專利名稱：使用抗IL-1α抗體治療癌癥的制作方法
使用抗IL-la抗體治療癌癥
0001本申請(qǐng)要求2006年5月22日提交的共同未決臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào) 60/802,166的權(quán)益，并通過(guò)引用將其引入。
背景技術(shù)：
0002癌癥通常通過(guò)侵入鄰近組織結(jié)構(gòu)，破壞關(guān)鍵器官的生理學(xué)來(lái) 進(jìn)行殺傷。已發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移過(guò)程與原發(fā)性腫瘤病變(primary tumor lesions)的 去分化并發(fā)。腫瘤去分化的必然結(jié)果是腫瘤異質(zhì)性(tumor heterogeneity)。 去分化、異質(zhì)性和轉(zhuǎn)移三聯(lián)征(triad)導(dǎo)致了致命的混合(a deadly mix)。 一旦癌癥變?yōu)檗D(zhuǎn)移性的并且是異質(zhì)性的，完全抗腫瘤治療的可能性就極 小了。長(zhǎng)期存在的希望是識(shí)別出轉(zhuǎn)移性腫瘤的一些共同要素(common element),在甚至最異質(zhì)性腫瘤的生長(zhǎng)(贅疣，outgrowth)和去分化過(guò)程 中保持的關(guān)鍵特征，這個(gè)特征對(duì)轉(zhuǎn)移過(guò)程是固有的，以至于它幾乎存在 于不論來(lái)源或趨向性的所有腫瘤細(xì)胞中。隨著這種關(guān)鍵要素的識(shí)別，治 療晚期播散性疾病的想法可具有現(xiàn)實(shí)基礎(chǔ)。
附圖簡(jiǎn)述
0003圖l。該圖顯示了用抗IL-la抗體治療后，具有人腫瘤異種移 植物的裸鼠的腫瘤反應(yīng)。用小鼠抗人抗IL-la單克隆抗體(mahIL-la)或倉(cāng)鼠 抗小鼠IL-la單克隆抗體(hanJL-la)或二者(mahlL-la+hamlL-la)治療小鼠。
從異種移植當(dāng)天(第l天腫瘤)或轉(zhuǎn)移性疾病建立(建立的腫瘤)之后， 開始給小鼠5mg/kg劑量的每種抗體，每周兩次。當(dāng)攜帶相當(dāng)大的腫瘤負(fù) 荷并處于明顯不適時(shí)，小鼠被處死。

圖1A，前列腺腫瘤，第l天；圖1B， 乳腺腫瘤，第l天；圖1C，建立的前列腺腫瘤；圖1D，建立的乳腺腫瘤。
0004圖2。三次皮下注射在明礬中的IL-la-PPD偶聯(lián)物后，第56 天在C57BL/6小鼠中抗IL-la自身抗體的形成("。對(duì)照小鼠僅用在明磯中 的PPD免疫(—。
0005圖3?？贵w依賴性補(bǔ)體介導(dǎo)的EL-4細(xì)胞殺傷。EL-4細(xì)胞與連 續(xù)稀釋的小鼠抗小鼠IL-la多克隆抗血清一起溫育。死亡細(xì)胞與活細(xì)胞的 比例與血清濃度成比例。人抗小鼠IL-la單克隆抗體被用作陽(yáng)性對(duì)照。與 未用過(guò)鼠血清溫育或僅與培養(yǎng)基溫育作為兩個(gè)陰性對(duì)照。
發(fā)明詳述
0006用抗體靶向IL-la可用作癌癥治療。特別地是，抗IL-la抗體 能夠通過(guò)中斷腫瘤來(lái)源的IL-lcx在腫瘤轉(zhuǎn)移中所發(fā)揮的生理作用來(lái)抑制腫 瘤轉(zhuǎn)移潛能。此外，因?yàn)镮L-loi由腫瘤表達(dá)，所以靶向IL-la的抗體可通過(guò) 抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(通常稱為ADCC， antibody directed cellular cytotoxicity)導(dǎo)致直接的腫瘤細(xì)胞毒性。
0007白細(xì)胞介素-la (IL-la)可成為癌癥治療的靶是非常意外的。 要理解這一點(diǎn)需要簡(jiǎn)要地回顧所謂白細(xì)胞介素-l體系的歷史。IL-1體系包 括IL-lou白細(xì)胞介素-1(3 (IL-1卩)、白細(xì)胞介素-l受體拮抗劑(IL-lra)和 白細(xì)胞介素-l受體l (IL-1R1)。發(fā)現(xiàn)IL-la和IL-lp之后的近三十年以來(lái)， 在區(qū)分這兩種基因產(chǎn)物不同的生物功能方面進(jìn)展很小。無(wú)法闡明這兩個(gè) 細(xì)胞因子獨(dú)立的生物學(xué)功能，這一點(diǎn)被科學(xué)文獻(xiàn)中通常只提到白細(xì)胞介 素-l所表明，幾十年來(lái)白細(xì)胞介素-l一直為統(tǒng)稱IL-la和/或IL-l!3的術(shù)語(yǔ)。 無(wú)法區(qū)分這兩種細(xì)胞因子這一問題是既獨(dú)特又罕見的，這是考慮到IL-la 和IL-1P之間相當(dāng)明顯的區(qū)別它們不共有顯著的蛋白序列同源性；它們 處在不同的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)下，造成表達(dá)的時(shí)空分離；它們是通過(guò)單獨(dú)的和各 自的復(fù)雜翻譯后加工機(jī)器而被獨(dú)立調(diào)節(jié)；它們受到獨(dú)特且獨(dú)立的翻譯后 修飾；而且它們具有不同的組織分布，并針對(duì)不同的刺激上調(diào)。此外，IL-la 是通過(guò)脂尾(lipid tail)進(jìn)行膜錨定的，而且具有凝集素樣結(jié)合活性，而 IL-1(3是分泌蛋白。
0008考慮到這些細(xì)胞因子之間的區(qū)別，就值得理解為什么IL-la 與IL-1P應(yīng)該統(tǒng)稱為白細(xì)胞介素1。首先，早期的假設(shè)是，這兩個(gè)基因產(chǎn)物只表現(xiàn)出單一的生物活性，或者也許更精確地說(shuō)，IL-la幾乎沒有顯著的 生物功能。這種對(duì)IL-la的忽視源于下列事實(shí)沒有任何已知的細(xì)胞因子 的分泌機(jī)制，沒有能整合入膜的跨膜序列，和沒有編碼轉(zhuǎn)位到分泌囊泡 的信號(hào)序列。IL-la被認(rèn)為是包含在細(xì)胞質(zhì)中，并且作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子 的角色表明它與真正的細(xì)胞因子幾乎沒有相關(guān)性。另一方面，IL-1(3的翻 譯后加工和分泌途徑被快速建立。事實(shí)上，在所謂的白細(xì)胞介素-l體系中 僅有的IL-la的相關(guān)性似乎是IL-la顯示出通過(guò)IL-l受體-l誘導(dǎo)信號(hào)，該信 號(hào)被發(fā)現(xiàn)是響應(yīng)IL-la和IL-ip的誘導(dǎo)信號(hào)。因?yàn)闆]有分泌機(jī)制，所以假定 當(dāng)IL-la從死細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)釋放時(shí)，它可能只實(shí)現(xiàn)生理作用。但幾乎在任 何情況下，在血清或組織中都沒有發(fā)現(xiàn)明顯水平的IL-la，這似乎將IL-la 可能的重要性最小化。
0009因此，用抗IL-lct抗體治療動(dòng)物能保護(hù)動(dòng)物免受侵襲性形式 的癌癥是相當(dāng)意外的。同樣地，免疫動(dòng)物以誘導(dǎo)抗IL-la抗體效價(jià)可以保 護(hù)動(dòng)物免于腫瘤。作用機(jī)制目前尚不清楚，可能涉及中和宿主促腫瘤 (pro-tumor) IL-la的產(chǎn)生、中和腫瘤IL-la的產(chǎn)生或通過(guò)抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒 性(ADCC)或補(bǔ)體介導(dǎo)殺傷(ADCK)中和腫瘤直接細(xì)胞毒性的一個(gè)或多個(gè) 組合。
0010可根據(jù)本發(fā)明治療的患者包括人和非人哺乳動(dòng)物，如伙伴動(dòng) 物(companion animal)、實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物、動(dòng)物模型等(如貓、狗、綿羊、豬、 山羊)。
0011本文使用的"抗體"包括完整多克隆或單克隆免疫球蛋白分 子；免疫球蛋白片段，如單體和二聚體Fab、 F(ab')2、 scFv和Fv;和非天 然發(fā)生的分子，如雙抗體、微抗體(minibody) 、 Kappa體禾卩Janusins等。 本發(fā)明治療方法中可用的抗體包括IL-l(x結(jié)合位點(diǎn)，并與IL-lcc特異性地結(jié) 合。本文使用的"IL-la結(jié)合位點(diǎn)"包括在抗體可變部分自然發(fā)生的IL-la 結(jié)合位點(diǎn)。IL-la結(jié)合位點(diǎn)還包括這樣的結(jié)合位點(diǎn)其通過(guò)l至15個(gè)之間(例 如l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14或15)保守氨基酸 替換而不同于自然產(chǎn)生的IL-la結(jié)合位點(diǎn)，并且該結(jié)合位點(diǎn)與IL-la特異性 地結(jié)合。典型地，與IL-la特異性結(jié)合的抗體提供了檢測(cè)信號(hào)，其高于當(dāng) 非IL-la抗原用于免疫化學(xué)分析時(shí)提供的檢測(cè)信號(hào)的至少10、 20或100倍。優(yōu)選地，在免疫化學(xué)分析中，與IL-la特異性結(jié)合的抗體沒有檢測(cè)到其它 蛋白，并且可以從溶液中免疫沉淀IL-la。
0012多克隆抗體可以通過(guò)使用眾所周知的方法用IL-la免疫適合 的宿主來(lái)獲得。但是，單克隆抗體是優(yōu)選的。單克隆抗體(如全長(zhǎng)、scFv、 Fv)可以使用通過(guò)培養(yǎng)的連續(xù)細(xì)胞系提供抗體分子產(chǎn)生的任何技術(shù)來(lái)制 備。這些技術(shù)包括，但不限于，雜交瘤技術(shù).人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)以及EBV-雜交瘤技術(shù)。參見Roberge等，269， 202-204， 1995; Kohler等， Nature 256， 495-497， 1985; Kozbor等，J/"朋m"o/. M"/wA 81 ， 31-42， 1985; Cote等，尸簡(jiǎn).扁.Jca^. 80， 2026-2030， 1983禾口Shimamoto 等，5/o/og/a^， 2005 Sep; 33(3): 169-74。單鏈抗體可以通過(guò)從隨機(jī)組合 文庫(kù)中進(jìn)行鏈改組來(lái)產(chǎn)生。Takeda等，胸臟M4， 452-454， 1985。
0013單鏈抗體還可以使用DNA擴(kuò)增方法——如PCR—一利用雜 交瘤cDNA為模板來(lái)構(gòu)建。單鏈抗體可以是單特異性或雙特異性的，并且 可以是二價(jià)或四價(jià)的。四價(jià)雙特異性單鏈抗體的構(gòu)建在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所 周知的。編碼單鏈抗體的核苷酸序列可以使用人手動(dòng)或自動(dòng)核苷酸合成 構(gòu)建，使用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA方法克隆到表達(dá)構(gòu)建體內(nèi)，并引入到細(xì)胞以表 達(dá)編碼序列?？蛇x地，單鏈抗體可以直接使用，例如絲狀噬菌體技術(shù) (filamentous phage technology)來(lái)產(chǎn)生。Burton等，JVoc. Jca<i. 5W. 88， 11120-23， 1991; Verhaar等，/""C認(rèn)"1， 497-501， 1995。
0014本發(fā)明可用的IL-la抗體可從任何表達(dá)抗體的細(xì)胞純化，所 述細(xì)胞包括已用編碼抗體的核酸分子轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞在適于 抗體表達(dá)的條件下培養(yǎng)。適合的宿主細(xì)胞和培養(yǎng)條件可從本領(lǐng)域已知的 各種各樣中選擇。
0015純化的抗體與其它化合物分離，這些化合物正常情況下在細(xì) 胞內(nèi)與抗體結(jié)合，如某些蛋白質(zhì)、碳水化合物或脂質(zhì)。純化方法包括， 但不限于尺寸排阻層析、硫酸銨分級(jí)分離、離子交換層析、親和層析 和制備型凝膠電泳。純化抗體的制品至少是80%純度，優(yōu)選地，制品是 90%、 95%或99%純度。制品的純度可用本領(lǐng)域任何已知的方法進(jìn)行評(píng) 估，如SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。本發(fā)明純化抗體的制品可包含與IL-la 特異性結(jié)合的一種類型以上的抗體。0016但是，制備的全長(zhǎng)多克隆或單克隆抗體可以用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)切割 以獲得功能性抗體片段，如Fab或F(ab')2。見Cheung等，尸,/ 32， 135-40， 2003?？梢灾苽浣Y(jié)合蛋白，其來(lái)自免疫球蛋白并且是多價(jià)和 多特異性的，如在WO 94/13804和Holliger等，尸roc. A^/.」c^. USA 90， 6444-48， 1993中所述的"雙抗體";在Martin等，五MBOJ. 13， 5303-09， 1994中所述的"微抗體"；在I11等，/Vote/" 10， 949-57， 1997中所 述的"Kappa體"和在Traunecker等，五MBO / 10， 3655-3659， 1991和 Traunecker等，Int. J. Cancer Suppl. 7， 51-52， 1992中所述的"Janusins"(雙 特異性單鏈分子)。
0017本發(fā)明可用的任何IL-la抗體也可利用化學(xué)方法合成其氨基 酸序列來(lái)產(chǎn)生，如通過(guò)采用固相技術(shù)的直接肽合成(Merrifield，/Jm. C7^m. fee. 85"， 2149-54， 1963; Robcrgc等，Scz,潔g，， 202-04， W5)。
質(zhì)合成可以使用手動(dòng)技術(shù)或自動(dòng)裝置來(lái)實(shí)施。自動(dòng)合成可通過(guò)使用例如 Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer(Perkin Elmer)來(lái)獲得。任選
地，抗體片段可單獨(dú)合成并使用化學(xué)方法進(jìn)行組合來(lái)產(chǎn)生全長(zhǎng)分子。新 合成的分子可用制備型高效液相色譜法充分地純化(如Crdghton， PROTEINS: STRUCTURES AND MOLECULAR PRINCIPLES, WH Freeman and Co.， New York, N.Y.， 1983)。合成多肽的組成可用氨基酸 分析或測(cè)序來(lái)確定(例如使用Edman降解)。
0018本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以使用已知可注射的，生理可接受的 無(wú)菌溶液來(lái)制備包含本發(fā)明抗體的適合的藥物組合物。水等滲溶液，如 鹽水或相應(yīng)的血漿蛋白質(zhì)溶液是容易獲得的，并且可用于制備用于腸胃 外注射或灌注的現(xiàn)成可用的溶液。藥物組合物可作為凍干粉 (lyophylisate)或干燥制品存儲(chǔ)，在使用前其可用已知可注射的溶液重 建。藥物組合物可以補(bǔ)充己知的載體物質(zhì)和/或添加劑(如血清白蛋白、 葡萄糖、亞硫酸氫鈉，EDTA等)。本發(fā)明藥物組合物典型地包括藥學(xué)可 接受的賦形劑，如惰性稀釋劑。
0019本發(fā)明藥物組合物可通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的不同途 徑施用。對(duì)于全身性應(yīng)用(systemic application),靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、肌肉 內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、口腔、結(jié)節(jié)內(nèi)(intranodal)或鞘內(nèi)途徑均可使用。
7更局部的應(yīng)用可以皮下地、皮內(nèi)地、心內(nèi)地、葉內(nèi)地(intralobally)、髓 內(nèi)地(intramedullarly)，、肺內(nèi)地(intrapulmonarily)或直接地在或接近待 被治療的組織來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)治療所期望的持續(xù)時(shí)間和效果，組合物可能 被施用一次或數(shù)次，例如以每日為基礎(chǔ)，持續(xù)數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月，并且 以不同劑量施用。
0020劑量將取決于患者的年齡、狀況、性別和疾病程度，可以從 每千克患者體重0.25mg到50mg變化?？梢灾委煹陌┌Y包括，但不限于， 血癌(如白血病、淋巴瘤)和實(shí)體組織(例如膀胱、骨、腦、乳腺、宮 頸、結(jié)腸、食道、腎、肝、肺、胰腺、前列腺、胃)的癌癥。
0021在一個(gè)實(shí)施方式中，用IL-la免疫患者以誘導(dǎo)IL-la抗體。本 領(lǐng)域已知的任何免疫方法可用于獲得期望的抗體反應(yīng)(見下文)。 一般來(lái) 說(shuō)，重組IL-la可用于含有佐劑的配方用以獲得免疫；編碼IL-lct的核酸序 列可用于制造可用于免疫的重組病毒或生物；或重組IL-la可與病毒樣顆 ?；瘜W(xué)連接，其作為免疫刺激復(fù)合物發(fā)揮作用。
佐劑實(shí)例
無(wú)機(jī)鹽氫氧化鋁，磷酸鈣，氫氧化鈹
遞送系統(tǒng)不完全弗氏佐劑
細(xì)菌產(chǎn)物完全弗氏佐劑，BCG，質(zhì)粒
DNACpG基序
免疫刺激復(fù)合物(Immune含有病毒蛋白的Quil A混合物
Stimulatory Complexes ， ISCOMS )
細(xì)胞因子GM隱CSF, IL-12, IL-1,IL畫2
重組病毒流感病毒
病毒樣顆粒偶聯(lián)物2/6VLP，含有牛輪狀病毒VP2和 人輪狀病毒VP6
重組細(xì)菌減毒鼠傷寒沙門氏菌
0022在本公開內(nèi)容中引用的所有專利、專利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)通過(guò) 引用明確引入本文。上述公開內(nèi)容一般性地描述本發(fā)明。更加完整的理解可通過(guò)參考以下具體實(shí)施例獲得，實(shí)施例只提供用于說(shuō)明目的，而不 企圖限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例l
動(dòng)物和腫瘤細(xì)胞
0023使用無(wú)胸腺nu/nu小鼠(8-10周齡，NCI, Frederick, MD)產(chǎn)生 數(shù)據(jù)。小鼠皮下側(cè)面注射懸浮于200 (il DMEM的5xl()S的腫瘤細(xì)胞。因?yàn)?我們預(yù)計(jì)IL-la可能提供腫瘤細(xì)胞生存力的一般機(jī)制，所以我們測(cè)試了用 抗IL-la對(duì)幾種腫瘤細(xì)胞系的抑制，用衍生于乳腺(MDA-MB-436或 MDA-MB-231 ， Nozaki等所oc/zew所o/ /^ Comw 275 ， 60-62 (2000))或 前列腺(PC-3， Chung等，The Prostate 38:199-207 (1999); Singer CF等Clin Cancer Res. 2003 Oct 15; 9(13):4877-83)譜系的腫瘤細(xì)胞注射動(dòng)物，以前 已表明這些腫瘤細(xì)胞表達(dá)IL-la。
0024用小鼠抗人IL-la抗體注射小鼠來(lái)對(duì)抗腫瘤IL-la的產(chǎn)生。小 鼠接受5mg/kg IgGl單克隆抗體(克隆364-3B3-14， BioLegend)或5mg/kg IgG2a單克隆抗體(克隆lF3B3， ProMab)，從腫瘤植入當(dāng)天或原發(fā)腫瘤病 變至少約3mi^的跡象之后開始，每周兩次腹腔內(nèi)施用。其它兩組小鼠接 受lgGl單克隆抗體或IgG2a單克隆抗體以及5mg/kg的抗小鼠抗IL-la單克 隆抗體(倉(cāng)鼠抗小鼠IL-la購(gòu)自BD PharMingen (San Diego， Calif))，用以中 和內(nèi)源IL-la的產(chǎn)生。
0025動(dòng)物維持生命56天，除非由于過(guò)度腫瘤負(fù)荷而出于人道主義 原因較早處死。每周記錄動(dòng)物體重，測(cè)量可觀察到的腫瘤體積。當(dāng)動(dòng)物 具有明顯的腫瘤相關(guān)病狀(體重減輕，嗜睡)時(shí)，動(dòng)物被處死。使用C02 室處死小鼠。在徹底檢查腹部和腹膜腔及包括肝臟、淋巴結(jié)、脾和肺在 內(nèi)的主要器官之后，轉(zhuǎn)移物被收獲和分開存放。計(jì)算聚集的腫瘤塊。存 活和腫瘤負(fù)荷的結(jié)果表示為平均+ASE。
實(shí)施例2 免疫組織化學(xué)
0026從一些動(dòng)物取得與周圍組織一起切除的轉(zhuǎn)移性腫瘤標(biāo)本，進(jìn)行組織學(xué)分析。在處死時(shí)產(chǎn)生福爾馬林固定的、石蠟包埋的腫瘤制備物。
使用抗鼠和抗人IL-la抗體實(shí)施組織學(xué)分析，還實(shí)施抗VEGF、抗ICAM-1、 抗E-選擇蛋白和抗VCAM染色。
實(shí)施例3 PCR
0027從每個(gè)腫瘤細(xì)胞系和取自帶有已確定皮下移植腫瘤的小鼠的 腫瘤活組織中提取RNA。使用RT-PCR對(duì)細(xì)胞進(jìn)行IL-la轉(zhuǎn)錄分析。設(shè)計(jì)引 物用以特異性識(shí)別人IL-la，以至不會(huì)在腫瘤活組織檢査樣本中混淆IL-la 轉(zhuǎn)錄物來(lái)源于腫瘤細(xì)胞或內(nèi)源產(chǎn)生。此外，設(shè)計(jì)IL-la小鼠特異性引物用 以識(shí)別內(nèi)源IL-la，內(nèi)源IL-la可能已由侵入的白細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境周圍組 織產(chǎn)生。因此，兩種來(lái)源的任意一種IL-la可能對(duì)創(chuàng)造良好的腫瘤微環(huán)境 是重要的。
0028使用Trizol(Gibco/BRL Life Technologies, Rockville， MD，
USA)按制造商的指導(dǎo)從腫瘤樣本中分離總RNA。污染的DNA用無(wú)RNase 的DNAse去除。lfigDNAse處理的總RNA(或用水作為陰性對(duì)照)與l嗎寡 dT引物在95。C共溫育3min,然后在68。C共溫育10 min。根據(jù)Lee等人的方 法(Joumal of Orthopaedic Research, 21 (2003)62-72)，將8pl 5x緩沖液、4 jil DTT (0.1M)、 2(il dNTP (10mM)、 1RNase抑制劑和l )il superscript逆轉(zhuǎn) 錄酶加入到每個(gè)反應(yīng)。
實(shí)施例4
aIL-la抗體降低轉(zhuǎn)移發(fā)生率
0029每周兩次腹腔內(nèi)注射PBS、 5mg/kg的^hlL-lab、或5mg/kg 的haJL-la b與5mg/kg的hamlL-la b，對(duì)攜帶確定的轉(zhuǎn)移性腫瘤的Nu/nu小 鼠進(jìn)行治療。使用兩組腫瘤攜帶小鼠，其被皮下注射5xl(^MDA-MB-436 或PC-3腫瘤細(xì)胞。從皮下注射腫瘤細(xì)胞當(dāng)日或腫瘤生長(zhǎng)至3mn^后開始， 每周兩次施用抗體。見表l。
表l實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物數(shù)量說(shuō)明PBSmahIL-la+hamIL-lamahIL-lahamIL-la
D1MDA-MB4366666
D1PC-36666
EstMDA陽(yáng)MB4366666
EstPC-36660030在處死時(shí)對(duì)器官上可見的腫瘤集落進(jìn)行計(jì)數(shù)。表面肝轉(zhuǎn)移的 數(shù)量通過(guò)檢查組織顯現(xiàn)腫瘤病灶來(lái)測(cè)定。膈壁、腸壁及腹腔壁和淋巴結(jié) 上的轉(zhuǎn)移病灶數(shù)量以類似的方式測(cè)定。
0031在乳腺腫瘤模型可見淋巴結(jié)中，通過(guò)使用mahIL-la治療或 mahlL-lab+!AjL-lab結(jié)合治療，肺和肝轉(zhuǎn)移得到降低。對(duì)照處理小鼠百 分之百發(fā)展成腹水，相反，抗IL-la處理的小鼠僅有10。/。形成腹水。在前 列腺腫瘤模型中進(jìn)行類似的觀察，其中接受mahIL-la或mahIL-la b+hamlL-l(xb的小鼠具有降低的轉(zhuǎn)移負(fù)荷。在乳腺和前列腺腫瘤模型中， 施用haJL-lab的小鼠在處死時(shí)顯示轉(zhuǎn)移沒有明顯減少。見表2 。
表2使用aIL-la抗體治療對(duì)異種移植腫瘤的控制
D1MDA-MB436PBSmahlL-1 a+hamIL-1 amahIL-lahamIL-la
腹水6(100)0(0)1(17)4(66)
淋巴結(jié)6(100)1(17)2(33)6(100)
腹膜6(100)o(o)1(17)6(100)
肝臟6(100)1(17)3(50)6(100)
EstMDA-MB436PBSmahIL-1 a+hamIL-1 amahIL-lahamIL-la
腹水6 (100)o(o)0(0)4(66)
淋巴結(jié)6(100)4(66)5(83)6(100)
腹膜6(100)3(50)5(83)6(100)
肝臟6(100)3(50)5(83)6(100)
D1PC-3PBSmahIL-1 a+hamIL-1 amahIL-lahamIL-la腹水6(100)0(0)o(o)3(50)
淋巴結(jié)6(100)o(o)3 (33)5(83)
腹膜6(100)1(17)2(33)6(100)
肝臟6(100)o(o)1(17)6(100)
EstPC-3PBSmahIL-1 a+hamIL-1 amahIL-lahamIL-la
腹水6(100)005(83)
淋巴結(jié)6(100)3(50)3(50)6(100)
腹膜6(100)4(66)2 (33)6(100)
肝臟6(100)3(50)2(33)6(100)
0032所有用PBS處理的小鼠在第50天處死，而60天后，aIL-la處 理的小鼠沒有死于乳腺或前列腺異種移植腫瘤。靶向腫瘤表達(dá)的IL-la或 內(nèi)源(主要是白細(xì)胞)產(chǎn)生的IL-la的aIL-la治療在攜帶乳腺或前列腺異 種移植癌癥的小鼠中，降低了轉(zhuǎn)移負(fù)荷。靶向腫瘤表達(dá)IL-la的aIL-la治 療具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上更有效的抗腫瘤作用，而組合的抗腫瘤和抗內(nèi)源aIL-l(x 抗體治療在攜帶乳腺或前列腺癌的nu/nu小鼠中幾乎完全阻止轉(zhuǎn)移性腫瘤 生長(zhǎng)。見圖l。
0033接受^hlL-la或hamlL-la或這兩種抗體組合的動(dòng)物具有降低 的臨床病程嚴(yán)重性。所有對(duì)照動(dòng)物最終顯現(xiàn)出瀕死狀，需要在研究結(jié)束 之前處死。與之相反，接受^hlL-l(x+hamlL-la的動(dòng)物在外表上沒有異樣， 它們是整潔的、活躍的、沒有顯示痛苦跡象，顯示出正常生長(zhǎng)和體重增 加，并且在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間所有動(dòng)物均存活。但是，經(jīng)過(guò)對(duì)死后器官仔細(xì) 的檢查，接受抗體組合的小鼠確實(shí)顯示出可觀察到的轉(zhuǎn)移病灶。這在治 療開始前已具有確定的轉(zhuǎn)移性腫瘤的動(dòng)物中尤其明顯。這顯示出僅在確 定轉(zhuǎn)移病灶形成之后接受治療的小鼠在隨后無(wú)法清除所有已確定的病 變。但是，在這些被治療的小鼠中的轉(zhuǎn)移病灶明顯被抑制。
0034可以在用乳腺或前列腺腫瘤接種小鼠和在具有可檢測(cè)到的轉(zhuǎn) 移性疾病時(shí)處死動(dòng)物之后，對(duì)這種作用進(jìn)行分析，其是其中動(dòng)物接受治 療的疾病的相同過(guò)程。在這些小鼠中，轉(zhuǎn)移病灶的多度和大小明顯大于
12在接受mahlL-la+hamlL-la組合的動(dòng)物尸檢中所觀察到的。這顯示出抗體治 療引起已確定的轉(zhuǎn)移疾病的退化。
0035mahlL-lcx+hamlL-la處理的小鼠，其從腫瘤接種第l天就開始 接受抗體注射，幾乎完全阻止形成轉(zhuǎn)移。在每個(gè)乳腺或前列腺腫瘤組中， 只有個(gè)別動(dòng)物(17%)形成轉(zhuǎn)移病灶。
0036異種移植的人腫瘤用于腫瘤轉(zhuǎn)移的裸小鼠模型。利用表達(dá)人 IL-lot的人腫瘤，使我們能夠嘗試治療小鼠，此種治療通過(guò)耙向以下任一 來(lái)進(jìn)行在腫瘤上表達(dá)的人IL-la、在白細(xì)胞上表達(dá)的鼠IL-la (為了簡(jiǎn)便 起見，我們稱為內(nèi)源IL-1產(chǎn)生)；或通過(guò)施用兩種不同的抗體，同時(shí)靶向 內(nèi)源和腫瘤源的IL-la來(lái)進(jìn)行。這使我們開始在某種程度上將腫瘤源IL-la 在轉(zhuǎn)移中的作用與內(nèi)源產(chǎn)生的IL-la (由白細(xì)胞浸入或腫瘤微環(huán)境組織表 達(dá))在轉(zhuǎn)移中的作用相區(qū)分。
0037結(jié)果表明，內(nèi)源和腫瘤源的IL-l(x在腫瘤轉(zhuǎn)移中均發(fā)揮作用， 原因在于針對(duì)任一來(lái)源IL-la的抗體均提高小鼠的存活率。但是，針對(duì)內(nèi) 源性IL-la的抗體與靶向腫瘤源的IL-l(x的抗體相比，在提供長(zhǎng)期存活益處 上相當(dāng)?shù)托?，并且不能保護(hù)小鼠免于轉(zhuǎn)移。顯然，IL-la從腫瘤本身的表 達(dá)在這些模型中足以促進(jìn)轉(zhuǎn)移。
0038針對(duì)腫瘤表達(dá)的IL-la的抗體具有有效的抗腫瘤作用。在接 受抗腫瘤IL-la抗體的動(dòng)物中意義深遠(yuǎn)的抗腫瘤作用似乎涉及腫瘤轉(zhuǎn)移中 IL-la的生理阻斷(physiological blockade),但也可能涉及抗體的直接殺 腫瘤作用。我們預(yù)期，使用IgGl抗體靶向腫瘤表達(dá)IL-la可表現(xiàn)在裸小鼠 模型中對(duì)IL-lcx表達(dá)腫瘤相當(dāng)?shù)臍⒛[瘤作用，其中所使用的IgGl抗體是有 效誘導(dǎo)補(bǔ)體結(jié)合和抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(antibody directed cellular cytotoxicity, ADCC)的抗體亞類。但是，如果針對(duì)腫瘤源IL-la抗體的抗 腫瘤作用是通過(guò)ADCC或其它細(xì)胞毒性機(jī)制專有地發(fā)揮作用，那么將不會(huì) 有所預(yù)期的兩種抗體協(xié)同作用。也不會(huì)預(yù)期針對(duì)內(nèi)源IL-la的抗體會(huì)影響 存活率；而是與用針對(duì)內(nèi)源IL-la抗體處理的動(dòng)物中所見的存活受益相一 致，雖然是適度的。從用hamIL-la抗體靶向抗內(nèi)源IL-la中所見的存活受益 可以是hamIL-la與人IL-l(x交叉反應(yīng)，從而直接靶向腫瘤的結(jié)果。我們檢查 了對(duì)抗鼠IL-la抗體的交叉反應(yīng)性，以評(píng)估存活受益是否是該抗體與腫瘤表達(dá)IL-la的交叉反應(yīng)的直接結(jié)果；腫瘤表達(dá)的IL-la誘導(dǎo)腫瘤的ADCC， 誘導(dǎo)對(duì)腫瘤IL-la產(chǎn)生的生理性IL-la阻斷，或兩者兼而有之。沒有與抗體 明顯的交叉反應(yīng)性。此外，hamIL-la抗體不能有效地結(jié)合鼠Fc受體，并且 不可能誘導(dǎo)有效的ADCC反應(yīng)。
0039從裸小鼠異種移植模型中內(nèi)源和腫瘤表達(dá)的IL-lcx的不同靶 向的結(jié)果，我們得出的結(jié)論是IL-la的生理阻斷可以減少腫瘤的致死率。 抗IL-la抗體組合的存活受益的協(xié)同作用一一既針對(duì)內(nèi)源性IL-la又針對(duì) 腫瘤源的IL-la——提供了令人信服的證明腫瘤和內(nèi)源性來(lái)源的IL-la在
這種模型的腫瘤轉(zhuǎn)移中都是重要的。這些結(jié)果也有助于了解其它報(bào)告， 這些報(bào)告表明IL-la在腫瘤和宿主之間的動(dòng)態(tài)相互作用(dynamic interplay)中發(fā)揮生理作用；而且IL-la的表達(dá)可增強(qiáng)腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能。
0040使用單克隆抗體靶向由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的IL-la是延長(zhǎng)存活和 降低轉(zhuǎn)移負(fù)荷的有效方法。IL-la表達(dá)腫瘤的抗體靶向?qū)⒃谌思膊≌{(diào)整 (disease setting)中具有潛在的治療價(jià)值，并可代表了多種形式癌癥在疾
病早期或晚期有效的治療目標(biāo)。
0041據(jù)其它報(bào)道，所分析的多達(dá)20X的人具有存在于血清的IL-la
中和自身抗體。此外，據(jù)報(bào)道，這些人在長(zhǎng)期觀察中是健康的。同樣地， IL-la敲除小鼠沒有明顯表型(Horai等J. Exp. Med. 1998 187: 1463-1475)。 最后，其它的報(bào)道(Svenson等)可用IL-lot對(duì)動(dòng)物進(jìn)行簡(jiǎn)單和有效的免疫以 誘導(dǎo)出對(duì)細(xì)胞因子有效的中和抗體反應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)表明主動(dòng)免疫治療， 如用IL-la免疫以誘導(dǎo)中和自身抗體，也可能是治療表達(dá)IL-la的人癌癥的
有效方法。
實(shí)施例5
材料和方法
用ELISA測(cè)量抗IL-la抗體效價(jià)
0042人或鼠IL-la分別在96孔ELISA板上溫育過(guò)夜，每孔用 0.5昭/ml 100pl體積的量。板隨后用磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffered saline, PBS)+0.05%吐溫20(Tween 20)洗滌4次，然后用封閉液進(jìn)行飽和， 所述封閉液含有在PBS+0.05 %吐溫20中的1 %牛血清白蛋白(bovine
14serum albumin, BSA)。在室溫下，每孔使用200|11這種封閉緩沖液1-2小 時(shí)。然后用PBS+0.05。/。 Tween 20 (PBST)再洗滌板4次。100ml連續(xù)稀釋 的血清樣品(在PBST+1XBSA中1:2稀釋)隨后加入，并在室溫下溫育一小 時(shí)或4。C溫育過(guò)夜。然后再次用PBST洗滌板4次。然后加入辣根過(guò)氧化 物酶(Horseradish peroxidise， HRP)偶聯(lián)的抗Fc-抗體作為二抗(在具有l(wèi) % BSA的PBST中1:2000稀釋，每孔加lOO(il， l小時(shí)，室溫)。人0.2 (il山 羊抗人IgG-HRP在400(ilPBST+lXBSA中。小鼠0.5^ HRP山羊抗小鼠 IgG(H+L)。然后，板再次用PBST洗滌4次。用ABTS緩沖液(3-乙基苯并 噻唑啉-6-磺酸，Sigma目錄號(hào)A-1888， 150 mg; O.IM擰檬酸，F(xiàn)isher anhydrous,目錄號(hào)A-940， 500毫升；用NaOH顆粒將pH值調(diào)節(jié)到4.35， 每瓶llml等分樣品并保存在-2(TC， 40%SDS(80 g SDS溶于200 ml dd 丑20)中，并添加200ml DMF(N，N -二甲基甲酰胺))進(jìn)行顯色反應(yīng)(coloring reaction)。向每個(gè)孔加IOO (il ABTS緩沖液。當(dāng)良好對(duì)比度可見時(shí)，通過(guò) 加入100^112%草酸溶液停止反應(yīng)。然后，用ELISA讀數(shù)器在405nm波長(zhǎng) 下測(cè)量光密度。
在腫瘤攻擊中監(jiān)測(cè)動(dòng)物0043動(dòng)物健康通過(guò)監(jiān)測(cè)如下指標(biāo)來(lái)記錄外表、食物和水的攝入 量、自然行為以及挑釁行為(provokedbehaviour),使用以下評(píng)分系統(tǒng) 分?jǐn)?shù)0:沒有偏離正常；分?jǐn)?shù)h輕度偏離正常；分?jǐn)?shù)2:中等偏離正常； 分?jǐn)?shù)3:重大偏離正常。如果分?jǐn)?shù)3多于一次，則每次另加l分，最高分?jǐn)?shù) 為15分。分?jǐn)?shù)0-3:正常。分?jǐn)?shù)4-7:仔細(xì)監(jiān)測(cè)。分?jǐn)?shù)8-15:動(dòng)物患病。動(dòng) 物被處以安樂死。當(dāng)體重減輕15%以上或體溫下降超過(guò)3.0°。時(shí)，動(dòng)物也 被處以安樂死。
腫瘤細(xì)胞系
0044EL-4細(xì)胞從American Type Culture Collection (ATCC ， Manassas VA， USA)獲得。EL-4源于在C57BL/6小鼠中用9，10-二甲基-1，2-苯并蒽誘導(dǎo)的淋巴瘤。細(xì)胞培養(yǎng)于Dulbecco的改良Eagle培養(yǎng)基，該培養(yǎng) 基用4 mM L-谷氨酰胺調(diào)整到含有1.5 g/L碳酸氫鈉和4.5 g/L葡萄糖，卯%;胎牛血清，10%。
0045PC-3細(xì)胞從American Type Culture Collection (ATCC，Manassas VA， USA)獲得。PC-3細(xì)胞系最初來(lái)自62歲男性白種人IV級(jí)前列腺癌的骨轉(zhuǎn)移。該細(xì)胞系用Ham的F12K培養(yǎng)基生長(zhǎng)，該培養(yǎng)基用2mML-谷氨酰胺調(diào)整到含有1.5g/L碳酸氫鈉，90%;胎牛血清，10%。
用與PPD偶聯(lián)的IL-la和IL-lb免疫小鼠
0046IL-la和IL-lp從eBioscience (San Diego， CA)獲得。PPD從Statens Serum Institute (Copenhagen, Denmark)獲得。偶聯(lián)方法改編自Svenson等(SvensonM. 2000)。 IL匿1 a或IL-1 b在4°C與PPD以0.41 (w/w)的比例并且在O.l X戊二醛存在下溫育48小時(shí)(IL-1/PPD = 0.41)。作為對(duì)照，PPD被平行處理，但不含IL-la或IL-ip。偶聯(lián)物隨后被吸附到Al(OH)3(Rehydragel; Reheis Chemical, Dublin, Ireland),以使終體積中具有1.5X的Al(OH)3。與明礬在室溫下溫育卯分鐘。顆粒隨后用0.9XNaCl洗滌，并將其重懸在0.9XNaCl中，達(dá)到ll嗎IL-la/10(Hil懸液，假設(shè)70XIL-la被吸附到Al(OH)3(使用^I-IL-la在實(shí)驗(yàn)性研究中發(fā)現(xiàn))。IL-ip偶聯(lián)物以同樣方式制備。對(duì)照懸液同樣地稀釋以匹配IL-la-PPD偶聯(lián)物中PPD的量。該偶聯(lián)物儲(chǔ)存在4"C備用。
實(shí)施例6
C57BL/6小鼠中抗IL-la抗體反應(yīng)的產(chǎn)生
0047然而，由于免疫系統(tǒng)對(duì)自身蛋白質(zhì)如細(xì)胞因子的耐受，所以這種主動(dòng)免疫必須打破自身耐受性。對(duì)大多數(shù)自身蛋白來(lái)說(shuō)，免疫耐受是由于缺乏特異性T細(xì)胞——這是胸腺中負(fù)選擇的結(jié)果——引起的。相反，潛在的自身反應(yīng)B細(xì)胞通常存在。當(dāng)僅注射像IL-la這樣的自身蛋白時(shí)，由于缺乏T細(xì)胞的幫助，這些B細(xì)胞不會(huì)應(yīng)答。將一種外源蛋白，如PPD，與自身抗原IL-la偶聯(lián)，就提供了T細(xì)胞對(duì)B細(xì)胞刺激的幫助，因?yàn)門細(xì)胞識(shí)別PPD，導(dǎo)致受刺激的B細(xì)胞針對(duì)IL-la和PPD產(chǎn)生抗體。因此，我們用明礬中的IL-la-PPD偶聯(lián)物接種小鼠，以確保T細(xì)胞對(duì)IL-ip-特異性B細(xì)胞產(chǎn)生有效的幫助?？贵w效價(jià)用ELISA測(cè)定。5只小鼠的組接受用15昭偶聯(lián)
16至10嗎PPD的重組IL-la進(jìn)行的皮下免疫，該偶聯(lián)采用與戊二醛溫育的步驟進(jìn)行。IL-la-PPD偶聯(lián)物隨后吸附到明礬。小鼠接受三次這樣的皮下免疫，時(shí)間間隔為2周。
0048免疫的小鼠產(chǎn)生高效價(jià)的抗IL-la抗體，而用明礬中的PPD免疫的對(duì)照小鼠未能誘導(dǎo)出可檢測(cè)到的抗體效價(jià)(圖2)?？笽L-la抗體的誘導(dǎo)需要至少2次注射。在僅僅注射一次明砜中的重組IL-la-PPD偶聯(lián)物之后，在血清中檢測(cè)不到抗體反應(yīng)。但在用明礬中的重組IL-kx-PPD偶聯(lián)物第三次注射后，所有接種的小鼠都產(chǎn)生抗IL-lct抗體。
實(shí)施例7
對(duì)IL-la的主動(dòng)免疫保護(hù)小鼠對(duì)抗用EL-4的腫瘤攻擊
0049在第0天、第14天和第28天，通過(guò)在頸部區(qū)域皮下給藥，使用在明礬中與10嗎PPD偶聯(lián)的15嗎鼠IL-la三次注射，對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行主動(dòng)免疫。注射體積為100iil，氫氧化鋁的量為約lmg。對(duì)照小鼠進(jìn)行類似處理，但是使用含有相同量的PPD和氫氧化鋁，但不包含IL-la的制品。在第O、 28、 42和56天，從尾靜脈血液取樣，以便用ELISA確定抗IL-la抗體反應(yīng)的形成。首次免疫56天后，所有小鼠接受1000個(gè)EL-4淋巴瘤細(xì)胞的接種物。隨后，在接下來(lái)的四周每天觀察小鼠。在首次出現(xiàn)疾病癥狀時(shí)，小鼠處以安樂死，進(jìn)行腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的肉眼和組織學(xué)定量。
0050在腫瘤攻擊后的30天內(nèi)，因腫瘤發(fā)展對(duì)照小鼠顯示出疾病癥狀，這被內(nèi)臟器官中散布的肉眼可見的轉(zhuǎn)移所證實(shí)。與之相反，對(duì)IL-lcc主動(dòng)免疫的小鼠沒有顯示出疾病的臨床癥狀。
實(shí)施例8
對(duì)IL-la的被動(dòng)免疫防止小鼠淋巴瘤EL-0051使用明礬中的IL-la-PPD偶聯(lián)物三次皮下注射，對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行對(duì)IL-la的主動(dòng)免疫。56天后，收集它們的血清，并用ELISA確定抗IL-la自身抗體效價(jià)的產(chǎn)生。200pl這種血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移至6周齡的C57BL/6小鼠。每周重復(fù)這些被動(dòng)血清轉(zhuǎn)移。對(duì)照C57BL/6小鼠以周為間隔接受200)il來(lái)自未用過(guò)C57BL/6小鼠的血清。與首次血清轉(zhuǎn)移一起，所有小鼠接受1000個(gè)EL-4淋巴瘤細(xì)胞的接種物。隨后，在接下來(lái)的四周每天觀察小鼠。在首次出現(xiàn)疾病癥狀時(shí)，小鼠處以安樂死，進(jìn)行腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的肉眼和組織學(xué)定量。
005230天內(nèi)，對(duì)照小鼠死于腫瘤，這被內(nèi)臟器官中散布的肉眼可見的轉(zhuǎn)移證實(shí)。與之相反，接受多克隆抗IL-la抗血清被動(dòng)血清轉(zhuǎn)移的小鼠沒有顯示出疾病的臨床癥狀。
實(shí)施例9
對(duì)IL-la的被動(dòng)免疫保護(hù)SCID小鼠對(duì)抗PC-3異種移植腫瘤
0053使用明礬中IL-la-PPD偶聯(lián)物三次皮下注射，對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行對(duì)IL-la的主動(dòng)免疫。56天后，收集它們的血清，并用ELISA確定抗IL-la自身抗體效價(jià)的產(chǎn)生。200pl這種血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移至6周齡的雌性SCID小鼠。每周重復(fù)這些被動(dòng)血清轉(zhuǎn)移。對(duì)照SCID小鼠以周為間隔接受來(lái)自未用過(guò)C57BL/6小鼠的200^1血清。與首次血清轉(zhuǎn)移一起，所有小鼠接受107 PC-3細(xì)胞的皮下接種物至側(cè)腹。每周鑒定帶有可觸摸到腫瘤的小鼠。
005430天內(nèi)，對(duì)照小鼠在接種部位已形成為可觸摸到的腫瘤，然而，接受多克隆抗IL-la抗血清被動(dòng)血清轉(zhuǎn)移的小鼠沒有形成可觸摸到的腫瘤。
實(shí)施例10
ADCK-抗體依賴性補(bǔ)體介導(dǎo)殺傷
0055使用明礬中的IL-la-PPD偶聯(lián)物三次皮下注射，對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行對(duì)IL-la的主動(dòng)免疫。56天后，收集它們的血清，并用ELISA確定抗IL- la自身抗體效價(jià)的產(chǎn)生。熱滅活血清。50 nlEL-4細(xì)胞懸液被鋪入96孔板。向這些孔的每一個(gè)中加入15 ^的熱滅活血清的1:2連續(xù)稀釋液。然后在37。C溫育板20分鐘。隨后將25ml鼠血清加入每個(gè)孔。在37。C下另外溫育5h后，對(duì)孔進(jìn)行拍照，隨后使用臺(tái)盼藍(lán)將死細(xì)胞與活細(xì)胞區(qū)分，在計(jì)數(shù)室對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
0056EL-4腫瘤細(xì)胞的多克隆小鼠抗小鼠IL-la抗血清介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴性殺傷為濃度依賴方式。見圖
權(quán)利要求
1. 治療癌癥的方法，其包括施用治療有效量的抗IL-1α抗體給需要其的哺乳動(dòng)物患者。
2. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者是人。
3. 權(quán)利要求l所述的方法，其中所述患者選自小鼠、豬、山羊、狗、 貓和綿羊。
4. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移的。
5. 權(quán)利要求l所述的方法，其中所述癌癥是乳腺癌或前列腺癌。
6. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是多克隆的。
7. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是單克隆的。
8. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自Fab、 F(ab')2、 scFv、 Fv、 雙抗體、微抗體、Kappa體禾卩Janusins。
9. 治療癌癥的方法，其包括用IL-la免疫需要其的哺乳動(dòng)物患者，從 而所述患者產(chǎn)生IL-la自身抗體。
10. 權(quán)利要求9所述的方法，其中所述患者是人。
全文摘要
使用抗IL-1α抗體治療患者，或抗IL-1α免疫作為癌癥治療。
文檔編號(hào)C07K16/24GK101472948SQ200780023111
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月22日
發(fā)明者J·賽瑪?shù)?申請(qǐng)人:?？怂股锟萍脊?br>