專利名稱：阿托伐他汀鈣的氧化降解產(chǎn)物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于有機化學(xué)領(lǐng)域，涉及阿托伐他汀鈣的氧化降解產(chǎn)物及其制備方法。本發(fā)明還涉及基本上不含氧化降解產(chǎn)物的阿托伐他汀鈣和含有此阿托伐他汀鈣的藥物組合物。
藥物活性物質(zhì)的純度已經(jīng)一直被認為是確保藥物安全性和質(zhì)量的重要因素。在本領(lǐng)域眾所周知的是，在生產(chǎn)藥物活性物質(zhì)的過程中，多步不同復(fù)雜步驟的結(jié)果不僅是所需的產(chǎn)物，而且還包括結(jié)構(gòu)與化合物密切相關(guān)的雜質(zhì)。此外，許多藥物活性物質(zhì)對環(huán)境的影響敏感，例如溫度、pH、濕度、光、氣體、氧氣、二氧化碳，以及在處理或儲存過程中環(huán)境介質(zhì)的反應(yīng)活性。這些環(huán)境因素的影響可導(dǎo)致藥物活性化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橛行酝ǔ５陀诨钚曰衔锏慕到猱a(chǎn)物。降解產(chǎn)物除有效性較低外，還可能引起不期望的副作用，從而對用藥安全產(chǎn)生不利的影響。即使在活性物質(zhì)中存在極少百分比的雜質(zhì)或降解產(chǎn)物也可能顯著損害藥物的安全性。因此，用藥時藥物活性物質(zhì)盡可能純是非常重要的；這意味著在藥物活性物質(zhì)中存在的降解產(chǎn)物和雜質(zhì)的百分比應(yīng)該最小。
此外，藥物劑型中使用的藥用賦形劑也可影響藥物活性物質(zhì)中存在的降解產(chǎn)物和雜質(zhì)的量。藥用賦形劑自身的降解產(chǎn)物可充當(dāng)反應(yīng)活性位點觸發(fā)藥物劑型中的藥物活性物質(zhì)的降解反應(yīng)。
多種藥物活性物質(zhì)對氧化降解的敏感性在Waterman，K.C.等人的“藥物對氧化降解的穩(wěn)定性”(“Stabilization of Pharmaceuticals to OxidativeDegradation”，Pharmaceutical Development and Technology，7(1)，2002，1-32)一文中有描述，它也展示了使藥物活性物質(zhì)對氧化降解穩(wěn)定的可能途徑。上述文章提出，固體藥物劑型的氧化機理研究是困難和費力的，因為該機理在所述領(lǐng)域幾乎沒有報告指出，然而該文章教導(dǎo)，活性物質(zhì)本身以及更大程度上是藥物劑型中的活性物質(zhì)可以發(fā)生氧化。Byrn，S.R.等人(Solid-State Chemistry of Drugs，第2版，SSCI，West Lafayette，1999)公開來自大氣的分子氧與有機晶體反應(yīng)，其反應(yīng)活性取決于活性物質(zhì)的晶形和形態(tài)，它們分別決定對氧的可通透性及其在晶格中的溶解性。在某些實例中反應(yīng)活性隨熔點的升高表現(xiàn)出降低，提示較高的晶格能抑制氧的擴散。
至今已經(jīng)采用了不同的方法來防止或減少藥物制劑中活性物質(zhì)的氧化，例如1.在氧化由賦形劑中過氧化物和金屬雜質(zhì)的存在引起的情況下，增加藥物制劑中活性物質(zhì)的濃度；2.添加螯合劑(例如枸櫞酸、EDTA、富馬酸和馬來酸)用于除去賦形劑中存在的金屬雜質(zhì)；3.使用高純度的藥用賦形劑；4.使用供選的藥用賦形劑，或者減少藥物組合物中賦形劑的量，特別是當(dāng)賦形劑由于過氧化物雜質(zhì)成為氧化的起因時；5.使用能夠防止或減少藥物組合物中過氧化物形成的抗氧化劑。然而，此類抗氧化劑不能同時降低已存在的過氧化物的水平。先前已經(jīng)描述過一些適宜的抗氧化劑，包括-鏈終止劑(如硫醇類和苯酚類)；-比活性物質(zhì)更易被氧化且由此除去存在的氧的還原劑，(如亞硫酸鹽和抗壞血酸)，其中它們的組合可協(xié)同起作用(如抗壞血酸棕櫚酸酯與生育酚的組合)；-依據(jù)Fenton方法的原理降解過氧化物的過氧化物“清除劑”(如Fe2+)。然而它們的使用有限，因為通過這種方法可形成游離羥基，它可進一步誘導(dǎo)自由基反應(yīng)且由此誘導(dǎo)活性物質(zhì)的降解。
-掩蓋活性物質(zhì)受氧化位點的環(huán)糊精(Waterman，K.C.等人，藥物對氧化降解的穩(wěn)定性，Pharmaceutical Development and Technology，7(1)，2002，1-32)然而，個別活性物質(zhì)不可能達到最佳模式，并且在本領(lǐng)域幾乎不能獲得出版物(Waterman，K.C.等人，藥物對氧化降解的穩(wěn)定性，PharmaceuticalDevelopment and Technology，7(1)，2002，1-32)。
阿托伐他汀鈣，其化學(xué)名為(R-(R*，R*))-2-(4-氟苯基)-β，δ-二羥基-5-(1-甲基乙基)-3-苯基-4-((苯氨基)-羰基)-1H-吡咯基-1-庚酸的半鈣鹽，已知為3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑。它首次在美國專利No.5273995中被述及。阿托伐他汀鈣及其關(guān)鍵中間體的制備方法在美國專利號5,003,080、5,097,045、5,103,024、5,124,482、5,149,837、5,155,251、5,216,174、5,245,047、5,248,793、5,280,126、5,342,952和5,397,792中有描述。
HMG-CoA還原酶抑制劑已知是對環(huán)境pH、濕度、光、溫度、二氧化碳和氧氣敏感的藥物活性物質(zhì)。它們已知是有效治療與脂質(zhì)和膽固醇代謝相關(guān)的血脂異常癥和心血管疾病的治療活性物質(zhì)，所述的血脂異常癥和心血管疾病選自血脂異常癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠狀動脈疾病、冠心病等。他汀類化合物的作用機理是通過抑制人或動物肝臟中膽固醇和其他甾醇的生物合成而實現(xiàn)的。它們是HMG-CoA還原酶或3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A的競爭性抑制劑，所述的酶催化人或動物肝臟中HMG-CoA還原酶向甲羥戊酸的轉(zhuǎn)化，該轉(zhuǎn)化是肝臟中膽固醇生物合成的一個重要步驟。最近的研究表明，除上述的治療作用以外，他汀類藥物還具有其它治療作用，因此，它們可用于治療選自血管病癥、炎性疾病、變應(yīng)性疾病、神經(jīng)變性疾病、惡性疾病、病毒性疾病(WO 0158443)、異常骨狀態(tài)(WO 0137876)、淀粉樣-β前體蛋白加工紊亂如阿爾茨海默氏病或唐氏綜合征(WO 0132161)的疾病、異常狀況和紊亂。
迄今為止，關(guān)于如何避免阿托伐他汀物質(zhì)中氧化產(chǎn)物的存在幾乎沒有報導(dǎo)，阿托伐他汀鈣的降解產(chǎn)物以前也沒有被鑒別。通過在惰性氛圍中進行的制備方法和在惰性氛圍中用適宜包裝進行的包裝來防止阿托伐他汀鈣的氧化在斯洛文尼亞專利申請SI P-200200244中有描述。阿托伐他汀鈣的一種降解產(chǎn)物(化學(xué)名為3-(4-氟-苯甲酰基)-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺)的結(jié)構(gòu)及其通過光解反應(yīng)的制備在Hurley，T.R.等人，Tetrahedron 49，1993，1979-1984一文中有描述。
鑒于獲得具有高純度水平的活性物質(zhì)的重要性，有必要對活性物質(zhì)和/或藥物組合物中存在的每種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物進行鑒定。對活性物質(zhì)或藥物組合物中存在的每種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物進行表征對如下的那些活性物質(zhì)而言是特別重要的對所述的活性物質(zhì)而言，雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物對特定分析方法(如HPLC)的響應(yīng)因子與活性物質(zhì)的響應(yīng)因子不同。換句話說，在這種情況下，盡管事實上雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的真實水平超出了允許值，但是根據(jù)管理要求，可發(fā)生如下情形活性物質(zhì)被宣布為是可藥用的。
通過鑒定阿托伐他汀鈣和/或其藥物組合物中存在的三種氧化降解產(chǎn)物，本發(fā)明以技術(shù)上簡單的方法和高的收率滿足了本領(lǐng)域的如下要求獲得高純度形式且具有低含量氧化降解產(chǎn)物的阿托伐他汀鈣產(chǎn)品。
本發(fā)明的一個目的涉及新化合物，它們是阿托伐他汀鈣的氧化降解產(chǎn)物，具有如下化學(xué)式與化學(xué)名a)式I化合物 化學(xué)名為4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸(下文稱為ATV-環(huán)IP)；b)式II化合物
化學(xué)名為4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺(下文稱為ATV-環(huán)氧呋喃)；c)式III化合物 化學(xué)名為4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸(下文稱為ATV-環(huán)FP)。
Hurley，T.R.等人在Tetrahedron 49，1993，1979-1984一文中所述的阿托伐他汀鈣的氧化降解產(chǎn)物具有如下化學(xué)式IV
化學(xué)名為3-(4-氟-苯甲?；?-2-異丁酰基-3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺(下文稱為ATV-環(huán)氧二酮)。
阿托伐他汀鈣的氧化降解可用下圖表示 本發(fā)明的式I、II、III和IV化合物作為氧化降解產(chǎn)物存在于阿托伐他汀鈣物質(zhì)中，因此非常重要的是，它們的量應(yīng)當(dāng)最小并且它們應(yīng)當(dāng)僅以非常小的量被檢測到。作為雜質(zhì)，它們顯示出對患者有毒性或在其它方面有害的危險。出于這些原因，它們在物質(zhì)中的存在應(yīng)當(dāng)最小是必要的。另一方面，精確監(jiān)測這些雜質(zhì)的水平是非常重要的，因此應(yīng)當(dāng)正確和準確地測定它們的含量，例如通過采用用于定量分析的標準物(已知化學(xué)結(jié)構(gòu)和已知測定法的化合物)。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化學(xué)式I、II、III和IV化合物的新的制備方法。
本發(fā)明的新化合物可通過使鹽形式的固體阿托伐他汀(例如作為鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或銨鹽)在空氣或氧氣氛圍中在升高溫度如40-90℃下氧化來制備。反應(yīng)可持續(xù)一至數(shù)天。氧化可在阿托伐他汀鹽在水和/或有機溶劑和/或溶劑的混合物中的溶液中通過在約40℃至90℃的溫度下加入過氧化氫或向溶液中充入空氣或氧氣來進行，所述溶劑例如是乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、二氯甲烷。固體阿托伐他汀鹽可通過任何已知方法制備。
本發(fā)明的新化合物還可如下制備通過將阿托伐他汀鹽溶液暴露在日光或人工日光下，使鹽形式的阿托伐他汀(例如作為鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或銨鹽)進行光氧化。阿托伐他汀鹽可通過任何已知方法制備。
通過上述方法制備的本發(fā)明的新化合物可通過制備型正相或反相色譜法進行分離。
在制備型正相色譜法中，可采用硅膠或基于硅膠的鍵合相如氨基丙基、氰基丙基、二醇或硝基苯基鍵合固定相。流動相包含極性調(diào)節(jié)劑醇(如甲醇、乙醇、丙醇)或乙腈的混合物以及非極性溶劑(如己烷、二氯甲烷、甲基環(huán)己烷或兩種以上上述溶劑的組合)的混合物。
在制備型反相色譜法中，可采用鍵合于硅膠的十八烷基硅膠或辛基硅膠。流動相包含水與有機或無機緩沖劑的混合物(濃度為5mm至100mm，pH為2至8)以及包含一種或多種選自醇(例如甲醇、乙醇和丙醇)或乙腈的有機調(diào)節(jié)劑。
在本發(fā)明的新化合物的分離中可采用一步或多步色譜步驟。在色譜步驟中所用的溶劑可通過蒸發(fā)和/或冷凍干燥除去。
通過上述方法制備和分離的本發(fā)明的新化合物通過質(zhì)譜法和核磁共振光譜法進行結(jié)構(gòu)鑒定以測定所述新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。鑒定方法及其結(jié)果在下述實施例中顯示。
在制備穩(wěn)定的阿托伐他汀鈣組合物的研發(fā)工作期間，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)阿托伐他汀鈣與空氣或更精確地說與氧接觸時發(fā)生降解。驚奇的是，使用多種不同的抗氧化劑(例如丁羥茴醚、丁羥甲苯、富馬酸、沒食子酸丙酯、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、抗壞血酸鈉)不能防止或減少氧化降解產(chǎn)物的形成。令人驚奇的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過降低阿托伐他汀鈣或包含阿托伐他汀鈣的藥物組合物的環(huán)境大氣中氧的含量，可顯著減少阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的形成。所觀察到的氧化降解產(chǎn)物的減少與環(huán)境大氣中氧含量的降低呈線性比例。這種氧含量的降低可通過用惰性氣體(如氮氣或氬氣)替換氧來進行，或者通過降低阿托伐他汀鈣周圍的大氣壓來進行。
除了在惰性氛圍中進行阿托伐他汀鈣的制備方法及在惰性氛圍中儲存之外，監(jiān)測阿托伐他汀鈣物質(zhì)及含有該物質(zhì)的藥物組合物中存在的氧化降解產(chǎn)物的量是非常重要的。對于測定不期望化合物的量，有必要提供這些化合物的標準物(這意味著已知化學(xué)結(jié)構(gòu)和測定法的化合物)以能夠進行精確的定量分析。在雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物在例如HPLC分析中的響應(yīng)因子與活性物質(zhì)的響應(yīng)因子不同的情況下，這尤為重要。HPLC分析通常用于藥物活性物質(zhì)和藥物組合物中的雜質(zhì)測定。
驚奇的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)在250nm進行HPLC分析時，阿托伐他汀鈣物質(zhì)中存在的某些化合物表現(xiàn)出與阿托伐他汀鈣本身不同的響應(yīng)因子。換句話說，與阿托伐他汀鈣本身相比，本發(fā)明的式I新化合物表現(xiàn)出0.41的響應(yīng)因子，本發(fā)明的式II新化合物表現(xiàn)出0.72的響應(yīng)因子，本發(fā)明的式III新化合物表現(xiàn)出0.48的響應(yīng)因子，本發(fā)明的式IV新化合物表現(xiàn)出1.20的響應(yīng)因子。
活性物質(zhì)和/或藥物組合物中雜質(zhì)的含量對于藥物安全而言是一個重要因素，因此應(yīng)當(dāng)使雜質(zhì)含量最小。這對于降解產(chǎn)物而言尤其重要，因為它們在藥物中的含量在藥物儲存期間上升。
本發(fā)明的另一目的是提供基本上不含氧化降解產(chǎn)物的阿托伐他汀鈣及含有所述阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明提供了基本上純的阿托伐他汀鈣，其包含少于約0.29重量％的氧化降解產(chǎn)物。
本發(fā)明提供了基本上純的阿托伐他汀鈣，其包含少于約0.09重量％的ATV-環(huán)IP。
本發(fā)明提供了基本上純的阿托伐他汀鈣，其包含少于約0.05重量％的ATV-環(huán)氧呋喃。
本發(fā)明提供了基本上純的阿托伐他汀鈣，其包含少于約0.09重量％的ATV-環(huán)FP。
本發(fā)明提供了基本上純的阿托伐他汀鈣，其包含少于約0.06重量％的ATV-環(huán)氧二酮。
下表1顯示了進行制備過程中暴露于不同氛圍條件下的阿托伐他汀鈣中存在的每種氧化降解產(chǎn)物的量。
當(dāng)阿托伐他汀鈣在室溫下在空氣氛圍中制備或儲存時，形成了氧化降解產(chǎn)物。當(dāng)阿托伐他汀鈣在氮氣氛圍中儲存時這種情況可以避免。
表1當(dāng)阿托伐他汀鈣在空氣和氮氣氛圍中制備時阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的含量。所有物質(zhì)用響應(yīng)因子1.00進行分析。
表2在空氣或氮氣氛圍中制備的阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的含量。ATV-環(huán)IP用響應(yīng)因子0.41、ATV-環(huán)氧呋喃用響應(yīng)因子0.72、ATV-環(huán)FP用響應(yīng)因子0.48和ATV-環(huán)氧二酮用響應(yīng)因子1.20進行分析。
考慮氧化降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子為1.00的表1與考慮所測定的響應(yīng)因子的表2之間的比較顯示了含量值的重要差別。當(dāng)未采用雜質(zhì)的標準物而應(yīng)用響應(yīng)因子1.00時，在空氣或氮氣氛圍中制備的阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的測定值低于采用確切響應(yīng)因子所測定的值。采用響應(yīng)因子1.00測定的氧化降解產(chǎn)物的含量也可能低于0.10％的閾值，根據(jù)普遍接受的藥物規(guī)則雜質(zhì)在該閾值之上應(yīng)當(dāng)被鑒別出。并且，由于具有大于1.00響應(yīng)因子的事實，采用響應(yīng)因子1.00所測定的ATV-環(huán)氧二酮的含量在采用確切響應(yīng)因子所測定的值之上。
ATV-環(huán)IP采用響應(yīng)因子0.41、ATV-環(huán)氧呋喃采用響應(yīng)因子0.72、ATV-環(huán)FP采用響應(yīng)因子0.48和ATV-環(huán)氧二酮采用響應(yīng)因子1.20進行所有另外的分析。
表3室溫下(如25℃)在空氣或氮氣氛圍中儲存24個月的阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的含量
本發(fā)明提供了一種包含基本上純的阿托伐他汀鈣(其包含少于約0.6重量％的氧化降解產(chǎn)物)和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種包含基本上純的阿托伐他汀鈣(其包含少于約0.2重量％的ATV-環(huán)IP)和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種包含基本上純的阿托伐他汀鈣(其包含少于約0.1量％的ATV-環(huán)氧呋喃)和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種包含基本上純的阿托伐他汀鈣(其包含少于約0.2重量％的ATV-環(huán)FP)和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種包含基本上純的阿托伐他汀鈣(其包含少于約0.1重量％的ATV-環(huán)氧二酮)和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
表4配制成片劑藥物制劑形式、在Al/Al泡罩中于室溫下(如25℃)和在空氣或氮氣氛圍下儲存24個月的阿托伐他汀鈣中氧化降解產(chǎn)物的含量
表3和表4顯示的結(jié)果表明，當(dāng)阿托伐他汀鈣或片劑形式的含有阿托伐他汀鈣的藥物制劑在室溫下在空氣氛圍中儲存24個月時，氧化降解產(chǎn)物顯著增加。當(dāng)阿托伐他汀鈣在氮氣氛圍中儲存時這種情況可以避免。
本發(fā)明的藥物組合物可以以劑型向哺乳動物給藥。該劑型含有本發(fā)明的基本上純的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑，所述賦形劑選自稀釋劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、矯味劑、增甜劑、防腐劑、染色劑和其它制備藥物組合物中所采用的賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物可以是制藥工業(yè)中采用的任何劑型，例如片劑、口服可分散制劑、膠囊、小丸、顆粒劑等?？刹捎玫獨饣驓鍤庾鳛槎栊詺怏w來維持惰性氛圍。藥物組合物可在Al/Al泡罩、Al-聚氯-3-氟乙烯均聚物/PVC層狀泡罩(laminate blister)或瓶中在惰性氛圍中儲存。
本發(fā)明的藥物組合物可用于治療高膽固醇血癥和高脂血癥。
本發(fā)明可通過以下實施例來說明，但決非局限于以下實施例。
實施例1化合物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮的制備與分離將5克阿托伐他汀鈣在氧氣氛圍中于80℃下在200ml氣密性容器中儲存30天。然后將由此制備的樣品溶于50％的乙腈/水(體積/體積)中，進行制備型色譜法。
制備型色譜法氧化降解產(chǎn)物的分離在反相色譜上進行。為得到純的化合物，具有不同流動相的兩步色譜分離是有必要的。
第一步分離在裝備有Luna prep C18(2)10μm柱(200mm×50mm)和紫外檢測器(設(shè)置在250nm)的制備型HPLC色譜上進行。兩種流動相溶劑A和B分別是10mM pH為4.5的乙酸銨和95％乙腈/5％四氫呋喃(體積/體積)。流速為140ml/min。采用以下梯度形式
收集到四份級分；第一和二份級分的pH用1M氫氧化鉀調(diào)節(jié)至8-9，第三和四份級分的pH用1M鹽酸調(diào)節(jié)至2-3。將級分減壓蒸發(fā)。水浴溫度保持在30℃以下并且冷凝器用0℃水冷卻。
將所有四份級分另外純化以獲取純的物質(zhì)。
第一份級分的純化第一份級分的純化條件與第一步分離的條件相同，除了流動相A為10mM碳酸氫銨。采用以下梯度形式
收集到一份級分；pH用1M氫氧化鉀調(diào)節(jié)至8-9。將該級分以與第一步色譜分離后相同的方式減壓蒸發(fā)。通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出170mg純的ATV-環(huán)IP化合物(4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸)。色譜純度為97.2％。
第二份級分的純化第二份級分純化的色譜條件與第一步分離的條件相同，除了流動相A溶劑為70％10mM磷酸鹽緩沖液(pH7.0)/25％乙腈/5％四氫呋喃(體積/體積/體積)以及采用以下梯度形式
收集到一份級分并減壓蒸發(fā)。將濃縮的級分裝載于反相柱上，緩沖鹽用水洗出，ATV-環(huán)FP化合物用80％乙腈、20％水(體積/體積)從柱上洗脫出來。
通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出185mg純的ATV-環(huán)FP化合物(4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸)。色譜純度為97.5％。
第三份級分的純化第三份級分純化的色譜條件與第一步分離的條件相同，除了流動相A溶劑為5mM鹽酸以及采用以下梯度形式
收集到一份級分并以與第一步分離所得的級分相同的方式減壓蒸發(fā)。通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出205mg純的ATV-環(huán)氧呋喃化合物(4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3-1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺)。色譜純度為93.6％。
第四份級分的純化第四份級分純化的色譜條件與第三份級分純化的條件相同，除了采用以下梯度形式
收集到一份級分并以與第一步分離所得的級分相同的方式減壓蒸發(fā)。通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出50mg純的ATV-環(huán)氧二酮化合物(3-(4-氟-苯甲酰基)-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺)。色譜純度為96.2％。
化合物ATV-環(huán)IP的結(jié)構(gòu)說明質(zhì)譜法條件采用四級飛行時間質(zhì)譜儀Micromass Q TOF Ultima Global獲得高分辨質(zhì)譜。采用電噴射離子化。源溫度設(shè)定為100℃，去溶劑化溫度設(shè)定為200℃，錐孔氣(cone gas)0L/h和去溶劑化氣體200L/h。采用TOF分析儀的W幾何學(xué)。該儀器采用甲酸鈉簇進行標定。將樣品溶于50％5mM乙酸銨/乙腈(體積/體積)溶液中，以10μl/min的恒定流速注入質(zhì)譜儀中。樣品溶液的濃度為0.05mg/ml。
采用阿托伐他汀鈣鹽作為高分辨測量方法的內(nèi)標物。將濃度為0.01mg/ml的內(nèi)標物加入樣品溶液中。
觀察到質(zhì)子化的分子離子591.2507m/z。計算的元素組成為C33H36N2O7F。計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為0.5mDa。與阿托伐他汀鈣相比，化合物ATV-環(huán)IP在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中顯示出額外的兩個氧原子。
核磁共振光譜法條件1H與13C測量在300MHz Varian儀器INOVA或UNITY300上進行。INOVA儀器裝備有5mm逆探測脈沖場梯度探針(inverse detect pulsed fieldgradient probe)。1H與13C光譜通過在室溫下測量獲得。
樣品溶于甲醇、氯仿或者甲醇與氯仿2∶1的混合物中。
化學(xué)位移(ppm)參照溶劑的殘余信號進行分配。
溶劑CD3OD(1H與13C測量)
結(jié)構(gòu) 1H NMR光譜6.90-7.40ppm芳香質(zhì)子14H，m4.88ppm CD3ODs4.39ppm 5，32H，m3.31ppm CD3OD m3.25ppm 7a 1H，m3.17ppm (CH3)2CH1H，m2.87ppm 7b 1H，m2.54ppm 2 2H，d1.80-2.10ppm6a，4 3H，m1.40ppm 6b 1H，m1.33與1.32ppm (CH3)2CH6H，2xd13C NMR光譜180.5ppm1165.5ppmCO-NH164.4ppmC-F d140.0-115.0 芳香碳
97.2ppm2′94.9ppm5′74.4ppm4′70.6ppm3′70.4ppm569.3ppm349.1ppmCD3ODm46.4ppm245.0ppm437.4ppm730.5ppm629.5ppm(CH3)2CH19.5和18.3ppm (CH3)2CH化合物ATV-環(huán)氧呋喃的結(jié)構(gòu)說明質(zhì)譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的條件獲得高分辨質(zhì)譜。
在質(zhì)譜中觀察到分子離子與鈉的加合物472.1536m/z和與鉀的加合物488.1270。在第一種情況下計算的元素組成為C26H24NO5FNa(計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為0.0mDa)，在第二種情況下為C26H24NO5FK(計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為0.5mDa)。
由于水從分子中快速消除，沒有觀察到質(zhì)子化的分子離子(M+H-H2O)+＝432.1606m/z。提出的元素組成為C26H23NO4F。計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為0.5mDa。碎片離子還與鈉和鉀形成加合物。
在921.3131 m/z觀察到兩分子化合物ATV-環(huán)氧呋喃與鈉的加合物。建議的元素組成為C52H48N2O10F2Na。計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為4.4mDa。
核磁共振光譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的方式獲得1H與13C測量結(jié)果。
溶劑CDCl3(1H測量)CD3OD∶CDCl3＝2∶1的混合物(13C測量)結(jié)構(gòu) 1H NMR光譜7.57ppm-NH 1H，br6.90-7.50ppm 芳香質(zhì)子14H，m6.05ppm-OH 1H，br4.31ppm-OH 1H，s2.38ppm(CH3)2CH1H，m1.22與1.21ppm (CH3)2CH6H，2xd13C NMR光譜215.9ppm imp.
165.0ppmCO-NH164.0ppmC-F d
140.0-115.0ppm芳香碳107.1ppm 2104.1ppm 577.0ppm CDCl3t75.9ppm 470.4ppm 349.1ppm CD3ODm35.6ppm (CH3)2CH17.9與17.0ppm (CH3)2CH化合物ATV-環(huán)FP的結(jié)構(gòu)說明質(zhì)譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的方式獲得高分辨質(zhì)譜。
觀察到質(zhì)子化的分子離子591.2507m/z。分子離子比ATV-環(huán)IP弱得多。在質(zhì)譜中最強的離子是573.2406m/z，它是由水分子的消除形成的。對591.2507m/z而言所計算的元素組成為C33H36N2O7F。計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為1.4mDa。與阿托伐他汀相比，該化合物在結(jié)構(gòu)中具有兩個額外的氧原子。
核磁共振波光譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的方式獲得1H與13C測量結(jié)果。
溶劑CD3OD(1H與13C測量)
結(jié)構(gòu) 1H NMR光譜6.90-7.40ppm芳香質(zhì)子14H，m4.88ppm CD3ODs4.13ppm 5 1H，m3.74ppm 3 1H，m3.36ppm 7a 1H，m3.31ppm CD3OD m2.97ppm 7b 1H，m2.50ppm (CH3)2CH1H，m2.37與2.27ppm 2 2H，2xm2.07ppm 6a 1H，m1.85與1.64ppm 4 2H，2xm1.26與1.28ppm (CH3)2CH6H，2xd1.25ppm 6b 1H，m13C NMR光譜180.2ppm1167.1ppmCO-NH164.2ppmC-F d140.0-115.0ppm 芳香碳
96.9ppm2′95.1ppm5′74.5ppm4′70.4ppm570.0ppm3′67.5ppm349.1ppmCD3ODm45.2ppm244.7ppm438.3ppm736.6ppm(CH3)2CH31.0ppm619.7與19.0ppm (CH3)2CH化合物ATV-環(huán)氧二酮的結(jié)構(gòu)說明質(zhì)譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的方式獲得高分辨質(zhì)譜。
觀察到質(zhì)子化的分子離子432.1612m/z。計算的元素組成為C26H23NO4F。計算質(zhì)量與測量質(zhì)量之間的偏差為0.1mDa。表5顯示了質(zhì)子化的分子離子的MS/MS光譜。
表5質(zhì)子化的分子離子432m/z的MS/MS光譜-五個最強的峰
核磁共振光譜法條件以與化合物ATV-環(huán)IP相同的方式獲得1H與13C測量結(jié)果。
溶劑 CD3OD∶CDCl3＝2∶1的混合物(1H與13C測量)結(jié)構(gòu) 1H NMR光譜8.20-6.80ppm芳香質(zhì)子 14H，m4.79ppm CD3ODs3.31ppm CD3ODm3.20ppm (CH3)2CH1H，m1.20與1.02ppm (CH3)2CH 6H，2xd13C NMR光譜206.0ppm(CH3)2CH-CO-191.4ppm苯基-CO-167.3ppmF-Cd162.8ppmCO-NH140.0-115.0 芳香碳77.0ppm CDCl3t74.6與72.0ppm 環(huán)氧碳原子49.0ppm CD3ODm
38.3ppm (CH3)2CH18.5與17.7ppmCH實施例2ATV-環(huán)IP化合物的制備與分離在80％乙腈和20％水(體積/體積)中配制2升阿托伐他汀溶液，每毫升含有1mg阿托伐他汀。將該溶液置于淺結(jié)晶器皿中并暴露于日光照射下5小時。隨后溶液立即用1M氫氧化鉀溶液堿化至pH8至9，減壓蒸發(fā)直至首次出現(xiàn)混濁。水浴溫度保持在30℃以下，冷凝器用0℃水冷卻。
然后向溶液中加入最少量的乙腈使之澄清。
以與實施例1中相同的方式進行制備型色譜法和結(jié)構(gòu)說明。
通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出210mg純的ATV-環(huán)IP化合物。色譜純度為96.6％。
實施例3ATV-環(huán)氧呋喃與ATV-環(huán)氧二酮化合物的制備與分離在80％乙腈/20％水(體積/體積)中配制1升阿托伐他汀溶液，每毫升含有1mg阿托伐他汀。將該溶液置于淺結(jié)晶器皿中并暴露于日光照射下5小時。隨后溶液立即用0.5M磷酸酸化至pH3.0?；旌衔镉谑覝叵路胖脙尚r，減壓蒸發(fā)至原混合物體積的約1/3。
以與實施例1中相同的方式進行制備型色譜法和結(jié)構(gòu)說明。
通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出120mg ATV-環(huán)氧呋喃化合物。色譜純度為92.6％。
通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出21mg ATV-環(huán)氧二酮化合物。色譜純度為95.1％。
實施例4ATV-環(huán)FP化合物的制備與分離在乙腈中配制800ml阿托伐他汀溶液，每毫升含有10mg阿托伐他汀。加入4ml12M氫氧化鈉和40ml30％過氧化氫。溶液在55℃攪拌5小時。使反應(yīng)混合物冷卻并潷析。上清液減壓蒸發(fā)至約50ml。棄去剩余的水，固體殘余物用新鮮的水洗滌。然后將固體殘余物溶于乙腈中。
以與實施例1中相同的方式進行制備型色譜法和結(jié)構(gòu)說明。
通過冷凍干燥從濃縮的級分中分離出230mg純的ATV-環(huán)IP化合物。色譜純度為98.3％。
實施例5阿托伐他汀鈣可以用文獻中描述的任意方法來制備。在阿托伐他汀鈣制備的整個過程中唯一的要求是必須維持惰性氛圍。在如此制備的阿托伐他汀鈣中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的每種氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量低于0.04％。
實施例6將通過實施例1中所述的方法獲得的阿托伐他汀鈣于室溫下在氮氣氛圍中儲存兩年。在如此制備的阿托伐他汀鈣中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的每種氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量低于0.1％。
實施例7將通過實施例1中所述的方法獲得的阿托伐他汀鈣于室溫下在空氣中儲存兩年。在如此制備的阿托伐他汀鈣中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量分別是0.856％、0.636％、0.905％和0.741％。
實施例7采用通過實施例1中所述的方法獲得的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑制備片劑。在如此制備的片劑中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量分別是0.11％、0.07％、0.07％和0.08％。
片劑在氮氣氛圍中包裝在鋁/鋁泡罩中。泡罩在室溫下儲存兩年。采用HPLC方法和在250nm檢測測得的氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量分別是0.18％、0.08％、0.17％和0.09％。
實施例9如實施例8所述的片劑在空氣中包裝在鋁/鋁泡罩中。在如此制備的片劑中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量分別是0.13％、0.09％、0.08％和0.08％。
泡罩在室溫下儲存兩年。在如此制備的阿托伐他汀鈣中，采用HPLC方法和在250nm檢測測得的氧化降解產(chǎn)物ATV-環(huán)IP、ATV-環(huán)氧呋喃、ATV-環(huán)FP和ATV-環(huán)氧二酮化合物的含量分別是1.75％、0.61％、1.23％和0.65％。
權(quán)利要求
1.4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸。
2.4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺。
3.4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸。
4.制備化合物的方法，所述的化合物選自4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸、4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺、4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸和3-(4-氟-苯甲酰基)-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺，其特征在于使固體阿托伐他汀鹽在空氣或氧氣氛圍中在40-90℃的升高溫度下氧化。
5.權(quán)利要求4的方法，其中固體阿托伐他汀鹽選自阿托伐他汀鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和銨鹽。
6.權(quán)利要求4和5的方法，其中阿托伐他汀鹽的氧化在阿托伐他汀鹽在水和/或有機溶劑和/或選自乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、二氯甲烷的溶劑的混合物中的溶液中通過在約40℃至90℃的溫度下加入過氧化氫或向溶液中充入空氣或氧氣來進行。
7.制備化合物的方法，所述的化合物選自4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸、4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺、4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸和3-(4-氟-苯甲?；?-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺，其特征在于將阿托伐他汀鹽溶液暴露在日光或人工日光下。
8.權(quán)利要求7的方法，其中阿托伐他汀鹽選自阿托伐他汀鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和銨鹽。
9.權(quán)利要求4至8的方法，其中另外包括一步或多步分離步驟。
10.權(quán)利要求9的方法，其中分離步驟選自制備型正相和反相色譜法。
11.權(quán)利要求10的方法，其中在制備型正相色譜法中采用硅膠或選自氨基丙基、氰基丙基、二醇和硝基苯基的基于硅膠的鍵合相。
12.權(quán)利要求11的方法，其中在制備型正相色譜法中流動相包含極性調(diào)節(jié)劑醇與乙腈的混合物以及選自己烷、二氯甲烷、甲基環(huán)己烷及其任意組合的非極性溶劑的混合物，其中所述的醇選自甲醇、乙醇和丙醇。
13.權(quán)利要求10的方法，其中在制備型反相色譜法中采用鍵合于硅膠的十八烷基硅膠或辛基硅膠。
14.權(quán)利要求13的方法，其中在制備型反相色譜法中流動相包含水與有機或無機緩沖劑的混合物以及一種或多種選自醇和乙腈的有機調(diào)節(jié)劑的混合物。
15.含有少于約0.29重量％的氧化降解產(chǎn)物的基本上純的阿托伐他汀鈣，所述的氧化降解產(chǎn)物為4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸、4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺、4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸和3-(4-氟-苯甲?；?-2-異丁酰基-3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺。
16.含有少于約0.09重量％的4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸的基本上純的阿托伐他汀鈣。
17.含有少于約0.05重量％的4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺的基本上純的阿托伐他汀鈣。
18.含有少于約0.09重量％的4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸的基本上純的阿托伐他汀鈣。
19.包含少于約0.06重量％的3-(4-氟-苯甲?；?-2-異丁酰基-3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺的基本上純的阿托伐他汀鈣。
20.包含基本上純的阿托伐他汀鈣的藥物組合物，所述阿托伐他汀鈣包含少于約0.6重量％的氧化降解產(chǎn)物4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸、4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺、4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲酰基-六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸和3-(4-氟-苯甲酰基)-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺。
21.包含基本上純的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物，所述阿托伐他汀鈣包含少于約0.2重量％的4-[6-(4-氟-苯基)-6-羥基-1b-異丙基-6a-苯基-1a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸。
22.包含基本上純的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物，所述阿托伐他汀鈣包含少于約0.1重量％的4-(4-氟-苯基)-2，4-二羥基-2-異丙基-5-苯基-3，6-二氧雜-二環(huán)[3.1.0]己烷-1-甲酸苯基酰胺。
23.包含基本上純的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物，該阿托伐他汀鈣包含少于約0.2重量％的4-[1b-(4-氟-苯基)-6-羥基-6-異丙基-1a-苯基-6a-苯基氨甲?；?六氫-1，2-二氧雜-5a-氮雜-環(huán)丙烷并[a]茚-3-基]-3-(R)-羥基-丁酸。
24.包含基本上純的阿托伐他汀鈣和至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物，所述阿托伐他汀鈣包含少于約0.1重量％的3-(4-氟-苯甲?；?-2-異丁?；?3-苯基-環(huán)氧乙烷-2-甲酸苯基酰胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及阿托伐他汀鈣的氧化降解產(chǎn)物及其制備方法。本發(fā)明還涉及基本上不含氧化降解產(chǎn)物的阿托伐他汀鈣和含有此阿伐他汀鈣的藥物組合物。
文檔編號C07D207/40GK1997651SQ200580024085
公開日2007年7月11日 申請日期2005年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月16日
發(fā)明者R·格拉?？? D·科奇安, A·巴斯塔德, A·科齊揚, M·克拉春 申請人:力奇制藥公司