專利名稱：一種從發(fā)酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素a的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從發(fā)酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素A的方法。 背景技術(shù)：
布雷菲德菌素A(Brefeldin Α)是一種天然存在的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，化學(xué)名 [(1R，2E，6S，10E,lias,14aR)-1，6，7，8，9，1la，12，13，14，14a-Decahydro-l,13-dihydroxy -6-methyl-4H-cyclopent [f] oxacyclotridecin-4-one],分子式為 C16H24O4,分子量約 280,
化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種從發(fā)酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素A的方法，所述方法包括(1)將含有布雷菲德菌素A的發(fā)酵液，經(jīng)固液分離去除固體雜質(zhì)，得到澄清的布雷菲德菌素A發(fā)酵液上清液；(2)以非極性大孔吸附樹脂為吸附劑，對步驟(1)所得布雷菲德菌素A溶液進行吸附層析操作，待樹脂吸附至飽和，水洗去除未吸附雜質(zhì)，再以體積濃度30 60%的乙醇水溶液為洗脫劑洗脫，洗脫液減壓蒸餾回收溶劑、濃縮，獲得布雷菲德菌素A粗品；所述非極性大孔吸附樹脂為下列之一或其中兩種以上的混合物HZ830、HZ820、HZ818、HZ816、HZ841、 HZ801 ；(3)將步驟( 布雷菲德菌素A粗品復(fù)溶于乙醇中，得到布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，再以溶析結(jié)晶或冷卻結(jié)晶方式進行結(jié)晶操作，所得晶體在-4. 0 X 10_3 -4. 0 X lOlPa、 4 40°C條件下真空干燥1 M小時，即得所述高純度布雷菲德菌素A。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述含有布雷菲德菌素A的發(fā)酵液由布雷正青霉變種CCTCC No =M 208113發(fā)酵獲得。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(1)為將含有布雷菲德菌素A的發(fā)酵液，常溫下9000r miiT1離心10分鐘，收集上清液，即為所述澄清的布雷菲德菌素A發(fā)酵液上清液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟( 為步驟(1)所得布雷菲德菌素A發(fā)酵液上清液用非極性大孔吸附樹脂吸附至飽和，先用2 4B. V.的水淋洗除雜，再用 3 8B. V.的體積濃度30 80%的乙醇或甲醇水溶液以0. 05 0. 20B. V. /分鐘的流速洗脫，洗脫液在-4. OX 10_2 -8. OX 10_2MPa、40 60°C條件下減壓蒸餾回收溶劑，真空濃縮， 得到布雷菲德菌素A粗品。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟C3)為步驟( 所得布雷菲德菌素A粗品進一步于30 70°C下用適量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，然后進行冷卻結(jié)晶操作晶種投入量0. 5 10. Omg/ml，控制降溫速度為0. 05 5°C /min, 攪拌速度10 400r/min，出晶溫度4 45°C，養(yǎng)晶時間0. 5 72小時；抽濾，所得晶體在-4. OX Kr3 -4. OX KT1MPad 40°C條件下真空干燥1 M小時，獲得高純度布雷菲德菌素A晶體。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟C3)為步驟( 所得布雷菲德菌素A粗品常溫下用適量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，進行溶析結(jié)晶操作 晶種投入量0. 5 10. Omg/ml，在蠕動泵的控制下勻速將反溶劑水滴入至布雷菲德菌素A乙醇溶液，直至乙醇水體積比為1 0. 5 5，攪拌速度10 400r/min，所有反溶劑0. 5 24小時滴完，養(yǎng)晶0. 5 72小時；抽濾，所得晶體在-4. OXlO-3 -4. O X KT1MPad 40°C 條件下真空干燥1 M小時，得到高純度布雷菲德菌素A晶體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從發(fā)酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素A的方法，所述高純度是指純度在99％(w/w)以上，所述方法包括將含有布雷菲德菌素A的發(fā)酵液，經(jīng)固液分離除固體雜質(zhì)，然后以非極性大孔吸附樹脂為吸附劑進行吸附層析操作，待樹脂吸附至飽和，水洗去除未吸附雜質(zhì)，再用體積濃度30～60％的極性溶劑水溶液洗脫，洗脫液減壓蒸餾回收溶劑、濃縮，獲得布雷菲德菌素A粗品，粗品進一步進行溶析結(jié)晶或冷卻結(jié)晶操作，獲得所述高純度布雷菲德菌素A。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在生產(chǎn)工藝簡單易行、產(chǎn)物收率高、易于實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，得到的布雷菲德菌素A晶體純度高(＞99％)，晶型規(guī)則、晶體展開性好，滿足生物試劑對品質(zhì)的高要求。
文檔編號C07D313/00GK102399210SQ201110370278
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者吳植獻, 吳燁飛, 沈寅初, 王亞軍, 薛鋒, 鄭裕國 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)