專利名稱：用作組胺h1和h3拮抗劑的2-取代的4-芐基酞嗪酮衍生物的制作方法
專利說明用作組胺H1和H3拮抗劑的2-取代的4-芐基酞嗪酮衍生物 本發(fā)明涉及化合物、其制備方法、包含其的藥物組合物及其在治療各種疾病，尤其是呼吸道炎性和/或過敏性疾病中的用途。
過敏性鼻炎、肺炎和肺充血為通常與例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、季節(jié)性過敏性鼻炎和常年性過敏性鼻炎其他病癥相關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥。一般而言，這些病癥至少部分由與從各種細(xì)胞，尤其是肥大細(xì)胞，釋放組胺相關(guān)的炎癥介導(dǎo)。
過敏性鼻炎，也稱作“枯草熱”，影響全球大部分人口。存在這兩種過敏性鼻炎；季節(jié)性和常年性。季節(jié)性過敏性鼻炎的臨床癥狀通常包括鼻癢和疼痛、打噴嚏以及通常伴隨著鼻充血的流水樣鼻涕。常年性過敏性鼻炎的臨床癥狀類似，只是鼻塞可能更明顯。兩種過敏性鼻炎都還可導(dǎo)致其他癥狀，例如咽喉癢和/或眼睛癢、淚溢以及眼睛周圍浮腫。過敏性鼻炎癥狀的強(qiáng)弱可在令人討厭的程度和衰弱之間變動。
過敏性鼻炎和其他過敏性病癥與從各種細(xì)胞，但尤其是肥大細(xì)胞，中釋放組胺相關(guān)。組胺的生理效應(yīng)通常由名為H1、H2和H3的三種受體亞型所介導(dǎo)。H1受體廣泛分布于CNS和外周，并與失眠和急性炎癥相關(guān)。H2受體介導(dǎo)響應(yīng)組胺的胃酸分泌。H3受體存在于CNS和外周神經(jīng)末梢，并介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的抑制[Hill等，Pharmacol.Rev.，49253-278，(1997)]。近來，已鑒別出名為H4受體的組胺受體家族的第四名成員[Hough，Mol.Pharmacol.，59415-419，(2001)]。同時H4受體的分布似乎被限定在免疫和炎癥系統(tǒng)的細(xì)胞中，該受體的生理作用仍有待于闡明。
血管和神經(jīng)末梢中H1受體的活化引起過敏性鼻炎的許多癥狀，其包括癢、打噴嚏以及產(chǎn)生水樣鼻涕。為選擇性H1受體拮抗劑的口服抗組胺化合物(例如氯苯那敏、西替利嗪、地氯雷他定和非索非那定)和鼻內(nèi)抗組胺藥(例如氮

斯丁和左卡巴斯汀)能有效治療與過敏性鼻炎相關(guān)的癢、打噴嚏和流鼻涕，但對鼻充血癥狀無效[Aaronson，Ann.Allergy，67541-547，(1991)]。因此，同時給予H1受體拮抗劑和擬交感神經(jīng)藥例如偽麻黃堿或羥甲唑啉以治療過敏性鼻炎的鼻充血癥狀。認(rèn)為這些藥物通過激活α-腎上腺素能受體和提高鼻粘膜內(nèi)血管的血管緊張度而產(chǎn)生解充血作用。利用擬交感神經(jīng)藥治療鼻充血常常受到CNS刺激性及其對血壓和心率的影響的限制。因此降低鼻充血而不對CNS和心血管系統(tǒng)造成影響的治療可提供現(xiàn)有療法所沒有的優(yōu)勢。
組胺H3受體在CNS和外周神經(jīng)末梢廣泛表達(dá)，并介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的抑制。在離體人體隱靜脈中體外電刺激交感神經(jīng)引起去甲腎上腺素釋放提高和平滑肌收縮，這可通過組胺H3受體激動劑而得到抑制[Molderings等，Naunyn-Schmiedeberg’s Arch.Pharmacol.，34646-50，(1992)；Valentine等，Eur.J.Pharmacol.，36673-78，(1999)]。H3受體激動劑還抑制交感神經(jīng)在豬鼻粘膜中對血管緊張度的活化作用[Varty & Hey.，Eur.J.Pharmacol.，452339-345，(2002)]。在體內(nèi)，H3受體激動劑抑制交感神經(jīng)激活引起的鼻氣道阻力的降低[Hey等，Arzneim-Forsch Drug Res.，48881-888，(1998)]。人體鼻粘膜內(nèi)組胺H3受體的激活抑制交感血管收縮[Varty等，Eur.J.Pharmacol.，48483-89，(2004)]。此外，已表明H3受體拮抗劑與組胺H1受體拮抗劑結(jié)合能逆轉(zhuǎn)肥大細(xì)胞活化對鼻氣道阻力和鼻腔體積(鼻充血的指標(biāo))的影響[Mcleod等，Am.J.Rhinol.，13391-399，(1999)]，在正常人體受試體進(jìn)行的組胺鼻測試研究提供了H3受體對組胺誘導(dǎo)的鼻塞的作用的進(jìn)一步證據(jù)[Taylor-Clark等，Br.J.Pharmacol.，144，867-874，(2005)]，雖然這一方面H3機(jī)理是新的和不可預(yù)見的，并可能最終證實為臨床沉默。
WO2004/035556公開了作為組胺H3或組胺H1/H3雙拮抗劑或反相激動劑的取代的哌嗪、(1，4)氮雜

和2，5-二氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷。
已發(fā)現(xiàn)為雙組胺H1和H3受體拮抗劑的新型化合物。“雙”組胺H1和H3受體拮抗劑指化合物對兩種受體亞型具有活性。例如，對H1受體的活性可為對H3受體的活性的約100倍以內(nèi)，例如在約10倍或更小以內(nèi)。
因此，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其鹽
其中 A代表N或CH； R1和R2各自獨立代表鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基或三氟甲基； y和z各自獨立代表0、1或2； R3代表-(CH2)aNR4R5基團(tuán)或式(i)基團(tuán)
其中 a代表1、2或3； b代表0或1； c代表0、1或2，d代表0、1、2或3，使c和d不同時為0； R4代表氫或C1-6烷基； R5和R6各自獨立代表選自式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)(a)
其中，對式(a)而言 e代表1-6； e′代表2-4； f代表0、1或2，g代表0、1、2或3，使f和g不同時為0； h代表0、1或2； R7代表C1-3烷基； 其中，對式(b)而言 i代表1-6； X代表化學(xué)鍵、O或-N(R10)C(O)-，其中R10代表氫或C1-6烷基； j和k各自代表1或各自代表2； R8代表氫、C3-6環(huán)烷基或C1-6烷基； 其中，對式(c)而言 l代表1-6； l′代表0-3； m代表0、1或2，n代表0、1、2或3，使m和n不同時為0，且使1’加n必須為1、2或3； R9代表氫、C3-6環(huán)烷基或C1-6烷基。
式(I)化合物可用于治療與從細(xì)胞例如肥大細(xì)胞釋放組胺有關(guān)的各種疾病，尤其是炎性和/或過敏性疾病，例如呼吸道炎性和/或過敏性疾病，例如過敏性鼻炎。此外，式(I)化合物可表現(xiàn)出提高的效果，因為其可具有以下性質(zhì)中的一種或多種 (i)H3拮抗劑活性，pKi大于約7，例如大于約8； (ii)H1受體拮抗劑活性，pKi大于7，例如大于約8； (iii)黏膜纖毛清除率更小/作用時間延長； (iv)低CNS浸透。
具有如此效果的化合物適于鼻內(nèi)輸送，和/或能每天給藥一次，和/或相對于其他已知療法還可能具有改善的副作用。
在一個實施方案中，提供了式(I)化合物，其中A代表CH，即提供了下式(I)化合物
其中取代基R1、R2、R3、y和z如上所定義。
在另一個實施方案中，提供了式(I)化合物，其中A代表N。
在另一個實施方案中，提供了式(I)化合物，其中 A代表CH，R1和R2各自獨立代表鹵素，例如氟或氯、C1-3烷基(例如甲基)、C1-3烷氧基(例如甲氧基)、羥基或三氟甲基； y和z各自獨立代表0、1或2，例如0或1； R3代表-(CH2)aNR4R5基團(tuán)或式(i)基團(tuán)
其中 a代表1、2或3，例如2； b代表0或1，例如0； c代表0、1或2，d代表0、1、2或3，使c和d不同時為0，例如c和d均獨立代表1或2； R4代表氫或C1-3烷基，例如甲基； R5和R6各自獨立代表選自式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)
其中，對式(a)而言 e代表1-6，例如1-5，例如3或4； e′代表2-4，例如3； f和g各自獨立代表1或2； h代表0或1，例如0； R7代表C1-3烷基，例如甲基或異丙基； 其中，對式(b)而言 i代表1-6，例如1-3，例如3； X代表化學(xué)鍵、O或-N(R10)C(O)-，其中R10代表氫或C1-3烷基，例如甲基，例如氫； j和k各自代表1或各自代表2，例如各自代表2； R8代表氫、C3-5環(huán)烷基(例如環(huán)丁基)或C1-3烷基(例如異丙基)； 其中，對式(c)而言 l代表1-5，例如2或4 l′代表0-2，例如0； m和n各自獨立代表1或2，使m和n不同時為0，例如分別為1和2，且使1’加n必須為1、2或3； R9代表氫、C3-5環(huán)烷基(例如環(huán)丁基)或C1-3烷基(例如異丙基)。
或者，在該其他實施方案中，A可代表N。
在另一個實施方案中，R3代表式(i)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，A代表CH，R3代表式(i)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，R3代表式(i)基團(tuán)，R6代表式(a)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，A代表CH，R3代表式(i)基團(tuán)，R6代表式(a)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，R3代表基團(tuán)-(CH2)aNR4R5，R5代表選自式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)，尤其是式(b)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，A代表CH，R3代表基團(tuán)-(CH2)aNR4R5、R5代表選自式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)，尤其是式(b)基團(tuán)。
在另一個實施方案中，y代表0。
在另一個實施方案中，A代表CH，y代表0。
在另一個實施方案中，z代表1。
在另一個實施方案中，A代表CH，z代表1。
在另一個實施方案中，z代表1，R2在4-位即對位取代。
在另一個實施方案中，A代表CH，z代表1，R2在4-位即對置取代。
在另一個實施方案中，R2代表氯、氟、C1-3烷氧基(例如甲氧基)或羥基。
在另一個實施方案中，A代表CH，R2代表氯、氟、C1-3烷氧基(例如甲氧基)或羥基。
在另一個實施方案中，R5和R6代表式(a)或(c)基團(tuán)，其中在苯環(huán)上的取代方式為對位。
在另一個實施方案中，A代表CH，R5和R6代表式(a)或(c)基團(tuán)，其中在苯環(huán)上的取代方式為對位。
在另一個實施方案中，R5和R6代表式(a)基團(tuán)，其中f和g均代表2，h代表0。
在另一個實施方案中，R5和R6代表式(b)基團(tuán)，其中R8代表C3-5環(huán)烷基，尤其是環(huán)丁基。
在另一個實施方案中，R5和R6代表式(c)基團(tuán)，其中R9代表C3-5環(huán)烷基，尤其是環(huán)丁基。
在另一個實施方案中，R5和R6代表式(b)基團(tuán)，其中j和k各自代表2。
在另一個實施方案中， b代表0或1； c代表0、1或2，d代表0、1、2或3，使c和d不同時為0，條件是b和d不同時為0； i代表1-6；和 X代表化學(xué)鍵、O或-N(R10)C(O)-，其中R10代表氫或C1-6烷基，條件是當(dāng)X代表O時，i代表2-6。
當(dāng)A代表CH，R5和R6的代表性實例包括 4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基， 2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基， 4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基， 5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊基， (4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)甲基， 2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基， 3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙基， 3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基， (3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)甲基， N-(2-乙基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-羧酰胺， N-(3-丙基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-羧酰胺， N-(4-丁基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-羧酰胺， 2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基或 4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}丁基。
在另一個實施方案中，提供了如上所定義的式(I)化合物，條件是所述化合物不是4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其鹽或其單獨的異構(gòu)體或其混合物。
代表性的式(I)化合物包括實施例1-24的化合物或其鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(包括其R和S異構(gòu)體及其混合物)及其鹽，尤其是其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮及其鹽，尤其是其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2S)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮及其鹽，尤其是其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮及其鹽，尤其是其藥學(xué)可接受的鹽。
應(yīng)當(dāng)理解的是本發(fā)明包括本文所述實施方案、基團(tuán)、代表性實例和取代基的所有可能組合。
C1-6烷基，無論是單獨的或作為另一基團(tuán)的一部分，可為直鏈或支化的，C1-6烷氧基應(yīng)作類似解釋。代表性的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、新戊基和正己基。具體的烷基和烷氧基基團(tuán)為C1-3烷基和C1-3烷氧基。
C3-6環(huán)烷基指具有3-6個碳原子的非芳族環(huán)烴環(huán)。代表性的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
除非另有說明，否則術(shù)語“鹵素”在本文中用于描述氟、氯、溴或碘。
應(yīng)當(dāng)理解的是本文提及式(I)化合物時包括式(I)化合物的游離堿或其鹽，例如其藥學(xué)可接受的鹽，或溶劑化物。
式(I)化合物可為藥學(xué)可接受的鹽的形式和/或可以藥學(xué)可接受的鹽給藥。藥學(xué)可接受的鹽包括酸和堿加成鹽。合適的鹽的綜述見Berge等，J.Pharm.Sci.，661-19，(1977)。
一般而言，藥學(xué)可接受的鹽可通過利用所需的合適的酸輕易制備。鹽可從溶液中沉淀并通過過濾收集，或可通過蒸發(fā)溶劑回收。
藥學(xué)可接受的酸加成鹽可通過以下方法形成式(I)化合物與合適的無機(jī)或有機(jī)酸(例如氫溴酸、鹽酸、甲酸、硫酸、硝酸、磷酸、丁二酸、馬來酸、乙酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、萘二磺酸、聯(lián)苯磺酸或萘磺酸)任選在合適的溶劑例如有機(jī)溶劑中反應(yīng)得到鹽，所得鹽一般通過例如結(jié)晶和過濾分離。因此，式(I)化合物的藥學(xué)可接受的酸加成鹽可為例如氫溴酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、丁二酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘二磺酸鹽、聯(lián)苯二磺酸鹽或萘磺酸鹽。
其他非藥學(xué)可接受的鹽，例如草酸鹽或三氟乙酸鹽可用于例如式(I)化合物的分離中，這些鹽包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。式(I)化合物鹽的所有可能化學(xué)計量和非化學(xué)計量形式包括在其范圍內(nèi)。
具體的鹽包括萘二磺酸鹽，例如2，6-或1，5-萘二磺酸鹽，例如1，5-萘二磺酸鹽。
在一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮的萘二磺酸鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮的1，5-萘二磺酸鹽。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮的1，5-萘二磺酸鹽一水合物鹽。
應(yīng)當(dāng)理解的是許多有機(jī)化合物可與有機(jī)化合物在其中反應(yīng)或有機(jī)化合物從其中沉淀或結(jié)晶的溶劑形成絡(luò)合物。這些絡(luò)合物稱作“溶劑化物”。例如與水的絡(luò)合物稱作“水合物”。高沸點溶劑和/或極易形成氫鍵的溶劑，例如水、二甲苯、N-甲基吡咯烷酮或甲醇，可用于形成溶劑化物。用于鑒別溶劑化物的方法包括但不限于NMR和微量分析。式(I)化合物的溶劑化物在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(I)化合物可為晶體或無定形形式。此外，式(I)化合物的某些晶體形式可以多晶型存在，其包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。式(I)化合物的熱力學(xué)最穩(wěn)定多晶型物尤其引人注目。
式(I)化合物的多晶型物可利用許多傳統(tǒng)分析方法表征和區(qū)別，包括但不限于X-射線粉末衍射(XRPD)圖、紅外(IR)譜圖、拉曼譜圖、差示掃描量熱法(DSC)、熱重量分析(TGA)和固狀核磁共振(NMR)。
應(yīng)當(dāng)理解的是式(I)化合物可具有一個或多個不對稱的碳原子從而使可形成光學(xué)異構(gòu)體，例如對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體。本發(fā)明包括式(I)化合物的所有光學(xué)異構(gòu)體，分離的單獨異構(gòu)體以致基本不含其他異構(gòu)體(即純的)或其混合物(例如消旋體和外消旋混合物)。可分離分離的單獨異構(gòu)體以致基本不含其他異構(gòu)體(即純的)，從而使存在小于約10％，尤其是小于約1％，例如小于約0.1％的其他異構(gòu)體。
此外，應(yīng)當(dāng)理解的是R和S對映異構(gòu)體可通過以下方法從消旋體中分離傳統(tǒng)拆分法，例如包括手性固定相的制備HPLC，利用游離堿與手性酸的鹽分步結(jié)晶拆分，利用手性助劑化學(xué)轉(zhuǎn)換為非對映異構(gòu)體，接著色譜分離所述異構(gòu)體，然后去除手性助劑并再生純的對映體，或不對稱全合成。
應(yīng)當(dāng)從上文理解的是式(I)化合物及其鹽的所有溶劑化物、水合物、絡(luò)合物、異構(gòu)體和多晶型物均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
還提供了制備式(I)化合物或其鹽的方法。
依據(jù)第一種方法A，式(I)化合物可通過式(IIa)或(IIb)化合物
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d和R4如上文對式(I)中的定義， 與反應(yīng)式(IIIa)、式(IIIb)或式(IIIc)化合物制備

其中e、e′、f、g、h、R7、i、X、j、k、R8、l、l′、m、n和R9如上文對式(I)中的定義，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘、活化的羥基，例如甲磺酸基或甲苯磺酸基，或L代表醛，這樣L-(CH2)e、i或1為HC(O)-(CH2)(e、i或1)-1。
烷基化反應(yīng)通常可在以下條件進(jìn)行在合適的堿存在下，例如三乙胺(NEt3)、二異丙基乙基胺(DIPEA)或碳酸氫鈉(NaHCO3)，在合適的溶劑中，例如乙腈(MeCN)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，任選合適的高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如碘化鉀(KI)或碘化鈉(NaI)。
當(dāng)L代表醛時，還原胺化反應(yīng)可在以下條件進(jìn)行利用合適的還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)3)，任選在合適的酸催化劑存在下，例如乙酸，在溶劑中，例如二氯甲烷(DCM)或四氫呋喃(THF)。
在方法A的一個實施方案中，A代表CH。
式(IIa)化合物可依據(jù)本文所述方法制備(見

圖1和2)。
德國專利申請DE 3634942A1公開了式(IIb)化合物。或者，式(IIb)化合物可依據(jù)本文所述方法制備(見圖2)。
流程1式(IIa)化合物的合成-其中R4為H，A代表CH
其中A代表CH，R1、y、R2、z和a如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)合適的堿，例如氫化鈉(NaH)，溶劑，例如DMF；ii)肼(NH2NH2)，溶劑，例如乙醇(EtOH)，高溫，例如回流。
就其中R4為C1-6烷基的式(IIa)化合物而言，可任選進(jìn)行烷基化反應(yīng)。一般而言，烷基化反應(yīng)在以下條件進(jìn)行利用烷基化劑R4-L(其中R4如上所定義，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘或活化的羥基，例如甲基磺酸基或甲苯磺酸基)，與合適的堿，例如碳酸鉀(K2CO3)，在溶劑中，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI或NaI。
美國專利US 4,841,047、美國專利1,377,231和G Scheffer等在Arch.Pharm.，321205-208(1988)中公開了其中A代表CH的式(XI)化合物的合成(見化合物4)。或者，式(XI)化合物可依據(jù)本文所述方法制備(見流程2)。
式(XII)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如N-(溴甲基)鄰苯二甲酰亞胺、N-(2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞胺和N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺。
流程2其中A代表CH的式(IIb)化合物的合成
其中A代表CH，R1、y、R2、z、b、c和d如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)高溫，例如約180℃-約250℃，合適的堿，例如乙酸鈉(NaOAc)，合適的溶劑，例如N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)；ii)NH2NH2，或硫酸肼和氫氧化鈉(NaOH)，在合適的溶劑中，例如乙醇；iii)合適的溶劑，例如四氫呋喃(THF)，合適的偶氮二甲酸酯例如偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)或其他試劑例如溴化四丁基銨(TBAD)，合適的膦，例如三苯基膦(PPh3)，任選在低溫，例如在約-15℃；iv)利用酸去保護(hù)，例如氯化氫(HCl)或三氟乙酸(TFA)，溶劑，例如二氧六環(huán)或DCM。
在上述合成的改進(jìn)中，步驟iii和iv可連續(xù)進(jìn)行，而不分離Boc-保護(hù)的中間體。
在上述反應(yīng)流程的另一種改進(jìn)中，可活化式(XV)化合物中的醇基團(tuán)以提高反應(yīng)性，進(jìn)而得到例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯等基團(tuán)。一般而言，式(XV)的活化化合物與式(XI)化合物的偶聯(lián)反應(yīng)在以下條件進(jìn)行利用合適的堿，例如碳酸銫或碳酸鉀，任選在高溫，例如約100℃，在合適的溶劑中，例如甲基異丁基酮(MIBK)。
其中A代表CH的式(XIII)化合物購自例如Sigma-Aldrich、Apollo、Fluorochem、Apin、Davos或Merck，例如鄰苯二甲酸酐、3-氯鄰苯二酸酐、4-氯鄰苯二酸酐、4-溴鄰苯二酸酐、5-溴-異苯并呋喃-1，3-二酮、3-氟鄰苯二酸酐、4-氟鄰苯二酸酐、3，6-二氯鄰苯二酸酐、4，5-二氯鄰苯二酸酐、4，5-二氟鄰苯二酸酐、3，6-二氟鄰苯二酸酐、3-羥基鄰苯二酸酐和4-甲基鄰苯二酸酐，和/或可利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法制備，例如可由購自例如Wako的3，6-二乙酰氧基鄰苯二酸酐制備的3，6-二羥基鄰苯二酸酐。C1-6烷基取代的鄰苯二甲酸酐可利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法由市售的溴化物化合物制備。此類反應(yīng)通?？稍谝韵聴l件進(jìn)行利用合適的三烷基硼烷(例如購自例如Sigma-Aldrich的三乙基硼烷和三丁基硼烷)，與合適的鈀催化劑，例如二氯[1，1’-二(二苯基膦)二茂鐵]合鈀，在合適的高溫，例如70-100℃，與合適的堿，例如K2CO3，在合適的溶劑中，例如DMF。
式(XIV)化合物購自例如Sigma-Aldrich、Wako、Fluka或Apollo，例如苯乙酸、3-碘苯乙酸、2-溴苯乙酸、4-溴苯乙酸、3-氯苯乙酸、4-氯苯乙酸、3-氟苯乙酸、4-甲基苯乙酸、4-異丙基苯乙酸、4-叔丁基苯乙酸、4-甲氧基苯乙酸、4-乙氧基苯乙酸、4-正丁氧基苯乙酸、4-羥基苯乙酸、3-(三氟甲基)苯乙酸、4-(三氟甲基)苯乙酸、4-(溴甲基)苯乙酸、2，4-二氯苯乙酸、2-氟-3-(三氟甲基)苯乙酸、4-羥基-3-甲氧基苯乙酸和2，4-二甲氧基苯乙酸。
式(XV)化合物購自例如Sigma-Aldrich、Magical Scientific、Fluka、SynChem Inc.或Apollo，例如(R)-(-)-N-Boc-3-羥基吡咯烷醇、(S)-(+)-N-Boc-3-羥基吡咯烷醇、(R)-1-Boc-2-吡咯烷甲醇、(S)-1-Boc-2-吡咯烷甲醇、3-羥基-1-哌啶甲酸叔丁酯、1-Boc-4-羥基哌啶、N-Boc-4-哌啶甲醇和4-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯。Israeli J.Chem.，3747-67(1997)公開了3-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯。
其中醇被活化的式(XV)化合物可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法制備，例如通過相應(yīng)市售的醇的甲磺?；蚣妆交酋；?。此外，其可通過本文所述方法制備(見上文和實施例24C，步驟3A)?；罨磻?yīng)通常可在以下條件進(jìn)行利用合適的活化劑，例如甲磺酰氯(MsCl)，與合適的堿，例如三乙胺(NEt3)，在合適的溶劑中，例如叔丁基甲基醚(TBME)，一般在低溫，例如0-20℃。
流程3式(IIIa)化合物的合成-其中L為活化的羥基
其中e、e′、f、g、h和R7如上文對式(I)中的定義，R11代表C1-6-烷基。
試劑和條件i)合適的堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI；ii)R11OH(其中R11代表C1-6烷基，例如甲醇[MeOH])，酸，例如HCl；iii)溶劑，例如THF，合適的催化劑，例如DIAD、PPh3；iv)合適的還原劑，例如氫化鋰鋁(LiAlH4)，溶劑，例如THF和/或乙醚；v)合適的活化劑例如甲苯磺酰氯(TsCl)或MsCl，合適的堿，例如DIPEA，在合適的溶劑中，例如DCM。
式(X)化合物購自例如Sigma-Aldrich或Alfa Aesar，例如氮雜環(huán)辛烷、六氫-1H-氮雜

、哌啶、2-甲基哌啶、3-甲基哌啶、4-甲基哌啶、2，6-二甲基哌啶、3，3-二甲基哌啶、吡咯烷、2-甲基吡咯烷、2，5-二甲基吡咯烷和氮雜環(huán)丁烷。
式(XVI)化合物購自Sigma-Aldrich，例如3-羥基芐醇、4-羥基芐醇、4-羥基苯乙醇和3-(4-羥基苯基)-1-丙醇。
式(XVII)化合物購自Sigma-Aldrich，例如1-溴-2-氯乙烷、1-溴-3-氯丙烷和1-溴-4-氯丁烷。
式(XVIII)化合物購自Sigma-Aldrich，例如3-羥基苯甲酸、4-羥基苯甲酸、2-羥基苯乙酸、4-羥基苯乙酸、3-(4-羥基苯基)丙酸和4-(2-羥基苯基)-丁酸。
其他式(XVIII)化合物可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法制備，例如通過市售的相應(yīng)甲氧基化合物的脫甲基化制備。此類反應(yīng)可例如通過利用溴化氫的乙酸溶液(約48％)進(jìn)行。4-(4-甲氧基苯基)丁酸購自例如Sigma-Aldrich。
式(XIX)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如2-溴乙醇、3-溴-1-丙醇和4-溴-1-丁醇。
式(XX)化合物購自Apollo或Maybridge，例如3-(4-羥基苯基)丙酸乙酯?；蛘?，式(XX)化合物可依據(jù)本文所述方法制備(見流程3，上文)。
流程4式(IIIa)化合物的合成-其中e為3-6，L為活化的羥基
其中e為3-6，e′、f、g、h和R7如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI或NaI；ii)碘化銅(CuI)，合適的催化劑，例如氯化二[三苯基膦]合鈀(II)(Pd(PPh3)2Cl2)，堿，例如NEt3，溶劑，例如THF；iii)氫氣，合適的催化劑，例如載在碳上的鈀(Pd/C)，溶劑，例如EtOH；iv)合適的活化劑，例如TsCl或MsCl，堿，例如NEt3或吡啶，任選在合適的溶劑中，例如DCM。
式(XXI)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如2-碘苯酚、3-碘苯酚和4-碘苯酚。
式(XXII)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如炔丙醇、3-丁炔-1-醇、4-戊炔-1-醇和5-己炔-1-醇。
流程5式(IIIa)化合物的合成-其中L為醛，e為4
其中e代表4，e′、f、g、h和R7如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI或NaI；ii)3-丁烯醛縮二乙醇，合適的硼烷，例如9-硼雜雙環(huán)壬烷(9-BBN)，合適的催化劑，例如二氯[1，1’-二(二苯基膦)二茂鐵]合鈀，堿，例如K2CO3，溶劑，例如水/DMF，一般在高溫，例如約70℃；iii)H2，催化劑，例如Pd/C，溶劑，例如EtOH；iv)合適的酸，例如乙酸(AcOH)；v)MeOH，SCX-2層析柱。
式(XXIII)化合物，例如2-溴苯酚、3-溴苯酚和4-溴苯酚，購自例如Sigma-Aldrich。
流程6式(IIIb)化合物的合成-其中X為O，L為活化的羥基或鹵化物
其中i、j、k和R8如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI；ii)合適的活化劑，例如TsCl或MsCl，堿，例如NEt3，溶劑，例如DCM。
國際專利申請WO 2004/056369(見實施例3和4)和WO 2005/123723(見描述17)公開了式(XXIV)化合物，并為Bioorg.Med.Chem.Lett.，11685-688(2001)所描述。
式(XXXVI)化合物購自例如Sigma-Aldrich或TCI，例如2-溴乙醇、3-溴-1-丙醇、4-溴-1-丁醇、5-溴-1-戊醇和6-溴-1-己醇。
式(XXXVII)化合物購自Sigma-Aldrich，例如溴氯甲烷、1-溴-2-氯乙烷、1-溴-3-氯丙烷、1-溴-4-氯丁烷、1-溴-5-氯戊烷和1-溴-6-氯己烷。
流程7式(IIIc)化合物的合成-其中L為活化的羥基
其中l(wèi)、l′、m、n和R9如上文對式(I)中的定義，P代表基于硅的保護(hù)基。
試劑和條件i)溶劑，例如THF，合適的偶氮二甲酸酯，例如DIAD或偶氮二甲酸二叔丁酯(DTBAD)，合適的膦，例如PPh3；ii)TFA，溶劑，例如DCM；iii)合適的還原劑，例如NaBH(OAc)3，溶劑，例如MeOH，酸催化劑，例如AcOH；iv)2N氫氧化鈉；v)活化劑，例如TsCl或MsCl，合適的堿，例如NEt3，溶劑，例如DCM。
式(XXV)化合物可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法、通過保護(hù)相應(yīng)的市售的醇(例如購自例如Sigma-Aldrich的4-(2-羥乙基)苯酚)或通過利用本文所述方法(見例如中間體52)制備。
式(XXVI)化合物購自例如Sigma-Aldrich、Magical Scientific、Fluka、SynChem Inc.或Apollo，例如(R)-(-)-N-Boc-3-羥基吡咯烷醇、(S)-(+)-N-Boc-3-羥基吡咯烷醇、(R)-1-Boc-2-吡咯烷甲醇、(S)-1-Boc-2-吡咯烷甲醇、3-羥基-1-哌啶甲酸叔丁酯、1-Boc-4-羥基哌啶、N-Boc-4-哌啶甲醇和4-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯。Israeli J.Chem.，3747-67(1997)公開了3-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯。
式(XXVI)化合物也可制備本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法通過，例如Boc-保護(hù)市售的胺，例如購自例如Sigma-Aldrich或AlbernateCorporation的3-(羥甲基)吡咯烷、2-(2-羥乙基)哌啶和4(2-羥乙基)哌啶。
式(XXVII)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如環(huán)丁酮、環(huán)戊酮、環(huán)己酮、甲醛、乙醛、丙醛、2-丙酮、2-丁酮、丁醛、戊醛和己醛。
流程8式(IIIc)化合物的合成-其中1為3-6，L為活化的羥基
其中l(wèi)為3-6，l′、m、n和R9如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)合適的堿，例如氫化鈉，合適的溶劑，例如N-甲基-2-吡咯烷酮，高溫，例如約80℃；ii)合適的酸，例如TFA，溶劑，例如DCM；iii)合適的還原劑，例如NaBH(OAc)3，溶劑，例如DCM，任選的酸催化劑，例如AcOH；iv)CuI，合適的催化劑，例如Pd(PPh3)2Cl2，堿，例如NEt3，溶劑，例如THF；v)H2，催化劑，例如Pd/C，溶劑，例如EtOH；vi)合適的活化劑，例如TsCl或MsCl，堿，例如NEt3，溶劑，例如DCM。
式(XXXVIII)化合物，例如1-氟-2-碘苯、1-氟-3-碘苯和1-氟-4-碘苯、購自例如Sigma-Aldrich。
式(XXVIII)化合物，例如炔丙醇、3-丁炔-1-醇、4-戊炔-1-醇和5-己炔-1-醇，購自例如Sigma-Aldrich。
依據(jù)第二種方法B，其中R3為式(i)基團(tuán)和其中A代表CH的式(I)化合物可通過式(IV)化合物
其中A代表CH，R1和y如上文對式(I)中的定義，R3為式(i)基團(tuán)，L代表離去基團(tuán)，例如氯或溴，
其中R2和z如上文對式(I)中的定義，M-配體代表以下基團(tuán)中的一種Zn-X(其中X為氯或溴)、B(OH)2、SnR3(其中R代表C1-6烷基，例如丁基)或SiR3(其中R代表C1-6烷氧基，例如甲氧基或乙氧基)。
當(dāng)M-配體為Zn-X時，Negishi偶聯(lián)反應(yīng)可在以下條件進(jìn)行在合適的催化劑存在下，例如四(三苯基膦)合鈀(O)(Pd(PPh3)4)，在合適的溶劑中，例如THF，在合適的溫度。
當(dāng)M-配體為B(OH)2時，Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)可在以下條件進(jìn)行在合適的堿存在下，例如K2CO3，在合適的催化劑存在下，例如Pd(PPh3)4或氯化(二苯基膦基二茂鐵)合鈀(II)(Pd(dppf)Cl2)，在合適的溶劑中，例如THF或苯，一般在高溫，例如約60℃。
當(dāng)M-配體為時SnR3，Stille偶聯(lián)反應(yīng)通常在以下條件進(jìn)行利用合適的催化劑，例如Pd(PPh3)4，在合適的溶劑中，例如MeCN或DMF，任選與活化劑，例如氯化鋰或CuI，任選在高溫，例如約60℃。
當(dāng)M-配體為SiR3時，Hiyama偶聯(lián)反應(yīng)可在以下條件進(jìn)行利用合適的堿，例如氫氧化鈉，在合適的溶劑中，例如THF，合適的氟離子源，例如氟化叔丁基銨，與合適的催化劑，例如乙酸鈀(II)。
式(IV)化合物可依據(jù)下流程9制備。
式(V)化合物，例如3-氯芐基氯化鋅、4-氯芐基氯化鋅、4-溴芐基氯化鋅、4-氟芐基氯化鋅、3，4-二氟芐基氯化鋅、4-甲氧基芐基氯化鋅、4-乙氧基芐基氯化鋅、3-甲基芐基氯化鋅、4-甲基芐基氯化鋅和3-(三氟甲基)芐基氯化鋅，購自Sigma-Aldrich或Reike Metals。
式(V)化合物也可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法制備，例如相應(yīng)的市售的芐基氯(例如購自Sigma-Aldrich的2-甲氧基芐基氯、4-異丙基芐基氯和4-叔丁基芐基氯)與鋅粉在標(biāo)準(zhǔn)條件下反應(yīng)。
流程9式(IV)化合物的合成，其中R3代表式(i)基團(tuán)，A代表CH
其中A代表CH，R1、y、b、c和d如上文就式(I)所述，L代表離去基團(tuán)，例如氯或溴。
試劑和條件i)合適的溶劑，例如THF，合適的偶氮二甲酸酯，例如DIAD，合適的膦，例如PPh3；ii)酸，例如HCl，溶劑，例如二氧六環(huán)；iii)堿，例如NEt3，溶劑，例如DMF，在合適的溫度，例如約80℃。
式(XXIX)化合物購自Maybridge或Apollo，例如4-氯-1，2-二氫酞嗪-1-酮，和/或可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法由市售的式(XIII)化合物(見流程2)制備，例如Acta Chim.Acad.Sci.Hungaricae，88129-136(1976)所述方法。
依據(jù)第三種方法C，式(I)化合物，其中R5或R6代表式(b)基團(tuán)，其中X代表-N(R10)C(O)-，可通過式(VI)化合物
其中j、k和R8如上文對式(I)中的定義， 與式(VIIa)或(VIIb)化合物反應(yīng)制備
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d、i、R4和R10如上文對式(I)中的定義。
酰胺偶聯(lián)反應(yīng)通常可在以下條件進(jìn)行在合適的活化劑存在下，例如O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)，在合適的堿存在下，例如NEt3，在合適的溶劑中，例如DMF。
在方法C的一個實施方案中，A代表CH。
式(VI)化合物可依據(jù)流程10制備 流程10式(VI)化合物的合成
其中j、k和R8如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)三甲基氯硅烷和EtOH，接著氫氧化鈉(NaOH)和水；ii)合適的還原劑，例如NaBH(OAc)3，溶劑，例如DCM，任選的酸催化劑，例如AcOH；iii)NaOH，水，EtOH。
歐洲專利申請EP 0528369A2公開了式(XXX)化合物(見實施例17)。5-氰基異二氫吲哚-2-甲酸叔丁酯購自例如Milestone Pharm.Tech.。
式(XXXI)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如環(huán)丁酮、環(huán)戊酮、環(huán)己酮、甲醛、乙醛、丙醛、2-丙酮、2-丁酮、丁醛、戊醛和己醛。
式(VIIa)和(VIIb)化合物可依據(jù)以下反應(yīng)流程制備 流程11式(VIIa)和(VIIb)化合物的合成-其中R10為H，其中A代表CH
其中R10為H，A代表CH，i、R1、R2、y、z、a、b、c、d和R4如上文對式(I)中的定義，AG為活化基團(tuán)，例如甲磺酸基或甲苯磺酸基。
試劑和條件i)合適的活化劑，例如TsCl或MsCl，堿，例如NEt3，溶劑，例如DCM；ii)合適的堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI；iii)合適的酸，例如HCl，溶劑，例如二氧六環(huán)。
對其中R10代表C1-6烷基的式(VIIa)和(VIIb)化合物而言，可進(jìn)行任選的烷基化反應(yīng)。一般而言，烷基化反應(yīng)在以下條件進(jìn)行利用烷基化劑R10-L(其中L為如上文所定義的離去基團(tuán))，與合適的堿，例如K2CO3，在溶劑中，例如2-丁酮，一般在高溫，例如約80℃。任選可包括活化劑，例如KI或NaI。
式(XXXII)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如N-Boc-氨基乙醇、3-(Boc-氨基)-1-丙醇、4-(Boc-氨基)-1-丁醇、5-(Boc-氨基)-1-戊醇和6-(Boc-氨基)-1-己醇。
式(XXXIII)化合物可依據(jù)L.E.Canne，R.L.Winston，S.B.H.Kent，Tet.Lett.，383361-4(1997)(見化合物2)、S Kondo等，J.Antibiotics，341625-7(1981)和W.Hu，E.Reder，M.Hesse，Helv.Chim.Acta，792137-51(1996)(見化合物6)所述方法制備。
依據(jù)第四種方法D，式(I)化合物，其中R5或R6代表式(b)基團(tuán)，其中X代表化學(xué)鍵，可通過式(VIII)化合物
其中j、k和R8如上文對式(I)中的定義， 與式(IIa)或(IIb)化合物反應(yīng)制備。
還原胺化反應(yīng)通?？稍谝韵聴l件進(jìn)行利用合適的還原劑，例如NaBH(OAc)3，任選在合適的酸催化劑存在下，例如乙酸，在合適的溶劑中，例如DCM或THF。
在方法D的一個實施方案中，A代表CH。
式(VIII)化合物可依據(jù)流程12制備 流程12式(VIII)化合物的合成
其中j、k和R8如上文對式(I)中的定義。
試劑和條件i)甲基溴化鎂，合適的溶劑，例如THF，然后多聚甲醛，在溶劑中，例如甲苯，合適的堿，例如NEt3，高溫，例如約80℃；ii)合適的堿，例如NEt3，溶劑，例如DMF，1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三氟甲基)磺?；鵠甲磺酰胺；iii)乙酸鈀(II)，1，3-二(二苯基膦)丙烷，三辛基甲硅烷，高溫，例如約75℃。
根據(jù)需要可分離或可不分離中間體三氟甲磺酸酯化合物。
國際專利申請WO2004/056369(見實施例3和4)和WO2005/123723(見描述17)公開了式(XXIV)化合物，并為Bioorg.Med.Chem.Lett.，11685-688(2001)所描述。
依據(jù)第五種方法E，式(I)化合物，其中R5或R6代表式(a)基團(tuán)，可通過式(IXa)或(IXb)化合物

其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d、e、e′和R4如上文對式(I)中的定義，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘， 與式(X)化合物反應(yīng)制備
其中f、g、h和R7如上文對式(I)中的定義。
烷基化反應(yīng)通?？稍谝韵聴l件進(jìn)行在合適的溶劑中，例如2-丁酮、MIBK或丙酮，任選在活化劑存在下，例如碘化鈉或碘化鉀，合適的堿，例如DIPEA或碳酸鉀，在合適的溫度，例如回流。
在方法E的一個實施方案中，A代表CH。
式(IXa)和(IXb)化合物可依據(jù)以下反應(yīng)流程制備 流程13式(IXa)或(IXb)化合物的合成-其中L為Cl，其中A代表CH
其中R1、y、R2、z、b、c、d、e和e′如上文就式(I)所述，Ms代表甲磺酸基。應(yīng)當(dāng)理解的是用式(IIa)化合物代替式(IIb)化合物使用相同順序的反應(yīng)和試劑將得到式(IXa)化合物。
試劑和條件i)合適的還原劑，例如NaBH(OAc)3，溶劑，例如DCM，任選加入酸催化劑，例如AcOH；ii)合適的堿，例如K2CO3，溶劑，例如2-丁酮或MIBK，一般在高溫，例如約80℃或回流，任選利用微波照射，任選加入活化劑，例如KI或NaI；iii)BBr3，溶劑，例如DCM，在合適的溫度，例如-60℃-室溫，例如0℃-室溫。
如果需要，用于方法E前不需要分離式(IXa)和(IXb)化合物。
式(XXXIV)化合物購自例如Sigma-Aldrich，例如2-羥基苯甲醛、3-羥基苯甲醛和4-羥基苯甲醛。
式(XXXV)化合物可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法和/或通過本文所述方法制備，例如活化相應(yīng)的醇。2-甲氧基芐基醇、3-甲氧基芐基醇、4-甲氧基芐基醇、2-(3-甲氧基苯基)乙醇、2-(4-甲氧基苯基)乙醇、3-(4-甲氧基苯基)-1-丙醇和4-[4-(甲氧基)苯基]-1-丁醇購自例如Sigma-Aldrich。此類活化反應(yīng)可例如使用合適的活化劑，例如MsCl，在合適的溶劑中，例如TBME，采用合適的堿，例如NEt3。
式(I)化合物，其中A代表N 其中A代表N的式(I)化合物可通過本文所述方法制備。
更具體地，其中A代表N的式(I)化合物可由其中A代表N的式(IIa)和(IIb)化合物通常依據(jù)方法A、方法C(流程11)、方法D和方法E(流程13)所述反應(yīng)制備。其中A代表N的其他式(I)化合物可依據(jù)方法F和G制備。
其中A代表N的式(IIa)和(IIb)化合物可由其中A代表N的式(XI)化合物通常依據(jù)上文流程1和2所述反應(yīng)制備。
其中A代表N的式(XI)化合物可依據(jù)下流程14制備。
流程14式(XI)化合物的合成，其中A代表N
其中R1、R2、y和z如上文就式(I)所述。
試劑和條件i)甲醇鈉，THF/MeOH；ii)a)合適的活化劑，例如羰基二咪唑或草酰氯，合適的溶劑，例如DMF，合適的高溫，例如約50℃，b)合適的堿，例如NaH，c)；iii)合適的酸催化劑，例如TFA，合適的溶劑，例如DCM；iv)H2NNH2·H2O，在合適的溶劑中，例如EtOH，催化量的酸，例如AcOH。
其中A代表N的式(XIII)化合物購自Sigma-Aldrich，例如吡啶-3，4-二甲酸酐。2-甲基-吡啶-4，5-二甲酸酐可依據(jù)Werner，W.Graefe，U.，Ihn，W.，Tresselt，D.，Winter，S.，Paulus，E.，Tetrahedron，53(1)109-118(1997)(見化合物4)所述方法制備。3-甲氧基吡啶-4，5-二甲酸酐可依據(jù)Krapcho，A.P.，Maresch，M.J.，Gallagher，C.E.，Hacker，M.P.，J.Het.Chem.，32(6)1693-702，(1995)公開的方法(見化合物10)制備。2-甲基-3，4-吡啶二甲酸酐可依據(jù)Moriconi，E.J.和Spano，F(xiàn).A.，J.Amer.Chem.Soc.，86(1)38-46，(1964)(見化合物14)所述方法制備。
式(XXXVI)化合物可通過下流程15公開的方法或通過WO2002/079143所述方法(見制備149)制備。
流程15式(XXXVI)化合物的合成
其中R2和z如上文就式(I)所述。
試劑和條件i)二甲基甲酰胺縮二叔丁醇，合適的溶劑，例如甲苯，高溫，例如80℃，約18h。
二甲基甲酰胺縮二叔丁醇購自例如Sigma-Aldrich。
式(XIV)化合物的利用如上所述(見流程2)。
依據(jù)第六種方法F，式(I)化合物可通過其他式(I)化合物的相互轉(zhuǎn)換制備。
相互轉(zhuǎn)換包括但不限于在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的標(biāo)準(zhǔn)條件下烷基化和去保護(hù)。
因此，一般而言，烷基化反應(yīng)可由式(I)化合物和C1-6烷基完成，其中C1-6烷基已被活化以取代離去基團(tuán)例如鹵素或活化的羥基。所述反應(yīng)在以下條件進(jìn)行在合適的堿存在下，例如NEt3或DIPEA，在合適的溶劑中，例如2-丁酮或DMF，在合適的溫度，例如約80℃。
可用于所述合成路線的保護(hù)基的實例和去除其的方法可見T.W.Greene‘有機(jī)合成中的保護(hù)基(Protective Groups in OrganicSynthesis)’(第3版，J Wiley and Sons，1999)。合適的胺保護(hù)基包括磺酰基(例如甲苯磺?；?、?；?例如乙酰基、2′，2′，2′-三氯乙氧羰基、芐氧羰基或叔丁氧羰基)和芳烷基(例如芐基)，其可通過合適的水解(例如利用酸，例如氯化氫的二氧六環(huán)溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液)或還原(例如氫解芐基或利用鋅在乙酸中還原去除2′，2′，2′-三氯乙氧羰基)去除。其他合適的胺保護(hù)基包括三氟乙?；?-COCF3)，其可通過堿催化的水解去除，或固體相樹脂結(jié)合的芐基，例如Merrifield樹脂結(jié)合的2，6-二甲氧基芐基(Ellman連接基團(tuán))，其可通過酸裂解去除，例如利用三氟乙酸。
在方法F的一個實施方案中，A代表CH。
依據(jù)第七種方法G，式(I)化合物的鹽可通過平衡離子的交換或?qū)⑺鳆}從游離堿中沉淀出來制備。
在方法G的一個實施方案中，A代表CH。
應(yīng)當(dāng)理解的是用于制備式(I)化合物的所有新型中間體構(gòu)成本發(fā)明的另一個實施方案。
在一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(中間體4)或其鹽的式(IIb)化合物。
其中式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽可能具有潛在消炎和/或抗過敏有益效果的病狀的實例包括呼吸道炎性和/或過敏性疾病，例如過敏性鼻炎或其他疾病，例如支氣管炎(包括慢性支氣管炎)、哮喘(包括過敏原誘導(dǎo)的哮喘反應(yīng))、慢性阻塞性肺病(COPD)、竇炎和過敏性鼻炎(季節(jié)性和常年性)。
此外，式(I)化合物可用于治療腎炎和皮膚病，例如牛皮癬、濕疹、過敏性皮炎和超敏性反應(yīng)。此外，式(I)化合物可用于治療昆蟲叮咬。
式(I)化合物也可用于治療鼻息肉、結(jié)膜炎或瘙癢癥。
尤其引人注目的疾病是過敏性鼻炎。
其中組胺可能具有病理生理作用的其他疾病包括非過敏性鼻炎和胃腸道疾病，例如腸炎，包括炎性腸病(例如Crohn′s病或潰瘍性結(jié)腸炎)和輻射暴露或過敏原暴露引起的腸炎。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是本文提及治療時擴(kuò)大至包括預(yù)防以及治療已知病癥。
如上所述，式(I)化合物可用作治療劑。因此提供了式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在治療中的用途。
在另一個實施方案中，提供了用于治療的4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物。
在一個實施方案中，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療任何上述疾病的藥物中的用途。
在另一個實施方案中，提供了4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物在制備用于治療任何上述疾病的藥物中的用途。
在另一個實施方案中，提供了在有需要的人體或動物患者中治療任何上述疾病的方法，所述方法包括給予有效量式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一個實施方案中，提供了在有需要的人體或動物患者中治療任何上述疾病的方法，所述方法包括給予有效量為4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物。
當(dāng)用于治療時，式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽通常可配制在合適的組合物中。此類組合物可利用標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
因此，提供了一種組合物，所述組合物包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。
還提供了一種組合物，所述組合物包含4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物和任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。
可通過適合在環(huán)境溫度和環(huán)境壓力混合制備的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物可能適于局部給藥(包括上皮、吸入、鼻內(nèi)或經(jīng)眼給藥)、經(jīng)腸給藥(包括口服或直腸給藥)或不經(jīng)腸給藥(例如通過注入或灌注)。引人注目的是適于局部給藥，尤其是適于鼻內(nèi)給藥，的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物。
一般而言，組合物可為給藥途徑所需的溶液或懸浮液(溶液或非溶液)、片劑、膠囊、口服液制劑、粉末、顆粒、錠劑、洗液、乳膏、軟膏、凝膠、泡沫、可復(fù)水的粉末或栓劑形式。
一般而言，包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物依據(jù)給藥途徑可包含約0.1％-99％(w/w)，例如約10-60％(w/w)(基于組合物總重量)，式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。用于治療上述疾病的化合物的劑量隨著疾病的嚴(yán)重程度、患者體重和其他類似因素以正常方式變動。然而，作為通用指南，合適的單位劑量可為約0.05-1000mg，例如約0.05-200mg，一天可給予此單位劑量一次以上，例如一天兩次或三次天或者根據(jù)需要。此類療法可延續(xù)幾周或幾個月。
式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在主題組合物中的比例取決于待制備組合物的準(zhǔn)確類型和具體給藥途徑，但基于組合物總重量一般為約0.001-10％(w/w)。然而，一般而言，對大部分制劑而言所使用的比例基于組合物總重量為約0.005-1％(w/w)，例如約0.01-1％(w/w)，例如約0.01-0.5％(w/w)。然而，在吸入的粉末中，所使用的比例基于組合物總重量一般為約0.1-5％(w/w)。
一般而言，適于鼻內(nèi)或吸入給藥的組合物可任選與一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑，例如溶液或非溶液賦形劑、增稠劑、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑和/或防腐劑，方便地制成氣溶膠、溶液、懸浮液、滴劑、凝膠或干粉末。
對適于鼻內(nèi)或吸入給藥的組合物而言，式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽通常可為顆粒大小變小的形式，其可通過傳統(tǒng)方法制備，例如微粉化和研磨。一般而言，大小變小(例如微粉化)的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽可定義為D50值為約0.5-10微米，例如約2-4微米(例如如利用激光衍射所測量)。
在一個實施方案中，包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物適于鼻內(nèi)給藥。包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的鼻內(nèi)組合物可允許將化合物輸送至鼻腔(目標(biāo)組織)的所有區(qū)域，此外，還可允許化合物與目標(biāo)組織保持接觸更長時間。鼻內(nèi)組合物的合適劑量應(yīng)適合病人通過鼻子緩慢吸入隨后到達(dá)清理過的鼻腔。在吸入過程中，應(yīng)將組合物給予一個鼻孔，而另一個鼻孔用手壓住。然后針對另一個鼻孔重復(fù)該過程。一般而言，通過上述過程每天多達(dá)兩次或三次，理想的是每天一次，給予每個鼻孔一次或兩次噴霧劑。特別引人注目的是適于每天給藥一次的鼻內(nèi)組合物。
鼻內(nèi)組合物可任選包含所需的一種或多種懸浮劑、一種或多種防腐劑、一種或多種潤濕劑和/或一種或多種等滲調(diào)節(jié)劑。適于鼻內(nèi)給藥的組合物還可任選包含其他賦形劑，例如抗氧化劑(例如偏亞硫酸氫鈉)、掩味劑(例如薄荷醇)和甜味劑(例如右旋糖、甘油、糖精和/或山梨醇)。
懸浮劑，如果包括，通常基于組合物總重量以約0.1-5％(w/w)的量存在于鼻內(nèi)組合物中，例如約1.5％-2.4％(w/w)。懸浮劑的實例包括Avicel

、羧甲基纖維素、veegum、黃芪膠、膨潤土、甲基纖維素和聚乙二醇，例如微晶纖維素或羧甲基纖維素鈉。如果合適，懸浮劑也可包含在適于吸入、經(jīng)眼和口服給藥的組合物中。
為了穩(wěn)定性目的，包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的鼻內(nèi)組合物可通過包含防腐劑而防止微生物或真菌污染和生長。藥學(xué)可接受的抗微生物劑或防腐劑的實例可包括季銨化合物(例如苯扎氯銨、芐索氯銨、西曲溴銨和西吡氯銨)、含汞試劑(例如硝酸苯汞，苯基醋酸苯汞和硫柳汞)、醇試劑(例如氯丁醇、苯基乙醇和芐基醇)、抗菌酯(例如對羥基苯甲酸的酯)、螯合劑(例如乙二氨四乙酸二鈉(EDTA))以及其他抗微生物劑(例如雙氯苯雙胍己烷、氯甲酚、山梨酸及其鹽(例如山梨酸鉀)和多粘菌素)。藥學(xué)可接受的抗真菌劑或防腐劑的實例可包括苯甲酸鈉。防腐劑，如果包括，基于組合物總重量可為約0.001-1％(w/w)，例如約0.015％(w/w)。如果合適，防腐劑可包括在適于其他給藥途徑的組合物中。
包含懸浮藥物的組合物可包括藥學(xué)可接受的潤濕劑，其起到潤濕藥物顆粒以促使其分散在組合物溶液相中的作用。一般而言，所使用潤濕劑的量在混合過程中不會導(dǎo)致分散體發(fā)泡。潤濕劑的實例包括脂肪醇、酯和醚，例如聚環(huán)氧乙烷(20)山梨聚糖單油酸酯(Polysorbate 80)。潤濕劑可以基于組合物總重量為約0.001-0.05％(w/w)的量存在于鼻內(nèi)組合物中，例如約0.025％(w/w)。如果合適，潤濕劑可包含在適于其他給藥途徑的組合物中，例如吸入和/或經(jīng)眼給藥。
可包含等滲調(diào)節(jié)劑以實現(xiàn)與例如鼻腔流體等體液等滲，進(jìn)而導(dǎo)致刺激性降低。等滲調(diào)節(jié)劑的實例包括氯化鈉、右旋糖、木糖醇和氯化鈣。等滲調(diào)節(jié)劑可以基于組合物總重量為約0.1-10％(w/w)，例如約5.0％(w/w)，的量包含在鼻內(nèi)組合物中。如果合適，等滲調(diào)節(jié)劑也可包含在適于其他給藥途徑的組合物中，例如包含在適于吸入、經(jīng)眼、口服液體和不經(jīng)腸給藥的組合物中。
此外，包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的鼻內(nèi)組合物可通過加入合適的緩沖劑而得到緩沖，例如檸檬酸鈉、檸檬酸、磷酸鹽(例如磷酸二鈉鹽(例如十二水合物、七水合物、二水合物和無水形式)或磷酸鈉)及其混合物。如果合適，緩沖劑也可包含在適于其他給藥途徑的組合物中。
局部給予鼻子或肺以例如治療鼻炎的組合物包括加壓氣溶膠組合物和通過加壓泵輸送給鼻腔的溶液組合物。特別引人注目的是非加壓和適于局部給予鼻腔的組合物。合適的組合物包含實現(xiàn)該目的水稀釋劑或載體。給予肺或鼻子的溶液組合物可含有傳統(tǒng)賦形劑，例如緩沖劑和張力改良劑等。溶液組合物也可通過霧化給予鼻子。
通常可使用液體分配器以將組合物輸送至鼻腔。液體組合物可為溶液或非溶液，但通常為溶液。此類液體分配器可具有分配噴嘴或分配孔，通過使用者向液體分配器的泵機(jī)構(gòu)施加壓力而通過所述噴嘴或孔分配計量劑量的液體組合物。此類液體分配器一般設(shè)有多份計量劑量液體組合物的儲罐，可通過連續(xù)驅(qū)動泵分配這些劑量?？蓪Ψ峙鋰娮旎蚩走M(jìn)行設(shè)置以插入使用者的鼻孔從而將所述液體組合物噴霧分配到鼻腔中。WO05/044354描述和闡明了前述類型的液體分配器，通過引用將其全部內(nèi)容結(jié)合到本文中。分配器具有外殼，其包裹著具有壓縮泵的液體分配裝置，壓縮泵安裝在用于包含液體組合物的容器上。所述外殼具有至少一個手指可操作的側(cè)桿，其相對于外殼向內(nèi)移動以用凸輪帶動外殼中的容器向上，進(jìn)而導(dǎo)致泵壓縮并將計量劑量的組合物通過外殼的鼻噴嘴泵出泵桿。在一個實施方案中，WO05/044354的圖30-40闡述了通用類型的液體分配器。
在一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的鼻內(nèi)組合物，尤其是為4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物。在另一個實施方案中，此類組合物不含苯扎氯銨。
吸入給藥包括向肺局部給藥，例如通過氣溶膠或干粉組合物。適于吸入給藥的氣溶膠組合物可包含所述化合物在藥學(xué)可接受的水性或非水溶劑中的溶液或微懸浮液。適于吸入的氣溶膠組合物可為懸浮液或溶液，并通常包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽以及合適的揮發(fā)劑，例如氟烴或含氫氯氟烴或其混合物，例如氫氟烷，例如1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷或其混合物。氣溶膠組合物可任選地包含本領(lǐng)域熟知的其他賦形劑，例如表面活性劑或助溶劑。表面活性劑的實例包括但不限于油酸、卵磷脂、低聚乳酸或例如如WO94/21229和WO98/34596所述的衍生物。助溶劑的實例包括但不限于乙醇。氣溶膠組合物可以在密封容器中的單劑量或多劑量無菌形式存在，所述容器可采取藥筒形式或再充裝以與霧化裝置或吸入器一起使用?；蛘?，密封容器可為一體的分配裝置，例如單一劑量鼻吸入器，或裝有計量閥的氣溶膠分配器(計量劑量吸入器)，一旦所述容器的內(nèi)容物用盡則可將其丟棄。
干粉可吸入組合物可采取用于吸入器或吹入器的膠囊、例如明膠藥筒或例如層壓鋁箔泡罩的形式?？蓪⒋祟惤M合物制成包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和合適的粉末基底例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
任選地，就干粉可吸入組合物而言，可將適于吸入給藥的組合物結(jié)合到縱向裝在合適吸入裝置中的條帶上的許多密封藥劑容器中(例如包括所述干粉組合物)。所述容器可根據(jù)需要而被破壞或剝離打開，可通過例如GlaxoSmithKline上市的DISKUSTM裝置等裝置吸入給予例如干粉組合物的藥劑。例如GB 2242134 A描述了DISKUSTM吸入裝置，在此類裝置中，在兩個彼此可剝離地固定的部件間限定了至少一個用于粉末形式組合物的容器(所述容器可為例如許多縱向裝在條帶上的密封藥劑容器)；所述裝置包括限定所述容器打開位置的裝置；用于在打開位置剝離部件以打開所述容器的裝置；以及與打開的容器相通的出口，通過所述出口使用者可從打開的容器吸入粉末形式的組合物。
通常對氣溶膠組合物進(jìn)行設(shè)置從而使各計量劑量或氣溶膠“泡”包含約20μg-2000μg，具體約20μg-500μg，式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。可每天給藥一次或幾次，例如2、3、4或8次，每次給予例如1、2或3個劑量。每天氣溶膠的總劑量為約100μg-10mg，例如約200μg-2000μg。通過吸入器或吹入器中的膠囊和藥筒輸送的每天總劑量和計量劑量一般為氣溶膠組合物劑量的兩倍。
在另一個實施方案中，提供了適于上皮給藥的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物。每天涂覆一次或多次的涂覆于感染區(qū)域例如皮膚的上皮組合物可為例如軟膏、霜劑、乳狀液、洗液、泡沫、噴霧、含水凝膠或微乳劑形式。此類組合物可任選包含一種或多種增溶劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、表面活性劑、芳香劑、防腐劑或乳化劑。
通過加入合適的增稠劑和/或膠凝劑和/或溶劑，例如可將軟膏、霜劑和凝膠與水性或油性基底配制在一起。因此，此類基底可例如包括水和/或油，例如液體石蠟或植物油，例如花生油或蓖麻油，或溶劑，例如聚乙二醇?？梢罁?jù)基底性質(zhì)而使用的增稠劑和膠凝劑包括軟石蠟、硬脂鋁、十八十六醇、聚乙烯二醇、羊毛脂、蜂蠟、聚羧乙烯和纖維素衍生物，和/或單硬脂酸甘油酯和/或非離子乳化劑。可將洗液與水性或油性基底配制在一起，并一般還包含一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑或增稠劑。
在另一個實施方案中，提供了適于經(jīng)眼給藥的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物。此類組合物可任選包含一種或多種懸浮劑、一種或多種防腐劑、一種或多種潤濕/潤滑劑和/或一種或多種等滲調(diào)節(jié)劑。眼科潤濕/潤滑劑的實例可包括纖維素衍生物、葡聚糖70、明膠、液態(tài)多元醇、聚乙烯醇和聚烯吡酮，例如纖維素衍生物和多元醇。
在另一個實施方案中，提供了適于口服給藥的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物。口服給藥的片劑和膠囊可為單位劑量形式，并可包含傳統(tǒng)的賦形劑，例如粘合劑、填充劑、壓片滑潤劑、崩散劑和可接受的潤濕劑?？梢罁?jù)普通制藥實踐中所熟知的方法對所述片劑進(jìn)行包衣。
口服液制劑可為例如水性或油性懸浮液、溶液、乳濁液、糖漿或酏劑形式，或者可為使用前與水或其他合適的載體復(fù)原的干燥產(chǎn)品形式。此類液體制劑可包含傳統(tǒng)的添加劑，例如懸浮劑、乳化劑、非水載體(其可包括可食用的油)、防腐劑以及，如果需要，傳統(tǒng)的調(diào)味劑或著色劑。
在另一個實施方案中，提供了適于不經(jīng)腸給藥的包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的組合物。適于不經(jīng)腸給藥的液態(tài)單位劑量形式可利用式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和可為水基或油基的無菌載體制備?；衔铮Q于所使用的載體和濃度，可懸浮或溶解在載體中。在制備溶液的過程中，可將化合物溶解以供注射，并在填充到合適的小瓶或小玻璃瓶中之前過濾滅菌，密封。任選地，可將輔料例如局麻醉藥、防腐劑和緩沖劑溶解在載體中。為提高穩(wěn)定性，可在填充到小瓶中后冰凍組合物，并真空去除水。給藥前可利用合適的溶劑使凍干的不經(jīng)腸組合物復(fù)原。不經(jīng)腸的懸浮液可以基本相同的方法制備，只是將化合物懸浮在載體中，而非溶解，同時不能通過過濾實現(xiàn)滅菌?？稍趹腋≡跓o菌載體中之前通過暴露于環(huán)氧乙烷中對化合物進(jìn)行滅菌。表面活性劑或潤濕劑可包含在組合物中以促進(jìn)化合物均勻分布。
化合物和包含式(I)化合物的藥物組合物也可與一種或多種其他藥物組合使用或者包含一種或多種其他藥物，例如其他抗組胺藥物，例如H4受體拮抗劑，抗膽堿能藥，消炎藥，例如皮質(zhì)類固醇(例如丙酸氟替卡松、丙酸倍氯米松、糠酸莫米他松、醋酸曲安縮松、布地縮松和糠酸氟替卡松)；或非甾族消炎藥(NSAIDs)(例如色甘酸鈉、尼多考米鈉)，PDE-4抑制劑，白三烯拮抗劑，脂肪氧合酶抑制劑，趨化因子拮抗劑(例如CCR3、CCR1、CCR2、CCR4、CCR8、CXCR1、CXCR2)，IKK拮抗劑，iNOS抑制劑，類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑，β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷2a激動劑；或β腎上腺素能藥(例如沙美特羅、沙丁胺醇、福莫特羅、非諾特羅、特布他林和WO02/66422，WO02/270490，WO02/076933，WO03/024439和WO03/072539描述的β激動劑及其鹽)；或抗感染藥物例如抗生素(例如retapamulin)和抗病毒藥。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員清楚的是，如果合適，可以鹽(例如堿金屬或胺鹽或酸加成鹽)、前藥、酯(例如低級烷基酯)或溶劑化物(例如水合物)形式使用其他藥物以優(yōu)化所述藥物的活性和/或穩(wěn)定性和/或物理性質(zhì)(例如溶解性)。還應(yīng)當(dāng)清楚的是，如果合適，可以光學(xué)純形式使用所述藥物。
在另一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、一種或多種(例如一種或兩種，例如一種)其他治療活性劑以及任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑的組合物。
在另一個實施方案中，提供了包含4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其藥學(xué)可接受的鹽的化合物、一種或多種(例如一種或兩種，例如一種)其他治療活性劑以及任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑的組合物。
可單獨或與雙H1/H3受體拮抗劑結(jié)合使用的其他組胺受體拮抗劑包括H4受體的拮抗劑(和/或反向激動劑)，例如Jablonowski等，J.Med.Chem.463957-3960(2003)公開的化合物。
在一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和β2-腎上腺素能受體激動劑的組合物。
β2-腎上腺素能受體激動劑的實例包括沙美特羅(其可為消旋體或單一對映體，例如R-對映體)、沙丁胺醇(其可為消旋體或單一對映體，例如R-對映體)、福莫特羅(其可為消旋體或單一非對映異構(gòu)體，例如R，R-非對映異構(gòu)體)、沙甲胺醇、非諾特羅、卡莫特羅、依坦特羅、那明特羅、克侖特羅、吡布特羅、flerbuterol、瑞普特羅、班布特羅、茚達(dá)特羅、特布他林及其鹽，例如沙美特羅的羥萘甲酸(1-羥基-2-萘甲酸酯)鹽、沙丁胺醇的硫酸鹽或游離堿或者福莫特羅的富馬酸鹽。在一個實施方案中，包含式(I)化合物的組合物可包含長效β2-腎上腺素能受體激動劑，例如提供約12h或更長時間有效支氣管擴(kuò)張的化合物。
其他β2-腎上腺素能受體激動劑包括WO 02/066422、WO02/070490、WO 02/076933、WO 03/024439、WO 03/072539、WO03/091204、WO 04/016578、WO 2004/022547、WO 2004/037807、WO 2004/037773、WO 2004/037768、WO 2004/039762、WO2004/039766、WO 01/42193和WO03/042160所述激動劑。
β2-腎上腺素能受體激動劑的實例包括 3-(4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧基}丁基)苯磺酰胺； 3-(3-{[7-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-羥甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧基}丙基)苯磺酰胺； 4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯芐基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-1-羥乙基}-2-(羥甲基)苯酚； 4-{(1R)-2-[(6-{4-[3-(環(huán)戊基磺?；?苯基]丁氧基}己基)氨基]-1-羥乙基}-2-(羥甲基)苯酚； N-[2-羥基-5-[(1R)-1-羥基-2-[[2-4-[[(2R)-2-羥基-2-苯基乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺； N-2{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-2-羥基-2-(8-羥基-2(1H)-喹啉酮-5-基)乙胺；和 5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙基氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮。
β2-腎上腺素能受體激動劑可為與藥學(xué)可接受的酸形成的鹽的形式，所述酸選自硫酸、鹽酸、富馬酸、羥萘甲酸(例如1-或3-羥基-2-萘甲酸)、肉桂酸、取代的肉桂酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、萘丙烯酸、苯甲酸、4-甲氧基苯甲酸、2-或4-羥基苯甲酸、4-氯苯甲酸和4-苯基苯甲酸。
在另一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和腺苷2a激動劑的組合物。
腺苷2a激動劑包括國際專利中請公開PCT/EP/2005/005651的腺苷2a激動劑，例如(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反-1，4-環(huán)己烷二基雙[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]。
在另一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和消炎藥的組合物。
消炎藥包括皮質(zhì)類固醇?？膳c式(I)化合物結(jié)合使用的合適皮質(zhì)類固醇為口服和吸入皮質(zhì)類固醇及其具有消炎活性的前藥。實例包括甲基強(qiáng)的松龍、強(qiáng)的松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯(糠酸氟替卡松)、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2，2，3，3-四甲基環(huán)丙基羰基)氧基-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氰基甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-(1-甲基環(huán)丙基羰基)氧基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地縮松、氟尼縮松、莫米他松酯(例如糠酸莫米他松)、醋酸曲安縮松、羅氟奈德、環(huán)索奈德(16α，17-[[(R)-環(huán)己基亞甲基]二(氧基)]-11β，21-二羥基-孕烷-1，4-二烯-3，20-二酮)、布替可特丙酸酯、RPR-106541和ST-126。特別引人注目的皮質(zhì)類固醇可包括丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2，2，3，3-四甲基環(huán)丙基羰基)氧基-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氰基甲基酯、6α，9α-二氟-11b-羥基-16α-甲基-17α-(1-甲基環(huán)丙基羰基)氧基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯和糠酸莫米他松。在一個實施方案中，皮質(zhì)類固醇為6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯(糠酸氟替卡松)或糠酸莫米他松。
在一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和皮質(zhì)類固醇例如6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17β-硫代甲酸S-氟甲基酯(糠酸氟替卡松)或糠酸莫米他松的組合物。此類組合物因為鼻內(nèi)給藥而可能特別引人注目。
可能對轉(zhuǎn)錄激活具有選擇性轉(zhuǎn)錄抑制和可用于聯(lián)合治療的具有糖皮質(zhì)激素激動的非甾族化合物包括以下專利申請和專利描述的非甾族化合物WO03/082827、WO98/54159、WO04/005229、WO04/009017、WO04/018429、WO03/104195、WO03/082787、WO03/082280、WO03/059899、WO03/101932、WO02/02565、WO01/16128、WO00/66590、WO03/086294、WO04/026248、WO03/061651、WO03/08277、WO06/000401、WO06/000398和WO06/015870。
在一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和糖皮質(zhì)激素激動劑的組合物。
消炎藥包括非甾族消炎藥(NSAID)。
NSAID包括色甘酸鈉、尼多考米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑、白三烯合成抑制劑(例如孟魯司特)、iNOS(誘發(fā)的硝酸氧化物合成酶)抑制劑(例如口服iNOS抑制劑)、IKK拮抗劑、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動劑)、細(xì)胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑，例如CCR1，CCR2，CCR3，CCR4或CCR8拮抗劑)或細(xì)胞因子合成抑制劑或5-脂肪氧合酶抑制劑。iNOS抑制劑包括WO93/13055、WO98/30537、WO02/50021、WO95/34534和WO99/62875公開的iNOS抑制劑。
在一個實施方案中，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在與磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑結(jié)合中的用途。用于該實施方案的PDE4特異性抑制劑可為已知抑制PDE4酶或發(fā)現(xiàn)起到PDE4抑制劑作用的任何化合物，其僅僅是PDE4抑制劑，而非抑制PDE家族其他成員的化合物，例如PDE3、PDE5以及PDE4。
可能引人注目的化合物包括順-4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-甲酸、2-甲氧基羰基-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮和順-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]。以及順-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-甲酸(也稱作西洛司特)及其鹽、酯、前藥或1996年9月3日授權(quán)的美國專利5,552,438所述的物理形式。
其他PDE4抑制劑包括Elbion的AWD-12-281(Hofgen，N.等，15thEFMC Int.Symp.Med.Chem.，(9月6-10，Edinburgh)1998，Abst.P.98；CAS號247584020-9)、名為NCS-613的9-芐基腺嘌呤衍生物(INSERM)、Chiroscience和Schering-Plough的D-4418、識別為CI-1018(PD-168787)并屬于Pfizer的苯并二氮雜

PDE4抑制劑、KyowaHakko在WO99/16766公開的苯并間二氧雜環(huán)戊烯衍生物、KyowaHakko的K-34、Napp的V-11294A(Landells，L J.等，Eur.Resp.J.[Ann.Cong.Eur.Resp.Soc.(9月19-23，Geneva)1998]1998，12(Suppl.28)Abst P2393)、Byk-Gulden的羅氟司特(CAS號162401-32-3)和酞嗪酮(WO99/47505)、Byk-Gulden(現(xiàn)為Altana)制備和公布的苯芬群和混合PDE3/PDE4抑制劑的(-)-p-[(4aR*，10bS*)-9-乙氧基-1，2，3，4，4a，10b-六氫-8-甲氧基-2-甲基苯并[c][1，6]二氮雜萘-6-基]-N，N-二異丙基苯甲酰胺、Almirall-Prodesfarma正在開發(fā)的阿羅茶堿、Vernalis的VM554/UM565、T-440(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，284(1)162，(1998))和T2585。
公布的國際專利申請WO04/024728(Glaxo Group Ltd)、WO04/056823(Glaxo Group Ltd)和WO04/103998(Glaxo Group Ltd)公開了可能引人注目的其他化合物。
在另一個實施方案中，提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和抗膽堿能藥的組合物。
抗膽堿能藥為起到毒蕈堿受體拮抗劑作用的化合物，尤其是為M1或M3受體拮抗劑、M1/M3或M2/M3受體雙拮抗劑或M1/M2/M3受體三拮抗劑的化合物。通過吸入給藥的示例性化合物包括異丙托品(例如溴化物，CAS 22254-24-6，以Atrovent名稱銷售)，氧托品(例如溴化物，CAS 30286-75-0)和噻托品(例溴化物，CAS 136310-93-5，以Spiriva名稱銷售)。還引人注目的是瑞伐托酯(例如氫溴酸鹽，CAS262586-79-8)和WO01/04118公開的LAS-34273?？诜o藥的示例性化合物包括哌侖西平(例如CAS 28797-61-7)、達(dá)非那新(例如CAS133099-04-4，或以Enablex名稱銷售的氫溴酸鹽CAS 133099-07-7)、奧昔布寧(例如CAS 5633-20-5，以Ditropan名稱銷售)、特羅地林(例如CAS 15793-40-5)、托特羅定(例如CAS 124937-51-5，或以Detrol名稱銷售的酒石酸鹽CAS 124937-52-6)、奧替銨(otilonium)(例如溴化物，CAS 26095-59-0，以Spasmomen名稱銷售)、托司氯銨(例如CAS10405-02-4)和索非那新(例如CAS 242478-37-1，或CAS 242478-38-2，或也稱作YM-905并以Vesicare名稱銷售的丁二酸酯)。
其他抗膽堿能藥包括美國專利申請60/487981公開了的式(XXI)化合物
其中，與莨菪烷環(huán)相連的烷基鏈的具體取向為內(nèi)位； R31和R32獨立選自具有例如1-6個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基、具有5-6碳原子的環(huán)烷基、具有6-10個碳原子的環(huán)烷基烷基、2-噻吩基、2-吡啶基、苯基、具有不超過4個碳原子的烷基取代的苯基和具有不超過4個碳原子的烷氧基取代的苯基； X-代表與N原子正電荷對應(yīng)的陰離子。X-可為但不限于氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、苯磺酸根和甲苯磺酸根，包括例如 溴化(3-內(nèi))-3-(2，2-二-2-噻吩基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 溴化(3-內(nèi))-3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； (3-內(nèi))-3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷4-甲基苯磺酸鹽； 溴化(3-內(nèi))-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-噻吩基)乙烯基]-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷；和/或 溴化(3-內(nèi))-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-吡啶基)乙烯基]-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷。
其他抗膽堿能藥包括美國專利申請60/511009公開的式(XXII)或(XXIII)化合物
其中 所示H原子在外位； R41-代表與N原子正電荷對應(yīng)的陰離子。R1-可為但不限于氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、苯磺酸根和甲苯磺酸根； R42和R43獨立選自直鏈或支鏈低級烷基(具有例如1-6碳原子)、環(huán)烷基(具有5-6碳原子)、環(huán)烷基烷基(具有6-10碳原子)、N或O作為雜原子的雜環(huán)烷基(具有5-6碳原子)、N或O作為雜原子的雜環(huán)烷基烷基(具有6-10碳原子)、芳基、任選取代的芳基、雜芳基和任選取代的雜芳基； R44選自(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基、-OR45、-CH2OR45、-CH2OH、-CN、-CF3、-CH2O(CO)R46、-CO2R47、-CH2NH2、-CH2N(R47)SO2R45、-SO2N(R47)(R48)、-CON(R47)(R48)、-CH2N(R48)CO(R46)、-CH2N(R48)SO2(R46)、-CH2N(R48)CO2(R45)、-CH2N(R48)CONH(R47)； R45選自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基； R46選自(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基； R47和R48獨立選自H、(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基-芳基和(C1-C6)烷基-雜芳基，包括例如 碘化(內(nèi))-3-(2-甲氧基-2，2-二噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基丙腈； (內(nèi))-8-甲基-3-(2，2，2-三苯基乙基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基丙酰胺； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基丙酸； 碘化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 溴化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙-1-醇； N-芐基-3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺； 碘化(內(nèi))-3-(2-氨基甲酰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 1-芐基-3-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； 1-乙基-3-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-乙酰胺； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯甲酰胺； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二-噻吩-2-基-丙腈； 碘化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯磺酰胺； [3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-甲磺酰胺；和/或 溴化(內(nèi))-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷。
可使用的具體抗膽堿能化合物包括 碘化(內(nèi))-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 碘化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 溴化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 碘化(內(nèi))-3-(2-氨基甲?；?2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷； 碘化(內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷；和/或 溴化(內(nèi))-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮鎓雜二環(huán)[3.2.1]辛烷。
上文所指組合可方便地存在于藥物組合物以及包含上文所指組合和任選的藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物形式中。
此類組合的單獨化合物可以單獨的藥物組合物依次給予和以結(jié)合的藥物組合物同時給予?？蓪⑵渌委熁钚越M分與式(I)化合物一起懸浮在組合物中。已知藥物的合適劑量輕易地為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所理解。
式(I)化合物可通過下文所述方法或類似方法制備。因此以下中間體和實施例闡述了式(I)化合物的制備，無論如何不能認(rèn)為其限定本公開的范圍。
通用試驗 縮寫 aq.溶液 9-BBN9-硼雜雙環(huán)壬烷 BBr3三溴化硼 BOC(Boc)叔丁氧羰基 Cs2CO3碳酸鈀 CV柱體積 DCM二氯甲烷 DIPEAN，N-二異丙基乙基胺 DMFN，N-二甲基甲酰胺 DMSO二甲亞砜 EtOAc乙酸乙酯 EtOH乙醇 HCl氯化氫 HPLC高效液相色譜 K2CO3碳酸鉀 LCMS液相色譜-質(zhì)譜 mbar毫巴(壓力) MDAP質(zhì)量引導(dǎo)的自制備 MeCN乙腈 MeOH甲醇 MgSO4硫酸鎂 MIBK甲基異丁基酮 MsCl甲磺酰氯 NaHCO3碳酸氫鈉 NaOH氫氧化鈉 Na2SO4硫酸鈉 NEt3三乙胺 NMPN-甲基吡咯烷酮 NMR核磁共振 PTFE聚四氟乙烯 Pd/C載在活性碳上的鈀 RT保留時間 SiO2二氧化硅 TBTUO-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸鹽 TFA三氟乙酸 THF四氫呋喃 TLC薄層色譜 TBME叔丁基甲基醚 h小時 min分鐘 通用方法 快速硅膠指Merck Art No 9385；硅膠指Merck Art No 7734。
SCX層析柱為離子交換SPE柱，其中固定相為聚合苯磺酸。其用于分離胺。
SCX2層析柱為離子交換SPE柱，其中固定相為聚合丙磺酸。其用于分離胺。
LCMS在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3.3cm×4.6mm ID)上進(jìn)行，用0.1％甲酸和0.01M乙酸銨的水溶液(溶劑A)以及0.05％甲酸和5％水的MeCN溶液(溶劑B)洗脫，利用以下洗脫梯度0.0-7分鐘0％ B，0.7-4.2分鐘100％ B，4.2-5.3分鐘0％ B，5.3-5.5分鐘0％ B，流速為3ml min-1。在使用電噴霧正模式和負(fù)模式(ES+ve和ES-ve)的Fisons VGPlatform質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜。
Flashmaster II為購自Argonaut Technologies Ltd的自動多用戶快速層析系統(tǒng)，其使用一次性正常相SPE層析柱(2g-100g)。其提供了四種在線溶劑混合以使能運(yùn)行梯度法。利用多功能開放式軟件排列樣品，其管理著溶劑、流速、梯度圖和收集條件。系統(tǒng)裝有Knauer可變波長UV-檢測器和兩個允許自動峰去除、搜集和跟蹤的Gilson FC204流分收集器。
如下進(jìn)行質(zhì)量引導(dǎo)的自動制備(Mass directedautopreparative)(MDAP)HPLC在包括具有加長泵頭的Waters 600泵、Waters 2700自動取樣器，Waters 996二極管陣列和Gilson 202流分收集器的Waters FractionLynx系統(tǒng)上，在10cm×2.54cm內(nèi)徑ABZ+柱上，用0.1％甲酸的水溶液(溶劑A)和0.1％甲酸的MeCN溶液(溶劑B)洗脫，使用15分鐘內(nèi)的合適洗脫梯度，20mlmin-1流速，在200-320nm和室溫檢測。在使用電噴霧正模式和負(fù)模式交替掃描的Micromass ZMD質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜圖。所使用的軟件為具有OpenLynx和FractionLynx可選件的MassLynx 3.5。
在400MHz運(yùn)行的Bruker AV400上記錄1H NMR譜圖。使用標(biāo)準(zhǔn)氘化溶劑。一般而言，利用供參考的氘鎖定進(jìn)行NMR。任選地，將四甲基硅烷用作內(nèi)標(biāo)。
利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的方法對反應(yīng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測，例如TLC、LCMS和/或HPLC。此類方法用于確定反應(yīng)是否完成，同時，反應(yīng)時間可相應(yīng)地變動。
用于分析化合物晶體形式的XRPD法如下 XRPD分析在PANalytical X’Pert Pro X-射線粉末衍射儀上進(jìn)行，型號X’Pert Pro PW3040/60，序列號DY1850，使用X’Celerator檢測器。采集條件輻射Cu K，發(fā)生器電壓40kv，發(fā)生器電流45mA，始角2.000°2θ，端角39.997°2θ，步長0.0167，時間/步31.75秒。利用沖洗硅片制備樣品。
差示掃描量熱法(DSC)在裝有冷凍冷卻系統(tǒng)的TA instrumentsQ1000差示掃描量熱計上進(jìn)行?；谒褂玫奶囟▋x器和盤設(shè)置、分析員的樣品制備技術(shù)以及試樣量，可預(yù)料到所觀察峰的輕微變動。在上文所報導(dǎo)的峰歸屬中存在一些誤差范圍。峰最大值誤差范圍為約±5℃，熔化熱誤差范圍為±10J/g。
利用ACD/Name PRO 6.02化學(xué)命名軟件Advanced ChemistryDevelopments Inc.；Toronto，Ontario，M5H2L3，Canada命名化合物。
中間體 中間體1 2-{2-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]乙基}-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮 在氮氣氣氛中將氫化鈉(0.19g，4.75mmol)懸浮在無水DMF(20ml)中，在冰水浴中攪拌和冷卻。緩慢加入4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如美國專利1,377,231所公開，見實施例9，步驟1)(1.055g，3.90mmol)的DMF(8ml)溶液，在冷卻浴中繼續(xù)攪拌30分鐘。移除冷卻浴，室溫攪拌混合物30分鐘。緩慢加入N-(2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞胺(購自例如Aldrich)(1.12g，4.42mmol)的DMF(12ml)溶液，在氮氣氣氛中攪拌所得混合物過夜。真空濃縮混合物，使殘留物分配在水和EtOAc中。分層，干燥(MgSO4)有機(jī)層，真空濃縮。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(Flashmaster II，100g，60分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc-DCM梯度)。合并合適的流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物(1.192g)。LCMS RT＝3.44分鐘，ES+ve m/z 444/446[M+H]+。
中間體2 2-(2-氨基乙基)-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮 在EtOH(30ml)中攪拌2-{2-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]乙基}-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(例如如中間體1所制備)(1.192g，2.69mmol)和水合肼(約65％溶液，0.4ml，8.02mmol)，回流加熱4h。冷卻所得粘稠懸浮液，過濾去除固體，洗滌。真空濃縮濾液得標(biāo)題化合物(0.66g)。LCMS RT＝2.34分鐘，ES+ve m/z 314/316[M+H]+。
中間體3 (2R)-2-{[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯 在-15℃向三苯基膦(1.86g，7.09mmol)的無水THF(6ml)溶液加入偶氮二甲酸二異丙酯(1.12ml，5.69mmol)。在-15℃攪拌所得淺黃色粘稠懸浮液2分鐘。為有益于攪拌，加入更多無水THF(2ml)。然后在-15℃用4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如美國專利1,377,231所公開，實施例9，步驟1)(0.571g，2.11mmol)和N-叔丁氧羰基-D-脯氨醇(購自例如Fluka)(0.650g，3.23mmol)的無水THF(10ml)懸浮液處理反應(yīng)混合物。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，20℃攪拌23h。然后加入MeOH(20ml)，真空去除溶劑。所得殘留物通過Flashmaster II層析純化(70g硅膠層析柱)，用40分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc-環(huán)己烷梯度洗脫。真空去除溶劑得標(biāo)題化合物黑褐色油狀物(1.05g)。LCMS RT＝3.71分鐘。
中間體4 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮 向(2R)-2-{[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體3所制備)(1.05g，2.31mmol)的無水二氧六環(huán)(12ml)溶液加入HCl的1，4-二氧六環(huán)(4.0M，6ml)溶液。20℃攪拌溶液2h。向混合物加入TFA(1ml)，攪拌30分鐘，然后每10分鐘加入更多TFA(3×約1ml)直至完成去保護(hù)。真空去除溶劑，將殘留物上載至SCX層析柱(20g)，用MeOH洗滌(×2)，然后用10％的氨的MeOH溶液洗脫(2×50ml)。真空去除溶劑，通過Flashmaster II層析純化所得殘留物(50g硅膠層析柱)，用40分鐘內(nèi)0-30％ MeOH+1％ NEt3-DCM梯度洗脫得標(biāo)題化合物深褐色泡沫(0.351g)。LCMS RT＝2.45分鐘。
中間體5 (2S)-2-{[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯 攪拌下將偶氮二甲酸二叔丁酯(1.15g，5mmol)的THF(5ml)溶液加入三苯基膦(1.8g，7mmol)的THF(5ml)溶液中，冷卻至-15℃。所得粘稠懸浮液用4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如美國專利1,377,231所公開，見實施例9，步驟1)(0.558g，2mmol)和N-叔丁氧羰基-D-脯氨醇(購自例如Fluka)(0.64g，3.2mmol)的THF(5ml)懸浮液處理，然后在攪拌下繼續(xù)向混合物加入THF(15ml)。在氮氣氣氛中攪拌繼續(xù)過夜，使溫度升高至室溫。真空濃縮反應(yīng)混合物，殘留物通過硅膠層析純化(Flashmaster II，100g，60分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc-環(huán)己烷梯度)。合并合適的流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物(0.738g)。LCMS RT＝3.71分鐘，ES+ve m/z 454/456[M+H]+。
中間體6 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮 (2S)-2-{[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體5所制備)(738mg，1.6mmol)的二氧六環(huán)(5ml)溶液用HCl的二氧六環(huán)溶液(4M，5ml)處理，在氮氣氣氛、室溫中攪拌1h。繼續(xù)加入HCl的二氧六環(huán)溶液(4M，2ml)，繼續(xù)攪拌40分鐘。真空濃縮反應(yīng)混合物。將殘留物上載至SCX層析柱(50g)上，依次用MeOH和10％的氨的MeOH溶液洗脫。合并合適的流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物(0.555g)。LCMS RT＝2.45分鐘，ES+ve m/z 354/356[M+H]+。
中間體7 (3Z)-3-{[4-(甲氧基)苯基]亞甲基}-2-苯并呋喃-1(3H)-酮 在Dean-Stark裝置和氮氣中加熱4-甲氧基苯乙酸(購自例如Aldrich)(13.948g，83.94mmol)、鄰苯二甲酸酐(購自例如Aldrich)(12.43g，83.94mmol)和乙酸鈉(276mg，3.4mmol)的混合物至240℃2.5h，冷卻至室溫過夜，然后再加熱7h。在氮氣中冷卻混合物，并在其固化前加入EtOH使其迅速結(jié)晶。過濾收集晶體，用少量EtOH洗滌，干燥得標(biāo)題化合物(15.8g，75％)。LCMS RT＝3.45分鐘，ES+ve m/z 253[M+H]+。
中間體8 4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮 用NaOH溶液(2M，70ml)、水(70ml)和EtOH(20ml)處理(3Z)-3-{[4-(甲氧基)苯基]亞甲基}-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(例如如中間體7所制備)(15.8g，62.7mmol)和硫酸肼(9g，69mmol)的混合物，加熱混合物至95℃ 18h。繼續(xù)加入硫酸肼(0.9g，6.9mmol)和NaOH溶液(2M，10ml)，繼續(xù)加熱混合物7h，然后冷卻至室溫過周末。用水(750ml)稀釋反應(yīng)混合物，過濾收集固體。固體用水洗滌，真空干燥得標(biāo)題化合物(15.25g，91％)。LCMS RT＝2.76分鐘，ES+ve m/z 267(M+H)+。
中間體9 (2R)-2-{[4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯 將20℃的4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體8所制備)(1.46g，5.5mmol)和N-Boc-D-脯氨醇(購自例如Fluka)(1.08g，5.36mmol)的THF(20ml)混合物加入-15℃的三苯基膦(2.81g，10.7mmol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(1.85g，8.04mmol)的THF(20ml)混合物中。在氮氣中攪拌混合物，同時升溫至室溫過夜。減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，通過層析純化殘留物(Flashmaster II，兩根100g硅膠層析柱)，用60分鐘內(nèi)0-100％ EtOAc-環(huán)己烷洗脫。合并合適的流分，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(2.19g，91％)。LCMS RT＝3.49分鐘，ES+ve m/z 450[M+H]+。
中間體10 4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮 室溫用TFA(5ml)處理(2R)-2-{[4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體所制備9)(1.4g，3.1mmol)的DCM(20ml)溶液。攪拌混合物0.45分鐘，然后濃縮減壓。在SCX-2層析柱(20g)上純化殘留物，依次用MeOH和10％的氨的MeOH溶液洗脫。合并含氨流分，濃縮減壓得標(biāo)題化合物(1.08g)。LCMS RT＝2.25分鐘，ES+ve m/z 350[M+H]+。
中間體11 (2R)-2-[(4-氯-1-氧代-2(1H)-酞嗪基)甲基]-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯在-10℃向三苯基膦(3.06g，11.6mmol)的無水THF(26ml)溶液加入偶氮二甲酸二異丙酯(1.95ml，9.9mmol)。在-10℃至-5℃攪拌所得懸浮液10分鐘。向所述懸浮液加入4-氯-1(2H)-酞嗪酮(購自例如Acros)(0.8g，4.43mmol)和N-Boc-D-脯氨醇(購自例如Fluka)(1.15g，5.7mmol)的THF(27ml)懸浮液。使懸浮液升溫至20℃，攪拌1.5h。用MeOH(10ml)猝滅懸浮液，真空去除溶劑。殘留物(5.63g)通過MDAP HPLC(100g硅膠層析柱)純化，利用EtOAc-環(huán)己烷梯度得標(biāo)題化合物(2.213g)。LCMS RT＝3.30分鐘，ES+ve m/z 364和366(M+H)+。
中間體12 4-氯-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮 向粗產(chǎn)物(2R)-2-[(4-氯-1-氧代-2(1H)-酞嗪基)甲基]-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體所制備11)(2.213g，6.1mmol)的二氧六環(huán)(10ml)溶液加入4.0M的HCl的二氧六環(huán)(10ml)溶液。20℃攪拌混合物1.5h。真空去除溶劑，將殘留物上載至SCX層析柱(2×20g)上。依次用MeOH(2CV)和10％ 0.88的氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.816g)。RT＝1.79分鐘，ES+vem/z 264和266(M+H)+ 中間體13 4-氯-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮 向4-氯-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體12所制備)(0.206g，0.78mmol)的MeCN(3ml)輕微懸浮液依次加入4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基甲磺酸酯(例如如中間體35所制備)(0.2g，0.52mmol)和碳酸氫鈉(0.087g，1.04mmol)。加熱懸浮液至80℃ 5天。將混合物上載至SCX層析柱(20g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88的氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分，將殘留物(0.27g)溶解在MeOH(2ml)中，用TFA(0.12ml，1.61mmol)處理。通過MDAP(將樣品分為4份)純化溶液得膠狀物(0.173g)，將其上載至SCX層析柱(5g)上。依次用MeOH(2CV)和10％ 0.88的氨水的MeOH溶液(2CV)洗滌層析柱。真空濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.109g)。LCMS RT＝2.27分鐘，ES+vem/z 551(M+H)+和276+277(M/2+H)+ 中間體14 4-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯 分批向4-氧代六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如專利申請WO2000/00203A1所公開，見實施例1A)(2.146g，10.0mmol)的MeOH(60ml)溶液加入硼氫化鈉(購自例如Aldrich)(0.426g，12.2mmol)。20℃攪拌溶液1.5h。用MeOH和水(1:1，10ml)小心猝滅溶液。真空去除溶劑。使殘留物分配在EtOAc(100ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)中。分層，用鹽水(50ml)洗滌有機(jī)萃取物。MgSO4干燥有機(jī)萃取物。真空去除溶劑得標(biāo)題化合物蠟狀固體(2.094g，97％)。LCMSRT＝2.40分鐘，ES+ve m/z 216(M+H)+。
中間體15 4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯 在-15℃向三苯基膦(2.77g，10.57mmol)的無水四氫呋喃(10ml)溶液加入偶氮二甲酸二異丙酯(1.77ml，9mmol)。在-15℃至-20℃攪拌所得懸浮液5分鐘。在-20℃向混合物滴加4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如美國專利1,377,231所公開，見實施例9，步驟1)(0.887g，3.23mmol)和4-羥基六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體14所制備)(1.0g，4.64mmol)的無水THF(20ml)溶液。6.5h內(nèi)使懸浮液逐漸升溫至20℃。用MeOH(10ml)猝滅混合物，真空去除溶劑。通過層析(Flashmaster II，兩根100g硅膠層析柱)純化殘留物(7.3g)，用60分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc-環(huán)己烷洗脫得標(biāo)題化合物(2.5g)。LCMS RT＝3.85分鐘，ES+ve m/z 468(M+H)+。
中間體16 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮 向4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體15所制備)(2.5g，5.34mmol)的1，4-二氧六環(huán)(10ml)溶液加入HCl/1，4-二氧六環(huán)(4.0M，10ml)。20℃攪拌溶液1.5h。真空去除溶劑，將殘留物上載至SCX層析柱(50g，用MeOH預(yù)洗)上，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88的氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。合并堿性流分，真空濃縮得淺黃色油狀物(1.179g)。殘留物通過層析(Flashmaster II，70g層析柱)進(jìn)一步純化，用包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH洗脫得標(biāo)題化合物(0.787g)。LCMS RT＝2.44分鐘，ES+ve m/z 368[M+H]+。
中間體16也可通過利用TFA作為去保護(hù)酸制備。
中間體17 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[(4-羥基苯基)甲基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮甲酸鹽 用三乙酰氧基硼氫化鈉(230mg，1mmol)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(100mg，0.27mmol)和4-羥基苯甲醛(購自例如Aldrich)(33.2mg，0.27mmol)的DCM(2ml)溶液和1滴乙酸的混合物，在氮氣中攪拌過夜。繼續(xù)加入醛(10mg)和三乙酰氧基硼氫化鈉(57.6mg)。2.5h后，使反應(yīng)混合物分配在EtOAc和碳酸氫鈉溶液中。用碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥，蒸發(fā)。將殘留物(90mg)溶解在MeOH-DMSO(1:1；0.8ml)中，通過MDAP HPLC純化得標(biāo)題化合物(19.2mg)LCMS RT＝2.69分鐘，ES+ve m/z 474(M+H)+。還獲得第二較不純的流分(34.7mg)，不進(jìn)一步純化而用于下步反應(yīng)。
中間體18 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-({4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}甲基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮 用碳酸鉀(15.7mg)和1-溴-3-氯丙烷(購自例如Aldrich)(0.1ml)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[(4-羥基苯基)甲基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮甲酸鹽(例如如中間體17所制備)(53.9mg，0.1mmol)的2-丁酮(2ml)溶液，在氮氣中加熱混合物至80℃過夜。繼續(xù)加入碳酸鉀(47.1mg)和1-溴-3-氯丙烷(0.056ml)，繼續(xù)加熱混合物4天。繼續(xù)加入碳酸鉀(49mg)、1-溴-3-氯丙烷(0.056ml)和2-丁酮(2ml)，繼續(xù)加熱混合物4h。然后減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，使殘留物分配在EtOAc和碳酸氫鈉溶液中。用碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥，蒸發(fā)。殘留物通過層析(Flashmaster II，5g層析柱)純化，用0-25％MeOH-DCM洗脫，然后在第二根硅膠層析柱(10g)上層析，依次用DCM與2％、4％和5％ MeOH-DCM洗脫。合并合適的流分，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(15mg)LCMS RT＝3.03分鐘，ES+ve m/z 550/552(M+H)+。
中間體19 (2-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}乙基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯 依次用4-甲基苯磺酸2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基酯(例如如L.E.Canne，R.L.Winston，S.B.H.Kent，Tet.Lett.，383361-4，(1997)所公開，見化合物2)(0.15g，0.47mmol)的丙酮(2ml)溶液、碘化鈉(64.7mg，0.43mmol)和DIPEA(51.8μl，0.43mmol)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(0.16g，0.43mmol)的丙酮(5ml)溶液，在氮氣中加熱混合物至66℃過夜。第二天早上加入另一份4-甲基苯磺酸2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基酯(75mg)和DIPEA(26μl)，繼續(xù)加熱混合物一天。然后將混合物上載至SCX-2層析柱(20g)上，用MeOH洗滌，用10％的氨的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分，殘留物通過層析(Flashmaster II，50g層析柱)純化，用30分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH洗脫得標(biāo)題化合物(133.8mg)。LCMSRT＝2.80分鐘，ES+ve m/z 511[M+H]+。
中間體20 2-[1-(2-氨基乙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽 在室溫用HCl的二氧六環(huán)溶液(4M，1ml)處理(2-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}乙基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體19所制備)(133.8mg)的DCM(5ml)溶液。2h后，繼續(xù)加入HCl(4M，0.5ml)，減壓蒸發(fā)混合物得標(biāo)題化合物(69.6mg)LCMS RT＝2.25分鐘，ES+ve m/z 411(M+H)+。
中間體21 (3-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丙基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯 依次用4-甲基苯磺酸3-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丙基酯(例如如S.Kondo，H.Iwasawa，D.Ikeda，Y.Umeda，Y.Ikeda，H.Iinuma，H.Umezawa，J.Antibiotics，341625-7，(1981)所公開)(156mg，0.47mmol)的丙酮(2ml)溶液、碘化鈉(64.7mg，0.43mmol)和DIPEA(51.8μl，0.43mmol)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(0.16g，0.43mmol)的丙酮(5ml)溶液，在氮氣中加熱混合物至66℃過夜。然后將混合物上載至SCX-2層析柱(20g)上，用MeOH洗滌，用10％的氨的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分，殘留物通過層析(Flashmaster II，50g層析柱)純化，用30分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH洗脫得標(biāo)題化合物(241mg)。LCMS RT＝2.81分鐘，ES+ve m/z 525[M+H]+。
中間體22 2-[1-(3-氨基丙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽 在室溫用HCl的二氧六環(huán)溶液(4M，1ml)處理(3-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丙基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體21所制備)(241.4mg)的DCM(5ml)溶液。2h后，減壓蒸發(fā)混合物得標(biāo)題化合物(114mg)LCMS RT＝2.22分鐘，ES+ve m/z 425(M+H)+。
中間體23 (4-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丁基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯 依次用4-甲基苯磺酸4-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁基酯(例如如W.Hu，E.Reder，M.Hesse，Helv.Chim.Acta，1996，79，2137-51所公開，見化合物6)(163mg，0.47mmol)的丙酮(2ml)溶液、碘化鈉(64.7mg，0.43mmol)和DIPEA(51.8μl，0.43mmol)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(0.16g，0.43mmol)的丙酮(5ml)溶液，在氮氣中加熱混合物至66℃過夜。然后將混合物上載至SCX-2層析柱(20g)上，用MeOH洗滌，用10％的氨的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分，殘留物通過層析(Flashmaster II，50g層析柱)純化，用30分鐘內(nèi)包含1％NEt3-DCM的0-30％ MeOH洗脫得標(biāo)題化合物(118.6mg)。LCMS RT＝2.83分鐘，ES+ve m/z 539[M+H]+ 中間體24 2-[1-(4-氨基丁基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽 在室溫用HCl的二氧六環(huán)溶液(4M，1ml)處理(4-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丁基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體23所制備)(118.6mg)的DCM(5ml)溶液。2h后，減壓蒸發(fā)混合物得標(biāo)題化合物(108.8mg)LCMS RT＝2.25分鐘，ES+ve m/z 439(M+H)+。
中間體25 2-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}乙醇 將4-(2-羥乙基)苯酚(購自例如Aldrich)(10g，72mmol)溶解在2-丁酮(250ml)中，然后加入碳酸鉀(19.9g，0.144摩爾)，接著加入1-溴-3-氯丙烷(購自例如Aldrich)(8.54ml，0.144摩爾)，80℃加熱反應(yīng)混合物18h。用水(500ml)稀釋冷卻的反應(yīng)混合物，分層，用DCM(2×200ml)萃取水溶液。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取液，真空蒸發(fā)，通過Flashmaster II(3×100g硅膠層析柱)純化，用40分鐘內(nèi)0-100％EtOAc-環(huán)己烷洗脫得標(biāo)題化合物(14.12g)。LCMS RT＝2.84分鐘，ES+ve m/z 232[M+H]+。
中間體26 2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙醇 用碳酸鉀(17.96g，0.13摩爾)、碘化鉀(1.24g，7.5mmol)和六氫-1H-氮雜

(購自例如Aldrich)(14.71ml，0.1308摩爾)處理2-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}乙醇(例如如中間體25所制備)(14g，0.065摩爾)的2-丁酮(200ml)溶液，在氮氣中80℃加熱18h。用水(300ml)稀釋冷卻的反應(yīng)混合物，分層，用DCM(2×200ml)萃取水溶液。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取物，真空蒸發(fā)得黃色油狀物(23g)。部分黃色油狀物(10g)通過Flashmaster II(100g硅膠層析柱)純化，依次用15分鐘內(nèi)0-100％ EtOAc-環(huán)己烷、100％ EtOAc 10分鐘、0-10％(10％氨水-MeOH)-DCM 15分鐘以及10％(10％氨水-MeOH)-DCM 10分鐘洗脫得標(biāo)題化合物(5.3g)。LCMS RT＝1.9分鐘，ES+ve m/z 278[M+H]+。
中間體27 甲磺酸2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基酯 制備A 將2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙醇)(例如如中間體26所制備)(273mg，0.98mmol)溶解在DCM(5ml)中，用DIPEA(0.204ml，1.2mmol)和甲磺酰氯(0.093ml，1.2mmol)處理。室溫攪拌混合物3h。繼續(xù)加入甲磺酰氯(0.020ml，0.26mmol)，繼續(xù)攪拌45分鐘。向混合物加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)。分層，繼續(xù)用DCM洗滌水溶液。真空濃縮合并的DCM萃取物得標(biāo)題化合物，不進(jìn)一步純化而直接使用。LCMS RT＝2.18分鐘，ES+ve m/z 356[M+H]+。
制備B 可以類似于中間體35的方法利用2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙醇(例如如中間體26所制備)(0.080g，0.29mmol)制備中間體27，得標(biāo)題化合物(0.101g，100％)。LCMS RT＝2.18分鐘，ES+ve m/z 356[M+H]+。
中間體28 3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙酸乙酯， -20℃攪拌下將3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)-1-丙醇(例如如E.L.Strogryn，J.Med.Chem.，13864-6，(1970)所公開)(412mg，3mmol)和(4-羥基苯基)丙酸乙酯(購自例如Maybridge)(641mg，3.3mmol)加入到三苯基膦(1.02g，3.9mmol)和偶氮二甲酸二異丙酯(0.66ml，3.9mmol)的THF(15ml)混合物中。10分鐘后，使溶液升溫至21℃。18h后，LCMS表明原料不再明顯存在。加入MeOH猝滅任何過量試劑，蒸干混合物。將殘留物上載至兩根100g Flashmaster II硅膠層析柱上，以40分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc的環(huán)己烷溶液運(yùn)行。層析柱利用40分鐘內(nèi)0-25％的MeCH的EtOAc溶液再次運(yùn)行。UV-檢測器沒有檢測到產(chǎn)物，因此蒸發(fā)洗脫液得粗產(chǎn)物(782mg)。在以40分鐘內(nèi)0-50％ MeOH的DCM溶液運(yùn)行的50g硅膠層析柱上對其進(jìn)行進(jìn)一步純化得標(biāo)題化合物(306mg)。LCMSRT＝2.39分鐘，ES+ve m/z 334[M+H]+。
中間體29 3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-丙醇 在氮氣和THF(5ml)中攪拌3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙酸乙酯(例如如中間體28所制備)(306mg，0.92mmol)，在21℃約20秒內(nèi)加入氫化鋰鋁的乙醚(1M，0.5ml)溶液。30分鐘后，LCMS表明反應(yīng)完成。加入含水THF，10分鐘后加入Na2SO4。過濾混合物，蒸干濾液和固體濾餅的浸出液。為去除最后的痕量Na2SO4，將殘留物溶解在EtOAc中，濾過棉花塞。蒸發(fā)得標(biāo)題化合物，LCMSRT＝2.04分鐘，ES+ve m/z 292[M+H]+。
中間體30 4-甲基苯磺酸3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙基酯和1-(3-{[4-(3-氯丙基)苯基]氧基}丙基)六氫-1H-氮雜

的混合物(3:2) 在包含吡啶(0.2ml，2.5mmol)的DCM(2ml)中攪拌3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-丙醇(例如如中間體29所制備)(146mg，0.5mmol)，冰水冷卻，加入甲苯磺酰氯(115mg，0.6mmol)。10分鐘后，使混合物升溫至21℃。2h后，LCMS表明反應(yīng)完成。繼續(xù)加入甲苯磺酰氯(60mg，0.31mmol)，攪拌繼續(xù)5h。反應(yīng)不完全。使混合物在21℃靜置三天，然后繼續(xù)加入甲苯磺酰氯(60mg，0.31mmol)和吡啶(0.1ml，1.25mmol)。繼續(xù)攪拌3h后，LCMS表明僅剩少量原料。蒸發(fā)混合物至油狀物。將其溶解在DCM中，上載至50g Flashmaster II硅膠層析柱上。層析柱以30分鐘內(nèi)0-50％ MeOH的DCM溶液運(yùn)行。蒸發(fā)包括雙峰的洗脫液得粗標(biāo)題混合物(133mg)，甲苯磺酸鹽LCMS RT＝2.79分鐘，ES+ve m/z 446[M+H]+，氯類似物L(fēng)CMS RT＝2.59分鐘，ES+ve m/z 310和312[M+H]+以及甲苯磺酸RT＝2.31分鐘ES-ve m/z 171[M-H]-。將該混合物用于下步反應(yīng)。
中間體31 1-[(3-氯丙基)氧基]-4-碘苯 在氮氣氣氛中回流攪拌4-碘苯酚(購自例如Aldrich)(20g)、1-溴-3-氯丙烷(購自例如Aldrich)(17.91g)和碳酸鉀(25.2g)的2-丁酮(400ml)混合物18h。冷卻混合物，過濾。蒸發(fā)濾液，將殘留物溶解在環(huán)己烷中，在100g硅膠層析柱上通過Flashmaster II純化，依次用環(huán)己烷和20％的EtOAc的環(huán)己烷溶液洗脫。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物無色油狀物(15.928g)，靜置結(jié)晶。LCMS RT＝3.70分鐘。從另一組流分中蒸發(fā)溶劑得另一部分標(biāo)題化合物的淺黃色油狀物(6.668g)，靜置固化。1H NMR(CDCl3)δ 2.23(2H，五重峰，J＝6Hz)，3.74(2H，t，J＝6Hz)，4.09(2H，t，J＝6Hz)，6.70(2H，m)，7.57(2H，m)。
中間體32 1-{3-[(4-碘苯基)氧基]丙基}六氫-1H-氮雜
在80℃和氮氣氣氛中攪拌1-[(3-氯丙基)氧基]-4-碘苯(例如如中間體31所制備)(15.855g)、碘化鈉(8g)和六亞甲基亞胺(購自例如Aldrich)(15.1ml)的2-丁酮(200ml)混合物約22h。過濾反應(yīng)混合物，蒸發(fā)濾液得米色殘留物。用乙醚研磨該物質(zhì)，過濾回收得灰白色固體。
使固體分配在DCM(200ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(200ml)中。無水Na2SO4干燥有機(jī)層，蒸發(fā)得殘留物，在50g硅膠層析柱上通過Flashmaster II層析純化，使用50分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％MeOH梯度。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物黃色固體(1.2708g)。LCMS RT＝2.39分鐘，ES+ve m/z 360[M+H]+。蒸發(fā)研磨物的濾液得褐色殘留物，在2×100g硅膠層析柱上通過Flashmaster II層析純化，使用50分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH梯度。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物黃色油狀物(15.9g)。LCMS RT＝2.40分鐘，ES+ve m/z 360[M+H]+。
中間體33 4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-3-丁炔-1-醇 在氮氣氣氛中室溫攪拌1-{3-[(4-碘苯基)氧基]丙基}六氫-1H-氮雜

(例如如中間體32所制備)(1.268g)、3-丁炔-1-醇(購自例如Aldrich)(668μl)、NEt3(2.5ml)、氯化二(三苯基膦)合鈀(II)(124mg)和碘化銅(I)(34mg)的THF(15ml)混合物約5h。過濾(60ml PTFE濾管)混合物，蒸發(fā)濾液得殘留物。在100g硅膠層析柱上通過FlashmasterII層析純化該物質(zhì)，使用60分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH梯度。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得殘留物，將殘留物溶解在MeOH中，上載至SCX離子交換層析柱(50g)。用MeOH洗滌層析柱，然后用2M氨的MeOH溶液洗脫。從含氨流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物暗黃色殘留物(823mg)。LCMS RT＝2.10分鐘，ES+ve m/z 302[M+H]+。
中間體34 4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-丁醇 向4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-3-丁炔-1-醇(例如如中間體33所制備)(823mg)的EtOH(20ml)溶液加入1.25M HCl的MeOH(3.25ml)溶液，10％ w/w Pd/C(350mg)氫化所得混合物約4h。使反應(yīng)混合物濾過Celite硅藻土，蒸發(fā)溶劑。將殘留物溶解在DCM(125ml)中，用2N NaOH(100ml)和鹽水(100ml)洗滌所得溶液，無水Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物暗黃色殘留物(726mg)。LCMS RT＝2.18分鐘，ES+ve m/z 306[M+H]+。
中間體35 甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯 依次向4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-丁醇(例如如中間體34所制備)(0.077g，0.25mmol)的無水DCM(2ml)溶液加入DIPEA(0.053ml，0.30mmol)和甲基磺酰氯(0.023ml，0.30mmol)。
20℃攪拌溶液2h。用DCM(10ml)和飽和碳酸氫鈉(10ml)稀釋溶液。振蕩兩相混合物，利用憎水玻璃料分層。真空去除有機(jī)相得標(biāo)題化合物(0.09g)。LCMS RT＝2.43分鐘，ES+ve m/z 384[M+H]+。
中間體36 1-{3-[(4-溴苯基)氧基]丙基}六氫-1H-氮雜
加熱1-溴-4-[(3-氯丙基)氧基]苯(例如如R.Faghih，W.Dwight，A.Vasudevan，J.Dinges，S.E.Conner，T.A.Esbenshade，Y.L.Bennani，A.A.Hancock，Biorg.Med.Chem.Lett.，123077-9，(2002)所公開，見流程1)(25mmol)、六亞甲基亞胺(購自例如Aldrich)(6ml，50mmol)、碘化鈉(300mg，2mmol)和碳酸鉀(3.45g，25mmol)的丙酮(50ml)混合物至78℃過夜。冷卻混合物至室溫，過濾去除固體。減壓蒸發(fā)濾液，將殘留物溶解在EtOAc中，用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，MgSO4干燥，減壓蒸發(fā)。將殘留物溶解在MeOH中，上載至SCX-2層析柱(70g)，依次用MeOH和10％的氨的MeOH溶液洗脫。合并含氨流分，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(6.866g)。LCMS RT＝2.28分鐘，ES+ve m/z312/314(M+H)+。
中間體37 1-[3-({4-[(1E)-4，4-二(乙氧基)-1-丁烯-1-基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜
在氮氣和冰浴中用9-BBN的THF(0.5m，50ml)溶液處理3-丁烯醛縮二乙醇(購自例如Aldrich)(4.14ml，24.4mmol)的THF(7ml)溶液，攪拌溶液3h。同時，用碳酸鉀(10.11g，73.2mmol)和二氯[1，1’-二(二苯基膦)二茂鐵]合鈀(536mg，0.73mmol)處理1-{3-[(4-溴苯基)氧基]丙基}六氫-1H-氮雜

(例如如中間體36所制備)(6.866g，22mmol)的DMF(7ml)溶液，然后用上述溶液緩慢處理。然后在氮氣中加熱混合物至70℃ 3h，然后在80℃加熱過夜。冷卻混合物至室溫，用EtOAc和水稀釋。用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)溶液，干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)。將殘留物(11.12g)溶解在DCM(30ml)中，通過層析(Flashmaster II，3×100g硅膠層析柱)純化，用40分鐘內(nèi)包含1％NEt3-DCM的0-15％ MeOH洗脫。合并合適的流分，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(6.14g)與1-[3-({4-[4，4-二(乙氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

的1:1混合物L(fēng)CMS RT＝2.5分鐘，ES+ve m/z 376/378(11)(M+H)+。
中間體38 1-[3-({4-[4，4-二(乙氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜
在10％ Pd/C(0.6g)上氫化包含1-[3-({4-[4，4-二(乙氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

的1-[3-({4-[(1E)-4，4-二(乙氧基)-1-丁烯-1-基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

(例如如中間體37所制備)(1:1，6.14g)的EtOH(120ml)溶液。4h后，過濾收集催化劑，用EtOH洗滌，減壓蒸發(fā)濾液和洗滌物。殘留物通過層析(Flashmaster II，2×100g硅膠層析柱)純化，用40分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-15％ MeOH洗脫。合并合適的流分，減壓蒸發(fā)得3.5g不純產(chǎn)物，在100g硅膠層析柱上通過Flashmaster I層析進(jìn)一步純化，用0-15％(10％的氨水的EtOH溶液)-DCM洗脫得標(biāo)題化合物和1-[3-(苯氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

的混合物(1.78g，4:1)LCMS RT＝2.59分鐘ES+ve m/z 378(M+H)+。合并剩余流分，減壓蒸發(fā)得較不純的產(chǎn)物(1.782g)，在Flashmaster I(100g硅膠層析柱)上層析，用0-15％ MeOH-EtOAc洗脫。合并合適的流分，蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(410mg)LCMS RT＝2.58分鐘ES+ve m/z 378(M+H)+。
中間體39 1-[3-({4-[4，4-二(甲氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜
將1-[3-({4-[4，4-二(乙氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

(例如如中間體38所制備)的MeOH溶液上載至SCX-2層析柱(20g)，用3CV MeOH洗滌。然后用10％的氨的MeOH溶液洗脫層析柱，合并含氨流分，蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(243mg)LCMS RT＝2.43分鐘ES+ve m/z 350(M+H)+。
中間體40 4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁醛乙酸鹽 在氮氣中加熱1-[3-({4-[4，4-二(甲氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

(例如如中間體39所制備)(243mg，0.6mmol)的乙酸(5ml)和水(3ml)溶液至60℃ 2h。然后減壓蒸發(fā)混合物得標(biāo)題化合物(305mg)LCMS RT＝2.20分鐘ES+ve m/z 304(M+H)+。
中間體41 5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊酸甲酯 -20℃攪拌三苯基膦(1.84g，7.0mmol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(1.61g，7mmol)的THF(30ml)溶液，10分鐘后，加入3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)-1-丙醇(例如如E.L.Strogryn，J.Med.Chem.，1970，13，864-866所公開)(1.0g，6.35mmol)和5-(4-羥基苯基)戊酸甲酯(以類似于Yi，Ching Sui；Martinelli，Louis C.；Blanton，C.DeWitt，Jr.J.Org.Chem.，43405-9，(1978)(化合物17)所述方法制備，但用室溫下的硫酸代替回流的鹽酸)(1.32g，6.35mmol)各自的THF(約4ml)溶液。1小時內(nèi)使溶液升溫至室溫，然后加熱至75℃ 48h，此時不再發(fā)生反應(yīng)。蒸干溶液，將殘留物溶解在MeOH中，上載至已用MeOH預(yù)處理過的SCX-2層析柱(70g)。用MeOH洗脫層析柱，然后用10％ 0.88的氨水的MeOH溶液洗脫產(chǎn)物。蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(1.52g)。LCMS RT＝2.55分鐘，ES+ve m/z 348[M+H]+。
中間體42 5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-戊醇 在氮氣和THF(30ml)中攪拌5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊酸甲酯(例如如中間體41所制備)(1.52g，4.37mmol)，約1分鐘內(nèi)加入氫化鋰鋁的乙醚溶液(1M，2.2ml)。15分鐘后，LCMS表明反應(yīng)完成。加入含水THF，10分鐘后，加入Na2SO4。過濾混合物，蒸發(fā)濾液得標(biāo)題化合物油狀物(0.95g)LCMS RT＝2.34分鐘，ES+ve m/z 320[M+H]+。
中間體43 甲磺酸5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊基酯 在室溫和氮氣中攪拌5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)-1-戊醇(例如如中間體42所制備)(0.12g，0.37mmol)和甲磺酰氯(0.035ml，0.45mmol)的DCM(3ml)溶液，加入DIPEA(0.078ml，0.45mmol)。3h后，反應(yīng)完成。用DCM稀釋溶液，用碳酸氫鈉溶液洗滌。用DCM萃取水層，用水洗滌合并的有機(jī)層，MgSO4干燥，蒸發(fā)得標(biāo)題化合物油狀物(148mg)LCMS RT＝2.60分鐘，ES+ve m/z 398[M+H]+。
中間體44 3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]-1-丙醇 回流加熱和攪拌3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-醇(例如如專利申請WO2004/056369A1所公開，見實施例3)(5g)、碳酸鉀(7.95g)和3-溴-1-丙醇(購自例如Aldrich)(2.18ml)的2-丁酮(115ml)混合物約18h。過濾混合物，蒸發(fā)得殘留物，將其溶解在DCM中，在100g硅膠層析柱上通過Flashmaster II層析純化，用40分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-30％ MeOH梯度洗脫。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物粗樣品(3.375g)，在KP-Sil 40M層析柱上通過Biotage快速層析進(jìn)一步純化，用3％(2M氨的MeOH溶液)的DCM洗脫。從合適的流分中蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物(2.3g)。LCMS RT＝1.80分鐘，ES+ve m/z 276[M+H]+。
中間體45 甲磺酸3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基酯 將3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]-1-丙醇(例如如中間體44所制備)(55mg，0.2mmol)溶解在DCM(1.5ml)中，用DIPEA(0.042ml，0.24mmol)和甲磺酰氯(0.017ml，0.24mmol)處理。在氮氣氣氛中室溫攪拌混合物2h，然后真空濃縮得標(biāo)題化合物，不進(jìn)一步純化而用于下步反應(yīng)。LCMS RT＝2.09分鐘，ES+ve m/z 354[M+H]+。
中間體46 7-[(3-氯丙基)氧基]-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜
依次向3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-醇(例如如專利申請WO2004/056369A1所公開，見實施例3)(0.3g，1.38mmol)的丙酮(3ml)懸浮液加入碳酸鉀(0.253g，1.83mmol)和1-溴-3-氯丙烷(購自例如Aldrich)(0.150ml，1.52mmol)。35分鐘后加入另一份碳酸鉀(0.140g，1.0mmol)。回流加熱懸浮液23h。蒸發(fā)溶劑過夜。使混合物分配在EtOAc(50ml)和水(40ml)中。分層，用水洗滌(2×40ml)有機(jī)相，MgSO4干燥，過濾。真空去除溶劑得標(biāo)題化合物(0.3g，74％)。LCMSRT＝2.27分鐘，ES+ve m/z 294/296(M+H)+ 中間體47 3-環(huán)丁基-8-羥基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲醛 在氮氣中滴加甲基溴化鎂的乙醚溶液(3M，3.1ml)處理3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-醇(例如如專利申請WO2004/056369A1所公開，見實施例3)(2g)的THF(20ml)溶液。攪拌懸浮液10分鐘，然后用甲苯(100ml)稀釋。加入多聚甲醛(1g)和NEt3(1.5g)，80℃加熱混合物3h。用2MHCl(50ml)處理冷卻后的混合物，攪拌10分鐘。用飽和碳酸氫鈉水溶液小心堿化混合物，并萃取到EtOAc中。蒸發(fā)干燥(Na2SO4)過的有機(jī)相，通過硅膠(20g)柱層析純化殘留物，用DCM-MeOH-氨水(95:5:0.5)洗脫得標(biāo)題化合物(1.4g)。LCMS RT＝1.55分鐘。
中間體48 3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲醛 用1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三氟甲基)磺?；鵠甲磺酰胺(購自例如Aldrich)(14g)分批處理3-環(huán)丁基-8-羥基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜環(huán)庚烯-7-甲醛(例如如中間體47所制備)(8.5g)和NEt3(20ml)的DMF(60ml)溶液。攪拌混合物16h，加入乙酸鈀(II)(300mg)、1，3-二(二苯基膦)丙烷(520mg)和三辛基硅烷(20ml)。在氮氣中和75℃加熱混合物2h，冷卻，在水和DCM中分配。蒸發(fā)干燥(Na2SO4)過的有機(jī)相，通過硅膠(150g)柱層析純化殘留物，用DCM-MeOH-氨水(98:2:0.2)洗脫，通過硅膠(150g)柱層析純化進(jìn)一步純化，用EtOAc-MeOH-氨水(95:5:0.5)洗脫得標(biāo)題化合物(7.4g)LCMS RT＝1.56分鐘。
中間體49 2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸乙酯 在靜態(tài)氬氣中回流(熱浴溫度71℃)7-氰基-1，2，4，5-四氫-3H-苯并氮雜環(huán)庚烯-3-甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如專利申請EP0528369A2所公開，見實施例17)(3.7g，13.6mmol)在預(yù)先混合好的三甲基氯硅烷(25ml)-EtOH(15ml)中的溶液過夜。在最初升溫至回流的過程中劇烈冒泡。5天后，加入其他等分三甲基氯硅烷和EtOH直至總共加入了103ml三甲基氯硅烷(0.81摩爾)和EtOH(69ml，1.17摩爾)。冷卻反應(yīng)物，冰浴冷卻下緩慢加入水(100ml)，保持溫度<40℃。15分鐘后，升溫至24℃，加入2N NaOH直至pH>13。用DCM萃取溶液(2×500ml)，用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，干燥，蒸發(fā)得粗產(chǎn)物(2.59g)。去除0.13g后，通過硅膠層析(200g Biotage柱)純化殘留物，用DCM-2M氨的MeOH溶液洗脫(10:1)得標(biāo)題化合物(2.3g，81％)。TLC(硅膠)Rf＝0.10 DCM-2N氨的MeOH溶液，20:1 中間體50 3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸乙酯 在氬氣中和冰浴冷卻下攪拌2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸乙酯(例如如中間體49所制備)(2.3g，10.5mmol)的DCM(30ml)-乙酸(0.3ml)溶液，加入環(huán)丁酮(購自例如Aldrich)(1.24ml，16.5mmol)。30分鐘后，在10℃分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.5g，16.5mmol)。移除冰浴，在環(huán)境溫度攪拌混合物17h，然后倒入DCM(50ml)-飽和碳酸鉀溶液(50ml)中。利用2N NaOH水溶液堿化兩相混合物至pH13。分層，用DCM(80ml)萃取水溶液，用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥，蒸發(fā)得(標(biāo)題化合物)結(jié)晶固體(2.8g，97％)。TLC(硅膠)Rf＝0.67DCM-2N氨的MeOH溶液(20:1) 中間體51 3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸 攪拌下用2N NaOH(10ml)處理3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸乙酯(例如如中間體50所制備)(2.7g，10mmol)的EtOH(35ml)溶液。在環(huán)境溫度27h后，用約10ml 2N HCl小心酸化溶液至pH6。蒸發(fā)溶液，用氯仿處理殘留物，真空濃縮干。將固體殘留物溶解在預(yù)先混合的1:1 氯仿:MeOH(50ml)中，使固體濾過Celite硅藻土。蒸發(fā)溶液，用氯仿處理殘留物，真空濃縮干得具有約25mol％氯仿的標(biāo)題化合物(3.2g，定量)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 7.84(1H，d)，7.83(1H，s)，7.26(1H，d)，3.63(1H，m)，3.20(8H，br s)，2.35(4H，m)，1.88(1H，m)，1.77(1H，m)。
中間體52 4-(2-{[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯酚 在21℃和氮氣中攪拌4-(2-羥乙基)苯酚(購自例如Aldrich)(8.28g，0.06摩爾)和叔丁基二甲基氯硅烷(9.9g，0.066摩爾)與咪唑(8.4g，0.123摩爾)的DMF(60ml)溶液19h。10％ EtOAc-環(huán)己烷TLC表明反應(yīng)完成。蒸發(fā)溶液至漿狀物，使其分配在乙醚和水中，加2N HCl得pH 3。用更多乙醚萃取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，MgSO4干燥，蒸發(fā)。將殘留物溶解在DCM中，上載至已在DCM中制好的硅膠凝膠柱(500g)上。用DCM洗脫柱子得標(biāo)題化合物(13.09g)。LCMS RT＝3.78分鐘，ES+ve m/z 253[M+H]+ 中間體53 4-{[4-(2-{[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯基]氧基}-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯 攪拌和0℃下向4-(2-{[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)硅基]氧基}乙基)苯酚(例如如中間體52所制備)(0.96g，3.8mmol)、4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁基酯(購自例如Aldrich)(0.842g，4.18摩爾)和三苯基膦(1.09g，4.18mmol)的無水THF(10ml)混合物分批加入偶氮二甲酸二叔丁酯(0.963g，4.18mmol)。一旦加完，使混合物升溫至室溫，在氮氣中攪拌3h。真空濃縮反應(yīng)混合物，然后用乙醚(20ml)研磨三次，過濾去除三苯基氧化膦。真空濃縮乙醚。完全如上，以1mmol規(guī)模重復(fù)所述實驗，在硅膠層析柱(100g)上利用Flashmaster II純化合并的粗產(chǎn)物(3.3g)。首先將粗產(chǎn)物預(yù)吸附至Florisil(100-200目)上，用25-50％EtOAc-環(huán)己烷沖洗5分鐘后，用65分鐘內(nèi)0-25％ EtOAc-環(huán)己烷洗脫柱子。合并合適的流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物(1.46g)。LCMS RT4.36分鐘ES+ve m/z 436(M+H)+，453(M+NH4)+ 中間體54 三氟乙酸2-[4-(4-哌啶氧基)苯基]乙基酯三氟乙酸鹽 將4-{[4-(2-{[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯基]氧基}-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體53所制備)(1.37g，3.14mmol)溶解在DCM(25ml)中，然后加入TFA(5.5ml)。在氮氣中和室溫攪拌所得溶液約17h。真空濃縮溶液，溶解在DCM(5ml)中，真空蒸發(fā)，然后將殘留物溶解在甲苯(5ml)中得標(biāo)題化合物(1.55g)。LCMS RT＝2.38分鐘，ES+ve m/z 318[M+H]+。
中間體55 2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙醇 攪拌下向三氟乙酸2-[4-(4-哌啶氧基)苯基]乙基酯三氟乙酸鹽(例如如中間體54所制備)(1.49g，3.46mmol)的DCM(60ml)溶液加入乙酸(0.2ml)和環(huán)丁酮(購自例如Aldrich)(0.775ml，10.38mmol)。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.1g，5.19mmol)，室溫攪拌混合物5天。繼續(xù)加入乙酸(0.2ml)、環(huán)丁酮(0.775ml)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.88g，2.77mmol)，攪拌混合物20h。用DCM(20ml)稀釋反應(yīng)混合物，用NaOH溶液(2N，80ml)洗滌，Na2SO4干燥，真空濃縮。在SCX離子交換層析柱(50g)上純化殘留物，依次用MeOH(6×45ml)和2N氨的MeOH溶液(6×45ml)洗脫柱子。合并堿性流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物(0.668g)。LCMS RT＝1.84分鐘ES+ve m/z 276(M+H)+。
中間體56 甲磺酸2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基酯 以類似于甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)的方法，利用2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙醇(例如如中間體55所制備)(0.070g，0.25mmol)制備得標(biāo)題化合物(0.089g)。LCMS RT＝2.11分鐘，ES+ve m/z 354[M+H]+。
中間體57 4-[(4-碘苯基)氧基]-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯 攪拌下向4-羥基-1-哌啶甲酸叔丁酯(購自例如Aldrich)(10.064g，50mmol)的N-甲基-2-吡咯烷酮(45ml)溶液分批加入氫化鈉(60％ w/w在礦物油中的分散體，3g，75mmol)。最初冒泡停止后，加入1-氟-4-碘苯(購自例如Aldrich)(11.1g，50mmol)，在80℃和氮氣氣氛中加熱所得混合物20h。使混合物分配在EtOAc(500ml)和水(400ml)中。用水(2×400ml)洗滌有機(jī)相，無水MgSO4干燥，蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(19.56g)。LCMS RT＝3.86分鐘，ES+ve m/z 404[M+H]+。
中間體58 4-[(4-碘苯基)氧基]哌啶三氟乙酸鹽 用TFA(17ml)處理4-[(4-碘苯基)氧基]-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體57所制備)(4g，9.9mmol)的DCM(90ml)溶液。室溫攪拌所得混合物2h。真空蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物(3.85g)。LCMSRT＝2.21分鐘，ES+ve m/z 304[M+H]+。
中間體59 1-環(huán)丁基-4-[(4-碘苯基)氧基]哌啶 攪拌下依次向4-[(4-碘苯基)氧基]哌啶三氟乙酸鹽(例如如中間體58所制備)(3.85g，9.23mmol)在具有乙酸(0.57ml)的DCM(50ml)中的溶液加入環(huán)丁酮(購自例如Aldrich)(2.22ml，29.7mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(3.15g，14.8mmol)。在氮氣中室溫攪拌混合物約17h，繼續(xù)加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.57g，7.4mmol)和環(huán)丁酮(1.11ml，14.8mmol)。繼續(xù)攪拌混合物2h，然后使其分配在DCM(70ml)和NaOH溶液(2N，100ml)中。分離有機(jī)層，用HCl(2N，2×100ml)洗滌，硫酸鈉干燥，蒸發(fā)溶劑得米色固體。在兩根SCX離子交換層析柱(2×20g)上進(jìn)一步純化所述化合物。依次用MeOH和氨水的MeOH溶液(1:10)洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(2.066g)。LCMS RT＝2.38分鐘，ES+ve m/z 358[M+H]+。
中間體60 4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-3-丁炔-1-醇 將3-丁炔-1-醇(購自例如Aldrich)(0.284ml，3.74mmol)溶解在THF(15ml)和NEt3(0.659ml，4.67mmol)中，在氮氣氣流中室溫攪拌溶液30秒。依次加入催化劑、氯化二(三苯基膦)合鈀(II)(30mg)、碘化銅(I)(20mg)和1-環(huán)丁基-4-[(4-碘苯基)氧基]哌啶(例如如中間體59所制備)(0.670g，1.87mmol)。在氮氣、室溫中攪拌約17h后，過濾去除固體，用MeOH洗滌。真空濃縮濾液以去除溶劑，然后通過SCX離子交換(20g層析柱)進(jìn)一步純化。依次用MeOH(5×50ml)和(5×50ml)氨水的MeOH溶液(1:10)洗脫柱子。真空濃縮堿性流分，完全如上，在SCX離子交換層析柱上再次純化殘留物得標(biāo)題化合物(0.525g)。LCMS RT＝2.06分鐘，ES+ve m/z 300[M+H]+。
中間體61 4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-1-丁醇 將4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-3-丁炔-1-醇(例如如中間體60所制備)(0.52g，1.74mmol)溶解在MeOH-EtOH(1:9，50ml)和乙酸(0.2ml，3.48mmol)的混合物中，10％重量Pd/C(130mg)室溫氫化約17h。通過濾過10g硅藻土層析柱去除催化劑。真空濃縮濾液，在SCX離子交換層析柱(10g)上純化殘留物，依次用MeOH(5×45ml)和(4×45ml)2N氨的MeOH溶液洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.51g)。LCMS RT＝2.12分鐘，ES+ve m/z 304[M+H]+。
中間體62 甲磺酸4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}丁基酯 以類似于甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)的方法，利用4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-1-丁醇(例如如中間體61所制備)(0.063g，0.2mmol)制備得標(biāo)題化合物(0.085g)。LCMS RT＝2.38分鐘，ES+ve m/z 381[M+H]+。
中間體63 甲磺酸4-[4-(甲氧基)苯基]丁基酯 在氮氣中向冷至0℃的4-[4-(甲氧基)苯基]-1-丁醇(購自例如Aldrich)(0.36g，2mmol)和NEt3(1.39ml，10mmol)的無水乙醚(10ml)溶液滴加甲基磺酰氯(0.46ml，6mmol)。室溫攪拌4h后，使反應(yīng)混合物分配在乙醚和水中。用水和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相，無水MgSO4干燥。真空去除溶劑得標(biāo)題化合物無色油狀物(0.52g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ 7.10(d，J＝8.8Hz，2H)，6.84(d，J＝8.8Hz，2H)，4.24(t，J＝6.3Hz，2H)，3.80(s，3H)，2.99(s，3H)，2.61(t，J＝7Hz，2H)，1.82-1.68(m，4H)。
中間體64 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2R)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷)甲基]-1(2H)-酞嗪酮 在氮氣中向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體4所制備)(35.35g，100mmol)的2-丁酮(250ml)溶液加入4-[4-(甲氧基)苯基]丁基甲磺酸酯(例如如中間體63所制備)(31g，120mmol)和碳酸鉀(27.6g，200mmol)。回流加熱反應(yīng)混合物24h。通過過濾去除固體，用2-丁酮(3×100ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在DCM(70ml)中。將其上載至硅膠Biotage層析柱(800g)，依次用DCM(5000ml)和5％的MeOH/DCM(5000ml)洗脫。真空蒸發(fā)所需流分，將其溶解在DCM(70ml)中。將其上載至氨基丙基層析柱(8×70g)，用30分鐘內(nèi)0-100％DCM的環(huán)己烷溶液梯度洗脫。合并所需流分，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物淺褐色油狀物(30.96g)。LCMS RT＝2.95分鐘，ES+ve m/z 516/518[M+H]+。
中間體65 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮 在氮氣中向冷至-60℃的4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2R)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體64所制備)(24.35g，47mmol)的無水DCM(100ml)溶液滴加1.0M的三溴化硼的DCM(52ml，52mmol)溶液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，在氮氣中攪拌18h。在冰/水浴中冷卻反應(yīng)混合物，然后用2N鹽酸(50ml)猝滅。利用飽和碳酸氫鈉堿化反應(yīng)混合物，用DCM(500ml)萃取。無水MgSO4干燥分離的有機(jī)相，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物橙色泡沫(22.04g)。LCMS RT＝2.80分鐘，ES+ve m/z 502/504[M+H]+。
中間體66 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2R)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮 在氮氣中向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體65所制備)(22.03g，44mmol)的2-丁酮(220ml)溶液加入1-溴-3-氯丙烷(購自例如Aldrich)(5.2ml，53mmol)和碳酸鉀(12.2g，88mmol)。在氮氣中回流加熱反應(yīng)混合物18h。過濾去除固體，用2-丁酮(200ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在DCM(60ml)中。將其上載至硅膠層析柱(330g)，用12CV內(nèi)0-25％ MeOH的DCM溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分。在氮氣中將部分殘留物(19.65g)溶解在2-丁酮(200ml)中，向其加入1-溴-3-氯丙烷(4.65ml，47mmol)和碳酸鉀(10.8g，78.4mmol)。在氮氣中回流加熱反應(yīng)混合物18h。繼續(xù)加入1-溴-3-氯丙烷(1ml)，繼續(xù)回流加熱反應(yīng)混合物5h。通過過濾去除固體，用2-丁酮(3×100ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在DCM(50ml)中。將其上載至硅膠層析柱(330g)，用12CV內(nèi)0-10％ MeOH的DCM溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分得標(biāo)題化合物褐色油狀物(21.68g)。LCMS RT＝3.18分鐘，ES+ve m/z 578/580[M+H]+。
中間體67 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2S)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷)甲基]-1(2H)-酞嗪酮 向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體6所制備)(0.457g，1.29mmol)的2-丁酮(25ml)懸浮液加入甲磺酸4-[4-(甲氧基)苯基]丁基酯(0.52g，2mmol)和碳酸鉀(0.276g，2mmol)?；亓骷訜岱磻?yīng)混合物20h。過濾去除固體，用2-丁酮(20ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在DCM(3ml)中。將其上載至氨基丙基層析柱(10g)，用40分鐘內(nèi)0-100％ DCM的環(huán)己烷溶液梯度洗脫。合并所需流分，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(0.23g)。LCMS RT＝2.99分鐘，ES+ve m/z 516/518[M+H]+。
中間體68 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2S)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮 向冷至-60℃的4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2s)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體67所制備)(0.23g，0.45mmol)的無水DCM(5ml)溶液滴加1.0M三溴化硼的DCM(2.5ml，2.5mmol)溶液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，在氮氣中攪拌18h。冷卻反應(yīng)混合物，然后用2N鹽酸(5ml)猝滅。利用飽和碳酸氫鈉堿化反應(yīng)混合物，用DCM(20ml)萃取。無水MgSO4干燥分離的有機(jī)相，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(0.20g)。LCMS RT＝2.79分鐘，ES+ve m/z502/504[M+H]+。
中間體69 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2S)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮 在氮氣中向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2S)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體68所制備)(0.22g，0.44mmol)的2-丁酮(10ml)溶液加入1-溴-3-氯丙烷(0.052ml，0.53mmol)和碳酸鉀(0.122g，0.83mmol)。回流加熱反應(yīng)混合物18h。繼續(xù)加入1-溴-3-氯丙烷(0.052ml，0.53mmol)，繼續(xù)回流加熱反應(yīng)混合物5h。過濾去除固體，用2-丁酮(20ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在DCM(2ml)中。將其上載至硅膠層析柱(10g)，用20分鐘內(nèi)0-10％ MeOH的DCM溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分得標(biāo)題化合物(0.149g)。LCMS RT＝3.20分鐘，ES+ve m/z578/580/582[M+H]+。
中間體70 (4-氯苯基)乙酸1，1-二甲基乙基酯 在氮氣中將(4-氯苯基)乙酸(購自例如Aldrich)(13.76g，81mmol)懸浮在甲苯(100ml)。向其加入二叔丁基二甲基縮醛(購自例如Aldrich)(50ml)，80℃加熱反應(yīng)混合物18h。真空去除溶劑，將殘留物溶解在EtOAc(200ml)中。用飽和碳酸氫鈉溶液(2×200ml)和鹽水(2×200ml)洗滌所述溶液。無水MgSO4干燥有機(jī)相，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(6.68g，36％)淺褐色油狀物。1H NMR(CDCl3)7.28(2H，d，J8.5Hz)，7.19(2H，d，J8.5Hz)，3.48(2H，s)，1.43(9H，s)。
中間體71 4-[(甲氧基)羰基]-3-吡啶甲酸 在-70℃和氮氣中向吡啶-3，4-二甲酸酐(購自例如Aldrich)(26.73g，180mmol)的無水THF(250ml)懸浮液加入甲醇鈉(11.2g，2.01摩爾)的無水MeOH(50ml)懸浮液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌18h。真空去除溶劑，將殘留物溶解在水(350ml)中。利用濃鹽酸將其酸化至～pH 2。過濾收集所得固體，用水洗滌。45℃真空干燥固體得標(biāo)題化合物(14.6g，45％)白色固體。LCMS RT＝0.98分鐘，ES+ve m/z 182[M+H]+。
中間體72 3-{2-(4-氯苯基)-3-[(1，1-二甲基乙基)氧基]-3-氧代丙?；鶀-4-吡啶甲酸甲酯 在氮氣中向4-[(甲氧基)羰基]-3-吡啶甲酸(例如如中間體71所制備)(1.81g，10mmol)的無水DMF(90ml)溶液加入羰基二咪唑(1.7g，10.5mmol)。50℃加熱反應(yīng)混合物90分鐘，然后在鹽/冰浴中冷卻至-5℃。向其加入4-氯苯基乙酸1，1-二甲基乙基酯(例如如中間體70所制備)(2.38g，10.5mmol)，接著15分鐘內(nèi)分批加入氫化鈉(1.4g，60％分散在礦物油中，35mmol)。-5℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘，然后升溫至室溫。2h后，將反應(yīng)混合物倒入飽和氯化銨溶液(100ml)中。用EtOAc(3×100ml)萃取。用水(2×100ml)和鹽水(2×100ml)洗滌合并的有機(jī)物。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空去除溶劑。將殘留物溶解在DCM(5ml)中，上載至100g硅膠層析柱。利用60分鐘內(nèi)0-50％ EtOAc的環(huán)己烷溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分得標(biāo)題化合物(2.94g，75％，酮和烯醇的混合物，99％純度)淺褐色油狀物。LCMS RT＝3.41和3.63(U-形峰)分鐘ES+ve m/z 390/392(M+H)+。
中間體73 3-[(4-氯苯基)乙?；鵠-4-吡啶甲酸甲酯 將3-{2-(4-氯苯基)-3-[(1，1-二甲基乙基)氧基]-3-氧代丙?；鶀-4-吡啶甲酸甲酯(例如如中間體72所制備)(2.94g，7.5mmol)溶解在無水DCM(12ml)中，向其加入TFA(5ml)。在氮氣中室溫攪拌反應(yīng)混合物20h。真空去除溶劑，將殘留物溶解在DCM(5ml)中。將其上載至100g硅膠層析柱，用60分鐘內(nèi)0-100％ EtOAc的環(huán)己烷溶液梯度洗脫。合并所需流分，真空蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(1.59g，73％)淺橙色油狀物。LCMS RT＝3.02分鐘ES+ve m/z 290/292(M+H)+。
中間體74 4-[(4-氯苯基)甲基]吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮 將3-[(4-氯苯基)乙酰基]-4-吡啶甲酸甲酯(例如如中間體73所制備)(1.59g，5.5mmol)溶解在EtOH(60ml)中，向其加入水合肼(購自例如Aldrich)(0.3ml，6mmol)和幾滴AcOH?；亓骷訜岱磻?yīng)混合物3h。冷卻反應(yīng)混合物，過濾收集固體，用EtOH(10ml)洗滌。真空干燥固體得標(biāo)題化合物(1.17g，78％)白色固體。LCMS RT＝2.73分鐘，ES+vem/z 272/274(M+H)+。
中間體75 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮 -10℃向三苯基膦(10.42g，40mmol)的無水THF(80ml)溶液加入偶氮二甲酸二叔丁酯(8.38g，36mmol)的無水THF(60ml)溶液。使溶液升溫至15℃，然后冷卻至0-5℃。向所述輕微懸浮液加入4-[(4-氯苯基)甲基]吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮(例如如中間體74所制備)和N-Boc-D-脯氨醇(購自例如Aldrich)(5.14g，25.6mmol)的無水THF(100ml)懸浮液。使懸浮液升溫至環(huán)境溫度，攪拌23h。真空去除溶劑得油狀物(30g)。LCMS RT＝3.48分鐘，ES+ve m/z 455/457。向粗產(chǎn)物(30g)的1，4-二氧六環(huán)(80ml)溶液加入4.0M HCl的1，4-二氧六環(huán)(80ml，320mmol)溶液。在環(huán)境溫度攪拌溶液5h。真空去除溶劑，使殘留物分配在1M鹽酸溶液(400ml)和EtOAc(200ml)中。分層，用EtOAc(200ml)洗滌水相。用1M鹽酸溶液(200ml)洗滌合并的有機(jī)萃取物。利用2M NaOH溶液(300-350ml)堿化合并的水相萃取物至pH10，用EtOAc(2×400ml，1×200ml)萃取所得懸浮液。真空濃縮合并的有機(jī)萃取物得標(biāo)題化合物(8.0g)。LCMS RT＝2.15分鐘，ES+vem/z 355/357(M+H)+。
實施例 實施例1 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(2-{[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]氨基}乙基)-1(2H)-酞嗪酮
攪拌、80℃下加熱2-(2-氨基乙基)-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體2所制備)(190mg，0.606mmol)、甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)(115mg，0.300mmol)和碳酸氫鈉(50mg，0.595mmol)的MeCN(10ml)混合物3天。使冷卻后的反應(yīng)混合物分配在水和EtOAc中。用EtOAc洗滌水層(×2)。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取物，真空濃縮。通過硅膠層析(10g，用DCM-MeOH-氨水洗脫，200:8:1，然后100:8:1)純化殘留物。單獨真空濃縮合適的流分得不純產(chǎn)物。通過硅膠層析(1g，用DCM-MeOH-氨水洗脫，200:8:1)進(jìn)一步純化第一部分，接著濃縮合適的流分得標(biāo)題化合物(5.7mg)。LCMS RT＝2.38分鐘，ES+vem/z 601[M+H]+和301[M/2+H]+。通過硅膠層析(5g，用DCM-MeOH-氨水洗脫，200:8:1，然后150:8:1)進(jìn)一步純化得自第一次純化的第二部分，接著濃縮合適的流分得其他大量標(biāo)題化合物(32mg)。
實施例2 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(2-{[2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基]氨基}乙基)-1(2H)-酞嗪酮
攪拌、80℃下加熱2-(2-氨基乙基)-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體2所制備)(190mg，0.606mmol)、甲磺酸2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基酯(例如如中間體27所制備)(112mg，0.315mmol)和碳酸氫鈉(50mg，0.595mmol)的MeCN(10ml)混合物3天。使冷卻后的反應(yīng)混合物分配在水/鹽水(1:1)和EtOAc中。用EtOAc洗滌水層(×2)。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取物，真空濃縮。通過制備TLC(4塊硅膠板)純化殘留物，用DCM-MeOH-氨水(200:8:1)洗脫，利用MeOH從硅膠萃取得標(biāo)題化合物(5.1mg)。LCMSRT＝2.41分鐘，ES+ve m/z 573/575[M+H]+和287[M/2+H]+。通過制備TLC得其他大量標(biāo)題化合物(12mg)。
實施例3 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{2-[[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基](甲基)氨基]乙基}-1(2H)-酞嗪酮
用甲醛(37％重量的水溶液，2ml)和甲酸(0.20ml)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(2-{[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]氨基}乙基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如實施例1所制備)(16mg，0.027mmol)，攪拌下100℃加熱所述混合物40分鐘。冷卻后，真空濃縮混合物。然后在蒸汽浴上高真空加熱殘留物2h得標(biāo)題化合物(11mg)，不對其進(jìn)行進(jìn)一步純化。LCMS RT＝2.47分鐘，ES+ve m/z 615[M+H]+和308/309[M/2+H]+。
實施例4 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{2-[[2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基](甲基)氨基]乙基}-1(2H)-酞嗪酮
用甲醛(37％重量的水溶液，2ml)和甲酸(0.20ml)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(2-{[2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基]氨基}乙基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如實施例2所制備)(12.3mg，0.021mmol)，100℃攪拌下加熱所述混合物1h。冷卻后，真空濃縮混合物。然后在蒸汽浴上高真空加熱殘留物2h得標(biāo)題化合物(8.5mg)，不對其進(jìn)行進(jìn)一步純化。LCMS RT＝2.30分鐘，ES+ve m/z 587/589[M+H]+和294/295[M/2+H]+。
實施例5 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2S)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮
在氮氣中向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2S)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體69所制備)(0.149g，0.26mmol)的2-丁酮(5ml)溶液加入碘化鉀(購自例如Aldrich)(0.086g，0.52mmol)、碳酸鉀(0.072g，0.52mmol)和六亞甲基亞胺(0.059ml，0.52mmol)。回流加熱反應(yīng)混合物41h。過濾去除固體，用2-丁酮(20ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在MeOH-DMSO(2ml，1:1)中。將其上載至C18反相層析柱(20g)，利用40分鐘內(nèi)0-50％ MeCN(0.05％ TFA)的水(0.05％ TFA)溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分，將殘留物溶解在MeOH中。將其上載至氨基丙基層析柱(10g)，用MeOH洗脫。真空蒸發(fā)所需流分得標(biāo)題化合物(0.092g)。LCMS RT＝2.68分鐘，ES+ve m/z 641/643[M+H]+。1H NMR(400MHz，MeOD-d4)δ 8.85(m，1H)，7.90(m，1H)，7.86-7.88(m，2H)，7.29-7.24(m，4H)，7.00(d，J＝8.5Hz，2H)，6.77(d，J＝8.5Hz，2H)，4.33(dd，J＝4.8，13Hz，1H)，4.30(s，2H)，4.11(dd，J＝8，13Hz，1H)，3.93(t，J＝6.3Hz，2H)，3.11(m，1H)，2.98(m，1H)，2.80(m，1H)，2.70-2.91(m，6H)，2.47(m，2H)，2.31(m，1H)，2.24(m，1H)，1.92(m，2H)，1.85-1.72(m，4H)，1.70-1.58(m，8H)，1.55-1.46(m，4H)。
實施例6 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮
在包含碳酸氫鈉(60mg，0.72mmol)的MeCN(10ml)、80℃和氮氣中攪拌甲磺酸5-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)戊基酯(例如如中間體43所制備)和4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體4所制備)(126mg，0.36mmol)六天，此時反應(yīng)基本完成。蒸干混合物，將殘留物在DCM中的溶液上載至已用DCM預(yù)處理過的20g硅膠層析柱。用DCM-EtOH-0.88氨水溶液(200:8:1)洗脫層析柱，然后(100:8:1)洗脫得不純產(chǎn)物的三流分(52mg，74mg和25mg)。合并74mg和25mg部分，上載至2×20×20cm硅膠板(1mm層厚)，在DCM-EtOH-0.88氨水溶液(100:8:1)中展開兩次。取下主帶，洗脫得標(biāo)題化合物(50mg)。LCMS RT＝2.58分鐘，ES+ve m/z 655[M+H]+，ES+ve m/z 328[1/2M+H]+。
實施例7 2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮二甲酸鹽
在氮氣中用三乙酰氧基硼氫化鈉(0.42g，2mmol)處理4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體10所制備)(409mg，1.1mmol)和4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁醛(例如如中間體40所制備)(305mg)的DCM(5ml)和乙酸(2ml)溶液。室溫攪拌混合物，然后加入另一份4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁醛(211mg)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.42g，2mmol)。LCMS表明為原料和產(chǎn)物的混合物(1:1)。向反應(yīng)混合物加入1-[3-({4-[4，4-二(乙氧基)丁基]苯基}氧基)丙基]六氫-1H-氮雜

(例如如中間體38所制備)(150mg)，繼續(xù)攪拌3天。減壓去除溶劑，使殘留物分配在EtOAc和碳酸氫鈉水溶液中。用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)溶液，干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)。將殘留物(714mg)溶解在DCM中，通過層析(Flashmaster II，100g硅膠層析柱)純化，用60分鐘內(nèi)包含1％ NEt3-DCM的0-15％ MeOH洗脫。合并合適的流分，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物游離堿(335mg)。將其溶解在MeOH-DMSO(2:1，2.4ml)中，通過MDAP HPLC純化得標(biāo)題化合物(193mg)LCMS RT＝2.37分鐘，ES+ve m/z 637(M+H)+，319(M/2+H)+；ES-ve m/z 681(M+HCO2)-。
實施例8 2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-4-[(4-羥基苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮
在冰浴和氮氣中冷卻2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-4-{[4-(甲氧基)苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮二甲酸鹽(例如如實施例7所制備)(100mg，0.13mmol)的DCM(10ml)溶液，然后用三溴化硼的已烷(1M，0.3ml)溶液處理，2h后用另一份(0.3ml)處理。室溫靜置混合物共2天4h，然后減壓去除溶劑。將殘留物溶解在MeOH-DMSO(1:1，2ml)中，通過MDAP HPLC純化得18mg，通過MDAPHPLC再次純化得標(biāo)題化合物(13mg)LCMS RT＝2.37分鐘，ES+ve m/z 623(M+H)+，312(M/2+H)+。
實施例9 4-[(4-氟苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮
在環(huán)境溫度和氮氣中向4-氯-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體13所制備)(0.055g，0.1mmol)的無水THF(4ml)溶液加入四(三苯基膦)合鈀(0)(0.013g，0.01mmol)，然后加入4-氟-芐基氯化鋅(購自例如Aldrich)(0.5M，0.6ml)的THF溶液。加熱溶液至60℃ 1h。在環(huán)境溫度向所述混合物加入四(三苯基膦)合鈀(0)(0.014g，0.01mmol)，然后加入4-氟-芐基氯化鋅的THF溶液(0.5M，0.6ml)。加熱混合物至80℃ 4h。在環(huán)境溫度繼續(xù)向所述混合物加入四(三苯基膦)合鈀(0)(0.014g，0.01mmol)，然后加入4-氟-芐基氯化鋅的THF溶液(0.5M，2.5ml)。加熱混合物至80℃ 2.5h。用MeOH(2ml)猝滅反應(yīng)。將混合物上載至SCX層析柱(20g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱，真空濃縮堿性流分得膠狀物(0.038g)。通過MDAP(MDAP前加入0.1ml TFA)純化粗產(chǎn)物得膠狀物(0.009g)，將其上載至SCX層析柱(5g)。用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱，真空濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.005g)。LCMS RT＝2.42分鐘，ES+ve m/z 625(M+H)+和313(M/2+H)+ 實施例10 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)甲基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮
用碘化鈉(10mg)和六亞甲基亞胺(購自例如Aldrich)(0.1ml)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-({4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}甲基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體18所制備)(15mg，0.027mmol)的2-丁酮(1ml)溶液，在氮氣中加熱混合物至75℃ 2h。繼續(xù)加入六亞甲基亞胺(0.1ml)，在相同溫度加熱混合物過夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物，將殘留物溶解在MeOH-DMSO(1:1；1ml)中，通過MDAP HPLC純化。合并合適的流分得標(biāo)題化合物(10.7mg)LCMS RT＝2.54分鐘ES+ve m/z 613(M+H)+，307(M/2+H)+。
實施例11 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮
以類似于4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-(2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮(實施例21)的方法，利用甲磺酸2-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)乙基酯(例如如中間體27所制備)(0.101g，0.284mmol)制備得標(biāo)題化合物(0.0044g)。LCMS RT＝2.54分鐘，ES+ve m/z 314和315(M+H)+。
實施例12 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮
在包含碘化鈉(18mg，0.12mmol)和碳酸鉀(70mg)的丙酮(4ml)中回流攪拌4-甲基苯磺酸3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙基酯和1-(3-{[4-(3-氯丙基)苯基]氧基}丙基)六氫-1H-氮雜

的混合物(3:2)(例如如中間體30所制備)(42mg，約0.12mmol烷基化劑)和4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(33mg，0.09mmol)三天。反應(yīng)不完全，因此繼續(xù)加入碘化鈉(18mg，0.12mmol)和碳酸鉀(70mg)。繼續(xù)回流1天后，判斷反應(yīng)完全以分離產(chǎn)物。通過過濾去除固體，濃縮濾液，上載至2×20×20cm硅膠板(1mm層厚)，在DCM-EtOH-0.880氨水溶液(50:8:1)中展開。利用MeOH-DCM(1:1)從硅膠洗脫主帶，蒸發(fā)洗脫物得標(biāo)題化合物(28mg)。LCMS RT＝2.52分鐘，ES+ve m/z 321[1/2M+H]+ 實施例13 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[3-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丙基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮
依次向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體所制備16)(0.072g，1.96mmol)的無水DCM(2ml)溶液加入DIPEA(0.041ml，2.3mmol)和甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)(0.090g，0.23mmol)。20℃攪拌溶液26h，然后加熱至74℃ 20h。將混合物上載至SCX層析柱(20g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88的氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分，通過MDAP純化殘留物。合并合適的流分，真空去除溶劑。將殘留物溶解在DCM(5ml)中。依次向所述溶液加入DIPEA(0.034ml，0.19mmol)和乙酰氯(0.1ml，1.4mmol)。20℃攪拌溶液15-20分鐘，然后用MeOH(1ml)猝滅。將溶液上載至SCX層析柱(10g，用MeOH預(yù)洗)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.0323g)。LCMS RT＝2.58分鐘，ES+ve m/z328和329(M/2+H)+。
實施例14 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2S)-1-{3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基}-2-吡咯烷基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮二甲酸鹽
在DMF(1.5ml)中混合4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體6所制備)(30mg，0.08mmol)、甲磺酸3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基酯(例如如中間體45所制備)(50mg，0.14mmol)、DIPEA(0.02ml，0.13mmol)和碘化鈉(20mg，0.13mmol)，在150℃微波爐中加熱20分鐘，然后繼續(xù)加熱20分鐘。將混合物上載至SCX層析柱(20g)，依次用MeOH和10％氨水的MeOH溶液洗脫。真空濃縮合適的流分。通過制備TLC(2塊硅膠板)純化粗產(chǎn)物，用DCM-MeOH-氨水(100:8:1)洗脫，利用DCM-EtOH-氨水(100:8:1)從硅膠中萃取。用甲酸處理由此所得產(chǎn)物，然后在氮氣氣流中干燥得標(biāo)題化合物(2.4mg)的二甲酸鹽。LCMSRT＝2.45分鐘，ES+ve m/z 611[M+H]+和306[M/2+H]+。
實施例15 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2R)-1-{3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基}-2-吡咯烷基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮
在微波爐中加熱4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體4所制備)(32mg，0.09mmol)、7-[(3-氯丙基)氧基]-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜環(huán)庚烯(例如如中間體46所制備)(32mg，0.108mmol)、碘化鈉(16mg，0.108mmol)和DIPEA(0.019ml，0.108mmol)的無水DMF(1.5ml)懸浮液至150℃ 15分鐘，繼續(xù)加熱20分鐘。然后將粗產(chǎn)物混合物倒入SCX-2層析柱(20g)中，用MeOH(×2)洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分，通過MDAP HPLC純化所得油狀物。濃縮所需流分，然后將所得殘留物溶解在DCM(約3ml)中，用DIPEA(0.007ml)和乙酰氯(0.003ml，0.04mmol)處理。20℃攪拌溶液20分鐘，然后用MeOH(1ml)猝滅。將混合物倒入SCX-2層析柱(10g)中，用10％氨水的MeOH溶液洗脫。真空去除溶劑，通過MDAP HPLC純化所得油狀物。然后將所得濃縮殘留物上載至制備TLC板上，用DCM-EtOH-氨水(100:8:1)洗脫。收集合適的帶，用相同的洗脫液洗滌，真空濃縮合并的濾液得標(biāo)題化合物(4.5mg)。LCMS RT＝2.40分鐘。ES+ve m/z611[M+H]+，306[M/2+H]+。
實施例16 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(1-{3-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)氧基]丙基}六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮甲酸鹽
依次向7-[(3-氯丙基)氧基]-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

(例如如中間體46所制備)(0.095g，0.32mmol)的DMF(3ml)溶液加入4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(0.097g，0.26mmol)和DIPEA(0.056ml，0.32mmol)。20℃攪拌溶液20h。加熱溶液70℃2h。在微波爐中加熱溶液至150℃30分鐘。將粗產(chǎn)物混合物上載至SCX層析柱(20g，用MeOH預(yù)洗)。用MeOH(2CV)洗滌層析柱，然后用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫。真空濃縮堿性流分，通過MDAP HPLC進(jìn)一步純化殘留物(0.137g)得標(biāo)題化合物(0.068g，40％)。LCMS RT＝2.48分鐘ES+ve m/z 625(M+H)+，313/314(M/2+H)+。
實施例17 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{1-[(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-基)甲基]六氫-1H-氮雜

-4-基}-1(2H)-酞嗪酮二甲酸鹽
用乙酸(1滴)和三乙酰氧基硼氫化鈉(43mg，0.2mmol)處理4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(36.7mg，0.1mmol)和3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲醛(例如如中間體48所制備)(22.9mg，0.1mmol)的DCM(1ml)混合物，在氮氣中攪拌混合物過夜。繼續(xù)加入三乙酰氧基硼氫化鈉(42.4mg，0.2mmol)和DCM(1ml)，2h后，繼續(xù)加入醛(6mg)。2h后，使反應(yīng)混合物分配在EtOAc(10ml)和碳酸氫鈉溶液(10ml)中。用10ml碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥，減壓蒸發(fā)。將殘留物(46.5mg)溶解在DCM(1.5ml)中，用甲苯磺酰氯(5mg)處理，攪拌過周末。減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，將殘留物(50.6mg)溶解在MeOH-DMSO(1:1；1ml)中，通過MDAP HPLC純化。蒸發(fā)合適的流分得標(biāo)題化合物(12.6mg)LCMS RT＝2.40分鐘，ES+ve m/z 581(M+H)+，291(M/2+H)+。
實施例18 N-(2-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}乙基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酰胺二甲酸鹽
用NEt3(0.24ml)和TBTU(80.3mg)處理2-[1-(2-氨基乙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽(例如如中間體20所制備)(69.6mg)，3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸(例如如中間體51所制備)(39.5mg，0.17mmol)的DMF(1.02ml)混合物，室溫攪拌混合物過夜。將反應(yīng)混合物上載至SCX-2層析柱(20g)，用MeOH洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分得殘留物(243mg)，將其溶解在MeOH-DMSO(1:1；2.4ml)中，然后通過MDAP HPLC純化，蒸發(fā)合適的流分后得87.5mg。將該殘留物溶解在MeOH中，上載至SCX-2層析柱(10g)，用MeOH洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓蒸發(fā)含氨流分得標(biāo)題化合物游離堿(33mg)。將其溶解在MeOH中，用甲酸(0.3ml)處理，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(40.4mg)LCMS RT＝2.38分鐘ES+ve m/z638(M+H)+，320(M/2+H)+。
實施例19 N-(3-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丙基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酰胺二甲酸鹽
用NEt3(0.35ml)和TBTU(128mg)處理2-[1-(3-氨基丙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽(例如如中間體22所制備)(114mg)和3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸(例如如中間體51所制備)(72.6mg，0.27mmol)的DMF(1.62ml)混合物，室溫攪拌混合物過夜。將反應(yīng)混合物上載至SCX-2層析柱(20g)，用MeOH洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分得殘留物(253mg)，將其溶解在MeOH-DMSO(1:1；2.5ml)中，然后通過MDAP HPLC純化，蒸發(fā)合適的流分后得99mg。將該殘留物溶解在MeOH中，上載至SCX-2層析柱(10g)，用MeOH洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓蒸發(fā)含氨流分得標(biāo)題化合物游離堿(55.7mg)。將其溶解在MeOH中，用甲酸(0.3ml)處理，減壓蒸發(fā)得標(biāo)題化合物(72.6mg)LCMS RT＝2.37分鐘ES+ve m/z652(M+H)+，327(M/2+H)+。
實施例20 N-(4-{4-[4-[(4-氯苯基)甲基]-1-氧代-2(1H)-酞嗪基]六氫-1H-氮雜

-1-基}丁基)-3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酰胺二甲酸鹽
用NEt3(0.5ml)和TBTU(120.4mg)處理2-[1-(4-氨基丁基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-4-[(4-氯苯基)甲基]-1(2H)-酞嗪酮鹽酸鹽(例如如中間體24所制備)(108.8mg)和3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜

-7-甲酸(例如如中間體51所制備)(58mg，0.25mmol)的DMF(1.5ml)混合物，室溫攪拌混合物過夜。將反應(yīng)混合物上載至SCX-2層析柱(20g)，用MeOH洗滌，然后用10％氨水的MeOH溶液洗脫。減壓濃縮含氨流分得殘留物(217.9mg)，將其溶解在MeOH-DMSO(1:1；2.2ml)中，然后通過MDAP HPLC純化，蒸發(fā)合適的流分后得標(biāo)題化合物(81.9mg)LCMS RT＝2.40分鐘ES+ve m/z 666(M+H)+，334(M/2+H)+。
實施例21 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-(2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮
依次向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-(六氫-1H-氮雜

-4-基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體16所制備)(0.072g，0.196mmol)的無水DCM(2ml)溶液加入DIPEA(0.0434ml，0.244mmol)和甲磺酸2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基酯(例如如中間體56所制備)(0.089g，0.25mmol)。20℃攪拌溶液26h，然后加熱至74℃20h。將混合物上載至SCX層析柱(20g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。真空濃縮合并的堿性流分，通過MDAP純化殘留物。合并合適的流分，真空去除溶劑。將殘留物溶解在DCM(5ml)中。依次向所述溶液加入DIPEA(0.020ml，0.11mmol)和乙酰氯(0.1ml，1.4mmol)。20℃攪拌溶液15-20分鐘，然后用MeOH(1ml)猝滅。將溶液上載至SCX層析柱(10g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。真空濃縮堿性流分。將殘留物上載至制備板(20×20cm，1mm厚度)，用15:100:1 MeOH-DCM-NEt3洗脫。將從制備板所得產(chǎn)物上載至SCX層析柱(1g)，用MeOH(2CV)洗滌層析柱。用10％ 0.88氨的MeOH溶液(2CV)洗脫層析柱。利用氮氣氣流濃縮堿性流分得標(biāo)題化合物(0.0048g)。LCMS RT＝2.51分鐘，ES+ve m/z 313和314(M/2+H)+。
實施例22 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-(4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}丁基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮
以類似于4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[1-(2-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}乙基)六氫-1H-氮雜

-4-基]-1(2H)-酞嗪酮(實施例21)的方法，利用甲磺酸4-{4-[(1-環(huán)丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}丁基酯(例如如中間體62所制備)(0.0849g，0.22mmol)制備得標(biāo)題化合物(0.004g)。LCMS RT＝2.62分鐘，ES+ve m/z 327和328(M/2+H)+。
實施例23 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮
在氮氣氣氛、攪拌、80℃下加熱4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮(例如如中間體75所制備)(54mg，0.15mmol)、甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)(78mg，0.20mmol)和碳酸氫鈉(28mg，0.33mmol)的MeCN(3ml)混合物6天。過濾冷卻后的反應(yīng)混合物，真空濃縮濾液。利用憎水玻璃料使殘留物分配在水和DCM中。利用憎水玻璃料，用鹽水稀釋水層，繼續(xù)用DCM(×6)洗滌。真空濃縮合并的有機(jī)萃取物，通過質(zhì)量引導(dǎo)的自制備HPLC純化殘留物。濃縮相關(guān)流分得兩批產(chǎn)物，各批產(chǎn)物包含不同的雜質(zhì)。各批通過硅膠層析[2g，用2％-4％(10％氨水的MeOH溶液)-DCM洗脫]進(jìn)一步單獨純化。濃縮來自這兩種純化操作的合適流分，從其中一種得純產(chǎn)物(16mg)，從另一種得不純產(chǎn)物。后一種產(chǎn)物通過質(zhì)量引導(dǎo)的自制備HPLC進(jìn)一步純化得另一部分純產(chǎn)物(3mg，甲酸鹽)。合并兩部分純產(chǎn)物，干燥真空以去除甲酸，由此得標(biāo)題化合物游離堿(18mg，19％)。LCMS RT＝2.42分鐘，ES+ve m/z 642[M+H]+和322[M/2+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ 9.23(s，1H)，8.89(d，J＝5.5Hz，1H)，8.17(d，J＝5Hz，1H)，7.27-7.33(m，4H)，7.00(d，J＝8Hz，2H)，6.76(d，J＝8Hz，2H)，4.37(s，2H)，4.30(dd，J＝13，4.5Hz，1H)，4.11(dd，J＝13，8Hz，1H)，3.94(t，J＝6Hz，2H)，3.07-3.14(m，1H)，2.94-3.01(m，1H)，2.75-2.85(m，1H)，2.65-2.73(m，6H)，2.48(t，J＝6.5Hz，2H)，2.20-2.35(m，4H)，1.89-1.97(m，2H)，1.58-1.88(m，12h)，1.45-1.57(m，4H)。
實施例24A 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮游離堿
方法1 在氮氣中向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2R)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體66所制備)(20g，34.6mmol)的2-丁酮(200ml)溶液加入碘化鉀(11.5g，69.2mmol)、碳酸鉀(9.6g，69.2mmol)和六亞甲基亞胺(購自例如Aldrich)(7.8ml，69.2mmol)?；亓骷訜岱磻?yīng)混合物41h。通過過濾去除固體，用2-丁酮(2×100ml)洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾液和洗滌物，將殘留物溶解在MeOH-DMSO(30ml，1:1)中。將其上載至C18反相層析柱(2×330g)。利用12 CV內(nèi)0-50％ MeCN(0.05％ TFA)的水(0.05％ TFA)溶液梯度洗脫。真空蒸發(fā)所需流分，將殘留物溶解在MeOH中。將其上載至氨基丙基層析柱(4×70g)，用MeOH洗脫。真空蒸發(fā)所需流分得標(biāo)題化合物橙色膠狀物(10.74g)。LCMS RT＝2.67分鐘，ES+ve m/z 641/643[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.46(m，1H)，7.74-7.62(m，3H)，7.26(d，J＝8.5Hz，2H)，7.20(d，J＝8.5Hz，2H)，7.06(d，J＝8.5Hz，2H)，6.81(d，J＝8.5Hz，2H)，4.42(dd，J＝4，13Hz，1H)，4.24(s，2H)，4.07(dd，J＝8，13Hz，1H)，3.98(t，J＝6.3Hz，2H)，3.16(m，1H)，2.97(m，1H)，2.90(m，1H)，2.65(m，6H)，2.55(m，2H)，2.37(m，1H)，2.21(m，1H)，1.93(m，2H)，1.89-1.52(m，16H)。
方法2 在氮氣氣氛中、攪拌、80℃下加熱4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體4所制備)(1.017g，2.87mmol)、甲磺酸4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基酯(例如如中間體35所制備)(1.115g，2.91mmol)和碳酸氫鈉(474mg，5.64mmol)的無水MeCN(50ml)混合物5天。使冷卻后的反應(yīng)混合物分配在水(70ml)和EtOAc(70ml)中。用EtOAc洗滌水層(2×50ml)。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取物，真空濃縮。將殘留物(1.35g)溶解在DMF(10ml)中，并分成10份。用TFA(0.5ml)稀釋各份。各份通過利用Kromasil C8柱(25cm×5cm)的制備HPLC純化，用40分鐘內(nèi)5％-45％(0.25％ TFA的MeCN溶液)的(0.25％ TFA的水溶液)溶液梯度洗脫，接著繼續(xù)保持最終濃度15分鐘。合并各次運(yùn)行的相關(guān)流分，真空濃縮得水溶液。將其上載至Amberchrom CG-161M柱(25cm×2.5cm)以吸附所述化合物。用水洗滌柱子以去除過量TFA，用MeCN洗脫，得產(chǎn)物三氟乙酸鹽。依次用MeOH和MeCN洗滌SCX層析柱(20g)。將部分上述產(chǎn)物(0.98g)溶解在MeCN中，并上載至SCX層析柱，依次用MeCN和10％氨水的MeCN溶液(200ml)洗脫。真空濃縮合適的流分得標(biāo)題化合物橙色膠狀物(651mg)。LCMS RT＝2.52分鐘，ES+ve m/z 641[M+H]+和321/322[M/2+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ ppm 8.38(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.93(m，1H)，7.86(m，1H)，7.82(m，1H)，7.30(m，4H)，7.03(d，J＝8.5Hz，2H)，6.80(d，J＝8.5Hz，2H)，4.36(m，1H)，4.33(s，2H)，4.14(dd，J＝13.1，8.0Hz，1H)，3.98(t，J＝6.1Hz，2H)，3.14(m，1H)，3.03(dd，J＝7.8，4.5Hz，1H)，2.84(m，1H)，2.75(m，6H)，2.50(t，J＝6.9Hz，2H)，2.31(m，2H)，1.97(m，2H)，1.82(m，4H)，1.68(m，8H)，1.55(m，4H)。
實施例24B 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮二甲酸鹽 從2.25mmol 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮(例如如中間體4所制備)開始并依據(jù)例如實施例24A，方法2的制備方法，如下處理最初水相處理后的殘留物 將粗產(chǎn)物(1.20g)溶解在DCM(5ml)中，用DIPEA(0.087ml，0.499mmol)和乙酰氯(0.036ml，0.506mmol)處理，室溫攪拌混合物45分鐘。將反應(yīng)混合物上載至SCX層析柱(50g)，依次用MeOH(×2)和10％氨水的MeOH溶液洗脫。真空濃縮合適的流分得橙色油狀物(853mg)。將部分油狀物(548mg)溶解在MeOH(6ml)和DMSO(1ml)的混合物中，通過MDAP HPLC純化該溶液。合并相關(guān)流分，真空濃縮得標(biāo)題化合物橙色膠狀物(384mg)。LCMS RT＝2.42分鐘，ES+ve m/z641/643[M+H]+和321/322[M/2+H]+。
實施例24C 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮1，5-萘二磺酸鹽一水合物 方法1 將4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如實施例24A所制備)(400mg)溶解在MeOH(4.44ml)中。加入1，5-萘二磺酸(232mg)的MeOH(1ml)溶液，利用氣槍加熱所得膠狀溶液。開始形成少量固體，冷卻使固體沉淀。室溫攪拌所述漿料約1h。加入MeOH(2ml)以增加所述漿料的流動性，再次加熱和冷卻，繼續(xù)攪拌1小時。通過過濾分離固體，40℃真空干燥得標(biāo)題化合物(464.5mg，73％)。
方法2 向4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如實施例24A所制備)(3.82g，5.96mmol)加入水(200ml)和鹽酸(2N12ml)。加熱反應(yīng)混合物90℃以獲得透明溶液。20分鐘內(nèi)向其加入1，5-萘二磺酸一水合物(2.2g，6mmol)的水(100ml)溶液。90℃攪拌懸浮液20分鐘，然后冷卻至室溫。過濾收集固體，用水洗滌(100ml)?？諝飧稍锕腆w3天，然后真空干燥20h得標(biāo)題化合物(5.1g，92％)白色固體。LCMS RT＝2.58分鐘，ES+ve m/z 641[M+H]+。
方法34-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮1，5-萘二磺酸鹽一水合物也可依據(jù)以下方法制備。
針對該方法使用以下縮寫 eq當(dāng)量(1eq＝1摩爾試劑/1摩爾原料) vol體積(1vol＝1ml/克原料) vol/vol體積/體積 wt重量(1wt＝1g試劑/1g原料) wt/vol重量/體積 中間體76(步驟1) (3E)-3-[(4-氯苯基)亞甲基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮
在NMP(3vol)中混合4-氯苯乙酸(購自例如Aldrich)(1.00eq)、鄰苯二甲酸酐(購自例如Aldrich)(1.10eq)和乙酸鈉(0.04eq)。加熱所得懸浮液至約200℃，攪拌所得褐色溶液2天。在反應(yīng)過程中，在環(huán)境壓力蒸掉NMP/水(0.45vol)。確認(rèn)轉(zhuǎn)化完全后(99％，HPLC)，1h內(nèi)冷卻反應(yīng)混合物至約70℃，在約70℃和1h內(nèi)加入EtOH(4.5vol)。1.5h內(nèi)冷卻所得褐色溶液至約50℃，在此過程中所述溶液變?yōu)楹稚珣腋∫?。在約50℃和1h內(nèi)加入EtOH(3.8vol)，1h內(nèi)冷卻所得褐懸浮液至約2℃，在約0-5℃攪拌1h。通過濾過吸濾器分離褐色固體，用冷EtOH溶液(EtOH/水＝l/1，vol/vol，約2℃，3×1vol)洗滌，在氮氣中和吸濾器上干燥。得產(chǎn)物淺褐色和濕潤固體。確定干燥失重，將產(chǎn)物用于下步反應(yīng)。產(chǎn)率(針對干燥失重和1H NMR測試進(jìn)行了校正)80％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ 6.37.(s，1H)，7.38(d，2H)，7.58(t，1H)，7.77(m，4H)，7.95(d，1H) 中間體77(步驟2) 4-{[4-氯苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮
將(3E)-3-[(4-氯苯基)亞甲基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(如例如步驟1所制備)(1.0eq，針對干燥失重進(jìn)行了校正)懸浮在EtOH(3.7vol)中，約85℃輕微回流加熱。通過滴液漏斗1h內(nèi)加入水合肼(購自例如Aldrich)(1.2eq)的EtOH(0.63vol)溶液。加入后，通過滴液漏斗將EtOH(0.63vol)加入反應(yīng)懸浮液以去除痕量水合肼。約85℃輕微回流加熱反應(yīng)懸浮液14h。冷卻至約20℃，取樣測轉(zhuǎn)化率(99％轉(zhuǎn)化，HPLC)。30分鐘內(nèi)向反應(yīng)混合物加入丙酮(0.35vol)(放熱反應(yīng))。攪拌猝滅的懸浮液至少1h，然后30分鐘內(nèi)冷卻至約2℃，約2℃攪拌1h。通過濾過吸濾器分離產(chǎn)物，用冷EtOH(約0-5℃，3×1.9vol)洗滌。在真空、氮氣中和吸濾器上完全干燥淺褐色固體。得標(biāo)題化合物淺褐色固體。產(chǎn)率(針對1HNMR測試進(jìn)行了校正)90-95％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，

4.30(s，2H)，7.35(m，4H)，7.88(m，3H)，8.26(d，1H)，12.62(s，1H) 中間體78(步驟3a) 2-{[(甲基磺?；?氧基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
冷卻N-Boc-D-脯氨醇(購自例如Aldrich)(1.0eq)的MIBK(9.5vol)溶液至約2℃，加入NEt3(1.03vol)。通過滴液漏斗1h內(nèi)加入MsCl(1.2eq)，形成白色懸浮液。用MIBK(0.5vol)洗滌滴液漏斗。使反應(yīng)混合物升溫至約22℃，攪拌2h。取樣測轉(zhuǎn)化率(TLC表明完全轉(zhuǎn)化)。加入水(5.0vol)。分層(良好和迅速分層)。用飽和NaHCO3溶液(5.0vol)洗滌有機(jī)相，最后用水(5.0vol)洗滌(良好和迅速分層)。通過在裝有MgSO4(0.46wt)的吸濾器上過濾干燥有機(jī)相。測定干燥有機(jī)相的體積(12.40vol)。濃縮有機(jī)相至43％wt/vol(基于N-Boc-D-脯氨醇/溶液)，通過在約40℃真空蒸餾至最終體積(2.20vol)。確定干燥樣品失重，蒸干(約40℃，<100毫巴)；形成黃色油狀物，取樣分析。將濃縮的黃色有機(jī)相(2.0vol)直接用于烷基化反應(yīng)。產(chǎn)率(針對干燥失重和1H NMR測試進(jìn)行了校正)100％。
中間體4(步驟3b) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮，HCl鹽
加熱4-{[4-氯苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟2所制備)(1.0eq)和Cs2CO3(2.5eq)的MIBK(9.7vol)的懸浮液至約100℃。在2h內(nèi)和約100℃滴加新制備的2-{[(甲基磺?；?氧基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(如例如步驟3a所制備)的MIBK(1.2eq，以N-Boc-D-脯氨醇計)的溶液。用MIBK(0.2vol)洗滌滴液漏斗，并將其加入反應(yīng)混合物中。在約100℃攪拌反應(yīng)混合物17h。形成褐色懸浮液。冷卻至約50℃后，取樣測轉(zhuǎn)化率(99％轉(zhuǎn)化率，HPLC)。冷卻反應(yīng)混合物至約22℃，向反應(yīng)混合物加入水(16.7vol)，接著加入MIBK(16.7vol)。分層。確定有機(jī)相的體積(18.8vol)，通過蒸餾真空(約45℃，<100毫巴)濃縮至50％w/vol(4-{[4-氯苯基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮/溶液)。在約22℃向濃縮的有機(jī)相加入HCl的異丙醇溶液(5-6M，3eq，2.0vol)。觀察到產(chǎn)生氣體，約1h內(nèi)形成淺褐色懸浮液。在約22℃攪拌反應(yīng)混合物14h。取樣測轉(zhuǎn)化率(完全轉(zhuǎn)化，HPLC)。2h內(nèi)冷卻淺褐色懸浮液至約1℃，通過濾過燒結(jié)漏斗分離產(chǎn)物，用冷MIBK(3×1vol)洗滌。得白色固體，依次在吸濾器上和真空(45℃，<20毫巴)干燥。得標(biāo)題化合物(HCl鹽)白色固體。產(chǎn)率(針對1H NMR測試進(jìn)行了校正)86％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ 1.76(m，1H)，1.95(m，2H)，2.14(m，1H)，3.15(m，1H)，3.27(m，1H)，3.91(m，1H)，4.36(d，2H)，4.47(m，2H)，7.35(d，2H)，7.41(d，2H)，7.80-8.00(m，3H)，8.31(d，1H)，8.92(bs，1H)，9.48(bs，1H) 中間體63(步驟4a) 甲磺酸4-[4-(甲氧基)苯基]丁基酯
在約21℃向4-(4-甲氧基苯基)-1-丁醇(購自例如Aldrich)(1.0eq)的MIBK(9.5vol)溶液加入NEt3(1.5eq，1.16vol)。冷卻所得溶液至約10-15℃，1h內(nèi)加入MsCl(1.2eq，0.52vol)，保持約16℃溫度。立即形成白色懸浮液。加入后，用MIBK(0.5vol)洗滌滴液漏斗，并將其轉(zhuǎn)移到反應(yīng)燒瓶中。3h內(nèi)使反應(yīng)混合物升溫至約22℃，在約22℃攪拌15h。產(chǎn)生淺黃色懸浮液。取樣測轉(zhuǎn)化率(完全轉(zhuǎn)化，HPLC)。冷卻反應(yīng)混合物至約10-15℃，加入水(5.6vol)，保持溫度低于約18℃。在約22℃攪拌乳狀液10分鐘。分層。用飽和NaHCO3水溶液(5.6vol)洗滌有機(jī)相，最后用水(5.6vol)洗滌。通過在裝有MgSO4(0.5wt)的吸濾器上過濾干燥有機(jī)相，用MIBK(2×0.2vol)洗滌MgSO4。測定干燥有機(jī)相的體積(12.40vol)。濃縮有機(jī)相至40％w/vol(4-(4-甲氧基苯基)-1-丁醇/溶液)，通過在約45℃真空蒸餾至2.20vol。取樣測干燥失重，蒸干(約40℃，<100毫巴)；剩下黃色油狀物，取樣分析。將包含黃色有機(jī)相(2.5vol)的產(chǎn)物用于隨后的烷基化反應(yīng)(步驟4b)。產(chǎn)率(針對干燥失重和1H NMR測試進(jìn)行了校正)101％。
1H NMR(DMSO-d6)δ 1.53-1.71(m，4H)，2.52-2.57(m，2H)，3.11-3.20(s，3H)，3.68-3-76(s，3H)，4.15-4.26(m，2H)，6.81-6.87(m，2H)，7.08-7.15(m，2H) 中間體64(步驟4b) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2R)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷)甲基]-1(2H)-酞嗪酮
在MIBK(16.5vol)中混合4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(2R)-2-吡咯烷基甲基]-1(2H)-酞嗪酮HCl鹽(如例如步驟3b所制備)(1.0eq)和K2CO3(5.0eq，1.77wt)，約135℃回流加熱所得淺褐色懸浮液。1h內(nèi)回流加入甲磺酸4-[4-(甲氧基)苯基]丁基酯(如例如步驟4a所制備)(2.4eq，1.59wt)的MIBK(4.9vol)透明橙色溶液。回流攪拌所得黃褐色懸浮液20h。取樣測轉(zhuǎn)化率(88.5％轉(zhuǎn)化，HPLC)。在約19℃和5分鐘內(nèi)加入水(24.7vol)(輕微放熱)。在約20℃攪拌由此形成的渾濁橙褐色混合物15分鐘。分層。通過濾過裝有MgSO4(0.92wt)的吸濾器干燥有機(jī)相；用MIBK(2×4.1vol)洗滌MgSO4。真空(約40-45℃，600毫巴以完全吸住)徹底去除所得有機(jī)相的溶劑。合并所得粗產(chǎn)物(2.45wt，暗褐色油狀物，HPLC純度73.50％面積/面積)和以相同方法所得粗產(chǎn)物(2.41wt)，通過填塞過濾(SiO2)純化。然后，將合并的粗產(chǎn)物(4.86wt)溶解在DCM中，將其置于裝有SiO2的吸濾器上(45.7wt，高度24.5cm，直徑30cm)以用DCM(823vol)洗去雜質(zhì)。洗脫液逐漸由純DCM變?yōu)镈CM:MeOH＝10:1以洗脫標(biāo)題化合物。得產(chǎn)物溶液(494vol)。通過真空蒸餾(45℃，600毫巴以完全吸住)去除溶劑得標(biāo)題化合物(2.46wt)淺褐色油狀物。產(chǎn)率(針對1H NMR測試進(jìn)行了校正)86％ 1H NMR(DMSO-d6)δ 1.32-1.53(m，4H)，1.61-1.79(m，4H)，2.08-2.18(m，1H)，2.20-2.27(m，1H)，2.37-2.45(m，2H)，2.66-2.76(m，1H)，2.84-2.93(m，1H)，2.96-3.04(m，1H)，3.69-3.71(m，3H)，3.89-3.98(m，1H)，4.18-4.26(m，1H)，4.28-4.36(m，2H)，6.77-6.83(m，2H)，6.98-7.04(m，2H)，7.33-7.39(m，4H)，7.79-7.90(m，2H)，7.91-7.97(m，1H)，8.26-8.31(m，1H)。
中間體65(步驟5) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮
冷卻4-[(4-氯苯基)甲基]-2-[((2R)-1-{4-[4-(甲氧基)苯基]丁基}-2-吡咯烷)甲基]-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟4b所制備)(1.0eq)的DCM(4.2vol)溶液至約0℃。20分鐘內(nèi)加入BBr3(1.8eq，0.33vol)的DCM(3.4vol)溶液，保持溫度低于約2℃。約20℃攪拌反應(yīng)混合物過夜。取樣測轉(zhuǎn)化率(90％轉(zhuǎn)化，HPLC)。在約-1℃和10分鐘內(nèi)繼續(xù)加入BBr3(0.2eq，0.05vol)。使反應(yīng)混合物升溫至約20℃。約5h后，再次取樣測轉(zhuǎn)化率(96％轉(zhuǎn)化，HPLC)。繼續(xù)加入BBr3(0.2eq，0.05vol)，在約25℃攪拌反應(yīng)過夜，再次取樣測轉(zhuǎn)化率(>99％轉(zhuǎn)化，HPLC)。冷卻反應(yīng)混合物至約15℃，15分鐘內(nèi)滴加HCl溶液(2N，2.4vol)，保持溫度低于約19℃。加入約2/3HCl后，觀察到發(fā)生放熱反應(yīng)。加完后，形成包含一些褐色油狀產(chǎn)物的褐色懸浮液。在約11℃和20分鐘內(nèi)緩慢加入飽和NaHCO3水溶液(5.1vol)，保持溫度低于約13℃。形成深色和稍渾濁的乳狀液。15分鐘內(nèi)使反應(yīng)混合物升溫至約20℃，分層。用DCM(4.28vol)反萃取水相。通過在裝有MgSO4(0.69wt)的吸濾器上過濾干燥合并的有機(jī)相，然后用DCM(3×1.7vol)洗滌MgSO4。干燥的有機(jī)相為深色和透明的。在真空(600毫巴-完全吸住，35-40℃)去除溶劑的過程中，形成褐色泡沫。所得褐色固體(HPLC純度73.22％面積/面積)包含殘留的DCM，再次干燥過周末(35℃，<20毫巴)。干燥產(chǎn)物的HPLC純度降低(63.98％面積/面積)。將粗產(chǎn)物分成2等份(2×0.50wt)，通過柱層析(2根柱子；SiO2(2×2.74wt)；高度＝20.5cm，直徑＝14cm；DCM:MeOH＝20:1)純化。合并包含產(chǎn)物的流分，真空濃縮(約35℃，600毫巴以完全吸住)。得標(biāo)題化合物淺褐色泡沫狀固體。產(chǎn)率(針對1H NMR測試進(jìn)行了校正)65％。
1H NMR(DMSO-d6)δ 1.39-1.72(m，4H)，1.82-2.05(m，3H)，2.12-2.24(m，1H)，2.35-2.48(m，2H)，3.00-3.25(m，2h，)，3.26-3.54(m，1H)，3.56-3.71(m，1H)，3.80-3.97(m，1H)，4.25-4.43(m，2H)，4.49-4.62(m，2H)，6.58-6.74(m，2H)，6.91-7.03(m，2H)，7.27-7.48(m，4H)，7.79-8.04(m，3H)，8.23-8.39(m，1H)，9.06-9.37b，2H) 中間體66(步驟6) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2R)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮
在2-丁酮(7.1vol)中和約20℃混合4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-羥基苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟5所制備)(1.0eq)和K2CO3(4.0eq，1.1wt)。向所得褐色懸浮液加入1-溴-3-氯丙烷(2.0eq，0.40vol)的2-丁酮(2.9vol)溶液?；亓骷訜岷稚旌衔?5h。取樣測轉(zhuǎn)化率(98％轉(zhuǎn)化，HPLC)。在約20℃和5分鐘內(nèi)加入水(14.8vol)(輕微放熱)。加入MIBK(14.8vol)，攪拌橙色混合物25分鐘；分層。通過在裝有Na2SO4(1.90wt)的吸濾器上過濾干燥有機(jī)相，用MIBK(2×2.4vol)洗滌Na2SO4。真空(40℃，600毫巴-完全吸住)蒸發(fā)溶劑得標(biāo)題化合物(氯衍生物和溴衍生物的混合物)褐色油狀物。產(chǎn)率(針對HPLC純度進(jìn)行了校正)91％。
1H NMR(CDCl3)δ 1.47-1.91(m，6H)，2.16-2.27(m，3H)，2.33-2.43(m，1H)，2.51-2.60(m，2H)，2.80-3.04(m，2H)，3.08-3.23(m，1H)，3.47-3.86(m，3H)，4.01-4.14(m，3H)，4.18-4.30(m，2H)，4.36-4.50(m，1H)，6.74-6.88(m，2H)，7.01-7.14(m，2H)，7.15-7.34(m，4H)，7.57-7.77(m，3H)，8.37-8.52(m，1H)。
實施例24A(步驟7) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮游離堿
在MIBK(10.9vol)中混合4-[(4-氯苯基)甲基]-2-{[(2R)-1-(4-{4-[(3-氯丙基)氧基]苯基}丁基)-2-吡咯烷基]甲基}-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟6所制備)(1.0eq)、KI(3.0eq，0.86wt)、K2CO3(3.0eq，0.72wt)和六亞甲基亞胺(購自例如Aldrich)(3.0eq，0.59vol)，回流加熱所得褐色懸浮液18h。取樣測轉(zhuǎn)化率(完全轉(zhuǎn)化，HPLC)。冷卻淺褐色懸浮液至約30℃，5分鐘內(nèi)加入水(6.9vol)。攪拌20分鐘后分層。用MIBK(3.96vol)反萃取水相。真空(40-50℃，600毫巴-完全吸住)去除溶劑得標(biāo)題化合物褐色油狀物。產(chǎn)率(針對1HNMR測試進(jìn)行了校正)83％。
1H NMR(CDCl3)δ 1.41-2.05(m，14H)，2.13-2.27(m，1H)，2.29-2.44(m，1H)，2.47-2.72(m，6H)，2.81-3.02(m，2H)，3.08-3.22(m，1H)，3.92-4.11(m，3H)，4.20-4.28(m，2H)，4.34-4-49(m，1H)，6.72-6.87(m，2H)，6.96-7.12(m，2H)，7.14-7.31(m，4H)，7.59-7.77(m，3H)，8.38-8.52(m，1H)。
實施例24C(步驟8) 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮1，5-萘二磺酸鹽一水合物
制備1 冷卻4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟7所制備)(1.0eq)的MeOH(41.41vol)的橙色溶液至約15℃。20分鐘內(nèi)加入HCl溶液(2N，41.4vol)，同時保持溫度低于約18℃。蒸掉溶劑(約80℃，600毫巴以完全吸住)，剩下橙褐色油狀物，將其溶解在水(32.1vol)中。加熱所得橙褐色稍渾濁的溶液至約100℃(回流)，加入MeOH(61.1vol)。2分鐘內(nèi)向所得黃色溶液加入1，5-萘二磺酸四水合物(1.0eq，0.57wt)的水(6.0vol)溶液。溶液仍為黃色，90分鐘內(nèi)從約58℃冷卻至約20℃。形成白色懸浮液，在約20℃使其濾過吸濾器。用MeOH水溶液(MeOH:水＝1:1，2×10.4vol)洗滌固體，真空(約50℃，完全吸住)干燥回收的淺褐色產(chǎn)物。得標(biāo)題化合物淺褐色固體。產(chǎn)率(針對HPLC純度進(jìn)行了校正)69％。
制備2 冷卻4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(如例如步驟7所制備)(1.0eq)的MeOH(39.9vol)褐色溶液至約15℃。20分鐘內(nèi)加入HCl溶液(2N，42.6vol)，保持溫度低于約18℃。蒸掉溶劑(約80℃，600毫巴以完全吸住)，剩下橙褐色油狀物，將其溶解在水(32.9vol)中。用EtOAc(1×41.2vol，1×39.5vol)洗滌所得橙褐色稍渾濁的溶液，形成分為兩相的白色乳狀液。蒸干無機(jī)相，剩下橙褐色油狀物。將所述狀油物溶解在MeOH(79.9vol)中，約90℃回流加熱所得橙褐色溶液。2分鐘內(nèi)向所述溶液加入1，5-萘二磺酸四水合物(1.0eq，0.56wt)的水(4.8vol)溶液。溶液保持透明，100分鐘內(nèi)冷卻至約2℃。得白色固體懸浮液，在約2℃攪拌30分鐘。通過過濾(良好)分離固體，用冷MeOH溶液(3×11.0vol)洗滌。真空干燥褐色固體(50℃，10毫巴，18h)。淺褐色產(chǎn)物包含顆粒，將其機(jī)械研碎。得標(biāo)題化合物淺褐色固體?？偦厥章?針對HPLC純度進(jìn)行了校正)74％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ 1.30-2.28(m，18H)，3.13(m，4H)，3.20(m，2H)，3.27-3.53(m，9H)，3.62(m，1H)，3.85(m，1H)，3.94(m，2H)，4.31(m，2H)，4.55(d，2H)，6.82(m，2H)，7.05(d，2H)，7.29-7.51(m，6H)，7.79-8.05(m，5H)，8.31(m，1H)，8.86(d，2H)，9.15(m，2H) DSC溫度記錄圖以瓦/秒對溫度圖示了加熱的不同速率。晶體4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮1，5-萘二磺酸鹽一水合物鹽(例如如實施例24C所制備)的DSC溫度記錄圖在約53℃±5、190℃±5和234℃±5示出了三個寬吸熱峰，其分別對應(yīng)于失水、少量吸熱行為和熔化。通過對熔點峰進(jìn)行積分測得熔化焓為58J/g±10。代表性的DSC溫度記錄圖見圖1。
4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮1，5-萘二磺酸鹽一水合物(例如如實施例24C所制備)的代表性XRPD圖見圖2。該種形式的峰角列表如下。

實施例24D 4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮二鹽酸鹽 將4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜

-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮(例如如實施例24A所制備)(3.85g，6.0mmol)溶解在MeOH(100ml)和2N鹽酸(12ml，24mmol)中。真空去除溶劑。將殘留物溶解在MeOH(50ml)中，然后蒸發(fā)。重復(fù)該過程3次。真空干燥殘留物得標(biāo)題化合物(4.3g，100％)易碎泡沫。LCMS RT＝3.41分鐘，ES+ve m/z 641(M+H)+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ 10.60(1H，br s)，10.49(1H，br s)，8.30(1H，dd，J＝7.5，1.5Hz)，7.96(1H，d，J＝7.5Hz)，7.88-7.93(1H，m)，7.84-7.89(1H，m)，7.38(2H，d，J＝8.5Hz)，7.34(2H，d，J＝8.5Hz)，7.09(2H，d，J＝8.5Hz)，6.84(2H，d，J＝8.5Hz)，4.62(1H，dd，J＝14.0，4.5Hz)，4.55(1H，dd，J＝14.0，7.0Hz)，4.37(1H，d，J＝16.5Hz)，4.33(1H，d，J＝16.5Hz)，4.00(2H，t，J＝6.0Hz)，3.77-3.85(1H，m)，3.55-3.64(1H，m)，3.31-3.46(3H，m)，3.15-3.22(2H，m)，3.02-3.14(4H，m)，2.47-2.53(2H，m)，2.07-2.23(4H，m)，1.49-1.99(14H，m)。
生物數(shù)據(jù) 可依據(jù)以下或類似測試對本發(fā)明化合物進(jìn)行體外和/或體內(nèi)生物活性測試。
H1受體細(xì)胞系產(chǎn)生和FLIPR測試法 1 組胺H1細(xì)胞系的產(chǎn)生 利用文獻(xiàn)[Biochem.Biophys.Res.Commun.，201(2)894(1994)]所述已知方法克隆人體H1受體。依據(jù)文獻(xiàn)[Br.J.Pharmacol.，117(6)1071(1996)]所述已知方法產(chǎn)生穩(wěn)定表達(dá)人體H1受體的中華倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。
組胺H1功能拮抗劑測試功能pKi值的測定 將組胺H1細(xì)胞系接種至開放的黑壁透明底384孔組織培養(yǎng)板極限必需培養(yǎng)基(Gibco/Invitrogen，貨號22561-021)中，其中補(bǔ)加了10％滲析的胎牛血清(Gibco/Invitrogen貨號12480-021)和2mM L-谷氨酰胺(Gibco/Invitrogen貨號25030-024)，并在5％ CO2和37℃中保持過夜。
從各孔去除過量培養(yǎng)基以剩下10μl。向每個孔加入30μl負(fù)載染料(250μM Brilliant Black，在Tyrodes緩沖液+丙磺舒(145mM NaCl，2.5mM KCl，10mM HEPES，10mM D-葡萄糖，1.2mM MgCl2，1.5mM CaCl2，2.5mM丙磺舒，用NaOH 1.0M調(diào)節(jié)pH至7.40)中稀釋的2μM Fluo-4)，在5％ CO2和37℃中孵化培養(yǎng)板60分鐘。
向每個孔加入10μl在Tyrodes緩沖液+丙磺舒中稀釋至所需濃度的受試化合物(或10μl Tyrodes緩沖液+丙磺舒作為對照)，在37℃和5％ CO2中孵化培養(yǎng)板30分鐘。然后將培養(yǎng)板放入FLIPRTM(MolecularDevices，UK)中以便如Sullivan等(In Lambert DG(ed.)，CalciumSignaling Protocols，New Jersey Humana Press，1999，125-136)所述方法在以導(dǎo)致組胺最終測試濃度為EC80的濃度加入10μl組胺之前和之后監(jiān)測細(xì)胞熒光(λex＝488nm，λEM＝540nm)。
功能拮抗以如FLIPRTM系統(tǒng)(Molecular Devices)所測組胺誘導(dǎo)的熒光增加的抑制表示。通過濃度效果曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)數(shù)學(xué)分析確定功能親和力。
組胺H1功能拮抗劑測試拮抗劑pA2和持續(xù)時間的測定 如上所述，將表達(dá)的組胺H1受體CHO細(xì)胞接種至開放的黑壁透明底96孔組織培養(yǎng)板。
培養(yǎng)過夜后，從每個孔去除生長培養(yǎng)基，用200μl磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌，并置換成50μl負(fù)載染料(250μM Brilliant Black，在Tyrodes緩沖液+丙磺舒(145mM NaCl，2.5mM KCl，10mM HEPES，10mM D-葡萄糖，1.2mM MgCl2，1.5mM CaCl2，2.5mM丙磺舒，用NaOH 1.0M調(diào)節(jié)pH至7.40)中稀釋的1μM Fluo-4)。在37℃孵化細(xì)胞45分鐘。去除負(fù)載緩沖液，如上洗滌細(xì)胞，向每個孔加入90μl Tyrodes緩沖液+丙磺舒。向每個孔加入10μl在Tyrodes緩沖液+丙磺舒中稀釋至所需濃度的受試化合物(或10μl Tyrodes緩沖液+丙磺舒作為對照)，在37℃和5％ CO2中孵化培養(yǎng)板30分鐘。
然后將培養(yǎng)板放入FLIPRTM(Molecular Devices，UK)中以便如Sullivan等(In Lambert DG(ed.)，Calcium Signaling Protocols，NewJersey Humana Press，1999，125-136)所述方法在以1mM-0.1nM濃度范圍加入50μl組胺之前和之后監(jiān)測細(xì)胞熒光(λex＝488nm，λEM＝540nm)。通過非線性回歸利用標(biāo)準(zhǔn)四參數(shù)邏輯等式分析所得濃度響應(yīng)曲線以確定組胺EC50和產(chǎn)生50％組胺最大響應(yīng)的響應(yīng)所需的組胺濃度。利用以下標(biāo)準(zhǔn)等式計算拮抗劑pA2:pA2＝log(DR-1)-log[B]，其中DR＝劑量比，定義為EC50拮抗劑處理的/EC50對照，[B]＝拮抗劑的濃度。
為測定拮抗劑持續(xù)時間，在開放的黑壁透明底96孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)細(xì)胞過夜，用PBS洗滌，用所選拮抗劑濃度孵化得約30-300DR。拮抗劑孵化30分鐘后，用200μl PBS洗滌細(xì)胞兩次或三次，然后向每個孔加入100μl Tyrodes緩沖液以引起拮抗劑離解。在37℃孵化預(yù)定時間后，一般為30-270分鐘，然后再次用200μl PBS洗滌細(xì)胞，如上所述在37℃用100μl包含Brilliant Black、丙磺舒和Fluo-4的Tyrodes緩沖液孵化45分鐘。之后，如上所述利用組胺在FLIPRTM中對細(xì)胞進(jìn)行測試。各時間點的劑量比用于通過以下等式確定局部H1受體占有率局部受體占有率＝(DR-1)/DR。受體占有率隨時間的降低約為直線，通過線性回歸對其進(jìn)行分析。將該直線擬合的斜率作為拮抗劑離解速率的指標(biāo)。各時間點的拮抗劑處理的細(xì)胞與拮抗劑處理和洗滌的細(xì)胞的劑量比用于計算相對劑量比(相對DR)，其也用作拮抗劑持續(xù)時間的指標(biāo)。作用時間長的拮抗劑產(chǎn)生接近1的相對DR值，作用時間短的拮抗劑產(chǎn)生接近于針對拮抗劑處理單獨所得的劑量比值的相對DR值。
2.H3受體細(xì)胞系產(chǎn)生、膜制備和功能GTPγS測試法 組胺H3細(xì)胞系的產(chǎn)生 通過具有酶BamH1和Not-1的質(zhì)粒DNA的限制酶切消化從其結(jié)合的載體pCDNA3.1 TOPO(InVitrogen)分離組胺H3 cDNA，并連接到用相同酶系消化的誘導(dǎo)型表達(dá)載體pGene(In Vitrogen)上。如在US專利5,364,791、5,874,534和5,935,934中所述使用Gene SwitchTM系統(tǒng)(一種在誘導(dǎo)物不存在時關(guān)閉并在誘導(dǎo)物存在時打開的轉(zhuǎn)基因表達(dá)系統(tǒng))。將連接DNA轉(zhuǎn)移到活性DH5α E.大腸桿菌宿主細(xì)菌細(xì)胞中并以50μgml-1的濃度接種到含有ZeocinTM(一種抗菌素，其允許細(xì)胞表達(dá)sh ble基因的選擇，所述基因存在于pGene和pSwitch上)的LuriaBroth(LB)瓊脂上。經(jīng)限制酶切分析鑒定含有重配位質(zhì)粒的菌落。從250ml含有pGeneH3質(zhì)粒的宿主細(xì)菌的培養(yǎng)物中制備用于轉(zhuǎn)移到哺乳動物細(xì)胞中的DNA并如每一制造商指導(dǎo)(Qiagen)的使用DNA制備試劑盒(Qiagen Midi-Prep)使其分離。
將預(yù)先用pSwitch調(diào)節(jié)質(zhì)粒(InVitrogen)轉(zhuǎn)染的CHO K1細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中以2 x 106細(xì)胞/每T75燒瓶的濃度接種，所述完全培養(yǎng)基含有Hams F12(GIBCOBRL，Life Technologies)培養(yǎng)基，其補(bǔ)加了10％v/v透析的胎牛血清、L-谷氨酰胺和潮霉素(100μg ml-1)，24小時后使用。使用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺并根據(jù)制造商的指導(dǎo)(InVitrogen)，將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。48小時后將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞放置到補(bǔ)加500μg ml-1ZeocinTM的完全培養(yǎng)基中。
10-14天后，將選擇性10nM Mifepristone(In Vitrogen)加入到培養(yǎng)基中以誘導(dǎo)受體的表達(dá)。18小時后，使用乙二胺四乙酸(EDTA；1:5000；InVitrogen)使誘導(dǎo)的細(xì)胞從燒瓶中脫離，隨后用pH7.4的磷酸緩沖鹽溶液洗滌數(shù)次并重懸浮在含有極限必需培養(yǎng)基(MEM)的分選培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基沒有酚紅，并補(bǔ)加了Earles鹽和3％ Foetal Clone II(Hyclone)。通過用兔多克隆抗體、4a染色，檢查作為受體表達(dá)的近似1 x 107個細(xì)胞，高位阻止組胺H3受體的N-端結(jié)構(gòu)域，在冰上溫育60分鐘，隨后在分選培養(yǎng)基中洗滌兩次。通過將所述細(xì)胞在帶有山羊抗兔抗體的冰上培育60分鐘檢測受體結(jié)合的抗體，將受體結(jié)合的抗體與Alexa 488熒光標(biāo)記(Molecoular Probes)結(jié)合。隨后再用分選培養(yǎng)基洗滌兩次，將細(xì)胞通過50μm FilconTM(BD Biosciences)過濾，然后在裝備有自動細(xì)胞沉著部件的FACS Vantage SE Fiow Cytometer上分析。對照細(xì)胞是以相同方法處理的非誘導(dǎo)細(xì)胞。將陽性著色細(xì)胞作為單一細(xì)胞分選進(jìn)96-孔平板中，該平板中含有500μg ml-1 ZeocinTM的完全培養(yǎng)基并充許在通過抗體和配體結(jié)合研究對于受體表達(dá)重分析前膨脹。一種克隆，3H3被選擇用于膜制劑。
來自培養(yǎng)細(xì)胞的膜制劑 該方案的所有步驟都在4℃下并與預(yù)冷卻的試劑一起進(jìn)行。將細(xì)胞沉淀物重懸浮在10容積均化緩沖液中(50mM N-2-羥基乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)，用KOH調(diào)節(jié)pH為7.40，其中補(bǔ)加了10-6M亮抑酶肽(乙?；?亮氨?；?亮氨?；比?arginal)；Sigma L2884)、25μgml-1桿菌肽(Sigma B0125)、1mM苯基甲基磺酰氟(PMSF)和2 x 10-6M抑胃酶肽A(Sigma)。然后在1升玻璃Waring攪拌器中經(jīng)2 x 15秒裂解，隨后在500g下離心20分鐘使細(xì)胞均化。然后將上清液在48,000g下離心30分鐘。經(jīng)渦旋5秒鐘將沉淀物重懸浮在均化緩沖液中(4×初始細(xì)胞沉淀物的體積)，隨后在Dounce勻漿器(10-15振幅)中均化。此時將制備物等分試樣放入聚丙烯管中并放置在-80℃下。
組胺H3功能拮抗劑測試 向純白384孔平板中的每一種需測試的化合物中加入- (a)0.5μl在DMSO中稀釋至所需濃度的受試化合物(或0.5μlDMSO作為對照)； (b)如下制備的30μl珠粒/膜/GDP混合液將麥胚凝集素聚苯乙烯

(WGA PS LS)閃爍親近測定法(SPA)珠粒與膜(根據(jù)以上所述方法制備)混合并以測試緩沖液(20mM N-2-羥基乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)+100mM NaCl+10mMMgCl2，pH 7.4 NaOH)稀釋得到30μl終容積，其包含5μg蛋白、0.25mg珠粒/孔和10μM最終測試濃度的鳥苷5’-二磷酸(GDP)(Sigma，稀釋到測試緩沖液中)，在振蕩器上和室溫孵化60分鐘； (c)15μl 0.38nM[35S]-GTP S(Amersham；放射性濃度＝37MBqml-1；比活性＝1160Cimmol-1)，組胺(導(dǎo)致組胺最終測試濃度為EC80的濃度)。
2-6h后，1500rpm離心平板5分鐘，在Viewlux計數(shù)器上利用613/55濾光器5minplate-1計數(shù)。利用4參數(shù)邏輯等式分析數(shù)據(jù)。作為最低量的基礎(chǔ)活性，即組胺不加入到孔中。
鼻內(nèi)測試方法整體體積描記法 (a)致敏 用卵清蛋白(OVA)和氫氧化鋁(Al(OH)3或Alum)的生理鹽水溶液以25μl/鼻孔每天致敏150-250g雌性Dunkin-Hartley豚鼠兩次，共5天(第1周)。溶液由20μg/ml OVA和180mg/ml Alum組成。在第2周和第3周，動物接受25μl/鼻孔OVA(5mg/ml)，每天一次。在第4周，豚鼠進(jìn)入研究，但如第2周和第3周那樣連續(xù)致敏直至給予化合物或載體的前一天。
(b)化合物/載體預(yù)處理 在組胺測試前在不同時間對受試化合物進(jìn)行預(yù)處理。給藥1h后測定效果劑量響應(yīng)曲線，而給藥7天后對作用時間進(jìn)行研究。將受試化合物配制成在0.9％無菌鹽水中的溶液或在0.9％無菌鹽水/吐溫80中的懸浮液。
用異氟烷麻醉豚鼠(5％，2-31/分鐘O2)，仰臥放置，利用Gilson移液管給予每個鼻孔25μl受試化合物或載體。給藥后，在從麻醉中恢復(fù)的過程中動物保持仰臥至少30秒。
(c)組胺測試方法 組胺測試前30分鐘，給予豚鼠硫酸阿托品(Sigma A0257，溶解在鹽水中)，1mg/kg腹腔注射。然后將動物置于整體體積描記系統(tǒng)中

Electronics)，其中如Hamelmann E.，Schwarze，J.，Takeda，K.，Oshiba，A.，Larsen，L.，Irvin，C.G.和Gelfand，E.W.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.156766-775(1997)所述記錄參數(shù)PenH曲線下面積(AUC)。記錄10分鐘基線AUC，如果該值大于1000，則將所述動物排除在外。
到達(dá)規(guī)定的前劑量時間后，用異氟烷再次麻醉豚鼠，并給予15mM組胺或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(25μl/鼻孔)。在從麻醉恢復(fù)的過程中，將動物放回單獨的體積描記室，并記錄4×10分鐘連續(xù)的PenHAUC。歸納這些記錄得每只動物組胺測試后40分鐘內(nèi)的累積AUC。利用具有事后比較Fishers LSD檢驗(通用線性模型，

)和最后Hochberg調(diào)整的ANOVA分析數(shù)據(jù)。利用化合物預(yù)處理組相對于載體預(yù)處理組胺測試組的平均響應(yīng)間的統(tǒng)計學(xué)上的明顯區(qū)別確定組胺誘導(dǎo)的充血的抑制。
CNS滲透 (i)通過推注給藥的CNS滲透 以1mg/kg標(biāo)稱劑量靜脈給予CD Sprague Dawley大鼠化合物。將化合物配制在5％DMSO/45％ PEG 200/50％水中。在用異氟烷末端麻醉下和給藥5分鐘后取血液樣品，同時還去除腦部以評價腦部滲透。直接將血液樣品置于肝素化的管中。利用蛋白質(zhì)沉淀制備血液樣品以供分析，通過均化和隨后的蛋白質(zhì)沉淀從腦部萃取藥物制備腦部樣品。通過使用化合物特異性質(zhì)量轉(zhuǎn)化的定量LC-MS/MS分析測定血液和腦部萃取物中的母藥濃度。
(ii)穩(wěn)態(tài)靜脈注射后的CNS滲透 以0.4mg/kg標(biāo)稱劑量給予雄性CD Sprague Dawley大鼠化合物負(fù)荷劑量。然后以0.1mg/kg/h標(biāo)稱劑量靜脈注射化合物4h。將化合物配制在2％DMSO/30％ PEG 200/68％水中。給藥0.5、1.5、2.5、3、3.5和4h后取連續(xù)或最終血液樣品。在用異氟烷末端麻醉下收集最終血液樣品，同時還去除腦部以評價腦部滲透。直接將血液樣品置于肝素化的管中。利用蛋白質(zhì)沉淀制備血液樣品以供分析，通過均化和隨后的蛋白質(zhì)沉淀從腦部萃取藥物制備腦部樣品。通過使用化合物特異性質(zhì)量轉(zhuǎn)化的定量LC-MS/MS分析測定血液和腦部萃取物中的母藥濃度。
大鼠藥代動力學(xué) 通過單次靜脈或口服給藥分別以1mg/kg和3mg/kg標(biāo)稱劑量給予雄性CD Sprague Dawley大鼠化合物。將化合物配制在5％DMSO/45％ PEG 200/50％水中。通過在給藥后0.083、0.25、0.5、1、2、4和7h取連續(xù)或者最終血液樣品(對某些研究而言，可取12和24h樣品)獲得靜脈分布。通過在給藥后0.25、0.5、1、2、4、7和12h取連續(xù)或最終血液樣品(對某些研究而言，可取24和30h樣品)獲得口服分布。直接將血液樣品置于肝素化的管中。通過蛋白質(zhì)沉淀制備血液樣品，并通過LC-MS/MS利用化合物特異性質(zhì)量轉(zhuǎn)化進(jìn)行定量分析。獲得藥物濃度時間圖，非房室PK分析用于獲得半衰期、清除率、體積分布和口服生物利用率的估計值。
狗藥代動力學(xué) 通過單次靜脈或口服給藥分別以1mg/kg和2mg/kg標(biāo)稱劑量給予雄性Beagle狗化合物。依據(jù)交叉設(shè)計進(jìn)行研究從而使同一只狗用于兩次給藥，每隔1周給藥一次。將化合物配制在5％DMSO/45％ PEG200/50％水中。通過在給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6和12h取連續(xù)血液樣品(對某些研究而言，可取24h樣品)獲得靜脈分布。通過在給藥后0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、12和24h取連續(xù)血液樣品獲得口服分布。直接將血液樣品置于肝素化的管中。通過蛋白質(zhì)沉淀制備血液樣品，并通過LC-MS/MS利用化合物特異性質(zhì)量轉(zhuǎn)化進(jìn)行定量分析。獲得藥物濃度時間圖，非房室PK分析用于獲得半衰期、清除率、體積分布和口服生物利用率的估計值。
結(jié)果 在上述或類似測試/方法中對實施例1-23的化合物進(jìn)行了測試，并表現(xiàn)出 (i)實施例化合物對H1的平均pKi(pKb)大于約7。實施例7化合物對H1的平均pKi(pKb)大于約8。
實施例1-3、5-9、11-13、15、18和23化合物對H1的平均pA2值大于約7。實施例3、8、11、12、13、15和18化合物對H1的平均pA2值大于約8。實施例6、7、9和23化合物對H1的平均pA2值大于約9。
(ii)實施例化合物對H3的平均pKi(pKb)大于約8。實施例1、2、5-10、12、14-20和23化合物對H3的平均pKi(pKb)大于約9。
(iii)實施例7、8、9、11、12、13、15、18和23化合物在H1功能拮抗劑測試中的作用時間較氮

斯丁更長(在一個或多個時間點)。
(iv)實施例7和13化合物表現(xiàn)出較氮

斯丁更低的CNS滲透。實施例16化合物表現(xiàn)出與氮

斯丁相當(dāng)?shù)腃NS滲透。
在上述或類似測試/方法中對實施例24化合物及其各種鹽進(jìn)行了測試，并表現(xiàn)出 i)對H1的平均pKi(pKb)為約7.8，對H1的平均pA2值為約8.9。
ii)對H3的平均pKi(pKb)為約9.6。
iii)在組胺H1功能拮抗劑測試中，在一個或多個時間點，較氮

斯丁的作用時間明顯更長。
iv)在豚鼠整體體積描記法模型中，給藥24小時后相對于氮

斯丁統(tǒng)計學(xué)上明顯地抑制鼻充血(圖3)。
v)CNS滲透較氮

斯丁更小。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其鹽
其中
A代表N或CH；
R1和R2各自獨立代表鹵素、C1-6-烷基、C1-6烷氧基、羥基或三氟甲基；
y和z各自獨立代表0、1或2；
R3代表-(CH2)aNR4R5基團(tuán)或式(i)基團(tuán)
其中
a代表1、2或3；
b代表0或1；
c代表0、1或2，d代表0、1、2或3，使c和d不同時為0；
R4代表氫或C1-6烷基，R5和R6各自獨立代表選自式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)
其中，對式(a)而言
e代表1-6；
e′代表2-4；
f代表0、1或2，g代表0、1、2或3，使f和g不同時為0；
h代表0、1或2；
R7代表C1-3烷基；
其中，對式(b)而言
i代表1-6；
X代表化學(xué)鍵、O或-N(R10)C(O)-，其中R10代表氫或C1-6烷基；
j和k各自代表1或各自代表2；
R8代表氫、C3-6環(huán)烷基或C1-6烷基；
其中，對式(c)而言
l代表1-6；
l′代表0-3；
m代表0、1或2，n代表0、1、2或3，使m和n不同時為0，且使l’加n必須為1、2或3；
R9代表氫、C3-6環(huán)烷基或C1-6烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中A代表CH。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中z代表1，R2在4-位(對位)取代。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中R3代表式(i)基團(tuán)。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R6代表式(a)基團(tuán)。
6.權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中R3代表基團(tuán)-(CH2)aNR4R5，R5代表式(b)基團(tuán)。
7.實施例1至實施例24的化合物或其鹽。
8.一種化合物，所述化合物為4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜
-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其鹽。
9.一種化合物，所述化合物為4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2S)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜
-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)-1(2H)-酞嗪酮或其鹽。
10.一種化合物，所述化合物為4-[(4-氯苯基)甲基]-2-({(2R)-1-[4-(4-{[3-(六氫-1H-氮雜
-1-基)丙基]氧基}苯基)丁基]-2-吡咯烷基}甲基)吡啶并[3，4-d]噠嗪-1(2H)-酮或其鹽。
11.權(quán)利要求1-10中任一項的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
12.用于治療的權(quán)利要求11的化合物。
13.用于治療呼吸道炎性和/或過敏性疾病的權(quán)利要求12的化合物。
14.用于治療過敏性鼻炎的權(quán)利要求13的化合物。
15.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求11的式(I)化合物與任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述組合物適于鼻內(nèi)輸送。
17.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求11的化合物和一種或多種其他治療劑。
18.權(quán)利要求11的化合物在制備用于治療或預(yù)防呼吸道炎性和/或過敏性疾病的藥物中的用途。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述疾病為過敏性鼻炎。
20.一種治療或預(yù)防呼吸道炎性和/或過敏性疾病的方法，所述方法包括給予有需要的病人有效量的權(quán)利要求11的式(I)化合物。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述疾病為過敏性鼻炎。
22.一種制備式(I)化合物的方法，所述方法選自A-G的方法
A)使式(IIa)或(IIb)化合物
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d和R4如權(quán)利要求1所定義，
與式(IIIa)、式(IIIb)或式(IIIc)化合物反應(yīng)
其中e、e′、f、g、h、R7、i、X、j、k、R8、l、l′、m、n和R9如權(quán)利要求1所定義，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘、活化的羥基，例如甲磺酸基或甲苯磺酸基，或L代表醛，在這種情況下L-(CH2)e.i或l為HC(O)-(CH2)(e.i或l)-1；
B)使式(IV)化合物
其中A代表CH，R1和y如權(quán)利要求1所定義，R3為式(i)基團(tuán)，L代表離去基團(tuán)，例如氯或溴，
與式(V)化合物反應(yīng)
其中R2和z如權(quán)利要求1所定義，M-配體代表以下基團(tuán)中的一種Zn-X(其中X為氯或溴)、B(OH)2、SnR3(其中R代表C1-6烷基，例如丁基)或SiR3(其中R代表C1-6烷氧基，例如甲氧基或乙氧基)；
C)對其中R5或R6代表式(b)基團(tuán)，其中X代表-N(R10)C(O)-的式(I)化合物而言，使式(VI)化合物
其中j、k和R8如權(quán)利要求1所定義，
與式(VIIa)或(VIIb)化合物反應(yīng)
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d、i、R4和R10如權(quán)利要求1所定義；
D)對其中R5或R6代表式(b)基團(tuán)，其中X代表化學(xué)鍵的式(I)化合物而言，使式(VIII)化合物
其中j、k和R8如權(quán)利要求1所定義，
與式(IIa)或(IIb)化合物反應(yīng)
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d和R4如權(quán)利要求1所定義；
E)對其中R5或R6代表式(a)基團(tuán)的式(I)化合物而言，使式(IXa)或(IXb)化合物
其中A、R1、y、R2、z、a、b、c、d、e、e′和R4如權(quán)利要求1所定義，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘，
與式(X)化合物反應(yīng)
其中f、g、h和R7如權(quán)利要求1所定義；
F)由其他式(I)化合物變換；或
G)制備式(I)化合物的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)化合物、及其鹽、其制備方法、包含其的組合物及其在治療各種病癥(例如過敏性鼻炎)中的用途。
文檔編號C07D237/00GK101472899SQ200780023232
公開日2009年7月1日 申請日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月20日
發(fā)明者P·M·戈爾, A·P·漢庫克, S·T·霍奇森, L·J·金頓, P·A·普羅科皮歐 申請人:葛蘭素集團(tuán)有限公司