專利名稱：從吳茱萸中分離檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中草藥藥材中分離活性成分的方法，具體而言，是一種從 吳茱萸藥材中同時大量地快速分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方 法。
背景技術(shù)：
, 檸檬苦素(limomin)、吳茱萸堿(evodiamin)和吳茱萸次堿(rutaecarpin) 分別是從蕓香科植物吳茱萸(Fructus Evodia)中分離出的生理活性較高的三萜 內(nèi)酯和生物堿化合物；檸檬苦素(也稱吳茱萸內(nèi)酯)具有降壓、抗炎、.鎮(zhèn)痛、抗腫 瘤、抑制HIV-1病毒、抗動脈粥樣硬化和殺蟲等作用，其與生物堿類有效成分(主 要是吳茱萸堿和吳茱萸次堿)共同表達(dá)吳茱萸的藥理作用。目前主要采用常壓柱 層析，同時分離出這三種有效成分耗時長，溶劑耗費(fèi)大，環(huán)境污染大，且一次性 分離的量很小，無法滿足日益增長的市場需要，且不利于環(huán)保和高效率高得率生 產(chǎn)。.

發(fā)明內(nèi)容
'本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種從吳茱萸藥材中 同時大量地分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法。該方法分離速 度快、得率高、利于環(huán)保。
為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下 ' 一種從瑪茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方 法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行
A.加熱提取選取粒度為20-60目的吳茱萸果實(shí)粗粉，按質(zhì)量比加入8
倍量的醇溶劑，于25—65'C加熱2—5小時，經(jīng)過濾除渣，濾液減壓回收除去醇 溶劑后，得到水懸浮液；
所述醇溶劑選自體積百分比濃度為95%的乙醇或100%的甲醇，優(yōu)選95%的 乙醇。 所述吳茱萸果實(shí)粗粉的粒度優(yōu)選30目。 .所述吳茱萸果實(shí)粗粉與醇溶劑的加熱溫度優(yōu)選56'C 。
B. 溶劑萃取將步驟A所得水懸浮液，先用2倍體積比的石油醚萃取，水 相再用氯仿或者二氯甲烷萃取，各萃取3 — 5次，每次用量按體積比，均為水懸 浮液的4一5倍，石油醚層回收石油醚后棄去，合并氯仿或者二氯甲烷層萃取液， 于45—65。C溫度下經(jīng)減壓濃縮得到黑色濃浸膏(密度為1.26),
所述石油醚、氯仿或者二氯甲垸均為分析純。
C. 色譜柱層析將B步驟所得的黑色濃浸膏甲醇溶解干法拌樣后進(jìn)行常 壓色譜柱層析。其中，層析柱填料為中性氧化鋁或者硅膠，粒度為100—400目； 色譜柱規(guī)格據(jù)分離量而定，直徑為5—50cm。梯度洗脫所選用的洗脫劑為石油醚 :乙酸乙酯或者石油醚一丙酮的混合溶劑，按體積比由高到低，依次按50: l — 1: l的洗脫劑比例，分段收集半成品。
D. 高效制備液相分離將C步驟分段收集的半成品合并后，加入甲醇至剛 好溶解，再經(jīng)高效制備液相分離得到檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿餾分。
所述高效制備液相填料為十八烷基硅垸鍵合硅膠(C18)，柱規(guī)格為 25cm*10cm或25cm*5cm，色譜條件檢測波長210nra，流動相為甲醇一水(甲醇 的體積百分比為50%—90%)或者乙腈一水(乙腈的體積百分比35%—55%)， 含量都可達(dá)90%。
E. 結(jié)晶將D步驟分離所得三種餾分，采用兩相溶劑結(jié)晶法進(jìn)一步純化分 別得到純度達(dá)99.0%以上的檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿無色針狀結(jié)晶產(chǎn)
口
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所用結(jié)晶溶劑選用體積百分比濃度為80%—95%的乙醇，或者體積比為5: l一2: 1的石油醚一丙酮混合溶劑，亦或者體積比為5: l—2: 1的石油醚一乙 酸乙酯混合溶劑。 '
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
1、 步驟少，耗時短，得率高，操作簡便，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
2、 溶劑消耗少，提取、萃取、柱層析、制備液相分離等步驟中的溶劑都可 回收再利用。
3、 所用溶劑毒性較小，層析過程中所用的石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，可
替代ffl常柱層析釆用的氯仿、甲醇等，安全無毒，環(huán)保。
4、 經(jīng)濟(jì)效益好，能進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，且工序簡便，僅包括5個步驟，易于
控制，分離效率高。
5、 具有較高的學(xué)術(shù)價值。目前國內(nèi)關(guān)于檸檬苦素等的分離純化的文獻(xiàn)報道 都是常規(guī)柱層析，高效制備液相色譜用于檸檬苦素的分離純化也屬首次。本發(fā)明 為擰檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了藥理原料、理論和 實(shí)踐支持。 .


圖1為本發(fā)明B步驟所述HPLC檢測圖譜
圖2為本發(fā)明制備分離在線監(jiān)測圖譜
圖3為本發(fā)明E步驟所述檸檬苦素的HPLC檢測圖譜
圖4為本發(fā)明E步驟所述吳茱萸堿的HPLC檢測圖譜
圖5為本發(fā)明E步驟所述吳茱萸次堿的HPLC檢測圖譜
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l
一種從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方
法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行
A.加熱提取選取粒度為20目的吳茱萸果實(shí)粗粉10kg，按l: 8的質(zhì)量比
加入95%的乙醇，在56。C下加熱3小時，經(jīng)過濾除渣，濾液減壓回收除去乙醇 后，得到水懸浮液；
'B.溶劑萃取取步驟A所得水懸浮液5L，先用10L石油醚萃取，水相再用 20L二氯甲烷萃取，各萃取3次。石油醚層回收石油醚后棄去，二氯甲烷萃取液 合并后55'C濃縮，得到黑色濃浸膏500g (密度為1.26)。
C. 色譜柱層析將B步驟所得的500g黑色濃浸膏甲醇溶解干法拌禪后進(jìn) 行常壓色譜柱層析。層析柱填料為硅膠，粒度為300 — 400目Z色譜柱規(guī)格為直 徑5cra;梯度洗脫，洗脫劑為石油醚一乙酸乙酯的混合溶劑，按體積比，由高到
低，依次按50: 1， 20: 1, 10: 1，5: 1禾B 1: 1，分段收集半成品。
D. 高效制備液相分離將C步驟分段收集的半成品合并后，加入甲醇至剛
好溶解，再經(jīng)高效制備液相分離得到含量分別達(dá)92%、 90%和95%的檸檬苦素、 吳茱萸堿和吳茱萸次堿餾分。
所述制備液相填料為十八垸基硅烷鍵合硅膠(C18)，柱規(guī)格為25cm*5cm， fe譜條件檢測波長210nm,流動相為乙腈一水(乙腈的體積百分比為45%)。
E.結(jié)晶將D步驟分離所得三種餾分，采用兩相溶劑結(jié)晶法進(jìn)一步純化分 別得到純度達(dá)99.0%以上的無色針狀結(jié)晶產(chǎn)品，即檸檬苦素10g、吳茱萸堿8g 和吳茱萸次堿5g，所用結(jié)晶溶劑選用石油醚一丙酮，其體積比為3: 1。
實(shí)施例2
一種從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方
法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行
A. 加熱提取選取粒度為30目的吳茱萸果實(shí)粗粉200kg，按l: 8的質(zhì)量
比加入95%的乙醇，在56。C下加熱5小時，經(jīng)過濾除渣，濾液減壓回收除去乙 醇后，得到水懸浮液；
B. 溶劑萃取取步驟A所得水懸浮液75L，先用150L石油醚萃取，水相再 用300L二氯甲烷萃取，各萃取3次。石油醚層回收石油醚后棄去，二氯甲烷萃 取液合并后55。C濃縮，得到黑色濃浸膏800g (密度為1. 26)。 '
C. 色譜柱層析將B步驟所得的800g黑色濃浸膏甲醇裙解干法拌樣后進(jìn) 行常壓色譜柱層析。層析柱填料為氧化鋁，粒度為300—400目，色譜柱規(guī)格為 直徑15cm;梯度洗脫，洗脫劑為石油醚一丙酮，洗脫劑比例分別為50: 1， 30:
1， 20: 1， 10: l和2: 1，分段收集半成品。
D. 高效制備液相分離將C步驟分段收集的半成品合并后，加入甲醇至剛
好溶解，再經(jīng)高效制備液相分離得到含量分別達(dá)90%、 89%和92%的檸檬苦素、 吳茱萸堿和吳茱萸次堿餾分。
所述制備液相填料為十八垸基硅烷鍵合硅膠(C18)，柱規(guī)格為25cm*5cm， 色譜條件檢測波長210nm，流動相為乙腈一水(乙腈的體積百分比為46%)。
E. 結(jié)晶將D步驟分離所得三種餾分，采用兩相溶劑結(jié)晶法進(jìn)一步純化分 別得到純度達(dá)99%以上的無色針狀結(jié)晶產(chǎn)品，即檸檬苦素200g、吳茱萸堿150g 和吳茱萸次堿100g，所用結(jié)晶溶劑選用石油醚一乙酸乙酯，其體積比為5: 1。
權(quán)利要求
1.一種從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行A. 加熱提取選取粒度為20—60目的吳茱萸果實(shí)粉，按質(zhì)量比加入8倍量的醇溶劑，于25—65℃加熱2—5小時，經(jīng)過濾除渣，濾液減壓回收除去醇溶劑后，得到水懸浮液；B. 溶劑萃取將步驟A所得水懸浮液，先用2倍體積比的石油醚萃取，水相再用氯仿或者二氯甲烷萃取，各萃取3—5次，每次用量按體積比，均為水懸浮液的4—5倍，石油醚層回收石油醚后棄去，合并氯仿或者二氯甲烷層萃取液，于45—65℃溫度下經(jīng)減壓濃縮得到密度為1.26的黑色濃浸膏；C. 色譜柱層析將B步驟所得的黑色濃浸膏甲醇溶解干法拌樣后進(jìn)行常壓色譜柱層析，其中，層析柱填料為中性氧化鋁或者硅膠，粒度為100—400目；色譜柱規(guī)格據(jù)分離量而定，直徑為5—50cm；梯度洗脫所選用的洗脫劑為石油醚—乙酸乙酯或者石油醚—丙酮的混合溶劑，按體積比由高到低，依次按501—11的洗脫劑比例，分段收集半成品；D. 高效制備液相分離將C步驟分段收集的半成品合并后，加入甲醇至剛好溶解，再經(jīng)高效制備液相分離得到檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿餾分；E. 結(jié)晶將D步驟分離所得三種餾分，采用兩相溶劑結(jié)晶法進(jìn)一步純化分別得到純度達(dá)99.0％以上的檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿無色針狀結(jié)晶產(chǎn)品，所用結(jié)晶溶劑為乙醇，或者石油醚—丙酮混合溶劑，亦或者或石油醚—乙酸乙酯混合溶劑。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟A所述醇溶劑選自體積百分比濃度為 95%的乙醇或100%的甲醇。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟A所述吳茱萸果實(shí)粉與醇溶劑的加熱溫 度為56°C。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度擰檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟D所述高效制備液相填料為十八垸基 硅烷鍵合硅膠，柱規(guī)格為25cffl*10cm或25cm*5cm，色譜條件檢測波長210nm，流動相為甲醇一水或者乙腈一水。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于所述流動相中甲醇的體積百分比為50% — 90%。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于所述流動相中乙腈的體積百分比35%—55 %。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從吳茱萸藥才才中同時分離高純度擰檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟E所述乙醇的體積百分比濃度為80% _95%。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度擰檬苦素、吳茱萸 堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟E所述石油醚一丙酮的題積比為5: 1 —2: 1。
9、根據(jù)權(quán)利要求1所述從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，其特征在于步驟E所述石油醚一乙酸乙酯的體積比為5: l一2: 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從吳茱萸藥材中同時分離高純度檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，它按如下工藝步驟進(jìn)行A.加熱提取乙醇或甲醇溫浸后除渣；B.溶劑萃取采用有機(jī)溶劑萃取提取濃縮液；C.色譜柱層析用氧化鋁或硅膠作為填料，石油醚-乙酸乙酯或者石油醚-丙酮梯度洗脫，分段收集半成品；D.高效制備液相分離；E.結(jié)晶采用兩相溶劑結(jié)晶法，將分段收集的半成品用乙醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯混合溶劑結(jié)晶，得到純度達(dá)99％以上的檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿無色針狀結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明分離速度快、溶劑消耗少，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，且得率高，可以一次性制備得到較大量的產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價值和學(xué)術(shù)價值。
文檔編號C07D493/00GK101367823SQ20081004616
公開日2009年2月18日 申請日期2008年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月25日
發(fā)明者柯 夏, 黎 張, 兵 楊, 董維臻 申請人:成都普思生物科技有限公司