專利名稱：抗Benzonase單克隆抗體、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及抗Benzonase單克隆抗體、其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
Benzonase是源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)產(chǎn)生的核酸內(nèi)切酶，能高效地降解所有形式的DNA和RNA (單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀)。結(jié)構(gòu)上，該酶由兩個(gè)相同的亞基通過(guò)兩個(gè)二硫鍵連接而成，每個(gè)亞基有245個(gè)氨基酸,分子量 30kDa。Benzonase有效用于實(shí)驗(yàn)室重組蛋白表達(dá)純化以及重組藥物制備過(guò)程中核酸的消化、去除。目前，Benzonase的檢測(cè)方法之一是利用Benzonase本身的水解活性進(jìn)行間接進(jìn)行,但如果Benzonase失去酶解能力就不能檢測(cè)出Benzonase ;另外,可以通過(guò)ELISA方法檢測(cè)Benzonase的含量,但是這種方法使用的抗體是多抗，特異性較差，不能精確定量。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)的發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，以Benzonase蛋白作為免疫原或?qū)enzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原，能夠獲得靈敏、高效、特異的抗Benzonase單克隆抗體。本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供抗Benzonase單克隆抗體的制備方法。本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供根據(jù)所述方法制備得到的抗Benzonase單克隆抗體。本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供所述抗Benzonase單克隆抗體的應(yīng)用。作為本發(fā)明的第一個(gè)方面，抗Benzonase單克隆抗體的制備方法，以Benzonase蛋白作為免疫原或?qū)enzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。進(jìn)一步地，所述方法包括以下步驟A)將Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原免疫動(dòng)物；B)將被免疫動(dòng)物的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合；C)篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。其中，所述Benzonase蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示,所述Benzonase的氨基酸肽段的氨基酸序列如 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQID NO :6、SEQ ID NO 7 中任一項(xiàng)所示。其中，所述載體蛋白選自1(1^、85八、(^八，優(yōu)選為1(1^。其中，所述動(dòng)物選自小鼠、大鼠、兔子，優(yōu)選為小鼠。作為本發(fā)明的第二個(gè)方面，根據(jù)上述方法制備得到的抗Benzonase單克隆抗體。作為本發(fā)明的第三個(gè)方面,所述抗Benzonase單克隆抗體在檢測(cè)Benzonase及其類似物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的單克隆抗體的有益效果1、以Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段作為免疫原,所制備的抗體特異地識(shí)別核酸內(nèi)切酶Benzonase及其類似物，能夠通過(guò)Western Blotting對(duì)Benzonase精確定量，并從分子量上作進(jìn)一步地確認(rèn)是否為Benzonase ；2、利用此抗體通過(guò)Western Blotting可檢測(cè)出每毫升體系中低于Ing或Iunit的 Benzonase ；3、能夠檢測(cè)具有酶活或失活的Benzonase。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的抗Benzonase單克隆抗體特異性好、靈敏度高、適用范圍廣，可用于Benzonase及其類似物的檢測(cè)，具有良好的應(yīng)用前景。



圖1為本發(fā)明篩選獲得的14株單克隆抗體與Benzonase的Western Blotting反應(yīng)。圖2為本發(fā)明制備的單克隆抗體與Benzonase的Western Blotting反應(yīng),其中，泳道 1-8 對(duì)應(yīng)的 Benzonase 濃度依次為 10ng/ml、5ng/ml、2. 5ng/ml、l. 25ng/ml、0. 625ng/ml、0. 3125ng/ml、0. 15625ng/ml、0. 078125ng/ml。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、抗Benzonase單克隆抗體的制備1.1、免疫根據(jù)SEQ ID NO 1所示的Benzonase的氨基酸序列設(shè)計(jì)特異性的多肽，序列如表I所示。表1、設(shè)計(jì)的多肽序列
權(quán)利要求
1.抗Benzonase單克隆抗體的制備方法,其特征在于，以Benzonase蛋白作為免疫原或?qū)enzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase 單克隆抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟A)將Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原免疫動(dòng)物；B)將被免疫動(dòng)物的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合；C)篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述Benzonase蛋白的氨基酸序列如 SEQ ID NO 1 所示。
4.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述Benzonase的氨基酸肽段的氨基酸序列如 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO 4, SEQID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO: 7中任一項(xiàng)所示。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述載體蛋白選自KLH、BSA、OVA。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述載體蛋白為KLH。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述動(dòng)物選自小鼠、大鼠、兔子。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述動(dòng)物為小鼠。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的抗Benzonase單克隆抗體。
10.如權(quán)利要求9所述的抗Benzonase單克隆抗體在檢測(cè)Benzonase及其類似物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了抗Benzonase單克隆抗體的制備方法，以Benzonase蛋白作為免疫原或?qū)enzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。本發(fā)明的方法獲得的單克隆抗體特異性好、靈敏度高，可用于Benzonase及其類似物的檢測(cè)。
文檔編號(hào)C07K16/40GK103012591SQ20121053762
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者張濤, 尹娟 申請(qǐng)人:武漢吉愛(ài)生物技術(shù)有限公司