專利名稱：干細(xì)胞培養(yǎng)的制作方法
干細(xì)胞培養(yǎng)對相關(guān)申請的交叉引用本申請要求于2008年12月3日提交的美國臨時申請?zhí)?1/200，808的優(yōu)先權(quán)，將該申請的全部內(nèi)容結(jié)合入本文中用于所有目的。
背景技術(shù)：
胚胎干細(xì)胞(ESCs)是多能細(xì)胞，其具有無限地自我更新和分化成身體的所有細(xì)胞類型的能力(Thomson, J. Α.等，Science (科學(xué))282 (5391) :1145-1147(1998) ；Thomson, J.A.&Odorico，J. S.，Trends Biotechnol (生物技術(shù)趨勢)18 O) :53-57 (2000))。此能力提供了希望，即有一天ESC將被用來替換損失的和損傷的細(xì)胞，并且提供常規(guī)藥物所不能達(dá)到的治療。然而，為了充分實現(xiàn)hESC的臨床潛力，需要建立化學(xué)成分限定的、無飼養(yǎng)細(xì)胞-和動物產(chǎn)品、穩(wěn)定的培養(yǎng)條件。盡管已經(jīng)報道了幾種化學(xué)成分限定培養(yǎng)基Mao， S.等.，Proc Natl Acad Sci USA (美國國家科學(xué)院院刊)103 (18) :6907-6912(2006) ；Lu, J.等.，Proc Natl Acad Sci USA (美國國家科學(xué)院院刊)103 (15) :5688-5693(2006)； Ludwig, Τ. E.等.，Nat Biotechnol (自然生物技術(shù))24(2) 185-187 Q006))，但由于細(xì)胞在它們中的性能欠佳，它們大多仍然是不令人滿意的。尤其是在這些條件下，當(dāng)細(xì)胞通過胰蛋白酶傳代為單一細(xì)胞時，它們經(jīng)歷廣泛的細(xì)胞死亡。許多介導(dǎo)hESC自我更新的信號傳導(dǎo)途徑是已知的，包括 FGF，TGF-0，Wnt，等(James, D.等·，Development (發(fā)育)132 (6) 1273-1282(2005) ；Xu,R. H.等.，Nat Methods (自然方法)2(3) :185-190(2005) ；Beattie, G.M.等.，Stem Cells (干細(xì)胞)23 (4) :489-495(2005) ；Greber，B.，Lehrach，H.，&Adjaye， J.，Stem Cells (干細(xì)胞)25 O) :455-464(2007) ；Sato, N.等·，Nat Med (自然-醫(yī)學(xué))10(1) 55-63 (2004) )0然而，它們中沒有一個似乎能在此過程中充當(dāng)存活因子，其分子機制是復(fù)雜的。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了具有下式的化合物
權(quán)利要求
1.具有下式的化合物
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)A是取代或未被取代的芳基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)A是取代或未被取代的苯基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)B是取代或未被取代的雜環(huán)烷基，或取代或未被取代的雜芳基。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)B是取代或未被取代的雜芳基。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)B是取代或未被取代的吡唑基，取代或未被取代的呋喃基，取代或未被取代的咪唑基，取代或未被取代的異噁唑基，取代或未被取代的噁二唑基，取代或未被取代的噁唑基，取代或未被取代的吡咯基，取代的或未被取代的吡啶基，取代或未被取代的嘧啶基，取代或未被取代的噠嗪基，取代或未被取代的噻唑基，取代或未被取代的三唑基，取代或未被取代的噻吩基，取代或未被取代的二氫噻吩-吡唑基，取代或未被取代的硫茚基，取代或未被取代的咔唑基，取代或未被取代的苯并噻吩基，取代或未被取代的苯并呋喃基，取代或未被取代的吲哚基，取代或未被取代的喹啉基，取代或未被取代的苯并三唑基，取代或未被取代的苯并噻唑基，取代或未被取代的苯并噁唑基，取代或未被取代的苯并咪唑基，取代或未被取代的異喹啉基，取代或未被取代的異吲哚基，取代或未被取代的吖啶基，取代或未被取代的苯并異噻唑基，或取代或未被取代的二甲基乙內(nèi)酰脲。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，其中L2是取代或未被取代的C1-Cltl烷基。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中L2是亞甲基。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)A是取代或未被取代的芳基；環(huán)B是取代或未被取代的雜芳基；R1是氫；并且L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2是氫。
12.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1是氫或是未被取代的C1-Cltl烷基。
13.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1是氫。
14.權(quán)利要求1所述的化合物，具有下式
15.權(quán)利要求14所述的化合物，其中L2是取代或未被取代的C1-Cltl烷基。
16.權(quán)利要求14所述的化合物，其中L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
17.權(quán)利要求14所述的化合物，其中L2是亞甲基。
18.權(quán)利要求14所述的化合物，其中X是-N=或-CH =。
19.權(quán)利要求14所述的化合物，其中ζ是2且鄰近頂點處的兩個R3結(jié)構(gòu)部分連接在一起形成取代或未被取代的雜環(huán)烷基。
20.權(quán)利要求14所述的化合物，其中ζ是1。
21.權(quán)利要求14所述的化合物，其中y是0或1。
22.權(quán)利要求14所述的化合物，其中R3是-0R18，且R18是氫或未被取代的C1-Cltl烷基。
23.權(quán)利要求14所述的化合物，其中 L2是亞甲基；X 是-N =或-CH =； R1是氫；并且 y和ζ是0。
24.權(quán)利要求1所述的化合物，具有下式
25.具有下式的化合物
26.權(quán)利要求25所述的化合物，其中環(huán)D是取代或未被取代的苯基。
27.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的環(huán)烷基。
28.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的C1-Cltl烷基或取代或未被取代的3-7元環(huán)烷基。
29.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的C1-C5烷基或取代或未被取代的3-6元環(huán)烷基。
30.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R2°是未被取代的C1-C5烷基或未被取代的3-6元環(huán)烷基。
31.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R22是氫；并且Rm是取代或未被取代的環(huán)烷基，取代或未被取代的雜環(huán)烷基，取代或未被取代的芳基， 或取代或未被取代的雜芳基。
32.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R22是氫；并且R23是取代或未被取代的取代或未被取代的芳基。
33.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R22和R23連接在一起形成取代或未被取代的雜環(huán)烷基，或取代或未被取代的雜芳基。
34.權(quán)利要求25所述的化合物，其中R22和R23連接在一起形成取代或未被取代的吡咯基，取代或未被取代的異二氫氮雜茚基，取代或未被取代的哌啶基，或取代或未被取代的四氫喹啉基。
35.權(quán)利要求25所述的化合物，具有下式
36.權(quán)利要求35所述的化合物，其中R28為-0R4°，其中R4°為氫或未被取代的C1-Cltl烷基。
37.權(quán)利要求36所述的化合物，其中R4°為氫或未被取代的C1-C5烷基。
38.權(quán)利要求35所述的化合物，其具有下式
39.權(quán)利要求38所述的化合物，其中R2°為未被取代的C1-Cltl烷基。
40.權(quán)利要求38所述的化合物，其中R28為-0R4°，其中R4°為氫或未被取代的C1-Cltl烷基，或被取代或未被取代的C3-C6環(huán)烷基取代的C1-Cltl烷基。
41.權(quán)利要求38所述的化合物，其中q為1。
42.權(quán)利要求38所述的化合物，其具有下式
43.權(quán)利要求25所述的化合物，其具有下式
44.一種體外穩(wěn)定分離的細(xì)胞的方法，所述方法包括使動物細(xì)胞與足量的式I或式III 化合物(例如，權(quán)利要求1-43所述的化合物中的任一種)接觸以穩(wěn)定所述細(xì)胞。
45.權(quán)利要求44所述的方法，其中進(jìn)一步包括在所述化合物的存在下改變所述細(xì)胞的條件或環(huán)境，其中在缺少所述化合物的條件下所述改變步驟會導(dǎo)致細(xì)胞的細(xì)胞編程變化。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述改變步驟包括使所述細(xì)胞解凍和使所述細(xì)胞與其它細(xì)胞解離的至少一個。
47.權(quán)利要求44所述的方法，其中所述細(xì)胞是貼壁的。
48.權(quán)利要求44所述的方法，其中所述細(xì)胞處于混懸液中。
49.權(quán)利要求44所述的方法，還包括確定所述細(xì)胞的表型。
50.權(quán)利要求44所述的方法，包括從動物中分離所述細(xì)胞。
51.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述動物是人。
52.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述動物是非人動物。
53.權(quán)利要求44所述的方法，其中所述化合物是式I化合物。
54.權(quán)利要求44所述的方法，其中所述化合物是式III化合物。
55.一種改善動物的病癥的方法，所述方法包括施用足量的式I或式III化合物(例如，權(quán)利要求1-43所述的化合物中的任一種)于需要所述方法的動物以改善所述病癥。
56.權(quán)利要求55所述的方法，其中所述病癥選自由組織損傷、卒中和癌癥組成的組。
57.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述組織選自由胰腺、肝、腸、肺和腎組成的組。
58.權(quán)利要求55所述的方法，其中所述病癥包括移植組織或器官的至少部分排斥。
59.權(quán)利要求58所述的方法，其中所述移植包括骨髓、臍帶血、純化的造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞、心臟細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、胰腺β細(xì)胞或肝細(xì)胞的移植。
60.權(quán)利要求55所述的方法，其中所述化合物是式I化合物。
61.權(quán)利要求55所述的方法，其中所述化合物是式III化合物。
62.一種維持細(xì)胞存活的方法，所述方法包括，產(chǎn)生分離的干細(xì)胞、祖細(xì)胞或分化細(xì)胞；和誘導(dǎo)所述分離的細(xì)胞中E-鈣黏著蛋白的穩(wěn)定，從而維持細(xì)胞存活。
63.權(quán)利要求62所述的方法，其中所述誘導(dǎo)步驟包括使所述分離的干細(xì)胞與足以提高分離的干細(xì)胞的存活率的量的式I化合物(例如，權(quán)利要求I-M所述的化合物中的任一種)接觸，與缺少所述化合物的情況相比，所述式I化合物的量將分離的干細(xì)胞的存活率提高至少2倍。
64.權(quán)利要求62所述的方法，其中所述誘導(dǎo)步驟包括在表面上培養(yǎng)所述分離的干細(xì)胞，其中包含E-鈣黏著蛋白胞外結(jié)構(gòu)域的分子栓系在所述表面上。
65.一種分離的細(xì)胞群，其包含足以提高分離的細(xì)胞的存活率的量的穩(wěn)定所述細(xì)胞中的E-鈣黏著蛋白的分子，與缺少所述分子的情況相比，所述分子的量將分離的細(xì)胞的存活率提高至少2倍。
66.權(quán)利要求65所述的細(xì)胞群，其中所述分子包含式I化合物(例如，權(quán)利要求I-M 所述的化合物中的任一種)。
67.權(quán)利要求65所述的細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞選自由干細(xì)胞、誘導(dǎo)的干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、祖細(xì)胞、分化細(xì)胞、β細(xì)胞和成纖維細(xì)胞組成的組。
68.一種分離的細(xì)胞群，其包含足以提高分離的細(xì)胞的存活率的量的式I或式III化合物(例如，權(quán)利要求1-43所述的化合物中的任一種)，與缺少所述化合物的情況相比，所述式I或式III化合物的量將分離的細(xì)胞的存活率提高至少2倍。
69.權(quán)利要求68所述的細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞選自由干細(xì)胞、誘導(dǎo)的干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、祖細(xì)胞、分化細(xì)胞、β細(xì)胞和成纖維細(xì)胞組成的組。
70.一種維持干細(xì)胞存活的方法，所述方法包括，產(chǎn)生分離的細(xì)胞；和激活所述分離的細(xì)胞中的蛋白激酶C(PKC)，從而維持細(xì)胞存活。
71.權(quán)利要求70所述的方法，其中所述激活步驟包括使足量的佛波醇12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯(PMA)與所述分離的細(xì)胞接觸，從而與缺少PMA時的存活率相比提高所述細(xì)胞的存活率。
72.—種分離的干細(xì)胞群，其包含足以提高分離的干細(xì)胞的存活率的量的蛋白激酶C 激活物，與缺少所述PKC激活物的情況相比，所述蛋白激酶C激活物的量將分離的干細(xì)胞的存活率提高至少2倍。
73.權(quán)利要求1所述的化合物，其中每個取代基獨立地選自由下列各項組成的組Ch。烷基，CH。雜烷基，-OR ‘，= 0，= NR ‘，= N-OR ‘，-NR ‘ R 〃，-SR ‘，-鹵素，-SiR ‘ R 〃 R ‘ 〃，-OC(O)R ‘，-C(O)R ‘，-CO2R ‘，-CONR ‘ R 〃，-OC(O) NR' R"，-NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，_NR〃 C(O)2R'，-NR-C(NR' R〃 R'“) = NR" “ ,-NR-C(NR' R〃 ) = NR' “，-S(O)R'，-S(O)2R'，-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，-CN，-NO2，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和雜芳基，其中每個R'，R〃 ,R'‘‘和R"‘‘獨立地選自由氫，C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和芳基烷基組成的組。
74.權(quán)利要求1所述的化合物，其中環(huán)A為環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基，每個任選地被1-5個R3基團(tuán)取代；環(huán)B為雜環(huán)烷基或雜芳基，每個任選地被1-5個R4基團(tuán)取代；L1 為-C (0) -NR2-或-NR2-C (0)-；L2為鍵，C1,亞烷基或C1,雜亞烷基；R1和R2獨立地為氫，C1,烷基，C1,雜烷基，C3_8環(huán)烷基，C3_8雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基；每個 R3 禾口 R4 獨立地為-CN，-S(O)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, -NR10-C(O) R11，-NR12-C(O) -OR13, -C(O)NR14R15, -NR16S(O)2R17, -OR18, -S (O)2NR19, C1^10 烷基，C1^10 雜烷基， 環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基，其中η為0至2的整數(shù)，其中兩個R3結(jié)構(gòu)部分任選地連接在一起形成環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基；和R6，R7，R8，R9，R10，R11, R12, R13, R14, R15, R16，R17, R18 和 R19 各自獨立地為氫，C1,烷基，C1, 雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基。
75.權(quán)利要求25所述的化合物，其中每個取代基獨立地選自由下列各項組成的組Ch。烷基，CH。雜烷基，-OR ‘，= 0，= NR ‘，= N-OR ‘，-NR ‘ R 〃，-SR ‘，-鹵素，-SiR ‘ R 〃 R ‘ 〃，-OC(O)R ‘，-C(O)R ‘，-CO2R ‘，-CONR ‘ R 〃，-OC(O) NR' R"，-NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，_NR〃 C(O)2R'，-NR-C(NR' R〃 R'“) = NR" “ ,-NR-C(NR' R〃 ) = NR' “，-S(O)R'，-S(O)2R'，-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，-CN，-NO2，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和雜芳基，其中每個R'，R〃 ,R'‘‘和R"‘‘獨立地選自由氫，C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和芳基烷基組成的組。
76.權(quán)利要求25所述的化合物，其中環(huán)D為芳基或雜芳基，每個任選地被1-5個R基團(tuán)取代；L3 為-C (0) NH-或-S (0) 2NH-；R20為C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，或雜芳基，每個任選地被1-5個 R基團(tuán)取代；R21 為-NR22R23 或-OR24 ；R22和鏟3獨立地為氫，C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，或連接在一起形成雜環(huán)烷基或雜芳基，每個任選地被1-5個R基團(tuán)取代；R24為C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，每個任選地被1-5個R 基團(tuán)取代；并且每個R基團(tuán)獨立地選自由下列各項組成的組=C1,烷基，C1,雜烷基，-OR'，= 0， = NR' ，= N-OR' ，-NR' R〃，-SR'，-鹵素，-SiR' R “ R ‘ 〃，-OC(O)R' ，-C(O) R'，-CO2R'，-CONR' R"，-OC(O)NR' R"，_NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，-NR" C(O)2R' ,-NR-C(NR' R" R' “ ) = NR" “ ,-NR-C(NR' R" ) = NR' “ ,-S(O)R' ,-S(0)2 R' ,-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，_CN，-NO2，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和雜芳基，其中每個R'， R"，R'“和R"“獨立地選自由氫，C1,烷基，C1,雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和芳基烷基組成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于穩(wěn)定細(xì)胞的化合物和它們的使用方法。
文檔編號C07D513/02GK102307882SQ200980156028
公開日2012年1月4日 申請日期2009年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月3日
發(fā)明者丁生, 徐悅 申請人:斯克里普斯研究所