專利名稱：一種從葡萄皮中分離制備五種高純度花色苷單體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種從葡萄皮中分離制備五種高純度花色苷單體的方法，涉及天然色素的制備， 屬于食品安全和食品分析化學領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
花色苷是一種對人體有益的天然色素，可做為食用色素使用，在食品中的應(yīng)用廣泛?；ㄉ沼兄谌梭w抵御炎癥，抑制脂質(zhì)過氧化作用，同時還能促進血液循環(huán)。在葡萄中天然花色苷主要存在于果皮上，經(jīng)釀造過程賦予了葡萄酒亮麗的紅色。葡萄是世界年產(chǎn)量最大的水果之一，大部分用于了葡萄酒的釀造。在歐亞種葡萄中，花翠素葡萄糖苷(Delphinidin-3-glucoside，Dp3_glu)、3’甲基花翠素葡萄糖苷 (Petunidin-3-glucoside, Pt3_glu)、二甲花翠素葡萄糖苷(Malvidin-3-glucoside， Mv3-glu)及其乙酷化(Malvidin-3-acetylglucoside, Mv3_acet_glu)禾口香豆酷化的花色 ^f (Malvidin-3coumarylglucoside, Mv3-coum-glu) 禾中ifii^^^^EfefS 禾中^Efe 苷結(jié)構(gòu)如下所示。
權(quán)利要求
1.一種花色苷的提取方法，其特征在于以葡萄皮為原料依次進行花色苷的提取、純化、分離；從葡萄皮中分離制備五種高純度花色苷單體為花翠素葡萄糖苷Dp3-glu、3’甲基花翠素葡萄糖苷Pt3-glu、二甲花翠素葡萄糖苷Mv3-glu、二甲花翠素乙酰化葡萄糖苷 Mv3-aCet-glu、二甲花翠素反式香豆?；咸烟擒誐v3-COum-glu ；其步驟為(1)提取采用分析純95%乙醇，V/V，浸提葡萄皮，得到花色苷的提取液，離心后真空旋蒸除乙醇，然后真空冷凍干燥得到花色苷的粗提取物；(2)大孔樹脂純化將花色苷的粗提取物用稀釋到50%的分析純乙醇溶解，V/V，離心去沉淀，將上清液加樣于XAD-7HP大孔樹脂，用稀釋到50%的分析純乙醇，V/V，lBV/h流速洗脫，收集顏色明顯的流出液，真空冷凍干燥后得到初步純化的提取物；(3)制備液相分離將初步純化的提取物用稀釋到15%的分析純乙醇溶解至飽和，V/ V，SOOOr離心6min，上清液用于制備液相分離，經(jīng)程序1分離，按照時間順序收集得到了 Dp3-glu、Pt3-glu、Mv3-glu、Mv3-acet-glu、Mv3-coum-glu 五種花色苷單體；對首次分離后純度較低的3’甲基花翠素葡萄糖苷Pt3-glu及二甲花翠素葡萄糖苷Mv3-glu再用程序2 分別進行二次分離獲得純度高的Pt3-glu及Mv3-glu ；分離后 Dp3-glu、Pt3-glu、Mv3-glu、Mv3_acet_glu、Mv3_coum-glu 的純度分別達 99. 9%, 99. 9%, 99. 9%, 91. 7%, 95. 5% ；所述程序1中的流動相分別為A相色譜純，V/V,2%甲酸的乙醇，B相2%甲酸的純水；程序 1 采用梯度洗脫:0-20min :15%_40%A，用 B 相補足 100% ；20_28min :40%_80%A，用 B 相補足 100% ；28-30min :80%_15%A，用 B 相補足 100% ；30_35min :15%A，用 B 相補足 100% ；程序2中的流動相分別為C相乙醇/純水/甲酸=60/40/3，V/V/V，D相純水/甲酸=100/3，V/V ；程序 2 采用梯度洗脫:0-15min :40%_45%C，用 D 相補足 100% ；15_30min 45%-60%C，用 D 相補足 100% ；30-35min :60%_40%C，用 D 相補足 100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述的花色苷提取所用的葡萄皮是人工剝離的將新鮮釀酒葡萄在_20°C冷凍，置冷凍的葡萄于室溫下，待表皮化凍而果肉未解凍時將葡萄皮剝離。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述的提取，花色苷的提取條件為浸提液95%分析純乙醇中添加1%鹽酸，V/V，30°C，浸提過夜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步驟(2)中所述的大孔樹脂純化，選用XAD-7HP大孔樹脂，純化條件為0. 5BV/h流速加樣，含0. 1%鹽酸的50%乙醇，V/V， lBV/h流速洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步驟(3)中所述的制備液相分離，使用了 bridge Prep C18, 250mmX 19mm i. d.，10 μ m，制備分離柱，流動相為 99. 9% 乙醇、色譜純甲酸和超純水，流速為8mL/min。
全文摘要
一種從葡萄皮中分離制備五種高純度花色苷單體的方法，涉及天然色素的制備，屬于食品安全和食品分析化學領(lǐng)域。本發(fā)明為先對赤霞珠葡萄皮進行花色苷浸提，得到花色苷的粗提取物。再用XAD-7HP大孔樹脂對粗提取物進行純化，除去其中大部分的糖類、無機鹽、粘液質(zhì)等吸潮成分。將初步純化后的花色苷提取物進行制備液相分離，得到花色苷的高純單體。在花色苷制備的提取、純化、分離階段溶劑僅使用乙醇和酸，環(huán)境友好，方法簡便易行。純化后得到的五種花色苷單體分別為花翠素葡萄糖苷、3’-甲基花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素乙?；咸烟擒铡⒍谆ù渌胤词较愣辊；咸烟擒?，純度依次為99.9%、99.9%、99.9%、91.7%、95.5%。
文檔編號C07H1/08GK102229633SQ20111014396
公開日2011年11月2日 申請日期2011年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月31日
發(fā)明者徐巖, 韓富亮 申請人:江南大學