專利名稱：橫向流動裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測敵草隆的橫向流動裝置、使用該橫向流動裝置檢測敵草隆的方法、以及包含所述用于檢測敵草隆的橫向流動裝置的試劑盒。
背景技術(shù)：
敵草隆(3-(3，4-二氯苯基)-1，1_ 二甲基脲)是芳基脲類除草劑家族中的一員， 其于20世紀(jì)50年代初被開發(fā)出來，并從20世紀(jì)60年代以來在農(nóng)業(yè)中得到普遍應(yīng)用。敵草隆在許多國家被廣泛用于農(nóng)業(yè)中，這些國家包括美國、澳大利亞、歐洲和中國。除草劑在非農(nóng)作物土地、工業(yè)用地上作為土壤不育劑(soil sterilent)使用，并且少量用于對蔬菜、馬鈴薯、棉花、玉米、豆類、谷類以及果園、葡萄園中的草類植物和闊葉雜草進行選擇性的前、后緊急控制。關(guān)于敵草隆對人類的毒性人們尚知之甚少。然而，美國環(huán)境保護署建議的敵草隆在水中的健康水平被設(shè)定為十億分之十份(10μ g/L)。因此，有必要監(jiān)測商品和環(huán)境場所中的殘余物。此外，在美國，肉類和大多數(shù)商品中的敵草隆殘余物的法定容限為百萬分之一至百萬分之二份(mg/kg)，而在諸如香蕉、桃和堅果等商品中則低至十億分之一百份。檢測敵草隆的標(biāo)準(zhǔn)分析方法包括分光光度法、氣相色譜/質(zhì)譜法(GC/MQ和高效液相色譜法(HPLC)。然而，這些檢測敵草隆的方法需要昂貴的儀器，并且需要經(jīng)過了儀器使用訓(xùn)練的熟練技術(shù)人員來進行檢測。此外，許多要檢測敵草隆的場所通常是環(huán)境場所或者是檢測儀器不能容易地接近的場所。結(jié)果，樣品必須被運送至檢測儀器所處的檢測采樣場所，然后才能進行測定。因此，需要低廉、便攜和有效的檢測敵草隆的方法，該方法允許在樣品獲得現(xiàn)場快速地檢測樣品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一方面提供了用于檢測樣品中的敵草隆的橫向流動裝置，包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的，所述半抗原和所述抗敵草隆抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時，通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合(combine)。本發(fā)明的第二方面提供了檢測液體樣品中是否存在敵草隆的方法，包括-將所述液體樣品施加于橫向流動裝置，該裝置包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；
(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的，所述半抗原和所述抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時，通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合；-提供足夠的時間以使得所述半抗原、所述抗敵草隆抗體和所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合；以及-觀察所述反應(yīng)區(qū)域以確定所述抗敵草隆抗體是否與所述敵草隆半抗原結(jié)合。當(dāng)液體樣品中不含敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原結(jié)合，而當(dāng)被檢樣品中含有敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原的結(jié)合減少。本發(fā)明的第三方面提供了包括第一方面所述的橫向流動裝置的試劑盒。


圖1為橫向流動裝置的一個實施方案的各部件布置方式的俯視圖(上)和側(cè)視圖 (下)。圖2為橫向流動裝置的一個實施方案的各部件布置方式的透視圖。圖3為使用橫向流動裝置分析敵草隆陽性樣品(左)和敵草隆陰性樣品(右)所獲得的結(jié)果的示意圖。圖4A為示出使用包被抗原(半抗原4C-0VA或半抗原6C-0VA)進行競爭性間接 ELISA的結(jié)果的圖。圖4B為示出競爭性直接ELISA的結(jié)果的圖，該圖顯示出隨著包被抗體的濃度增力口，抗體的結(jié)合受到抑制。圖4C為示出在不同pH下的競爭性ELISA的結(jié)果的圖。圖4D為示出使用針對半抗原4C-KLH而產(chǎn)生的抗體進行競爭性直接ELISA的結(jié)果的圖。
具體實施例方式在一個方面中，本發(fā)明涉及用于檢測樣品中的敵草隆的橫向流動裝置，包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的，所述半抗原和所述抗敵草隆抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時，通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合。第一位置通常為基底上或基底內(nèi)的位置。第二位置通常為基底上或基底內(nèi)的位置。通常，第一位置為基底上或基底內(nèi)的位置，并且第二位置為基底上或基底內(nèi)的位置。第二位置與第一位置是分開的。
當(dāng)液體樣品中不含敵草隆時，抗敵草隆抗體在反應(yīng)區(qū)域與半抗原結(jié)合，而當(dāng)被檢樣品中含有敵草隆時，抗敵草隆抗體在反應(yīng)區(qū)域與半抗原的結(jié)合減少。如本文所用，橫向流動裝置是一種用于檢測被分析物的裝置，其中試劑通過移動穿過基底(通常借助于毛細(xì)管作用)而匯合。該橫向流動裝置使用競爭性免疫測定法檢測敵草隆。在這方面，該裝置在使用時利用了樣品中的敵草隆能夠與抗敵草隆抗體結(jié)合、而抑制該抗體與半抗原結(jié)合的能力，從而提供了用于檢測樣品中的敵草隆的測定方法。半抗原和抗敵草隆抗體位于該裝置中彼此分開的位置處，并且當(dāng)施加到樣品接收部分的液體樣品從該樣品接收部分移動到反應(yīng)區(qū)域時，該半抗原和抗敵草隆抗體匯合。在這方面，液體樣品從樣品接收部分向反應(yīng)區(qū)域的移動使得位于反應(yīng)區(qū)域上游的那些試劑 (例如，抗敵草隆抗體)被運送至反應(yīng)區(qū)域。反應(yīng)區(qū)域包括位于基底上或基底內(nèi)的區(qū)域，如果樣品中不含敵草隆，則抗敵草隆抗體在該區(qū)域與半抗原匯合，從而使得抗體可以與半抗原結(jié)合。在一個實施方案中，敵草隆半抗原位于反應(yīng)區(qū)域，并且通過抗敵草隆抗體和液體樣品穿過基底向反應(yīng)區(qū)域的移動而使半抗原、抗敵草隆抗體以及液體樣品匯合。在該實施方案中，樣品穿過基底的移動使得抗敵草隆抗體和樣品中的敵草隆(如果存在的話)被運送至反應(yīng)區(qū)域。所述裝置可包括能夠與抗敵草隆抗體結(jié)合的對照抗體。通常，反應(yīng)區(qū)域包括對照抗體。因此，在一個實施方案中，反應(yīng)區(qū)域包括位于第一位置(本文也稱為測試區(qū)域)的敵草隆半抗原、以及位于與該第一位置分開的對照位置(本文也稱為對照區(qū)域)的對照抗體， 其中液體樣品從樣品接收部分向反應(yīng)區(qū)域的移動使得抗敵草隆抗體在第一位置與敵草隆半抗原匯合，并且使得抗敵草隆抗體在對照位置與對照抗體匯合。在該實施方案中，液體樣品穿過基底的移動使得抗敵草隆抗體和敵草隆(如果存在的話)被運送至反應(yīng)區(qū)域，在該反應(yīng)區(qū)域，如果抗敵草隆抗體沒有與敵草隆結(jié)合，則該抗敵草隆抗體可與測試區(qū)域的半抗原相結(jié)合，而對照抗體在對照區(qū)域與抗敵草隆抗體結(jié)合。不管樣品中是否存在敵草隆，被對照抗體結(jié)合的抗敵草隆抗體均可在對照區(qū)域被檢測出來。通常，液體樣品借助于毛細(xì)管作用而移動穿過基底。在一個實施方案中，敵草隆半抗原由式I表示
權(quán)利要求
1.一種用于檢測樣品中的敵草隆的橫向流動裝置，包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的， 所述半抗原和所述抗敵草隆抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時，通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、 所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合。
2.權(quán)利要求1所述的裝置，其中當(dāng)所述液體樣品中不含敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原結(jié)合，而當(dāng)所述被檢樣品中含有敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原的結(jié)合減少。
3.權(quán)利要求1或2所述的裝置，其中所述液體樣品借助于毛細(xì)管作用而移動穿過所述基底。
4.權(quán)利要求1或2所述的裝置，其中所述反應(yīng)區(qū)域包括所述第一位置，并且通過該液體樣品和該抗敵草隆抗體向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗敵草隆抗體和所述液體樣品匯合。
5.權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述反應(yīng)區(qū)域包括位于所述第一位置的敵草隆半抗原以及位于對照位置的對照抗體，所述對照抗體能夠與所述抗敵草隆抗體結(jié)合，其中所述液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動使所述抗敵草隆抗體在所述第一位置與所述敵草隆半抗原匯合，并且使所述抗敵草隆抗體在所述對照位置與所述對照抗體匯
6.權(quán)利要求1-5中任意一項所述的裝置，其中所述敵草隆半抗原為式I所示的化合物H
7.權(quán)利要求6所述的裝置，其中X為BSA，并且η為5。
8.權(quán)利要求1-7中任意一項所述的裝置，其中所述抗敵草隆抗體是針對式II所示的化合物而產(chǎn)生的H01VN-X1/ \ V /(CH2)n-(c|-0-V< 0O \其中X1為選自由BSA、OVA和鑰孔血藍蛋白(KLH)所組成的組中的蛋白質(zhì)；并且η為3至5。
9.權(quán)利要求8所述的裝置，其中X為KLH，并且η為3。
10.權(quán)利要求1-9中任意一項所述的裝置，其中所述基底為可透性膜。
11.權(quán)利要求1-10中任意一項所述的裝置，其中所述可透性膜為硝化纖維素。
12.權(quán)利要求1-11中任意一項所述的裝置，其中所述抗敵草隆抗體被標(biāo)記，從而允許對所述抗體與所述半抗原的結(jié)合進行檢測。
13.權(quán)利要求12所述的裝置，其中所述標(biāo)記物為膠體金顆粒。
14.一種檢測液體樣品中是否存在敵草隆的方法，包括-將所述液體樣品施加于橫向流動裝置，該裝置包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的，所述半抗原和所述抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時， 通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合；-提供足夠的時間以使得所述半抗原、所述抗敵草隆抗體和所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合；以及-觀察所述反應(yīng)區(qū)域以確定所述抗敵草隆抗體是否與所述敵草隆半抗原結(jié)合。
15.權(quán)利要求14所述的方法，其中當(dāng)所述液體樣品中不含敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原結(jié)合，而當(dāng)所述被檢樣品中含有敵草隆時，所述抗敵草隆抗體在所述反應(yīng)區(qū)域與所述半抗原的結(jié)合減少。
16.權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述液體樣品借助于毛細(xì)管作用而移動穿過所述基底。
17.權(quán)利要求14-16中任意一項所述的方法，其中所述反應(yīng)區(qū)域包括所述第一位置，并且通過該液體樣品和該抗敵草隆抗體向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗敵草隆抗體和所述液體樣品匯合。
18.權(quán)利要求14-17中任意一項所述的方法，其中所述反應(yīng)區(qū)域包括位于所述第一位置的敵草隆半抗原以及位于對照位置的對照抗體，所述對照抗體能夠與所述抗敵草隆抗體結(jié)合，其中所述液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動使所述抗敵草隆抗體在所述第一位置與所述敵草隆半抗原匯合，并且使所述抗敵草隆抗體在所述對照位置與所述對照抗體匯合。
19.權(quán)利要求14-18中任意一項所述的方法，其中所述敵草隆半抗原為式I所示的化合物
20.權(quán)利要求19所述的方法，其中X為BSA，并且η為5。
21.權(quán)利要求14-20中任意一項所述的方法，其中所述抗敵草隆抗體是針對式II所示的化合物而產(chǎn)生的
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中X為KLH，并且η為3。
23.權(quán)利要求14-22中任意一項所述的方法，其中所述基底為可透性膜。
24.權(quán)利要求14-22中任意一項所述的方法，其中所述可透性膜為硝化纖維素。
25.權(quán)利要求14-23中任意一項所述的方法，其中所述抗敵草隆抗體被標(biāo)記，從而允許對所述抗體與所述半抗原的結(jié)合進行檢測。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述標(biāo)記物為膠體金顆粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及橫向流動裝置，其包括(a)基底，該基底包括樣品接收部分和反應(yīng)區(qū)域，所述基底被構(gòu)造為允許液體樣品從所述樣品接收部分移動到所述反應(yīng)區(qū)域；(b)位于第一位置的敵草隆半抗原；以及(c)位于第二位置的抗敵草隆抗體，所述第二位置與所述第一位置是分開的，所述半抗原和所述抗敵草隆抗體被布置為使得當(dāng)所述液體樣品被施加于所述樣品接收部分時，通過該液體樣品從所述樣品接收部分向所述反應(yīng)區(qū)域的移動而使所述半抗原、所述抗體以及所述液體樣品在所述反應(yīng)區(qū)域匯合。本發(fā)明還涉及使用該裝置來檢測液體樣品中是否存在敵草隆的方法。本發(fā)明的裝置和方法允許在樣品獲得現(xiàn)場快速地檢測樣品。
文檔編號C07K14/765GK102539732SQ201010609718
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者伊萬·羅伯特·肯尼迪, 安格斯·尼爾·克羅森, 張燕, 王碩, 生威 申請人:科頓集水共同體Crc有限公司