324 至 343,339 至 361,339至 367、348 至 367、342 至 367、358 至 392、358 至 378、360 至 392、360 至 383、360 至 388、`360 至 385、362 至 381、366 至 388、369 至 388、366 至 385、366 至 392、370 至 389、370 至`3`92,380 至 399、382 至 401、384 至 433、384 至 400、384 至 401、385 至 401、405 至 424、409至 428、405 至 428、411 至 426、411 至 427、411 至 430、411 至 431、411 至 437、412 至 431、`411 至 426、411 至 427、412 至 428、412 至 431、412 至 427、413 至 433、413 至 432、413 至`428,413 至 429,413 至 432,413 至 433,414 至 427,415 至 427,414 至 429,414 至 430,414至 433、415 至 428、415 至 429、415 至 430、415 至 431、415 至 434、416 至 431、416 至 432、.416 至 429、416 至 435、417 至 432、417 至 433、417 至 436、418 至 433、418 至 435、418 至 .434,418 至 437,419 至 435,419 至 434,420 至 435,419 至 432,419 至 434,421 至 436,422 至 437,422 至 441,423 至 436,425 至 465,454 至 473,454 至 472,457 至 476,457 至 472、 457 至 473、454 至 .476、455 至 472、457 至 485、458 至 485、458 至 483、458 至 477、458 至 473,459 至 485,460 至 .485,463 至 498,463 至 485,466 至 485,463 至 482,457 至 491,458 至 491、459 至 491、460 至 .491、463 至 491、466 至 491、472 至 491、472 至 493、473 至 492、 475 至 491、459 至 494、460 至 494、463 至 494、466 至 494、467 至 498、472 至 494、475 至 494,457 至 473,457 至 472,458 至 .494,454 至 494,457 至 494,457 至 473,485 至 513,470 至 493,476 至 519,485 至 519,500 至 519,512 至 534,512 至 550,524 至 546,536 至 559、 548 至 567、548 至 570、550 至 570、548 至 594、554 至 .573、548 至 576、560 至 594、584 至 606,611 至 645,617 至 363,623 至 642,617 至 645,639 至 .754,639 至 658,639 至 654,641 至 656、642 至 657、643 至 658、642 至 754、653 至 672、662 至 .685、665 至 685，665 至 689、 668 至 687、670 至 754、670 至 706、670 至 685、670 至 686、670 至 689、671 至 690、671 至 691,671 至 686,671 至 687,672 至 693,672 至 697,672 至 707,672 至 .687,672 至 688,673 至 688、674 至 693、678 至 693、679 至 694、679 至 707、679 至 698、679 至 .701、679 至 702、 679 至 707、680 至 695、680 至 699、679 至 699、681 至 706、681 至 696、682 至 697、682 至 706,682 至 707、682 至 702、682 至 701、683 至 698、684 至 699、685 至 700、686 至 701、687 至 754、688 至 704、689 至 709、689 至 710、690 至 705、679 至 705、679 至 710、679 至 706、 690 至 710、691 至 710、690 至 754、690 至 706、684 至 703、687 至 705、687 至 702、687 至 703,687 至 706、688 至 703、688 至 704、688 至 705、689 至 704、689 至 705、689 至 708、690 至 705、690 至 706、690 至 709、691 至 706、692 至 711、693 至 716、693 至 712、695 至 715、 697 至 716、697 至 716、690 至 716、724 至 746、724 至 752、724 至 754、724 至 758、733 至 752,738 至 754,738 至 753,739 至 758,739 至 754,739 至 775,739 至 754,740 至 754,742 至 785、742 至 773、757 至 776、757 至 785、790 至 815、793 至 812、811 至 833、811 至 844、 814 至 833、811 至 906、820 至 839、822 至 844、822 至 867、823 至 842、845 至 864、845 至 867,854 至 906、845 至 909、845 至 906、854 至 876、863 至 882、863 至 885、878 至 900、887 至 906、899 至 918、899 至 933、899 至 958、905 至 927、905 至 933、914 至 933、936 至 958、 936 至 955、945 至 964、951 至 970、951 至 985、951 至 1044、951 至 1024、951 至 1056、951 至 997、960 至 985、963 至 1044、963 至 1024、963 至 997、972 至 1015、1025 至 1044、1031 至 1056,1037 至 1056,1046 至 .1083,1049 至 1068,1070 至 1089,1070 至 1095,1082 至 1101、 1081 至 1134、1081 至 1143、1082 至 .1101、1088 至 1107、1088 至 1134、1094 至 1119、1097 至 1119,1112 至 1134,1118 至 1143,1118 至 .1146,1088 至 1146,1121 至 1140,1127 至 1146、 1127 至 1193、1150 至 1193、1156 至 1187、1165 至 .1187、1170 至 1192、1171 至 1191、1172 至 1191,1176 至 1192,1176 至 1285,1177 至 1192,1176 至 .1191,1203 至 1297,1206 至 1228、 1206 至 1255、1209 至 1228、1215 至 1255、1245 至 1265,1251 M .1280,1262 M 1285,1251 至 1285,1259 至 1296,1259 至 1290,1259 至 1287,1261 至 1296,1261 至 .1285,1261 至 1276、 1261 至 1277,1261 至 1280、1262 至 1296、1262 至 1277,1262 M 1278,1262 M .1281,1263 M 1278,1263 至 1279,1263 至 1282,1264 至 1279,1264 至 1280,1264 至 1283,1264 至 1297、.1265 至 1280、1265 至 1281、1265 至 1284、1266 至 1281、1266 至 1282,1266 M 1285,1267 M.1282.1267至 1283,1268 至 1283,1268 至 1284,1268 至 1296,1269 至 1284,1269 至 1285、.1269 至 1288,1270 M 1285,1271 至 1290,1271 至 1296,1277 M 1296,1261 至 1290,1262 M.1290.1268至 1290、1263 至 1305、1259 至 1305、1259 至 1305、1266 至 1305、1259 至 1302、.1275 至 1294,1281 至 1306,1281 至 1324,1281 至 1336,1282 M 1301,1286 M 1306,1290 M.1324,1293 至 1318,1290 至 1324,1293 至 1315,1296 至 1315,1311 至 1336,1311 至 1333、.1326 至 1345、1353 至 1381、1359 至 1378,1395 M 1414,1498 M 1532、1498 至 1523、1498 至.1535,1510 至 1529,1515 至 1535,1515 至 1563,1515 至 1596,1515 至 1605,1515 至 1602、.1515 至 1540、1515 至 1535、1518 至 1605、1518 至 1602、1518 至 1537、1521 至 1563、1521 至.1540,1550 至 1655、1550 至 1563、1550 至 1569、1553 至 1578、1553 至 1599、1553 至 1590、.1565 至 1584,1571 至 1595、1577 至 1605、1577 至 1606,1577 M 1592,1577 M 1593,1577 M.1596,1578 至 1593,1578 至 1594,1578 至 1597,1578 至 1598,1571 至 1598,1579 至 1594、.1579 至 1594、1579 至 1598、1580 至 1595、1580 至 1596、1580 至 1599、1580 至 1605、1580 至.1602,1581 至 1596、1581 至 1597、1581 至 1600、1582 至 1597、1582 至 1598、1582 至 1601、.1582 至 1602,1553 M 1655、1583 至 1598、1583 至 1599、1583 至 1602,1584 M 1599,1584 M.1600,1584 至 1603、1585 至 1600、1585 至 1601、1585 至 1604、1586 至 1601、1586 至 1602、.1586 至 1605、1587 至 1602、1587 至 1603、1587 至 1606、1588 至 1603、1588 至 1604、1589 至.1604、1589 至 1605、1590 至 1605、1590 至 1606、1591 至 1606、1586 至 1652、1642 至 1664、.1651 至 1720,1651 至 1673,1655 M 1679,1695 M 1720,1716 M 1738、1743 至 1763、1743 至.1768,1764 至 1783,1773 至 1792,1777 至 1796,1777 至 1800,1778 至 1800,1778 至 1793、.1778 至 1794,1778 M 1797、1779 至 1798、1779 至 1797、1779 至 1796,1779 M 1795,1779 M.1794,1780 至 1799,1780 至 1796,1780 至 1795,1781 至 1797,1781 至 1796,1781 至 1796、.1781 至 1800,1781 至 1797、1782 至 1799、1782 至 1797,1782 M 1798,1783 M 1798,1783 M.1799,1784 至 1800,1784 至 1799,1779 至 1799,1778 至 1889,1778 至 1794,1779 至 1795、.1780 至 1799、1785 至 1800、1794 至 1813、1806 至 1837、1806 至 1828、1806 至 1825、1809 至.1828,1812 至 1843,1812 至 1837,1812 至 1831,1815 至 1843,1815 至 1844,1815 至 1840、.1815 至 1834,1818 M 1837,1821 至 1840,1821 至 1844,1821 至 1837,1822 M 1843,1822 M.1839,1822 至 1837、1823 至 1843、1823 至 1838、1824 至 1839、1827 至 1846、1861 至 1884、.1861 至 1880、1865 至 1885、1866 至 1881、1867 至 1882、1867 至 1886、1868 至 1883、1869 至.1885、1869 至 1884、1870 至 1885、1871 至 1886、1872 至 1887、1874 至 1889、1876 至 1895、.1888 至 1914,1888 至 1908,1891 至 1910,1891 至 1914,1895 至 1938,1895 至 1935,1913 至.1935,1898 至 1920,1907 至 1929,1913 至 1935,1918 至 1934,1919 至 1938,1919 至 1934、.1921 至 1934,1928 至 1956,1957 至 1976,2035 至 2057,2083 至 2141,2230 至 2261,2368 至.2393,2381 至 2397、2368 至 2394、2379 至 2394、2381 至 2396、2368 至 2397、2368 至 2396、.2420 至 2439,2458 至 2476,2459 至 2478,2819 至 2838,2818 至 2838,2873 至 2892 或 3161至3182，其中所述修飾的寡核苷酸的所述核酸堿基序列與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。
39.如權(quán)利要求36所述的化合物，其中所述修飾的寡核苷酸的至少一個核苷包含至少一個2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖。
40.一種化合物，其包含修飾的寡核苷酸，所述修飾的寡核苷酸由10至30連接的核苷組成并具有包含核酸堿基序列 SEQ ID ΝΟ:1、1273、1274、1275、1276、1277、1278、1279、.1280、1281、1282、1283、1284、1285、1287、1352、1353、1354、1359、1360、1361、1362 以及1363中任何一個的至少8個連續(xù)核酸堿基的核酸堿基序列。
41.一種組合物，其包含如權(quán)利要求1至40中任一項所述的化合物或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑中的至少一個 。
42.一種方法，其包括向動物施用如權(quán)利要求1至41中任一項所述的化合物或組合物。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述動物是人。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中施用所述化合物預(yù)防、治療、改善HBV相關(guān)疾病、病癥或病狀，或延緩HBV相關(guān)疾病、病癥或病狀的進(jìn)展。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是肝病。
46.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是黃疸、肝炎、肝纖維化、炎癥、肝硬化、肝衰竭、彌漫性肝細(xì)胞炎癥性疾病、噬血細(xì)胞綜合征、血清肝炎、HBV病毒血癥或與肝臟疾病相關(guān)的移植。
47.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述疾病或病狀是過度增生性疾病。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述過度增生性疾病是肝癌。
49.一種降低動物的抗原水平的方法，所述方法包括向所述動物施用如權(quán)利要求1至41中任一項所述的化合物或組合物。
50.如權(quán)利要求49所述的方法，其中HBsAG水平被降低。
51.如權(quán)利要求49所述的方法，其中HBeAG水平被降低。
52.如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述動物是人。
53.如權(quán)利要求49所述的方法，其包括將所述化合物或組合物和第二種藥劑共同施用。
54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中將所述化合物或組合物和所述第二種藥劑同時施用。
【文檔編號】C07H21/02GK103582648SQ201280025777
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月21日
【發(fā)明者】埃里克·E·斯威茲, 蘇珊·M·弗賴爾, 邁克爾·L·麥凱萊布 申請人:Isis制藥公司