專利名稱：一種三聚氰胺抗原及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三聚氰胺抗原及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
三聚氰胺(Melamine)(化學(xué)式C3H6N6)，俗稱密胺、蛋白精，IUPAC命名為 "1,3, 5-三嗪-2，4，6-三氨基”，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，通常被用作化工原料。 三聚氰胺是一種用途廣泛的基本有機(jī)化工中間產(chǎn)品，最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲 醛樹脂(MF)的原料；三聚氰胺還可以作阻燃劑、減水劑、甲醛清潔劑等。樹脂MF硬度比脲 醛樹脂高，不易燃，耐水、耐熱、耐老化、耐電弧、耐化學(xué)腐蝕、有良好的絕緣性能、光澤度和 機(jī)械強(qiáng)度，廣泛運(yùn)用于木材、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫(yī)藥等行業(yè)。食品工業(yè)中常常需要測(cè)定食品的蛋白質(zhì)含量，由于直接測(cè)量蛋白質(zhì)技術(shù)上比較復(fù) 雜，所以常用凱氏定氮法，通過測(cè)定氮原子的含量來間接推算食品中蛋白質(zhì)的含量。由于三 聚氰胺與蛋白質(zhì)相比含有更多的氮原子，有時(shí)被不法分子用于食品、飼料造假，已經(jīng)發(fā)生過 重大食品安全事故。三聚氰胺被攝入人體后，通過小腸吸收進(jìn)入血液循環(huán)并最終進(jìn)入腎臟， 形成腎結(jié)石，尤其對(duì)于哺乳期的嬰兒，更容易造成結(jié)石，危害極大。三聚氰胺的檢測(cè)目前主要采用儀器檢測(cè)的方法。主要方法有GC-MS法、 Spectra-Quad在線檢測(cè)、超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法、反相高效液相色譜法、高效 液相色譜-二極管陣列法、高效液相色譜法(HPLC)、高效液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用、固相 萃取與高效液相色譜聯(lián)用、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS)等。這些儀器方法價(jià)格昂貴，且 方法操作復(fù)雜，需受過專門訓(xùn)練的人員才能操作，而且存在著適用范圍窄、設(shè)備昂貴、成本 高等問題。免疫檢測(cè)方法以其靈敏、特異、快速、簡便的優(yōu)點(diǎn)在藥物殘留檢測(cè)領(lǐng)域已被廣泛 應(yīng)用，比起理化檢驗(yàn)方法有很多優(yōu)勢(shì)。免疫檢測(cè)方法包括膠體金免疫層析、ELISA，是目前食品安全快速檢測(cè)的兩種重要 方法，已經(jīng)在食品安全監(jiān)測(cè)中發(fā)揮著越來越明顯的作用。近期采用免疫檢測(cè)方法進(jìn)行三聚 氰胺的檢測(cè)成為研究熱點(diǎn)。但建立三聚氰胺的免疫檢測(cè)方法必須首先制備出三聚氰胺抗原 及高特異性的抗體，然后才能利用這些試劑建立免疫檢測(cè)方法。吳建祥等在《三聚氰胺與載體蛋白和三聚氰胺抗體的制備方法及用途》(專利申請(qǐng) 號(hào)200810162590. 2)中提供了一種直接以三聚氰胺為半抗原，采用戊二醛法偶聯(lián)載體蛋白 制備抗體的方法。但是由于三聚氰胺的氨基并非脂肪胺，活性很低，較難充分反應(yīng)，且制備 得到的抗原均一性較差，偶聯(lián)質(zhì)量很難控制，可能會(huì)導(dǎo)致所得抗體特異性不均一性。雷紅濤等在《氰脲三酰胺半抗原、抗原和抗體制備方法及應(yīng)用》(專利申請(qǐng)?zhí)?200910038375. 6)中提供了一種用2-氯-4，6 二氨基-1，3，5-三嗪與氨基酸反應(yīng)，制備出三 聚氰胺抗原的方法，獲得了高質(zhì)量的抗體。但半抗原的獲得非常不容易，需要復(fù)雜的有機(jī)合 成、分離技術(shù)。
吳小平等在《一種三聚氰胺半抗原與抗原及其制備方法與應(yīng)用》(專利申請(qǐng)?zhí)?00910085644. 4)提供了一種采用2-氯-4，6 二氨基-1，3，5-三嗪為原料，與一種特殊的氨 基酸一對(duì)氨基苯丁酸反應(yīng)，獲得一個(gè)具有苯環(huán)手臂的半抗原，與載體蛋白偶聯(lián)后制備出抗 體的方法。但該方法半抗原的合成較為復(fù)雜，且苯環(huán)空間位阻較大，所得抗體對(duì)三嗪環(huán)部分 識(shí)別力會(huì)較弱，所獲得抗體最低檢測(cè)限為49 ng/mL。因此，為了配合三聚氰胺免疫檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的需求，有必要建立一種更簡單的三 聚氰胺抗原制備方法，獲得更加理想的抗體和檢測(cè)效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有的三聚氰胺免疫檢測(cè)技術(shù)中存在的不足，提供一種三 聚氰胺抗原。本發(fā)明另一目的在于提供上述三聚氰胺抗原的制備方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供上述三聚氰胺抗原的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)
一種三聚氰胺抗原，以三聚氰胺類似物與載體蛋白偶聯(lián)制備得到三聚氰胺抗原。所述三聚氰胺類似物優(yōu)選2，4-二氨基-6-胼基-1，3，5_三嗪，所述載體蛋白可選 牛血清白蛋白質(zhì)、人血清蛋白質(zhì)、血藍(lán)蛋白或卵清白蛋白等各種蛋白質(zhì)。所述偶聯(lián)可采用碳二亞胺法或戊二醛法； 所述碳二亞胺法包括以下步驟
(1)將2，4二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪用溶劑溶解；
配制含載體蛋白的醋酸緩沖液或磷酸緩沖液；所述醋酸緩沖液或磷酸緩沖液PH值為 4. 0 9· 0、離子濃度為10 1000 mmoL、含載體蛋白Γ Ο mg/mL ；
(2)將步驟(1)溶解好的2，4二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪滴入含載體蛋白的醋酸緩 沖液或磷酸緩沖液中；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)后用生理 鹽水充分透析，得三聚氰胺抗原，所述反應(yīng)時(shí)間為214 h。上述碳二亞胺偶聯(lián)方法中，各物質(zhì)的用量優(yōu)選參照以下比例
(Γ5 )mg 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪(2 50 mL)所述含載體蛋白的醋酸緩 沖液或磷酸緩沖液(Γ50 mg) 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。所述溶劑優(yōu)選二氧六環(huán)或N，N’ - 二甲基甲酰胺，用量適量即可。所述戊二醛法包括以下步驟
(1)將2，4二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪1 2 mg溶解于適量溶劑；
配制含載體蛋白的磷酸緩沖液；所述磷酸緩沖液PH值為7 10、離子濃度為1(Γ1000 mmoL、含載體蛋白廣10 mg/mL ；
(2)將步驟(1)溶解好的2，4二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪滴入含載體蛋白的磷酸緩 沖液中；加入體積比為25%的戊二醛溶液，反應(yīng)后用生理鹽水充分透析，得三聚氰胺抗原， 所述反應(yīng)時(shí)間為214 h。上述戊二醛偶聯(lián)方法中，各物質(zhì)的用量優(yōu)選參照以下比例
(Γ2 mg ) 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪(Γ Ο mL)所述含載體蛋白的磷酸緩 沖液(Γ50 μ L) 25%的戊二醛溶液。所述溶劑優(yōu)選二氧六環(huán)或N，N’ - 二甲基甲酰胺，用量適量即可。
將本發(fā)明制備得到的三聚氰胺抗原參照現(xiàn)有常規(guī)方法免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，獲得高特異 性、高靈敏的三聚氰胺抗體，包括單克隆抗體、多克隆抗體和工程基因抗體。將三聚氰胺抗原免疫動(dòng)物后采集血清，獲得多克隆抗體；或免疫小鼠后用小鼠脾 細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，獲得雜交瘤細(xì)胞，制備得到單克隆抗體或者參照本領(lǐng)域常規(guī)方法制備 得到的工程基因抗體等。所得抗體可用于簡單快捷方便的三聚氰胺免疫檢測(cè)，包括膠體金免疫層析、ELISA 等食品安全快速檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)三聚氰胺安全監(jiān)控。本發(fā)明的有益效果是
現(xiàn)有的三聚氰胺抗原的制備需要復(fù)雜的有機(jī)合成手段來輔助，而本發(fā)明直接采用 2，4- 二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備得到三聚氰胺抗原。所述抗原免疫實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物獲得三聚氰胺特異性抗體，最低檢測(cè)限(L0D值)為0. 9 ng/mL,與三聚氰酸、莠去津、 三聚氯氰等無交叉反應(yīng)，特異性非常良好，可應(yīng)用于簡單快捷方便的三聚氰胺免疫檢測(cè)，實(shí) 現(xiàn)食品中三聚氰胺安全監(jiān)控。


圖1是三聚氰胺間接競爭ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。下述實(shí)施例中所使用的試驗(yàn) 方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業(yè)途徑 得到的試劑和材料。實(shí)施例1免疫抗原的制備
將5 mg 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪溶解于1.0 mL N，N，- 二甲基甲酰胺中，溶 解后將其滴入PH值為7. 4、離子濃度為200 mmoL、含有10 mg/mL載體蛋白的磷酸緩沖液5 mL中，載體蛋白采用牛血清白蛋白質(zhì)，加入5mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽 酸鹽，反應(yīng)10 12 h，用生理鹽水充分透析，得三聚氰胺免疫抗原。人工抗原的鑒定
取2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪、牛血清白蛋白質(zhì)和三聚氰胺抗原分別進(jìn)行紫外 (200nm-400nm)掃描鑒定，比較三者的最高吸光值，鑒定2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪 與載體蛋白是否發(fā)生偶聯(lián)，發(fā)現(xiàn)三聚氰胺抗原的吸光值與2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三 嗪和牛血清白蛋白質(zhì)明顯不同，說明2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與牛血清白蛋 白質(zhì)成功偶聯(lián)制得三聚氰胺抗原。經(jīng)計(jì)算，2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與牛血清 白蛋白質(zhì)的結(jié)合摩爾比為16:1。其他載體蛋白與牛血清白蛋白質(zhì)偶聯(lián)方法相同，為本領(lǐng)域常用技術(shù)，不再贅述。實(shí)施例2免疫抗原的制備
將Img 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪溶解于0. 5mL 二氧六環(huán)中，溶解后將其滴入 PH值為4. 0、離子濃度為200mmoL、含有10mg/mL卵清白蛋白的醋酸緩沖液2. 5 mL中，加入 IOmg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)2 5 h，用生理鹽水充分透析， 得三聚氰胺抗原。
人工抗原的鑒定
取2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪、卵清白蛋白和三聚氰胺抗原分別進(jìn)行紫外 (200nm-400nm)掃描鑒定，比較三者的最高吸光值，鑒定2，4 二氨基_6_胼基-1，3，5-三嗪 與載體蛋白是否發(fā)生偶聯(lián)，發(fā)現(xiàn)三聚氰胺抗原的吸光值與2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三 嗪和卵清白蛋白明顯不同，說明2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與卵清白蛋白成功 偶聯(lián)制得三聚氰胺抗原。經(jīng)計(jì)算，2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與牛血清白蛋白質(zhì) 的結(jié)合摩爾比為15:1。 其他載體蛋白與卵清白蛋白偶聯(lián)方法相同，不再贅述。實(shí)施例3包被抗原的制備
將2 mg 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪溶解于ImL N，N，- 二甲基甲酰胺中，溶解 后將其滴入PH值為7. 4、離子濃度為200 mmoL、含有10 mg/mL載體蛋白的磷酸緩沖液5 mL 中，載體蛋白采用卵清白蛋白，加入20 yL體積比為25%的戊二醛溶液，反應(yīng)10 12 h， 用生理鹽水充分透析，得三聚氰胺包被抗原。包被抗原的鑒定
取2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪、卵清白蛋白和三聚氰胺抗原分別進(jìn)行紫外 (200nm-400nm)掃描鑒定，比較三者的最高吸光值，鑒定2，4 二氨基_6_胼基-1，3，5-三嗪 與載體蛋白是否發(fā)生偶聯(lián)，發(fā)現(xiàn)三聚氰胺抗原的吸光值與2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三 嗪和卵清白蛋白明顯不同，說明2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與卵清白蛋白成功 偶聯(lián)制得三聚氰胺抗原。經(jīng)計(jì)算，2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與卵清白蛋白的結(jié) 合摩爾比為16 =I0其他載體蛋白與卵清白蛋白偶聯(lián)方法相同，不再贅述。實(shí)施例4包被抗原的制備
將1 mg 2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪溶解于0. 5mL 二氧六環(huán)中，溶解后將其滴入 PH值為10、離子濃度為1000 mmoL、含有5 mg/mL血藍(lán)蛋白的磷酸緩沖液5 mL中，加入15 μ L 25%的戊二醛溶液，反應(yīng)15 M h，用生理鹽水充分透析三天，得三聚氰胺抗原。包被抗原的鑒定
取2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪、血藍(lán)蛋白和三聚氰胺抗原分別進(jìn)行紫外 (200nm-400nm)掃描鑒定，比較三者的最高吸光值，鑒定2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪 與載體蛋白是否發(fā)生偶聯(lián)，發(fā)現(xiàn)三聚氰胺抗原的吸光值與2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三 嗪和血藍(lán)蛋白明顯不同，說明2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與血藍(lán)蛋白成功偶聯(lián) 制得三聚氰胺抗原。經(jīng)計(jì)算，2，4 二氨基-6-胼基-1，3，5-三嗪已經(jīng)與血藍(lán)蛋白的結(jié)合摩爾 比為19 :1ο實(shí)施例5抗體制備
多克隆抗體取實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的1. 5 2 kg新西蘭白兔3只，將本發(fā)明制備得到的 免疫抗原用生理鹽水稀釋，加等體積弗氏完全佐劑充分乳化，給2只新西蘭兔進(jìn)行背部皮 下皮下多點(diǎn)注射，免疫劑量為2 mg/只，兩周后加強(qiáng)免疫，免疫劑量同基礎(chǔ)免疫，改用弗氏不 完全佐劑，每兩周加強(qiáng)免疫一次。從第三次加強(qiáng)免疫開始，免疫后第7 d耳部動(dòng)脈取血，定 期監(jiān)測(cè)并鑒定抗體。待抗體達(dá)到一定水平后，頸動(dòng)脈放血，待血液凝固后，轉(zhuǎn)入37 °C溫箱中放置30min,,再轉(zhuǎn)入4°C冰箱內(nèi)過夜，離心，分離得到抗血清，即多克隆抗體。單克隆抗體實(shí)驗(yàn)選用8周齡左右的健康雌性Balb/c小鼠作為免疫對(duì)象，基礎(chǔ)免 疫劑量為0.2 mg/只，加強(qiáng)免疫劑量為0.4 mg/只。將免疫抗原與等量佐劑充分混勻，采用 背部皮下多點(diǎn)注射，每隔15 d加強(qiáng)免疫一次，第3次免疫后7 10天內(nèi)，尾部采血，測(cè)定抗血 清效價(jià)和特異性，待其抗血清效價(jià)和特異性合格后，進(jìn)行一次不含佐劑的加強(qiáng)免疫，免疫后 第3天進(jìn)行細(xì)胞融合；用小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，獲得雜交瘤細(xì)胞，將雜 交瘤細(xì)胞置于雌性Balb/c小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，獲得含高濃度單克隆抗體的腹水，并對(duì)腹水純化 得到高特異性的單克隆抗體。實(shí)施例6三聚氰胺免疫檢測(cè)方法的建立
抗血清最低檢測(cè)限(L0D值)和半數(shù)抑制量(IC50值)的檢測(cè)
用方陣滴定法確定抗原(載體蛋白為牛血清白蛋白質(zhì)，制備方法參照實(shí)施例1)和三聚 氰胺抗體的工作濃度，抗原的工作濃度為ι μ g/mL，三聚氰胺抗體的工作濃度為5ug/ml。用不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液做實(shí)驗(yàn)溶液，其濃度如下0ng/mL、12. 5 ng/ mL、25 ng/mL、50 ng/mLU00 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL、1 μ g/mL，采用 8 組平行實(shí)驗(yàn) (n=8)。間接競爭ELISA方法將包被抗原用pH 9. 6的碳酸鹽緩沖液稀釋至1 μ g/mL包被 酶標(biāo)板，IOOuL/孔，置于4°C過夜；傾去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液200 μ L，洗滌2次，然后 甩凈洗滌液；每孔加入120 111^封閉液，371封閉3 h，然后甩凈洗滌液，37°C烘30min。配制lmg/ml的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，取出4 μ L加入^iil PBST中，然后三倍倍比稀 釋成若干個(gè)濃度。第一孔加50 μ L PBST，后面11孔依次加入配好的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液， 然后每孔加入50 μ L稀釋(好的抗血清。每孔加入100 μ L HRP —羊抗鼠IgG (15000稀 釋)，37°C孵育1 h;洗滌同2。每孔加入底物TMB-過氧化氫溶液100 μ L，置于37°C顯色15 min，然后每孔加入50 μ L的10%的H2S04以終止反應(yīng)。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定各孔A450nm的吸收值，標(biāo)準(zhǔn)曲線如附圖1所示。結(jié)果表明 標(biāo)準(zhǔn)曲線具有完整的反S形狀，并且有上平臺(tái)和下平臺(tái)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的平行測(cè)定次數(shù)8次，實(shí) 驗(yàn)重復(fù)性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差卻在15%以內(nèi)。由公式計(jì)算得三聚氰胺抗體在緩沖溶液中的最低檢測(cè)限(LOD值)為0. 9 ng/mL, 顯著比現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)限低，說明該抗原的效果非常顯著。半數(shù)抑制量(IC50值)為 53ng/mL。歐盟、美國FDA和我國關(guān)于三聚氰胺最大殘留限量為2 ug/kg。本方法能夠很好 地滿足檢測(cè)靈敏度的需要。
實(shí)施例7三聚氰胺免疫檢測(cè)方法檢測(cè)實(shí)際樣品 (1)純牛奶樣品的檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1所示 表1 純牛奶樣品的檢測(cè)結(jié)果(n=3)
權(quán)利要求
1.一種三聚氰胺抗原，其特征在于是采用2，4- 二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪與蛋白質(zhì) 偶聯(lián)得到。
2.權(quán)利要求1所述三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將2，4-二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪溶解；(2)將溶解好的2，4-二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪滴入含有載體蛋白的緩沖液中，加入 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)后經(jīng)透析，得到三聚氰胺抗原。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(1)中的2，4-二 氨基-6-胼基-1，3，5三嗪用量為廣5mg ；步驟(2)中所述含有載體蛋白的緩沖液用量為 2 50mL ；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的用量為廣50mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述緩沖 液為醋酸緩沖液或磷酸緩沖液，PH值為4.(Γ9.0、離子濃度為1(Γ1000 mmoL、含載體蛋白 1 10 mg/mL0
5.權(quán)利要求1所述三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將2，4-二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪溶解；(2)將溶解好的2，4-二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪滴入含有載體蛋白的緩沖液中，加入 25體積％的戊二醛溶液，反應(yīng)后經(jīng)透析，得到三聚氰胺抗原。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(1)中的2，4-二 氨基-6-胼基-1，3，5三嗪用量為廣2mg ；步驟(2)中所述含有載體蛋白的緩沖液用量為 廣IOmL ；所述25體積％的戊二醛溶液用量為廣50 μ L。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述含 有載體蛋白的緩沖液為磷酸緩沖液，PH值為7 10、離子濃度為1(Γ1000 mmoL、含載體蛋白 1 10 mg/mL0
8.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述 用于溶解2，4- 二氨基-6-胼基-1，3，5三嗪的溶液為二氧六環(huán)或N，N，-二甲基甲酰胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的三聚氰胺抗原的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述 載體蛋白為牛血清蛋白、人血清蛋白、血藍(lán)蛋白或卵清白蛋白。
10.權(quán)利要求1所述三聚氰胺抗原在三聚氰胺免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種三聚氰胺抗原及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明三聚氰胺抗原是采用2,4-二氨基-6-肼基-1,3,5三嗪與蛋白質(zhì)偶聯(lián)得到。采用本發(fā)明三聚氰胺抗原免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物得到的三聚氰胺特異性抗體，最低檢測(cè)限(LOD值)為0.9ng/mL，與三聚氰酸、莠去津、三聚氯氰等無交叉反應(yīng)，特異性好，可用于三聚氰胺的免疫檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)三聚氰胺的安全監(jiān)控。
文檔編號(hào)C07K1/10GK102140127SQ20101061333
公開日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者孫遠(yuǎn)明, 王強(qiáng), 雷紅濤, 黃啟欣 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)