專利名稱：一種超聲波-微波協(xié)同萃取七葉皂苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種超聲波-微波協(xié)同萃取七葉皂苷的方法。
背景技術(shù)：
婆羅子為七葉樹科植物七葉樹Aesculus chinensis Bge.、浙江七葉樹Aesculus chinensis Bge. var. ch ekiangensis (Hu et Fang) Fang 或天師栗 Aesculus wilsonii Rehd.的干燥成熟種子。具有理氣寬中，和胃止痛的功效，用于治療胸悶脹痛，胃脘疼痛。七葉皂苷為婆羅子的有效成分，屬于三萜皂苷化合物，具有消炎、抗?jié)B出、恢復(fù)毛 細(xì)血管通透性，提高靜脈張力，改善血循環(huán)，兼有擴(kuò)張動脈，增加耐缺氧能力，促進(jìn)腦功能恢 復(fù)等作用。現(xiàn)代藥理研究表明，七葉皂苷明顯抑制SGC-7901腫瘤細(xì)胞的增殖，并抑制細(xì)胞 周期和誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，可下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)(吳子俠，吳海競.七葉皂苷 體外抗SGC-7901細(xì)胞的作用及機(jī)制研究，中國藥理學(xué)通報，2009，25 (1) :78_81.)。目前國內(nèi)七葉皂苷的現(xiàn)有提純方法主要有1)60%酒精提取，乙酸乙酯和正丁醇依 次萃取，正丁醇萃取液真空干燥濃縮后上NKA-9樹脂和反相層析柱(王緒英，婆羅子中七葉 皂苷的提取分離與純化.西北植物學(xué)報，2003，23 (9) =1592-1595.)，該方法提取率低，有機(jī) 溶劑用量大，制備量小，僅適用于實(shí)驗(yàn)室小劑量制備需求；2) 95%乙醇浸提，活性炭脫色后 氯仿萃取，水洗烘干(高小寧，吳暉，孫曉飛.婆羅子中七葉皂苷提取工藝研究.中藥材， 2008,31(3) :459-460.)，該方法提取時間長，脂肪油含量較高，純度低。3)加速溶劑提取 (郭秀梅，陳軍輝，鄭立，等.加速溶劑提取法提取婆羅子中的七葉皂苷.天然產(chǎn)物研究與開 發(fā)，2007，19 683-687.)，該方法簡單快速，但提取溫度選用100°C，易發(fā)生乙?；D(zhuǎn)化，使 七葉皂苷有效部位活性降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種超聲波_微波協(xié)同萃取七葉皂苷的方法，該方法通過脫 脂、超聲波_微波同時萃取、硅膠柱層析、丙酮洗滌、干燥等步驟獲得七葉皂苷。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了 一種超聲波_微波協(xié)同萃取七葉皂 苷的方法，由以下步驟實(shí)現(xiàn)的取原藥材加6-12倍量石油醚回流脫脂，將脫脂藥渣加入無水乙醇，投入設(shè)備腔 中，進(jìn)行超聲微波同時萃取，萃取完成后，冷卻，離心分離，上清液濃縮后通過硅膠柱層析， 先用10-30%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和正丁醇-丙酮比例混合溶液洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、 丙酮洗滌、脫色、干燥即得。所述藥材原料為七葉樹、浙江七葉樹或天師栗的干燥成熟種子。所述無水乙醇加入量為脫脂藥渣重量的8-25倍。所述超聲功率為40-350W，微波功率為10-500W，提取溫度為40_80°C，萃取時間為 10-60min，所述萃取步驟中乙醇用量為脫脂藥渣質(zhì)量的10-30倍量。所述洗脫劑水飽和正丁醇-丙酮混合溶液體積比為3 1-1 5，優(yōu)選比例1:1-1: 3。所述洗滌步驟中，丙酮洗滌次數(shù)為3-5次。所述脫色步驟中，洗滌后的粗提物用0. 5 % -4 %藥用活性炭脫色，過濾，優(yōu)選2 %。所述干燥方法可選真空干燥、冷凍干燥，所述真空干燥溫度為60-80°C。本發(fā)明進(jìn)行了一系列的正交試驗(yàn)，最終摸索出一種超聲波-微波協(xié)同萃取七葉皂 苷的方法，本發(fā)明得率高，用時少。干燥后所得七葉皂苷含量達(dá)88%以上。
具體實(shí)施例方式通過以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施 例的任何限制。實(shí)施例1將七葉樹種子用萬能粉碎機(jī)粉碎，取1kg，加入10倍石油醚回流提取脫脂lh，將脫 脂物料加入15倍無水乙醇，在超聲波-微波協(xié)同萃取機(jī)中萃取，超聲波175W，微波200W，恒 溫60°C，處理15min，萃取完成后冷卻，離心lOmin，得七葉樹萃取液，將萃取液濃縮成浸膏 后通過硅膠柱，先用5倍柱體積20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再水飽和正丁醇-丙酮(1 3)洗脫 至洗脫液皂苷反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，50°C減壓濃縮，用相當(dāng)于生藥量1倍體積的丙酮分 4次洗滌，加入20g藥用活性炭，加熱回流，脫色，過濾，過濾液真空冷凍干燥，得到七葉皂苷 14. 6g，含量為 92%。實(shí)施例2將七葉樹種子用萬能粉碎機(jī)粉碎，取1kg，加入8倍石油醚回流提取脫脂1. 5h，將 脫脂物料加入15倍無水乙醇，在超聲波-微波協(xié)同萃取機(jī)中萃取，超聲波175W，微波200W， 恒溫60°C，處理15min，萃取完成后冷卻，離心lOmin，得七葉樹萃取液，將萃取液濃縮成浸 膏后通過硅膠柱，先用5倍柱體積20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和正丁醇-丙酮(3 1)洗 脫至洗脫液皂苷反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，50°C減壓濃縮，用相當(dāng)于生藥量1倍體積的丙酮 分4次洗滌，加入15g藥用活性炭，加熱回流，脫色，過濾，過濾液真空冷凍干燥，得到七葉皂 苷15. 5g，含量為88. 4% ο實(shí)施例3:將七葉樹種子用萬能粉碎機(jī)粉碎，取2kg，加入12倍石油醚回流提取脫脂0. 5h，將 脫脂物料加入15倍無水乙醇，在超聲波-微波協(xié)同萃取機(jī)中萃取，超聲波175W，微波200W， 恒溫60°C，處理15min，萃取完成后冷卻，離心lOmin，得七葉樹萃取液，將萃取液濃縮成浸 膏后通過硅膠柱，先用5倍柱體積20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和正丁醇-丙酮(1 2)洗 脫至洗脫液皂苷反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，50°C減壓濃縮，用相當(dāng)于生藥量1倍體積的丙酮 分4次洗滌，加入50g藥用活性炭，加熱回流，脫色，過濾，過濾液真空冷凍干燥，得到七葉皂 苷29. 4g，含量為91%。實(shí)施例4 將七葉樹種子用萬能粉碎機(jī)粉碎，取5kg，加入15倍石油醚回流提取脫脂1. 5h，將 脫脂物料加入15倍無水乙醇，在超聲波-微波協(xié)同萃取機(jī)中萃取，超聲波175W，微波200W， 恒溫60°C，處理15min，萃取完成后冷卻，離心lOmin，得七葉樹萃取液，將萃取液濃縮成浸 膏后通過硅膠柱，先用5倍柱體積20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和正丁醇-丙酮(2 1)洗脫至洗脫液皂苷反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，50°C減壓濃縮，用相當(dāng)于生藥量1倍體積的丙酮 分4次洗滌，加入IOOg藥用活性炭，加熱回流，脫色，過濾，過濾液真空冷凍干燥，得到七葉 皂苷75. 0g，含量為90%。實(shí)施例5 將七葉樹種子用萬能粉碎機(jī)粉碎，取10kg，加入9倍石油醚回流提取脫脂lh，將脫 脂物料加入15倍無水乙醇，在超聲波-微波協(xié)同萃取機(jī)中萃取，超聲波175W，微波200W，恒 溫60°C，處理15min，萃取完成后冷卻，離心lOmin，得七葉樹萃取液，將萃取液濃縮成浸膏 后通過硅膠柱，先用5倍柱體積20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和正丁醇-丙酮(1 4)洗 脫至洗脫液皂苷反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，50°C減壓濃縮，用相當(dāng)于生藥量1倍體積的丙酮 分4次洗滌，加入150g藥用活性炭，加熱回流，脫色，過濾，過濾液真空冷凍干燥，得到七葉 皂苷154g，含量為89%。
權(quán)利要求
一種超聲波 微波協(xié)同萃取七葉皂苷的方法，其特征在于包括以下步驟取原藥材加6 12倍量石油醚回流脫脂，將脫脂藥渣加入無水乙醇，投入設(shè)備腔中，進(jìn)行超聲微波同時萃取，萃取完成后，冷卻，離心分離，上清液濃縮后通過硅膠柱，先用10 30％乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和的正丁醇與丙酮的比例混合溶液洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、丙酮洗滌、脫色、干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述藥材原料為七葉樹、浙江七葉樹或天 師栗的干燥成熟種子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述無水乙醇加入量為脫脂粉末重量的 8-25 倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述超聲功率為40-350W，微波功率為 10-500W，提取溫度為40-80°C，萃取時間為10-60min，乙醇用量為脫脂藥渣質(zhì)量的10-30倍量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述硅膠柱為短粗硅膠柱，洗脫劑水飽和 的正丁醇-丙酮，體積比為3 1-1 5，用量為4-6倍柱體積。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于丙酮洗滌次數(shù)為3-5次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于粗提物用0.5% -4%藥用活性炭脫色，過濾ο
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述干燥方法可選真空干燥、冷凍干燥，所 述真空干燥溫度為60-80°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超聲波-微波協(xié)同萃取七葉皂苷的方法，該方法是將原料用石油醚脫脂，脫脂藥渣加乙醇，與乙醇比例為1∶8-20；放入設(shè)備腔，進(jìn)行超聲微波同時萃取，超聲波功率為40-350W，微波功率為10-500W，萃取時間5-60min，萃取完成后，冷卻，離心分離，得到七葉皂苷萃取液；將上清液濃縮后通過硅膠柱層析，10-30％乙醇洗脫雜質(zhì)，再用水飽和的正丁醇與丙酮的比例混合溶液洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、丙酮洗滌，脫色、干燥即可獲得含量88％以上的七葉皂苷。
文檔編號C07H1/08GK101967175SQ20101021027
公開日2011年2月9日 申請日期2010年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月28日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司