專利名稱：作為精神分裂性障礙和雙相型障礙的生物標(biāo)記的vgp肽片段的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為精神分裂性障礙和雙相型障礙的肽生物標(biāo)記，還涉及 所述生物標(biāo)記特別是在診斷或監(jiān)測精神分裂性障礙或雙相型障礙或其素 因的方法中的用途。生物標(biāo)記和使用生物標(biāo)記的方法可用來輔助診斷，以 便確定精神分裂性障礙或雙相型障礙的存在，或者以l更評估精神分裂性障 礙或XM目型障礙的發(fā)病和發(fā)展。本發(fā)明還涉及生物標(biāo)記在精神分裂性障礙 和/或雙相型障礙領(lǐng)域中，用于臨床篩選、預(yù)后評價和療法評估中的用途 以及用于藥物篩選和藥物開發(fā)的用途。
背景技術(shù)：
精神分裂癥是一種主要的精神性障礙，患病者占總?cè)丝诘淖罡哌_(dá)1%。 發(fā)現(xiàn)在不同性別和不同的文化和地理區(qū)域中該病的患病率基^目當(dāng)(1; 2 )。世界衛(wèi)生組織發(fā)現(xiàn)精神分裂癥是世界上造成殘疾的第四大病因(3; 4 )， 它造成全部DALY(失能調(diào)整壽命年)的1. 1%和YLD(失能壽命損失年)2. 8%(4)。據(jù)估計，在1991年一年美國因為精神分裂癥造成的經(jīng)濟(jì)消費超過 190億美元，這超過了所有癌癥的總消費。在精神分裂癥早期進(jìn)行有效治 療可以改善預(yù)后并有助于降^f氐與該疾病有關(guān)的花銷。精神分裂癥的臨床癥狀包括一些不相似的臨床特征，包括陽性癥狀(幻覺、妄想、思想錯亂和行為怪異)；陰性癥狀(運動能力減退、情緒 體驗和表情的范圍受限以及快樂程度降低)；以及各個個體之間不同程度 的認(rèn)知損害(5)。精神分裂癥沒有特有的某一癥狀和/或沒有某一癥狀均存 在于每個病例中。由于臨床癥狀上沒有統(tǒng)一性，所以目前精神分裂癥的診 斷和分類還是基于患者表現(xiàn)的臨床癥狀(6)。這主要是因為精神分裂癥的 病因?qū)W還不清楚(實際上大多數(shù)精神疾病的病因?qū)W都還不清楚)，并且基 于病因?qū)W的分類還不可行。然而，精神分裂癥的臨床癥狀經(jīng)常與其他神經(jīng) 性精神障礙中觀察到的癥狀相似，這使得正確的診斷變得十分困難。由于精神分裂性障礙患者表現(xiàn)的癥狀十分復(fù)雜并和其他精神障礙的
癥狀^M目似，所以目前精神分裂癥的診斷還是基于繁瑣的臨床檢查/對患 者的家族病史、個人病史、當(dāng)前癥狀(精神狀態(tài)檢查)和是否存在其它障 礙(鑒別診斷；表l)進(jìn)行會診來做出。這種畔估可以做出"高度疑似" 的診斷，從而可制定初步的治療計劃。確診為精神分裂癥的患者(有少數(shù) 例外)應(yīng)具有至少六個月的精神病的"意識喪失，，癥狀(DSM IV)并表現(xiàn) 出實行正常功能越來越困難。世界衛(wèi)生組織在1992年頒布的精神和行為障礙的ICD-10分類標(biāo)準(zhǔn)是 歐洲的精神科醫(yī)師用于診斷包括精神分裂性障礙和雙相型障礙的精神健 康疾病的最常用的手冊。該手冊提供了對精神分裂癥的詳細(xì)診斷指南并定 義了以下各種形式的精神分裂癥精神分裂癥、偏執(zhí)型精神分裂癥、青春 型精碎中分裂癥(hebrephrenic schizophrenia )、緊張型精神分裂癥、混 合型精神分裂癥、精神分裂癥后精神分裂癥 (post-schizophrenic schizophrenia )、殘留型精神分裂癥和單純型精神分裂癥。由美國精神病學(xué)學(xué)會(華盛頓特區(qū))在1994年出版的精神障礙診斷 與統(tǒng)計學(xué)手冊第四版(DSM IV )，在英國和美國都已證明是在精神健康問 題的分類和診斷方面的衛(wèi)生職業(yè)人員的權(quán)威性參考手冊。這本手冊描述了 包括精神分裂性障礙和^M目型障礙的精神健康疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)、亞型、相 關(guān)特征和鑒別診斷的標(biāo)準(zhǔn)。精神分裂癥的DSM IV診斷標(biāo)準(zhǔn)A. 特征性癥狀以下癥狀中的兩種(或多種)，每種癥狀均應(yīng)在一月 內(nèi)的(如果治療成功，期限可較短)顯著較長時間里呈現(xiàn)妄想；幻覺； 言語錯亂(例如經(jīng)常性的思維出軌(derailment)或不連貫)；全身錯亂 性或緊張性行為；陰性癥狀，即情感冷淡、精神性失語癥或意志減退(avolition)。若妄想荒謬怪異，或幻覺是由對患者的行為或思想作實況 廣播樣評議的聲音，或由在互相對話的兩個或多個聲音構(gòu)成，則僅需l種 標(biāo)準(zhǔn)A中的癥狀就已足夠。B. 社交/職業(yè)功能障礙自疾病發(fā)作以來在顯著較長時間內(nèi)， 一個或 多個重要方面的功能發(fā)揮(如工作、人際關(guān)系或自我照料)明顯地M病 前的水平差得多(或者如果發(fā)病于童年或青少年，則為未能達(dá)到應(yīng)有的人 際關(guān)系、學(xué)業(yè)、或職業(yè)水平)。C. 病期疾病的持續(xù)性癥候至少持續(xù)6個月。這6個月的時間必須包
括癥狀(即活動期癥狀)符合A標(biāo)準(zhǔn)的至少l個月(如果治療成功，期限 可較短)，并且可包括前驅(qū)癥狀期或殘留癥狀期。在上述前驅(qū)期或殘留期 期間，疾病的征候可表現(xiàn)為僅有陰性癥狀或A標(biāo)準(zhǔn)中所列2個或多個癥狀 的輕樹束現(xiàn)形式(例如，古怪的想法，不尋常的知覺體驗)。
D. 排除分裂情感性障礙及心境障礙伴有精神病性特征的心境障礙和 分裂情感性障礙均已排除，因為(1)重性抑郁發(fā)作、躁狂性發(fā)作、或混 合性發(fā)作并不與活動期癥狀同時發(fā)生；或者(2)如果活動期癥狀期期出 現(xiàn)情感發(fā)作，其總的持續(xù)時期與活動期和殘留期的持續(xù)時間相比均較短。
E. 排除物質(zhì)/一般醫(yī)學(xué)病癥此疾病并非是由于某種物質(zhì)(例如，某 種藥物的濫用、某種治療藥品)或由于一般醫(yī)學(xué)病癥所導(dǎo)致的直接生理效 應(yīng)。
F. 與綜合性精神發(fā)育障礙的關(guān)系如有孤獨癥或另一種綜合性精神發(fā) 育障礙的病史，那么除非還出現(xiàn)至少一月(如果治療成功，限期可較短) 的明顯妄想或幻覺，否則不另外作精神分裂癥診斷。
精神分裂癥亞型
1. 偏執(zhí)型滿足下列標(biāo)準(zhǔn)的精神分裂癥類型帶有一種或多種妄想或 頻繁出現(xiàn)聽覺幻覺。未明顯出現(xiàn)下列癥狀言語錯亂、錯亂性或緊張性行 為、或者情感貧乏或不當(dāng)。
2. 緊張型至少有下列兩種臨床明顯表現(xiàn)的精神分裂癥類型表現(xiàn)為 僵直(包括蠟樣屈曲)或木僵的運動性靜止(motoric immobility),運 動性活動過多(excessive motor activity)(明顯無目的并且不受外部 刺激影響)，極端違拗(明顯無動機(jī)地違抗所有指示或者保持某種僵硬姿 勢對抗試圖移動他的企圖)或沉默，表現(xiàn)為作出某種姿勢(主觀假想不當(dāng) 或怪異的姿勢)、刻板的運動、明顯裝相或者明顯地扮怪相等古怪隨意運 動，模仿言語或模仿動作。
3. 錯亂型滿足下列標(biāo)準(zhǔn)而且不滿足緊張型標(biāo)準(zhǔn)的精神分裂癥類型 下列所有癥狀均明顯言語錯亂、行為錯亂、情感貧乏或不當(dāng)。
4. 未分化型存在滿足A標(biāo)準(zhǔn)的癥狀但不滿足偏執(zhí)型、錯亂型或緊張 型的標(biāo)準(zhǔn)的精神分裂癥類型。
5. 殘留型滿足下列標(biāo)準(zhǔn)的精神分裂癥類型沒有明顯的妄想、幻覺、 言語錯亂和全身錯亂性或緊張性行為。疾病持續(xù)出現(xiàn)，表現(xiàn)為僅有陰性癥
狀或精神分裂癥A標(biāo)準(zhǔn)中所列2個或多個癥狀的輕微表現(xiàn)形式(例如，古 怪的想法、不尋常的知覺體驗)。精神分裂癥相關(guān)特征精神分裂癥的相關(guān)特征包括學(xué)習(xí)困難、活動減退、精神病、情緒歡 快、情緒抑郁、軀體功能不全或性功能障礙、活動過度、犯罪或強(qiáng)迫觀念、 性偏差行為、奇怪/古怪或多疑的人格、焦慮或恐懼或依賴性人格、引人 注目的或怪異的或厭惡社會的人格。精神分裂癥的鑒別診斷許多障礙都與精神分裂癥有著相似甚至相同的癥狀。因此，臨床醫(yī)生于一般的醫(yī)學(xué)病^、譫妄或癡呆導(dǎo)致的精神障礙；物質(zhì)誘導(dǎo)的精神障礙； 物質(zhì)誘導(dǎo)的譫妄；物質(zhì)誘導(dǎo)的持續(xù)癡呆；物質(zhì)相關(guān)的障礙；具有精神特征 的心境障礙；分裂情感性障礙；未另外指明的抑郁障礙；未另外指明的雙 相型障礙；具有緊張型特征的心境障礙；精神分裂癥樣精神障礙；短時精 神障礙；妄想型障礙；未另外指明的精神障礙；綜合性精神發(fā)育障礙(例 如孤獨癥)；伴有(語言交流障礙所致)言語錯亂和(注意力缺陷/多動癥 所致)行為錯亂的兒童期表現(xiàn)；分裂型障礙；分裂樣人格障礙和偏執(zhí)型人 格障礙。對于躁狂抑郁/雙相情感障礙(BD)的DSM IV診斷學(xué)分類 已被清楚地定義而足夠?qū)λ鼈兘o出DSM分類的雙相型疾病目前僅有兩類，分別為雙相i型和雙相n型。雙相I型這種障礙以躁狂性發(fā)作為特征；躁狂發(fā)作是躁狂-抑郁周 期的"高"點。雖然有些雙相I型個體可能不會經(jīng)歷重性抑郁發(fā)作，但是 通常在躁狂期之后會有一段抑郁期。^Uf目I型患者中還經(jīng)常出現(xiàn)混合的狀 態(tài)，其中躁狂或輕躁狂癥狀和抑郁癥狀同時出現(xiàn)(例如躁狂的思維奔逸伴 隨抑郁)。而且煩躁不安性躁狂也很普遍，這是一種以易怒和易激惹為特 征的躁狂。雙相n型這種障礙以重性抑郁發(fā)作和輕躁狂發(fā)作(較輕形式的躁狂) 相交替為特征。輕躁狂發(fā)作為破壞性較輕的躁狂形式，并且可能以低水平
的非精神病性的躁狂癥狀為特征，例如以活力比平時更豐富或情緒比平時 更積極為特征。這可能并不影響個體在每日生活方面的行為能力。輕躁狂 和躁狂的判斷標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)別僅在于輕躁狂的持續(xù)時間較短(輕躁狂的持續(xù)時間為至少4天而不是1周)和嚴(yán)重程度較輕(對行為能力沒有明顯損害， 無須住院治療，也沒有精神病特征)。如果抑郁和躁狂癥狀持續(xù)兩年并且不滿足重性抑郁或躁狂發(fā)作的標(biāo) 準(zhǔn)，則可在診斷上歸類為循環(huán)情感性障礙(Cyclothymic disorder),這 是一種較輕形式的雙相情感障礙。循環(huán)情感性障礙的確診要經(jīng)過兩年時 間，該障礙是以中間間以穩(wěn)定期的頻繁短期輕躁狂和抑郁癥狀為特征的?？焖傺h(huán)發(fā)生在個體的情緒快速連續(xù)地由抑郁波動到輕躁狂或躁狂 時，其間沒有或幾乎沒有穩(wěn)定期。當(dāng)個體在一定年限內(nèi)出現(xiàn)四次或多次滿 足重性抑郁、躁狂、混合或輕躁狂發(fā)作標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)作時，就被稱為經(jīng)歷快速 循環(huán)。某些經(jīng)歷快速循環(huán)的個體可在每月、每周甚或每天都經(jīng)歷相型轉(zhuǎn)換 (有時也稱為超快速循環(huán))。如果躁狂、抑郁、混合情緒或輕躁狂的癥狀是直接由例如曱狀腺疾病 或中風(fēng)的醫(yī)學(xué)病癥所引起的，則目前將其診斷為由于一般醫(yī)學(xué)病癥導(dǎo)致的 心境障礙(Mood Disorder Due to a General Medical Condition)。如果躁狂情緒是由抗抑郁藥、ECT引起或者由于個體使用街頭藥物 (street drugs)而引起的，則將其診斷為具有躁狂特征的物質(zhì)誘導(dǎo)心境 障礙。對于因服用抗抑郁藥物引起而不是自發(fā)發(fā)生的躁狂性發(fā)作，已被歸入雙相m型診斷類別。奇怪的是，對于經(jīng)歷輕躁狂或燥郁環(huán)性氣質(zhì)(即輕度 的躁狂)而沒有重性抑郁的個體，也被歸入了^M目m型診斷類別中。躁狂癥躁狂抑郁包括兩種不同并且對立的情緒狀態(tài)，由此抑郁和躁狂交替出 現(xiàn)。dsm iv給出了必須滿足的多個標(biāo)準(zhǔn)，滿足這些標(biāo)準(zhǔn)的疾病才能被歸類 為躁狂癥。首先，個體的情緒必須是興奮的、自大的或易激惹的。這種情 緒必須與穩(wěn)定期中該個體的正常情感狀態(tài)不同。必須在顯著較長的時間段 內(nèi)呈現(xiàn)明顯的改變。患者必須變得相當(dāng)興奮并且有夸張的想法。他們也可 能變得非常易激惹，可能在態(tài)度上明顯的表現(xiàn)為"狂妄自大"。躁狂癥的第二條主要標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)必須以顯著程度存在下述癥狀中的至少三種自身重
要性的夸張感覺、睡眠的需要減少、言語增多、意念飄忽或思維奔逸、 容易分心、有意圖的活動增加、過度沉迷于能帶來快感但卻有不良后果的活動(例如性活動和過度消費)。DSM IV中躁狂癥的第三條標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)情緒 的改變應(yīng)顯著到足以影響個體的工作表現(xiàn)或參加常規(guī)社會活動的能力或 人際關(guān)系。這第三條標(biāo)準(zhǔn)主要用于強(qiáng)調(diào)躁狂和輕躁狂的區(qū)別。抑郁DSM IV提出了臨床上確定重性抑郁的多個標(biāo)準(zhǔn)。病癥必須出現(xiàn)至少兩 周，并且必須具有下述癥狀中的五種基本上每天的大部分時間都情緒低 落；基本上每天對于幾乎所有的活動都失去興趣或樂趣；體重和食欲改變； 睡眠障礙；生理活動減少；疲憊和活力減退；感覺沒有價值或過度的犯罪 感；注意力不集中；有自殺的念頭。在對重性抑郁進(jìn)行表征的五種癥狀中，情緒抑郁和對日?；顒邮ヅd 趣這兩個癥狀都必須明顯。將患有躁狂抑郁個體的抑郁情緒癥狀和患有重 性抑郁患者的癥狀區(qū)別開是很難的。心境惡劣(dysthymia)比單相型抑 郁的癥狀稍輕但是會更持久。精神病精神病是以基本感知、認(rèn)知、情感和判斷過程方面的障礙為特征的。 例如，患者可能經(jīng)歷妄想、幻覺、言語錯亂、行為錯亂等。診斷為雙相型情感障礙并不表示個體就一定有精神病經(jīng)歷。精神病性癥狀與一些不同的 腦部障礙相關(guān)，所述腦部障礙包括由頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、腫瘤、感染或^f吏用非法藥物造成的腦部損傷。精神病性癥狀可發(fā)生在重性抑郁時。 分裂情感性障礙分裂情感性障礙是以同時具有精神分裂癥和雙相型障礙兩要素為特 征的，它被稱為"具有心境要件的精神分裂癥"。分裂情感性障礙的特征 是在某一疾病發(fā)作中，精神分裂癥和雙相型障礙的癥狀程度相近而且伴隨 出現(xiàn)，因此通常難以將分裂情感性障礙和精神分裂癥或雙相型障礙區(qū)別 開，而且在本領(lǐng)域中，分裂情感性障礙是否以獨特的綜合征形式存在還是 有爭論的。由于分裂情感性障礙的復(fù)雜性，通常難以對該病確診。許多患 有分裂情感性障礙的個體在開始時都纟皮診斷為躁狂抑郁。
分裂性人格、精神分裂癥樣精神障礙、分裂型人格和^目型障礙(躁 狂抑郁)經(jīng)常被混淆和誤診。因此，需要鑒別診斷來將精神分裂癥和^M目 型障礙與其他存在相似癥狀的疾病區(qū)分開來，所述其他存在相似癥狀的疾病例如分裂情感性障礙和短時精神障礙(6)?；加衈目型障礙的個體中有20%至30。/。的病例滿足精神分裂癥的全部 診斷標(biāo)準(zhǔn)?；加须p相型障礙的患者也不總是處于躁狂期或抑郁期；其中還 可能有很長幾段時間患者看起來幾乎沒有癥狀，也不存在病態(tài)的思想、妄 想、言語或其他精神障礙本身的特征性癥狀?；加须p相型障礙的個體可能 不總是有癥狀的，只是在發(fā)作期會在躁狂或抑郁的背景中出現(xiàn)類似精神分 裂癥的癥狀，這些癥狀包括妄想或夸大妄想，幻覺，盲目樂觀，夸張的 行為，以及生理上的異常狀況，形式為對睡眠的需要減少，食欲、性欲與 一般動力和動機(jī)提高。雙相型障礙和臨床上重性抑郁的主要辨別性差異為雙相型障礙中會 出現(xiàn)躁狂性發(fā)作。存在一次躁狂性發(fā)作(滿足DSM IV標(biāo)準(zhǔn))就足以做出雙 相型障礙的診斷。對雙相型障礙和抑郁的區(qū)分對于制定治療方案十分重 要；因為抑郁癥的治療主要使用抗抑郁藥，而雙相型障礙主要使用例如鋰 或丙戊酸鹽的情緒穩(wěn)定藥。如果將抗抑郁藥用于^M目型障礙有時可能會誘 發(fā)躁狂性發(fā)作。雖然癥狀很明顯，但是經(jīng)常難以確定該癥狀是否是由其他一些神經(jīng)精 神障礙、神經(jīng)變性障礙或神經(jīng)發(fā)育障礙所引起的，因此可能需要6個月或 更長的時間來對^M目型障礙、精神分裂性障礙或其他精神疾病作出確定的 診斷。目前需要可以將精神分裂性障礙和雙相型障礙與存在類似癥狀的其 它障礙區(qū)別開的診斷方法和工具。還需要鑒別診斷，以便在下述疾病的背 景下可將精神病排除，所述疾病為神經(jīng)變性障礙、神經(jīng)發(fā)育障礙和器質(zhì)性 病因的精神病，例如癲癇和藥物誘發(fā)的精神病。目前獲得正確診斷所需要的較長的過程可能會使適當(dāng)?shù)闹委煱l(fā)生延 誤，這可能會引起嚴(yán)重的具有中長期疾病后果的并發(fā)癥(5;7;8)。因此亟 需開發(fā)客觀的診斷方法、檢測和工具，以輔助辨別各種具有相似臨床癥狀 的精神病。用于精神分裂性癥和/或雙相型障礙的客觀診斷方法和檢測可 在患病過程中輔助監(jiān)測個體(治療反應(yīng)和順應(yīng)性等)，還可能用于評定預(yù) 后，而且還為藥物篩選和藥物開發(fā)提供了工具。
不幸的是，目前針對精神分裂癥或^M目型障礙并沒有一種標(biāo)準(zhǔn)的、靈 敏的、特異性的檢測。目前正在開發(fā)的一種用于精神分裂癥診斷分析的生物化學(xué)檢測是煙酸皮膚發(fā)紅測試(9-11)，該測試基于這樣一個觀察結(jié)果，即由于花生四 烯酸代謝異常， 一些精神分裂癥患者對煙酸皮膚試驗沒有反應(yīng)(10)。然而， 不同的研究所顯示的這種測試的特異性和靈敏性相當(dāng)不穩(wěn)定，可從23%變 化到87%(12-15),表明這種測試的可靠性和有效性還需要驗證。國際專利申請公布文本No. W0 01/63294描述的方法和組合物可用于 神經(jīng)精神疾病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病(包括BAD (刃UN型情感障礙)、精神分裂癥 和血管性癡呆)的篩選、診斷和預(yù)后評定，用于對這些疾病的治療的有效 性進(jìn)行監(jiān)測和用于藥物開發(fā)。其他基于額葉、顳葉和基底神經(jīng)節(jié)的細(xì)微改變的技術(shù)(例如磁共振成 像或正電子發(fā)射斷層成像)對于個體患者中精神分裂性障礙的診斷、治療 或預(yù)后價值不大，這是因為所報道的精神分裂癥個體和正常比較受試者之 間這些結(jié)構(gòu)的差異的絕對大小通常很小，并且在兩組之間還有明顯的重疊 (16)。這些神經(jīng)成像技術(shù)在排除其他可能伴有精神分裂性癥狀的疾病方面 的作用，很大程度上受到局限，所述疾病例如腦部腫瘤或出血。因此，需要識別靈敏的和特異的生物標(biāo)記，所述生物標(biāo)記可用于在活 體受試者中進(jìn)行鑒別診斷并監(jiān)測精神分裂性障礙，雙相型障礙，或者精神 分裂性障礙或雙相型障礙的素因。此外，顯然需要用于鑒定和評估用于治 療上述病癥的已有治療劑和新治療劑的方法、才莫型、測試和工具。VGF基因編碼一種神經(jīng)肽前體，該前體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系 統(tǒng)的一小類神經(jīng)元中表達(dá)，并且還在腺垂體、腎上腺髓質(zhì)、胃腸道和胰腺 的一類特殊的內(nèi)分泌細(xì)胞中表達(dá)。VGF的表M反應(yīng)性神經(jīng)元中被神經(jīng)營 養(yǎng)因子上調(diào)。VGF是一種已被認(rèn)識的神經(jīng)生長因子，在體內(nèi)能量平衡的調(diào) 節(jié)方面起關(guān)鍵作用。人類VGF蛋白長度為615個氨基酸；小鼠和大鼠的VGF 蛋白長度為617個M酸。人類VGF蛋白和大鼠的VGF蛋白之間的同源性 大約為85%。 VGF神經(jīng)肽前體具有一個22個氨基酸的分泌前導(dǎo)("信號，，) 序列，該序列促使向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的易位。在VGF神經(jīng)肽前體和從該前體切下的 成熟全長VGF肽中，有多個堿性氨基酸殘基的短連續(xù)序列，這是肽酶切割 產(chǎn)生更短的VGF肽的潛在靶向位點。已在大鼠和人類中識別了 VGF肽， Stark等人(20Q1) (17)從未患有已知神經(jīng)疾病的人類受試者的腦脊液 (CSF)中識別出了三種VGF的N端片段(狄酸23至62、 26至62 (肽 23至62的N端截短片段)和23至59 (肽23至62的C端截短片段))。VGF肽生物標(biāo)記與慢性癡呆疾病有關(guān)。國際專利申請No PCT/DE02/01376 (WO 02/082075)描述了檢測慢性癡呆特別是阿爾茨海默 癥的方法，所述方法包括檢測各種VGF衍生肽，包括VGF23至62和VGF26 至62。上述疾病是器質(zhì)性病變。例如W0 02/082075中所述的'隄性癡呆疾 病的診斷自動地排除了精神分裂性障礙和^M目型障礙的診斷。直至目前為 止還沒有VGF肽與精神分裂性障礙、雙相型障礙或其素因的報道。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供VGF肽作為用于精神分裂性障礙、^jf目型障礙或其素因的 生物標(biāo)記的用途，所述VGF肽優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所示#^酸序列或 其片段組成的。本發(fā)明還提供了一種精神分性裂障礙、^目型障礙或其素因的VGF肽 生物標(biāo)記，優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所示M酸序列或其片段組成。術(shù)語"生物標(biāo)記，，意為某種過程、事件或情況的區(qū)別性生物標(biāo)志物或 生物來源標(biāo)志物。生物標(biāo)記肽可以用于例如臨床篩選等的診斷方法、預(yù)后 評估，并可用于監(jiān)測治療效果、識別對某種特定藥物最可能有反應(yīng)的患者、 篩選和開發(fā)藥物。生物標(biāo)記及其應(yīng)用對于識別新型藥物療法和發(fā)現(xiàn)藥物療 法的新乾標(biāo)都是有^h值的。術(shù)語"VGF肽生物標(biāo)記"包括^A類VGF神經(jīng)肽前體切除信號序列而 生成的成熟全長人類VGF肽。優(yōu)選的VGF肽生物標(biāo)記為其N端是由人類VGF 神經(jīng)肽前體蛋白經(jīng)水解性切除假設(shè)的分泌前導(dǎo)("信號，，)序列而生成的肽。 一種特別優(yōu)選的VGF肽生物標(biāo)記(SEQ ID NO: 1) ^!^^A類VGF產(chǎn)生的， 由人類VGF的23至62位JL^酸組成。發(fā)現(xiàn)這種生物標(biāo)記的M酸序列緊 接著人類VGF蛋白的假設(shè)信號肽的羧基端(圖3 )。發(fā)現(xiàn)SEQ ID NO: 1 (圖 2)所示的生物標(biāo)記肽在第一次出現(xiàn)精神分性裂障礙或雙相型障礙的精神 病特征的個體體內(nèi)存在的水平升高，因此它可以用作診斷和監(jiān)測精神分性 裂障礙、雙相型障礙或其素因的生物標(biāo)記。另一方面，本發(fā)明提供一種診斷或監(jiān)測精神分性裂障礙、雙相型障礙 或其素因的方法，所述方法包括對來自測試受試者的生物樣本中存在的 VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行檢測和/或定量，所述VGF肽生物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所示M酸序列或其片段組成。本發(fā)明的監(jiān)測方法可用于監(jiān)測精神分性裂障礙、^f目型障礙或其素因 的發(fā)生、發(fā)展、穩(wěn)定、改善和/或緩解。在根據(jù)本發(fā)明的診斷或監(jiān)測方法中，對來自測試受試者的生物樣本中 存在的生物標(biāo)記肽的檢測和/或定量可以在兩個或多個時機(jī)進(jìn)行。可以對 兩個或多個時機(jī)得到的樣本中的生物標(biāo)記的水平進(jìn)行比較?？梢詫蓚€或 多個時機(jī)得到的樣本中的生物標(biāo)記肽水平的任何變化進(jìn)行評估。生物標(biāo)記 肽水平的調(diào)制可以用作精神分性裂障礙、雙相型障礙或其素因的狀態(tài)的標(biāo) 志物。生物標(biāo)記肽水平隨著時間的提高標(biāo)志著疾病的發(fā)生和t艮即疾病的 惡化，而生物標(biāo)記肽水平的降低表明疾病的改善或緩解。根據(jù)本發(fā)明的診斷或監(jiān)測方法可以包括對來自測試受試者的測試生 物樣本中存在的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行定量，并將所述測試樣本中存在的肽 水平與一種或多種對照物相比較，所述VGF肽生物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所示^J^^f列或其片段組成。在本發(fā)明方法中使用的對照物可以是選自下列的一種或多種對照物 來自正常受試者的正常對照樣本中存在的生物標(biāo)記水平，即正常生物標(biāo)記 水平；正常生物標(biāo)記的范圍；來自患有精神分性裂障礙、^Uf目型障礙或已 確診其素因的受試者的樣本中的水平，或精神分性裂障礙的標(biāo)志水平，或 雙相型障礙的標(biāo)志水平；精神分性裂障礙的標(biāo)志范圍和雙相型障礙的標(biāo)志 范圍。一種診斷精神分性裂障礙、雙相型障礙或其素因的優(yōu)選方法，包括 (a )對測試生物樣本中的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行定量，所述VGF肽生 物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1或其片段組成，(b )將所述測試樣本中所述肽的量與來自正常受試者的正常對照生 物樣本中存在的量進(jìn)行比較。測試樣本中的VGF生物標(biāo)記肽的水平比正常對照高就表明存在精神 分性裂障礙、雙相型障礙或其素因。測試樣本中的所述肽的水平與正常對 照相當(dāng)或較之更低則表明不存在精神分性裂障礙、^目型障礙，或其素因。本文使用的術(shù)語"診斷"包括精神分性裂障礙、^目型障礙或精神分 性裂障礙的素因或雙相型障礙的素因的識別、確認(rèn)和/或表征。素因意為 受試者目前并不存在該障礙，但是在一段時間內(nèi)易于患上該障礙。才艮據(jù)本 發(fā)明的監(jiān)測和診斷方法可用于確認(rèn)精神分性裂障礙、雙相型障礙或其素 因的存在；通過評估疾病的發(fā)生和M來監(jiān)測疾病進(jìn)程；或評估疾病的改 善或緩解。檢測和診斷方法還可用于對臨床篩選、預(yù)后、療法選擇的評估， 療效評價的方法中，即用于在精神分性裂障礙、^M目型障礙、或精神分性 裂障礙或^目型障礙的素因的領(lǐng)域中的藥物篩選和藥物開發(fā)的方法中。有效的診斷和檢測方法通過作出正確的診斷，使得可以迅速確定最合 適的治療方案(由此減少沒有必要遭受的有害藥物副作用)，減少"等待 時間(downtime)"和降低復(fù)發(fā)率，由此提供可能改善預(yù)后的十分有效的 "患者治療方案"。還提供了一種監(jiān)測治療受試者的精神分裂性障礙或雙相型障礙的效 果的方法，所述受試者患有精神分性裂障礙或xM目型障礙、疑似患有這類 障礙或被懷疑具有其素因，所述方法包括對來自所述受試者的生物樣本中 存在的VGF肽進(jìn)行檢測和/或定量，所述VGF肽優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所 示M酸序列或其片段組成。在監(jiān)測方法中，可在兩個或多個時機(jī)獲得測 試樣本。所述方法還可包括將所述測試樣本中存在的所述生物標(biāo)記的水平 與一種或多種對照相比較，和/或與先前(例如治療開始之前)從同一受 試者獲得的一個或多個前期測試樣本相比較，和/或與治療早期從同一受 試者獲得的一個或多個前期測試樣本相比較。所述方法可包括對在不同時 才幾獲得的測試樣本中生物標(biāo)記水平的變化進(jìn)行檢測。因此，本發(fā)明提供一種監(jiān)測治療受試者的精神分裂性障礙或^M目型障 礙的效果的方法，包括(a)對來自所述受試者的測試生物樣本中的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行定 量，所述VGF肽生物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1所示M酸序列或其片 段組成，(b )將所述測試樣本中所述肽的量與一個或多個對照中和/或先前從 所述同一測試受試者獲得的一個或多個前期測試樣本中存在的量進(jìn)^f亍比 較。如果測試樣本中的生物標(biāo)記肽的水平比較先前從同一測試受試者處 獲得的早先的測試樣本中的水平低，就表明所述治療對于所述障礙、疑似 障礙或其素因有有益的效果，例如穩(wěn)定或改善。監(jiān)測治療有效性的方法可以用于監(jiān)測現(xiàn)有療法和新療法在人類受試 者和除人外的動物(例如動物模型)中的療效。這些監(jiān)測方法可以用于新
藥物物質(zhì)和組合物質(zhì)的篩選。適當(dāng)?shù)?，從接受診斷或監(jiān)測的受試者取樣的時間間隔可為3天、5天、 l周、2周、l個月、2個月、3個月、6個月或12個月?？梢栽谶M(jìn)行抗精 神分性裂障礙或抗雙相型障礙治療之前和/或之中和/或之后進(jìn)行取樣?？?以在受試者剩余生命的全部或部分的時間內(nèi)間隔取樣。本文所使用的術(shù)語"檢測"意為確定樣本中VGF生物標(biāo)記肽的存在， 所述VGF生物標(biāo)記肽優(yōu)選地由SEQ ID N0: 1所示氨基酸序列或其片段組 成。對樣本中存在的生物標(biāo)記的量進(jìn)行定量可包括測定樣本中存在的生物 標(biāo)記肽的濃度?？芍苯訉颖荆蛘唛g接地對其提取物，或者對其稀釋液 進(jìn)行檢測和/或定量。在本發(fā)明另 一方面中，通過對能特異性結(jié)合生物標(biāo)記的抗體或其片段 進(jìn)行檢測和/或定量來評估生物標(biāo)記肽的存在，所述抗體或其片段由受試 者身體針對該肽產(chǎn)生，因此存在于從患有精神分性裂障礙或X^目型障礙的受試者獲得的生物樣本中。檢測和/或定量可使用任何適于識別某特定蛋白在來自患者的生物樣方法進(jìn)行。在本發(fā)明的方法中，可以通過測量一個或多個樣本中的VGF生 物標(biāo)記肽的濃度而進(jìn)行定量?？梢栽诒景l(fā)明的方法中被測試的生物樣本包 括腦脊液(CSF)、全血、血清、尿液、唾液或其他體液(糞^f更、淚液、 滑液、痰)、呼出的氣例如濃縮的呼出氣，或者來自上述樣本的提取物或 純化物，或者上述樣本的稀釋物。生物樣本還包括來自活的受試者或尸體 的組織勻漿、組織切片和活檢標(biāo)本。樣本可被制備為例如合適的稀釋度或 濃縮度，并以常規(guī)的方式儲存。對VGF生物標(biāo)記肽的檢測和/或定量可通過檢測生物標(biāo)記肽或其片段 來進(jìn)行，所述片段為例如C端被截短的片段或N端被截短的片段。合適的 片段長度大于4個^酸。生物標(biāo)記肽可以通過例如SELDI、 MALDI-T0F而^皮直接檢測?；蛘呱?物標(biāo)記可通過與能特異性結(jié)合所述生物標(biāo)記的一種或多種配體的相互作 用直接或間接地被檢測，所述配體例如抗體或其生物標(biāo)記結(jié)合片段，或其 他肽，或者配體例如適體或寡核苷酸等。配體可帶有可檢測的標(biāo)記(例如 發(fā)光標(biāo)記、熒光標(biāo)記或放射性標(biāo)記)或親和標(biāo)簽。例如，檢測和/或定量可通過選自下列的一種或多種方法進(jìn)行SELDI(-TOF )和/或MALDI (-T0F ); —維皿分析；二維凝膠分析；質(zhì)語(MS) 技術(shù)和基于LC-MS的技術(shù)。合適的LC MS技術(shù)包括ICAT (Applied Biosystems， CA， USA)或iTRAQ (Applied Biosystems， CA, USA)。也可 使用液相色譜(例如高壓液相色譜(HPLC)或低壓液相色譜(LPLC))、薄層 色譜、NMR (核磁共振)波譜。根據(jù)本發(fā)明的診斷或監(jiān)測方法可包括用SELDI-TOF或MALDI-TOF來分 析腦脊液(CSF)樣本，以檢測SEQ ID NO: 1的生物標(biāo)記肽(3. 96kDa， 校準(zhǔn)誤差=2%)是否存在或其存在水平(圖1)。上述方法還適用于臨床 篩選、預(yù)后、監(jiān)測治療效果、識別對于特定治療療法最可能有反應(yīng)的患者， 還適用于藥物篩選與開發(fā)和識別藥物療法的新靶標(biāo)。對VGF肽生物標(biāo)記的檢測和/或定量可使用免疫學(xué)方法進(jìn)行，所述免 疫學(xué)方法涉及能特異性結(jié)合VGF肽生物標(biāo)記的抗體或其片段，例如與由 SEQ ID NO: 1所示M^列或其片段組成的肽結(jié)合的抗體或其片段。合 適的免疫學(xué)方法包括夾心免疫分析，例如使用識別生物標(biāo)記肽上的不同 表位的兩種抗體來進(jìn)行生物標(biāo)記肽的檢測的夾心ELISA;放射免疫分析UIA);直接或竟?fàn)幮悦嘎?lián)免疫吸附分析(ELISA);酶免疫分析(EIA); 蛋白質(zhì)印跡分析，免疫沉淀以及任何基于顆粒的免疫分析(例如使用金、 銀、或乳膠顆粒、磁性顆粒或Q-dot )。免疫學(xué)方法可以在例如微量滴定板 或條狀板上進(jìn)行。本文所使用的術(shù)語"抗體"包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、 雙特異性抗體、人源化抗體或嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和F(ab，)2 片段、由Fab表達(dá)文庫產(chǎn)生的片段、個體基因型(anti-Id)抗體，以及 上述任何抗體的表位結(jié)合片段。本文所使用的術(shù)語"抗體"還指免疫球蛋 白分子(即含有特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點的分子)和免疫球蛋白分 子的免疫活性部分。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可為免疫球蛋白分子的任何 類型(例如IgG、 IgE、 IgM、 IgD和IgA)或^^f亞類。疾病特異性的關(guān)鍵生物標(biāo)記的識別對于診斷過程和治療方案整體而言 十分重要。使用預(yù)定的生物標(biāo)記可以開發(fā)合適的診斷工具例如生物傳感器， 因此，在本發(fā)明的方法和用途中，可以使用生物傳感器來進(jìn)行檢測和定量。 生物傳感器可以引入用于檢測生物標(biāo)記的免疫學(xué)方法、電學(xué)技術(shù)、熱學(xué)技術(shù)、 磁學(xué)技術(shù)、光學(xué)技術(shù)(例如全息圖)或聲學(xué)技術(shù)。使用這類生物傳感器可以 檢測生物樣本中存在的預(yù)期濃度的耙標(biāo)生物標(biāo)記?？梢允褂靡肓嘶?smart"全息圖或高頻聲學(xué)系統(tǒng)的技術(shù)的生物 傳感器檢測本發(fā)明的生物標(biāo)記，所述系統(tǒng)特別適用于"條形碼(bar code )" 或陣列的構(gòu)型。在smart全息圖傳感器(Smart Holograms Ltd, Cambridge, UK)中， 全息圖像儲存于薄聚合物膜中，該膜被致敏以特異性地與生物標(biāo)記反應(yīng)。 當(dāng)接觸時，生物標(biāo)記就與聚合物反應(yīng)導(dǎo)致全息圖顯示的圖1象發(fā)生改變。讀 出的測試結(jié)果可在光強(qiáng)度、圖像、色彩和/或圖像位置上發(fā)生變化。對于 定性分析和半定量分析，傳感器全息圖可用肉眼讀出，因此不需要4吏用檢 測設(shè)備。當(dāng)需要定量測量時可以使用簡單的色彩傳感器讀出信號。樣本的 不透明度或顏色不會干擾傳感器的工作。傳感器的形式使得可同時對幾種 物質(zhì)進(jìn)行多重檢測。可以設(shè)計可逆和不可逆的傳感器以滿足不同的需要， 并可以持續(xù)監(jiān)測某種特定的目標(biāo)生物標(biāo)記。適當(dāng)?shù)兀糜跈z測本發(fā)明的生物標(biāo)記的生物傳感器可以以合適的方式 與生物分子識別相結(jié)合，以便將檢測到的樣本中生物標(biāo)記的存在或數(shù)量轉(zhuǎn) 化為信號。可以調(diào)整生物傳感器以適用于"替代場所(alternate site)" 診斷檢驗，例如在病房、門診病人的公寓、診所、家中、場地和工作地點 進(jìn)行診斷檢驗。用于檢測本發(fā)明的生物標(biāo)記的生物傳感器包括聲學(xué)傳感器、等離子體 振子共振傳感器、全息傳感器和微工程(microengineered)傳感器?？梢?在傳感器中使用印跡識別元件、薄膜晶體管技術(shù)、磁聲共振裝置以及其他新 的聲電系統(tǒng)，以用于本_發(fā)明的生物標(biāo)記的檢測。包括對本發(fā)明的生物標(biāo)記肽進(jìn)行檢測和/或定量的方法可以在臺式裝置上進(jìn)行，或者可結(jié)合一次性的診斷或監(jiān)測平臺進(jìn)行，所述平臺可以在例 如醫(yī)生診室或患者病床邊等非實驗室環(huán)境中使用。實行本發(fā)明方法的合適 的生物傳感器包括帶有光學(xué)或聲學(xué)解讀儀的"信用"卡?？梢耘渲蒙飩?感器以使得將采集到的數(shù)據(jù)通過電子儀器傳送給醫(yī)生以便解析，這樣就可 形成"電子神經(jīng)醫(yī)學(xué)(e-neuromedicine)"的_1^}。在本發(fā)明的方法和用途中，測量來自測試受試者的測試樣本中的SEQ ID NO: l或其片段的VGF生物標(biāo)記肽的含量，若檢測到測試樣本中生物標(biāo) 記肽的水平比來自正常個體的正常對照樣本中的水平高，就表明測試受試 者患有精神分性裂障礙或雙相型障礙或存在其素因。例如，在來自患有精 神分性裂障礙或XM目型障礙或存在其素因的測試受試者的樣本中，檢測到
的SEQ ID NO: 1的肽的水平通常會比正常對照樣本中該肽的存在量高2. 5 倍或2. 5倍以上，例如高約2. 8倍或2. 8倍以上。若用比值表示，當(dāng)測試 樣本中SEQ ID NO: 1的肽與正常對照的量的比值為1: 2. 5或1: 2. 5以上， 例如1: 2. 8或1: 2. 8以上時，高水平的SEQ ID NO: 1的肽就表明具有精神 分性裂障礙或雙相型障礙或其素因。本發(fā)明的另一方面提供了能特異性結(jié)合VGF肽生物標(biāo)記的配體，例如 天然存在的或化學(xué)合成的化合物。根據(jù)本發(fā)明的配體可包括能特異性結(jié)合 VGF肽生物標(biāo)記的肽、抗體或其片段、或適體或寡核苷酸?？贵w可以是能 特異性結(jié)合VGF肽生物標(biāo)記的單克隆抗體或其片段。根據(jù)本發(fā)明的配體可 以用可檢測的標(biāo)志物標(biāo)記，例如發(fā)光標(biāo)志物、熒光標(biāo)志物或》文射性標(biāo)志物； 替代地或另外地，本發(fā)明的配體還可用親和標(biāo)簽進(jìn)行標(biāo)記。才艮據(jù)本發(fā)明的生物傳感器可包括本文所述的 一種或多種能特異性結(jié) 合VGF肽生物標(biāo)記的配體。這類生物傳感器可用于本發(fā)明的肽的檢測和/ 或定量。根據(jù)本發(fā)明的生物傳感器可包括能特異性結(jié)合針對VGF肽生物標(biāo)記 的抗體的VGF肽生物標(biāo)記或其結(jié)構(gòu)/形狀才莫擬物。還提供了包括本文所述的能特異性結(jié)合VGF肽生物標(biāo)記的配體的陣 列，或者包括VGF肽生物標(biāo)記或其結(jié)構(gòu)/形狀模擬物的陣列。提供了用于實行本發(fā)明方法的診斷或監(jiān)測試劑盒。這類試劑盒應(yīng)適當(dāng) 地包括用于VGF肽生物標(biāo)記的檢測和定量的根據(jù)本發(fā)明的配體，和/或本 文所述的生物傳感器，和/或陣列，任選地還帶有試劑盒的4吏用說明書。本發(fā)明還提供了本文所述的配體或本發(fā)明的生物傳感器或本發(fā)明的 陣列或本發(fā)明的試劑盒用于對VGF肽生物標(biāo)記或其片段的檢測和/或定量 的用途，所述配體可為天然存在的或化學(xué)合成的，適當(dāng)?shù)乜蔀殡?、抗體或 其片段、適體或寡核苷酸。在上述用途中，檢測和/或定量可在生物樣本 上進(jìn)行，所述生物樣本例如CSF、全血、血清、尿液、唾液或其他體液、 呼出的氣例如濃縮的呼出氣，或者來自上述樣本的提取物或純化物，或者 上述樣本的稀釋物。精神分性裂障礙或雙相型情感障礙的生物標(biāo)記是尋找可以延緩或阻 抑疾病進(jìn)程的藥物分子和新靶標(biāo)的關(guān)鍵目標(biāo)。由于VGF生物標(biāo)記肽的水平 是障礙和藥物反應(yīng)的標(biāo)志物，因此生物標(biāo)記可以在體外和/或體內(nèi)測定中 用于識別新的治療性化合物。本發(fā)明的生物標(biāo)記可應(yīng)用于篩選化合物的方
法中，所述化合物能調(diào)節(jié)本發(fā)明的VGF肽生物標(biāo)記的活性或抑制該VGF肽 生物標(biāo)記的生成。因此，本發(fā)明的另 一方面提供本文所述的配體、本發(fā)明的生物傳感器、 本發(fā)明的陣列、或本發(fā)明的試劑盒用于識別能夠抑制VGF肽生物標(biāo)記生成 的物質(zhì)的用途，所述配體可為根據(jù)本發(fā)明的肽、抗體或其片段或適體或寡 核苷酸。因此，還提供了識別能夠抑制受試者中的VGF肽生物標(biāo)記生成的物質(zhì) 的方法，所述VGF肽生物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1的^J^酸序列或其 片段組成，所述方法包括向受試動物給予測試物質(zhì)，并對來自受試者的測 試樣本中存在的所述肽的水平進(jìn)行檢測和/或定量。任何合適的動物都可用作除人外的受試動物，例如除人外的靈長動 物、馬，牛，豬，山羊，綿羊，狗，貓，魚，嚙齒動物例如豚鼠、大鼠或 小鼠；昆蟲(例如果蠅("roso;7h7a))，兩棲類(例如非洲蟾蛤(Je/ o/w;y)) 或線蟲(C e7柳/ s)。測試物質(zhì)可為已知的化學(xué)物質(zhì)或藥物學(xué)物質(zhì)，例如包括但不限于抗精 神分裂性障礙或抗雙相型障礙的治療劑，例如已知的抗精神病藥物；或者 測試物質(zhì)可為新合成的或天然的化學(xué)實體，或者為前述兩種或多種物質(zhì)的 組合。還提供了識別能夠抑制受試者的VGF生物標(biāo)記肽生成的物質(zhì)的方法， 所述VGF肽生物標(biāo)記優(yōu)選地由SEQ ID NO: 1的氨基酸序列或其片段組成， 所述方法包括將測試細(xì)胞暴露于測試物質(zhì)，并監(jiān)測所述測試細(xì)胞內(nèi)的或由 所述測試細(xì)胞分泌的VGF肽生物標(biāo)記的水平。在基于細(xì)胞的測試方法中， 測試細(xì)胞可為原核細(xì)胞，但是優(yōu)選使用真核細(xì)胞。合適地，真核細(xì)胞可為 酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、果蠅細(xì)胞、兩棲動物細(xì)胞(例如來自非洲蟾蜍的細(xì) 胞)、線蟲細(xì)胞；或來源于人類、除人外的靈長類、馬、牛、豬、山羊、 綿羊、狗、貓、魚、嚙齒類或鼠類的細(xì)胞。在識別具有潛在治療用途的物質(zhì)的方法中，可以使用能夠表達(dá)下列一 種或多種多肽的除人外的動物或細(xì)胞，所述多肽選自人類VGF多肽和蛋白 水解酶類，優(yōu)選地為能切割人類VGF多肽的人類蛋白水解酶類。篩選方法還包括識別能與本發(fā)明的VGF生物標(biāo)記肽結(jié)合的配體的方 法，所述方法包括在存在生物標(biāo)記肽以及適于結(jié)合的條件下孵育測試物 質(zhì)，并對所述肽與所述測試物質(zhì)的結(jié)合進(jìn)行檢測和/或定量。
在VGF生物標(biāo)記肽是由SEQ ID NO: 1所示序列(人類VGF的23至 62位氨基酸)或其片段組成的肽的情況下，如果測試物質(zhì)不結(jié)合人類VGF 蛋白或由人類VGF的26至62位^酸組成的蛋白(N端的三肽被截短的 序列)，就表明有特異性結(jié)合?；诒景l(fā)明的生物標(biāo)記、用途和方法的高通量篩選技術(shù)，例如以陣列 形式構(gòu)型的技術(shù)，適于監(jiān)測用于鑒定能結(jié)合生物標(biāo)記的可能有用的治療化 合物的生物標(biāo)記信號，所述化合物例如配體例如天然化合物、化學(xué)合成化 合物(例如來自組合文庫)肽、單克隆抗體或多克隆抗體或其片段。本發(fā)明的方法可以陣列形式進(jìn)行，例如在芯片上或以多孔陣列的形式 進(jìn)^f亍。所述方法可適用于進(jìn)4亍單次測試或多次相同測試或多次不同測試的 平臺，還可以以高通量形式進(jìn)行。本發(fā)明的方法可以包括進(jìn)《亍一次或多次 另外的不同的測試，以確認(rèn)診斷或排除診斷，和/或進(jìn)一步表征某種病癥。本發(fā)明還提供了用本發(fā)明的識別方法或篩選方法或用途識別的或能 夠識別的物質(zhì)，例如配體。這類物質(zhì)能夠直接或間接地抑制VGF生物標(biāo)記 肽的活性，或者能抑制VGF生物標(biāo)記肽的生成。術(shù)語"物質(zhì)"包括不直接 結(jié)合VGF生物標(biāo)記肽，也不直接抑制其功能，但是間接抑制VGF生物標(biāo)記 肽功能的抑制性物質(zhì)。配體也包括在物質(zhì)這一術(shù)語中，本發(fā)明的配體(例 如天然的或化學(xué)合成的化合物、肽、適體、寡核苷酸、抗體或抗體片段) 能夠結(jié)合VGF生物標(biāo)記肽，優(yōu)選地能特異性結(jié)合VGF生物標(biāo)記肽。本發(fā)明還提供了根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)或配體用于治療精神分性裂障礙、 雙相型障礙或其素因的用途。還提供了根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)用作藥物的用途。還進(jìn)一步提供了根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)用于制備治療精神分性裂障礙、雙 相型障礙或其素因的藥物中的用途。還提供了用于診斷或監(jiān)測精神分性裂障礙、^M目型障礙或其素因的試 劑盒。適當(dāng)?shù)兀鶕?jù)本發(fā)明的試劑盒可包括一種或多種選自下列的組成部 分特異性針對VGF肽生物標(biāo)記的配體；VGF肽生物標(biāo)記或VGF肽生物標(biāo) 記的結(jié)構(gòu)/形狀模擬物；對照物、反應(yīng)試劑和消耗試劑；任選地還含有試 劑盒的使用說明書。對精神分性裂障礙和雙相型障礙的生物標(biāo)記的識別使得可以將診斷 過程和治療方案進(jìn)行整合。目前在確定有效的療法時會有明顯的延誤，而 且迄今為止還不能夠?qū)λ幬锓磻?yīng)作出迅速的評估。對于既定的治療方法，
通常許多對抗精神分裂性障礙和雙相型障礙的治療都需要長達(dá)幾周至幾個月的治療試驗過程。根據(jù)本發(fā)明的對VGF生物標(biāo)記的檢測可用于在進(jìn)4亍 臨床試驗前篩選受試者。生物標(biāo)記提供了指示下列指標(biāo)的手段治療反應(yīng)、 無反應(yīng)、不良副作用情況、藥物順應(yīng)性程度以;5UL夠的血清藥物水平。生 物標(biāo)記可以用于提供不良藥物反應(yīng)的警示，不良藥物反應(yīng)是所有精神性藥 物都會面臨的一個主要問題。由于對反應(yīng)的評估可用于劑量孩i調(diào)、盡量減 少處方藥物的數(shù)量、減少獲得有效治療的延誤時間和避免不良的藥物反 應(yīng)，因此生物標(biāo)記可用于開發(fā)個性化的腦部療法。因此，通過監(jiān)測本發(fā)明 的生物標(biāo)記，可以精確地訂制患者的護(hù)理方案，以滿足由該患者的障礙和 藥物基因組學(xué)特征決定的需求，因此，可使用生物標(biāo)記來逐步調(diào)整到最佳 劑量、預(yù)測陽性治療反應(yīng)以及識別具有嚴(yán)重副作用的高風(fēng)險的患者?；谏飿?biāo)記的檢測提供對于"新"患者的一線評估，并且提供了用 于正確和快速診斷的客觀量度，這種客觀量度的速度和準(zhǔn)確性是使用目前 的主觀量度無法達(dá)到的。本發(fā)明的生物標(biāo)記使得可以用鑒別診斷將精神分 性裂障礙和雙相型障礙從其它具有相似或相同癥狀的障礙或病癥中區(qū)別 出來。此外，診斷性生物標(biāo)記測試可用于識別處于"前驅(qū)癥狀期"的患者或 家庭成員，即具有發(fā)展為明顯精神分性裂障礙或雙相型障礙的高風(fēng)險的那 些人。這使得可以啟用合適的治療物質(zhì)例如低劑量的抗精神病藥，或者啟 動預(yù)防性措施例如控制危險因素，所述危險因素例如壓力、^吏用違禁藥品 或病毒感染。這些手段被認(rèn)為可以改善治療效杲并且可能防止明顯地出現(xiàn) 障礙。生物標(biāo)記監(jiān)測方法、生物傳感器和試劑盒作為患者監(jiān)測工具也同樣重 要，可以使醫(yī)生確定疾病的復(fù)發(fā)是是否由于純粹的再次發(fā)作還是由于疾病 的惡化、患者順應(yīng)性不良或者藥物濫用。由于生物標(biāo)記對于障礙的狀態(tài)十 分敏感，因此它提供了藥物療法或藥物濫用的影響的指示。如果藥物學(xué)治 療被評估為不足，可能就要重新進(jìn)行或加強(qiáng)治療。對于純粹的再次發(fā)作， 適當(dāng)?shù)那闆r下可改變療法。本發(fā)明的生物標(biāo)記測試使得可以將由藥物濫用 引起的精神病發(fā)作與精神分性裂障礙或^M目型障礙的復(fù)發(fā)區(qū)別開。使用現(xiàn) 有技術(shù)進(jìn)行評估可能會做出不正確的診斷，并導(dǎo)致使用短期針對癥狀的抗 精神病藥物的療法，而該療法并不適用于藥物引發(fā)的精神病，因為這種精 神病是自身限制性的，并且會隨著違禁藥物的停用(wash-out)而減輕。
因此，本發(fā)明的生物標(biāo)記為精神分性裂障礙、^M目型障礙及其素因提供了 正確的診斷和治療性干預(yù)的手段。


圖1. CSF中的大小為3. 96kDa的精神分裂癥特異性生物標(biāo)記(SEQ ID NO: 1的肽)。在本次研究中包括取自40名健康志愿者和40名首次出現(xiàn)精 神病發(fā)作(將會發(fā)展為精神分性裂障礙或^M目型障礙)的未治療的受試者 的腦脊液(CSF)樣本。在各種pH條件下，將每個CSF樣本的5 ju 1等分 試樣加到每個測試的蛋白質(zhì)芯片(每一個都具有不同的化學(xué)性質(zhì))上。發(fā) 現(xiàn)最佳條件是在強(qiáng)陰離子交換Q10芯片上pH為9. 0的條件，以上參數(shù)的 選擇基于所分辨的峰的數(shù)目和分離度。然后使用SELDI質(zhì)譜分析結(jié)合到芯 片表面的蛋白質(zhì)/肽。來自健康志愿者的圖鐠實例示于圖1A。采集每一圖 傳中的峰強(qiáng)度并用ProteinChipM軟件(Ciphergen， Fremont, USA)進(jìn)4亍 分析。觀察到3. 96kDa處的峰加強(qiáng)(如圖1B所示)。在3. 69kDa處的峰沒 有區(qū)別，即為構(gòu)成3. 96kDa峰的肽(N端)少于三個氛基酸的截短形式(見 圖3B,測序數(shù)據(jù)未示出)。圖1C顯示的是健康志愿者和首次出現(xiàn)精神病發(fā) 作的患者的3. 96kDa峰的相對強(qiáng)度。圖2.鑒定SEQ ID NO: 1的3. 96kDa的肽為VGF肽片段。將50ju 13. 96kDa峰最高表達(dá)的CSF樣本用10kDa的截留柱(cut-off column) 處理，以除去較大的蛋白質(zhì)。然后，用C18 Ziptip(Millipore， Billericak， USA)將流出皿鹽，并用0.1%甲酸/50。/。7JC化乙腈洗脫肽。將洗脫液分為 1 ju 1的等分試樣，直接上樣至ESI-MS/MS (用于從頭測序)和SELDI質(zhì)譜 儀(用于確認(rèn)富集的3. 96kDa峰)的納米噴射頭中。SELDI謙中的3. 96kDa 的峰與帶6+電荷的3. 95肽(m/z 659. 9,近似質(zhì)量)相吻合。該肽的MS/MS 語示于圖2B至圖2D。圖中標(biāo)出了指定的優(yōu)勢離子以及它們分別的電荷狀 態(tài)。i普中主要為y系列和b系列的離子，和產(chǎn)生于雙片段化(標(biāo)記為by 離子)的離子。為了清楚起見，通過脫水或脫氨產(chǎn)生的次級片段離子沒有 標(biāo)出。圖2A顯示了由MS/MS語得出的M^列。圖3.該生物標(biāo)記肽在VGF蛋白中的位置圖示。A. 3. 96kDa的肽(或從ESI-MS/MS i瞽得出的3. 95kDa的肽)定位在天 然VGF蛋白(用粗體和下劃線表示)的23位至62位氨基酸(SEQ ID NO:1)，并緊接著預(yù)計的分泌信號肽(使用InterProScan:歐洲生物信息研究 所 ( European Bioinformatics Institute ) : www, ebi. ac. uk/cgibin/iprscan )。該3. 96kDa的肽具有SEQ ID NO: l所B. 3. 96kDa的肽和3. 69kDa的肽的序列比對。使用ES/MS-MS進(jìn)行的 從頭測序顯示CSF中的3. 69kDa的肽是3. 96kDa的肽缺少三個氨基酸(在 N端)的較短形式(數(shù)據(jù)未示出)，它在健康志愿者和首次出現(xiàn)精神病發(fā)作 的患者的CSF中表達(dá)沒有差異(p=0. 87)。這表明3. 96kDa的VGF化ft于 存在首次精神病發(fā)作的病癥(即精神分性裂障礙和/或雙相型障礙)有高 度的特異性。圖4.患有精神分裂癥的患者和年齡相當(dāng)?shù)膶φ照叩那邦~皮質(zhì)中的成 熟全長人類VGF肽生物標(biāo)記的蛋白質(zhì)印跡分析。實施例材料從年齡相當(dāng)?shù)慕】祩€體(n=40)和首次出現(xiàn)精神分性裂障礙/雙相型 障礙的明顯癥狀的精神病發(fā)作的患者(未^f吏用藥物)(n-40)身上取得CSF 樣本。所有化學(xué)試劑均獲自Sigma公司。蛋白質(zhì)芯片和基質(zhì)獲自Ciphergen 公司(Guildford, UK )。用于SELDI分析的CSF樣本的制備將5plCSF的各等分試樣用強(qiáng)陰離子交換(Q10)芯片按照廠商的說 明書(CiphergenBiosystems)進(jìn)行處理。筒而言之，使用結(jié)合緩沖液(IOO mM Tris-HCI， pH 9. Q )在室溫下振蕩(頻率為5Hz )預(yù)激活陣列點，預(yù)激 活兩次，每次10分鐘。然后將50pl結(jié)合緩沖液加至每個蛋白質(zhì)點上，然 后每個點加入5 ju 1的CSF樣本。將蛋白質(zhì)芯片在振蕩器上室溫孵育30分鐘。 將芯片用結(jié)^^緩沖液洗滌兩次，再用HPLC級1120洗滌一次后空氣干燥。然 后將芯片連續(xù)用1 ji 1的溶于50°/。乙腈和0. 5°/。的三氟乙酸的飽和度100°/。的芥 子酸(3， 5-二甲錄-4-羥基肉桂酸)處理兩次。用Ciphergen ProteinChip Reader (PBSn型)分析芯片。每個樣本分析兩次，以確保識別差異表達(dá)的 蛋白質(zhì)的可重復(fù)性。Ciphergen ProteinChipW的SELDI-TOF-MS分沖斤。使用Ciphergen Proteinchip Reader (PBSII型)分析陣列。使用fct 強(qiáng)度為230-280任意單位的平均65次激光斗擊產(chǎn)生蛋白質(zhì)的質(zhì)譜。為獲取 低分子量蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù)，檢測的大小范圍為3至20kDa之間，最大大小為 25kDa。激光聚焦于10kDa。檢測器靈^tti殳置為8，激光強(qiáng)>^:沒置為190。 對于高分子量的蛋白質(zhì)，檢測大小范圍為20至150kDa之間，最大大小為 250kDa。 ^聚焦于85kDa。檢測器靈4t^設(shè)置為9， ^it強(qiáng)座j殳置為260 (對于1: 4的稀釋度)和280。陣列表面捕獲的每種蛋白質(zhì)的質(zhì)荷比UA) 根據(jù)下述外部校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物(Ciphergen Biosystems )測定牛胰島素(5733. 6 Da)、人類泛素(8564. 8 Da )、牛細(xì)胞色素c ( 12230.9 Da )、牛超氧化物歧 化酶(15591. 4 Da )、牛oc-乳5求蛋白A( 18363. 3 Da )、 1^f艮過氧化物酶(43240 Da)、 BSA ( 66410 Da )和雞伴清蛋白(77490 Da )。CSF肽的LC-MS-MS分析。使用具有10kDa名義分子量(nominal molecular weight)截留值的 Nanosep (Pall Corporation)離心超濾裝置從50pl的CSF樣本中除去蛋 白質(zhì)。在C18 ZipTipTM (Waters)上通過固相微提取使濾液的等^^樣(5 ja 1)脫鹽，將0.1%曱酸/50°/。水化乙腈洗脫的肽(1 jLi 1)直接上樣至納米噴 射頭(Protana Engineering )。將納米噴射頭插入至與四極桿飛行時間質(zhì)譜 儀(quadupole-time-of-flight mass spectrometer) (Qstar Pulsar i， Applied Biosystems-MDS Sciex )相連接的納米電噴霧離子源(Protana Engineering )，然后在350-1500原子質(zhì)量單位的m/z范圍內(nèi)用5至10分鐘 獲取全掃描T0F語。在50-1700原子質(zhì)量單位的m/z范圍內(nèi)獲取MS/MS謙， 直到獲得足夠的信噪比為止。在數(shù)據(jù)采集過程中優(yōu)化了碰撞能量，以便得到 最寬的片段離子的范圍。人工解析MS/MS的數(shù)據(jù)以便提取"序列標(biāo)簽"，使用該標(biāo)簽和 BioAnalyst""軟件(Applied Biosystems)可以檢索NCBI服DB數(shù)據(jù)庫。檢 索結(jié)果通過對MS/MS數(shù)據(jù)的進(jìn)一步人工解析來證實。統(tǒng)計學(xué)分析使用PROTEINCHIP加數(shù)據(jù)分析軟件3. 0(Ciphergen Biosystems )
來分析數(shù)據(jù)。對于每一次比較，都使用被比較的組中所有曲線的總離子電流對原始的強(qiáng)度數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。對于4氐分子量范圍，將峰強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化為m/z 在3000至25000 Da的范圍內(nèi)的總離子電流；對于高分子量范圍，將峰強(qiáng)度 標(biāo)準(zhǔn)化為m/z在4000至250000 Da的范圍內(nèi)的總離子電流。使用Biomarker Wizard application (非^f^i:計算；Ciphergen Biosystems )來編譯所有的 譜，并自動檢測已定量的質(zhì)量峰。使用質(zhì)量窗的0.2%進(jìn)行二次峰篩選 (second-pass peak selection)來完成對峰的標(biāo)記,還力口入了估計的峰。 對各組曲線(正常受試者和精神病首:^作的受試者)進(jìn)行了樣本統(tǒng)計。計 算各組間了蛋白質(zhì)差異(倍數(shù)改變)。在患有精神分裂癥的患者的前額皮質(zhì)中VGF肽上調(diào)。隨才;Li^擇了八^Nt神分裂癥的腦部和八個對照腦部(前額皮質(zhì)，人口統(tǒng) 計學(xué)變量相匹配)。使用多克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc. ， (VGF R-15): sc-10383;針對大鼠來源的VGF的j^端產(chǎn)生的經(jīng)親和純化的山羊多克隆抗體)對死后的腦部前額皮質(zhì)組織提取物進(jìn)行了蛋白質(zhì)印跡分析。發(fā)現(xiàn) 與對照相比，VGF肽生物標(biāo)記(圖3A中不含信號肽的成熟人類VGF)在已證 實患有精神分裂癥的4名患者中(共8名患者)顯著上調(diào)(圖4 )。在另外 的實驗中(10例對照和10例診斷有精神分裂癥的患者)也得到了相似的結(jié) 果(數(shù)據(jù)未示出)。這一結(jié)果與SELDI質(zhì)譜的數(shù)據(jù)相結(jié)合，表明成熟VGF肽 生物標(biāo)記與精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，因此可用作精神分裂癥的診斷標(biāo)記 /預(yù)后標(biāo)記和/或治療耙標(biāo)。參考文獻(xiàn)1. Thaker GK, Carpenter WT, Jr.: Advances in schizophrenia. Waf Med 7:667-671,2001.2. Susser E, Wanderling丄Epidemiology of nonaffective acute remitting psychosis vs schizophrenia. Sex and sociocultural setting. A/ch G節(jié)PsycWafry 51:294-301， 1994.
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權(quán)利要求
1.VGF肽作為精神分裂性障礙、雙相型障礙或其素因的生物標(biāo)記的用途，所述VGF肽由SEQ ID NO1所示的氨基酸序列或其片段組成。
2. —種精神分裂性障礙、雙相型障礙或其素因的VGF肽生物標(biāo)記，所述 VGF肽由SEQ ID NO: 1所示的#^*列或其片_^^且成。
3. —種診斷或監(jiān)測精神分裂性障礙、刃4目型障礙或其素因的方法，所述方 法包括對來自測試受試者的生物樣本中存在的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行檢 測和/或定量，所述VGF肽生物標(biāo)記由SEQ ID NO: 1的^J^酸序列或 其片段組成。
4. 一種監(jiān)測治療受試者的效果的方法，所述受試者患有精神分裂性障礙或 雙相型障礙、疑似患有這類障礙或被懷疑具有其素因，所述方法包括對 來自所述受試者的生物樣本中存在的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行檢測和/或定 量，所述VGF肽生物標(biāo)記由SEQ IDNO: 1的^酸序列或其片賴j且成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的方法，所述方法包括對在兩個或多個時 才幾取自測試受試者的生物樣本中存在的VGF肽生物標(biāo)記進(jìn)行檢測和/或 定量，所述VGF肽生物標(biāo)記由SEQ IDNO: 1的M酸序列或其片段組 成。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的方法，所述方法還包括對兩個或多個時 機(jī)得到的樣本中的VGF肽生物標(biāo)記水平進(jìn)行比較。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4至6任一項的方法，所述方法包括將所述測試樣本中的肽生物標(biāo)記的量與治療開始前從所述受試者處獲得的一個或多個樣本中存在的量相比較，和/或與治療早期從所述受試者獲得的一個或多 個樣本中存在的量相比較。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4至7任一項的方法，所述方法還包括對兩個或多個時機(jī) 得到的樣本中的肽生物標(biāo)記的量的變化進(jìn)行檢測。
9. 根據(jù)權(quán)利要求3至8任一項的方法，所述方法包括將所述測試樣本中存 在的肽生物標(biāo)記的量與一種或多種對照物進(jìn)行比較。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的診斷精神分裂性障礙、雙相型障礙或其素因的方法， 包括(a )對測試生物樣本中存在的VGF生物標(biāo)記肽進(jìn)行定量，所述VGF生 物標(biāo)記肽由SEQ ID NO: l或其片段組成；(b)將所述測試樣本中所述肽的量與來自正常受試者的正常對照生物 樣本中存在的量進(jìn)行比較。
11. 根據(jù)權(quán)利要求3至10任一項的方法，其中在進(jìn)行抗精神分裂性障礙或 抗^目型障礙治療之前和/或之中和/或^取樣。
12. 根據(jù)權(quán)利要求3至11任一項的方法，其中在受試者剩余生命的全部或 部分的時間內(nèi)間隔取樣。
13. 根據(jù)權(quán)利要求3至12任一項的方法，其中通過測量所述樣本中所述VGF 生物標(biāo)記肽或其片段的量ii行定量。
14. 根據(jù)權(quán)利要求3至13任一項的方法，其中檢測和/或定量可通過選自 下列的一種或多種方法進(jìn)行SELDI (-TOF )和/或MALDI (-TOF )、 一 維凝膠分析、二維凝膠分析、質(zhì)鐠(MS)技術(shù)和基于LC-MS的技術(shù)。
15. 根據(jù)權(quán)利要求3至14任一項的方法，其中使用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測和/ 或定量。
16. 根據(jù)權(quán)利要求3至15任一項的方法，其中使用生物傳感器進(jìn)行檢測和/ 或定量。
17. 根據(jù)權(quán)利要求3至16任一項的方法，其中所述生物樣本為CSF、全血、 血清、尿液、唾液或其他體液、或呼出的氣、濃縮的呼出氣，或者來 自上述樣本的提取物或純化物，或者上述樣本的稀釋物。
18. —種能特異性結(jié)合由SEQ ID NO: 1的M酸序列或其片殺i且成的VGF 肽生物標(biāo)記的配體。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18的配體，所述配體包括能特異性結(jié)合由SEQ ID NO: 1 的M酸序列或其片段組成的VGF肽生物標(biāo)記的肽。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18或權(quán)利要求19的配體，所述配體為特異性針對由SEQ ID NO: 1所示M酸序列或其片段組成的VGF肽生物標(biāo)記的抗體。
21. 根據(jù)權(quán)利要求22的配體，其中所述抗體為單克隆抗體。
22. 根據(jù)權(quán)利要求18至21任一項的配體，所述配體標(biāo)記有可檢測的標(biāo)志物。
23. 根據(jù)權(quán)利要求22的配體，其中所述可檢測的標(biāo)志物為發(fā)光標(biāo)志物、焚 光標(biāo)志物或》文射性標(biāo)志物。
24. 根據(jù)權(quán)利要求18至23任一項的配體，所述配體標(biāo)i沐親和標(biāo)簽。
25. —種生物傳感器，含有根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項的配體。
26. —種生物傳感器，含有可以結(jié)合根據(jù)權(quán)利要求18至25任一項的配體的 生物傳感器配體。
27. —種陣列，含有根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項的配體。
28. —種陣列，含有具有SEQ ID N0: 1的絲齡列或其片段的VGF肽生 物標(biāo)記。
29. —種診斷或監(jiān)測試劑盒，含有根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項的配體，任 選i4J^^有試劑盒的^f吏用說明書。
30. —種診斷或監(jiān)測試劑盒，含有根據(jù)權(quán)利要求25或26的生物傳感器，任 選M舍有試劑盒的使用說明書。
31. —種診斷或監(jiān)測試劑盒，含有根據(jù)權(quán)利要求27或權(quán)利要求28的陣列， 任選to含有試劑盒的使用說明書。
32. 根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項的配體、肽、抗體或其片段，或者才艮據(jù)權(quán) 利要求25或26的生物傳感器，或者根據(jù)權(quán)利要求27或28的陣列，或 者根據(jù)權(quán)利要求29至31的試劑盒，用于對由SEQ ID NO: 1或其片段 組成的VGF肽生物標(biāo)i^測和/或定量的用途。
33. 根據(jù)權(quán)利要求32的用途，其中所述的檢測和/或定量是對下列的生物樣 ^ii行的，所述生物樣本選自CSF、全血、血清、尿液、唾液或其他 體液、或呼出的氣、濃縮的呼出氣，或者來自上述樣本的提取物或純 化物，或者上述樣本的稀釋物。
34. 根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項的配體、抗體或其片段，或者根據(jù)權(quán)利要 求25或26的生物傳感器，或者根據(jù)權(quán)利要求27或28的陣列，或者根 據(jù)權(quán)利要求29至31的試劑盒，用于識別受試者中能夠抑制由SEQ ID N0: 1的M酸序列肽的生成的物質(zhì)的用途。
35. —種識別受試者中能夠抑制由SEQ ID NO: 1的M酸序列組成的VGF 肽生物標(biāo)記生成的物質(zhì)的方法，所述方法包括給予受試動物一種測試物 質(zhì)，并對所述受試者體內(nèi)存在的所述VGF肽生物標(biāo)記或其片段的水平進(jìn) 行檢測/定量。
36. —種識別受試者中能夠抑制由SEQ ID NO: 1的^酸序列組成的VGF 肽生物標(biāo)記生成的物質(zhì)的方法，所述方法包括將測試細(xì)胞暴露于測試物 質(zhì)，并監(jiān)測所述測試細(xì)胞內(nèi)的或由所述測試細(xì)胞分泌的SEQ IDN0: 1 的肽或其片段的水平。
37. 才艮據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中所述測試細(xì)胞為真核細(xì)胞。
38. 根據(jù)權(quán)利要求36或37的方法，其中所述真核細(xì)胞為酵母細(xì)胞、昆蟲 細(xì)胞、果蠅細(xì)胞、線蟲細(xì)胞；或來源于人類、除人外的靈長類、馬、 牛、豬、綿羊、狗、貓、魚、嚙齒類或鼠類的細(xì)胞。
39. 根據(jù)權(quán)利要求36至38任一項的方法，其中所述動物或細(xì)胞為經(jīng)基因工 程改造的能表達(dá)下列一種或多種多肽的除"卜的動物或細(xì)胞，所述一種 或多種多肽選自人類VGF多肽和能切割人類VGF多肽的人類蛋白水解 酶。
40. —種識別能夠結(jié)合由SEQ ID NO: 1的M酸序列組成的VGF肽生物標(biāo) 記的配體的方法，所述方法包括在存在由SEQ ID NO: 1的M酸序列 組成的肽以及適于結(jié)合的條件下孵育測試物質(zhì)，并對所述肽與所述測 試物質(zhì)的結(jié)合進(jìn)行檢測和/或定量。
41. 一種識別能夠特異性結(jié)合由SEQ ID NO: 1的M酸序列組成的肽的配 體的方法，所述方法包括在由SEQ ID NO: 1的^J^酸序列組成的JIU^ 在的條件下孵育測試物質(zhì)，并對所述肽與所述測試物質(zhì)的特異性結(jié)合進(jìn) 行檢測和/或定量，其中如果測試物質(zhì)不結(jié)合人類VGF蛋白質(zhì)或由人類 VGF的26至62位M酸組成的蛋白質(zhì)，就表明有特異性結(jié)合。
42. 根據(jù)權(quán)利要求3至17、 32至34或36至41任一項的方法或用途，所述 方法或用途以芯片、陣列和/或多孔陣列的形式實行。
43. 根據(jù)權(quán)利要求3至27、 32至34或36至42任一項的方法，所述方法以 高通量形式實行。
44. 通it^利要求34至43任一項的方法或用途識別出或能夠識別出的物質(zhì) 或配體。
45. 根據(jù)權(quán)利要求18至24任一項或權(quán)利要求44的物質(zhì)或配體，所述物質(zhì) 或配體能夠抑制由SEQ ID N0: 1的M酸序列組成的肽的活性。
46. 才緣權(quán)利要求18至24或44至45任一項的物質(zhì)或配體，所述物質(zhì)或配 體能夠抑制由SEQ ID NO: 1的M酸序列組成的肽的生成。
47. 根據(jù)權(quán)利要求18至24或44至46任一項的配體，所述配體為能夠與由 SEQ ID NO: 1的M酸序列組成的肽特異性結(jié)合的肽、抗體或其片段。
48. 根據(jù)權(quán)利要求44至47任一項的物質(zhì)或配體用于治療精神分裂性障礙、 ^目型障礙或其素因的用途。
49. 根據(jù)權(quán)利要求44至47任一項的物質(zhì)或配體用作藥物的用途。
50. 根據(jù)權(quán)利要求44至47任一項的物質(zhì)或配體用于制備治療精神分裂性障 礙、X5^目型障礙或其素因的藥物的用途。
51. —種用于診斷或監(jiān)測精神分裂性障礙、^目型障礙或其素因的試劑盒， 所述試劑盒包括選自下列的一種或多種組成部分特異性針對SEQ ID NO: 1或其片段的VGF肽生物標(biāo)記的配體、SEQ ID NO: 1或其片段的VGF肽生 物標(biāo)記、SEQ ID NO: 1或其片段的VGF肽生物標(biāo)記的結(jié)構(gòu)/形狀模擬物、能 夠與特異性針對SEQ ID NO: 1或其片段的VGF肽生物標(biāo)記的配體相結(jié)合的 配體、 一種或多種對照物、反應(yīng)試劑和消耗試劑；任選i4iE含有試劑盒的使 用i兌明書。
全文摘要
本發(fā)明提供了精神分裂性障礙和雙相型障礙的生物標(biāo)記，以及與該生物標(biāo)記相關(guān)的診斷、監(jiān)測和篩選方法，以及施行該方法所用的試劑盒。
文檔編號C07K14/435GK101120250SQ200680004894
公開日2008年2月6日 申請日期2006年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月14日
發(fā)明者J·黃, S·巴恩 申請人:劍橋企業(yè)有限公司