專利名稱：：替加環(huán)素及其制備方法替加環(huán)素及其制備方法本申請要求于2005年5月27日提交的美國臨時(shí)申請60/685,285的權(quán)益，該文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文作為參考。本文公開了制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3Rp其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且ii為l-4。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，Ri為氫，R2為叔丁基，R為-NR3Rt，其中R3為甲基且R4為曱基，且n為1，例如替加環(huán)素(tigecycline)。替加環(huán)素，(9-(叔丁基-甘氨酰氨基)-米諾環(huán)素，TBA-MINO)，(45，4a&5a及，12a5)-9-[2-(叔丁基氨基)乙酰氨基-4，7-雙(二甲基氨基)國l，4，4a，5，5a，6，ll,12a畫八氫-3，10，12,123-四羥基-1，11-二氧代-2-并四苯甲酰胺，其中Ri為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，R4為甲基，且n為l。替加環(huán)素是甘氨酰環(huán)素抗生素，并且是半合成四環(huán)素一一米諾環(huán)素一一的類似物。替加環(huán)素是米諾環(huán)素的9-叔丁基甘氨酰氨基衍生物，如下述結(jié)構(gòu)所示替加環(huán)素替加環(huán)素是響應(yīng)于對抗生素出現(xiàn)耐藥性的世界性威脅而研發(fā)的。替加環(huán)素具有^皮擴(kuò)展的體外及體內(nèi)廣鐠抗菌活性。甘氨酰環(huán)素抗生素象四環(huán)素抗生素那樣通過抑制細(xì)菌中的蛋白質(zhì)翻譯來起作用。替加環(huán)素是四環(huán)素家族中已知的抗生素，并且是米諾環(huán)素的化學(xué)類似物。其可用作對抗耐藥性細(xì)菌的治療，并且其在其它抗生素?zé)o效的情況下已經(jīng)顯示出有作用。例如，其具有對抗下述的活性耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(S鄉(xiāng)/j盧cocc"saMreus)、耐青霉素肺炎鏈球菌(5^/7tococc"spwe"附ow/fle)和耐萬古霉素腸球菌(e"tewcocc/)(D.J.Beidenbach等人，D/tfg"o幼'cM/cfo6i'o/o^y做d/"/e"/o附Z)/sease40:173-177(2001);H.W.Boucher等人，在C/re附C/refYi/^44:2225-2229(2000);P.A.BradfordC7i'汰Af/cw6i》A7VeHv/e汰26:163-168(2004);D.Milatovic等人,J/fft附,c/Y^.C臉附o^e/:47:400-404(2003);R.Patel等人，Z)/flg"仍ricM/m^/o/ogj;朋<//"/e"/o附Z)/s^ose38:177-179(2000);P.J.Petersen等人,爿/iri附/cro6.C/re附C/f^:46:2595-2601(2002);和P.J.Petersen等人，j/ift附/cw6.C^e附o幼e/:43:738-744(1999)),并且具有對抗攜帶四環(huán)素耐藥性的兩種主要形式一一外流和核糖體保護(hù)一一之一的生物體的活性(C.Betriu等人，^ge"toC/^附o狄ei:48:323-325(2004);T.Hirata等人，爿/ift附/c/Y^.^gerafeC^e附W/rc48:2179-2184(2004);和P.J.Petersen等人，^4ge"teCAe/wo^e/:43:738-744(1999))。替加環(huán)素可用于治療多種細(xì)菌感染，例如復(fù)雜性腹腔內(nèi)感染(cIAI)、復(fù)雜性皮膚及皮膚結(jié)構(gòu)感染(cSSSI)、社區(qū)獲得性肺炎(CAP)和醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)征候，其可由革蘭氏陰性和革蘭氏陽性病原體、厭氧菌以及對甲氧苯青霉素敏感的和對曱氧苯青霉素有耐藥性的金黃色葡萄球菌菌林(MSSA和MRSA)引起。此外，替加環(huán)素可用于治療或控制溫血?jiǎng)游镏杏删哂蠺etM及TetK耐藥性決定子的細(xì)菌引起的細(xì)菌感染。而且，替加環(huán)素可用于治療骨和關(guān)節(jié)感染、與導(dǎo)管有關(guān)的中性白細(xì)胞減少癥、產(chǎn)科及婦科感染或者用于治療其它耐藥性病原體如VRE、ESBL、腸的、快速生長的分枝桿菌等。替加環(huán)素具有一些缺點(diǎn)，即可能通過差向異構(gòu)化而降解。差向異構(gòu)化通常是四環(huán)素類已知的降解途徑，雖然降解速率可以隨四環(huán)素的不同而改變。比較而言，替加環(huán)素的差向異構(gòu)化可能是快速的，即使例如在稍微酸性的條件和/或稍微升高的溫度下亦如此。有關(guān)四環(huán)素的文獻(xiàn)報(bào)道了數(shù)種已經(jīng)被科學(xué)家嘗試并使得四環(huán)素類的差向異構(gòu)體形成最小化的方法。在一些方法中，當(dāng)在堿性pH下、在非水溶液中進(jìn)行時(shí)，與四環(huán)素類形成鈣、鎂、鋅或鋁金屬鹽限制了差向異構(gòu)體的形成(Gordon，P.N，St印hensJr，C.R.，Noseworthy，M.M.,Teare，F(xiàn).W.，英國專利卯1，107)。在其它方法中(Tobkes，美國專利4，038，315)，金屬復(fù)合物的形成在酸性pH下進(jìn)行，隨后制備藥物的穩(wěn)定固體形式。替加環(huán)素僅僅在一個(gè)方面在結(jié)構(gòu)上區(qū)別于其差向異構(gòu)體。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式I式II在替加環(huán)素中，4號(hào)碳上的N-二甲勤目對于相鄰的氫為順式，如上文式I中所示，而在差向異構(gòu)體(即C4-差向異構(gòu)體)式II中，它們以所示的方式相互為反式。雖然據(jù)信替加環(huán)素差向異構(gòu)體是無毒的，但是在某些條件下其可能缺乏替加環(huán)素的抗菌功效，因此可以是不希望的降解產(chǎn)物。而且，當(dāng)大規(guī)模合成替加環(huán)素時(shí)，差向異構(gòu)化的量可能被放大。減少差向異構(gòu)體形成的其它方法包括:在加工期間維持pH高于約6.0;避免與弱酸共軛物如甲酸根、乙酸根、磷酸才艮或硼酸才艮接觸；和避免與潮濕、包括基于水的溶液接觸。關(guān)于防潮，Noseworthy和Spiegel(美國專利、0M，:MS)以及Nash和Haeger(美國專利3，219，529)已經(jīng)提出在非水溶媒中配制四環(huán)素類似物，以提高藥物穩(wěn)定性。然而，在這些公開文獻(xiàn)中所包括的溶媒大都更適合于局部使用勝于胃腸道外使用。四環(huán)素差向異構(gòu)化還已知是溫度依賴性的，因此在低溫下生產(chǎn)和儲(chǔ)存四環(huán)素類也可以降低差向異構(gòu)體形成的速率(Yuen，P.H.，Sokoloski，T.D.，/./%^附.66:1648-1650，1977;Pawelczyk，E.,Matlak,B，Pol./戶/t"i7n"a/.戶/r"r附.34:409-421，1982)。已經(jīng)將這些方法中的一些嘗試用于替加環(huán)素，但是顯然沒有一種成功地降低差向異構(gòu)體形成及氧化降解兩者并且未引入額外的降解物(degradants)。例如，發(fā)現(xiàn)金屬#作用通常在堿性pH下對差向異構(gòu)體形成或降解幾乎沒有影響。雖然磷酸鹽、乙酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液的使用提高了溶液狀態(tài)的穩(wěn)定性，但是它們似乎加速了替加環(huán)素在冷凍干燥狀態(tài)下的降解。但是，即使沒有緩沖液，差向異構(gòu)化對替加環(huán)素而言比對其它四環(huán)素類如米諾環(huán)素而言更為嚴(yán)重。除了CV差向異構(gòu)體，其它雜質(zhì)包括氧化副產(chǎn)物。這些副產(chǎn)物中的一些通過分子的D環(huán)(為氨基苯酚)氧化獲得。式3化合物(參見下述流程I)在C-ll和C-12a位置可容易地被氧化。采用非溶劑沉淀法分離式3化合物可具有氧化副產(chǎn)物和金屬鹽與產(chǎn)物共沉淀、導(dǎo)致純度非常低的問題。式3化合物的核的氧化和降解在堿性反應(yīng)條件下可更明顯，并且在大規(guī)模操作時(shí)，由于加工時(shí)間通常較長以及化合物與堿接觸更長時(shí)間，因而氧化和降解更為明顯。而且，在流程的每個(gè)不同合成步驟期間都可能獲得降解產(chǎn)物，并且使所需化合物與這些降解產(chǎn)物分離可以是冗長乏味的。例如，常規(guī)純化技術(shù)(例如硅膠色i脊法或制備型HPLC)由于其螯合特性不能用于容易地純化這些化合物。雖然已經(jīng)通過采用硅藻土柱浸潤含有多價(jià)螯合劑如EDTA的緩沖固定相的分配色鐠法純化了一些四環(huán)素，但是這些技術(shù)的分離度、重現(xiàn)性和生產(chǎn)力非常低。這些缺點(diǎn)可以妨礙大規(guī)模合成。HPLC也已經(jīng)用于純化，但是各種組分在HPLC柱子上的足夠分離度要求流動(dòng)相中存在離子對試劑。將終產(chǎn)物與流動(dòng)相中的多價(jià)螯合劑和離子對試劑分離可以是困難的。雖然在小規(guī)模中，通過沉淀獲得的不純化合物可通過制備型反相HPLC來純化，但是當(dāng)處理公斤級(jí)的材料時(shí)，通過反相液相色語法進(jìn)行純化是效率低的和昂貴的。因此，仍然需要以比以往更純的形式獲得至少一種式l化合物。同樣需要一種新的合成法以使得以純化為目的的色譜法使用最小化。本文7〉開了四環(huán)素類如替加環(huán)素的生產(chǎn)方法，大致如下文流程I所解釋的那樣<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>流程IRi和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；且R為-NR3Rj，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷基；且n為l-4。式2化合物也已知為米諾環(huán)素或米諾環(huán)素衍生物。式2化合物與至少一種硝化劑反應(yīng)，產(chǎn)生-]\02取代基，從而形成式3化合物。式3中的-N02取代基隨后可以被還原為氨基，例如通過氫化還原為氨基，以形成式4化合物。最后，式4化合物?；?，產(chǎn)生式l化合物。本文公開了進(jìn)行反應(yīng)以產(chǎn)生式l化合物的方法，例如硝化、還原和?；磻?yīng)。本文還公開了純化式1化合物的方法。本文所公開的方法可形成所需產(chǎn)物，并且減少終產(chǎn)物中存在的至少一種雜質(zhì)的量，例如差向異構(gòu)體形成、起始反應(yīng)物的存在和氧化副產(chǎn)物。雜質(zhì)的這種減少可以在合成的至少一個(gè)階段期間、即在硝化、還原和?；磻?yīng)任一者期間達(dá)成。本文所公開的方法也使得大規(guī)模合成具有適宜純度的終產(chǎn)物變得容易。附l描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。圖2描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。圖3描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。定義應(yīng)注意的是,如本說明書和所附的權(quán)利要求中所用的單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"該"等包括復(fù)數(shù)稱謂，本文有清楚的指示除外。因此，例如，對含有"該化合物"的組合物的稱謂包括兩種或多種化合物的混合物。還應(yīng)當(dāng)注意，術(shù)語"或(者)"通常以包括"和/或"的含義被采用，本文有清楚的指示除外。如本文所用的"替加環(huán)素"包括游離堿形式和鹽形式的替加環(huán)素，例如任意可藥用的鹽、對映異構(gòu)體和差向異構(gòu)體。如本文所用的替加環(huán)素可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來配制。如本文所用的"化合物"指中立(neutral)的化合物(例如游離堿)及其鹽(例如可藥用鹽)?；衔锟梢砸詿o水形式存在，或者作為水合物或作為溶劑化物存在。化合物可以以立體異構(gòu)體(例如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體)的形式存在，并且可以分離為對映異構(gòu)體、外消旋混合物、非對映異構(gòu)體及其混合物。固體形式的化合物可以以各種結(jié)晶形式和非晶形形式存在。如本文所用的"可藥用"指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范疇內(nèi)適用于與患者的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或其它與合理的風(fēng)險(xiǎn)/利益比相稱的問題或并發(fā)癥的那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑量形式。如本文所用的"環(huán)烷基"指具有3至6個(gè)環(huán)成員的飽和碳環(huán)環(huán)系。如本文所用的"雜環(huán)"指含有至少一個(gè)氮環(huán)成員且每個(gè)環(huán)具有3至6個(gè)環(huán)成員的單環(huán)雜環(huán)基，其中每個(gè)環(huán)是飽和的或者不是另外被取代的。硝化一項(xiàng)實(shí)施方案公開了制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3Rj,其中&和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4。一項(xiàng)實(shí)施方案公開了其中未分離硝化產(chǎn)物的硝化反應(yīng)。因此，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以生成包含中間體的反應(yīng)混合物；2;和(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng)，以形成所述的至少一種式1化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體未從反應(yīng)混合物中分離出。所述的至少一種式2化合物可以以游離堿或鹽形式提供。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式2化合物為鹽。如本文所用的"鹽"可原位制備或通過使游離堿與適宜的l應(yīng)來單獨(dú)地制備。示例性的鹽包括但不限于鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、半胱氨酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫酸鹽和氯苯磺酸鹽。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，鹽可以選自烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式2化合物以鹽酸鹽或硫酸鹽的形式提供。如本文所用的"硝化劑"指可以給化合物加上-N02取代基或者可以將現(xiàn)有取代基轉(zhuǎn)化為-N02取代基的試劑。示例性的硝化試劑包括硝酸和硝酸鹽，例如堿金屬鹽，例如KN03。當(dāng)硝化劑為硝酸時(shí)，硝酸的濃度可以為至少80%，例如85%、88%、90%、95%、99%或甚至是100%。硝化劑可以在任意被本領(lǐng)域技術(shù)人員視為適宜的溶劑中與所述的至少一種式2化合物反應(yīng)。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)在硫酸和/或硫酸鹽的存在下進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所用的硫酸為濃的硫酸，例如濃度為至少50%、60%、70%、80%、85%、90%或至少95%。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種硝化劑相對于所述的至少一種式2化合物而言以摩爾過量提供。適宜的摩爾過量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員來決定，可以包括但不限于諸如至少1.05的值，例如摩爾過量為1.05至1.75當(dāng)量，例如摩爾過量為1.05至1.5當(dāng)量、1.05至1.25當(dāng)量或者1.05至1.1當(dāng)量。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，摩爾過量為1.05、1.1、1.2、1.3或1.4當(dāng)量。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，通過歷經(jīng)一段時(shí)間加入所述的至少一種硝化劑來使所述的至少一種硝化劑與所述的至少一種式2化合物反應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定硝化劑總量加入的時(shí)間段以使反應(yīng)條件最優(yōu)化。例如，硝化試劑的添加可通過例如HPLC來監(jiān)測，以控制所述至少一種硝化劑的用量。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種硝化劑的總量歷經(jīng)至少1小時(shí)的時(shí)間段、例如至少2小時(shí)、至少3小時(shí)、至少5小時(shí)、至少10小時(shí)、至少24小時(shí)的時(shí)間段或者l小時(shí)至1周、l小時(shí)至48小時(shí)、l小時(shí)至24小時(shí)、l小時(shí)至12小時(shí)的時(shí)間段加入。所述的至少一種硝'化劑可以;故連續(xù)地加入。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，硝化劑可與所述的至少一種式2化合物在0至25r、例如5至15匸、5至10"C或10至15t:的溫度下反應(yīng)。如本文所用的"中間體"指在原料和終產(chǎn)物之間作為中間產(chǎn)物形成的化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體為所述至少一種式2化合物硝化的產(chǎn)物。例如，中間體可以為至少一種式3化合物或其鹽。中間體可以以游離堿或鹽、例如本文公開的任意鹽的形式存在。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體為硫酸鹽。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體未從反應(yīng)混合物中分離出。如本文所用的"反應(yīng)混合物"指包含反應(yīng)物之間的化學(xué)反應(yīng)的至少一種產(chǎn)物以及副產(chǎn)物如雜質(zhì)(包括具有所不希望的立體化學(xué)的化合物)、溶劑和任意殘余的反應(yīng)物如原料的溶液或漿狀液。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體為硝化產(chǎn)物且存在于反應(yīng)混合物中，反應(yīng)混合物還可以含有起始反應(yīng)物(例如硝化劑和/或至少一種式2化合物)、副產(chǎn)物(例如式2或式3的CV差向異構(gòu)體)。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物為漿狀液，其中漿狀液可以是包含至少一種固體和至少一種液體(例如水、酸或溶劑)的組合物，例如固體的混懸液或^t液。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，硝化反應(yīng)產(chǎn)生中間體，同時(shí)產(chǎn)生低量的相應(yīng)C4-差向異構(gòu)體。例如，當(dāng)中間體為所述的至少一種式3化合物時(shí)，硝化導(dǎo)致以如通過高效液相色譜法(HPLC)所測定的低于10%的量形成式3的C4-差向異構(gòu)體。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，C4-差向異構(gòu)體的存在量低于5%、低于3%、<氐于2%、低于1%或低于0.5%。各步驟即硝化、還原和?；腍PLC參數(shù)在實(shí)施例章節(jié)中有提供。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，進(jìn)行硝化反應(yīng)以便原料如所述的至少一種式2化合物的量是低的。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式2化合物在硝化產(chǎn)物中的存在量低于10%，如通過HPLC所測定的，或者低于5%、低于3%、低于2%、低于1%或低于0.5%。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，硝化可以大規(guī);f莫地進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，"大規(guī)模"指使用至少l克式2化合物，例如使用至少2克、至少5克、至少10克、至少25克、至少50克、至少100克、至少500克、至少lkg、至少5kg、至少10kg、至少25kg、至少50kg或至少100kg。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該還原反應(yīng)形成至少一種式4化合物或其鹽，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，(b)中的進(jìn)一步反應(yīng)包括使中間體還原。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括使還原的中間體進(jìn)行?；１疚墓_的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>其中Ri為氫，R2為叔丁基，R為-NRsR4，其中Rs為甲基且R4為甲基，且n為1，該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以生成包含中間體的反應(yīng)混合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>;和(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng)，以形成所述的至少一種式1化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體未從反應(yīng)混合物中分離出。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式l化合物為替加環(huán)素。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和Ri各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Q)烷基；且n為l-4，該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以產(chǎn)生漿狀液，(b)進(jìn)一步使?jié){狀液反應(yīng)，以形成所述的至少一種式1化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，Ri為氫，R2為叔丁基，R為-NR3Rj，其中R3為甲基且R4為甲基，且n為l。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式l化合物為替加環(huán)素。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式3化合物或其鹽的方法，其中R為-NRsR4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基，該方法包括使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，其中該反應(yīng)在5至15。C的溫度下進(jìn)行。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3R4，其中113和Rj各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4，該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以生成包含中間體的反應(yīng)混合物；和(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng)，以形成所述的至少一種式1化合物。其中(a)的反應(yīng)在5至15'C的溫度下進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，Ri為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，R4為甲基，且n為1。還原一項(xiàng)實(shí)施方案公開了制備至少一種式4化合物或其鹽的方法，RY其中R=-NR3R4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基，該方法包括使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并，所述反應(yīng)混合物包含由至少一種硝化劑和至少一種式2化合物或其鹽之間的反應(yīng)制備的中間體，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法描述了"單罐，，方法，其中硝化和還原步驟在未從硝化反應(yīng)混合物中分離出硝化產(chǎn)物的情況下進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，Ri為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，R4為甲基，且n為1。如本文所用的"還原劑"指給化合物增加氫的化學(xué)物質(zhì)。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，還原劑為氫氣。還原可以在如本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定的適宜壓力的氫氣氛圍中進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，氫氣以l至75psi的壓力、例如l至50psi的壓力或1至40psi的壓力提供。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，還原劑在至少一種催化劑的存在下被提供。示例性的催化劑包括但不限于稀土金屬氧化物、含有第VIII族金屬的催化劑以及含有第VIII族金屬的催化劑的鹽。含有第VIII族金屬的催化劑的實(shí)例為4巴，例如披鈀炭。當(dāng)催化劑為披4巴炭時(shí)，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，催化劑相對于在與所述至少一種硝化劑反應(yīng)前所存在的所述至少一種式2化合物的量而言以0.1份至l份的量存在。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體為至少一種式3化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在式3化合物中，R1為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，R4為曱基，且n為1。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定適于還原反應(yīng)的溶劑。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在合并之前，例如在還原反應(yīng)之前，將反應(yīng)混合物與包含至少一種(d-Cs)醇的溶劑合并。所述的至少一種(d-Cs)醇可以選自例如甲醇和乙醇。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定適于還原反應(yīng)的溫度。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，合并、例如還原在0。C至50。C、例如20'C至40'C或26。C至28。C的溫度下進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在合并之后，例如在還原反應(yīng)之后，將所得反應(yīng)混合物加入溶劑系統(tǒng)中或與之合并，所述溶劑系統(tǒng)包含(d-Cs)支鏈醇和(d-C8)烴。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，(d-Cs)支鏈醇為異丙醇。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，(d-Cs)烴選自己烷、庚烷和辛烷。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在合并之后，例如在還原反應(yīng)之后，將所得反應(yīng)混合物在0匸至50n、例如0C至10'C的溫度下加入溶劑系統(tǒng)中。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括以固體或固體組合物的形式分離所述的至少一種式4化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式4化合物以鹽、例如本文描述的任意鹽形式被沉淀或分離出。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，固體組合物以如通過高效液相色鐠法所測定的低于10%的量包含式4的<:4-差向異構(gòu)體。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，CV差向異構(gòu)體以低于5%、低于3%、低于2%、低于1%或低于0.5%的量存在。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，固體組合物以如通過高效液相色語法所測定的低于2%的量、例如低于1%或低于0.5%的量包含所述的至少一種式2化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，還原可以大規(guī)模地進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，"大規(guī)模"指使用至少1克式2化合物，例如使用至少2克、至少5克、至少10克、至少25克、至少50克、至少100克、至少500克、至少lkg、至少5kg、至少10kg、至少25kg、至少50kg或至少100kg。本文7>開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中議3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4，該方法包括(a)使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并，所述的反應(yīng)混合物包含由至少一種硝化劑和至少一種式2化合物或其鹽之間的反應(yīng)制備的中間體，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>2以形成第二中間體；和(b)進(jìn)一步佳乂應(yīng)混合物中的第二中間體反應(yīng)，以制備所述的至少一種式l化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，Ri為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，Rt為甲基，且n為1。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，中間體為至少一種式3化合物或其鹽，且第二中間體為至少一種式4化合物或其鹽，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>4在一項(xiàng)實(shí)施方案中，(b)中的進(jìn)一步反應(yīng)包含使第二中間體?；?。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在?；?，第二中間體可以作為鹽被沉淀或分離出。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式4化合物或其鹽的方法，ry其中議=-1131^,其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基，該方法包括使式3中間體或其鹽還原，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，式3中間體可以存在于反應(yīng)混合物漿狀液中。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，還原包括將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物合并。本文^Hf的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽其中R!和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(Cl-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4，該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以制備反應(yīng)混合(b)在未從反應(yīng)混合物中分離或沉淀任意固體的情況下，使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物合并，以制備中間體；和(c)由中間體制備所述的至少一種式l化合物。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，的方法，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和Rt各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷基；且n為l-4，該方法包括(a)在氫存在下，使至少一種含有第VIII族金屬的催化劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并，所述的反應(yīng)混合物由至少一種硝化劑和至少一種式2化合物或其鹽之間的反應(yīng)制備，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種含有第VIII族金屬的催化劑相對于在與所述至少一種硝化劑反應(yīng)前所存在的所述至少一種式2化合物的量而言以0.1份至1份的量存在。本文公開的另一項(xiàng)實(shí)施方案是包含至少一種式4化合物或其鹽的組合物其中R為-NRsR4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-d)烷基，其中式4的Cr差向異構(gòu)體以如通過高效液相色鐠法所測定的低于10%的量存在。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，A為氫，R2為叔丁基，R3為甲基，R4為曱基，且n為1。酰化^^開內(nèi)容的一項(xiàng)實(shí)施方案提供了制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>1其中&和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基如(C3-C6)環(huán)烷基,或者和R2與N—起形成雜環(huán)，例如5元環(huán)；R為-NRsR4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(CrCO烷基；且n為l-4，該方法包括在反應(yīng)介質(zhì)中使至少一種式4化合物或其鹽，4與至少一種氨基酰基化合物反應(yīng)。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)介質(zhì)可選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，制備式1化合物的方法為制備替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法替加環(huán)素在一項(xiàng)實(shí)施方案中，變量n為l，Ri為氫，R2為叔丁基，且Rs和R4各自為甲基。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，變量n為l，A和R2與N—起形成吡咯烷基，且R3和R4各自為甲基。所述的至少一種式4化合物的鹽可以為囟化鹽，例如鹽酸鹽。反應(yīng)介質(zhì)可以是選自極性非質(zhì)子溶劑的溶劑或這些溶劑的混合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，極性非質(zhì)子溶劑選自乙腈、1，2-二曱氧基乙烷、二甲基乙酰胺、二曱基甲酰胺、六甲基磷酰胺、N，N，-二曱基亞乙基脲、N，N，-二甲基亞丙基脲、二氯甲烷、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃及其混合物。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，極性非質(zhì)子溶劑選自乙腈、二甲基甲酰胺、N，N，-二甲基亞丙基脲、N-曱基吡咯烷酮、四氫呋喃及其混合物。所述的至少一種堿性溶劑可以為乙腈與N，N，-二甲基亞丙基脲的混合物。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種堿性溶劑可以為水與N，N，-二甲基亞丙基脲的混合物。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種堿性溶劑為N，N，-二甲基亞丙基脲。反應(yīng)介質(zhì)可以為水性介質(zhì)。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的在沒有堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑為在沒有堿存在時(shí)的水。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)介質(zhì)可以為在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑。堿性溶劑為能夠部分或完全接受質(zhì)子的溶劑。反應(yīng)物堿指在反應(yīng)開始時(shí)加入、無論是與所述的至少一種式4化合物和所述的至少一種M?；衔锿瑫r(shí)還是或依次加入并且能夠部分或完全接受質(zhì)子的堿。反應(yīng)物堿也指在反應(yīng)期間加入的堿。所述的至少一種氨基?；衔锟蛇x自^J^?；x化物、氨基?；约盎旌系陌被；?。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，M?；衔餅橹辽僖环N式6的氨基?；栈锘蚱潲}R、2叉/N—(CH2>nQ6其中R!和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；n為l-4;且其中Q為選自氟、溴、氯和碘的卣素。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，Q為氯。式6化合物的鹽可選自卣化鹽。卣化鹽指與卣素陰離子相互作用所形成的任意鹽，例如鹽酸鹽、氬溴酸鹽和氪碘酸鹽。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，卣化鹽為鹽酸鹽。所述的至少一種式6M?；栈锟赏ㄟ^包括如下步驟的方法來獲得A)使至少一種式7的酯或其鹽，與至少一種胺RiR2NH反應(yīng)，以制備至少一種羧酸，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；X為選自溴、氯、氟和碘的面素；A為-OR。其中R6選自直鏈或支鏈(d-C6)烷基和芳基烷基，例如芳基(d-C6)烷基，例如其中芳基為苯基；11為1-4;和B)使所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑反應(yīng)，得到至少一種式6#J>?；衔锘蚱潲}。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，R!和R6可以各自為叔丁基。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，&和112與N—起可以形成雜環(huán)，例如吡咯烷，且R6可以為芳基烷基，例如芐基。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，n為l。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，X為溴。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式7酯為鹽酸鹽。反應(yīng)物中可以存在與式7酯相比而言過量的胺I^R2NH以制備至少一種羧酸。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種氯化劑可以為亞石危酰氯。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑的反應(yīng)包括添加催化量的二甲基甲酰胺。反應(yīng)物中可以存在相對于所述的至少一種羧酸而言過量的氯化劑，以獲得至少一種式6氨基?；衔铩．?dāng)R6為芳基烷基時(shí)，所述至少一種式7化合物的芳基烷基可以在與所述的至少一種胺反應(yīng)后通過氬化裂解，以獲得所述的至少一種羧酸。所述至少一種羧酸與氯化劑的反應(yīng)可以在55'C至85。C、例如80。C至85X:、還例如55'C的溫度下進(jìn)行。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，可以向反應(yīng)物中加入另外量的氯化劑以使反應(yīng)完全，例如達(dá)到低于4%羧酸的水平。在使所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑反應(yīng)后，可以過濾所得混懸液以除去鹽，例如叔丁胺鹽酸鹽。式6的M?；栈锟梢砸喳}酸鹽的形式被分離或者用無機(jī)酸如鹽酸進(jìn)行處理，以制備氨基?；u化物鹽。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，至少一種式6的Jl^酰基鹵化物通過包括如下步驟的方法獲得使至少一種式8羧酸或其鹽其中Rs選自直鏈或支鏈(d-C6)烷基，且n為l至4，與至少一種氯化劑反應(yīng)，獲得至少一種式6的氨基?；栈锘蚱潲}。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式8羧酸為鹵化鹽，例如鹽酸鹽。至少一種式8化合物與至少一種氯化劑的反應(yīng)時(shí)間可以為1至50小時(shí)、例如2至45小時(shí)、還例如1至3小時(shí)。所述的至少一種式8羧酸的粒度可以低于150微米、例如低于110微米、還例如為50至100微米。具有給定粒度的式8化合物可通過碾磨化合物來獲得。至少一種式4化合物與所述至少一種M?；衔锏姆磻?yīng)可以在01C至30X:、例如20'C至25X:、例如10C至17'C、例如0匸至6"C、還例如2'C至8C的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間可以為1小時(shí)至24小時(shí)、例如0.5小時(shí)至4小時(shí)、還例如2小時(shí)至8小時(shí)。在反應(yīng)中可以使用相對于式4化合物的量而言過量的M?；衔?。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，過量可以為3當(dāng)量氨基跣基化合物對比于1當(dāng)量的所述至少一種式4化合物。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，水性介質(zhì)相對于所述至少一種式4化合物的比例可以為6:1w/w或5:1體積比。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，^J^?；衔锉患尤胨鲋辽僖环N式4化合物在水性介質(zhì)中的溶液中或者與之合并。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)為水性介質(zhì)時(shí)，水性介質(zhì)的pH可調(diào)節(jié)至pH為4至9、例如5至7.5、例如6.3至6.7、例如7.0至7.5、還例如6.5、還例如7.2。水可以在調(diào)節(jié)pH之前加入。調(diào)節(jié)pH可以包括添加堿，包括但不限于氬氧化銨。氬氧化銨的濃度可以為25%至30%。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，酸如鹽酸可用于調(diào)節(jié)pH。在pH調(diào)節(jié)期間反應(yīng)介質(zhì)的溫度可以為-5。C至25。C、例如5'C至8'C、還例如0'C至5'C。在pH調(diào)節(jié)后，可以將至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物加入水性介質(zhì)中。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種有機(jī)溶劑混合物可以含有甲醇和二氯甲烷。曱醇的濃度可以為5%至30%，包括但不限于20%和30%。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物包含四氫吹喃?；旌衔锏臏囟瓤梢詾?5X:至25。C。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，水性介質(zhì)可以用至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑的混合物來萃取。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包括二氯甲烷，且所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包括甲醇。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，水性介質(zhì)用至少一種極性非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷來萃取。萃取可以在-5。c至25。c、還例如在ox:至5n的溫度下進(jìn)行。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，在各萃取之后，將水性介質(zhì)的pH調(diào)節(jié)至7.0至7.5、例如7.2。萃取操作可以重復(fù)，例如重復(fù)最高達(dá)10次。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所合并的有機(jī)萃取物可以用干燥劑如硫酸鈉進(jìn)行處理。有機(jī)萃取物還可以用活性碳如NoritCA-l進(jìn)行處理。固體通過過濾除去以獲得溶液。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，溶液可以被濃縮以獲得式l化合物。由該反應(yīng)獲得的式1化合物可以在至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物中結(jié)晶。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，有機(jī)溶劑混合物包含曱醇和二氯甲烷。結(jié)晶可以例如在-15X:至155。C、例如0。C至15n、還例如2'C至5匸的溫度下發(fā)生。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，在萃取之后，可以將所得的至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑的有機(jī)混合物濃縮以獲得漿狀液，并過濾以獲得所述的至少一種式1化合物。濃縮和過濾可以例如在0。C至5。C的溫度下發(fā)生。制備式1化合物的方法可采用高于5克、例如高于10克、例如高于50克、例如高于100克、例如高于500克、例如高于l公斤、還例如高于10公斤的式4胺來進(jìn)行。一項(xiàng)實(shí)施方案公開了通過本文所述的任一種方法制備的化合物，包括但不限于式l化合物、式4化合物、式6化合物、式7化合物、式8化合物及其鹽。另一項(xiàng)實(shí)施方案包括包含通過本文所述的任一種方法制備的化合物的組合物。該組合物還可以包含可藥用載體。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，組合物可包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽:其中n為l，Ri和R2與N—起形成叔丁基，且R3和R4各自為甲基。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，組合物可以包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽和低于0.5%的所述至少一種式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體其中R！和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者I^和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和R4各自獨(dú)立地選自氬、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為1-4。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，組合物可包含替加環(huán)素或其可藥用鹽和低于0.5%的替加環(huán)素或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體在一項(xiàng)實(shí)施方案中，通過本文公開的任一種方法所制備的式1化合物含有如通過高效液相色語法測定的低于10.0%的雜質(zhì)、例如低于5%的雜質(zhì)、例如低于2%的雜質(zhì)、還例如1-1.4%的雜質(zhì)。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，式1化合物含有如通過高效液相色鐠法測定的低于1.0%的量的cv差向異構(gòu)體，例如^f氐于0.5%的Cr差向異構(gòu)體，還例如低于0.2%的CV差向異構(gòu)體。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，式l化合物含有如通過高效液相色譜法測定的低于1%的米諾環(huán)素、例如低于0.6%的米諾環(huán)素。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，式1化合物含有低于5%的二氯甲烷、例如低于2-3%的二氯甲烷。替力口環(huán)素4^>開內(nèi)容的一項(xiàng)實(shí)施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中Rs和Rt各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4，該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，以制備包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液，式3B)使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并，以制備至少一種式4化合物或其鹽，式4;和C)使至少一種式4化合物與至少一種M酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。通過該方法制備的式1化合物可以是替加環(huán)素(tigecyline)。^^開內(nèi)容的另一項(xiàng)實(shí)施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法式l其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3Rt,其中議3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷基；且n為l-4，該方法包括A)使至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液合并，式3以制備至少一種式4化合物或其鹽，式4;和B)使所述的至少一種式4化合物與至少一種氨基酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，通過上述方法制備的式1化合物可以為替加環(huán)素(tigecyline)。純化;^&開內(nèi)容的一項(xiàng)實(shí)施方案提供了純化至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，式l其中和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4,其中Rs和Rj各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-CO烷基；且n為l-4，該方法包括A)使所述的至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，B)在0n至40X:的溫度下，使第一混合物混合至少一段時(shí)間，例如15分鐘至2小時(shí)，和C)獲得所述的至少一種式1化合物。如本文所用的術(shù)語"獲得"指以有用的純度水平、包括但不限于高于90%、95%、96%、97%、98%、99%的純度水平分離化合物。純度水平可通過高壓液相色鐠法來測定。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，純化至少一種式1化合物的方法包括下述步驟A)使所述的至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，B)在30。C至40。C的溫度下，使第一混合物混合一段時(shí)間段，C)使第一混合物冷卻至15。C至25°C,在未混合的情況下使混合物靜置第二段時(shí)間段，D)使第一混合物冷卻至0匸至6*C，在未混合的情況下使混合物靜置第三段時(shí)間段，和E)獲得所述的至少一種式1化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法可以包括至少一種式l化合物，其中n為1，Ri為氫，R2為叔丁基，R3和R4各自為甲基。另一項(xiàng)實(shí)施方案包括至少一種式l化合物，其中n為l,&和112與N—起形成吡咯烷基，且R3和R4各自為甲基。與所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑和所述至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的所述至少一種式l化合物可以以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式被提供。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑可以選自丙酮、1，2-二氯乙烷、乙酸甲酯、甲乙酮、曱基異丁基酮、二氯甲烷和乙酸乙酯。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑可以選自丙酮和二氯甲烷。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種極性質(zhì)子溶劑可以選自曱醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種極性質(zhì)子溶劑可以為甲醇。所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑與至少一種極性質(zhì)子溶劑的組合可包括丙酮和甲醇。另一項(xiàng)實(shí)施方案提供了所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑"二氯甲烷，，與所述至少一種極性質(zhì)子溶劑"甲醇"的組合。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑與至少一種極性質(zhì)子溶劑的組合可以包括乙酸曱酯和甲醇。式1化合物可以例如與等體積的所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑和所迷至少一種極性質(zhì)子溶劑合并。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，第一混合物可以例如混合30分鐘至2小時(shí)的第一段時(shí)間段，此時(shí)溫度為15C至25C，隨后混合30分鐘至2小時(shí)的第二段時(shí)間段，此時(shí)溫度為ox:至2'c。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，第一段時(shí)間段和第二段時(shí)間段各自為l小時(shí)。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，該方法可以包括在15匸至25'C的溫度下使第一混合物混合至少一段30分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段，隨后過濾第一混合物以獲得固體。該方法還可以包括在15X:至25r的溫度下使固體與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并、例如以等體積合并30分鐘至2小時(shí)的第一段時(shí)間段并過濾以獲得第二固體。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，這些合并和過濾步驟可重復(fù)二至十五次。純化式l化合物的方法還可以包括由第一混合物獲得固體，使固體與至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑合并以獲得第二混合物。第二混合物可以例如包含甲醇和二氯甲烷，其中甲醇:二氯甲烷體積比為1:5至1:15。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，第二混合物可以在30匸至36X:的溫度下混合，然后過濾以獲得溶液。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑在溶液中的濃度可以被降低至低于5%的水平，溶液在過濾前可以混合、例如在O*€至6^的溫度下混合一段時(shí)間段、例如30分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，混合第一混合物可以在10至20分鐘、例如15分鐘的時(shí)間段期間發(fā)生。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，使第一混合物冷卻至15。C至25。C并使混合物在未混合的情況下靜置可以在30分鐘至3小時(shí)、例如1小時(shí)至2小時(shí)的第二段時(shí)間段期間發(fā)生。第一混合物可進(jìn)一步冷卻至O"C至6。C,并使其在未混合的情況下靜置30分鐘至2小時(shí)、例如l小時(shí)的第三段時(shí)間段。獲得式1化合物可以包括通過至少一種選自減熱原過濾器和澄清過濾器的濾器來過濾本文所述的任意混合物。如本文所公開的那樣，混合可以通過采用機(jī)械混合裝置如攪拌器或攪動(dòng)器來進(jìn)行?；旌线€可通過式l化合物在溶劑系統(tǒng)中的溶解來進(jìn)行。升高溫度可以增加溶解度。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，當(dāng)至少一種式l化合物用于與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并時(shí)，所述的至少一種式1化合物可以以其可藥用鹽的形式來使用。當(dāng)至少一種式1化合物作為本發(fā)明方法的產(chǎn)物被獲得時(shí)，所述的至少一種式l化合物可以以其可藥用鹽的形式回收。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，當(dāng)式l化合物通過本發(fā)明的方法獲得時(shí)，該化合物可以通過加入酸而轉(zhuǎn)化為其可藥用鹽。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式l化合物可以為[4S-(4a，12aa)卜4，7-雙(二曱基氨基)-9-[(叔丁基氨基)乙?；鵯氨基-l，4，4a，5,5a，6，ll，12a-八氫-3，10，12，12a-四羥基-l，ll-二氧代-2-并四苯-曱酰胺，例如可藥用鹽，例如HC1鹽。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式1化合物可以為[4S-(4a，12aa)-4，7-雙(二甲基氨基)-9-[[(吡咯烷基)乙?；鵌氨基-1，4，4a，5，5a,6，ll，12a-八氫-3，10，12，12a-四羥基-l，ll-二氧代-2-并四苯-曱酰胺，例如可藥用鹽，例如HC1鹽。純化至少一種式1化合物的方法可以是純化替加環(huán)素的方法，該方法包括:A)使替加環(huán)素與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，B)使第一混合物在0C至40C的溫度下混合至少一段時(shí)間段，例如15分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段，和C)獲得替加環(huán)素。與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的替加環(huán)素可以以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式,皮提供。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，由該方法獲得的替加環(huán)素可以含有如通過高壓液相色i普法(HPLC)測定的低于1%的替加環(huán)素或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體。由該方法獲得的所述至少一種式1化合物可以含有如通過HPLC測定的低于3.0%的雜質(zhì)、例如低于1.0%的雜質(zhì)、例如低于0.7%的雜質(zhì)。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的至少一種式1化合物可以含有如通過HPLC測定的低于2%的式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體、例如低于1%的C-4差向異構(gòu)體、例如低于0.5%的C-4差向異構(gòu)體。該方法可以在高于5克的所述至少一種式1化合物的水平上進(jìn)行，例如高于50克、例如高于100克、例如高于500克、例如高于l公斤、還例如高于10>5^斤。一項(xiàng)實(shí)施方案公開了通過本文所述的任一種方法制備的化合物，包括但不限于式1化合物和替加環(huán)素。另一項(xiàng)實(shí)施方案包括包含通過本文所述的任一種方法制備的化合物的組合物。該組合物可進(jìn)一步包含可藥用載體。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該組合物可包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽式l其中n為l，&為氫，R2為叔丁基，且R3和R4各自為甲基。>$^>開內(nèi)容的一項(xiàng)實(shí)施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>鹽的方法:其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3Rt,其中議3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為1-4，該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，式2以制備反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液，其包含中間體、例如至少一種式3化合物或其鹽，式3B)使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并，以制備第二中間體，例如至少一種式4化合物或其鹽，式4C)使笫二中間體與至少一種氨基?；衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，以獲得至少一種式l化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。另外的步驟可以包括例如下述步驟中的至少一個(gè)步驟D)使所述至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，E)在例如0。C至40t:的溫度下，使第一混合物混合至少一段時(shí)間段、例如15分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段，和F)獲得至少一種式l化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所公開方法的任意中間體可以4皮分離或沉淀出。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，所公開方法中的任意方法的兩個(gè)或多個(gè)步驟為"單罐"操作。;M^開內(nèi)容的另一項(xiàng)實(shí)施方案包括制備至少一種式i化合物或其可藥用鹽的方法其中&和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R，和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和Rt各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4，該方法包括A)使至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并，式3以制備至少一種中間體，例如式4化合物或其鹽，式4B)使中間體與至少一種氨基?；衔镌谶x自水性介質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，以獲得式l化合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，反應(yīng)介質(zhì)可以選自在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑。另外的步驟可以包括例如下述步驟中的至少一個(gè)步驟C)使所述的至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，D)在例如0。C至40。C的溫度下，使第一混合物混合至少一段時(shí)間段、例如15分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段，和E)獲得至少一種式1化合物。^/>開內(nèi)容的另一項(xiàng)實(shí)施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法式l其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中113和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Q)烷基；且n為l-4，該方法包括A)使至少一種式4化合物或其鹽與至少一種氨基?；衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)例如選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>式4以獲得式1化合物。另外的步驟可以包括下述步驟中的至少一個(gè)步驟B)使所述的至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并，以獲得第一混合物，C)在例如0匸至40t:的溫度下，使第一混合物混合至少一段時(shí)間段、例如15分鐘至2小時(shí)的時(shí)間段，和D)獲得至少一種式1化合物。所公開的制備式1化合物的這些方法中的任一種可以是制備如下定義的式l化合物的方法，其中n為l，Ri為氫，R2為叔丁基，且R3和R4各自為甲基。藥物組合物如本文所用的"藥物組合物"指醫(yī)藥組合物。藥物組合物可含有至少一種可藥用載體。如本文所用的"可藥用賦形劑"指適于施用本文所提供的化合物的藥用載體或賦形劑，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知適于特定施用模式的任意這類載體。例如，用于胃腸道外、真皮內(nèi)、皮下或局部應(yīng)用的溶液或混懸液可包括無菌稀釋液(例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)油等)；天然存在的植物油(例如芝麻油、椰子油、花生油、棉籽油等)；合成脂肪載體(例如油酸乙酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇等，包括其它合成溶劑)；抗微生物劑(苯甲醇、尼泊金甲酯等)；抗氧化劑(例如抗壞血酸、亞硫酸氫鈉等)；螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA)等)；緩沖劑(例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽等)；和/或用于調(diào)節(jié)張力的物質(zhì)(例如氯化鈉、右旋糖等)；或其混合物。進(jìn)一步舉例而言，當(dāng)靜脈內(nèi)施用時(shí)，適宜的載體包括生理鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)以及含有增稠和增溶物質(zhì)如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇等及其混合物的溶液。作為非限制性的實(shí)例，替加環(huán)素可任選與一種或多種可藥用賦形劑合并，并且可以以諸如片劑、膠囊劑、可分散粉末、顆?；蚝欣缂s0.05至5%助懸劑的混懸劑或者含有例如約10至50%糖的糖漿劑和含有例如約20至50%乙醇的酏劑等的形式經(jīng)口服施用，或者以無菌可注射溶液或含有在等張介質(zhì)中的約0.05至5%助懸劑的混懸液的形式經(jīng)胃腸道外施用。這些藥物制劑可含有與載體組合的例如約25至約90%重量的活性成分、更通常是約5%至60%重量。其它制劑在美國專利5,494,903和5,529,990中有討論，其引入本文作為參考。術(shù)語"可藥用鹽"指本公開內(nèi)容中的化合物的酸加成鹽或堿加成鹽?？伤幱名}是保留母體化合物的活性并且對施用其的受治療者以及在施用其的背景中不產(chǎn)生任何有害或不希望的作用的鹽。可藥用鹽包括金屬復(fù)合物以及無機(jī)酸和有機(jī)酸的鹽?？伤幱名}包括金屬鹽如鋁鹽、釣鹽、鐵鹽、鎂鹽、錳鹽和復(fù)合物鹽?？伤幱名}包括酸的鹽，例如乙酸鹽、天門冬氨酸鹽、烷基磺酸鹽、芳基磺酸鹽、axetil(醋氧乙)、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、丁酸鹽、鉀依地酸鹽、camsylic(樟腦磺酸)、碳酸鹽、氯苯甲酸鹽、cilexetil(西賽替爾)、檸檬酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽(edisylic)、十二烷基磺酸鹽(estolicacid)、esyl(乙磺?；?、esylic(乙磺酸)、甲酸鹽、富馬酸鹽、gluceptic(葡庚酸鹽)、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酸鹽、羥乙酰基氨苯胂酸鹽、環(huán)己磺酸鹽、己基間苯二曱酸鹽(hexylresorcinoicacid)、hydrabamic(海卓巴米克酸鹽)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氬碘酸鹽、羥萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、曱基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、粘康酸鹽、napsylicacid(恭璜酸鹽)、硝酸鹽、草酸鹽、對硝基甲磺酸鹽、樸酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、酞酸鹽、聚半乳糖醛酸、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、氨基磺酸鹽、對氨基笨璜酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、teoclicacid(提歐里克酸鹽)、甲M酸鹽等?？伤幱名}可衍生自氛基酸，包括但不限于半胱氨酸。其它可接受的鹽可以例如在Stahl等人，i^flr附"ce"ftca//V印eW/M，5We"/ow，t/^e，Wiley畫VCH;第1版(2002年6月15日)中找到。除了在實(shí)施例中以及另有指示時(shí)，說明書和權(quán)利要求書中所用的所有數(shù)值應(yīng)被理解為在所有實(shí)例中以術(shù)語"約，，進(jìn)行修飾。因此，除非有相反指示，本說明書和所附的權(quán)利要求中所給出的數(shù)值參數(shù)是近似值，其可以根據(jù)通過本公開內(nèi)容所尋求獲得的所需性質(zhì)而改變。最起碼地，并且不是意欲限制等同原則對權(quán)利要求范圍的應(yīng)用，每個(gè)數(shù)值參數(shù)應(yīng)當(dāng)考慮有效數(shù)字的數(shù)和常規(guī)四舍五入方法來解釋。雖然設(shè)定公開內(nèi)容的寬范圍的數(shù)值范圍和#是近似值，但是在具體實(shí)施例中所給出的數(shù)值被盡可能精確地報(bào)道。然而，任意數(shù)值本質(zhì)上包含某些由在它們各自的測試測定中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差所必然產(chǎn)生的誤差。下述實(shí)施例意欲以非限制性的方式解釋說明本發(fā)明。實(shí)施例硝化米諾環(huán)素根據(jù)美國專利3,226,436所述的方法制得。HPLC分析在下述條件下進(jìn)行:柱InertsilODS35阿，25x0.46cm流動(dòng)相80%A+20%B，其中A=90%(0.05MKH2P04+5mL三乙胺/L(磷酸鹽+H;jP04至pH6)/10%乙腈，用H3P04調(diào)節(jié)至pH3.0B-乙腈流速1.0mL/min檢測250nm比較例1:9-硝基米諾環(huán)素的制備該比較例描述了米諾環(huán)素的硝化，其中硝化產(chǎn)物被分離出。在攪拌下將13.44g對氯苯磺酸米諾環(huán)素(即對氯苯磺酸[4S-(4a，12aa)卜4，7誦雙(二曱基氨基)-l，4，4a，5，5a，6，ll，12a-八氫-3，10，12，12a畫四羥基-l，ll-二氧代-2-并四苯甲酰胺)緩慢加入50mL濃疏酸中。將溶液冷卻至0-15'C。緩慢加入賄酸(90%，0.6mL),于0-15'C攪拌溶液1至2小時(shí)直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在攪拌下，歷經(jīng)20分鐘將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽(即[4S-(4a，12aa)-9-硝基l-4，7-雙(二甲基氨基)-l，4，4a,5，5a,6，ll，12a-八氫-3，10，12，12a-四羥基-l，ll-二氧代-2-并四苯甲酰胺硫酸鹽)的溶液轉(zhuǎn)移至300g冰水混合物中。采用28%氬氧化銨水溶液調(diào)節(jié)淬滅物的pH至5.0-5.5,同時(shí)維持溫度在0-8。C之間。過濾沉淀物，用水洗滌(2xl0mL)。在氮?dú)饬飨抡婵涨г锕腆w，獲得9g粗的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽。HPLC分析(面積％)顯示純度為卯％，C4-差向異構(gòu)體含量為1.5%。MS(FAB):m/z5(B(M+H)，S02(M+)。產(chǎn)物通過在其等電點(diǎn)從水溶液中沉淀而分離出。石危酸鹽粗品的摩爾產(chǎn)率為45%。下表1列出了其它硝化操作的數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>可以看出，9-硝基米諾環(huán)素的分離導(dǎo)致高含量的雜質(zhì)。比較例2:9-硝基米諾環(huán)素的制備該比較例描述了米諾環(huán)素的硝化，其中硝化產(chǎn)物被分離出。將2升多頸玻璃燒瓶裝配才幾械攪拌器、熱電偶、液體添加管、氮?dú)夤芫€和連接至30V。(wt)堿洗滌器的氣體出口。向燒瓶中裝入硫酸66°Be(l，507g，819mL,15moles)。將溶液冷卻至0至2°C。在攪拌下，于0至14°C歷經(jīng)0.7小時(shí)將米諾環(huán)素.HC1(效價(jià)92.7%，311g，0.58moles)加入硫酸中。在添加后，混合物于0'C攪拌0.5小時(shí)，獲得黃色溶液。歷經(jīng)3小時(shí)加入硝酸(95.9%硝酸根含量，48g，32mL，0.73moles,1.25摩爾當(dāng)量)，同時(shí)保持混合物在0至2°C。將混合物于O'C攪拌0.3小時(shí)(暗紅色/黑色溶液)。HPLC分析(面積％)顯示0%米諾環(huán)素，75.6%9-硝基米諾環(huán)素，8.2%最大單項(xiàng)雜質(zhì)(LSI);對米"i若環(huán)素而言的相對保留時(shí)間(RRT)=2.08。將22升多頸玻璃燒瓶裝配機(jī)械攪拌器、熱電偶和具有氮?dú)獗Ｗo(hù)的冷凝器。向燒瓶中裝入6，704g(8，540mL)異丙醇(IPA)和l，026g(1，500mL)庚烷。然后將溶液冷卻至0-5"。在0-39C下，歷經(jīng)2小時(shí)將9-硝基米諾環(huán)素反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至22升燒瓶中，以產(chǎn)生黃色漿狀液。漿狀液溫度在34-39匸維持2小時(shí)，然后冷卻至20-34r并在20-34X:下攪拌14.6小時(shí)。制備異丙醇3,028g(3，857mL)和庚烷660g(965mL)的溶液并維持在20-25C(IPA:庚烷的體積比為4:1)。將漿狀液采用1號(hào)Whatman濾紙?jiān)谡婵蘸偷獨(dú)獗Ｗo(hù)下經(jīng)直徑30cm的布氏漏斗過濾。將所得的濕濾餅轉(zhuǎn)移至裝配有機(jī)械攪拌器和氮?dú)獗Ｗo(hù)的4升玻璃錐形瓶中。在23-26C下通過歷經(jīng)0.5小時(shí)加入1，608mL所制備的IPA/庚烷溶液使濾餅形成漿狀液。將漿狀液再次如上所述過濾。濕濾餅如上所述重新制成漿狀液二次(總共重新制成漿狀液三次)。最后一次過濾后，將濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下在真空中維持0.2小時(shí)。產(chǎn)物在40X:和在23至llmmHg的真空下干燥48小時(shí)，至干燥失重(LOD，80X:，1小時(shí)，>49mmHg真空)值為1.54。所得9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽的重量為380.10g，HPLC強(qiáng)度-76,3。/。(作為硫酸氫鹽)，總雜質(zhì)=34.6%,最大單項(xiàng)雜質(zhì)(LSI)9.46%(RRT=0.94)。自米諾環(huán)素.HC1的產(chǎn)率=86%。對產(chǎn)物和原料強(qiáng)度矯正的產(chǎn)率=71%?？梢钥闯?，9-硝基米諾環(huán)素化合物的分離導(dǎo)致具有高百分比雜質(zhì)的產(chǎn)實(shí)施例1下表2概括了采用比較例2所概述的操作進(jìn)行的硝化實(shí)驗(yàn)，其中修改下述變量硝酸添加時(shí)間；反應(yīng)溫度；硝酸(相對于米諾環(huán)素HC1)的摩爾當(dāng)量；和攪拌速率。根據(jù)本文公開的方法，這些反應(yīng)物中沒有一者被淬滅或進(jìn)行后處理以分離產(chǎn)物。所用的唯一分析工具是HPLC分析。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>i由于容器尺寸，在這些反應(yīng)中僅監(jiān)測浴溫。2反應(yīng)在原始米諾環(huán)素濃度的50wt%。3相對于所有其它實(shí)驗(yàn)而言，攪拌是劇烈的。4HN03以在H2S04中的50wt。/。添加?？梢钥闯觯M管所采用的條件不同，起始米諾環(huán)素的量以低于10%的量存在，并且在某些條件下基本上被除去。實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)還進(jìn)行<務(wù)改的硝化反應(yīng)、反應(yīng)物淬滅和硝化反應(yīng)物的后處理。采用比較例2中所概述的操作進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中修改下述變量硝酸添加時(shí)間；反應(yīng)溫度；硝酸(相對于米諾環(huán)素HC1)的摩爾當(dāng)量；淬滅溫度；淬滅溶液的組成；將反應(yīng)混合物加入淬滅溶液的時(shí)間；和所分離濾餅的洗滌方法。數(shù)據(jù)顯示于下表3。所用的唯一分析工具是HPLC分析。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>1由于容器尺寸，在這些反應(yīng)中僅監(jiān)測浴溫。2當(dāng)IPA用作淬滅物時(shí)，隨后添加庚烷以獲得原始淬滅混合物的組合物。3洗滌方法l:將濕濾餅在濾器上用4:1的IPA:庚烷(體積比)洗滌。洗滌方法2:將濕濾餅用4:1的IPA:庚烷(體積比)形成漿狀液三次。洗滌方法弁2比洗滌方法#1多4吏用20°/。的洗滌溶液。4產(chǎn)率對產(chǎn)物和原料的強(qiáng)度進(jìn)行了校正。5淬滅在ox:開始，隨后立即加熱至34r并在淬滅的剩余時(shí)間保持在34X:。由表3的數(shù)據(jù)可以看出，產(chǎn)率至少為50%。實(shí)施例3該實(shí)施例顯示了改變硝化步驟所需的硝酸量(以當(dāng)量計(jì))的結(jié)果。硝酸經(jīng)滴定為89.5%，相應(yīng)地校正用量。進(jìn)行三項(xiàng)試驗(yàn)。試驗(yàn)l使用1.25當(dāng)量的硝酸，試驗(yàn)24吏用1.09當(dāng)量硝酸，且試驗(yàn)3使用1.00當(dāng)量的硝酸。試驗(yàn)1的HPLC完全測試顯示沒有米諾環(huán)素的信號(hào)，而試驗(yàn)2的完全測試顯示有2.5%未反應(yīng)的原料。采用SLP操作，將兩種反應(yīng)物均進(jìn)行氫化、然后轉(zhuǎn)化為氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽。氫化產(chǎn)物1(來自試驗(yàn)l)顯示米諾環(huán)素含量為0.37%;強(qiáng)度-83.0%，總雜質(zhì)=3.20%;單項(xiàng)雜質(zhì)=0.52%;差向異構(gòu)體含量=1.1%。氫化產(chǎn)物2(來自試驗(yàn)2)顯示米諾環(huán)素含量為1.6%;強(qiáng)度-84.2%;總雜質(zhì)=4.00%;單項(xiàng)雜質(zhì)=0.35%;差向異構(gòu)體含量=1.0%。試驗(yàn)3:強(qiáng)度=83.0%;總雜質(zhì)=5.0%;單項(xiàng)雜質(zhì)=2.7%;差向異構(gòu)體含量=1.1%。還原HPLC分析在下述條件下進(jìn)行:柱'.I證tsilODS35拜，25x0.46cm流動(dòng)相80%A+20%B，其中A=90%(0.05MKH2P04+5mL三乙胺/升磷酸鹽+H3P04至pH6)/10。/o乙腈，用H3P04調(diào)節(jié)至pH6.0B=乙腈流速l.OmL/min檢測250nm實(shí)施例1該實(shí)施例描述了氫化反應(yīng)，其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。在攪拌下，將lO.lg對氯苯磺酸米諾環(huán)素緩慢加入27mL濃硫酸中。將溶液冷卻至0-2。C。緩慢加入硝酸(0.6mL，90。/。)，將溶液在0-2t:下攪拌1至2小時(shí)直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在硝化完全后，在攪拌下將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽的溶液轉(zhuǎn)移至150mL異丙醇和1200mL甲醇中，同時(shí)保持溫度低于10-15'C。將溶液在26-28X:和40psi下、在10。/。披鈀炭催化劑(50%濕)的存在下氫化3小時(shí)。氫化完成后，濾除催化劑，于0-5。C將溶液在攪拌下緩慢倒入250mL異丙醇。濾出固體(3.4g)。HPLC(面積％)測得粗品純度為90%。<:4-差向異構(gòu)體存在的量為0.9%。MS(FAB):m/z473(M+H),472(M+)。實(shí)施例2該實(shí)施例描述了氫化反應(yīng)，其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。在攪拌下，將84.3g對氯M酸米諾環(huán)素緩慢加入368g、^S克酸中。將溶液冷卻至10-15'C。緩慢加入硝酸(0.6mL，發(fā)煙)。將溶液于10-15C攪拌1至2小時(shí)直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在硝化完全后，將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽的溶液在攪拌下轉(zhuǎn)移至0.3kg甲醇中，同時(shí)保持溫度低于10-15'C。將溶液在26-28C和50psi下、在10%披把炭催化劑(50%濕)的存在下氫化2-3小時(shí)。氫化完成后，濾除催化劑，在攪拌下于0-5X:將溶液緩慢倒入0.6kg異丙醇和0.3kg正庚烷中。濾出固體。將濕固體溶于0-5"C的100g水中。攪拌混合物，分離并棄去有機(jī)相。向水相中加入14.4g濃HC1。采用氫氧化銨將溶液的pH調(diào)節(jié)至4.0士0.2。加入100mg亞硫酸鈉，溶液用100mg9-氨基米諾環(huán)素進(jìn)行接種。將混合物在0-5匸下攪拌4小時(shí)，過濾產(chǎn)物并干燥，獲得28.58固體。HPLC(面積%)測定純度為96.5%,含有0.9%C4-差向異構(gòu)體。MS(FAB):m/z473(M+H)，472(M+)。產(chǎn)率54.2%。比較例1該比較例描述了氫化反應(yīng)，其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。將52.0kg米諾環(huán)素.HC1(效價(jià)92.4%)倒入在300加侖容器中的0至15。C的4.8份(251kg)硫酸66。Be中，攪拌以除去HC1。歷經(jīng)3小時(shí)20分鐘加入7.48kg硝酸(發(fā)煙100%,95.9%硝酸根含量，1.26當(dāng)量)。HPLC分析顯示殘余>1%的米諾環(huán)素。因此，加入0.31kg硝酸(發(fā)煙100%，95.5%硝酸根含量，0.05當(dāng)量)。HPLC分析仍顯示殘佘:^o/o的米諾環(huán)素。另外加入0.74kg硝酸(發(fā)煙100%,95.5%硝酸根含量，0.12當(dāng)量)。由于HPLC測試再次顯示殘余>1%的米諾環(huán)素，因此另外加入l.llkg硝酸(發(fā)煙100%,95.5%硝酸才艮含量，0.19當(dāng)量)，之后顯示殘余<1%的米諾環(huán)素。在0至36"C下，將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至21.5份IPA/3.3份庚烷(1120kgIPA/171kg庚烷)的溶液中。過濾漿狀液(過濾時(shí)間冗長)，用IPA/庚烷4:1洗滌、在NMT上于40n干燥至NMT的LOD為6%,生成70.9kg硫酸鹽(97°/。粗產(chǎn)率)，供還原反應(yīng)使用。實(shí)施例3該實(shí)施例描述了氫化反應(yīng)，其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。將25.0kg米諾環(huán)素.HCl(效價(jià)94.4%)倒入在100加侖容器中的5至15匸的7.3份(183kg)硫酸66°Be中，攪拌以除去HC1。于9至15"C歷經(jīng)78分鐘向容器內(nèi)加入2.5015kg硝酸(85%，86.6%硝酸根含量，1.25當(dāng)量)。HPLC分析顯示殘余>1%的米諾環(huán)素。另外加入0.261kg硝酸(85%，86.6%硝酸根含量，0.13當(dāng)量)。HPLC再次顯示殘余>1%的米諾環(huán)素，另外加入0.261kg硝酸(85%，86.6%硝酸根含量，0.13當(dāng)量)。由于HPLC仍顯示殘余>1%的米諾環(huán)素，加入另外的0.174kg硝酸(85Vo，86.6%硝酸根含量，0.09當(dāng)量)，之后顯示反應(yīng)在1.7%米諾環(huán)素原料處到達(dá)平臺(tái)。在-20至10t:下，將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至4.2份(106kg)甲醇中。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至10X:，原樣用于還原反應(yīng)。比較例2該比較例描述了氫化反應(yīng)，其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。將104kg米諾環(huán)素.HCl(效價(jià)卯.3%)倒入在300加侖容器中的0至10r的4.8份(502kg)疏酸66°Be中，攪拌以除去HC1。于0至6'C和100rpm歷經(jīng)3小時(shí)加入15.2kg發(fā)煙硝酸(100.4%,1.25當(dāng)量)由于HPLC測試顯示殘余>1%的米諾環(huán)素，加入另外的0.69kg發(fā)煙硝酸(100.4%，0.06當(dāng)量)，之后米諾環(huán)素<1%。在0至36'C下，將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至21.5份IPA/3.3份庚烷的溶液中。過濾漿狀液(過濾時(shí)間冗長)，用IPA/庚烷4:1洗滌、在NMT上于40"C干燥至NMT的LOD為6%，生成140kg硫酸鹽(95%粗產(chǎn)率)，供還原反應(yīng)使用。實(shí)施例4該實(shí)施例描述了氫化反應(yīng)，其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。將104kg米諾環(huán)素.HCl(效價(jià)90%)倒入5至15"C的7.3份(763kg)硫酸66°Be中，攪拌以除去HC1。于5至15C和120rpm歷經(jīng)1小時(shí)加入14.9kg發(fā)煙硝酸(100.4%，1.25當(dāng)量)。由于HPLC測試顯示殘余>1%的米諾環(huán)素，加入另外的0.69kg發(fā)煙硝酸(100.4%,0.06當(dāng)量)，之后顯示米諾環(huán)素<1%。在-10至-20'C下，將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至4.2份(440kg)甲醇中。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至iox:，原樣用于還原反應(yīng)。比較例3該比較例描述了氫化反應(yīng)，其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。溶劑/反應(yīng)試劑的比例是相對于硝化反應(yīng)之前的米諾環(huán)素初始加入量而言的。歷經(jīng)1小時(shí)將比較例4的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物淬滅入2240kg(21.5份)異丙醇和342kg(3.3份)庚烷中，同時(shí)維持批料溫度在0至36'C。將所得漿狀液在30至36r:下攪拌2小時(shí)，然后冷卻，并在19至25X:下攪拌1小時(shí)。過濾一半漿狀液，用3x205kgIPA/庚烷(4:1)v/v洗滌，在NMT上于40X:干燥至NMT的LOD為6%。過濾和干燥花費(fèi)16天(其中7天在預(yù)定的工廠停工期間濕濾餅在氮?dú)庀麻e置)，生成58kg硫酸鹽。將另一半漿狀液滾筒轉(zhuǎn)動(dòng)(drummed)并冷凍以待進(jìn)行過濾。冷凍12天，然后倒回容器中，于0至6'C攪拌2天，然后調(diào)節(jié)至19至25'C,過濾，用3x205kgIPA/庚烷(4:1)v/v洗滌，在NMT上于40。C干燥至NMT的LOD為6%。過濾和干燥花費(fèi)6天，生成82kg硫酸鹽。于19至25n將亞-批料(lot)的9-硝基米諾環(huán)素石充酸鹽溶于672kg(6.5份)甲醇和8.4kg(0.08份)注射用水(USP)中，采用70psig氫氣和2.74kg(0.026份)披鉭炭(濕10。/。(w/w))還原為9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽。氫化反應(yīng)花費(fèi)10.5小時(shí)，導(dǎo)致沒有可檢測的原料。過濾9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物以除去催化劑，歷經(jīng)1小時(shí)淬滅入0至27t:的1660kg(16份)IPA/710(6.8份)庚烷的溶液中。將所得混合物調(diào)節(jié)至19至25r;并攪拌1小時(shí)。將9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽漿狀液在Nutsche濾器上過濾，用2xl62kg(每次1.5份)IPA/庚烷(4:l)v/v洗滌，在40匸下干燥至LOD低于4。/。。過濾、洗滌和干燥花費(fèi)10天，得到94.0kg9-M米諾環(huán)素硫酸鹽。過濾后，在母液中，見察到固體。過濾這些固體，用113kgIPA/庚烷(4:1)v/v洗滌，在40X:下干燥至LOD低于4。/。?；厥?4.1kg。保留作為分離的批料(lot)。由米諾環(huán)素得到9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽的總粗產(chǎn)率為84°/。。將94.0kg"第一批收獲物"干燥的9-#^米諾環(huán)素硫酸鹽和0.084kg(0.0008份)亞硫酸鈉溶于538kg(5.17份)注射用水(USP)中，冷卻至0至6。C。需要0kg鹽酸20。Be以使9-M米諾環(huán)素硫酸鹽的pH為l.l士O.l，因?yàn)槌跏紁H為1.16。將48.3kg(0.46份)鹽^應(yīng)試劑加入9-氨基米諾環(huán)素溶液中，形成9-氨基米諾環(huán)素HC1。將56kg(0.54份)氫氧化銨、28%和4.0kg(0.039份)鹽酸反應(yīng)試劑加入溶液中，獲得批料pH為4.0±0.2。然后將批料在0至6'C下攪拌90分鐘，同時(shí)確保pH維持在4.0±0.2。最終pH讀數(shù)為4.05pH單位。將批料在Nutsche濾器上過濾，用2x33kg(每次0.3份)預(yù)冷至2-8C的注射用水(pH調(diào)至4.0)洗滌，然后通過2x26.1kg(0.25份)丙酮(預(yù)冷至2-8匸)洗滌，在NMT上于40。C干燥至NMT的水份含量為7.0%。分離43.2kg9-^J^米諾環(huán)素HC1，由米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為40%。類似于前四個(gè)段落所述的方法，采用成比例量的反應(yīng)試劑，進(jìn)4于24.1kg"第二批收獲物"干燥的9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽通過鹽變化的加工。回收另外的9.9kg9-氨基米諾環(huán)素HCl，代表9.2%的額外增加產(chǎn)率。包括兩批收獲物的總批料產(chǎn)率為53.1%。實(shí)施例5該實(shí)施例描述了氫化反應(yīng)，其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。溶劑/反應(yīng)試劑的比例是相對于硝化反應(yīng)之前的米諾環(huán)素初始加入量而言的。歷經(jīng)90分鐘將來自實(shí)施例7的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至440kg(4.2份)甲醇中，同時(shí)維持批料溫度在-20至-10。C、攪拌速率為130RPM。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至10°C，采用50psig氫氣和52kg(0.5份)披鈀炭(濕10。/。(w/w))還原為9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽。氳化反應(yīng)花費(fèi)5小時(shí)，導(dǎo)致沒有可測得的原料。將9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物過濾以除去催化劑，歷經(jīng)30分鐘淬滅入17-23n的1241kg(12份)IPA/537kg(5.2份)庚烷溶液中。然后將所得混合物冷卻至-18至-12X:并攪拌1小時(shí)。將所得9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽漿狀液分兩批在Nutsche濾器上過濾，用總共3.6份預(yù)冷至0-6'C的IPA/庚烷(2:1)v/v和506kg(4.9份)冷庚烷洗滌。兩批的過濾和洗滌花費(fèi)99小時(shí)(由于濾器尺寸的限制分兩批過濾)。將9-氛基米諾環(huán)素石克酸鹽濕濾餅溶于150kg(1.4份)0-6。C的注射用水(USP)中，分離出上層有機(jī)層作為廢液。將25.7kg(0.3份)鹽酸20°Be加入0-6。C的9-氨基米諾環(huán)素石克酸鹽溶液中，以供轉(zhuǎn)化為9-氨基米諾環(huán)素HC1。將28%氫氧化銨加入反應(yīng)混合物中，獲得批料的pH為4.0±0.2;這花費(fèi)49.5kg(0.48份)。將0.15kg亞硫酸鈉(0.0014份)加入反應(yīng)混合物中。將批料用5g9-氨基米諾環(huán)素HCl進(jìn)行接種，攪拌3小時(shí)，同時(shí)釆用28%氫氧化銨(花費(fèi)0.05份)維持pH為4.0±0.2。將批料在Nutsche濾器上過濾，用l份預(yù)冷至2-8'C的注射用水(pH調(diào)節(jié)至4.0)洗滌，然后用0.2份異丙醇(預(yù)冷至2-8X:)洗滌，在NMT上于50t:干燥至NMT的LOD為10.0%和NMT的水份含量為8.0%。分離出63.1kg9-t^米諾環(huán)素HC1，由米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為59%。下表4列出了比較數(shù)據(jù)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>1循環(huán)時(shí)間是由米諾環(huán)素.HC1至9-氨基米諾環(huán)素HC1。2第一批和第二批收獲物的組合產(chǎn)率。3不包括在加工期間的7天工廠停工，包括加工第二批收獲物的時(shí)間。表4顯示，在未分離情況下的反應(yīng)混合物的氫化產(chǎn)生了具有較低量雜質(zhì)和cv差向異構(gòu)體的產(chǎn)物。?；疕PLC分析在下述條件下進(jìn)行:<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>實(shí)施例1N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽在45-50"C下，向叔丁胺(1.57L)和甲苯(1.35L)的混合物中加入溴乙酸叔丁酯(420mL)。將混合物在50-60X:下攪拌1小時(shí)，溫度歷經(jīng)1小時(shí)增加至75t:。在75X:下2小時(shí)后，將混合物冷卻至-12土3X:，靜置1小時(shí)。過濾收集固體，通過蒸餾(30-40'C，25-35mmHg)濃縮濾液至體積為825mL。將所得濃縮液冷卻至20-25X:，加入6NHC1(1.45kg)。3小時(shí)后，使相分離，水相通過蒸餾(30-40"C，25-35mmHg)濃縮至體積為590mL。加入異丙醇(2.4L),混合物通過蒸餾(15-20"C，10-20mmHg)濃縮至體積為990mL。將所得漿狀液歷經(jīng)30分鐘冷卻至-12±靜置l小時(shí)。過濾收集固體，用i國PrOH洗滌，千燥24小時(shí)(45土3X:，10mmHg),得到(407.9g，86%)所需產(chǎn)物。實(shí)施例2N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽歷經(jīng)20分鐘向經(jīng)過碾磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(250.0g)、甲苯(1.14L)、DMF(7.1g)中加入亞硫酰氯(143mL)。使混合物溫度為80-85C并在攪拌下加熱3小時(shí)。冷卻至20X:后，在N2下過濾收集固體，用曱苯洗滌，干燥16小時(shí)(40匸，10mmHg),得到所需產(chǎn)物(260.4g，93.8%)。HPLC面積％的純度98.12%.實(shí)施例3替加環(huán)素歷經(jīng)15分鐘在攪拌下向9-氨基米諾環(huán)素.11<:1(140.0g)和冷(0-4。C)水(840mL)的混合物中加入N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(154.0g)。將混合物在0-4。C下攪拌1-3小時(shí)。加入氫氧化銨(126g，30。/。)使pH為7.2,同時(shí)維持溫度為0-10。C。加入甲醇(930mL)和CH2C12(840mL),混合物在20-25C下攪拌1小時(shí)，通過加入氫氧化銨(13.5g，30%)維持pH為7.2。使相分離，將固體與有機(jī)層合并。用CH2C12(lx840mL，3x420mL)萃取水層，混合物的pH在每次萃取期間調(diào)節(jié)至7.2。向合并的有機(jī)層中加入甲醇(200mL),得到溶液。用水洗滌溶液(2xl40mL),然后在攪拌下經(jīng)硫酸鈉(140g)干燥30分鐘。過濾混合物，通過蒸餾(20'C，15-25mmHg)濃縮濾液至體積為425mL。向該混合物中加入CH2Ch(1.4L),重復(fù)蒸餾兩次。將所得混懸液冷卻至0-2n，攪拌l小時(shí)。過濾收集固體，用0-5匸的CH2C12(2xl50mL)洗滌，干燥24小時(shí)(65-70X:，10mmHg)，得到所需產(chǎn)物(120.0g，75%)。HPLC面積％的純度98.9%和04差向異構(gòu)體0.12%。實(shí)施例3A替加環(huán)素歷經(jīng)50分鐘在攪拌下向9-氨基米諾環(huán)素.HCl(100.0g)和冷(0-4。C)水(600mL)的混合物中加入N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(110.0g)。將混合物在0-4匸下攪拌1.5小時(shí)。加入氫氧化銨(112g，28%)使pH為7.2，同時(shí)維持溫度為0-5X:。加入二氯甲烷(600ml)，然后加入甲醇(440mL)，混合物在0-5°C下攪拌30分鐘，同時(shí)通過加入氫氧化銨(10.0g，28%)維持pH為7.2。歷經(jīng)15分鐘將混合物加熱至20-25匸。加入曱醇(244ml)，使相分離。用CH2C12(lx600mL，3x300mL)萃取水層，混合物的PH在每次萃取期間調(diào)節(jié)至7.2。向合并的有機(jī)層中加入甲醇(144mL),得到溶液。用水洗滌溶液(2x100mL),然后在攪拌下經(jīng)硫酸鈉(100g)干燥30分鐘。過濾混合物，通過蒸餾(20C，80-120mmHg)濃縮濾液至體積為400mL。向混合物中加入CH2C12(l.OL)，重復(fù)蒸餾量次。將所得混懸液冷卻至0-2'C,攪拌1小時(shí)。過濾收集固體，用0-5。C的CH2C12(2xll0mL)洗滌，干燥(65-70'C,于20mmHg進(jìn)行18小時(shí)，然后于3-5mmHg進(jìn)行16小時(shí))，得到所需產(chǎn)物(82.4g，71.7%)。HPLC面積％的純度98.5%和C-4差向異構(gòu)體0.28%。實(shí)施例4N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽將叔丁胺(88g)溶于300mL曱苯中。將混合物加熱至45-50。C，歷經(jīng)1小時(shí)加入117.5g溴乙酸叔丁酯，同時(shí)維持溫度50-60。C。將反應(yīng)物于75t:加熱2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至12-15'C，攪拌1小時(shí)。濾出固體，用冷曱苯洗滌。棄去固體，其為叔丁胺氫溴酸鹽。將濾液冷卻至10-12*C，通入HC1氣體0.5小時(shí)。將混合物在10-12n下攪拌3小時(shí)，然后過濾收集產(chǎn)物，用冷甲苯洗滌。將產(chǎn)物在真空下于40-50X:干燥，獲得107gN-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽。MS:m/z187(M+)將來自如上述制備的材料的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(7g)加入35mL甲苯中。加入亞硫酰氯(11.6mL)，將漿狀液在75-80X:下加熱1小時(shí)。將混懸液冷卻至20匸，過濾收集固體，用2xl5mL甲苯洗滌。將所得固體在真空中于40。C干燥，獲得4.4g(產(chǎn)率65。/。)產(chǎn)物，保護(hù)其免于與潮濕接觸，并立即用于下一步驟。實(shí)施例5替加環(huán)素在0-5。C下，將9-氨基米諾環(huán)素(10.00g)分批加入60mL水中。分批加入叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(10.98g),保持溫度為0-5X:。攪拌40-60分鐘后，向反應(yīng)混合物中滴加30%氫氧化銨以調(diào)節(jié)pH至7.2，同時(shí)保持溫度在0-5X:。向溶液中加入83mL甲醇，然后加入60mL二氯甲烷。攪拌15分鐘后，使相分離。7jC相用4x40mL二氯甲烷萃取，在每次萃取之前調(diào)節(jié)pH至7.2。向合并的有機(jī)物中加入10mL甲醇，溶液經(jīng)硫酸鈉干燥。過濾后，將溶液濃縮，得到混懸液(凈重51g)。將混懸液在5-10。C下攪拌1小時(shí)，然后過濾。用2x10mL冷二氯甲烷洗滌固體，然后干燥,獲得8.80g產(chǎn)物(產(chǎn)率76.8%)。HPLC面積％的純度98.4%和C-4差向異構(gòu)體0.1%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實(shí)施例6N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽將叔丁胺(L5kg)溶于1.35L曱苯中。將混合物加熱至45-50。C,歷經(jīng)l小時(shí)加入548g溴乙酸叔丁酯，同時(shí)維持溫度為50-60。C。將混合物在75。C下加熱3小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至12-15°C,攪拌1小時(shí)。濾出固體,用冷甲苯洗滌。棄去固體，其為叔丁胺氫溴酸鹽。通過蒸餾除去溶劑將濾液濃縮至800mL,將濃縮物冷卻至25'C，向混合物中加入900mL6NHC1。于20-25C攪拌3小時(shí)后，使相分離。棄去有機(jī)相，水相濃縮至體積為600mL。向濃縮物中加入異丙醇(2.4L)。將漿狀液冷卻至-12至-9C，并維持0.5小時(shí)。過濾收集產(chǎn)物，用冷異丙醇洗滌，然后在真空和40-50匸下干燥，獲得408g固體。通過NMR測定純度^5。/。。MS:m/z187(M+)。將來自如上述制備的材料的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(250g)加入1.3L甲苯和7.5mLDMF中。加入亞硫酰氯(143mL)，將漿狀液在80-85^下加熱3-4小時(shí)。將混懸液冷卻至20t;，過濾收集固體，用2x250mL甲苯洗滌。在真空和40X:下干燥固體，獲得260g(產(chǎn)率82%)的產(chǎn)物。HPLC面積。/。的純度98.2%實(shí)施例7替加環(huán)素在0-4"C下，將9-氨基米諾環(huán)素.HCl(140.0g)分批加入840mL水中。歷經(jīng)15分鐘在充分?jǐn)嚢柘录尤?^丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(154g)，同時(shí)維持溫度為0-4t:。將溶劑攪拌l-3小時(shí)。用30%氫氧化銨將混合物的pH調(diào)節(jié)至7.2±0.2,同時(shí)維持溫度為0-10X:。將甲醇(930mL)和840mL二氯甲烷加入溶液中，其在20-25"C下攪拌l小時(shí)。分離相。7jC相用3x600mL二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，千燥，濃縮至體積為約500mL。將所得混懸液于0-2'C冷卻1小時(shí)。過濾并干燥固體，獲得120g產(chǎn)物(產(chǎn)率75。/。)。HPLC面積%的純度98%，C-4差向異構(gòu)體0.1。/。。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實(shí)施例8吡咯烷基乙酸鹽酸鹽將吡咯烷(14,2g)溶于40mL甲基叔丁基醚中。將溶液冷卻至0至-5。C。在攪拌下滴加溴乙酸千基酯(22.9g)。將濃稠白色漿狀液在0-5。C下攪拌0.5小時(shí)。過濾除去固體，用甲基^又丁基醚洗滌。將濾液濃縮，獲得21.3g乙酸吡咯烷基節(jié)基酯。將節(jié)基酯(21.0g)溶于200mL甲醇中，加入4.0g10%Pd/C催化劑(濕50。/。)。將溶液在40psi下氬化6小時(shí)。濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮濾液，獲得11.8g吡咯烷基乙酸，為無色油。使15.8g吡咯烷基乙酸在15mL甲基-叔丁基醚中形成漿狀液。加入乙腈(15mL)，將混懸液冷卻至0-5匸。攪拌下加入乙醚HCl(120mL，1.0M)。過濾所得白色沉淀，用甲基叔丁基醚洗滌，干燥，獲得15g吡咯烷基乙酸鹽酸鹽。GC/MS面積%的純度98%。MS:m/z129(M+)。實(shí)施例94S"4a,12aot)l-4,7-雙(二曱基氨基)-94f吡咯烷基)乙?；鵯氨基l誦l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氬國3,10,12,12a畫四羥基國l,ll-二氧代誦2國并四苯曙甲酰胺使吡咯烷基乙酸(7.7g)混懸于7mL乙腈中。冷卻至0-5"C后，攪拌下緩慢加入5.3mL亞硫酰氯。將混懸液加熱至55C。將深色溶液于55'C保持0.5小時(shí)，然后冷卻至室溫，得到吡咯烷基乙酰氯鹽酸鹽。將如上文實(shí)施例4所述制備的9-氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽(5.0g)混懸于5.0mL水中。將混懸液冷卻至-15。C。向混懸液中滴加如上文所述制備的吡咯烷基乙酰氯鹽酸鹽的溶液，保持溫度在22'C以下。將深色反應(yīng)混合物在22-25。C下攪拌3小時(shí)。向混合物中加入水(2mL)，用30%氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至6.5士0,2。用6x15mLCH2Cl2萃取溶液。合并有機(jī)萃取物，在40'C下濃縮。向濃縮物中加入無水乙醇(10mL)，將漿狀液在5-7X:下攪拌l小時(shí)。過濾固體并在真空和40X:下干燥，得到3.5g產(chǎn)物。HPLC面積％的純度98.7%,C-4差向異構(gòu)體0.4%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實(shí)施例10替加環(huán)素在10-15。C下，將9-^J^米諾環(huán)素(4.0g)分批加入10mL乙腈和5mLDMPU中。分批加入4又丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(4.4g)，保持溫度為10-15。C。攪拌2小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中緩慢加入10mLMeOH和17mL水，保持溫度為10-17。C。將氫氧化銨(30%)滴加至反應(yīng)混合物中以調(diào)節(jié)pH至7.2，保持溫度為5-8n。向溶液中加入15mL二氯甲烷。攪拌15分鐘后，使相分離。用2x20mL二氯甲烷萃取7jC相，在每次萃取之前調(diào)節(jié)pH至7.2。向合并的有機(jī)物中加入700mgNoritCA-1(活性碳)和10g硫酸鈉，然后過濾混合物。用2x20mL二氯甲烷洗滌濾餅。濃縮溶液，將所得混懸液在5-8'C下攪拌16小時(shí)。過濾后，用2xl0mL冷二氯甲烷洗滌固體，然后干燥，獲得2,3g產(chǎn)物(產(chǎn)率50。/。)。HPLC面積。/o的純度95.2%，<:-4差向異構(gòu)體0.5%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實(shí)施例11-19替加環(huán)素實(shí)施例11-19按照實(shí)施例10的操作，溶劑修改如下所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>通過HPLC面積評(píng)估的純度。sm=原料9-氨基米諾環(huán)素。反應(yīng)混合物用異丙醇-乙酸乙酯淬滅，然后在水和CH2Cl2之間分配。濃縮有機(jī)相，然后在分離產(chǎn)物前用曱苯稀釋。實(shí)施例20N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽向裝配有機(jī)械攪拌器、熱電偶、具有連接至30%—1.)堿洗滌器的氮?dú)夤芫€的冷凝器和250mL壓力均衡添加漏斗的5升多頸燒瓶中加入經(jīng)過研磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(436g，2.60moles,d(0.5)=103nm)、甲苯(l,958g，2，263mL)和N，N畫二甲基曱酰胺(13.6g，14.4mL，0.19moles)。在20國23X:下，歷經(jīng)33分鐘使用250mL添加漏斗將亞硫酰氯(405g，248mL，3.40moles)加入灰白色漿狀液中。歷經(jīng)1小時(shí)將漿狀液緩慢加熱至80匸，然后于80X:攪拌3小時(shí)。3小時(shí)后，通過薄層色鐠法測得反應(yīng)完全(<2%原料)。歷經(jīng)32分鐘將橘黃色混懸液冷卻至，然后在15-20。C下攪拌32分鐘。通過釆用42號(hào)Whatman濾紙的15cm布氏漏斗真空過濾收集固體。在20-25°C用三份甲苯(每次洗滌用272g,314mL)洗滌濾餅。將濕濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下抽濾干燥20分鐘。然后在烘箱中以23mmHg真空和38X:下將產(chǎn)物干燥21.2小時(shí)，產(chǎn)生干燥失重為1.23%。所得叔丁胺乙酰氯HCl的重量-462g,GC強(qiáng)度=91.0%，IR鑒定-陽性。由叔丁胺乙酸11<:1開始的產(chǎn)率=96%。對產(chǎn)物和原料強(qiáng)度進(jìn)行校正的產(chǎn)率=87%。實(shí)施例21N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽向裝配有機(jī)械攪拌器、熱電偶、具有連接至25。/。(wt)堿洗滌器的氮?dú)夤芫€的冷凝器和250mL壓力均衡添加漏斗的5升多頸燒瓶中加入經(jīng)過研磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(450g，2.68moles,d(0.5)=664jim)、曱苯(2，863g，3，310mL)和N,N-二甲基甲酰胺(15g，15mL,0.21moles)。在19-22。C下，歷經(jīng)19分鐘使用250mL添加漏斗將亞硫酰氯(422g，259mL，3.54moles)加入灰白色漿狀液中。歷經(jīng)7.1小時(shí)將漿狀液緩慢加熱至79X:，然后于79-82。C攪拌44小時(shí)。于3小時(shí)通過薄層色鐠法(TLC)檢查反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)未完全。加入另外的26mL(42g，0.35moles)亞硫酰氯?？偣?7小時(shí)后，通過TLC測得反應(yīng)仍未完全，加入另外的26mL(42g，0.35moles)亞硫酰氯。總共44小時(shí)后，在79-82'C下通過TLC測得反應(yīng)完全(<4%的起始叔丁胺乙酸HC1)。歷經(jīng)17分鐘將深棕色混懸液冷卻至25X:，然后在21-25tl攪拌37分鐘。通過2升粗玻璃燒結(jié)漏斗真空過濾收集固體。在20-25"C用六份甲苯(每次洗滌用282g，325mL)洗滌濾餅。將濕濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下抽濾干燥16分鐘。然后在烘箱中以23mmHg真空和38t:下將產(chǎn)物干燥26.1小時(shí)，產(chǎn)生干燥失重為0.75%。所得叔丁胺乙酰氯HCl的重量-395g,GC強(qiáng)度=89.5%,IR鑒定-陽性。由叔丁胺乙酸HCl開始的產(chǎn)率-79%。對產(chǎn)物和原料強(qiáng)度進(jìn)行校正的產(chǎn)率=71%。實(shí)施例22替加環(huán)素在0至6'C下，將9_#^米諾環(huán)素HC1(".Okg)溶于2幼kg(6.0份)注射用水中。將N-叔丁基甘氨酰氯HC1(47.3kg，1.1份，3.01當(dāng)量)緩慢加入批料溶液中，同時(shí)維持批料溫度為0至6"C。將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)，測定含有0.2%原料(不需要另外的N-叔丁基甘氨酰氯HC1)。然后采用32kg(0.7份)28%氫氧化銨和2kg試劑鹽酸(回調(diào)過量狀況)使GAR-936反應(yīng)混合物的pH為7.2±0.2。初始pH等于0.42且最終pH等于7.34。在0至7。C將二氯甲烷(342kg，8份)和148kg(3.4份)甲醇加入反應(yīng)混合物中。由于pH為7.09，因此不需要調(diào)節(jié)。將批料溫?zé)嶂?9-25匸。加入曱醇(83kg，1.9份)，分離下部有機(jī)相。然后用lx342kg(8份)和3xl72kg(4份)二氯甲烷將保留在7K相中的產(chǎn)物萃取至有才M目中，同時(shí)用28%氫氧化銨維持pH為7.2±0.2。向所得二氯曱烷/甲醇溶液中加入甲醇(49kg，1.14份)，用2x43kg(1份)注射用水洗滌，然后用43kg(l份)硫酸鈉干燥。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇，在第二次和第三次蒸餾之前加入568kg(13.2份)二氯曱烷。母液中曱醇的殘余水平為0.21%。過濾批料，用2x60kg(1.4份)預(yù)冷(O至6'C)的二氯甲烷洗滌。所得粗物質(zhì)未進(jìn)行干燥，而是以濕濾餅(72,5kg，由干燥失重計(jì)算的干重為38.2kg)形式分離，由9-氮基米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為77%。濕濾餅分析結(jié)果米諾環(huán)素=1.26%;最大單項(xiàng)雜質(zhì)=0.37%，C-4差向異構(gòu)體=0.50%。實(shí)施例23替加環(huán)素在0至6"C下，將9_#^米諾環(huán)素HC1(M.0kg)溶于2幼kg(6.0份)注射用水中。將N-叔丁基甘氨酰氯HC1(67.1kg，1.1份，3.01當(dāng)量)緩慢加入批料溶液中，同時(shí)維持批料溫度為0至6*C。將反應(yīng)混合物攪拌3.5小時(shí)，測定含有0.13V。原料(不需要另外的N-叔丁基甘氨酰氯HC1)。然后采用45kg(0.7份)28%氫氧化銨使反應(yīng)混合物的pH為7.2±0.2。初始pH等于0.82且最終pH等于7.07。在0至6。C將二氯甲烷(485kg，8份)和210kg(3.4份)甲醇加入反應(yīng)混合物中。由于pH仍然在范圍內(nèi)(7.04)，因此不需要調(diào)節(jié)。將批料溫?zé)嶂?9-25X:。加入甲醇(118kg，1.9份)，分離下部有機(jī)相。然后用lx485kg(8份)和3x244kg(4份)二氯甲烷將保留在7jC相中的產(chǎn)物萃取至有機(jī)相中，同時(shí)用28%氫氧化銨維持pH為7.2±0.2。向所得二氯甲烷/甲醇溶液中加入甲醇(70kg，1.14份)，然后用2x61kg(l份)注射用水洗滌，然后用61kg(1份)硫酸鈉干燥。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇，在第二次和第三次蒸餾之前加入805kg(13.2份)二氯甲烷。母液中曱醇的殘余水平為0.05%。過濾批料，用2x85kg(1.4份)預(yù)冷(0至6t:)的二氯甲烷洗滌。所得粗物質(zhì)未進(jìn)行干燥，而是以濕濾餅(103kg，由干燥失重計(jì)算的干重為53.4kg)形式分離，由9-氨基米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為76%。比較例24替加環(huán)素單鹽酸鹽9-義乙瘋,差|諾豕#將二氯曱烷(1.3L)在裝配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)和1升添加漏斗的3升圓底燒瓶中冷卻至0-2'C。攪拌下分批加入重結(jié)晶的9-氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽(400g)。歷經(jīng)10分鐘加入三乙胺(428mL),同時(shí)保持溫度在0-2。C之間。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，然后冷卻至-22。C。然后以使得溫度上升不超過5。C的速率加入280g氯乙酸酐在540mL二氯甲烷中的溶液。使用另外的132mL二氯甲烷沖洗添加漏斗。在添加酸酐開始后15分鐘，通過HPLC分析反應(yīng)混合物。當(dāng)原料的存在量低于2%時(shí)，用680mL0.05M碳酸氫鈉溶液使反應(yīng)物淬滅。攪拌混合物15分鐘，然后轉(zhuǎn)移至5升分液漏斗中。使相分離。分離二氯甲烷相，用另外的680mL0.05M碳酸氬鈉溶液洗滌。將經(jīng)洗滌的二氯甲烷溶液滴加至17升正庚烷和異丙醇的10:1混合物(15.4升正庚烷和1,54升異丙醇)中。將漿狀液攪拌5分鐘，然后靜置10分鐘。傾析上層液，經(jīng)粗多孔玻璃燒結(jié)漏斗過濾沉淀物。用2L10:1正庚烷:異丙醇洗滌固體。將固體在真空和40X:下干燥，得到550g粗產(chǎn)物。在裝配有攪拌器和溫度計(jì)的1升雙頸圓底燒瓶中，于室溫(25-28。C)在有效的攪拌下將9-氯乙酰氨基米諾環(huán)素粗品(100g)緩慢加入500mL叔丁胺中。加入碘化鈉(10g),將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)殘余<2%的原料時(shí)，加入100mL曱醇，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40X:除去溶劑。向殘余物中加入420mL曱醇和680mL水。將溶液冷卻至0-2匸，用濃HC1(91ml)調(diào)節(jié)至pH7.2，得到體積為1300mL的反應(yīng)混合物。用水稀釋為6.5L，用濃HCl(12mL)調(diào)節(jié)至pH至4.0-4.2。向溶液中加入經(jīng)洗滌的Amberchrom(CG161cd)(860g),將混合物攪拌30分鐘，調(diào)節(jié)pH至4.0-4.2。過濾除去樹脂，通過HPLC分析廢水溶液中的產(chǎn)物，于4-8'C儲(chǔ)存。將樹脂在4.8L的20%甲醇在水中的溶液(化甲醇+16L水)中形成漿狀液。攪拌混懸液15分鐘，調(diào)節(jié)pH4.0-4.2。過濾除去樹脂，分析濾液中的產(chǎn)物。用4.8L的20%曱醇的水溶液重復(fù)樹脂萃取3次。合并所有的樹脂萃取物和來自上述的廢水溶液，用30%氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。用6x2.8L二氯曱烷萃取水溶液，在萃取之間調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。將合并的二氯甲烷萃取物經(jīng)250g無水硫酸鈉過濾，濃縮至500mL，冷卻至0-3。C。在產(chǎn)物結(jié)晶后，將漿狀液于0-3。C攪拌l小時(shí)。過濾固體，用2x50mL冷二氯甲烷洗滌，在40n和真空下干燥，獲得26g固體。比較例24C:替加環(huán)素單鹽酸鹽在攪拌下，將替加環(huán)素(49g，0.084moles)分批溶于500mL注射用水中。經(jīng)中型多孔漏斗過濾溶液，用420mL注射用水洗滌。將溶液冷卻至0-2。C，滴加5.6mL濃HC1，同時(shí)維持溫度在0-2。C之間。初始pH為8.0,最終pH為6.0。通過將樣品于-30t;冷凍和于-15^C冷凍干燥來冷凍干燥溶液。將儲(chǔ)存溫度升高至21匸達(dá)2小時(shí)。研磨所得固體(49.6g)，于4-5。C儲(chǔ)存。元素分析C(理論值52.92%，實(shí)測值51.75%);H(理論值6.73%,實(shí)測值6.75%);N(理論值10.65%，實(shí)測值10.32%);Cl(理論值5.4%,實(shí)測值5.5%)。比較例25替加環(huán)素單鹽酸鹽化較辦25J.'9-歲乙^4差|諾環(huán)#將二氯曱烷(325ml)冷卻至-5至0°C，歷經(jīng)10分鐘分批加入9-氬基米諾環(huán)素鹽酸鹽(100g)。加入三乙胺(77.6g),同時(shí)保持溫度為-10至-5'C。通過于20-25。C攪拌制得97。/。氯乙酸酐(70g)在二氯甲烷(133mL)中的溶液，并在45分鐘內(nèi)加入反應(yīng)混合物中，同時(shí)維持混合物溫度為-10至-2匸。用31mL二氯曱烷洗滌含有氯乙酸酐溶液的燒瓶，將洗滌液加入反應(yīng)混合物中。攪拌30分鐘后，通過HPLC分析反應(yīng)物以確定反應(yīng)是否完全。歷經(jīng)30分鐘加入碳酸氫鈉水溶液(185mL，0.05M),同時(shí)維持反應(yīng)混合物溫度為0至5X:。攪拌10分鐘后，使各層分離，將硫酸鈉(15g)加入有機(jī)層中。將混合物于0至5X:攪拌15分鐘，過濾。用二氯甲烷(2x38mL)沖洗所得濾餅，歷經(jīng)20分鐘將合并的濾液轉(zhuǎn)移至4.19L10:l庚烷:異丙醇中，然后用15mL二氯甲烷沖洗濾液燒瓶。將所得混懸液于20至25'C攪拌15分鐘，然后過濾。濾餅用680mL10:l庚烷:異丙醇沖洗，于37至40。C(5-10mmHg)干燥24小時(shí)。HPLC面積7。的純度78.1。在裝配有攪拌器、溫度計(jì)和冷凝器的2升多頸圓底燒瓶中，在劇烈攪拌下于0-10r:將9-氯乙酰氨基米諾環(huán)素(100g)加入483mL叔丁胺中。加入多典化鈉(16g)，于33-38C攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)。反應(yīng)混合物通過HPLC分析反應(yīng)完全，然后冷卻至5-10。C。歷經(jīng)10分鐘加入甲醇(300mL),然后通過蒸餾(10-17"C，68mmHg)濃縮反應(yīng)溶液至350mL。將第二部分甲醇(600mL)加入濃縮物中，通過蒸餾濃縮混合物至350mL。加入甲醇(46mL)和冷水(565mL),同時(shí)維持反應(yīng)溫度低于30X:。將溶液冷卻至0-5C,用100mLHC120°Be調(diào)節(jié)pH至4.0。將溶液轉(zhuǎn)移至5升多頸燒瓶中，用500mL水沖洗，然后用1升水稀釋。于0-5C攪拌1小時(shí)后，加入經(jīng)洗滌的Amberchrom(CG161)樹脂3，將所得混懸液于20-25X:攪拌30分鐘。過濾混懸液，將所得濕濾餅加入340mL5:l水:曱醇溶液中。將濾液放置一旁。于20-25C攪拌30分鐘后，過濾混懸液，將所得濕濾餅加入第二份340mL5:1水:曱醇溶液中。將該第二份濾液放置一旁。過濾混懸液，將所得濕濾餅加入第三份340mL5:l水:甲醇溶液中。過濾后，將第三份濾液與第一份和第二份濾液合并，冷卻至0-5'C。用llmL28%氫氧化銨將pH調(diào)節(jié)至7.0。將溶液于0-5X:攪拌16小時(shí)，同時(shí)酌情調(diào)節(jié)pH至7.0，于22-25C下攪拌l小時(shí)，同時(shí)酌情調(diào)節(jié)pH至7.0。用二氯甲烷(5x980mL)萃取水溶液，對每次萃取而言調(diào)節(jié)pH至7.0。將合并的有;feM目轉(zhuǎn)移至分液漏斗，分離水層。將有機(jī)層與100g硫酸鈉合并，于20-25t:攪拌l小時(shí)。經(jīng)硅藻土墊過濾混懸液，用250mL二氯甲烷沖洗濾餅。通過蒸餾(-5至5X:，150mmHg)濃縮濾液至150mL，然后于0-5C冷卻l小時(shí)。過濾所得混懸液，用0-5'C的二氯甲烷(2x30mL)洗滌濾餅。將濕濾餅于26-32TC在二氯甲烷(335mL)和甲醇(37mL)中攪拌，直至獲得溶液。經(jīng)硅藻土過濾溶液，用二氯曱烷(2xl5mL)沖洗硅藻土，通過蒸餾(-5至5"C，150mmHg)濃縮至54mL。濃縮操作重復(fù)兩次，首先加入335mL二氯甲烷并減少體積至55-70mL，然后加入254mL二氯甲烷并減少體積至90-105mL。將所得混懸液于0-5t:攪拌l小時(shí)，然后過濾，用-10X:的二氯甲烷(2x25mL)洗滌。將固體于35-40'C干燥16小時(shí)，然后于45-50X:干燥27小時(shí)。HPLC面積。/。的純度97.7。/。，C-4差向異構(gòu)體1.23%。3經(jīng)洗涂的Amberchrom(CG161M)樹脂如下制備將183g過濾的勻化Amberchrom(CG161M)樹脂加入340mL5:1水:甲醇溶液中。于22-25C攪拌l小時(shí)后，過濾混懸液，獲得濕濾餅，將其抽濾干燥。將濕濾餅于20。C在340mL5:17JC:甲醇溶液中攪拌i小時(shí)，然后過濾。再重復(fù)該操作一次，獲得經(jīng)洗滌的樹脂。純化實(shí)施例1替加環(huán)素?cái)嚢杼婕迎h(huán)素粗品(110.0g)與乙酸曱酯(1.65L)的混合物，加熱至30-35n，歷經(jīng)15分鐘加入甲醇(550mL)。于30-35XM呆持后，在硅藻土(36g)上過濾溫?zé)崛芤?，濾餅用乙酸甲酯(2xl06g)洗滌。通過蒸餾(20C，150mmHg)濃縮濾液至550mL。加入乙酸甲酯(1.1L)，通過蒸餾(20。C，150mmHg)將所得混懸液濃縮至550mL。重復(fù)該步驟，然后將濃縮物冷卻至0-4C達(dá)1小時(shí)。過濾收集所得固體，用0-5'C乙酸曱酯(2xl50mL)洗滌。將固體在真空中干燥(65-70'C，10mmHg)100小時(shí)，獲得98.0g(產(chǎn)率89.1%)所需產(chǎn)物。HPLC面積％的純度98.8%和C-4差向異構(gòu)體0.55%。實(shí)施例2替加環(huán)素在0-4。C下，將9-tJ^米諾環(huán)素.HCl(140.0g)分批加入840mL水中。歷經(jīng)15分鐘，在充分?jǐn)嚢柘录尤胧宥』拾滨Ｂ塞}酸鹽(154g),同時(shí)維持溫度為0-4n。將溶液攪拌1-3小時(shí)。用30%氫氧化銨將混合物的pH調(diào)節(jié)至7.2±0.2，同時(shí)維持溫度為0-10。C。將甲醇(930mL)和840mL二氯曱烷加入溶液中，其在20-25'C下攪拌l小時(shí)。使相分離。用3x600mL二氯甲烷萃取水相，合并有機(jī)相，干燥，濃縮至體積為約500mL。將所得混懸液冷卻至0-2。C達(dá)l小時(shí)。過濾固體，干燥，獲得120g產(chǎn)物(產(chǎn)率75。/。)。HPLC面積％的純度98%，C-4差向異構(gòu)體0.1。/。。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實(shí)施例3替加環(huán)素將如實(shí)施例2所述制備的替加環(huán)素(15.00g)加入113mL丙酮和113mL曱醇中。將混懸液在20-25。C下攪拌l小時(shí)，然后冷卻至0-2'C。攪拌l小時(shí)后，過濾混懸液，洗滌，獲得12.55g產(chǎn)物(產(chǎn)率83.7%)。HPLC面積。/。的純度>99%，C-4差向異構(gòu)體0.4%。實(shí)施例4替加環(huán)素將如實(shí)施例2所述制備的替加環(huán)素(105g)加入800mL丙酮和800mL甲醇中。攪拌混懸液，加熱至30-35t:達(dá)15分鐘，然后冷卻至20-25'C。于20-25'C保持1小時(shí)后，將混懸液冷卻至0-4'C并保持1小時(shí)。過濾固體，洗滌，干燥，獲得83g產(chǎn)物(產(chǎn)率79。/。)。HPLC面積。/。的純度>99%，C-4差向異構(gòu)體0.4%。實(shí)施例5替加環(huán)素向裝配有機(jī)械攪拌器和氮?dú)獗Ｗo(hù)的1升多頸燒瓶中加入94.3g濕的替加環(huán)素粗品4、曱醇(305g，386mL)和丙酮(291g,368mL)。將混合物于16-23匸攪拌4小時(shí)。將漿狀液通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾。將濕濾餅于20-25匸用甲醇(87g，110mL)洗滌。將濕濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下抽濾干燥0.1小時(shí)。將濕濾餅(75.38)轉(zhuǎn)回至1升多頸燒瓶中，加入曱醇(233g，295mL)和丙酮(244g，309mL)的溶液。將漿狀液于15-20。C攪拌5.5小時(shí)。通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾漿狀液。濕濾餅于18-24^用甲醇(70g，88mL)洗滌。將濕濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下抽濾干燥0.1小時(shí)。將濕濾餅(59.0g)轉(zhuǎn)回至1升多頸燒瓶中，加入甲醇(195g，247mL)和丙酮(187g，236mL)的溶液。在18-24'C下攪拌漿狀液3小時(shí)。通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾漿狀液。將濕濾餅于20-25'C用甲醇(55g，70mL)洗滌。將濕濾餅在氮?dú)獗Ｗo(hù)下抽濾干燥0.1小時(shí)。對濕濾餅(48.9g)取樣進(jìn)行高壓液相色i瞽法(HPLC)分析(總雜質(zhì)-0.62%,米諾環(huán)素=0.17%,C-4差向異構(gòu)體=0.35%，最大其它單項(xiàng)雜質(zhì)=0.05%)。4替加環(huán)素粗品由從供應(yīng)商Interchem獲得的米諾環(huán)素鹽酸鹽制得將濕濾餅(48.9g)轉(zhuǎn)移至具有真空蒸餾設(shè)備的2升多頸燒瓶中。向濕濾餅中加入預(yù)混合的甲醇(卯g，114mL)和二氯甲烷(l，023g，772mL)溶液中。將漿狀液在15-20'C下攪拌，獲得紅色溶液。將溶液歷經(jīng)0.8小時(shí)在13-17'C和330mmHg真空下蒸餾至160mL，產(chǎn)生橘色漿狀液。向2升燒瓶中加入二氯曱烷(818g，617mL)，將漿狀液于6-13C和817mmHg真空下歷經(jīng)0.7小時(shí)蒸餾至183mL。加入二氯甲烷(635g，479mL)，將漿狀液在6-7"C和817mmHg真空中歷經(jīng)0.6小時(shí)重蒸餾至183mL。將所得橘色漿狀液冷卻至0-5"C，在攪拌下于0-5XM呆持2小時(shí)。通過具有#1Whatman濾紙的7cm布氏漏斗過濾漿狀液。濕濾餅用兩份Ot:的69g(52mL)的二氯甲烷洗滌。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將濕濾餅抽濾干燥5分鐘。對濕濾餅(48.7g)取樣進(jìn)行HPLC分析(總雜質(zhì)=0.49%，米諾環(huán)素=0.12%,04差向異構(gòu)體=0.32%，其它雜質(zhì)=0%)。然后將濕濾餅在25'C和〈10mmHg的真空下干燥57.5小時(shí)至二氯甲烷水平為2.2%,獲得32.3g替加環(huán)素(產(chǎn)率34.2%)。采用已經(jīng)由從供應(yīng)商Hovione和NipponKayaku獲得的米諾環(huán)素.HC1制得的替加環(huán)素粗品進(jìn)行該操作。表1和2給出了采用各米諾環(huán)素.HCl原料來源由上述方法獲得的替加環(huán)素中雜質(zhì)存在量的比較。這些表指明，該方法提供了具有低水平雜質(zhì)的具有良好產(chǎn)率的替加環(huán)素。表l米諾環(huán)素.HCl來源替加環(huán)素加工階段最終替加環(huán)素中的總雜質(zhì)(％)所回收的米諾環(huán)素.HCl(%)最終替加環(huán)素中的C-4差向異構(gòu)體(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>9.4(vs),6.8(m),5.56(s),5.30(S),5.22(s),4.71(s),4.66(s),4.24(m),4.12(m),4.03(m),3.98(s)3.76(m),3.27(m)。7、根據(jù)權(quán)利要求1的式I的3-[2-(二甲基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽的結(jié)晶形態(tài)A,其特征在于，粉末衍射圖包括一個(gè)或多個(gè)以下反射9.38,9.94和10.35(在所有情況下，26±0.5)。8、根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)晶形態(tài)A,其特征在于，粉末衍射圖另外包含一個(gè)或多個(gè)以下反射12.76,15.94,17.54,19.28,28.68和31.99(在所有情況下，26±0.2)。9、根據(jù)權(quán)利要求1的式I的3-[2-(二甲基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽的結(jié)晶形態(tài)A,其特征在于，拉曼光鐠包含一個(gè)或者多個(gè)以下頻帶，在所有情況下以波數(shù)(cm")表示118(vs),188(w),400(w),676(w),2812(w)，2879(m),優(yōu)選一個(gè)或者多個(gè)以下頻帶118(vs)，188(w),292(m),328(m)，359(w),400(w),486(vw)'676(w),901(w),1025(w),1273(m),1351(m),1412(w),1569(vw),1601(m),1690(m),2812(w)，2879(m),2986(m),3060(m)。10、根據(jù)權(quán)利要求1的式I的3-[2-(二甲基氨基)甲基-(環(huán)己-1-基)〗-苯酚馬來酸鹽的結(jié)晶形態(tài)A，其顯示出如圖l所示的X射線衍射圖。11、根據(jù)權(quán)利要求1的式I的3-[2-(二曱基氨基)甲基-(環(huán)己-1-基)]-苯酚馬來酸鹽的結(jié)晶形態(tài)A，其顯示出如圖2所示的拉曼光語。12、一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求6-11中一項(xiàng)或者多項(xiàng)的3-[2-(二曱基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽結(jié)晶形態(tài)A的方法，其特征在于a)用含水蒸汽的惰性氣體處理3-[2-(二曱基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽的粉狀、固體、無定形形式；或者a)在作為載體的溶劑中形成無定形形態(tài)的3-[2-(二甲基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽的懸浮液，并且進(jìn)行攪拌，直至結(jié)晶形態(tài)A得到完全形成為止；或者c)將3-[2-(二甲基氨基)曱基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚馬來酸鹽溶于溶劑中，然后進(jìn)行沉淀；或者d)將3-[2-(二甲基氨基)甲基-(環(huán)己-l-基)]-苯酚和馬來酸相互合并，實(shí)施例6替加環(huán)素將替加環(huán)素粗品的濕濾餅(72.5kg，干重38.2kg5在191kg(5份)丙酮和191kg(5份)甲醇中攪拌并形成漿狀液。然后將漿狀液溫?zé)嶂?0至36X:，立即冷卻至19至25C于19至25n保持2小時(shí)。然后將漿狀液冷卻至0至6"C，于0至6tM呆持1小時(shí)。過濾和用2x34kg(0.9份)丙酮/甲醇(l:l)洗滌后，然后測試濕濾餅中的米諾環(huán)素(0.23%)、9-氮基米諾環(huán)素(0%)、最大單項(xiàng)雜質(zhì)(除了C-4差向異構(gòu)體以外)(0.09%)。C-4差向異構(gòu)體含量為1.12%。根據(jù)分析數(shù)據(jù)，未進(jìn)行額外的重新制漿狀液。向濕濾餅中加入440kg(11.5份)二氯甲烷和39,3kg(l.O份)甲醇，將混合物加熱至30至36C以溶解。將溶液批料經(jīng)過0.3微米減熱原過濾器和0.2微米澄清過濾器過濾。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇，在第二次和第三次蒸餾之前補(bǔ)添二氯甲烷(分別為440kg和339kg)。殘余的甲醇水平為0.3%。將批料冷卻至0至6"€并攪拌1小時(shí)。過濾批料，用2x42.lkg(1.1份)預(yù)冷卻(-13至刁t;)的二氯甲烷洗滌，在不超過60。C的溫度下干燥至干燥失重〈2.5。/。。將物質(zhì)研磨，獲得22.3kg替加環(huán)素(產(chǎn)率58%)。HPLC面積％的純度98.2%,C-4差向異構(gòu)體1.55%，米諾環(huán)素0.1%，9-氨基米諾環(huán)素0%,最大單項(xiàng)其它雜質(zhì)-0.08%。5由干燥失重?cái)?shù)據(jù)計(jì)算的干重實(shí)施例7替加環(huán)素將替加環(huán)素粗品的濕濾餅(103.5kg，干重53.4kg^在191kg(5份)丙酮和191kg(5份)曱醇中攪拌并形成漿狀液。然后將漿狀液溫?zé)嶂?0至36X:，立即冷卻至19至25。C,于19至25'C保持2小時(shí)。然后將漿狀液冷卻至0至6X:，于0至6。C保持1小時(shí)。過濾和用2x34kg(0.9份)丙酮/甲醇(l:l)洗滌后，然后測試濕濾餅中的米諾環(huán)素(0.12%)、9-氨基米諾環(huán)素(0%)、最大單項(xiàng)雜質(zhì)(除了C-4差向異構(gòu)體以外)(0.13%)。C-4差向異構(gòu)體含量為0.37%。根據(jù)分析數(shù)據(jù)，未進(jìn)行額外的重新制漿狀液。向濕濾餅中加入440kg(11.7份)二氯甲烷和55.7kg(l.O份)甲醇，將混合物加熱至30至36'C以溶解。將溶液批料經(jīng)過0.3微米減熱原過濾器和0.2微米澄清過濾器過濾。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇，在第二次和第三次蒸餾之前補(bǔ)添二氯甲烷(分別為624kg和4811^)。殘余的甲醇水平為1.07%,將批料冷卻至0至6'C并攪拌1小時(shí)。過濾批料，用3x59.7kg(1.14分)預(yù)冷卻(-13至-7'C)的二氯甲烷洗滌，在不超過60〔的溫度下干燥至干燥失重<2.5%。將物質(zhì)研磨，獲得31.7kg替加環(huán)素，為第一批收獲物。由結(jié)晶器中的剩余產(chǎn)物組成的第二批收獲物提供了另外的2.5kg。這兩批收獲物代表自替加環(huán)素粗品開始的產(chǎn)率64%。6由干燥失重?cái)?shù)據(jù)計(jì)算的干重雖然本發(fā)明已通過討論本發(fā)明的實(shí)施方案及其非限制性的實(shí)施例進(jìn)行了描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本說明書和權(quán)利要求書后可預(yù)見其它也落入本發(fā)明的預(yù)期范圍內(nèi)的實(shí)施方案和變體，因此本發(fā)明的范圍應(yīng)當(dāng)僅由所附的權(quán)利要求書的范圍來解釋和定義。權(quán)利要求1.制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法，式1其中R1和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(C1-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R1和R2與N一起形成雜環(huán)；R為-NR3R4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(C1-C4)烷基；且n為1-4，該方法包括在反應(yīng)介質(zhì)中使至少一種式4化合物或其鹽，式4與至少一種氨基?；衔锓磻?yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中n為1，Ri為氫，R2為叔丁基，且R3和R4各自為甲基。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中n為1,&和R2與N—起形成吡咯烷基，且R3和R4各自為甲基。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的方法，其中所述的至少一種式4化合物的鹽為卣化鹽。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述的卣化鹽為鹽酸鹽。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的方法，其中所述的反應(yīng)介質(zhì)是水性介質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的方法，其中所述的反應(yīng)介質(zhì)是在沒有堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑。8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑選自極性非質(zhì)子溶劑或其溶劑混合物，條件是存在至少一種堿性極性非質(zhì)子溶劑。9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑為乙腈與N，N，-二甲基亞丙基脲的混合物。10.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑為N，N，-二曱基亞丙基脲。11.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述的至少一種水性溶劑是水。12.根據(jù)權(quán)利要求l至ll任一項(xiàng)的方法，其中與所述至少一種氮基酰基化合物的反應(yīng)在0'C至6C下進(jìn)行。13.制備替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法與至少一種氨基?；衔锓磻?yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中替加環(huán)素是替加環(huán)素鹽酸鹽。15.根據(jù)權(quán)利要求13或權(quán)利要求14的方法，其中所述至少一種式4化合物的鹽是囟化鹽。16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中卣化鹽是鹽酸鹽。17.根據(jù)權(quán)利要求13至16任一項(xiàng)的方法，其中所述的反應(yīng)介質(zhì)是水替力口環(huán)素該方法包括在反應(yīng)介質(zhì)中使式4A化合物或其鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式4A性介質(zhì)。18.根據(jù)權(quán)利要求13至16任一項(xiàng)的方法，其中所述的反應(yīng)介質(zhì)是在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑。19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑選自極性非質(zhì)子溶劑或其溶劑混合物。20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑為乙腈與N，N，-二曱基亞丙基脲的混合物。21.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述的至少一種堿性溶劑為N，N，-二甲基亞丙基脲。22.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述的在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)的至少一種堿性溶劑為在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)的水。23.根據(jù)權(quán)利要求13至22任一項(xiàng)的方法，其中與所述至少一種M?；衔锏姆磻?yīng)在0C至6C下進(jìn)行。24.根據(jù)權(quán)利要求1至23任一項(xiàng)的方法，其中與所述至少一種氛基?；衔锏姆磻?yīng)進(jìn)行30分鐘至4小時(shí)的時(shí)間段。25.根據(jù)權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的方法，其中所述的至少一種氛基?；衔镞x自氨基?；栈?、氨基?；约盎旌系陌被；?。26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述的至少一種M?；衔锸侵辽僖环N式6的氨基?；婊锘蚱潲}，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式6其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Q)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；n為1-4;且其中Q為選自溴、氯和碘的鹵素。27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中Q為氯。28.根據(jù)權(quán)利要求26或27的方法，其中所述的至少一種M?；衔锸请x化鹽。29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中卣化鹽為鹽酸鹽。30.根據(jù)權(quán)利要求26至29任一項(xiàng)的方法，其中所述的至少一種式6氨基酰基面化物通過包括如下步驟的方法獲得A)使至少一種式7的酯或其鹽，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>與至少一種胺R^2NH反應(yīng)，以制備至少一種羧酸，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者R!和R2與N—起形成雜環(huán)；X為選自溴、氯、氟和碘的卣素；A為-OR6，其中R6選自直鏈或支鏈(CVC6)烷基和烷基芳基，；n為l-4;和B)使所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑反應(yīng)，得到至少一種式6^?；衔锘蚱潲}。31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中Rs和Re各自為叔丁基，n是l,且X是溴。32.根據(jù)權(quán)利要求30或31的方法，其中所述的至少一種氯化劑包括亞硫酰氯。33.根據(jù)權(quán)利要求30至32任一項(xiàng)的方法，其中所述的鹽為鹽酸鹽。34.根據(jù)權(quán)利要求26至29任一項(xiàng)的方法，其中所述的至少一種式6的氨基?；栈锿ㄟ^包括如下步驟的方法獲得使至少一種式8羧酸或其鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中Rs選自直鏈或支鏈(d-C6)烷基，與至少一種氯化劑反應(yīng)，獲得至少一種式6的氨基?；栈锘蚱潲}。35.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中Rs和R6各自為叔丁基。36.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中的至少一種氯化劑包括亞硫酰氯。37.根據(jù)權(quán)利要求34或35的方法，其中的鹽是鹽酸鹽。38.根據(jù)權(quán)利要求34至37任一項(xiàng)的方法，其中的至少一種式8羧酸的粒度低于150微米。39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述的至少一種式8羧酸的粒度低于110微米。40.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述的至少一種式8羧酸的粒度為50至100孩i米。41.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，還包含將反應(yīng)介質(zhì)的pH調(diào)節(jié)至7.0至7.5的步驟。42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中調(diào)節(jié)后的pH為7.2。43.根據(jù)權(quán)利要求41或42的方法，還包含向水性介質(zhì)中加入至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物。44.根據(jù)權(quán)利要求43的方法含甲醇和二氯甲烷。45，根據(jù)權(quán)利要求44的方法含5%至30%量的甲醇。46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法含20%的甲醇。47.根據(jù)權(quán)利要求45的方法含30%的甲醇。48.根據(jù)權(quán)利要求43至47任一項(xiàng)的方法，還包括用至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑的混合物萃取水性介質(zhì)。49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包括二氯甲烷，且所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包括甲醇。50.根據(jù)權(quán)利要求43至47任一項(xiàng)的方法，還包括用至少一種極性非質(zhì)子溶劑萃取水性介質(zhì)。51，根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包括二氯曱烷。52.根據(jù)權(quán)利要求48至51任一項(xiàng)的方法，其中萃取在0。C至5。C的溫，其中所迷的至少一種有機(jī)溶劑混合物包，其中所述的至少一種有機(jī)溶劑混合物包，其中所述的至少一種有機(jī)溶劑混合物包，其中所述的至少一種有機(jī)溶劑混合物包度下進(jìn)行。53.根據(jù)權(quán)利要求48至52任一項(xiàng)的方法，還包括在各萃取之后將水性介質(zhì)的pH調(diào)節(jié)至7.0至7.5。54.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中的pH為7.2。55.根據(jù)權(quán)利要求1至54任一項(xiàng)的方法，還包括使所述的至少一種式1化合物在至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物中結(jié)晶。56.根據(jù)權(quán)利要求55的方法，其中所述的有機(jī)溶劑混合物包含甲醇和二氯甲烷。57.根據(jù)權(quán)利要求55或56的方法，其中結(jié)晶在-15X:至15C的溫度下發(fā)生。58.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，還包括將混合物濃縮以獲得漿狀液并過濾以獲得所述的至少一種式1化合物。59.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中的濃縮和過濾在ox:至5x:的溫度下發(fā)生。60.通過權(quán)利要求1至59任一項(xiàng)的方法制備的化合物。61.包含至少一種權(quán)利要求60的化合物的組合物。62.根據(jù)權(quán)利要求61的組合物，還包含可藥用載體。63.根據(jù)權(quán)利要求61或62的組合物，其中所述的至少一種權(quán)利要求1的化合物是至少一種式l化合物或其可藥用鹽，式l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中n為l，Ri和R2與N—起形成叔丁基，且R3和R4各自為甲基。64.組合物，包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽和低于0.5%的所述至少一種式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體，其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(C廣C6)烷基以及環(huán)烷基，或者I^和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NR3R4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為l-4。65,組合物，包含替加環(huán)素或其可藥用鹽和僻于0.5%的替加環(huán)素或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體替力P環(huán)素o66.根據(jù)權(quán)利要求65的組合物，其中替加環(huán)素是替加環(huán)素鹽酸鹽。67.制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中Ri和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基；且n為1-4，該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>以制備包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>B)使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并，以制備至少一種式4化合物或其鹽，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>式4;和C)使所述的至少一種式4化合物與至少一種氨基酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。68.制備替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>替力口環(huán)素該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2A化合物或其鹽反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>式2A以制備包含至少一種式3A化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>式3AB)使至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并，以制備至少一種式4A化合物或其鹽，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>式4AC)使所述至少一種式4A化合物與至少一種^酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。69.根據(jù)權(quán)利要求68的方法，其中替加環(huán)素是替加環(huán)素鹽酸鹽。70.制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>式1其中&和R2各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基，或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán)；R為-NRsR4，其中議3和R4各自獨(dú)立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Cf)烷基；且n為l-4，該方法包括A)使至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液合并，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式3以制備至少一種式4化合物或其鹽，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式4;和B)使所述的至少一種式4化合物與至少一種氨基?；衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以;Mt沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。71.制備替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>替加環(huán)素72.該方法包括A)使至少一種還原劑與包含至少一種式3A化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液合并，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>以制備至少一種式4A化合物或其鹽，式4A;和B)使所述的至少一種式4A化合物與至少一種M?；衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng)，所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時(shí)至少一種堿性溶劑。73.根據(jù)權(quán)利要求71的方法，其中替加環(huán)素為替加環(huán)素鹽酸鹽。全文摘要公開了制備和純化四環(huán)素類、例如替加環(huán)素的方法。還公開了通過這些方法制備的四環(huán)素類組合物、例如替加環(huán)素組合物。文檔編號(hào)C07C231/02GK101228112SQ200680026763公開日2008年7月23日申請日期2006年5月25日優(yōu)先權(quán)日2005年5月27日發(fā)明者A·J·圖佩爾,A·P·米朔德,A·S·皮爾徹,J·J·麥考利三世,J·M·霍內(nèi),L·克里什楠,M·貝納池茨,P-E·孫,S·戴尼奧特申請人:惠氏公司