專利名稱：格爾德霉素衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類新的格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物、通過發(fā)酵制備該類化合物的方法，以及該類化合物用于制備細胞周期抑制劑、細胞增殖抑制劑及抗腫瘤藥物的用途。
背景技術：
格爾德霉素最早于1970年從鏈霉菌產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)[C.DeBoer，et al.；Geldanamycin，a new antibioticJ.Antibiot.，1970，23(9)，442-447]，其后，從微生物產(chǎn)物中或通過人工合成陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多同類化合物并發(fā)現(xiàn)該類化合物具有多種生物活性。如文獻[M.Muroi，et al.；The structuresof macbecin I and IITetrahedron，1981，37，pp.1123-1131]、文獻[R.C.Schnur，et al.；Inhibition of the oncogene product p185erbB-2in vitro andin vivo by geldanamycin and dihydrogeldanamycin derivativesJ.Med.Chem.，1995，38，3806-3812]、文獻[M.Bendin，et al.；Geldanamycin，aninhibitor of the chaperone activity of HS90，induces MAPK-independentcell cycle arrestInt.J.Cancer，2004，109，643-652]、文獻[Z.-Q.Tian etal.；Synthesis and biological activities of novel 17-aminogeldanamycinderivativesBioorg.Med.Chem.，2004，12，5317-5329]以及文獻[J.-Y.L.Brazidec，et al.；Synthesis and biological evaluation of a new class ofgeldanamycin derivatives as potent inhibitors of Hsp90J.Med.Chem.，2004，47，3865-3873]等都曾記載了天然或人工合成的格爾德霉素類化合物及其生物活性。該類化合物的生物活性多與熱休克蛋白90有關。熱休克蛋白90是細胞內(nèi)最活躍的一種分子伴侶，許多信號傳導途徑均依賴于熱休克蛋白90，并且，它在腫瘤細胞中的表達比正常細胞高出2～10倍，在腫瘤細胞生長和存活中可能起重要的調(diào)節(jié)作用。格爾德霉素類化合物能與熱休克蛋白90特異性結(jié)合并抑制其功能，導致多種癌基因產(chǎn)物和細胞周期調(diào)控蛋白的降解，從而顯示抗癌等多種生物活性，因此，該類化合物受到了癌癥研究者的極大關注和深入研究。其中，17-烯丙胺-17-脫甲氧格爾德霉素(17-AAG)作為治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物產(chǎn)品在歐洲剛剛上市，而在美國則正在進行治療腫瘤的II期臨床試驗。
格爾德霉素類化合物屬于苯醌安莎霉素類抗生素，它們的結(jié)構(gòu)特征是一個苯醌片段與一個大環(huán)安莎橋相連，形成大環(huán)內(nèi)酰胺苯醌的骨架結(jié)構(gòu)。從結(jié)構(gòu)類型上，從迄今已有記載的所有格爾德霉素類化合物中，尚未看到具有與本發(fā)明化合物相同的苯醌衍生片段結(jié)構(gòu)的同類化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種具有細胞周期抑制等抗腫瘤活性的新的格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物。
本發(fā)明人通過堅韌不拔的努力，發(fā)現(xiàn)了下述式I所示的一類具有細胞周期抑制活性的新結(jié)構(gòu)類型的格爾德霉素類化合物 式I其中，R1-R4各自獨立地代表氫、羥基、氨基、羥基取代的C1-6烷基或C1-6烷氧基。
本發(fā)明上述式I化合物的一個結(jié)構(gòu)特征是格爾德霉素骨架結(jié)構(gòu)中對苯醌的一個羰基被加成并還原，使原有的對苯醌結(jié)構(gòu)片斷成為一個2，5-環(huán)己二烯-1-酮結(jié)構(gòu)片斷，并且在該片段中的原羰基碳上還連接了一個通過碳-碳鍵相連的碳鏈取代基。本發(fā)明上述式I化合物的另一個結(jié)構(gòu)特征是所形成的2，5-環(huán)己二烯-1-酮進一步與一個五元二氧雜環(huán)稠合，形成一個二氧雜五元環(huán)并環(huán)己二烯酮的雙環(huán)結(jié)構(gòu)片斷。
因此，本發(fā)明的第一個方面涉及式I所示的格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物及其藥學上可接受的鹽 式I其中，R1-R4各自獨立地代表氫、羥基、氨基、羥基取代的C1-6烷基或C1-6烷氧基。
本發(fā)明的第二個方面涉及制備式I化合物的方法，所述方法包括通過發(fā)酵培養(yǎng)能生產(chǎn)式I化合物的微生物，如鏈霉菌屬的假輪枝鏈霉菌(Streptomyces pseudoverticillus)，首先獲取含有式I化合物的發(fā)酵物，繼而再從發(fā)酵物中經(jīng)過分離純化得到式I化合物。
本發(fā)明的第三個方面涉及含有作為活性成分的式I格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物以及一種或多種藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明的第四個方面涉及式I格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物用于制備細胞周期抑制劑、腫瘤細胞增殖抑制劑和抗腫瘤劑的用途。
在本發(fā)明的一個實施方式中，本發(fā)明涉及式I所示的格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物及其藥學上可接受的鹽 式I其中，R1-R4各自獨立地代表氫、羥基、氨基、羥基取代的C1-6烷基或C1-6烷氧基。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及式I格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物及其藥學上可接受的鹽 式I
其中，R1為羥基；R2-R4各自獨立地代表羥基或甲氧基。
在本發(fā)明進一步優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及式I格爾德霉素類苯醌羰基的加成衍生物及其藥學上可接受的鹽 式I其中，R1和R3為羥基，R2和R4為甲氧基。
本發(fā)明的式I化合物可通過微生物發(fā)酵法來制取，具體而言，通過發(fā)酵培養(yǎng)能生產(chǎn)式I化合物的微生物，首先獲取含有式I化合物的發(fā)酵物，再從發(fā)酵物中分離純化而得到式I化合物。
所述分離純化包括利用本領域技術人員熟知的天然產(chǎn)物分離純化的常規(guī)方法，如液液萃取、柱層析、薄層層析及重結(jié)晶等。
所述能夠生產(chǎn)式I化合物的微生物包括鏈霉菌屬的生產(chǎn)菌。在本發(fā)明的實施例中，所用生產(chǎn)菌是從西雙版納土壤樣品中分離，并經(jīng)分類學研究鑒定為假輪枝鏈霉菌如鏈霉菌屬的假輪枝鏈霉菌(Streptomycespseudoverticillus)的YN17707株。該菌株已于2005年9月6日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址中國北京市海淀區(qū)中關村北一條13號)，保藏編號為1452(CGMCC No.1452)，其具有如下微生物菌學特征
各種培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征培養(yǎng)特征在高氏合成一號瓊脂、葡萄糖天門冬素瓊脂、無機鹽淀粉瓊脂、酵母精麥芽瓊脂、燕麥粉瓊脂、馬鈴薯塊等六種培養(yǎng)基上，于28攝氏度培養(yǎng)7～10天后觀察氣生菌絲和基內(nèi)菌絲的顏色和色素的產(chǎn)生等情況，有關特征見表1。
表1 菌株YN17707在6種培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征

形態(tài)特征在高氏合成一號瓊脂和葡萄糖天門冬素瓊脂上28攝氏度培養(yǎng)7～10天后，用光學顯微鏡和電子顯微鏡，按常規(guī)方法進行菌絲及孢子表面特征的觀察，結(jié)果觀察到菌絲無橫隔，不斷裂；氣生菌絲呈假輪生狀，一根主軸，兩側(cè)不對稱地生有孢子絲，在孢子絲頂端彎曲成圈環(huán)狀；孢子卵圓形，表面略有突起(光學顯微鏡電子顯微鏡照片略)。
化學分類特征胞壁化學組分分析按照Lechevalier的薄層層析(TLC)法進行了該菌株全細胞水解液氨基酸和糖型分析，結(jié)果表明，YN17707菌株全細胞水解液含有LL-DAP(左旋二氨基庚二酸，Diaminopimelic acid)，甘氨酸；無特征性糖(糖型C)。細胞壁化學組分屬于I型。
生理生化特征參照《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》Vol.IV的內(nèi)容對菌株進行了生理生化鑒定。該YN17707菌株的生理生化特征見表2。
表2 菌株YN17707的生理生化特征

根據(jù)上述實驗結(jié)果，將該菌株鑒定為鏈霉菌屬的假輪枝鏈霉菌(Streptomyces pseudoverticillus)YN17707。
需要特別說明的是本發(fā)明通過微生物發(fā)酵法來制取式I化合物的方法可以采用但絕不僅限于采用假輪枝鏈霉菌(Streptomycespseudoverticillus)YN17707，鏈霉菌屬的其它任何微生物只要能生產(chǎn)式I化合物均可作為生產(chǎn)菌用于制備式I化合物。
本發(fā)明采用流式細胞術，測試了式I化合物對小鼠乳腺癌tsFT210細胞的細胞周期抑制和細胞凋亡誘導等作用。經(jīng)實驗證實，式I化合物可顯著抑制癌細胞的細胞周期周轉(zhuǎn)，從而對腫瘤細胞顯示出抑制其增殖的生物學活性，因而具有抗腫瘤作用。
本發(fā)明中的術語“藥學上可接受的鹽”可以是藥用無機或有機鹽。本發(fā)明式I中具有堿性基團的化合物可以與無機酸形成藥用鹽，例如硫酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽；也可與有機酸形成藥用鹽，例如乙酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽等。本發(fā)明式I中具有酸性基團的化合物可以與堿金屬或堿土金屬形成藥用鹽，優(yōu)選但不限于鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽。
本發(fā)明的式I化合物可與各種藥物上可接受的載體、賦形劑或輔料配伍制成抗腫瘤藥物，用于腫瘤的治療。
本發(fā)明化合物可單獨或以藥物組合物的形式給藥。給藥途徑可以是口服、非腸道或局部給藥。藥物組合物可根據(jù)給藥途徑配成各種適宜的劑型。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可以以下面的任意方式施用口服，噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥，如皮下，靜脈，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)，鞘內(nèi)，心室內(nèi)，胸骨內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植儲器用藥。其中優(yōu)選口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥方式。
當口服用藥時，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。任選地，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。
當皮膚局部施用時，本發(fā)明化合物可制成適當?shù)能浉?、洗劑或霜劑制劑形式，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。軟膏制劑可使用的載體包括但不限于礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用的載體包括但不限于礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、吐溫60、十六烷酯蠟、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
本發(fā)明化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本發(fā)明化合物使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化合物的活性強度、服用時間、代謝速率、病癥的嚴重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.01～100mg/kg體重/天。
本發(fā)明的式I化合物還可作為抑制細胞周期的低分子生物探針用于生命科學研究中。當把式I化合物用于生命科學研究中時，可溶于甲醇或含水甲醇中，也可溶于二甲基亞砜的含水溶液中加以應用。


圖1是非同步化培養(yǎng)的小鼠乳腺癌tsFT210細胞經(jīng)化合物I處理17小時后測得的流式細胞直方圖；圖2是G2期同步化的小鼠乳腺癌tsFT210細胞經(jīng)化合物I處理4小時后測得的流式細胞直方圖。
具體實施例方式下列實施例將進一步說明本發(fā)明，但并不對本發(fā)明構(gòu)成限制。
在以下實施例中，稱為化合物I的本發(fā)明化合物經(jīng)核磁共振等鑒定具有如下結(jié)構(gòu) 化合物I在結(jié)構(gòu)研究中，熔點用北京天地宇科技有限責任公司X-4型精密顯微熔點測定儀測定，溫度未校正。比旋光度用JSASCO P-1020型旋光儀測定。正負離子ESI-MS和HR-ESI-MS分別用美國ABI公司API 3000型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀和英國Micromass公司LCT型質(zhì)譜儀測定，紫外光譜用Shimadzu UV2501PC型紫外分光光度儀測定，紅外光譜用Nicolet Magna-IRTM550型紅外光譜儀測定，核磁共振譜用JEOLEclips-600型超導核磁共振儀(600MHz1H-NMR，150MHz13C-NMR)測定。
實施例1.化合物I的發(fā)酵生產(chǎn)及分離精制發(fā)酵生產(chǎn)生產(chǎn)菌株 本實施例中用于發(fā)酵生產(chǎn)化合物I的產(chǎn)素菌從采自西雙版納的土壤樣品中分離并經(jīng)分類學研究鑒定為假輪枝鏈霉菌(Streptomyces pseudoverticillus)YN17707。
發(fā)酵培養(yǎng) 按微生物培養(yǎng)的常規(guī)方法，取假輪枝鏈霉菌(Streptomyces pseudoverticillus)YN17707適量，接種到茄形瓶中高氏合成一號瓊脂固體斜面培養(yǎng)基上，在28攝氏度培養(yǎng)箱中活化培養(yǎng)7天。取活化培養(yǎng)7天的茄形瓶斜面，加入15毫升無菌水，用接種針刮下孢子，制成孢子懸液，倒入接種瓶中，接入含20升液體種子培養(yǎng)基(含豆粉0.5％，可溶性淀粉1.5％，甘油1.5％，蛋白胨1.5％，CaCO30.2％；滅菌前調(diào)pH7.4)的50升發(fā)酵罐中，28攝氏度培養(yǎng)48小時。取種子培養(yǎng)液，按10％的接種量接入含120升發(fā)酵培養(yǎng)基(組成與種子培養(yǎng)基相同)的250升發(fā)酵罐中，在罐壓為0.8個大氣壓、溫度為28攝氏度、轉(zhuǎn)速為350rpm的條件下發(fā)酵培養(yǎng)4天，獲得發(fā)酵物約120升。
化合物I的制備和分離將上述發(fā)酵物過濾，分為濾液和菌絲體兩部分。濾液直接用等量的氯仿萃取三次；菌絲體用80％丙酮水溶液提取，減壓濃縮至無丙酮味，所得水混懸液用等量氯仿萃取三次。合并由濾液和菌絲體得到的氯仿萃取液，減壓濃縮、干燥，得到含化合物I的氯仿萃取物70克。
取氯仿萃取物30克，用適量氯仿溶解，加50克青島海洋化工廠產(chǎn)硅膠G(200-300目)攪拌干燥，添加到裝有300克薄層層析用硅膠60H(青島海洋化工廠產(chǎn)品)的玻璃減壓柱上，進行減壓柱層析，用氯仿-甲醇梯度(100∶0→80∶20)洗脫，接收每500ml為一個餾分，得到若干餾分。根據(jù)薄層檢測及活性測試結(jié)果，合并餾分，得到含化合物I的活性組分Fr-3(氯仿-甲醇90∶10洗脫部位)。將該活性組分Fr-3溶于適量氯仿中，加適量硅膠G(200-300目)，攪拌干燥，添加到裝有適量薄層層析用硅膠60H的玻璃減壓柱上，以氯仿-甲醇(30∶1)為洗脫劑進行減壓柱層析，接取含化合物I的層析組分，經(jīng)制備硅膠薄層層析(石油醚-丙酮13∶7展開)及Sephadex LH-20凝膠柱(氯仿)精制，得到化合物I(4mg)。
化合物I的理化常數(shù)與波譜數(shù)據(jù)化合物I為淡黃色無定型粉末，溶于氯仿、甲醇、乙醇，不溶于水，[α]D27+34.3°(c 0.25，氯仿)。正離子ESI-MS m/z619[M+H]+；負離子ESI-MS m/z617[M-H]-。負離子HR-ESI-MS m/z實測值617.3066[M-H]-，計算值617.3070，與分子式C32H46O10N2相符。UVλmaxnm(logε)in MeOH275(4.25)。IR vmaxcm-1(KBr)3365，3205，2929，1722，1660，1620，1514。1H與13C NMR數(shù)據(jù)見表3。
表3 化合物I在氘代氯仿中的600MHz1H和150MHz13C NMR數(shù)據(jù)a)


a)本表信號歸屬基于DEPT、PFG1H-1H COSY、PFG HMQC及PFG HMBC圖譜解析結(jié)果。b)此欄中的數(shù)字代表在PFG1H-1H COSY譜中與相應行中的1H給出偶合相關信號的1H核。c)此欄中的數(shù)字分別代表在PFG HMBC(1JCH＝8Hz)中與相應行中的碳信號HMBC信號的1H核。
實施例2.化合物I的活性測試實驗樣品及實驗方法被測樣品溶液的配制測試樣品為上述實施例I中分離精制的純品化合物I。精密稱取適量樣品，用甲醇配成所需濃度的溶液，供測活性。
細胞系及細胞的繼代培養(yǎng)活性測試采用溫敏型小鼠乳腺癌tsFT210細胞系，細胞用含10％FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基，在32攝氏度于通入5％二氧化碳的細胞培養(yǎng)箱中繼代培養(yǎng)。
流式細胞術活性測試方法非同步化培養(yǎng)測試法取對數(shù)生長期的tsFT210細胞，用新鮮的RPMI-1640培養(yǎng)基配制成密度為每毫升2×105個細胞的細胞懸液，按每孔0.5毫升接種于24孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加入5微升不同濃度的樣品溶液，32攝氏度下培養(yǎng)17小時。將細胞從24孔細胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移至1.5毫升Eppendorf離心管中，4攝氏度下每分鐘3000轉(zhuǎn)離心3分鐘，吸去上清液，加0.5毫升磷酸緩沖溶液(PBS)震蕩洗滌一次，相同條件下離心收集細胞，加150微升碘化丙啶(PI)水溶液(在100毫升水中含5毫克PI、100毫克檸檬酸鈉和200毫克NP-40)，4攝氏度下染色30分鐘后，加入180微升PBS稀釋，用流式細胞儀分析測定細胞中的DNA含量。細胞在細胞周期各時相中的分布利用庫爾特公司產(chǎn)計算機軟件WinCycle進行分析計算。
同步化培養(yǎng)測試法取對數(shù)生長期的tsFT210細胞，用新鮮的RPMI-1640培養(yǎng)基配制成密度為每毫升2×105個細胞的細胞懸液，按每孔0.5毫升接種于24孔細胞培養(yǎng)板中，置于39.4攝氏度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)17小時，使細胞在細胞周期的G2期同步化。再往每孔細胞中分別加入5微升待測樣品的甲醇溶液，置于32攝氏度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時。將細胞從24孔細胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移至1.5毫升Eppendorf離心管中，4攝氏度下每分鐘3000轉(zhuǎn)離心3分鐘，吸去上清液，加0.5毫升PBS震蕩洗滌一次，相同條件下離心收集細胞，加150微升碘化丙啶水溶液，4攝氏度下染色30分鐘后，加入180微升PBS稀釋，用流式細胞儀分析測定細胞中的DNA含量。細胞在細胞周期各時相中的分布利用庫爾特公司產(chǎn)計算機軟件WinCycle進行分析計算。
實驗結(jié)果非同步化培養(yǎng)法測試結(jié)果非同步化培養(yǎng)的tsFT210細胞經(jīng)用不同濃度的化合物I處理17小時后測得的流式細胞術直方圖見附圖1。化合物I在5μM～20μM的濃度范圍內(nèi)顯示出一定的細胞周期G2/M期抑制活性，而在40μM以及40μM以上濃度時則主要將細胞周期抑制在G0/G1期(參見附圖1)。
同步化培養(yǎng)法測試結(jié)果用不同濃度的化合物I處理G2期同步化的tsFT210細胞4小時后測得的流式細胞術直方圖見附圖2?；衔颕對G2期同步化的tsFT210細胞顯示出較強的細胞周期G2/M期抑制活性，而且從2.5μM開始呈較好的劑量依賴性抑制作用(參見附圖2)。
結(jié)論化合物I將癌細胞阻滯在細胞周期的G0/G1期或G2/M期，從而抑制其增殖，因此化合物I可用作為細胞周期抑制劑、腫瘤細胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑。
權(quán)利要求
1.式I化合物，或其藥學上可接受的鹽 式I其中，R1-R4各自獨立地代表氫、羥基、氨基、羥基取代的C1-6烷基或C1-6烷氧基。
2.權(quán)利要求1的式I化合物，其中，R1為羥基；R2-R4各自獨立地代表羥基或甲氧基。
3.權(quán)利要求1的式I化合物，其中，R1和R3為羥基，并且R2和R4為甲氧基。
4.權(quán)利要求1的式I化合物的制備方法，該方法包括通過發(fā)酵培養(yǎng)能生產(chǎn)式I化合物的微生物，首先獲取含有該類化合物的發(fā)酵物，繼而再從發(fā)酵物中分離純化得到式I化合物。
5.權(quán)利要求4的方法，所述能生產(chǎn)式I化合物的微生物為鏈霉菌屬的假輪枝鏈霉菌YN17707，即CGMCC No.1452。
6.藥物組合物，其含有作為活性成分的權(quán)利要求1的式I化合物以及一種或多種藥用載體或賦形劑。
7.權(quán)利要求1所述的式I化合物用于制備細胞周期抑制劑和腫瘤細胞增殖抑制劑的用途。
8.權(quán)利要求1所述的式I化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。
9.假輪枝鏈霉菌YN17707CGMCC No.1452。
10.權(quán)利要求9所述菌株用于生產(chǎn)權(quán)利要求1-3任一項的化合物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有以下式I的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中，R
文檔編號C07D317/00GK1986546SQ20061016540
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月19日
發(fā)明者崔承彬, 韓冰, 蔡兵 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所