專利名稱：那西肽厡粉的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種動(dòng)物用抗生素的提取方法，具體涉及一種制備含 硫多肽類抗生素那西肽原粉的提取方法。 技術(shù)背景-
隨著人類物質(zhì)文明的不斷進(jìn)步及人們對(duì)自然界認(rèn)識(shí)的不斷深化，人類的健康發(fā)展越來 越備受關(guān)注，食品的安全問題也就至關(guān)重要。肉魚蛋奶完全是用飼料換來的，要保證"吃" 和"喝"的放心，就要保證魚肉蛋奶的安全，因此，飼料的安全至關(guān)重要。飼料安全是指 在飼料中不應(yīng)含有有毒有害物質(zhì)或因素，至少不應(yīng)在畜禽水產(chǎn)品中殘留蓄積轉(zhuǎn)而危害人體 健康和對(duì)人類生存環(huán)境構(gòu)成威脅。那西肽就是一種完全符合人們需求的綠色飼用添加劑。
那西肽(nosiheptide)又名諾肽菌素(primofax)、多硫霉素(multhiomycin)。分子 式C51H43N13012S6，分子量1222. 37，是發(fā)酵工程產(chǎn)物。它是由12個(gè)氨基酸及其衍生物 組成的多肽，是一種新型的在動(dòng)物體內(nèi)不殘留的飼料添加劑，它是一種新型非吸收的飼用 抗生素。
那西肽產(chǎn)品科技含量高，原料成本低(黃豆餅粉、玉米粉等)，提取工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品 本身毒性較低(口服LDs?！?3060毫克/公斤體重，腹腔注射LDs?！?610毫克/公斤體重)。畜 禽、水產(chǎn)類動(dòng)物食用本產(chǎn)品后，體內(nèi)沒有殘留，且能夠明顯促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和改善飼料利用 率，符合綠色產(chǎn)品的要求。那西肽原粉具有含量高的特點(diǎn)，對(duì)下游生產(chǎn)廠家來說可以大幅 節(jié)約其運(yùn)輸成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種那西肽原粉的提取方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)的，那西肽原粉的提取方法，包括下述步驟
a、 取那西肽發(fā)酵液加熱至80-9(TC，保溫30分鐘以上，加入助濾劑，過濾；
b、 取那西肽濾渣，按l: 1.2的比例加入95%以上乙醇，控溫45-5(TC，攪拌處理30 分鐘以上，抽濾得乙醇提取液；
c、 抽濾后濾渣，再加入70%乙醇，控溫45-5(TC，攪拌處理30分鐘以上，進(jìn)行第二 次提取處理后，抽濾得乙醇提取液；
d、 濾渣重復(fù)c步操作，再提取一遍，然后將三次乙醇提取液合并；e、 將乙醇提取液控溫60-65°C，真空度0.08-0. 09Mpa減壓濃縮乙醇，濃出原體積三
分之二液體時(shí)，停止?jié)饪s；
f、 濃縮液內(nèi)加入相當(dāng)于濃縮液體積3倍的純化水，溫度降至l(TC以下結(jié)晶，離心， 50-6(TC干燥，得那西肽粗品；
g、 那西肽粗品用相當(dāng)于其重量10倍的pH值2-3的純化水洗滌、離心分離，然后再 用pH值8-9的純化水洗滌、離心分離，分離后那西肽原粉再用丙酮洗滌，離心分離，然 后干燥即得那西肽原粉。
本發(fā)明的進(jìn)一步技術(shù)方案是上述a步驟中過濾采用板框過濾。
由上述技術(shù)方案可見，本發(fā)明在發(fā)酵液離心分離方面，把原有的用離心機(jī)分離發(fā)酵液 的方法，改用板框過濾，這樣大大提高了單位時(shí)間處理量，減少設(shè)備投資；在粗品結(jié)晶步 驟，利用那西肽不溶于水的性質(zhì)，在濃縮結(jié)束時(shí)加入一定量的水，既不增加成本，又可大 幅度提高收率(目前現(xiàn)有的收率為60%左右，本發(fā)明的收率達(dá)到75%以上)；精制步驟由 原來的丁醇提取改用酸水洗滌，以達(dá)到提純的目的，改進(jìn)后的精制工藝生產(chǎn)的那西肽原粉 效價(jià)可達(dá)920-980 ug/mg，不僅大幅度提高了產(chǎn)品含量而且由溶劑提取改用酸水洗滌還能 大幅度降低生產(chǎn)成本。本發(fā)明的提取工藝具有方法簡(jiǎn)單，收率高，品質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)，具備工 業(yè)化生產(chǎn)條件。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一
a、 取那西肽發(fā)酵液3500ml加熱至8(TC，保溫35分鐘，加入助濾劑，板框過濾；
b、 取那西肽濾渣，按l: 1.2的比例加入95%以上乙醇，控溫45。C，攪拌處理30分 鐘，抽濾得乙醇提取液；
c、 抽濾后濾渣，再加入70%乙醇，控溫45。C，攪拌處理30分鐘，進(jìn)行第二次提取 處理后，抽濾得乙醇提取液；
d、 濾渣重復(fù)c步操作，再提取一遍，然后將三次乙醇提取液合并共3470ml;
e、 將乙醇提取液控溫60'C，真空度0.08Mpa減壓濃縮乙醇，濃出原體積三分之二液 體時(shí)，停止?jié)饪s；
f、 濃縮液內(nèi)加入相當(dāng)于濃縮液體積3倍的純化水，溫度降至l(TC以下結(jié)晶，離心， 5(TC干燥，得那西肽粗品7. 18g;
g、 那西肽粗品用相當(dāng)于其重量10倍的pH值2-3的酸水洗滌、離心分離，然后再用 pH值8-9的純化水洗滌、離心分離，分離后那西肽原粉再用丙酮洗滌，離心分離，然后干
4燥即得那西肽原粉5.11g。
發(fā)酵液3500ml效價(jià)1800ug/ml總億0. 063
乙醇提取液3470ml效價(jià)1752 ug/ml總億0. 0608收率96.51%
粗品7. 18g效價(jià)767 ug/mg總億0. 0551收率90.63%
精粉5. llg效價(jià)948 ug/mg總億0.0484收率87.90%
總收率0.0484+0.063 XI00% =76. 83%
實(shí)施例二
a、 取那西肽發(fā)酵液15000ml加熱至85'C，保溫30分鐘，加入助濾劑，板框過濾；
b、 取那西肽濾渣，按l: 1.2的比例加入95%以上乙醇，控溫48。C，攪拌處理35分 鐘，抽濾得乙醇提取液；
c、 抽濾后濾渣，再加入70%乙醇，控溫45。C，攪拌處理35分鐘，進(jìn)行第二次提取 處理后，抽濾得乙醇提取液；
d、 濾渣重復(fù)c步操作，再提取一遍，然后將三次乙醇提取液合并共14350ml;
e、 將乙醇提取液控溫55°C，真空度0.09Mpa減壓濃縮乙醇，濃出原體積三分之二液 體時(shí)，停止?jié)饪s；
f、 濃縮液內(nèi)加入相當(dāng)于濃縮液體積3倍的純化水，溫度降至IO'C以下結(jié)晶，離心， 55'C干燥，得那西肽粗品26. 85g;
g、 那西肽粗品用相當(dāng)于其重量10倍的pH值2-3的酸水洗滌、離心分離，然后再用 pH值8-9的純化水洗滌、離心分離，分離后那西肽原粉再用丙酮洗滌，離心分離，然后干 燥即得那西肽原粉20.41g。
發(fā)酵液15000ml效價(jià)1685ug/ml總億0. 253
乙醇提取液14350ml效價(jià)1686ug/ml總億0. 242收率95. 65%
粗品26. 85g效價(jià)838ug/mg總億0.225收率92. 98%
精粉20. 41g效價(jià)975ug/mg總億0. 199收率88. 44%
總收率0. 199 + 0. 253X100% =78. 66%
實(shí)施例三
a、 取那西肽發(fā)酵液8000ml加熱至9(TC，保溫30分鐘，加入助濾劑，板框過濾；
b、 取那西肽濾渣，按l: 1.2的比例加入95%以上乙醇，控溫50。C，攪拌處理30分 鐘，抽濾得乙醇提取液；
c、 抽濾后濾渣，再加入70%乙醇，控溫5(TC，攪拌處理30分鐘，進(jìn)行第二次提取處理后，抽濾得乙醇提取液；
d、 濾渣重復(fù)c步操作，再提取一遍，然后將三次乙醇提取液合并共7470ml;
e、 將乙醇提取液控溫65°C，真空度0.08Mpa減壓濃縮乙醇，濃出原體積三分之二液 體時(shí)，停止?jié)饪s；
f、 濃縮液內(nèi)加入相當(dāng)于濃縮液體積3倍的純化水，溫度降至l(TC以下結(jié)晶，離心， 6(TC干燥，得那西肽粗品15. 03g;
g、 那西肽粗品用相當(dāng)于其重量10倍的pH值2-3的酸水洗滌、離心分離，然后再用 pH值8-9的純化水洗滌、離心分離，分離后那西肽原粉再用丙酮洗滌，離心分離，然后干 燥即得那西肽原粉11.79g。
1750ug/ml 總億0. 14 1763ug/ml 總億0. 132 改價(jià) 825ug/mg 總億0. 124 975 ug/mg總億0. 115
發(fā)酵液 乙醇提取液
粗品
精粉
8000ml 7470ml 15. 03g 11. 79g
效價(jià) 效價(jià) 突 效價(jià)
收率 94.29% 收率 93.94% 收率 92.74%
總收率0.115 + 0. 14X100% =82. 1%
權(quán)利要求
1、那西肽原粉的提取方法，其特征在于a、取那西肽發(fā)酵液加熱至80-90℃，保溫30分鐘以上，加入助濾劑，過濾；b、取那西肽濾渣，按1∶1.2的比例加入95％以上乙醇，控溫45-50℃，攪拌處理30分鐘以上，抽濾得乙醇提取液；c、抽濾后濾渣，再加入70％乙醇，控溫45-50℃，攪拌處理30分鐘以上，進(jìn)行第二次提取處理后，抽濾得乙醇提取液；d、濾渣重復(fù)c步操作，再提取一遍，然后將三次乙醇提取液合并；e、將乙醇提取液控溫60-65℃，真空度0.08-0.09Mpa減壓濃縮乙醇，濃出原體積三分之二液體時(shí)，停止?jié)饪s；f、濃縮液內(nèi)加入相當(dāng)于濃縮液體積3倍的純化水，溫度降至10℃以下結(jié)晶，離心，50-60℃干燥，得那西肽粗品；g、那西肽粗品用相當(dāng)于其重量10倍的pH值2-3的酸水洗滌、離心分離，然后再用pH值8-9的純化水洗滌、離心分離，分離后那西肽原粉再用丙酮洗滌，離心分離，然后干燥即得那西肽原粉。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的那西肽原粉的提取方法，其特征在于所述a步驟中過濾 采用板框過濾。
全文摘要
本發(fā)明公開一種那西肽厡粉的提取方法，把原有的用離心機(jī)分離發(fā)酵液的方法，改用板框過濾，這樣大大提高了單位時(shí)間處理量，減少設(shè)備投資；在粗品結(jié)晶步驟，利用那西肽不溶于水的性質(zhì)，在濃縮結(jié)束時(shí)加入一定量的水，既不增加成本，又可大幅度提高收率(目前現(xiàn)有的收率為60％左右，本發(fā)明的收率達(dá)到75％以上)；精制步驟由原來的丁醇提取改用水洗，以達(dá)到提純的目的，改進(jìn)后的精制工藝生產(chǎn)的那西肽厡粉效價(jià)可達(dá)920-980ug/mg，不僅大幅度提高了產(chǎn)品含量而且由溶劑提取改用酸水洗滌還能大幅度降低生產(chǎn)成本。本發(fā)明的提取工藝具有方法簡(jiǎn)單，收率高，品質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)，具備工業(yè)化生產(chǎn)條件。
文檔編號(hào)C07K1/36GK101519434SQ200910116488
公開日2009年9月2日 申請(qǐng)日期2009年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月3日
發(fā)明者劉瑞華, 健 姚, 孫冠中, 朱立元, 李為全, 楊春麗 申請(qǐng)人:安徽省皖北藥業(yè)股份有限公司