專利名稱：蛋白質(zhì)濃縮/純化裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及化學(xué)儀器，具體地說(shuō)是一種利用等電凝膠橋隔離法濃縮/純 化蛋白質(zhì)的裝置。
技術(shù)背景
目前蛋白質(zhì)的濃縮/純化方法較多，主要有鹽析法、等電點(diǎn)沉淀法、低溫有 機(jī)溶劑沉淀法、透析和超濾、凝膠過濾法、離子交換層析法等，每種方法都有 自己的設(shè)備，這些設(shè)備有的操作過程較復(fù)雜，有的分離純化時(shí)間較長(zhǎng)，有的純 化成本較高。 實(shí)用新型內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種蛋白質(zhì)濃縮/純化 裝置，該裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易操作，分離過程快、純化成本低。
本實(shí)用新型主要由直流電源、待濃縮/純化蛋白質(zhì)原池、正極池、負(fù)極池及 凝膠玻璃橋管組成。正極池、負(fù)極池與直流電源的正、負(fù)極接通。正極池、負(fù) 極池分別由凝膠玻璃橋管與待濃縮/純化蛋白質(zhì)溶液原池連通；原池在正極池、 負(fù)極池之上之下均可。
所述凝膠玻璃橋管，用1%瓊脂將其下端封住，冷凝30分鐘，灌l(xiāng) 129b的隔 離膠，灌到4 15cm，用水封住，冷凝30分鐘將水倒出，吸干，冷凝30分鐘后 備用。使用時(shí)，玻璃橋管要浸在正、負(fù)極池及原池中。
所述的正極池、負(fù)極池倒入緩沖液5ml，原池加入緩沖液100 150ml，再把 待分離純化的蛋白質(zhì)溶液加入原池。
' 所述的池中緩沖液為PH值2~9:由36. 6gTris， 48ml lmo1/1的HC1或先加 水至80ml，用濃HC1調(diào)PH，再定容至100ml制成。
所述的隔離膠由4.9ml蒸餾水，KOml309&的丙烯酰胺，3.8ml1.5mo1/1 Tris-HCl， 150" 10%的過硫酸銨，6ul TEMED配制而成。
所述的直流電壓為50~300V。
蛋白質(zhì)純化儀安裝好后，在4'C環(huán)境中，加上電泳電壓，此時(shí)待分離的蛋白 質(zhì)及氨基酸分別按其電荷的性質(zhì)從原池通過凝膠橋管進(jìn)入正極池及負(fù)極池，而 等電點(diǎn)等于原池PH的蛋白質(zhì)則留在原池。通過調(diào)節(jié)原池的PH值，使不同等電
點(diǎn)的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)作用下進(jìn)入正、負(fù)極池，直至純化為止。
分離純化的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純度以SDS-丙烯酰胺凝膠電泳圖譜出現(xiàn)單一區(qū)帶 為標(biāo)準(zhǔn)氨基酸純度以氨基酸分析儀出現(xiàn)單峰為標(biāo)準(zhǔn)。
本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于濃縮純化方法新穎，操作容易，分離設(shè)備簡(jiǎn)單， 成本低，分離純化時(shí)間縮短、效率高。


圖1為本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)示意圖。
1為直流電池、2為正極池、3為負(fù)極池、4為凝膠玻璃橋管、5為待分離純 化物質(zhì)原池。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型由直流電源l、待濃縮/純化物質(zhì)原池5、正極池2、負(fù)極池3及 凝膠玻璃橋管4組成，正極池2、負(fù)極池3與直流電源1的正、負(fù)極接通，正極 池2、負(fù)極池3分別由凝膠玻璃橋管4與待濃縮/純化溶液原池5連通。
其中直流電源電壓為100V，原池5為1000厘米3，正極池2、負(fù)極池3均 為l厘米'；凝膠玻璃橋管，用1%瓊脂將其下端封住，冷凝30分鐘，灌1~12% 的隔離膠，灌到4 15cm，用水封住，冷凝30分鐘將水倒出，吸干，冷凝30分 鐘后備用。使用時(shí)，玻璃橋管要浸在正、負(fù)極池及原池中；正極池、負(fù)極池倒 入緩沖液5ml，原池加入緩沖液100 150ml，再把待分離純化的蛋白質(zhì)溶液加入 原池；池中緩沖液(PH值2 9):由36.6gTris， 48ml lmo1/1的HC1或先加水 至80ml,用濃HC1調(diào)PH，再定容至100ml制成；隔離膠由4.9ml蒸餾水， l"^.0ml30免的丙烯酰胺，3.8mll.5mo1/1 Tris-HC1, 150" 1096的過硫酸銨,6 iil TEMED配制而成。
權(quán)利要求1.蛋白質(zhì)濃縮/純化裝置，其特征是它主要由直流電源(1)、正極池(2)、負(fù)極池(3)、等電凝膠橋管(4)、待分離純化的蛋白質(zhì)原池(5)組成，直流電源(1)的正、負(fù)極分別與正極池(2)、負(fù)極池(3)連接，凝膠橋管(4)分別連通正極池(2)與原池(5)、負(fù)極池(3)與原池(5)、凝膠橋管(4)浸漬在正極池(2)、負(fù)極池(3)、原池(5)中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)濃縮/純化裝置，其特征是所述的待分 離純化的蛋白質(zhì)原池(5)、正極池(2)、負(fù)極池(3)，其內(nèi)部都盛裝緩沖液。
專利摘要本實(shí)用新型提供了一種蛋白質(zhì)濃縮/純化裝置，它主要由直流電源、待分離純化的蛋白質(zhì)原池、正極池、負(fù)極池和等電凝膠橋管組成。直流電源的正負(fù)極分別與正極池、負(fù)極池連接，凝膠橋管分別連通原池與正極池、原池與負(fù)極池。這種裝置利用氨基酸、蛋白質(zhì)等兩性離子在不同pH溶液中，其帶電的性質(zhì)不同，在直流電場(chǎng)作用下，凡是等電點(diǎn)不等于原池溶液pH值的氨基酸及蛋白質(zhì)分別由原池通過凝膠管的凝膠分別移動(dòng)到正極池或負(fù)極池，而其等電點(diǎn)等于原池溶液pH而不帶電荷的蛋白質(zhì)、氨基酸留在原池而進(jìn)行分離，分離設(shè)備簡(jiǎn)單，易操作掌握，成本低，分離時(shí)間短，效率高。
文檔編號(hào)C07K1/00GK201068436SQ20072007991
公開日2008年6月4日 申請(qǐng)日期2007年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日
發(fā)明者仇小強(qiáng), 施文祥, 李勝聯(lián), 陸明深, 陳森洲 申請(qǐng)人:桂林醫(yī)學(xué)院