專利名稱：用于治療急慢性肝病的無水硫普羅寧鈉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物及其制備方法領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及無水硫普羅寧鈉及其制備方法，本發(fā)明無水硫普羅寧鈉主要用于急、慢性肝病的肝功能改善。
背景技術(shù)：
硫普羅寧(英文名Tiopronin，化學(xué)名巰基丙酰甘氨酸)為一種代謝改善解毒劑，其分子式C5H9NO3SH，分子量163.20，結(jié)構(gòu)式如下 其主要用于急、慢性肝病的肝功能改善。該產(chǎn)品的口服制劑，凍干粉針和水針注射劑目前已經(jīng)上市。由于本品呈強酸性，現(xiàn)有制劑多是將其配制為中性應(yīng)用于臨床。如目前臨床上使用的凍干粉針為每1西林瓶中裝入0.1g或0.2g的硫普羅寧，并配以專用的碳酸氫鈉水溶液，臨床使用時再用碳酸氫鈉水溶液將硫普羅寧溶解，這樣生產(chǎn)、包裝和使用均較繁瑣，此外我們研究還發(fā)現(xiàn)硫普羅寧在水相中由酸性被堿中和到中性的過程中很易分解產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物，使產(chǎn)品純度下降，這無疑會影響該產(chǎn)品藥用的安全和有效使用。另亦有文獻顯示硫普羅寧在水中遇堿性物不穩(wěn)定易分解。因此目前臨床上直接用的硫普羅寧制劑均潛在有在中和為中性的過程中不穩(wěn)定而分解的問題，很多文獻報道臨床上使用硫普羅寧后產(chǎn)生較大的毒副作用，也可能與該問題有關(guān)。
因此我們設(shè)想，將硫普羅寧在體外有機溶液中進行成鹽反應(yīng)，制備成硫普羅寧鈉，避免分解物進入體內(nèi)或在體內(nèi)產(chǎn)生分解物進而引起毒副反應(yīng)。從結(jié)構(gòu)上看，硫普羅寧含有巰基，很不穩(wěn)定，如不采取一定措施，很難在水相或有機相中合成出較純的符合藥用的產(chǎn)物來。也有研究者嘗試制備含水的硫普羅寧鈉鹽(USP4346234A)，因其方法限制，最終產(chǎn)物為硫普羅寧鈉的水合物。該專利明確顯示，很難用常規(guī)方法合成出硫普羅寧鈉鹽，用NaOH，NaHCO3，Na2CO3等無機堿與硫普羅寧在水或醇中進行中和反應(yīng)，要么沒有鈉鹽的生成，要么分離得到的產(chǎn)物量很少；用普通的醇鈉(如甲醇鈉、乙醇鈉等)產(chǎn)物的量很低且難以精制。正是由于用常規(guī)方法難以合成出硫普羅寧鈉鹽，盡管已知硫普羅寧直接臨床應(yīng)用有很多缺點，但直到現(xiàn)在尚沒辦法克服。USP 4346234A以2-乙基己醇鈉作為堿，以異丁醇為溶劑，與硫普羅寧反應(yīng)成鹽，加水后析出硫普羅寧鈉一水合物 產(chǎn)率約為70％。該方法所用2-乙基己醇納成本高且難以制備。反應(yīng)后形成的2-乙基己醉及溶劑異丁醇具有較高的沸點，難以除去，在產(chǎn)品中容易形成殘留。此外因所形成的鈉鹽在所用溶劑中不能析出，只能在加水后方可析出，因此所得產(chǎn)物為一水合物，熔點僅為約90℃，難以用普通方法(如高溫滅菌)制備無菌粉針；再者，由于產(chǎn)物含有水(理論含水量8.86％)，產(chǎn)品結(jié)構(gòu)上的巰基在有水的環(huán)境中長期放置有降解的可能，存在不穩(wěn)定的因素。
我們經(jīng)過研究，發(fā)現(xiàn)在一些一般廉價的有機溶劑(如甲醇，乙醇等)中，將硫普羅寧與一些一般廉價的無機堿(如氫氧化鈉，碳酸氫鈉等)酸堿成鹽，輔以巰基保護劑和反應(yīng)體系除水劑，在向反應(yīng)體系中加入沉淀劑(如丙酮、乙酸乙酯等)便可創(chuàng)造性地制備得新的化合物——無水硫普羅寧鈉。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供了一種新的用于治療急慢性肝病的化合物—無水硫普羅寧鈉；本發(fā)明的另一目的是提供了一種制備無水硫普羅寧鈉的方法；本發(fā)明的另一目的是提供了一種用無水硫普羅寧鈉制備治療肝炎藥物的用途。
本發(fā)明的無水硫普羅寧鈉是由硫普羅寧與一般的含鈉無機堿(如氫氧化鈉，碳酸氫鈉等)在一般的有機溶劑(如甲醇或乙醇等)中酸堿成鹽，加入丙酮、乙酸乙酯或二氯甲烷等沉淀劑析出，便可制得無水硫普羅寧鈉。其中可以選擇性地輔以巰基保護劑和反應(yīng)體系除水劑(如分子篩、硅膠、等)。有機溶劑可以選自極性的有機化合物，尤其是低分子醇如C1-6烷醇如甲醇，乙醇，異丙醇等中的一種或多種，優(yōu)選甲醇；一般含鈉無機堿可以選自氫氧化鈉，碳酸氫鈉，碳酸鈉，磷酸鈉或乙酸鈉等，首選氫氧化鈉；沉淀劑司選用不溶解或微溶解硫普羅寧鈉的有機化合物，尤其是丙酮、乙酸乙酯，二氯甲烷等中的一種或多種，優(yōu)選丙酮；反應(yīng)過程中的巰基保護劑可選用DTT(二硫蘇糖醇)、EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)或2-巰基乙醇的一種或多種；反應(yīng)體系中的除水劑可選用分子篩、硅膠、無水硫酸鎂、無水氯化鈣等，優(yōu)選分子篩。
本發(fā)明的無水硫普羅寧鈉用以下方法制備本發(fā)明的無水硫普羅寧鈉是由硫普羅寧與含鈉無機堿(如氫氧化鈉，碳酸氫鈉等)在有機溶劑(如甲醇或乙醇等)中酸堿成鹽，加入丙酮、乙酸乙酯或二氯甲烷等沉淀劑析出，便可制得無水硫普羅寧鈉；其中可以選擇性地輔以巰基保護劑和反應(yīng)體系除水劑(如分子篩、硅膠、等)。
本發(fā)明的無水硫普羅寧鈉的制備方法具體包括下列步驟1.稱取MPG(硫普羅寧)49.8g(0.305mol)，置于三口燒瓶中，加入134ml分析純甲醇，15℃水浴，加入巰基保護劑DTT 0.5g，攪拌15分鐘，加入除水劑分子篩15g；2.稱取NaOH14.198g，分6次加入甲醇液中(每次加入2.366g)，每次間隔1小時；3.第6次加入NaOH后，繼續(xù)在15℃水浴中，攪拌下反應(yīng)1小時。然后，將反應(yīng)瓶移入20-25℃水浴中，攪拌1小時。抽濾，濾除分子篩，濾液加入402ml丙酮中，充分振搖，使混合均勻；4.待反應(yīng)液中出現(xiàn)大量白色沉淀，抽濾，濾餅于80℃干燥，得無水硫普羅寧鈉40.1g，收率73.94％；5.濾液(甲醇和丙酮混合液)65℃水浴，常壓蒸餾分出丙酮(可循環(huán)使用)，改為減壓蒸餾，使甲醇液濃縮到2/3，加入到3倍量丙酮中，充分振搖，使混合均勻，室溫放置過夜。后續(xù)操作同步驟4，得無水硫普羅寧鈉11.4g，總收率91.12％.
本發(fā)明的無水硫普羅寧鈉具有純度高、穩(wěn)定性好、藥用效果佳等特點，較硫普羅寧及硫普羅寧鈉水合物具有更好的穩(wěn)定性，以下通過實驗研究結(jié)果說明本發(fā)明的有益效果。
一.本發(fā)明產(chǎn)物無水硫普羅寧鈉的結(jié)構(gòu)確證1.元素分析(1)碳、氫、氮的分析結(jié)果見表1表1樣品元素分析結(jié)果

結(jié)論樣品的元素分析結(jié)果與理論值符合。測試結(jié)果說明本品分子式為C5H8NO3SNa。同時也說明本品不含結(jié)晶水。
2.紅外吸收光譜
(1)測定數(shù)據(jù)見表2。
表2、樣品的紅外吸收光譜測定數(shù)據(jù)及歸屬

解析A、3321，3272cm-1為酰胺的胺基伸縮振動峰，1633cm-1為酰胺c＝o伸縮振動，1616cm-1及1579cm-1為N-H面內(nèi)彎曲振動與部分C-N伸縮振動偶合，證明分子中含-CO-NH-仲酰胺基團；B、2979cm-1為C-H伸縮振動，1312cm-1為-CH3中C-H彎曲振動，證明分子中含有-CH3；C、2935cm-1為C-H伸縮振動；D、2566cm-1為S-H伸縮振動峰；E、1435cm-1為C-H伸縮振動峰。
(3)結(jié)論紅外光譜中各官能團吸收峰符合該化合物結(jié)構(gòu)特征。
3.1H-核磁共振譜(1HNMR、H-H COSY)、13C-核磁共振譜(13CNMR、DEPT、HMQC、HMBC)
(1)測定數(shù)據(jù)見表3和表4。

表3、樣品的核磁共振氫譜數(shù)據(jù)及歸屬(DMSO為溶劑)

解析(a)δ1.29ppm的雙重峰，相當于3個H，為甲基上的H；(b)δ2.47ppm的雙重峰，相當于1個H，為巰基上的H；(c)δ3.37ppm的雙重峰，相當于2個H，為亞甲基上的H；(d)δ3.58ppm的多重峰，相當于1個H，為次甲基上的H；(e)δ7.60ppm的單峰，相當于1個H，為NH上的H。
表4、樣品的核磁共振碳譜數(shù)據(jù)及歸屬(DMSO為溶劑)

解析1、結(jié)構(gòu)中一個甲基化學(xué)位移值在最高場；2、結(jié)構(gòu)中有一個亞甲基，化學(xué)位移在次高場；
3、結(jié)構(gòu)中有一個次甲基，受鄰位基團吸電子誘導(dǎo)作用，化學(xué)位移值向低場移動；4、結(jié)構(gòu)中有兩個羰基碳，羧羰基比酰胺羰基移向低場。
4.質(zhì)譜分析(1)測定數(shù)據(jù)分子離子峰163主要碎片峰145，102，88，74，61，56。
(2)結(jié)論分子離子峰(m/z)為163，與硫普羅寧鈉分子式經(jīng)酸化產(chǎn)生的硫普羅寧的分子量相符。各主要碎片峰都有合理解釋，符合該化合物的結(jié)構(gòu)特征。
5.熱分析(1)、DSC(差示掃描)和TG(熱重)分析DSC法測定結(jié)果顯示，在100℃以下沒有明顯吸收峰，在151～159℃處有強的吸熱峰，峰值是156.2℃，應(yīng)當為結(jié)晶的熔融。TG法測定結(jié)果確定，直到173℃左右本品質(zhì)量失重很少，但是從173℃左右開始分解，質(zhì)量減少。說明樣品不含結(jié)晶水。
綜上所述，發(fā)明的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)確為無水硫普羅寧鈉。
二、無水硫普羅寧鈉及硫普羅寧鈉一水合物理化性能比較無水硫普羅寧鈉 硫普羅寧鈉一水合物結(jié)構(gòu)式 熔點 154℃-156℃ 86℃熔化成糊狀熱重 173℃失重83℃開始失重差示掃描 峰值156℃峰值86℃和156℃三.無水硫普羅寧鈉及硫普羅寧鈉一水合物穩(wěn)定性試驗研究(一)、主要研究內(nèi)容對無水硫普羅寧鈉和硫普羅寧鈉一水合物樣品分別進行三方面試驗1.影響因素試驗分別考察強光、高溫、高濕等對其影響；2.加速試驗；3.長期試驗。
對于加速和長期試驗，我們采用如下包裝
雙層藥用復(fù)合膜(內(nèi)層裝樣品，密封，內(nèi)層與外層之間加入袋裝變色硅膠干燥劑)，密封，裝入牛皮袋內(nèi)，放入鋁桶封存。
加速試驗條件為40℃，相對濕度為75％；長期試驗條件為室溫，相對濕度60％。
(二)試驗方法及步驟1.取樣方法本試驗設(shè)計的每一項目，均用具有代表性和均一性的樣品進行考察。按考察項目要求，每一項目試驗前，先取樣分析，定為“0”天結(jié)果。
2.考察項目及測定方法(1)外觀色澤采用肉眼觀察樣品顏色變化，并將放置不同時間的樣品進行比較。
(2)含量測定含量時，采用滴定法測定硫普羅寧鈉的含量。
(3)有關(guān)物質(zhì)通過TLC高低濃度自身對照法檢測各種條件下放置不同時間樣品中降解雜質(zhì)含量的變化。
(4)水分含量通過干燥失重法檢測各種條件下放置不同時間的樣品中水分含量的變化。
(5)酸度通過酸度計分析PH值變化。
3.影響因素試驗(1)高溫試驗將樣品攤于扁形稱量瓶中，厚度≤5mm，每瓶裝1g，取2瓶，置于干燥器中，放入恒溫箱，于60±2℃恒溫10天，于5，10天分別取一瓶檢測，與0天結(jié)果比較。分析結(jié)果見表5和表6。
(2)高濕試驗相對濕度92.5％的影響將樣品攤于扁形稱量瓶中，厚度≤5mm，每瓶裝1g，取2瓶，置于下部放有飽和KNO3水溶液的具有具塞玻璃瓶中，于25℃±2℃條件下放置10天，于5，10天分別取一瓶檢測，與0天結(jié)果比較。分析結(jié)果見表5和表6。
(3)強光照射試驗將樣品攤于平面玻璃板上，厚度≤5mm，放在注射劑澄明度測定儀下，以4500±500Lx光照度放置10天，于5，10天分別取樣測定，與0天結(jié)果比較。分析結(jié)果見表5和表6。
4.加速試驗在相同包轉(zhuǎn)下，于40℃和相對濕度75％條件下進行考察。
將樣品置于下部放有飽和NaCl水溶液的具有具塞玻璃瓶中，放入恒溫箱，于40±2℃條件下恒溫6個月，于0、1、2、3、6月各取一袋進行檢測，并與0月結(jié)果比較。分析結(jié)果見表7。
5.長期試驗在相同包裝下，于室溫，相對濕度60％條件下進行考察。分析結(jié)果見表8。
(三)、結(jié)果與分析1.影響因素試驗結(jié)果表5、無水硫普羅寧鈉影響因素試驗結(jié)果

表6、硫普羅寧鈉一水合物影響因素試驗結(jié)果


由表5和6可以看出在光、溫度、濕度影響下，無水硫普羅寧鈉較硫普羅寧鈉一水合物更為穩(wěn)定。
2.加速試驗結(jié)果表7、無水硫普羅寧鈉加速試驗結(jié)果(40℃±2℃，RH75％)

表8、硫普羅寧鈉水合物加速試驗結(jié)果
(40℃±2℃，RH75％)

由表7和8可以看出在40±2℃，RH75％條件下，無水硫普羅寧鈉較硫普羅寧鈉一水合物更為穩(wěn)定。
3.長期試驗結(jié)果表9、無水硫普羅寧鈉長期試驗結(jié)果(室溫，RH60％)


表10、硫普羅寧鈉水合物長期試驗結(jié)果(室溫，RH60％)


由表9和10可以看出在長期存放下，無水硫普羅寧鈉較硫普羅寧鈉一水合物更為穩(wěn)定。
由上述分析數(shù)據(jù)可以看出，由于制備或者檢測工藝的原因，本發(fā)明的硫普羅寧鈉可以帶有少量非結(jié)晶游離水分，但是，這種游離水分的含量一般低于2％，優(yōu)選低于1％，更優(yōu)選低于0.5％。
四.無水硫普羅寧鈉制劑的藥效實驗對無水硫普羅寧鈉制劑(無水硫普羅寧鈉凍干粉針劑，由實施例4制備，用生理鹽水溶解，以下同)做了藥效學(xué)試驗并與硫普羅寧作了比較，采用四氯化碳、D-氨基半乳糖(DAG)引起急、慢性肝損傷模型，以血清中轉(zhuǎn)氨酶GOT、GPT，總蛋白T-P、白蛋白ALB、白球比例A/G以及組織中羥脯氨酸、唾液酸、肝膠原含量的變化作為肝功能變化、肝組織纖維化的評價指標，并結(jié)合病理組織學(xué)檢查，對二者的藥效學(xué)進行評價。藥物設(shè)計一系列同等劑量進行比較觀察，以注射途徑進行給藥，觀察在預(yù)防性給藥和慢性治療性給藥方式下二者的作用情況，結(jié)果顯示對急性肝損傷模型的作用(1)對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的作用無水硫普羅寧鈉經(jīng)注射給藥后，37.5-150mg/kg能明顯抑制CCl4引起的急性肝損傷所致的血清GOT和GPT的升高(P＜0.05、P＜0.01)，表明無水硫普羅寧鈉對CCl4引起的急性肝損傷有顯著的保護作用。同樣試驗條件下，硫普羅寧250mg/kg對CCl4引起的急性肝損傷同樣具有明顯的保護作用。
可以看出，無水硫普羅寧鈉對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的治療作用效果非常明顯。
(2)對D-氨基半乳糖(DAG)致小鼠急性肝損傷的作用預(yù)防作用無水硫普羅寧鈉經(jīng)預(yù)防性注射給藥后，高劑量150mg/kg能明顯抑制DAG引起的急性肝損傷所致的血清GOT和GPT的升高(P＜0.05、P＜0.01)，表明硫普羅寧鈉能抑制DAG引起的急性肝損傷，有顯著的保護作用。同樣試驗條件下，硫普羅寧180mg/kg對DAG引起的急性肝損傷同樣具有顯著的保護作用。
可以看出，無水硫普羅寧鈉對D-氨基半乳糖(DAG)致小鼠急性肝損傷的治療作用效果非常明顯。
對慢性肝損傷模型的作用無水硫普羅寧鈉連續(xù)注射給藥1個月后，50-100mg/kg劑量使升高的轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST顯著降低(P＜0.05、P＜0.01)，100mg/kg劑量使降低的ALB顯著升高(P＜0.01)，顯著升高A/G倒轉(zhuǎn)的比例(P＜0.01)；25-100mg/kg劑量顯著降低升高的唾液酸含量(P＜0.01)，100mg/kg劑量顯著降低升高的羥脯氨酸含量(P＜0.01)。表明無水硫普羅寧鈉對四氯化碳致慢性肝損傷有顯著的治療作用。同樣試驗條件下，硫普羅寧150mg/kg對四氯化碳致慢性肝損傷同樣有顯著的治療作用。
可以看出，無水硫普羅寧鈉對對慢性肝損傷的治療作用效果非常明顯。
結(jié)論無水硫普羅寧鈉注射液注射給藥對于四氯化碳、D-氨基半乳糖引起的急、慢性肝損傷有顯著的預(yù)防或治療作用，作用強度優(yōu)于硫普羅寧。
五、無水硫普羅寧鈉急性毒性研究為了考察無水硫普羅寧鈉注射液(無水硫普羅寧鈉凍干粉針劑，由實施例4制備，用生理鹽水溶解，以下同)的注射給藥途徑急性毒性情況，并且與藥物硫普羅寧進行毒性的比較，設(shè)計了靜脈注射途徑、腹腔注射途徑進行給藥的比較，采用嚙齒類小鼠和大型動物Beagle犬進行試驗，結(jié)果顯示靜脈給藥途徑，無水硫普羅寧鈉生理鹽水注射液小鼠一次性尾靜脈注射給藥，LD50及95％可信限為LD50＝2.464(2.422-2.507)g/kg；硫普羅寧NaHCO3注射液小鼠一次性尾靜脈注射給藥，LD50及95％平均可信限為1.993(1.957-2.029)g/kg(LD50計算方法Bliss法)。結(jié)果表明無水硫普羅寧鈉靜脈給藥小鼠的急性毒性明顯小于硫普羅寧。
腹腔給藥途徑，無水硫普羅寧鈉生理鹽水注射液小鼠一次性腹腔注射給藥，LD50及95％可信限為LD50＝＝3.092(3.082-3.102)g/kg；硫普羅寧NaHCO3注射液腹腔給藥一次性腹腔注射給藥，LD50及95％平均可信限為LD50＝2.136g/kg(2.093-2.181)g/kg。結(jié)果表明無水硫普羅寧鈉腹腔給藥小鼠的急性毒性明顯小于硫普羅寧。
Beagle犬分別一次性i.v硫普羅寧鈉生理鹽水注射液后，近似致死量范圍為401～501mg/kg，無嚴重毒副反應(yīng)劑量范圍為257～205mg/kg，無任何毒副反應(yīng)劑量為164mg/kg；一次性i.v硫普羅寧NaHCO3注射液后，近似致死量范圍為275～343mg/kg，無嚴重毒副反應(yīng)劑量范圍為176～141mg/kg，無任何毒副反應(yīng)劑量為113mg/kg。結(jié)果表明無水硫普羅寧鈉一次性i.v給藥Beagle犬的急性毒性明顯小于硫普羅寧。
六、無水硫普羅寧鈉長期毒性研究采用SD大鼠，進行注射給藥(無水硫普羅寧鈉凍干粉針劑，由實施例4制備，用生理鹽水溶解，以下同)，連續(xù)腹腔注射13周、恢復(fù)4周，考察試藥對動物體重、進食量等一般狀況、血液生化、血象、尿常規(guī)、各臟器系數(shù)及組織病理等指標的影響。將無水硫普羅寧鈉分別設(shè)定高、中、低3個劑量組286、143、72mg/kg(以70kg人每日200mg計，分別相當于人臨床擬用劑量的100、50、25倍)，同時設(shè)定硫普羅寧對比組，分別設(shè)定高、中、低3個劑量組257、129、57mg/kg(以70kg人每日200mg計，分別相當于人臨床擬用劑量的90、45、20倍)。并設(shè)定溶媒對照組，同樣試驗條件下，對二者的毒性影響進行觀察和比較，結(jié)果如下體重和食量與溶媒對照組比較，無水硫普羅寧鈉中劑量組在給藥第2周、第6周雄性大鼠出現(xiàn)了體重一過性的下降(P＜0.05)，其后直至給藥結(jié)束體重變化與對照組間未見有顯著性差異(P＜0.05)?；謴?fù)其內(nèi)也未見顯著性變化。
硫普羅寧對照組，中劑量在給藥第1周、第3周雄性大鼠出現(xiàn)了體重一過性的下降或升高(P＜0.05)，其后直至給藥結(jié)束體重變化與對照組間未見有顯著性差異(P＞0.05)，雌性大鼠高劑量在第3周體重顯著升高(P＜0.05)、中劑量在給藥第6-13周出現(xiàn)顯著性升高，表明硫普羅寧在一定劑量時影響雌性動物體重的變化，相應(yīng)的進食量未見有顯著性的變化。其他未見著變?；謴?fù)其內(nèi)也未見顯著性變化。
比較二者，產(chǎn)生的影響基本類似，均在中劑量時動物比較敏感，發(fā)生波動性變化，停藥后均能恢復(fù)。
血象檢查無水硫普羅寧鈉給藥13周后，與溶媒對照組比較，高劑量組WBC顯著性升高(P＜0.05)，低劑量WBC分類中GR％顯著升高(P＜0.01)，中劑量組血小板顯著減低(P＜0.05)，但均屬于正常范圍內(nèi)波動，其它指標未見顯著變化，4周恢復(fù)期內(nèi)，以上各指標未見顯著性差異。
硫普羅寧給藥13周后，與溶媒對照組比較，高劑量組白細胞總數(shù)和WBC分類中MO％顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)，中劑量組WBC分類中MO％和WBC分類中GR％顯著升高(P＜0.01、P＜0.01)，低劑量組WBC分類中GR％顯著升高(p＜0.05)，但均屬于正常范圍內(nèi)波動，4周恢復(fù)期內(nèi)，以上各指標未見顯著性差異。
比較二者，產(chǎn)生的影響基本類似，均對WBC及其分類產(chǎn)生一定的影響，但均為生波動性變化，沒有劑量依賴關(guān)系，停藥后均能恢復(fù)。
血液生化指標檢查無水硫普羅寧鈉給藥13周后，與溶媒對照組比較，高、中劑量組AST顯著性升高(P＜0.01、P＜0.05)，高、中、低劑量組T-P顯著升高(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)，但均在正常范圍內(nèi)波動，不屬于異常變化。4周恢復(fù)期內(nèi)各指標未見有著變。
硫普羅寧給藥13周后，與溶媒對照組比較，高、中劑量組AST顯著性升高(P＜0.01、P＜0.05)，低劑量組T-P顯著升高(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)，但均在正常范圍內(nèi)波動，不屬于異常變化。4周恢復(fù)期內(nèi)各指標未見有著變。
比較二者，產(chǎn)生的影響基本類似，大劑量時均對AST產(chǎn)生一定的影響，但均為生波動性變化，不屬于異常變化，停藥后均能恢復(fù)。
尿液檢查硫普羅寧及無水硫普羅寧鈉在給藥13周后，與溶媒對照組比較，各指標未見有顯著性差異(P＞0.05)。經(jīng)4周恢復(fù)后，也未見顯著性差異(P＞0.05)。
臟器系數(shù)測定無水硫普羅寧鈉在給藥13周后，與溶媒對照組比較，各臟器系數(shù)未見有顯著性差異(P＞0.05)。經(jīng)4周恢復(fù)后，也未見顯著性差異(P＞0.05)。
硫普羅寧在給藥13周后，與溶媒對照組比較，脾臟器系數(shù)顯著性升高(P＜00.01)，其他各臟器系數(shù)未見有顯著性差異(P＞0.05)。經(jīng)4周恢復(fù)后，也未見顯著性差異(P＞0.05)。
比較二者，產(chǎn)生的影響略有差異，硫普羅寧大劑量給藥影響脾臟的生長，而無水硫普羅寧鈉有升高，但沒有顯著性差異。但停藥后均能恢復(fù)。
病理組織學(xué)檢查結(jié)論病理檢查結(jié)果提示受試物無水硫普羅寧鈉和硫普羅寧高劑量組對受試動物SD大鼠各受檢臟器試驗期無毒性作用，恢復(fù)期無蓄積毒性。
試驗結(jié)論無水硫普羅寧鈉對大鼠長期腹腔注射給藥13周，在286、143mg/kg(以70kg人每日200mg計，分別相當于人臨床擬用劑量的100倍)時，可使動物的WBC、AST、T-P升高，但屬于正常范圍內(nèi)波動，病理學(xué)檢查也未見有藥物引起的病理性改變，停藥后4周恢復(fù)期內(nèi)未見有顯著性的差異，無蓄積毒性產(chǎn)生。因此可以認為，無水硫普羅寧鈉在相當于臨床擬用劑量的50倍以下劑量對大鼠是安全劑量。
與硫普羅寧影響的比較，二者產(chǎn)生的影響基本類似，在劑量反應(yīng)上略有差別。
七、無水硫普羅寧鈉注射液過敏、溶血、刺激性研究為了考察無水硫普羅寧鈉注射粉針(無水硫普羅寧鈉凍干粉針劑，由實施例4制備，用生理鹽水溶解，以下同)的安全性，并且與硫普羅寧注射粉針(以下簡稱硫普羅寧)進行比較，進行以下實驗。選用豚鼠、家兔及家兔紅細胞，觀察了試藥的全身過敏、被動皮膚過敏(PCA)、體外紅細胞溶血性以及局部和血管刺激性作用，選用牛血清白蛋白作為豚鼠主動致敏的陽性對照物，天花粉作為PCA的陽性物，結(jié)果顯示過敏性試驗，無水硫普羅寧鈉生理鹽水溶液，低濃度條件下50mg/ml對豚鼠的全身過敏性反應(yīng)為陰性，高濃度100mg/ml，對豚鼠的全身過敏性反應(yīng)為弱陽性；硫普羅寧5％的碳酸氫鈉注射液，低濃度條件下50mg/ml對豚鼠的全身過敏性反應(yīng)為弱陽性，高濃度100mg/ml，對豚鼠的全身過敏性反應(yīng)為陽性。
溶血性試驗，無水硫普羅寧鈉對紅細胞無溶血和凝聚作用，溶血性試驗符合要求。硫普羅寧注射粉針40mg/ml以上濃度不發(fā)生溶血和凝聚作用。說明無水硫普羅寧鈉注射粉針更具安全性。
刺激性實驗，無水硫普羅寧鈉及硫普羅寧在臨床濃度下對家兔血管、肌肉均沒有明顯病理損傷。
因此，無水硫普羅寧鈉及其藥物組合物制劑比硫普羅寧鈉水合物及硫普羅寧具有穩(wěn)定性高、治療效果好、毒性降低等優(yōu)點。
綜上所述，本發(fā)明的產(chǎn)品及其制備方法具有如下特點1、由于本發(fā)明制備方法中所用溶劑均為無水，反應(yīng)中形成的水又加除水劑立即除去，因此在整個制備過程中也就避免了硫普羅寧因遇水而分解的可能，所以所得產(chǎn)品為無水硫普羅寧鈉，而且純度很高(99％以上)；2、由于本發(fā)明使用的溶劑(如甲醇，乙醇等)沸點低，極易除去，產(chǎn)品中有機溶劑殘留極少甚至為零；3、由于無水硫普羅寧鈉在所用沉淀劑中溶解度極小，所以用本發(fā)明方法所得產(chǎn)品收率很高(90％以上)；4、所得產(chǎn)物無水硫普羅寧鈉的熔點為154-156℃，因此可以直接用一般方法制備無菌粉針；5、因產(chǎn)品不含水，也就避免了產(chǎn)品結(jié)構(gòu)上的巰基在有水的環(huán)境中長期放置有降解的可能，所以所得產(chǎn)品無水硫普羅寧鈉具有很好的穩(wěn)定性，各項實驗結(jié)果亦證明本品確有很好的穩(wěn)定性。
6、無水硫普羅寧鈉及其藥物組合物制劑比硫普羅寧鈉水合物及硫普羅寧具有穩(wěn)定性高、治療效果好、毒性降低等優(yōu)點。
本發(fā)明的制備方法突破了專利USP 4346234A所述難以用NaOH，NaHCO3，NaCO3等一般無機堿，在甲醇、乙醇等一般有機溶劑中與硫普羅寧進行反應(yīng)成鹽的技術(shù)難題，因此本發(fā)明的方法具有原料易得、成本低廉、方法簡便、易于控制等優(yōu)點。
具體實施方案下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的百分數(shù)是重量百分數(shù)。
需要說明的是，由于制備或者檢測工藝的原因，本發(fā)明的硫普羅寧鈉可以帶有少量非結(jié)晶游離水分，但是，這種游離水分的含量一般低于2％，優(yōu)選低于1％，更優(yōu)選低于0.5％。
實施例1制備無水硫普羅寧鈉1.稱取MPG(硫普羅寧)49.8g(0.305mol)，置于三口燒瓶中，加入134ml分析純甲醇，15℃水浴，加入巰基保護劑DTT(二硫蘇糖醇)0.5g及分子篩10g攪拌15分鐘；2.稱取NaOH14.198g，分6次加入甲醇液中(每次加入2.366g)，每次間隔1小時；3.第6次加入NaOH后，繼續(xù)在15℃水浴中，中速攪拌下反應(yīng)1小時。然后，將反應(yīng)瓶移入20-25℃水浴中，中進覺拌1小時。抽濾，濾除不溶物，濾液加入402ml丙酮中，充分振搖，使混合均勻，室溫放置過夜；4.過夜的反應(yīng)液中出現(xiàn)大量白色沉淀，抽濾，濾餅于60℃鼓風(fēng)干燥2小時，升溫到80℃，繼續(xù)干燥8小時。取出后置于干燥器中冷至室溫，稱重(40.1g，產(chǎn)率73.94％)。
實施例2制備無水硫普羅寧鈉稱取MPG49.8g(0.305mol)，置于三口燒瓶中，加入134ml分析純甲醇，15℃水浴，加入巰基保護劑2-巰基乙醇0.5g及分子篩10g，攪拌15分鐘。
制備方法除加入的巰基保護劑不同外，其他同實施例1
實施例3制備無水硫普羅寧鈉稱取MPG49.8g(0.305mol)，置于三口燒瓶中，加入134ml分析純乙醇，15℃水浴，加入巰基保護劑DTT 0.5g及分子篩10g，攪拌15分鐘。
制備方法除加入的反應(yīng)溶劑不同外，其他同實施例1實施例4制備無水硫普羅寧鈉凍干粉針劑將實施例1制備的無水硫普羅寧鈉114克，甘露醇300g溶于適量的注射用水中，攪拌溶解，加入0.3％的針用活性碳60℃加熱30分鐘，微孔濾膜過濾除熱原，冷卻至40℃以下，補足注射用水至全量(2000ml)，0.22um微孔濾膜過濾除菌，分裝，凍干，加塞，壓鋁蓋，制成凍干粉針劑1000支。
權(quán)利要求
1.一種用于治療急、慢性肝病的藥物無水硫普羅寧鈉，其化學(xué)名稱是無水N-(2-巰基丙?；?甘氨酸鈉，具有下面的結(jié)構(gòu)式
2.一種制備無水硫普羅寧鈉的方法，其特征是將硫普羅寧與含鈉無機堿在有機溶劑中進行酸堿成鹽反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后加入沉淀劑進行沉淀析出，過濾、干燥，制得無水硫普羅寧鈉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其中，反應(yīng)過程中加入除水劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中，在反應(yīng)過程中加入巰基保護劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的方法，其中所用的有機溶劑選自極性的有機溶劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中有機溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中有機溶劑選自甲醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的方法，其中所用的含鈉無機堿選自氫氧化鈉，碳酸氫鈉，碳酸鈉、磷酸鈉、乙酸鈉中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中含鈉無機堿選自氫氧化鈉。
10.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所用的沉淀劑選用不溶解或微溶解硫普羅寧鈉的有機溶劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所用的沉淀劑選自丙酮、乙酸乙酯，二氯甲烷中的一種或多種。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中沉淀劑選自丙酮。
13.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所用的除水劑選自分子篩、硅膠、無水硫酸鎂、無水氯化鈣中的一種或多種。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中除水劑選自分子篩。
15.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所用的巰基保護劑選自二硫蘇糖醇、乙二胺四乙酸二鈉或2-巰基乙醇中的一種或多種。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的無水硫普羅寧鈉用于制備預(yù)防和/或治療急慢性肝病的藥物的用途。
17.一種用于預(yù)防和/或治療急慢性肝病的藥物組合物，其含有治療有效量的權(quán)利要求1的無水硫普羅寧鈉和可藥用輔料或者賦性劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療急慢性肝病的藥物無水硫普羅寧鈉，其具有如圖的結(jié)構(gòu)式本發(fā)明還提供了上述無水硫普羅寧鈉的制備方法將硫普羅寧與一般的含鈉無機堿在一般的有機溶劑中進行酸堿成鹽反應(yīng)，反應(yīng)過程中輔以巰基保護劑和反應(yīng)體系除水劑，反應(yīng)結(jié)束再體系中加入沉淀劑進行沉淀析出析出，過濾、干燥，便可制得無水硫普羅寧鈉。本發(fā)明方法制備的硫普羅寧鈉具有穩(wěn)定性高，毒性低，療效確切，臨床使用方便等優(yōu)點。
文檔編號C07C323/25GK1687027SQ20051006955
公開日2005年10月26日 申請日期2005年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日
發(fā)明者穆來安, 韓玉謙, 李偉, 邵長青, 鄭禮 申請人:河南省新誼藥業(yè)股份有限公司