專利名稱：一種槍刀藥堿1的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，具體涉及ー種槍刀藥堿I的制備方法。
背景技術(shù)：
槍刀藥堿UHypoestestatin I),分子式C24H27NO3,分子量377. 48。槍刀藥堿I是從爵床科(Acanthaceae)輪生槍刀藥辦poesies verticillaris Soland.全植物中提取分離的ー種異喹啉生物堿類化合物。實驗研究表明，槍刀藥堿I具有抗腫瘤活性，能抑制白血病細胞 P388 生長，ED50 為 2. 3 X I(T5 μ g/ml。目前，國內(nèi)尚未見槍刀藥堿I的提取純化方法方面的報道
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種槍刀藥堿I的制備方法，該方法操作簡單、得率高、安全環(huán)保，可快速大量分離高純度槍刀藥堿I。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
(1)提取取輪生槍刀藥全植物粉碎成粗粉，加入80-95%的こ醇溶液，35-55°C下進行連續(xù)逆流超聲提取20-80min，得到こ醇提取液；
(2)氧化鋁柱層析上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測，收集富含槍刀藥堿I成分的洗脫液；
(3)萃取洗脫液濃縮至小體積，加1%鹽酸水溶液溶解，濾除不溶物，將酸液加入堿液調(diào)至PH9-10，加等體積量的ニ氯甲烷萃取，萃取液濃縮得到粗品；
(4)高速逆流色譜分離上述粗品采用高速逆流色譜分離，收集槍刀藥堿I組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得槍刀藥堿I粗晶；
(5)重結(jié)晶將槍刀藥堿I粗晶用氯仿-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體。步驟(I)中所述超聲頻率為60-80KHZ。步驟(2)中所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1。步驟(3)中所述堿性溶液為2 5mol/L的氨水溶液。步驟(4)中所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為ニ氯甲烷-甲醇-pH3. 2磷酸鹽緩沖液，體積比為(5-8) :(14-17) : (4-7)。步驟(5)中所述氯仿-丙酮的體積比為3:1。本發(fā)明的優(yōu)點在于1)操作簡單、耗時短，易于產(chǎn)業(yè)化放大；2)提取、柱層析、高速逆流色譜分離等步驟中的溶劑用量少，并可回收再利用；3)具有較高的經(jīng)濟效益和學術(shù)價值，本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，可為槍刀藥堿I的進ー步開發(fā)提供藥理原料和實踐支持。
具體實施例方式 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進ー步說明
實施例I:取輪生槍刀藥全植物1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設備頭部進料ロ進料，從連續(xù)逆流超聲提取設備尾部溶劑加入ロ加入95%こ醇溶液，55°C下進行連續(xù)逆流超聲提取20min，超聲頻率為80KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，向浸膏中加氧化鋁(120目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測，收集槍刀藥堿I流分，濃縮至密度I. 25g/ml，加入2倍量1%鹽酸溶液稀釋，濾除沉淀后，カロ入2mol/L氨水調(diào)至pH9. 2，用等量ニ氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得粗品。取氯仿、甲醇、PH3. 3磷酸鹽緩沖液按(6:15:7)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以I. 5ml/min流速泵入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣,控制轉(zhuǎn)速為800r/min,收集目標成分，減壓回收試劑得槍刀藥堿I粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體，經(jīng)HPLC檢測，純度96. 5%。實施例2:
取輪生槍刀藥全植物1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設備頭部進料ロ進料，從 連續(xù)逆流超聲提取設備尾部溶劑加入ロ加入80%こ醇溶液，45°C下進行連續(xù)逆流超聲提取50min，超聲頻率為70KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(80目)拌勻、干燥后裝柱，用4倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測，收集槍刀藥堿I流分，濃縮至密度I. 25g/ml，加入2倍量1%鹽酸溶液稀釋，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至pH9，用等量ニ氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得粗品。取氯仿、甲醇、pH3. 3磷酸鹽緩沖液按(8:17:7)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以2. 5ml/min流速泵入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣,控制轉(zhuǎn)速為850r/min,收集目標成分，減壓回收試劑得槍刀藥堿I粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體，經(jīng)HPLC檢測，純度95. 8%。實施例3
取輪生槍刀藥全植物10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設備頭部進料ロ進料，從連續(xù)逆流超聲提取設備尾部溶劑加入ロ加入90%こ醇溶液，35°C下進行連續(xù)逆流超聲提取50min,超聲頻率為70KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用6倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測，收集槍刀藥堿I流分，濃縮至密度I. 5g/ml，加入2倍量1%鹽酸溶液稀釋，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至PH10，用等量ニ氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得粗品。取氯仿、甲醇、pH3. 3磷酸鹽緩沖液按(7:15:4)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以3ml/min流速泵入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣,控制轉(zhuǎn)速為900r/min,收集目標成分,減壓回收試劑得槍刀藥堿I粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體，經(jīng)HPLC檢測，純度96. 5%。實施例4:
取輪生槍刀藥全植物10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設備頭部進料ロ進料，從連續(xù)逆流超聲提取設備尾部溶劑加入ロ加入80%こ醇溶液，35°C下進行連續(xù)逆流超聲提取SOmin,超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測，收集槍刀藥堿I流分，濃縮至密度I. 5g/ml，加入2倍量1%鹽酸溶液稀釋，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至PH9，用等量ニ氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得粗品。取氯仿、甲醇、pH3. 3磷酸鹽緩沖液按(5:14:6)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以2. 5ml/min流速泵入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣,控制轉(zhuǎn)速為850r/min,收集目標成分,減壓 回收試劑得槍刀藥堿I粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體，經(jīng)HPLC檢測，純度97. 2%。
權(quán)利要求
1.一種槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)提取取輪生槍刀藥全植物粉碎成粗粉，加入80-95%的乙醇溶液，35-55°C下進行連續(xù)逆流超聲提取20-80min，得到乙醇提取液； (2)氧化鋁柱層析上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測，收集富含槍刀藥堿I成分的洗脫液； (3)萃取洗脫液濃縮至小體積，加鹽酸水溶液溶解，濾除不溶物，將酸液加入堿液調(diào)至PH9-10，加等體積量的二氯甲烷萃取，萃取液濃縮得到粗品； (4)高速逆流色譜分離上述粗品采用高速逆流色譜分離，收集槍刀藥堿I組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得槍刀藥堿I粗晶； (5)重結(jié)晶將槍刀藥堿I粗晶用氯仿-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度槍刀藥堿I晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于步驟(I)中所述超聲頻率為 60-80KHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述堿性溶液為2 5mol/L的氨水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于步驟(4)所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-PH3. 2磷酸鹽緩沖液，體積比為(5-8) (14-17) (4_7)。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的槍刀藥堿I的制備方法，其特征在于步驟(5)所述氯仿-丙酮的體積比為3:1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種槍刀藥堿1的制備方法，其制備方法是(1)取輪生槍刀藥全植物粗粉，加入80-95%的乙醇溶液，進行連續(xù)逆流超聲提取，得到提取液；(2)將提取液濃縮，再經(jīng)氧化鋁柱層析；(3)洗脫液濃縮至小體積，加鹽酸水溶液溶解，濾除不溶物，將酸液調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑得粗品；(4)高速逆流色譜分離；(5)氯仿-丙酮重結(jié)晶，得到高純度的槍刀藥堿1結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡單、得率高，可得到高純度產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟價值和學術(shù)價值。
文檔編號C07D471/04GK102827164SQ20121037121
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司