專利名稱：一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法。
毛茛科(Ranunculaceae)烏頭屬(Aconitum)植物在我國品種很多，約160多種，主產(chǎn) 于西南各省，約有44種已作為藥用，其中附子(i adxA;ow力丄flferafo)、川烏(Wacfo:y4cowW) 和草烏(ite//* 《ww;rq^/)是最常用的中藥。附子為毛茛科植物烏頭C4co"/加w
ow7w/c/;w// Z)eA"的子根，川烏為毛茛科植物烏頭的干燥母根，草烏為毛茛科植物北烏頭
(j"W"〃附A7/縦-(參'i "'c/76)的干燥塊根。
烏頭屬植物中主要含有三類生物堿雙酯型生物堿、單酯型生物堿和脂類生物堿(表l)。 現(xiàn)代藥理研究證明，雙酯型生物堿為附子及烏頭屬植物中的劇毒成分，烏頭堿、中烏頭堿、
次烏頭堿的小鼠LDso分別為l. 8 mg/kg、 1. 9 mg/kg和5. 8 mg/kg (Ohno Y. / 7br 2Jbx7" ifev. , 1998， 17(1): 1-11)。中毒癥狀以神經(jīng)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)為主,其次是消化系統(tǒng)癥狀,尸檢 可見腦部及全身各器官均有不同程度的出血"此類生物堿的毒性概括為箭毒樣作用即阻斷神 經(jīng))肌肉接頭傳導(dǎo);烏頭堿樣作用表現(xiàn)為心率紊亂、血壓下降、體溫降低、呼吸抑制、肌肉麻 痹和中樞神經(jīng)功能紊亂等"烏頭堿可直接毒害心肌細胞,故其心臟中毒的致命性最為嚴(yán)重(宋 東江.烏頭堿類化合物毒理學(xué)研究概況[J].中國藥理通報，1989,5(5):272)。雖然單酯型生物堿含 量低，但是毒性低，使用安全，炮制品和配伍水煎液中含量較高，但是提取物中仍有一定雙 酯型生物堿殘余。在加熱水解過程中雙酯型生物堿如烏頭堿首先水解失去C-8位乙?；?成為毒性較小且仍具有一定藥理作用的苯甲酰烏頭原堿類(benzoylaconitines)毒性約為烏頭 堿的1/200，己基本達到去毒目的。若進一步水解則失去C-14位苯甲酰酯基而成為毒性更 小，藥理作用也較弱的烏頭原堿類(aconines)，其毒性僅為原生物堿的1/2000 1/4000。水 解后的產(chǎn)物仍然有效。本專利的目的，即通過調(diào)節(jié)提取溶液的酸堿度和高壓水解的方法，使 提取物中的雙酯型生物堿盡可能的轉(zhuǎn)變?yōu)閱熙バ蜕飰A。
本發(fā)明是通過調(diào)節(jié)提取物溶液的酸堿度和高壓水解的方法，使提取物中的雙酯型生物堿 盡可能的轉(zhuǎn)化為單酯型生物堿。
表l烏頭屬植物中主要雙酯型生物堿、單酯型生物堿和脂類生物堿
背景技術(shù)：

發(fā)明內(nèi)容
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生物堿
雙酯 型生 物堿
輔 型牛 物堿
脂型 生物 堿
次烏頭堿 中烏頭堿 烏頭堿 14-苯甲酰次
烏頭胺 14-苯甲酰中
烏頭胺 14-苯甲酰烏
頭胺 8-亞油酰-14-苯甲酰次烏
頭胺 8-亞油酰-14-苯甲酰中烏
頭胺 8-亞油酰-14-苯甲酰烏頭
R2R3R4R5R6R7質(zhì)荷比 Cm/z)口服半 數(shù)致死 量 (mg/Kg)
OCH3CH3HOCH3OAcOBzOHOH6165.8
OCH3C2H5HOCH3OAcOBzOHOH6321.9
OCH3C2H5OHOCH3OAcOBzOHOH6461.8
OCH3CH3HOCH3OHOBzOHOH574800
OCH3C2H5HOCH3OHOBzOHOH柳腸
OCH3C2H5OHOCH3OHOBzOHOH6041500
OCH3CH3HOCH3OLipoOBzOHOH836100-200
OCH3C2H5HOCH3OLipoOBzOHOH85210-40
OCH3C2H5OHOCH3OLipoOBzOHOH866>400
一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法，其步驟和條件如下 將烏頭類植物的千燥粉末浸于體積分數(shù)為50-95%的乙醇溶液中，烏頭類植物的干燥粉末質(zhì)量 (g): 50-95W的乙醇溶液的體積(ml)比為1: 1-3;超聲提取1.5-4小時后濾出乙醇提取液；按上述方 法再處理兩次；合并三次濾出的乙醇提取液，4(TC-6(TC下減壓蒸出溶劑，得到提取物；該提取物用 蒸餾水稀釋成以烏頭類植物的干燥粉末質(zhì)量(g)和蒸餾水的體積(ml)比為3-6g/ml的溶液，加氨 水調(diào)pH值到6.0-10.0，置高壓反應(yīng)釜中于100。C-12(TC加熱，加熱時間40-80min，得到一種增加烏 頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的提取液。
有益效果 一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法，反應(yīng)產(chǎn)物主要是以水解反 應(yīng)產(chǎn)物為主，雙酯型生物堿發(fā)生水解反應(yīng)，生成毒性較小的單酯型生物堿。由于是對提取物溶液的 水解，不用考慮生藥材的悶潤時間等多種因素的影響。而且溶液分布均勻，反應(yīng)更穩(wěn)定可靠。減少 別產(chǎn)物，縮短生產(chǎn)周期，提高單酯型生物堿產(chǎn)率0.17-13倍。 檢測方法
(1) 質(zhì)譜半定量法
金屬加熱毛細管溫度18(TC;噴霧電壓4. 5kV;管透鏡補償電壓10V;碰撞能量為20。/。
42%;氮氣為殼氣；金屬加熱毛細管電壓10 V;注射泵流速3 u L /min。取上述樣品溶液20pL， 加入100nL高烏甲素(內(nèi)標(biāo)物)，用甲醇稀釋25倍后，進電噴霧質(zhì)譜儀分析。
(2) 檢測圖見附圖1和附圖2


附圖l為生川烏未經(jīng)過增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法得到的電噴霧
質(zhì)譜閣(圖中616.88、 632.68、 646.61為雙酯型生物堿)。由圖可以看出未水解的生川烏提取
液樣品中主要以雙酯型生物堿為主，單酯型生物堿的含量很低(相對含量為22.66%)。
附圖2為生川烏經(jīng)過增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法得到的電噴霧質(zhì) 譜圖(圖中590.63、 574.62、 604.58為單酯型生物堿；836.63、 852.51為脂型生物堿)。由圖 可以看出水解后的生川烏提取液樣品中主要是單酯型生物堿(相對含量為317.90%)，雙酯 型生物堿己水解成單酯型生物堿。
具體實施例方式
實施例l 將生川烏的干燥粉末5g浸于體積比為50。/。的乙醇5ml溶液中超聲提取1.5小 時后濾出乙醇提取液，按上述方法再處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液，40。C下減壓蒸 出溶劑，得到生川烏提取物，提取物用蒸餾水稀釋成生川烏干燥粉末與蒸餾水的比是3g/ml 的溶液，加氨水調(diào)PH值到6.0，至高壓反應(yīng)釜中于10(TC加熱，加熱時間40min，得到一種增 加生〗11烏的提取物中單酯型生物堿含量的提取液。
把該生川烏的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入lOOpL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含 量為22.66%,水解后的相對含量為317.90%。
實施例2將生川烏的干燥粉末5g浸于體積比為95%的乙醇15ml溶液中超聲提取4小 時后濾出乙醇提取液，按上述方法再處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液，60。C下減壓蒸 出溶劑，得到生川烏提取物，提取物用蒸餾水稀釋成生川烏干燥粉末與蒸餾水的比是6g/ml 的溶液，加氨水調(diào)PH值到10.0，至高壓反應(yīng)釜中于12(TC加熱，加熱時間80min，得到一 種增加生川烏的提取物中單酯型生物堿含量的提取液。
把該生川烏的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入lOOpL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含 量為22.66%，水解后的相對含量為305.76°/。。
實施例^將生川烏的干燥粉末5g浸于體積比為75X的乙醇10ml溶液中超聲提取3小時后 濾出乙醇提取液，按上述方法再處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液，5(TC下減壓蒸出溶 劑，得到生川烏提取物，提取物用蒸餾水稀釋成生川烏干燥粉末與蒸餾水的比是5g/ml的溶 液，加I(水調(diào)PH值到7.0，至高壓反應(yīng)釜中于110C加熱，力[T熱時間TOn!fti，得到一種増加生
川烏的提取物中單酯型生物堿含量的提取液。
把該牛川烏的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入100nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物，
混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含
量為22.66%,水解后的相對含量為276.98%。
實施例4 生附子的干燥粉末5g,處理方法同實施例l，得到一種增加生附子的提取物中
單酯型生物堿含量的提取液。
把該生附子的提取液冷卻至室溫，取20)iL樣品溶液，加入1 OOnL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物，
混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量
為21.09%，水解后的相對含量為172.71%。
實施例5
生附子的干燥粉末5g，處理方法同實施例2得到一種增加生附子的提取物中單酯型生物堿
含量的提取液。
把該生附子的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入100nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為21.09%，水解后的相對含量為165.72%。
實施例6生附子的干燥粉末5g處理方法同實施例3，得到一種增加生附子的提取物中單 酯型生物堿含量的提取液。
把改生附子的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入100nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為21.09%,水解后的相對含量為152.36%。
實施例7 制草烏的干燥粉末5g處理方法同實施例l，得到一種增加制草烏的提取物中單 酯型生物堿含量的提取液。
把該制草烏的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入IOOnL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為57.71%，水解后的相對含量為67.37%。
實施例8 制草烏的干燥粉末5g，處理方法同實施例2，得到一種增加制草烏的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該制草烏的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入100nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜平定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為57.71%，水解后的相對含量為65.39%。
實施例9 制草烏的T燥粉末5g，處理方法同實施例3，得到一種增加制草烏的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該制草烏的提取液冷卻至室溫，取20VL樣品溶液,加入100fiL富鳥甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為57.71%,水解后的相對含量為59.28%。
實施例IO 生草烏的千燥粉末5g，處理方法同實施例l，得到一種增加生草烏的提取物 中單酯型生物堿含量的提取液。
把該生草烏的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入100pL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，脂肪型生物堿水解前的相對含量 為191.82%,脂肪型生物堿水解后的相對含量為299.36%，單酯型生物堿水解前的相對含量為 31.77%,單酯型生物堿水解后的相對含量為45.81%。
實施例ll 生草烏的干燥粉末5g，處理方法同實施例2，得到一種增加生草烏的提取物 中單酯型生物堿含量的提取液。
把該生草S的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入100pL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，脂肪型生物堿水解前的相對含量 為]91.82%，脂肪型生物堿水解后的相對含量為305.46%，單酯型生物堿水解前的相對含量為 31.77%，單酯型生物堿水解后的相對含量為40.37%。
實施例12 生草烏的干燥粉末5g，處理方法同實施例3，得到一種增加生草烏的提取物 中單酯型生物堿含量的提取液。
把該生草烏的提取液冷卻至室溫，取2(HiL樣品溶液，加入100nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，脂肪型生物堿水解前的相對含量 為191.82%,脂肪型生物堿水解后的相對含量為287.56%，單酯型生物堿水解前的相對含量為 31.77%,單酯型生物堿水解后的相對含量為37.88%。
實施例13 黑順片的干燥粉末5g ，處理方法同實施例l，得到一種增加黑順片的提取物 中單酯型生物堿含量的提取液。
把該黑順片的提取液冷卻至室溫，取100nL樣品溶液，加入20nL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為47.24%，水解后的相對含量為71.52%。
實施例14 黑順片的干燥粉末5g處理方法同實施例2，得到一種增加黑順片的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該黑順片的提取液冷卻至室溫，取10(^L樣品溶液，加入20fiL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為47.24%,水解后的相對含量為68.48%。
實施例15 黑順片的干燥粉末5g處理方，法同實施例A得到一激，l!黑順片的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該黑順片的提取液冷卻至室溫，取100nL樣品溶液，加入20pL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含量 為47.24%，水解后的相對含量為75.36%。
實施例16 制川烏的干燥粉末5g處理方法同實施例l，得到一種增加制川烏的提取物 中單酯型生物堿含量的提取液。
把該制川烏的提取液冷卻至室溫，取20nL樣品溶液，加入lOOpL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含 量為69.17%,水解后的相對含量為170.30%。
實施例17 制川烏的干燥粉末5g處理方法同實施例2，得到一種增加制川烏的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該制川烏的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入lOOpL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含 量為69.17%，水解后的相對含量為169.25%。
實施例18 制川烏的干燥粉末5g處理方法同實施例3，得到一種增加制川烏的提取物中 單酯型生物堿含量的提取液。
把該制川烏的提取液冷卻至室溫，取20pL樣品溶液，加入100pL高烏甲素作為內(nèi)標(biāo)物， 混勻后，進LCQ質(zhì)譜半定量檢測，雙酯型生物堿全部水解，單酯型生物堿水解前的相對含 量為69.17%,水解后的相對含量為165.19%。
權(quán)利要求
1、一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法，其步驟和條件如下將烏頭類植物的干燥粉末浸于體積分數(shù)為50-95％的乙醇溶液中，烏頭類植物的干燥粉末質(zhì)量(g)∶50-95％的乙醇溶液的體積(ml)比為1∶1-3；超聲提取1.5-4小時后濾出乙醇提取液；按上述方法再處理兩次；合并三次濾出的乙醇提取液，40℃-60℃下減壓蒸出溶劑，得到提取物；該提取物用蒸餾水稀釋成以烏頭類植物的干燥粉末質(zhì)量(g)和蒸餾水的體積(ml)比為3-6g/ml的溶液，加氨水調(diào)pH值到6.0-10.0，置高壓反應(yīng)釜中于100℃-120℃加熱，加熱時間40-80min，得到一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的提取液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種增加烏頭屬植物提取物中單酯型生物堿含量的方法。通過調(diào)節(jié)提取物溶液的酸堿度和高壓水解的方法，使提取物中的雙酯型生物堿盡可能的轉(zhuǎn)化為單酯型生物堿。反應(yīng)產(chǎn)物主要是以水解反應(yīng)產(chǎn)物為主，雙酯型生物堿發(fā)生水解反應(yīng)，生成毒性較小的單酯型生物堿。由于是對提取物溶液的水解，不用考慮生藥材的悶潤時間等多種因素的影響。而且溶液分布均勻，反應(yīng)更穩(wěn)定可靠。減少副產(chǎn)物，縮短生產(chǎn)周期，提高單酯型生物堿產(chǎn)率0.17-13倍。
文檔編號C07D221/22GK101357167SQ20081005116
公開日2009年2月4日 申請日期2008年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月12日
發(fā)明者劉志強, 孫莉佳, 宋鳳瑞, 皮子鳳 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所