專利名稱：：一組中藥芫花二萜原酸酯類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從芫花中分離有效成分，特別是涉及從芫花中分離新的二萜原酸酯類化合物。
背景技術(shù)：
：芫花(D即hnegenkwaSieb.etZucc.)為瑞香科瑞香屬植物，傳統(tǒng)上是以干燥花蕾入藥。芫花廣泛分布于我國長江流域各省和黃河流域的部分地區(qū)。該藥為傳統(tǒng)的峻下逐水藥，有毒，味苦、辛，性溫，歸肺、脾、腎經(jīng)。功能瀉水逐飲、祛痰止咳、解毒殺蟲，用于水腫脹滿、胸腹積水、痰飲積聚、氣逆喘咳、二便不利，外治疥癬禿瘡、凍瘡等癥。由于芫花是有毒中藥，因此臨床應(yīng)用一般需經(jīng)炮制后入藥。歷代多用炒、酒炒和醋制等方法炮制，以削減其毒性，緩和瀉下作用和腹痛的癥狀，但從宋代開始，在全國各地炮制規(guī)范中，醋制已完全取代了其他炮制方法。對(duì)芫花的化學(xué)成分研究多從生芫花中分離得到了少數(shù)二萜原酸酯類化合物，并發(fā)現(xiàn)其毒性較大。我們通過對(duì)醋制芫花進(jìn)行系統(tǒng)、現(xiàn)代、科學(xué)的分離技術(shù)，得到了11中二萜原酸酯類化合物，其中8種為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，其毒性低、活性強(qiáng)，說明其為醋制芫花的主要有效成分，有望用于抗腫瘤、改善胸腹積水、利尿、治療便秘、疥癬禿瘡、凍瘡、氣逆喘咳的藥物。以上成分，利用HPLC-MS分析證明，在生芫花中也不同含量的含有，也是生芫花的有效成分。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的公開芫花的新的化學(xué)成分，新的活性單體化合物，本發(fā)明的新化合物，包括以下類似結(jié)構(gòu)的8種化合物。芫花酯A，具有結(jié)構(gòu)式1所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式1芫花酯B，具有結(jié)構(gòu)式2所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>結(jié)構(gòu)式2芫花酯C，具有結(jié)構(gòu)式3所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式3芫花酯D，具有結(jié)構(gòu)式4所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式4芫花酯E，具有結(jié)構(gòu)式5所示結(jié)構(gòu)'結(jié)構(gòu)式5芫花酯F，具有結(jié)構(gòu)式6所示結(jié)構(gòu)'結(jié)構(gòu)式6芫花酯G，具有結(jié)構(gòu)式7所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式7芫花酯H，具有結(jié)構(gòu)式8所示結(jié)構(gòu)。o々7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>結(jié)構(gòu)式8本發(fā)明的新化合物制備方法經(jīng)過以下步驟芫花用水或有機(jī)溶劑提取，提取液減壓濃縮，制成水溶液混懸液，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，其中的氯仿萃取物，即為總二萜原酸酯類化合物粗提取物，繼用反復(fù)硅膠柱色譜、聚酰胺、S印hadexLH-20或HPLC等手段可以分離得到以上8種化合物，其中所述有機(jī)溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮，在使用硅膠柱色譜時(shí)，以低極性溶劑先洗脫去雜質(zhì)，再用高極性溶劑洗脫得到總二萜原酸酯類化合物。其中，低極性溶劑可為氯仿、不同比例石油醚-丙酮、不同比例石油醚-乙酸乙酯、不同比例氯仿-甲醇等；高極性溶劑可為氯仿、不同比例石油醚-丙酮、不同比例石油醚_乙酸乙酯、不同比例氯仿_甲醇。本發(fā)明使用我們多種分離手段包括硅膠柱色譜、大孔吸附樹脂、聚酰胺、葡聚糖凝膠LH-20柱色譜和制備型高效液相色譜法等，從中藥芫花中分離得到37個(gè)化合物，11個(gè)二萜原酸酯類化合物，其中8個(gè)為本發(fā)明的新的化合物。本發(fā)明的新的化合物，經(jīng)過初步生物活性研究，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的二萜原酸酯類化合物具有抗腫瘤、改善胸腹積水、利尿、治療便秘、疥癬禿瘡、凍瘡、氣逆喘咳等作用，是中藥芫花發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。利用HPLC-MS分析證明，在生芫花中也存在不同含量的以上成分。本發(fā)明還包括本發(fā)明的化合物的分析方法如HPLC分析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。檢測方法如下對(duì)照品溶液的配置取二萜原酸酯類化合物化學(xué)對(duì)照品精密稱取適量，用甲醇配制成適量的對(duì)照品溶液。樣品溶液的配置精密稱取芫花樣品(生芫花、醋制芫花)各適量，用100ml氯仿(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、環(huán)己烷等有機(jī)溶劑及其不同濃度的水溶液)提取，回收提取液，甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、環(huán)己烷等有機(jī)溶劑及其不同濃度的水溶液)溶解，經(jīng)裝填0DS的SPE小色譜柱預(yù)處理，95X乙腈(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、環(huán)己烷等有機(jī)溶劑及其不同濃度的水溶液)洗滌，合并洗脫液，甲醇溶解，定容，過濾，即得。測試方法進(jìn)行HPLC分析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。以樣品中各化合物的色譜峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品相應(yīng)色譜峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法(或外標(biāo)1點(diǎn)法、外標(biāo)2點(diǎn)法等)，進(jìn)行定量分析，計(jì)算，即得。本發(fā)明還包括含有本發(fā)明的二萜原酸酯類化合物的藥物組合物。所述組合物可以是本發(fā)明化合物和藥物可接受的載體混合制備成的藥物制劑。這些制劑包括通用的藥物劑型如片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑等。本發(fā)明的藥物組合物在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每次1-20劑，如:1-20袋或粒或片，每劑lmg-1000mg。本發(fā)明的化合物發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤、抑制血栓烷A2/前列腺素過氧化物(TXA2/PGH2)受體、利尿、促進(jìn)腸道蠕動(dòng)、增加腸道水分加速排便、瀉下等的作用。提示其可用于抗腫瘤和治療各種胸腹水等藥物和食品的制備。其抗腫瘤作用的數(shù)據(jù)如下表，說明芫花中抗腫瘤有效成分為本發(fā)明化合物的原酸酯類成分，其中本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙活性更強(qiáng)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>其促進(jìn)小鼠腸道蠕動(dòng)的數(shù)據(jù)如下表，說明芫花中發(fā)揮瀉下作用的有效成分為本發(fā)明化合物的原酸酯類成分，其中本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙活性更強(qiáng)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>47.153.968.5712.989.5芫花素>1000芫花酯乙178.2其利尿(小鼠)的數(shù)據(jù)如下表，說明芫花中發(fā)揮利尿作用的有效成分為本發(fā)明化合物的原酸酯類成分，其中本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙活性更強(qiáng)化合物有效劑量(咖ol/Kg體重)15.6223.0310.447.153.968.5712.989.5芫花素>1000芫花酯乙178.2本發(fā)明的化合物，和已知的類似結(jié)構(gòu)的化合物相比，副作用更少，活性更強(qiáng)，穩(wěn)定性更高。圖1:制備流程1藥材提取分離10圖2:制備流程2乙酸乙酯萃取物中各組分的分離圖3:制備流程3氯仿萃取物中各組分的分離圖4:化合物1的CD和紫外曲線圖5:化合物1中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖6:化合物2中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖7:化合物3的CD和紫外曲線圖8:化合物3中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖9:化合物4的CD和紫外曲線圖10:化合物4中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖11:化合物5中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖12:化合物6中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖13:化合物7的CD和紫外曲線圖14:化合物7中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖15:化合物8的CD和紫外曲線圖16:化合物8中a，p-不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的cotton效應(yīng)圖17:化合物9中不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的八區(qū)律規(guī)則圖18:化合物9中不飽和環(huán)酮結(jié)構(gòu)的八區(qū)律規(guī)則具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1:化合物的分離自制醋制芫花5kg，用十倍量95%乙醇回流提取三次，每次4h。提取液減壓濃縮除去醇后制成水的混懸液，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，各萃取三次，回收溶劑得到石油醚萃取物104.2g、氯仿萃取物139.5g、乙酸乙酯萃取物73.5g。1.乙酸乙酯萃取物乙酸乙酯萃取物60g，利用硅膠柱色譜，以氯仿/甲醇不同比例洗脫(1)氯仿/甲醇(100:2)得流分173-253，以硅膠柱色譜精制，石油醚乙酸乙酯(100:50)洗脫，重結(jié)晶后得化合物34(13mg)。(2)氯仿/甲醇(100:7)得流分440-534，采用開放0DS柱色譜，以甲醇/水不同比例洗脫(ioo:ii:ioo)①40%甲醇洗脫得餾分26-33，經(jīng)反相高效液相色譜制備(檢測波長380nm)，流動(dòng)相為45%甲醇，接峰后回收溶劑，重結(jié)晶后得化合物22(11mg)。②50%甲醇洗脫得流分50-72，經(jīng)反相高效液相色譜制備(檢測波長380nm)，流動(dòng)相為65%甲醇，在不同保留時(shí)間接峰，回收溶劑重結(jié)晶后分別得化合物21(800mg)、化合物20(8mg)、化合物14(7mg)。2.氯仿層萃取物氯仿萃取物100g，利用反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚/丙酮不同比例洗脫。(1)石油醚/丙酮(100:1)得流分53-64與65-85，流分53-64經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚/乙酸乙酯(30:1)洗脫，重結(jié)晶得化合物30(20mg)。流分65-85經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚/乙酸乙酯(100:1)洗脫，重結(jié)晶得化合物32(12mg)。(2)石油醚/丙酮(100:3)得流分117-129，依次經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚/乙酸乙酯洗脫(8:2)，重結(jié)晶得化合物15(8mg)。(3)石油醚/丙酮(100:7)得流分190-221與233，流分190-221依次經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，氯仿/乙酸乙酯(100:1)洗脫，得次流分89-139，次流分89-139再經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇洗脫(8:2)，得亞流分15-18，亞流分15-18經(jīng)制備薄層、氯仿/乙酸乙酯(100:1)洗脫，重結(jié)晶得化合物31(8mg)。流分233重結(jié)晶得化合物12(500mg)。(4)石油醚/丙酮(100:10)得流分222-269與270-304。流分222-269經(jīng)聚酰胺色譜，氯仿/甲醇洗脫(100:10)。①純氯仿洗脫時(shí)得次流分4-8與9-14，流分4_8經(jīng)制備波層色譜、重結(jié)晶得化合物19(9mg)。流分9-14經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(8:2)洗脫得亞流分24-34和101-116，兩者分別經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相分別為60%與65%甲醇，接峰后回收溶劑，重結(jié)晶后得化合物26(11mg)、化合物29(13mg)。②氯仿甲醇(100:l)洗脫時(shí)得次流分24-31，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，氯仿/丙酮(100:1)洗脫，得亞流分41-65，合并、重結(jié)晶得化合物24(9mg)。流分270-304經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚/丙酮洗脫。①石油醚/丙酮(100:5)得次流分93-136，合并、重結(jié)晶得化合物18(8mg)。②石油醚/丙酮(100:3)得次流分24-30，經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相分別為60%甲醇，接峰后回收溶劑重結(jié)晶后得化合物26(11mg)。③石油醚/丙酮(100:10)得次流分179-194，經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇洗脫(8:2)，重結(jié)晶得化合物28(15mg)。(5)石油醚/丙酮(100:20)洗脫得流分305-312、313-341。流分305-312經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，氯仿/乙酸乙酯(100:1)洗脫得次流分35_49，合并、重結(jié)晶得化合物13(400mg)。流分313-341經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，氯仿/乙酸乙酯洗脫①氯仿/乙酸乙酯(100:1)洗脫得次流分75-85，經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為65%甲醇，接峰后回收溶劑重結(jié)晶后得化合物16(8mg)和化合物17(9mg)。②氯仿/乙酸乙酯(100:2)洗脫得次流分93-123，經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為35%甲醇，在不同保留時(shí)間接峰，回收溶劑重結(jié)晶后得化合物35(10mg)、化合物23(9mg)和化合物25(12mg)。③氯仿/乙酸乙酯(100:3)洗脫得次流分150-165，經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(7:3)洗脫，重結(jié)晶得化合物33(14mg)。流分342-379經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，氯仿/乙酸乙酯不同比例洗脫①氯仿/乙酸乙酯(100:2)洗脫得次流分60-82，次流分60-82經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(8:2)洗脫得亞流分32-48，亞流分32-48再經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為80X甲醇，接峰后回收溶劑重結(jié)晶后得化合物11(9mg)。12②氯仿/乙酸乙酯(100:3)洗脫得次流分83-98，次流分83_98經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(8:2)洗脫得亞流分12-21，亞流分12-21再經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為80%甲醇，在不同保留時(shí)間接峰，回收溶劑重結(jié)晶后得化合物3(llmg)和化合物5(20mg)。③氯仿/乙酸乙酯(100:5)洗脫得次流分99-107、108-121、122-144。次流分99-107經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(8:2)與(6:1)時(shí)洗脫分別得亞流分34-40和10-12，兩者經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相分別為78%與80%甲醇，在不同保留時(shí)間接峰，回收溶劑重結(jié)晶后得化合物9(25mg)、化合物1(7mg)、化合物7(15mg)、化合物4(8mg)。次流分108-121經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇(7:3)洗脫得亞流分7-14，亞流分7-14再經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為74%甲醇，在不同保留時(shí)間接峰，回收溶劑重結(jié)晶后得化合物2(25mg)、化合物6(8mg)、化合物8(9mg)。次流分122-144經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱色譜，氯仿/甲醇洗脫得亞流分22-32，亞流分22-32再經(jīng)過反相高效液相色譜制備(檢測波長210nm)，流動(dòng)相為75%甲醇，接峰后回收溶劑重結(jié)晶后得化合物10(22mg)。實(shí)施例2:化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定利用1維、2維核磁共振譜(1D，2D-NMR)、質(zhì)譜(MS)、圓二色譜(CD)等光譜手段以及其他物理化學(xué)方法確定了分離得到的35個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。其中二萜原酸酯(包括新化合物)的化學(xué)結(jié)構(gòu)和鑒定手段如下13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>10*YuMihuaoat6H、-^'mllH、、'、、""'V^\^^?！?h=》——。h'H-NMR，13C-NMR,HMBC，CD,NOESY,HR-ESI-MS11GenkwanineHh。'h°7""7'、。hih?！?^^)'H陽NMR,l3C-NMR，HMQC,HMBC,CD,NOESY,HR-ESI-MS實(shí)施例3:HPLC-TOF-MS分析對(duì)照品溶液的配置化合物1-11自制化學(xué)對(duì)照品精密稱取適量，用甲醇配制成5yg/ml的對(duì)照品溶液。樣品溶液的配置精密稱取芫花樣品(生芫花、醋制芫花)各5g，用100ml氯仿沙氏提取器提取3小時(shí)，回收氯仿提取液，10ml甲醇溶解，經(jīng)裝填ODS的SPE小色譜柱預(yù)處理，95%乙腈20ml洗滌，合并甲醇和95%乙腈洗脫液，甲醇溶解，定容至5ml容量瓶，0.2ym濾膜過濾，即得。測試方法進(jìn)樣10ii1，進(jìn)行HPLC-TOF-MS分析，以各化合物的M+H峰為選擇離子得出色譜峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品相應(yīng)色譜峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法，進(jìn)行定量計(jì)算分析。結(jié)果表明生芫花、醋制芫花中，均含有本發(fā)明分離得到的11個(gè)二萜原酸酯類化合物。實(shí)施例4:化合物1的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z577.2050[M+Na]+(計(jì)算值577.2044)，說明1的分子量為554，推測其分子式為(;。H3A。，并計(jì)算出1中有14個(gè)不飽和度。IR(KBr)譜中在3440cm—1有吸收峰說明在1的結(jié)構(gòu)中存在羥基，并且在1707cm—1的吸收峰說明了羰基的存在。通過對(duì)"C-NMRH-NMR以及HSQC譜的分析，證明1含有30個(gè)碳，其中有4個(gè)16甲基、3個(gè)亞甲基、14個(gè)次甲基及9個(gè)季碳，同時(shí)解析碳譜可知1中有1個(gè)羥甲基(S65.1，C-20)，4個(gè)連氧的次甲基(S72.0，C-5;S64.3，C-7;S78.1，C-12;S80.7，C-14)，4個(gè)連氧的季碳(S72.2，C-4;S60.4，C-6;S78.5，C-9;S84.1，C-13)，2個(gè)羰基碳(S209.4，C-3;S173.1，C-l〃)，1個(gè)末端雙鍵(S143.0，C-15;S113.5，C-16)和1個(gè)單取代的苯基。化學(xué)位移在S117.9的季碳是原酸酯上的碳，這是二萜原酸酯類化合物中最為特征的結(jié)構(gòu)片段[1]。通過對(duì)1的^-NMR譜化學(xué)位移及質(zhì)子峰裂分情況的分析可進(jìn)一步推出，在1中有2個(gè)連在季碳上的甲基分別是S1.87(3H，s，CH3-17)和S1.79(3H，s，CH3_19)，1個(gè)連在叔碳上的甲基S1.37(3H，d，CH3-18)及l(fā)個(gè)連在仲碳上的甲基S1.11(3H，t，CH3_3");4個(gè)連氧次甲基上的質(zhì)子分別是4.27(1H，s，H-5)、3.61(1H，s，H-7)、5.06(1H，s，H-12)和4.90(lH，d，J=2.4Hz，H-14);l個(gè)連在季碳上的羥甲基S3.82(1H，d，J=12.OHz，Ha_20)，S3.96(1H，d，J=12.OHz，Hb_20);還有1個(gè)末端雙鍵的質(zhì)子信號(hào)分別在S5.00(1H，s，Ha-16)和S5.03(1H，s，Hb_16)。對(duì)化合物1的"C-NMRH-NMR、HSQC以及HMBCi普進(jìn)行綜合解析，將其所有的碳信號(hào)及質(zhì)子信號(hào)做出歸屬，推測1應(yīng)為瑞香型二萜骨架的化合物，并且與文獻(xiàn)[2]報(bào)道的這類化合物波譜數(shù)據(jù)的比較進(jìn)一步證明了該骨架的存在。HMBC譜中，季碳S117.9(C-1')與質(zhì)子S4.90(H-14)禾PS7.71(H_3'，7')存在遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了原酸酯結(jié)構(gòu)的存在，并且單取代苯基連接在原酸酯的碳S117.9(C-1')上；在S173.l(C-l")的羰基碳信號(hào)顯示和在S2.28(H-2〃)、Sl.ll(CH3-3〃)及S5.06(H-12)的質(zhì)子信號(hào)有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明有1個(gè)丙酰氧基的結(jié)構(gòu)片段存在，并且該片段連接在C-12(S78.1)上；在S209.4(C-3)的羰基碳信號(hào)顯示和在S1.79(CH3-19)及S7.59(H-1)的質(zhì)子信號(hào)有遠(yuǎn)程相關(guān)，同時(shí)S1.79(CH3_19)與S160.4(C-1)及Sl36.9(C-2)也存在遠(yuǎn)程相關(guān)，推出1中存在a，P-不飽和酮結(jié)構(gòu)，并且甲基連在a位上；此外在S3.61(H-7)的質(zhì)子信號(hào)與S35.5(C_8)，S80.7(C-14)，S78.5(C-9)，S60.4(C_6)及S65.1(C-20)有遠(yuǎn)程相關(guān)；在S1.87(H-17)的質(zhì)子與S113.5(C-16)，S143.0(C-15)及S84.1(C-13)有相關(guān)；在Sl.37(H-18)的質(zhì)子與S78.1(C-12)，S44.1(C-ll)及S78.5(C_9)也有遠(yuǎn)程相關(guān)。綜上所述，化合物1的平面結(jié)構(gòu)得以確定。通過對(duì)NOESY譜和力-NMR譜的峰型及偶合常數(shù)的分析可推導(dǎo)出化合物1的相對(duì)立體構(gòu)型。在NOESY譜中，有質(zhì)子信號(hào)S5.06(H-12)和S1.37(CH3_18)的相關(guān)點(diǎn)，說明H-ll與H-12是反式構(gòu)型，又因?yàn)樵诹?NMR譜中質(zhì)子S5.06(H-12)呈現(xiàn)為一個(gè)單峰，所以H_ll與H-12的夾角應(yīng)為90°;S2.43(H-11)與S3.59(H_8)呈現(xiàn)相關(guān)，推出H_11、H_8和H-14在六元環(huán)上是同側(cè)，而9，13，14-原酸酯結(jié)構(gòu)則在另一側(cè)；S4.90(H-14)與S3.61(H-7)、S5.00(H-16)及S1.87(CH3-17)相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了以上構(gòu)型，并且末端雙鍵結(jié)構(gòu)片段與H-14、H-7都在同側(cè)；而在力-NMR譜中質(zhì)子S3.61(H-7)以單峰呈現(xiàn)，說明H-7與H-8的二面角應(yīng)接近90。。S3.92(H-10)與S4.27(H-5)有相關(guān)點(diǎn)，說明H-10和H-5在七元環(huán)上是同側(cè)。《"mih':\,"、、、、h':、、A-''—'z——oho5h在CD譜中，化合物1在249nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，根據(jù)a，0-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定1的絕對(duì)構(gòu)型[3]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateA。實(shí)施例5:化合物2的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z563.1894[M+Na]+(計(jì)算值563.1887)，說明2的分子量為540，推測其分子式為C^3A。，并計(jì)算出2中有14個(gè)不飽和度。比較化合物1和2的力-NMR、"C-畫R數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)該兩個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)極為相似，所不同是化合物2中是乙酰氧基連接在C-12上，而非丙酰氧基；在HMBC譜中，S169.6(C-1〃)與S2.01(H-2〃)S5.04(H-12)有遠(yuǎn)程相關(guān)證實(shí)了以上推斷。通過分析2的N0ESY及力-NMR譜，發(fā)現(xiàn)其相對(duì)立體構(gòu)型與1相同。在CD譜中，化合物2在244nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，根據(jù)a，P-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定2的絕對(duì)構(gòu)型^。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateF。表2-2化合物1的"H-(600MHzinCDC13)及化合物2的'H-(300MHzinCDCl^and13C-NMR(150MHzinCDC13)譜數(shù)據(jù)t-NMR(75MHzinCDC13)譜數(shù)據(jù)s(c)S(H)G/inHz)s(c)S(H)(力nHz)1160.47.59(1H,brs)160.27.57(IH，brs)2136.9136.83209.4209.3472.272.3572.04.27(IH，s)71.54.26(IH，s)660.460.6764.33.61(1H,s)64.13.58(IH，s)835.53.59(1H,d,片4)35.33.59(1H，d,_/=2.4)978.578.51047.53.92(1H，brs)47.33.92(IH，brs)1144.12.43(1H,q,/=7.8)44.02.46(1H,q，>/=7.5)1278.15.06(1H,s)78.25.04(1H,s)1384.184.01480.74.90(1H,d".4)80.64.91(1H,d力2.4)15143.0142.916113.55.00(1H，s,Ha)113.45.01(1H，s，Ha)5.03(1H,s，Hb)5.03(1H，s,Hb)1718.81.87(3H，s)18.71.87(3H，s)1818.21.37(3H,d，^7.2)18.21.36(3H,d，J=7.5)199.81.79(3H,brs)9.81.77(3H,brs)2065.13.82(1H,d,^12.0,Ha)65.03.80(1H，d，>/=12.3，Ha)3.96(1H,d,J=12.0,Hb)3.87(1H,d力12.3，Hb)lr117.9117.719<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z625.2046[M+Na]+(計(jì)算值625.2044)，說明3的分子量為602，推測其分子式為C34H3401Q，并計(jì)算出3中有18個(gè)不飽和度。將化合物3與化合物2的力-NMR和13C-NMR進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)3比2少了1個(gè)甲基，多了一個(gè)單取代苯基，并且在HMBC譜中，存在S165.4(C-1〃)與S7.90(H-3〃，7〃)、S5.29(H-12)的遠(yuǎn)程相關(guān)，證明該單取代苯基應(yīng)連接在C-1〃(S165.4)上；3中的質(zhì)子信號(hào)H-11(S2.46)和H-12(S5.29)均較2向低場位移，這是受到苯環(huán)去屏蔽影響的結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)該結(jié)構(gòu)片段的存在。通過對(duì)3的N0ESY及^-NMR譜的分析，發(fā)現(xiàn)其相對(duì)立體構(gòu)型與2相同。但在CD譜中，化合物3在240nm處卻呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，根據(jù)a，p-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定3的絕對(duì)構(gòu)型，可確定該化合物為芫花烯(genkwad即hnin)。實(shí)施例7:化合物4的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z643.2151[M+Na]+(計(jì)算值643.2149)，說明4的分子量為620，推測其分子式為C34H36On，并計(jì)算出4中有17個(gè)不飽和度。對(duì)化合物4與化合物3的力-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)4也是二萜原酸酯類化合物，并且碳數(shù)與3相同，都有兩個(gè)單取代苯基；只是H-7(S4.56)質(zhì)子信號(hào)與C-6(S76.4)，C-7(S80.2)及C-20(S70.0)等碳信號(hào)均向低場大幅位移，說明6，7-環(huán)氧結(jié)構(gòu)已經(jīng)不存在，取而代之的是6，7-二羥基。在^-NMR譜中S4.56(H-7)呈現(xiàn)單峰，說明H-7與H-8的二面角應(yīng)為90。，并且在N0ESY譜中S3.73(H-20)與S4.15(H-5)、S4.56(H-7)有相關(guān)點(diǎn)，要同時(shí)滿足這兩點(diǎn)只有當(dāng)H-5、羥甲基和7-0H在七元環(huán)上是同側(cè)時(shí)才能做到。通過對(duì)'H-NMR、"C-NMR、HSQC、HMBC和N0ESY譜的綜合分析可確定4的平面結(jié)構(gòu)及相對(duì)立體構(gòu)型。在CD譜中，化合物4在226nm處呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，根據(jù)a，p-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定4的絕對(duì)構(gòu)型[3]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateB。表2-3化合物3和4的^-(600MHzinCDC13)及13C_NMR(150MHzinCDC13)譜數(shù)據(jù)34S(C)S(H)(JinHz)S(C)S(H)(JinHz)1160.27.58(1H，brs)159.67.65(IH，brs)2136.9137.23209.3208.9472.275.22171.64.21(1H，s)73.74.15(1H，660.776.4c、764.03.68(1H，s)80.24.56(1H，835.83.71(1H，d，J=2.5)35.93.52(1H，d，J=2.4)978.679.11047.43.95(1H，brs)50.54.OO(IH，brs)1144.12.64(1H，q，J=7.3)43.92.98(1H，q，J=7.8)1278.95.29(1H，s)78.15.35(1H，s)1384.385.01480.75.04(1H，d，J=2.5)83.15.IO(IH，d，J=2.4)15142.9142.516113.85.05(1H，s，Ha)114.05.Ol(lH，s，Ha)5.07(1H，s，Hb)5.06(1H，s，Hb)1718.81.91(3H，s)18.81.90(3H，s)1818.41.45(3H，d，J=7.3)18.01.44(3H，d，J=7.2)199.81.76(3H，brs)9.91.80(3H，brs)2064.83.84(1H，d，J=12.6，Ha)70.03.73(1H，d，J=11.4，Ha)3.94(1H，d，J=12.6，Hb)4.10(lH，d，J=11.4，Hb)1'117.9117.92'135.2134.83'，7'126.07.75(1H，m)125.87.68(2H，m)4'，6'128.67.40(1H，m)128.57.44(2H，m)5'129.77.42(1H，m)130.07.40(1H，m)1"165.4165.02"129.7128.53"，7"129.47.90(1H，m)129.67.95(1H，m)4"，6"128.17.45(1H，m)128.27.42(1H，m)5"133.37.55(1H，m)133.37.55(1H，m)實(shí)施例8:化合物5的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定:0175]白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z671.2833[M+Na]+(計(jì)算值671.2826)，說明5的分子量為648，推測其分子式為C37H4401Q，并計(jì)算出5中有16個(gè)不飽和度。比較化合物5與3的^-NMR、"C-NMR譜數(shù)據(jù)后，認(rèn)為5也是二萜原酸酯類化合物，并發(fā)現(xiàn)5較3缺少一個(gè)單取代苯基；而且出現(xiàn)了5個(gè)脂肪族的碳和4個(gè)雙鍵碳，分別是Sl22.2(C-2')、Sl35.0(C-3')、S128.5(C-4')、S139.3(C-5')、S32.6(C-6')、S28.6(C-7')、S31.2(C-8')、S22.4(C-9')禾PS14.0(C—10');在HMBC譜中，S1.29(H—8')與S28.6(C-7')、S22.4(C-9')及S14.0(C-10')有遠(yuǎn)程相關(guān)，S2.11(H-6')與S28.6(C-7')、S31.2(C-8')、S128.5(C-4')及S139.3(C-5')有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出5中存在1個(gè)五碳脂肪鏈，并且該脂肪鏈應(yīng)連接在雙鍵上；S6.06(H-4')與S32.6(C-6')、S122.2(C-2')及S135.0(C-3')在HMBC譜中也存在遠(yuǎn)程相關(guān)，更確證了以上結(jié)構(gòu)片段的存在，并且說明兩個(gè)雙鍵應(yīng)該連接在一起；進(jìn)一步分析5的力-NMR譜，5.69(H-2')與S6.70(H-3')的偶合常數(shù)是15.6Hz，S6.06(H-4')與S5.87(H-5')的偶合常數(shù)是15.0Hz，說明兩個(gè)雙鍵均為反式雙鍵。又因?yàn)樵贖MBC譜中，S117.0(C-1')與S5.69(H-2')、S6.70(H-3')及S4.90(H-14)有遠(yuǎn)程相關(guān)，可推出該長鏈應(yīng)連接在原酸酯的碳(S117.0，C-l')上。將5禾P3的力-NMR及NOESY譜進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)他們的二萜原酸酯骨架具有相同的相對(duì)立體構(gòu)型。但在CD譜中，化合物5在226nm處呈現(xiàn)的是負(fù)cotton效應(yīng)，根據(jù)a，13_不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定5的絕對(duì)構(gòu)型[3]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateD。實(shí)施例9:化合物6的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定23白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z689.2939[M+Na]+(計(jì)算值689.2932)，說明6的分子量為666，推測其分子式為C37H460n，并計(jì)算出6中有15個(gè)不飽和度。比較化合物6和5的13C-NMR譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)六元環(huán)上的碳化學(xué)位移變化很大，在S75.4(C_9)，S75.9(C-13)和S73.0(C-14)的碳信號(hào)均較5向高場位移，并且出現(xiàn)一個(gè)酯羰基S166.9(C-l')，這說明在5中存在的原酸酯官能團(tuán)在6中開環(huán)成了兩個(gè)羥基和一個(gè)2E，4E-decadienoyl，由此可確定6的平面結(jié)構(gòu)。而6的相對(duì)立體構(gòu)型與5比較來看也只是六元環(huán)有變化，在6的'H-NMR譜中有S5.19(H-12)呈現(xiàn)二重峰，并且S5.19(H_12)與S2.50(H-11)的偶合常數(shù)為3.6Hz，說明H-ll與H-12之間的二面角不再是90。；又因?yàn)樵贜0ESY譜中S5.19(H-12)與S1.88(CH3_17)有相關(guān)點(diǎn)，要同時(shí)滿足這兩點(diǎn)只有當(dāng)9-0H、13-0H在六元環(huán)的同側(cè)，且H-12與2E，4E-decadienoyl在另一側(cè)時(shí)才可以做到。在CD譜中，化合物6在244nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，根據(jù)a，|3-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定6的絕對(duì)構(gòu)型[3]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateE。表2-4化合物5和6的^-(600MHzinCDC13)及13C_NMR(150MHzinCDC13)譜數(shù)據(jù)s(c)S(H)C/inHz)s(c)S(H)(/inHz)123467891011121314151617181920r2'3'4'6'8,9,10'r'2"3"，7'4",6'160.2136.8209.372.171.660.663.935.778.147.444.078.983.880.4142.9113.618.718.39.864.6117.0122.2135.0128.5139.332.628.631.222.414.0165.4129.6129.4128.5133.27.58(1H,brs)4.20(1H，s)3.63(1H，s)3.62(1H,d,2.4)3.84(1H，brs)2.56(1H，q,7.2)5.21(1H,s)4.90(1H,d,2.4)5.01(1H,s,Ha)5.06(1H,s,Hb)1.87(3H,s)139(3H,d力7.2)1.76(3H,brs)3.82(1H,d,J:12.6,Ha)3.92(1H,d,12.6,Hb)5.69(1H,d,聲15.6)6.70(1H,dd,J:10,8,15.6)6.06(1H,dd,J二10.8,15.0)5.87(1H,m)2.11(2H,q，/=7.2)1.38(2H，m)1,29(2H，ffi)1.26(2H,m)0.88(3H，t,J-6.6)7.90(1H，d,A7.8)7.44(1H,t，/=7.8)7.57(1H,t,J=7.8)160.1136.9209.172.270.862,162.439.975.450.742.879.575.973.0144.3115.119.615.99.965.3166.9117.8147.2128.2146.533.028.331.322.413.9165.9128.2129.5128.5133.27.68(1H，brs)4.26(1H,s)3.32(1H,s)4.21(1H,d，J=4.8)3.63(1H,brs)2.50(1H,m)5.19(1H,d,J=3.6)6.04(1H,d,7=4.8)5.06(1H，s,Ha)5.34(IH，s,Hb)1,88(3H,s)1.35(3H,d,聲7.2)1.78(3H,brs)3.66(1H,d，/=12.6，Ha)3.94(1H,d,^12.6,Hb)5.93(1H,d,A15.0)7.34(1H,m)6.19(1H,m)6.19(1H，m)2.19(2H,q，弇7.2)1.41(2H，m)1.32(2H,m)1.25(2H，m)0.90(3H,t,/=6.6)7.94(2H,dd,J-7.2,1.2)7.45(2H,t，/=7.8)7.58(1H,t,J=7.8)實(shí)施例10:化合物7的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z609.2673[M+Na]+(計(jì)算值609.2670)，說明7的分子量為586，推測其分子式為QH4^。，并計(jì)算出7中有12個(gè)不飽和度。將化合物7與5的力-NMR、"C-NMR譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)7只比5少1個(gè)單取代苯基，而多1個(gè)甲基。在HMBC譜中，S169.6(C-l")與S1.99(CH3_2〃)和S4.97(H-12)有遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了7中C-12上連接的是乙酰氧基。通過對(duì)7的力-NMR、N0ESY譜的綜合解析，發(fā)現(xiàn)7與5有相同的相對(duì)立體構(gòu)型。但在CD譜中，化合物7在230nm處卻呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，根據(jù)a，P-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定7的絕對(duì)構(gòu)型^。綜上所述，可確定該化合物為芫花酯(Yuanhuadin)。白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z627.2777[M+Na]+(計(jì)算值627.2775)，說明8的分子量為604，推測其分子式為C^H^0n，并計(jì)算出8中有11個(gè)不飽和度?；衔?的^-NMR、"C-NMR譜數(shù)據(jù)與6相比，多了1個(gè)甲基，少了1個(gè)單取代苯基；同樣，在HMBC譜中S170.1(C-1〃)與S2.00(CH3-2〃)、S4.88(H-12)的遠(yuǎn)程相關(guān)，也證明了在8中是1個(gè)乙酰氧基連接在C-12上。綜合分析力-NMR、NOESY譜，發(fā)現(xiàn)8與6有相同的相對(duì)立體實(shí)施例11:化合物8的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定構(gòu)型。在CD譜中，8在236nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，根據(jù)a，p-不飽和環(huán)酮的CD規(guī)律可確定8的絕對(duì)構(gòu)型[3]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YimnhimoateC。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>表2-5化合物7禾P8的"H-(600MHzinCDC13)及13C-NMR(150MHzinCDC13)i8s(c)S(H)(JinHz)s(c)柳(JinHz)1160.37.57(1H,brs)160.07.66(IH，brs)2136.8137.1209.4209.2472.272.3571.94.25(1H,s)71.04.28(1H,s)660.561.9764.23.55(IH，s)62,43.25(1H,s)835.33.51(1H,d，^2.4)39.84.11(1H,d,5.4)978.175,01047.43.82(lH,brs)50.83.57(1H，brs)1144.02.38(IH，q，/=7.2)42.72.30(1H,qd，/=7.8,2.4)1278.24.97(1H,s)79.24.88(1H，d,/=2,4)1383.675.51480.44.76(1H,d,2.4)72.65.92(1H,d".4)15143.0144.616113.34.95(1H，s,Ha)114.85.04(1H,s,Ha)5.01(1H,s，Hb)5.24(1H，s,Hb)1718.61.83(3H，s)19.51.81(3H,s)1818.21.30(3H，d,7=7.2)16.11.30(3H,d，/=7.8)199.81.79(3H，brs)9.91.80(3H，brs)2065.03.93(lH，d,JM2.0,Ha)65.53,68(1H,d,^12.6,Ha)3.79(1H,d,/=12.0,Hb)3.90(1H,d,12.6,Hb)r116.9166.82,122.25.65(1H,d'^15.6)117.95.90(1H,d,聲15.0)3'135.06.66(1H,dd,/=訓(xùn)，15.6)147.17.34(lH,dd,/=15.0，9.6)4,128.56.04(1H,dd，J二10.8,15.6)128.26.18(lH，m)5'139.35.86(1H,m)146.36.19(1H,m)6,32.62.09(2H,33.02.17(2H，m)7,28.61.38(2H,m)28.31.43(2H,m)8,31.21.25(2H,m)31.31,32(2H,m)9,22.41.27(2H,m)22.41.28(2H，m)10'14.00.88(3H，t,".2)13.90.89(3H,t,/:7.8)r'169.6170.12"21.11.99(3H,s)21.12.00(3H,s)實(shí)施例12:化合物9的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定7"白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z627.2207[M+Na]+(計(jì)算值627.2200)，說明9的分子量為604，推測其分子式為C^H3^A。，并計(jì)算出9中有17個(gè)不飽和度。比較9與3的13C-NMR譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)9比3缺少2個(gè)sp2雜化碳原子，取而代之的是2個(gè)sp3雜化碳原子(S33.4，C-l;S42.8，C-2);并且在S220.2(C-3)的羰基碳信號(hào)比3中的羰基碳信號(hào)向低場位移，說明在9中a，e-不飽和酮的結(jié)構(gòu)片段已經(jīng)不存在。在^-NMR譜中，S1.12(CH3-19)質(zhì)子信號(hào)較3中的CHfl9信號(hào)向高場位移；S2.28(H-2)與S33.4(C_1)、S12.3(CH3-19)和S220.2(C-3)在HMBC譜中有遠(yuǎn)程相關(guān)，都進(jìn)一步證實(shí)了以上推斷，因此9的平面結(jié)構(gòu)得以確定。在NOESY譜中，S3.05(H-10)與S2.28(H_2)有相關(guān)點(diǎn)，說明H_10與H-2在五元環(huán)的同側(cè)，而CH3-19則在另一側(cè)；認(rèn)真解析了9的NOESY與^-NMR譜，可知9其余部分的相對(duì)立體構(gòu)型與3相同。在CD譜中，9在309nm處呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，根據(jù)飽和環(huán)酮的"八區(qū)律"規(guī)則可確定9的絕對(duì)構(gòu)型[4]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YuanhuaoateG。白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z565.2052[M+Na]+(計(jì)算值565.2044)，說明10的分子量為542，推測其分子式為C^3A。，并計(jì)算出10中有13個(gè)不飽和度。將化合物10和9的"C-NMRH-NMR譜進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)10比9多1個(gè)甲基，而少1個(gè)單取代苯基。在HMBC譜中，S169.7(C-1〃)與S2.02(CH3_2〃)S5.15(H-12)有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明在10中甲基取代了苯基，因此連接在C-12上的是1個(gè)乙酰氧基。分析10的力-畫R及N0ESY譜，可知10與9有相同的相對(duì)立體構(gòu)型。在CD譜中，10在299nm處呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，根據(jù)飽和環(huán)酮的"八區(qū)律"規(guī)則可確定10的絕對(duì)構(gòu)型[4]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見報(bào)道的新化合物，并命名為YuanhuaoateH。表2-6化合物9和10的^-(600MHzinCDC13)及13C_NMR(150MHzinCDC13)譜數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>27/30頁白色無定形粉末，HR-ESI-MS中給出峰m/z631.2518[M+Na]+(計(jì)算值631.2513)，說明11的分子量為608，推測其分子式為C3凡。(V，并計(jì)算出11中有15個(gè)不飽和度。對(duì)比分析化合物11與9的"C-NMRH-NMR譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)11還是二萜原酸酯類化合物，S117.1(C-1')的季碳與S4.58(H-14)禾PS7.69(H-3'，7')在HMBC譜中顯示的遠(yuǎn)程相關(guān)進(jìn)一步證實(shí)了原酸酯基團(tuán)的存在。不同之處在于，ll中沒有酮羰基信號(hào)，取而代之的是1個(gè)sp2雜化的連氧碳(S76.7，C-3)，而且在HMBC譜中S76.7(C-3)與S1.69(H-1)、S4.31(H-3)與S13.1(CH3-19)都有遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了這樣的變化；在S77.5(C-6)和S76.3(C-7)的碳信號(hào)均向低場位移，說明6，7-環(huán)氧結(jié)構(gòu)片段已開環(huán)成為6，7-二羥基結(jié)構(gòu)片段；在HMBC譜中，酯羰基S167.l(C-l")與S8.08(H-3〃，7〃)顯示遠(yuǎn)程相關(guān)，說明苯?；琅f存在，并且S4.90(H-20)與S167.l(C-l")、S76.3(C-7)及S77.5(C-6)的遠(yuǎn)程相關(guān)提示該苯?；B在C-20的羥基上。又通過分析HMBC譜中的其他相關(guān)而最終確定了11的平面結(jié)構(gòu)。在NOESY譜中，S1.74(H-2)與S2.76(H-10)及S4.31(H_3)有相關(guān)點(diǎn)，說明H-2、H-3和H-10在五元環(huán)的同側(cè)，而CH3-19與0H-3則在另一側(cè)；綜合分析力-NMR與NOESY譜，證實(shí)其余部分的相對(duì)立體構(gòu)型與化合物4相同。根據(jù)單取代苯環(huán)、帶的CD規(guī)則[5]，即因?yàn)?1在CD譜中于260nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，所以C-l'應(yīng)該是S構(gòu)型。綜上所述，可確定該化合物為GenkwanineH。實(shí)施例15:藥物組合物的制備本發(fā)明化合物1-8的任何一個(gè)和藥物可接受的載體混合以制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑等制劑。實(shí)施例16:現(xiàn)有技術(shù)中類似物如芫花酯乙和芫花素，和本發(fā)明化合物進(jìn)行藥理和毒理比較。結(jié)果本發(fā)明化合物優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)化合物。化合物對(duì)Hela細(xì)胞半數(shù)有效濃度(timol/L)110.2211.4354.6423.8528.9643.7712.686.5芫花素>1000芫花酯乙342.2其促進(jìn)小鼠腸道蠕動(dòng)的數(shù)據(jù)如下表，說明芫花中發(fā)揮瀉下作用的有效成分為本發(fā)明化合物的原酸酯類成分，其中本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙活性更強(qiáng)化合物有效劑量(咖ol/Kg體重)15.6223.0310.447.153.968.5712.989.5芫花素>100032化合物有效劑量(咖ol/Kg體重)芫花酯乙178.2其利尿(小鼠)的數(shù)據(jù)如下表，說明芫花中發(fā)揮利尿作用的有效成分為本發(fā)明化合物的原酸酯類成分，其中本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙活性更強(qiáng)化合物有效劑量(mmol/Kg體重)15.6223.0310.447.153.968.5712.989.5芫花素>1000芫花酯乙178.2小鼠毒性試驗(yàn)結(jié)果，說明芫花本發(fā)明化合物比已知化合物芫花酯乙毒性更弱；而芫花素雖然毒性小，但其并非活性化合物，從而說明了本發(fā)明化合物的優(yōu)勢化合物半數(shù)致死量靜脈注射(mmol/Kg體重)1209.52127.53118.433<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>權(quán)利要求一類從中藥芫花中分離得到的二萜原酸酯類化合物，包括芫花酯A-H，其中芫花酯A具有結(jié)構(gòu)式1所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式1F2009101764488C00011.tif2.—種二萜原酸酯類化合物芫花酯B，具有結(jié)構(gòu)式2所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>3.—種二萜原酸酯類化合物芫花酯C,具有結(jié)構(gòu)式3所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>4.一種二萜原酸酯類化合物芫花酯D，具有結(jié)構(gòu)式4所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>結(jié)構(gòu)式45.一種二萜原酸酯類化合物芫花酯E，具有結(jié)構(gòu)式5所示結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)式5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>6.一種二萜原酸酯類化合物芫花酯F，具有結(jié)構(gòu)式6所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>結(jié)構(gòu)式67.一種二萜原酸酯類化合物芫花酯G，具有結(jié)構(gòu)式7所示結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>8.—種二萜原酸酯類化合物芫花酯H，具有結(jié)構(gòu)式8所示結(jié)構(gòu)c<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>結(jié)構(gòu)式89.權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)二萜原酸酯類化合物在制備抗腫瘤、改善胸腹積水、利尿、以及便秘、疥癬禿瘡、凍瘡、氣逆喘咳的治療藥物中的應(yīng)用。10.含有權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)二萜原酸酯類化合物的藥物組合物。11.權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)二萜原酸酯類化合物的制備方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟芫花用水或不同濃度的有機(jī)溶劑提取，提取液減壓濃縮，制成水溶液混懸液，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，氯仿萃取物，即為總二萜原酸酯類化合物粗提取物，繼用反復(fù)硅膠柱色譜、聚酰胺、S印hadexLH-20、和HPLC等手段可以分離得到以上化合物，其中有機(jī)溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮，硅膠柱色譜時(shí)，以低極性溶劑先洗脫去雜質(zhì)，即用高極性溶劑洗脫得到總二萜原酸酯類化合物，其中，低極性溶劑可為氯仿、不同比例石油醚-丙酮、不同比例石油醚-乙酸乙酯、不同比例氯仿_甲醇等；高極性溶劑可為氯仿、不同比例石油醚-丙酮、不同比例石油醚-乙酸乙酯、不同比例氯仿-甲醇。結(jié)構(gòu)式全文摘要本發(fā)明涉及一組中藥芫花二萜原酸酯類化合物，本發(fā)明的化合物，包括以下類似結(jié)構(gòu)的化合物，具有以下所示結(jié)構(gòu)。文檔編號(hào)C07D303/32GK101704826SQ200910176448公開日2010年5月12日申請(qǐng)日期2009年9月15日優(yōu)先權(quán)日2009年9月15日發(fā)明者曾毅梅,李國玉,王金輝申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)