專利名稱：：抗重金屬銅的單克隆抗體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗重金屬銅的單克隆抗體及其制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著科技的進(jìn)步和工業(yè)的發(fā)展，人們的生活水平有了很大的提高。但是在工業(yè)高速發(fā)展的同時(shí)，也帶來了一系列環(huán)境問題。1931-1972年發(fā)生于日本富山縣神通川流域的痛痛病和1953年發(fā)生于日本熊本縣水魚灣漁村的水俁病都是由食物受到重金屬污染引發(fā)的，這些悲劇事件引發(fā)了人們對(duì)環(huán)境中重金屬污染的關(guān)注。什么是重金屬呢？重金屬系指密度4.0以上約60種元素或密度在5.0以上的45種元素。環(huán)境污染方面所指的重金屬主要是指生物毒性顯著的汞、鎘、鉛、鉻以及類金屬砷，也包括具有一定毒性的金屬，如銅、鋅、鎳、錫等元素。重金屬不能被微生物降解為無害物，它們?cè)谒w中富集起來，造成水體污染，最終危害人類身體健康。有些重金屬元素，例如銅，是人體和其它生物體必需的元素，但無論必須元素還是有毒元素，人體對(duì)它的忍受都要有一定的限度，超過這個(gè)限度后便會(huì)引起中毒對(duì)生命造成危害。隨著現(xiàn)代工業(yè)的迅猛發(fā)展，重金屬在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的廣泛應(yīng)用，人們?cè)谥圃膦荘和財(cái)富的同時(shí)，人為活動(dòng)引起的環(huán)境污染也在加劇。重金屬是有毒并對(duì)環(huán)境有著持久污染的物質(zhì)，重金屬可以在生物體內(nèi)長期積累不可降解，在環(huán)境中可長時(shí)間結(jié)合在土壤或沉淀物中，隨著環(huán)境的變化使金屬發(fā)生移動(dòng)，大大提高了它們的毒性和可吸收性。因此重金屬在環(huán)境、農(nóng)產(chǎn)品中殘留檢測(cè)都是非常重要的。土壤和農(nóng)產(chǎn)品中的重金屬與人類健康密切相關(guān)。銅在常量下對(duì)作物或人體為營養(yǎng)物質(zhì)，而過量時(shí)就會(huì)產(chǎn)生危害(TylerG..Heavy-metalecologyofterrestrialplants,microorganismsandinvertebrates.WaterAirandSoilPollution，1989，47:189-225)。隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的快速發(fā)展，銅的用途越來越廣泛，用量不斷增加，在當(dāng)代人類使用的金屬中，按金屬用量計(jì)，銅(Cu)是僅次于鐵、鋁之后的第三大用量的重金屬，含銅污染物排放越來越多，對(duì)土壤等環(huán)境的污染也逐漸顯現(xiàn)出來。過量的銅在體內(nèi)特別是肝臟的大量蓄積，會(huì)出現(xiàn)肝臟異常、胃腸反應(yīng)、腎臟病變及溶血，在養(yǎng)殖業(yè)配制飼料過程中，銅作為微量元素添加的促長劑，添加時(shí)過量，動(dòng)物吸收不完全，通過糞便排出進(jìn)入生物鏈，造成污染。高銅飼料在畜牧生產(chǎn)中使用普遍，過量的銅會(huì)引發(fā)母畜流產(chǎn)等。銅極難在自然界降解，造成土壤、水源、植被的嚴(yán)重污染(許梓榮，周勃，王敏奇.長期飼喂高銅飼糧對(duì)豬生長的影響及其機(jī)理討論.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2000,12(2):55-60.)。水生生物可以富集銅，通過食物鏈的富集，最終使大量銅進(jìn)入人體；農(nóng)作物可通過根吸收土壤中的銅，其中一部分也可經(jīng)食物進(jìn)入人體。重金屬銅的污染來源具多樣性，作物中積累的重金屬銅離子通過食物鏈的生物放大作用進(jìn)入人畜體內(nèi)，威脅著人畜健康。重金屬污染是食品、環(huán)境、衛(wèi)生監(jiān)測(cè)的重要內(nèi)容之一(倪才英，陳英旭，駱永明.土壤-植物系統(tǒng)銅污染與修復(fù)的研究進(jìn)展[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，四(3)=237-243.；ValcboD.Zbejazkov.Effectofheavymetalsonpeppermintandcommint.PlantandSoil,1996,178:59-66；郎明林，張玉秀，柴團(tuán)耀.基因工程改良植物重金屬抗性與富集能力的研究進(jìn)展.生物工程學(xué)報(bào),2004，2(K2):157-164；DianeAB，JonesRM,RobertCB,etal.Antibody-basesensorsforheavymetalions.BiosenBioelec,2001,16:799-809.),在重金屬銅污染的預(yù)防和治理中，重金屬銅污染物的監(jiān)測(cè)和識(shí)別至關(guān)重要?？傊亟饘偈且环N很危險(xiǎn)的污染物。污染環(huán)境中存在的高濃度重金屬，對(duì)生物的生理活動(dòng)能產(chǎn)生多種影響，使一些生物發(fā)生病害甚至死亡，最終使生態(tài)系統(tǒng)平衡被破壞、生態(tài)環(huán)境惡化。重金屬通過食物鏈可以在人體中積累，引起多種疾病甚至癌癥，而且危害還可以遺傳到下一代。因此，痕量重金屬的定量分析在食品和環(huán)境檢測(cè)等方面都是非常重要的。對(duì)重金屬的常規(guī)性檢測(cè)方法已經(jīng)有很多種，有些也已經(jīng)是非常成熟的技術(shù)，但因?yàn)橹亟饘匐x子存在的范圍很廣，根據(jù)檢測(cè)精度、方便程度和檢測(cè)成本，每種技術(shù)都有它們的局限性，同時(shí)還需合適的場所，因此都不利于在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。建立更快速、更經(jīng)濟(jì)的免疫分析法檢測(cè)銅離子是生產(chǎn)及經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要。傳統(tǒng)的重金屬離子檢測(cè)方法主要有原子吸收光譜法(AtomicAbsorptionSpectroscopy)、紫夕卜分光光度法(Ultra-violetSpectroscopy)、陽極溶$^(AnodicStrippingVoltammeter)>^^1if夕去(Oscillopolarography)禾口各種儀器聯(lián)用技術(shù)，如電感耦合等離子體質(zhì)譜法(InductivelyCoupledPlasma-MassSpectrometry)、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜分析GnductivelyCoupledPlasma-AtomicEmissionSpectrometry)>S1^^^^“J^nItBt^(HydrideGeneration-AtomicAbsorptionSpectrometry)等。傳統(tǒng)的重金屬檢測(cè)方法多采用化學(xué)儀器檢測(cè)，如利用AAS、ICP-AES或電化學(xué)方法等，檢測(cè)儀器昂貴，樣品要經(jīng)過濕法消解或微波消解，逐個(gè)測(cè)定單種重金屬濃度，測(cè)量精度雖可達(dá)到mg/kg或更高，但檢測(cè)步驟繁瑣，檢測(cè)成本高，需耗時(shí)2天左右，不適應(yīng)實(shí)踐中快速簡便的需要，難以適應(yīng)環(huán)境及市場產(chǎn)品的現(xiàn)場抽查及產(chǎn)品進(jìn)出口快速通關(guān)的要求。重金屬的免疫分析方法作為一種新型的檢測(cè)技術(shù)，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，具有快速、靈敏和便攜等優(yōu)點(diǎn)(KhosravianiM,PavlovAR,FlowersGC,etal.Detectionofheavymetalsbyimmunoassay!optimizationandvalidationofarapid,portableassayforioniccadmium.EnvironSciTtechnoy,1998,32(1)137-142；BlakeRC,DelehantyJB,KhosravianiM.Allostericbindingpropertiesofamonoclonalantibodyanditsfabfragment.Biochemistry,2003,42(2):497-508.),njM^點(diǎn)檢測(cè)和補(bǔ)救工作的費(fèi)用，并且能極大的提高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作的效率和質(zhì)量，可用于環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品重金屬污染的現(xiàn)場檢測(cè)，從而適用于農(nóng)畜產(chǎn)品的抽樣檢測(cè)及進(jìn)出口通關(guān)的快速檢驗(yàn)(BlakeRC,DelehantyJB,KhosravianiΜ.Allostericbindingpropertiesofamonoclonalantibodyanditsfabfragment.Biochemistry,2003,42(2):497_508.)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供雜交瘤細(xì)胞株及其分泌的抗重金屬銅的單克隆抗體。本發(fā)明所提供的雜交瘤細(xì)胞株為雜交瘤細(xì)胞株C9D11，其保藏編號(hào)為CCTCCN0201087。由雜交瘤細(xì)胞株C9D11CCTCCNO:C201087分泌得到的單克隆抗體也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種抗原。本發(fā)明所提供的抗原是按照包括如下步驟的方法制備得到1)將可溶性銅鹽溶液與螯合劑溶液混合，進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，得到銅離子與螯合劑的絡(luò)合物；2)在步驟1)的基礎(chǔ)上，再加入載體蛋白溶液和偶聯(lián)緩沖液，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到載體蛋白與所述絡(luò)合物的偶聯(lián)物，即為抗原。上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述可溶性銅鹽與所述螯合劑的投料比滿足如下條件所述可溶性銅鹽中的Cu2+與所述螯合劑的物質(zhì)的量比為11;上述抗原制備中，所述步驟2、中，所述螯合劑與所述載體蛋白的投料比滿足如下條件所述螯合劑與所述載體蛋白中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為51。上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述絡(luò)合反應(yīng)在pH值為7.4的條件下進(jìn)行；上述抗原制備中，所述步驟2)中，所述偶聯(lián)反應(yīng)在pH值為9.0的條件下進(jìn)行。上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述絡(luò)合反應(yīng)的溫度為25°C，所述絡(luò)合反應(yīng)的時(shí)間為10分鐘；上述抗原制備中，所述步驟2)中，所述偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為25°C，所述偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為12小時(shí)。上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述螯合劑的分子式為C22H28N4OltlS·3HC1；上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述可溶性銅鹽溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將銅片溶于濃度為68%(體積百分含量)的HNO3水溶液中，待銅片完全反應(yīng)后，得到所述可溶性銅鹽溶液；上述抗原制備中，所述步驟1)中，所述螯合劑溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將所述螯合劑加入PH值為9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液中，再調(diào)節(jié)pH值至9.0，得到所述螯合劑溶液；上述抗原制備中，所述步驟幻中，載體蛋白BSA溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將所述載體蛋白BSA溶于pH值為7.4、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液，得到所述載體蛋白溶液；上述抗原制備中，所述步驟幻中，所述載體蛋白為牛血清白蛋白或血藍(lán)蛋白；上述抗原制備中，所述步驟2)中，所述偶聯(lián)緩沖液為pH9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種不完全包被原。本發(fā)明所提供的不完全包被原，按照包括如下步驟的方法制備得到將螯合劑、載體蛋白和反應(yīng)緩沖液混合，在PH至9.0、25°C的條件下反應(yīng)12小時(shí)，得到螯合劑與載體蛋白的不完全包被原。上述不完全包被原制備中，所述螯合劑與所述載體蛋白的投料比滿足如下條件所述螯合劑與所述載體蛋白中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為51。上述不完全包被原制備中，所述偶聯(lián)反應(yīng)在pH值為9.0的條件下進(jìn)行。上述不完全包被原制備中，所述反應(yīng)的溫度為25°C，所述偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為12小時(shí)。上述不完全包被原制備中，所述螯合劑溶液按照包括如下步驟的方法制備得到6將螯合劑加入PH值為9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液中，再調(diào)節(jié)pH值至9.0，得到所述螯合劑溶液；上述不完全包被原制備中，所述螯合劑的分子式為C22H28N4OltlS·3HC1。上述不完全包被原制備中，所述載體蛋白為牛血清白蛋白；上述單克隆抗體在檢測(cè)樣品中是否含有銅中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述單克隆抗體在檢測(cè)樣品中銅的含量中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的抗重金屬銅的單克隆抗體的效價(jià)高。利用本發(fā)明的抗體可以用于銅離子殘留的免疫學(xué)檢測(cè)。并利用其快速、廉價(jià)、靈敏和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，發(fā)展便于現(xiàn)場檢測(cè)的便攜方法，從而適用于農(nóng)畜產(chǎn)品的抽樣檢測(cè)及進(jìn)出口通關(guān)的快速檢驗(yàn)。對(duì)提高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作的效率和質(zhì)量，保障食品安全有重要現(xiàn)實(shí)意義。圖1為Cu-DTPA-BSA，DTPA-BSA，BSA的紫外掃描圖譜；圖2為Cu-DTPA-KLH、KLH的紫外掃描圖譜；圖3為Cu-DTPA-BSA,DTPA-BSA及載體蛋白BSA的SDS-PAGE電泳圖圖4為Cu-DTPA-KLH，載體蛋白KLH的SDS-PAGE電泳圖5為小鼠六免后的差異率比較；圖6細(xì)胞株C9D11分泌抗體與DTPA結(jié)合系數(shù)測(cè)定結(jié)果；圖7為雜交瘤細(xì)胞株C9D11分泌抗體的亞型；圖8為單克隆抗體效價(jià)的檢測(cè)圖9為細(xì)胞株C9D11分泌抗體特異性鑒定；圖10為C9D11分泌抗體的穩(wěn)定性。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、抗原與不完全包被原的制備一、制備p-Scn-Bn-DTPA購自美國Macrocyclics，貨號(hào)為B-305。產(chǎn)品名p-SCN-Bn-DTPA英文名2-(4-isothiocyanatobenzyl)-diethylenetriaminepentaaceticacid別名:S-2-(4-Isothiocyanatobenzyl)-DiethylenetriaminePentaaceticAcid分子式=C22H28N4OltlS·3HC1。pH值為9.73的HEPES緩沖液1.4165gHEPES,去離子水溶解，用IOmol/L的KOH調(diào)pH至9.73，定容至50mL，配后過濾除菌，4°C保存。(濃度為1.4165g/50mL)。pH值為7.4的HEPES緩沖液14.165gHEPES,去離子水溶解，調(diào)pH至7.4，定容至500mL。(濃度為1.4165g/50mL)。A液llg銅片溶于IOOmL體積百分含量為68%的HN03水溶液中，得到濃度為110mg/mL的Cu(N03)2溶液。B液10.668mgp-SCN-Bn-DTPA，加入0.4mLpH9.73的HEPES緩沖液，終濃度為26.67mg/mL。C液20mgBSA溶于0.4mLpH7.4的HEPES緩沖液，得到濃度為50mg/mL的溶液。Bl液稱取IOmgp-SCN-Bn-DTPA溶于0.6mLpH9.73的HEPES緩沖液，得到濃度為16.67mg/mL的溶液Cl液濃度為5.9mg/mL的匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)溶液1.695mL。Cl液購自Sigma，貨號(hào)H^83。中文名匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)。產(chǎn)品英文名:HemocyaninfromMegathuracrenulata(keyholelimpet)。1、Cu-DTPA-BSA和Cu-DTPA-KLH的制備Cu-DTPA-BSA的制備(1)取0.4mL的B液加入反應(yīng)器，再加入9.5μLA液，在ρΗ為7.4、室溫(250C)下反應(yīng)10分鐘，得到Cu-DTPA液；(2)再向其中加入1.2mLρΗ9·73的HEPES緩沖液、C液0.4mL,再加ρΗ9·73的HEPES緩沖液將調(diào)節(jié)ρΗ至9.0，室溫(25°C)下攪拌，反應(yīng)12小時(shí)，得到Cu-DTPA-BSA。步驟(1)中，Cu(NO3)2中的Cu2+與p-SCN-Bn-DTPA的物質(zhì)的量比為11。步驟O)中，P-SCN-Bn-DTPA與BSA中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為5I0Cu-DTPA-KLH(1)取0.133mL的Bl液加入反應(yīng)器，再加入A液9.9μL，在ρΗ為7.4、室溫(250C)下反應(yīng)10分鐘，得到Cu-DTPA液；(2)再向其中加入0.420mLρΗ9·73的HEPES緩沖液、Cl溶液1.695mL，調(diào)節(jié)ρΗ至9.0，室溫(25°C)下攪拌，反應(yīng)12小時(shí)。步驟(1)中，Cu(NO3)2中的Cu2+與p-SCN-Bn-DTPA的物質(zhì)的量比為1:1。步驟(2)中，p-SCN-Bn-DTPA與KLH中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為51。CentriconYM-30超濾離心管預(yù)先用0.lmol/L二乙烯三胺五乙酸(DTPA)溶液浸泡過夜，然后用PH9.73的HEPES緩沖液充分沖洗。偶聯(lián)反應(yīng)后，用CentriconYM-30超濾離心管對(duì)蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行分離純化，即用CentriconYM-30過濾除去沒有參與反應(yīng)的過量的金屬離子Cu2+和螯合劑DTPA及Cu-DTPA，分離純化時(shí)先用pH9.73的HEPES緩沖液洗滌超濾管一次，再用PH7.4的HEPES緩沖液洗滌兩次。2、DTPA-BSA的制備DTPA-BSA取0.4mL的B液加入反應(yīng)器，再向其中加入1.2mLpH9.73的HEPES緩沖液、C液0.4mL,再加pH9.73的HEPES緩沖液將調(diào)節(jié)ρΗ至9.0,室溫(25°C)下攪拌，反應(yīng)12小時(shí)，得到DTPA-BSA。反應(yīng)中p-SCN-Bn-DTPA與BSA中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為5I0分離純化步驟同步驟1。純化后所得的抗原分裝于_20°C保存，長期保存存于-80°C。二、抗原的鑒定1、抗原的濃度測(cè)定參照BCA試劑盒步驟，用BCA法構(gòu)建濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。蛋白濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制在聚苯乙烯微孔板上，分別將ang/mL的BSA標(biāo)準(zhǔn)蛋白稀釋至濃度為1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、25μg/mL,0μg/mL。用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定570nm的光吸收值。以吸收值減去空白值得到的數(shù)值對(duì)BSA含量作圖，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。KLH的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制原理同BSA。抗原濃度的測(cè)定將分離純化后的抗原樣品適當(dāng)稀釋，用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定570nm的光吸收值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品溶液中抗原濃度。結(jié)果表明，利用BCA法檢測(cè)分離純化后的的Cu-DTPA-BSA、Cu-DTPA-KLH、DTPA-BSA中蛋白的實(shí)際濃度依次為6.3175士0.035mg/mL，6.314士0.024mg/mL29.65士0.03Img/mL(見表1)。表1、BCA法檢測(cè)抗原中蛋白濃度權(quán)利要求1.雜交瘤細(xì)胞株C9D11，其保藏編號(hào)為CCTCCN0:C201087。2.由雜交瘤細(xì)胞株C9D1ICCTCCNO:C201087分泌得到的單克隆抗體。3.—種抗原，按照包括如下步驟的方法制備得到1)將可溶性銅鹽溶液與螯合劑溶液混合，進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，得到銅離子與螯合劑的絡(luò)合物；2)在步驟1)的基礎(chǔ)上，再加入載體蛋白溶液和偶聯(lián)緩沖液，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到載體蛋白與所述絡(luò)合物的偶聯(lián)物，即為完全抗原。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗原，其特征在于所述步驟1)中，所述可溶性銅鹽與所述螯合劑的投料比滿足如下條件所述可溶性銅鹽中的Cu2+與所述螯合劑的物質(zhì)的量比為11;所述步驟幻中，所述螯合劑與所述載體蛋白的投料比滿足如下條件所述螯合劑與所述載體蛋白中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為51。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的抗原，其特征在于所述步驟1)中，所述絡(luò)合反應(yīng)在PH值為7.4的條件下進(jìn)行；所述步驟2、中，所述偶聯(lián)反應(yīng)在PH值為9.0的條件下進(jìn)行。6.根據(jù)權(quán)利要求3-5中任一所述的抗原，其特征在于所述步驟1)中，所述絡(luò)合反應(yīng)的溫度為25°C，所述絡(luò)合反應(yīng)的時(shí)間為10分鐘；所述步驟2)中，所述偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為25°C，所述偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為12小時(shí)。7.根據(jù)權(quán)利要求3-6中任一所述的抗原，其特征在于所述步驟1)中，所述螯合劑的分子式為C22H28N4OltlS·3HC1；所述步驟1)中，所述可溶性銅鹽溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將銅片溶于濃度為68%(體積百分含量)的HNO3水溶液中，待銅片完全反應(yīng)后，得到所述可溶性銅鹽溶液；所述步驟1)中，所述螯合劑溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將所述螯合劑加入PH值為9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液中，得到所述螯合劑溶液；所述步驟幻中，載體蛋白BSA溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將所述載體蛋白BSA溶于pH值為7.4、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液，得到所述載體蛋白溶液；所述步驟幻中，所述載體蛋白為牛血清白蛋白或匙孔血藍(lán)蛋白；所述步驟2)中，所述偶聯(lián)緩沖液為pH9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液。8.一種不完全包被原，按照包括如下步驟的方法制備得到將螯合劑、載體蛋白和反應(yīng)緩沖液混合，在PH至9.0、25°C的條件下反應(yīng)12小時(shí)，得到螯合劑與載體蛋白的不完全包被原。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的不完全包被原，其特征在于所述螯合劑與所述載體蛋白的投料比滿足如下條件所述螯合劑與所述載體蛋白中的賴氨酸的物質(zhì)的量的比為51。和/或，所述反應(yīng)在PH值為9.0的條件下進(jìn)行。和/或，所述反應(yīng)的溫度為25°C，所述反應(yīng)的時(shí)間為12小時(shí)；和/或，所述螯合劑溶液按照包括如下步驟的方法制備得到將螯合劑加入PH值為9.73、濃度為1.4165g/50mL的HEPES緩沖液中，再調(diào)節(jié)pH值至9.0，得到所述螯合劑溶液；和/或，所述螯合劑的分子式為C22H28N4OltlS·3HC1；和/或，所述載體蛋白為牛血清白蛋白。10.權(quán)利要求2所述單克隆抗體在檢測(cè)樣品中是否含有銅中的應(yīng)用；權(quán)利要求2所述單克隆抗體在檢測(cè)樣品中銅的含量中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗重金屬銅的單克隆抗體。該單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞株C9D11CCTCCNOC201087分泌得到的。本發(fā)明的抗重金屬銅的單克隆抗體的效價(jià)高。利用本發(fā)明的抗體可以用于銅離子殘留的免疫學(xué)檢測(cè)。并利用其快速、廉價(jià)、靈敏和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，發(fā)展便于現(xiàn)場檢測(cè)的便攜方法，從而適用于農(nóng)畜產(chǎn)品的抽樣檢測(cè)及進(jìn)出口通關(guān)的快速檢驗(yàn)。對(duì)提高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作的效率和質(zhì)量，保障食品安全有重要現(xiàn)實(shí)意義。文檔編號(hào)C07K14/795GK102071170SQ201010533370公開日2011年5月25日申請(qǐng)日期2010年11月5日優(yōu)先權(quán)日2010年11月5日發(fā)明者李霞,楊慧,趙麗申請(qǐng)人:北京農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)與農(nóng)田環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)研究中心,北京市農(nóng)林科學(xué)院