專利名稱：Il-13結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗原結(jié)合蛋白(特別是與白介素13(IL-13)結(jié)合并中和其活性的抗體)、編碼所述抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、含有所述抗原結(jié)合蛋白的藥物制劑，并涉及所述抗原結(jié)合蛋白在治療和/或預(yù)防與炎癥相關(guān)的疾病例如哮喘中的用途。將從以下闡述中明了本發(fā)明的其它方面、目的和優(yōu)勢。
背景技術(shù)：
白介素13(IL_13)IL-13是12kDa的分泌型細(xì)胞因子，最初被描述為源自T細(xì)胞的抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的細(xì)胞因子。結(jié)構(gòu)研究表明，IL-13具有由2個二硫鍵保持的4-螺旋束排列。雖然 IL-13有4個潛在的糖基化位點(diǎn)，但對來自大鼠肺的天然IL-13的分析表明，其以非糖基化分子產(chǎn)生。自NSO和C0S-7細(xì)胞表達(dá)的人IL-13確證了這一發(fā)現(xiàn)(Eisenmesser等，J. Mol. Biol. 2001 310(1) :231-241 ；Moy 等，J. Mol. Biol 2001 310(1) :219-230 ；Cannon-CarIson 等，Protein Expression and Purification (蛋白表達(dá)與純化)，1998 12(2) :239-248)。IL-13涉及哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD)；變應(yīng)性疾病，包括特應(yīng)性皮炎和變應(yīng)性鼻炎；食管嗜酸粒細(xì)胞增多(Esophagal eosinophilia)；腫瘤征象，例如慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病(B cell chronic lymphocytic leukaemia, B—CLL)禾口霍奇金病(Hodgkin’ s disease)；炎性腸病，例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病和未確定型結(jié)腸炎；銀屑病和銀屑病關(guān)節(jié)炎；急性移植物抗宿主?。惶悄虿⌒阅I?。焕w維變性病況，例如肺纖維化，例如特發(fā)性肺纖維化(IPF)。發(fā)明概述本發(fā)明提供與IL-13結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，例如IL-13抗體和所述IL-13抗體與 IL-4拮抗劑和/或IL-5拮抗劑的組合。本發(fā)明的IL-13抗體涉及或源自其中⑶RH3發(fā)生突變的鼠mAb 6A1。6A1鼠重鏈可變區(qū)氨基酸序列提供為SEQ ID NO :58。6A1鼠輕鏈可變區(qū)氨基酸序列提供為SEQ ID NO 59。本發(fā)明的重鏈可變區(qū)(VH)包含以下CDR (如Kabat (Kabat等Sequences of proteins of Immunological Interest (免疫目標(biāo)蛋白質(zhì)的序列)NIH，1987)所定義)。本發(fā)明的重鏈可變區(qū)的⑶R可包含以下⑶R
權(quán)利要求
1.一種抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IL-13，并包含 CDRH3SIYDDYHYDDYYAMDY(SEQ ID NO :3)，其中 CDRH3 包含一種或多種以下取代g)1位的S95被取代為色氨酸(W)；h)2位的196被取代為纈氨酸(V)；i)3位的Y97被取代為苯丙氨酸(F)； j)4位的D98被取代為谷氨酰胺(E)；k)7位的H100A被取代為丙氨酸(A)、谷氨酸(E)、谷氨酰胺⑴)、精氨酸00、絲氨酸 (S)、蘇氨酸(T)或纈氨酸(V)；和1)8位的Y100B被取代為丙氨酸(A)、異亮氨酸(I)、色氨酸(W)或纈氨酸(V)。
2.權(quán)利要求1的抗原結(jié)合蛋白，其中CDRH3的8位Y100B被取代為選自丙氨酸(A)、異亮氨酸(I)、色氨酸(W)或纈氨酸(V)的氨基酸。
3.權(quán)利要求1或2的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IL-13，并包含選自以下提出的序列的 CDRH3 序列SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 8 和 SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :13、 SEQ ID N0:14 禾口 SEQ ID N0:15、SEQ ID NO 16, SEQ ID N0:17 禾口 SEQ ID N0:18。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白進(jìn)一步包含以下 CDR序列CDRHl =SEQ ID NO1 ； CDRH2 =SEQ ID NO2 ； CDRLl =SEQ ID NO :19 ； CDRL2 =SEQ ID NO :20 ；禾口 CDRL3 =SEQ ID NO :21。
5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含以下CDR: CDRHl =SEQ ID NO1 ；CDRH2 =SEQ ID NO2 ； CDRH3 =SEQ ID NO :18 ； CDRLl =SEQ ID NO :19 ； CDRL2 =SEQ ID NO :20 ；禾口 CDRL3 =SEQ ID NO :21。
6.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含以下CDR: CDRHl =SEQ ID NO 1 ；CDRH2 =SEQ ID NO 2 ； CDRH3 =SEQ ID NO :17 ； CDRLl =SEQ ID NO :19 ； CDRL2 =SEQ ID NO :20 ；禾口 CDRL3 =SEQ ID NO :21。
7.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含以下CDR: CDRHl =SEQ ID NO 1 ；CDRH2 =SEQ ID NO 2 ；CDRH3 :SEQ ID NO :16 ； CDRLl :SEQ ID NO :19 ; CDRL2 :SEQ ID NO :20 ；禾口 CDRL3 :SEQ ID NO :21。
8.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含以下CDR: CDRHl =SEQ ID NO 1 ；CDRH2 =SEQ ID NO 2 ； CDRH3 =SEQ ID NO :15 ； CDRLl =SEQ ID NO :19 ； CDRL2 =SEQ ID NO :20 ；禾口 CDRL3 =SEQ ID NO :21。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含抗體。
10.權(quán)利要求9的抗體，其中所述抗體為人源化抗體。
11.權(quán)利要求10的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗體為IgG同種型的。
12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含選自以下的重鏈 SEQ ID NO26,SEQ ID NO28,SEQ ID NO 30,SEQ ID NO32,SEQ ID NO34,SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO 48,SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 52 禾口 SEQ ID NO 54 ；禾口 SEQ ID NO :24、108、110、112 和 114的輕鏈。
13.權(quán)利要求13的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含選自SEQID NO 48, SEQ ID NO :50、SEQ ID NO 52 和 SEQ ID NO 54 的重鏈和 SEQ ID NO :108 禾口 110 的輕鏈。
14.權(quán)利要求13的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含SEQID NO M的重鏈和SEQ ID NO 108的輕鏈。
15.權(quán)利要求13的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含SEQID NO力4的重鏈和SEQ ID NO 110的輕鏈。
16.權(quán)利要求10-15中任一項(xiàng)的抗體，所述抗體包含突變的Fc區(qū)，使得所述抗體具有降低的ADCC和/或補(bǔ)體激活。
17.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白能夠結(jié)合IL-13，并且亦能夠結(jié)合IL-4和IL-5中的至少一種。
18.權(quán)利要求17的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少一種選自SEQID N0 78、79、80、81 和 94 的 dAb。
19.權(quán)利要求18的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含選自SEQID NO :62、64、66、 68、70、72、74、76、96、98、100、102、104、106和 117-138 中的任一個的重鏈和 SEQ ID NO :24、 108、110、112 和 114 的輕鏈。
20.權(quán)利要求19的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含選自SEQID NO :96、98、100、 102、104、106中的任一個的重鏈和SEQ ID NO =24,108和110的輕鏈。
21.權(quán)利要求20的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含SEQID NO :96的重鏈和SEQ ID NO 24 的輕鏈；或 SEQ ID NO 96 的重鏈和 SEQ ID NO :108 的輕鏈；或 SEQ ID NO 96 的重鏈和SEQ ID NO 110的輕鏈；或SEQ ID NO 98的重鏈和SEQ ID NO 24的輕鏈；或SEQID NO 98 的重鏈和 SEQ ID NO :108 的輕鏈；或 SEQ ID NO 98 的重鏈和 SEQ ID NO :110 的輕鏈；或SEQ ID NO 100的重鏈和SEQ ID NO 24的輕鏈；或SEQ ID NO :100的重鏈和SEQ ID NO 108的輕鏈；或SEQ ID NO :100的重鏈和SEQ ID NO :110的輕鏈。
22.—種重組轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含第一和第二載體，所述第一載體包含編碼任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的抗體的重鏈的多核苷酸，所述第二載體包含編碼任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的輕鏈的多核苷酸。
23.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。
24.一種治療患有以下疾病的人患者的方法變應(yīng)性哮喘、重癥哮喘、難治性哮喘、脆性哮喘、夜間哮喘、月經(jīng)前哮喘、類固醇抵抗型哮喘、類固醇依賴性哮喘、阿斯匹林誘發(fā)性哮喘、成年發(fā)作性哮喘、兒童哮喘、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、克羅恩病、C0PD、纖維變性疾病或病癥例如特發(fā)性肺纖維化、進(jìn)行性全身性硬化癥、肝纖維化、肝肉芽腫、血吸蟲病、利什曼病、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)性疾病例如霍奇金病、慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病，所述方法包括給予治療有效量的權(quán)利要求1-21的抗原結(jié)合蛋白的步驟。
25.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白在制備用于治療或預(yù)防以下疾病的藥物中的用途變應(yīng)性哮喘、重癥哮喘、難治性哮喘、脆性哮喘、夜間哮喘、月經(jīng)前哮喘、類固醇抵抗型哮喘、類固醇依賴性哮喘、阿斯匹林誘發(fā)性哮喘、成年發(fā)作性哮喘、兒童哮喘、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、克羅恩病、C0PD、纖維變性疾病或病癥例如特發(fā)性肺纖維化、進(jìn)行性全身性硬化癥、肝纖維化、肝肉芽腫、血吸蟲病、利什曼病、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)性疾病例如霍奇金病、慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病。
26.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，用于治療或預(yù)防變應(yīng)性哮喘、重癥哮喘、難治性哮喘、脆性哮喘、夜間哮喘、月經(jīng)前哮喘、類固醇抵抗型哮喘、類固醇依賴性哮喘、 阿斯匹林誘發(fā)性哮喘、成年發(fā)作性哮喘、兒童哮喘、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、克羅恩病、 C0PD、纖維變性疾病或病癥例如特發(fā)性肺纖維化、進(jìn)行性全身性硬化癥、肝纖維化、肝肉芽腫、血吸蟲病、利什曼病、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)性疾病例如霍奇金病、慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病。
27.一種用于降低免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域聚集的方法，所述方法包括以下步驟a)測量免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域的聚集水平；b)將kabat89位突變?yōu)檫x自‘Q，(谷氨酰胺)、‘G，(甘氨酸)、‘S，(絲氨酸)、1，(甲硫氨酸)、‘A’(丙氨酸)、‘T’(蘇氨酸)和 ’ (谷氨酸)的殘基；c)測量所述突變的免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域的聚集水平；其中保留結(jié)合活性，并且所述突變的免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域的聚集水平低于未突變的免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域的聚集水平。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述kabat殘基89突變?yōu)檫x自‘Q’(谷氨酰胺)、‘G’(甘氨酸)、‘S’(絲氨酸)、1’(甲硫氨酸)和 ’ (谷氨酸)的殘基。
29.權(quán)利要求觀的方法，其中所述kabat殘基89突變?yōu)椤甉’(谷氨酰胺)。
30.一種人VK dAb，所述人VK dAb源自選自以下的種系框架IGKV1-17、IGKV1D-17、 IGKV1/0R2-108、IGKV1-6、IGKV5-2、IGKV1D-42、IGKV2-24、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV2-40、 IGKV2D-29,IGKV2D-30,IGKV2D-24 和 IGKV6-21，其中所述人 VKdAb 的殘基 89 (kabat 編號) 為谷氨酰胺。
31. 一種包含序列SEQ ID NO :94的免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域。
全文摘要
本發(fā)明涉及人IL-13的抗原結(jié)合蛋白、含有所述抗原結(jié)合蛋白的藥物制劑和所述抗原結(jié)合蛋白在治療和/或預(yù)防炎性疾病例如哮喘或IPF中的用途，所述抗原結(jié)合蛋白包括抗IL-13抗體和抗IL-3/抗IL-4mAbdAb。
文檔編號C07K16/46GK102459341SQ201080033723
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月28日
發(fā)明者A·P·路易斯, C·阿什曼, J·H·艾利斯, M·A·奧雷基亞, P·A·漢布林 申請人:葛蘭素集團(tuán)有限公司