專利名稱：一種由黃芪、田基黃和硫普羅寧制成的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種主要由黃芪或其提取物、田基黃或其提取物和硫普羅寧制成的藥物組合物，及其制備方法。
2、背景技術(shù)肝炎是一種常見病和多發(fā)病，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國肝炎患者和病毒攜帶者占總?cè)丝诘?0％。其中以病毒性肝炎為主，病毒性肝炎又可分為急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和膽型肝炎。肝炎是一種傳染性疾病，由于其流行性廣、危害性大、發(fā)病率高，是目前國內(nèi)外公認(rèn)的疑難病癥之一。中國是乙型肝炎的高流行區(qū)，有超過40％的人受過乙型肝炎病毒(HBV)感染，有1億多人口為慢性HbsAg攜帶者。乙型肝炎治愈率僅為10％，絕大部分轉(zhuǎn)為慢性肝炎，嚴(yán)重的轉(zhuǎn)化為肝腹水、肝癌。其中，肝纖維化的形成和發(fā)展是影響預(yù)后和病情轉(zhuǎn)危的關(guān)鍵病理變化之一，也是臨床慢性肝病治療中最為復(fù)雜的疑難問題。國內(nèi)外近年來治療肝炎的藥物雖然有許多，但大多療效并不理想，治療后病情易反復(fù)，且價(jià)格又十分昂貴。至今，市場(chǎng)上仍缺少抗肝炎療效確切，副作用又較小的藥物。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。味甘，性溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌的功效。黃芪的主要有效成分為黃芪多糖和黃芪總皂苷。現(xiàn)代藥理試驗(yàn)表明，黃芪多糖和黃芪總皂苷均有體外抗乙肝病毒活性，黃芪注射液(主要有效成分為黃芪總皂苷)對(duì)刀豆蛋白誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷、硫代乙酰胺所致的大鼠肝損傷、免疫性肝損傷具有一定的保護(hù)作用，黃芪多糖有增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能。
地耳草又名田基黃，民間別名有小元寶草、雀舌草、七層塔等，為藤黃科植物地耳草Hypericumjaponicum Thunb.的干燥全草。味苦、辛，性平，具有清利濕熱、散瘀消腫的功效。地耳草(田基黃)的主要有效成分為田基黃總黃酮。現(xiàn)代藥理研究表明，地耳草具有保肝作用，對(duì)醋氨酚(AP)、四氯化碳(CCl4)所致的小鼠肝臟損傷均有保護(hù)作用。目前，地耳草已被提煉制成田基黃注射液，臨床用于病毒性肝炎屬肝膽濕證者。
硫普羅寧(Tiopronin)，是一種新型的含巰基甘氨酸藥物，化學(xué)名稱為N-(2-巰基丙?；?甘氨酸。硫普羅寧已經(jīng)作為化學(xué)藥品上市，并且已載入《國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第43冊(cè)第139-141頁(國家藥典委員會(huì)編)，其中規(guī)定按干燥品計(jì)算，含C5H9NO3S不得少于98.0％，結(jié)構(gòu)式如下所示。硫普羅寧通過側(cè)鏈的游離活性巰基在體內(nèi)發(fā)揮藥理效應(yīng)，具有促肝細(xì)胞再生、清除自由基和對(duì)重金屬的解毒作用等多種藥理效應(yīng)，臨床上廣泛應(yīng)用于肝臟疾病的治療，療效確切。
目前，利用黃芪或其提取物、田基黃或其提取物和硫普羅寧的相互作用，配伍組方，制備用于治療肝臟疾病方面的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療肝臟疾病，延緩或減少肝炎向肝腹水或肝癌的轉(zhuǎn)化，提高肝炎患者的生命質(zhì)量，本發(fā)明提供了一種主要用于治療肝臟疾病的藥物組合物及其制備方法，主要由黃芪或其提取物、田基黃或其提取物和硫普羅寧制成，對(duì)四氯化碳、D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷、四氯化碳誘導(dǎo)大鼠慢性肝損傷、酒精誘導(dǎo)小鼠慢性肝損傷均具有顯著的保護(hù)作用，并且可以顯著抑制鴨乙型肝炎病毒，產(chǎn)生了意想不到的效果。
本發(fā)明藥物組合物由黃芪、田基黃和硫普羅寧制成，其重量份數(shù)為黃芪400～10000份、田基黃50～1000份、硫普羅寧5～80份，優(yōu)選為黃芪1000～5000份、田基黃100～500份、硫普羅寧10～40份，進(jìn)一步優(yōu)選為黃芪2000份、田基黃200份、硫普羅寧20份。
本發(fā)明藥物組合物中的黃芪、田基黃可以用適宜的溶劑和方法單獨(dú)或混合提取加工得到提取物，總提取物再與硫普羅寧和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。“單獨(dú)提取”是指，黃芪、田基黃每一味藥材分別通過不同的工藝單獨(dú)提取得到提取物，再將各提取物混合得到總提取物?！盎旌咸崛　笔侵?，黃芪、田基黃兩味藥材一起提取得到總提取物。所得的總提取物中所含的主要有效成分為黃芪總皂苷和田基黃總黃酮，或者為黃芪多糖和田基黃總黃酮；主要有效成分的總含量最好不低于50％。
上述黃芪、田基黃的提取制備方法中，所用的溶劑是指藥學(xué)上常用的溶劑，可以是水或乙醇等；所用的方法是指中藥提取的一般方法，可以是煎煮法、回流提取法、浸漬法、滲漉法或連續(xù)提取法等。例如，黃芪可以用水提醇沉的方法制備得到黃芪總皂苷或黃芪多糖，田基黃可以用水提醇沉或乙醇回流提取的方法制備得到田基黃總黃酮。本發(fā)明提供了黃芪(以總皂苷或多糖為主要有效成分)、田基黃(以總黃酮為主要有效成分)的優(yōu)選提取制備工藝。
原料藥的具體制備方法如下因?yàn)楝F(xiàn)代藥理試驗(yàn)研究表明黃芪總皂苷和黃芪多糖均有抗乙肝病毒和保護(hù)藥物性肝損傷的作用，所以黃芪的“單獨(dú)提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分別如下以總皂苷為主要有效成分的黃芪的優(yōu)選提取制備工藝，如下取黃芪藥材，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為0.5～2％，總皂苷的含量不低于50％，黃芪甲苷的含量不低于2.0％。
黃芪還可以通過下述工藝提取制備，但不僅限于下述工藝工藝一取黃芪藥材，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為2～4％，總皂苷的含量不低于40％，黃芪甲苷的含量不低于1％。
工藝二取黃芪藥材，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為3～5％，總皂苷含量的不低于30％，黃芪甲苷的含量不低于1％。
以多糖為主要有效成分的黃芪的優(yōu)選提取制備工藝，如下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，合并提取液，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，濾過，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，濾過，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。通過本工藝制備的黃芪多糖得率為0.5～2％，多糖的含量不低于50％。
黃芪還可以通過下述工藝提取制備，但不僅限于下述工藝工藝一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過，收集沉淀，真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪多糖得率為2～4％，多糖的含量不低于40％。
工藝二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，合并提取液，濾過，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，濾過，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪多糖得率為3～4％，多糖的含量不低于35％。
以總黃酮為主要有效成分的田基黃的優(yōu)選提取制備工藝，如下取田基黃，切斷，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15，加乙醇至含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至適量，攪勻，冷藏靜置過夜，濾過，濾液加于已處理好的聚酰胺柱上，先用3倍柱體積的水洗脫，棄去洗脫液，再用4倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的田基黃總黃酮得率為1～2％，田基黃總黃酮的含量以蘆丁(C27H30O16)計(jì)不低于60％，以槲皮素(C15H10O7)計(jì)不低于20％。
田基黃還可通過下述工藝提取制備，但不僅限于下述工藝工藝一取田基黃，切斷，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15，加乙醇至含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量，加乙醇至含醇量達(dá)75％，同上法處理后，加水至500ml，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過，濾液加新制的明膠溶液，邊加邊攪拌，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至適量，加乙醇至含醇量達(dá)85％，靜置48小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的田基黃總黃酮得率3～5％，田基黃總黃酮的含量以蘆丁(C27H30O16)計(jì)不低于30％，以槲皮素(C15H10O7)計(jì)不低于5％。
工藝二取田基黃，切斷，加70％乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮成每1ml相當(dāng)于1g生藥材溶液，冷藏靜置過夜，濾過，濾液加20％氫氧化鈉調(diào)pH值至8.0，靜置，濾過，再加稀鹽酸調(diào)pH值至7.0，靜置，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的田基黃總黃酮得率6～8％，田基黃總黃酮的含量以蘆丁(C27H30O16)計(jì)不低于20％，以槲皮素(C15H10O7)計(jì)不低于3％。
本發(fā)明藥物組合物，還可以由黃芪總皂苷或者黃芪多糖代替黃芪、田基黃總黃酮代替田基黃投料制得，按照提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明藥物組合物可以有以下兩種不同配比，重量份分別為配比1黃芪總皂苷2～200份、田基黃總黃酮0.5～20份、硫普羅寧5～80份，黃芪總皂苷5～100份、田基黃總黃酮1～10份、硫普羅寧10～40份，進(jìn)一步優(yōu)選為黃芪總皂苷10～40份、田基黃總黃酮2～4份、硫普羅寧20份。
配比2黃芪多糖2～200份、田基黃總黃酮0.5～20份、硫普羅寧5～80份，優(yōu)選為黃芪多糖5～100份、田基黃總黃酮1～10份、硫普羅寧10～40份，進(jìn)一步優(yōu)選為黃芪多糖10～40份、田基黃總黃酮2～4份、硫普羅寧20份。
上述藥物組合物中，黃芪總皂苷的主要有效成分為總皂苷，總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，黃芪甲苷的含量不低于1.0％，最好不低于2.0％；黃芪多糖的主要有效成分的為多糖，多糖的含量不低于35％，最好不低于50％；田基黃總黃酮的主要有效成分為總黃酮，總黃酮的含量以蘆丁不低于20％，最好不低于50％，以槲皮素計(jì)不低于3％，最好不低于20％。
黃芪總皂苷、黃芪多糖、田基黃總黃酮均可參照前述方法制備。按上述兩種配比得到的總提取物中的主要有效成分為黃芪總皂苷和田基黃總黃酮，或者為黃芪多糖和田基黃總黃酮；主要有效成分的總含量最好不低于50％。
本發(fā)明藥物組合物，藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。上述組成，若以克為單位，可以制成10～1000次用量的制劑，如作為水針或粉針，可制成20～2000支，每次用量1～10支。如作為片劑或膠囊劑，可制成20～2000片，每次服用1～10片。上述組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克或噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位。上述重量份數(shù)對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，以口服、鼻吸入或胃腸外給藥的方式施用于需要這種治療的患者?？诜o藥時(shí)，可制成口服常釋劑型(如片、腸溶片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊等)、緩釋控釋劑型(如緩釋片、控釋片、緩釋膠囊、控釋膠囊等)、口服液體劑(如口服溶液、糖漿等)、滴丸、顆粒劑等；胃腸外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、注射用水或油懸浮劑、栓劑等。優(yōu)選劑型為注射劑和口服制劑，如粉針、水針、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液、片、膠囊、軟膠囊、顆粒、滴丸、口服液等。
上述藥物組合物，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，必要時(shí)可以添加各種藥學(xué)上可接受的輔料，包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明藥物組合物，主要用于制備抗肝臟疾病的藥物。藥理藥效研究表明，黃芪或其提取物黃芪總皂苷或者黃芪多糖、田基黃或其提取物、硫普羅寧合并用藥對(duì)D-氨基半乳糖(DAG)致小鼠急性肝損傷、四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷、四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的大鼠慢性肝損傷、酒精誘導(dǎo)的小鼠慢性肝損傷均具有顯著的保護(hù)作用，并且可以顯著抑制鴨乙型肝炎病毒(DHBV)；提示其在治療病毒性肝炎、藥物性肝損傷、脂肪肝、酒精肝方面將有顯著療效。
本發(fā)明藥物組合物，具有下列優(yōu)點(diǎn)(1)提供了一種新的復(fù)方抗肝炎藥物，滿足臨床需要。
(2)對(duì)本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進(jìn)行了大量摸索研究，通過不同配比制成的注射液對(duì)D-氨基半乳糖(DAG)致肝損傷小鼠血清AST和ALB水平的影響的研究，篩選出具有顯著療效的重量配比。
(3)藥理藥效研究表明，本發(fā)明藥物組合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷有顯著保護(hù)作用，能顯著降低血清血清ALT和MDA水平，顯著降低肝指數(shù)；對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠慢性肝損傷有顯著保護(hù)作用，能顯著降低血清ALT和AST水平，顯著升高血清ALB水平，顯著減輕肝纖維化程度和降低纖維化發(fā)生率；對(duì)酒精誘導(dǎo)的小鼠慢性肝損傷也有顯著的保護(hù)作用，能顯著降低血清血清ALT、AST、TG水平，減輕肝組織病變；可以顯著抑制鴨乙型肝炎病毒(DHBV)，高劑量組的效果與陽性對(duì)照組的效果相當(dāng)，并且停藥后無反跳現(xiàn)象。產(chǎn)生了意想不到的效果。
(4)本發(fā)明藥物組合物，可以以黃芪、田基黃、硫普羅寧投料，也可以以黃芪提取物、田基黃總黃酮、硫普羅寧為原料，可制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
(5)對(duì)本發(fā)明藥物組合物制成的制劑或所用的提取物，進(jìn)行了鑒別、含量測(cè)定、穩(wěn)定性研究等，有效成分明確、含量高，制劑穩(wěn)定性好，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全。
(6)提供了優(yōu)選的制備工藝，簡(jiǎn)便易行，且制劑質(zhì)量高，適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)。
(7)本發(fā)明藥物組合物藥療效確切，合并用藥后用藥量減少，具有廣闊的應(yīng)用前景。
以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物組合物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)。本發(fā)明藥物組合物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明藥物組合物僅具有下列有益效果。
以下試驗(yàn)例中用HDL1代替以黃芪總皂苷、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分的藥物組合物，用HDL2代替以黃芪多糖、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分的藥物組合物。以下試驗(yàn)例中所用的黃芪總皂苷為實(shí)施例1制備所得，所用的黃芪多糖為實(shí)施例2制備所得，所用的田基黃總黃酮為實(shí)施例3制備所得。試驗(yàn)例2～6中所用的HDL1注射液、HDL2注射液為實(shí)施例4制備所得。
試驗(yàn)例1藥效學(xué)試驗(yàn)——黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物健康小鼠，240只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機(jī)分為24組，每組10只。
供試品氯化鈉注射液(正常對(duì)照組)250ml∶2.25g，山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司黃芪總皂苷注射液自制，2ml，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)黃芪多糖注射液自制，2ml，含黃芪多糖126mg(相當(dāng)于原藥材10g)田基黃注射液自制，2ml，含田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)硫普羅寧注射液市購，2ml∶100mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司(黃芪+田基黃+硫普羅寧)1注射液自制，見表1-1(以黃芪總皂苷、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分)(黃芪+田基黃+硫普羅寧)2注射液自制，見表1-1(以黃芪多糖、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分)給藥劑量見表1-1。
試驗(yàn)方法小鼠隨機(jī)分為24組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型組和各給藥組。正常對(duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)10天；各給藥組按表1-2尾靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)10天。正常對(duì)照組在最后一次尾靜脈注射1h后，腹腔注射生理鹽水；其余各組均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖(DAG)500mg/kg。24h后，處死動(dòng)物取血，離心，取血清，測(cè)定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和白蛋白(ALB)水平。取血后，肝組織作常規(guī)病理組織學(xué)檢查。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論結(jié)果見表1-1。與正常對(duì)照組相比較，模型組的血清AST和ALB水平均顯著升高(p＜0.01)，病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肝組織明顯受損，并出現(xiàn)壞死，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷均具有保護(hù)作用，能降低血清AST和ALB水平，減輕肝組織病變和壞死；黃芪總皂苷注射液和黃芪多糖注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用較弱，田基黃注射液和硫普羅寧注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05)；黃芪400～10000份、田基黃50～1000份、硫普羅寧5～80份制成的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)1注射液和(黃芪+田基酮+硫普羅寧)2注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷均具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01)，黃芪1000～5000份、田基黃100～500份、硫普羅寧10～40份制成的注射液的保護(hù)作用更好，尤其以黃芪2000份、田基黃200份、硫普羅寧20份制成的注射液的保護(hù)作用最好(p＜0.001)。
表1-1黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)DAG肝損傷小鼠的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
與正常對(duì)照組相比較#p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與硫普羅寧注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與田基黃注射液組相比較cp＜0 05，dp＜0.01；與黃芪總皂苷注射液組相比較ep＜0.01；與黃芪多糖注射液組相比較fp＜0.01。
與黃芪總皂苷注射液組相比較，各個(gè)配比的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)1注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01)；與黃芪多糖注射液組相比較，各個(gè)配比的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)2注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01)。與田基黃注射液相比較，各個(gè)配比的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)1注射液和(黃芪+田基酮+硫普羅寧)2注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用均具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05，p＜0.01)。與硫普羅寧注射液相比較，各個(gè)配比的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)1注射液和(黃芪+田基酮+硫普羅寧)2注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用均具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05，p＜0.01)。
試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，并且，相同給藥劑量下，各個(gè)配比的(黃芪+田基酮+硫普羅寧)1注射液和(黃芪+田基酮+硫普羅寧)2注射液對(duì)DAG誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用均優(yōu)于黃芪總皂苷注射液、黃芪多糖注射液、田基黃注射液和硫普羅寧注射液?jiǎn)为?dú)使用的效果。提示，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥具有協(xié)同作用，在抗肝炎、肝損傷方面有顯著作用。
試驗(yàn)例2黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)四氯化碳致小鼠肝損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物健康小鼠，100只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機(jī)分為10組，每組10只。
供試品 氯化鈉注射液(正常對(duì)照組)250ml∶2.25g，山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司田基黃注射液自制，2ml，含田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)硫普羅寧注射液市購，2ml∶100mg，濟(jì)南和民制藥有限責(zé)任公司HDL1注射液自制，5ml∶249mg，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mgHDL2注射液自制，5ml∶24lmg，含黃芪多糖126mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg給藥劑量見表1-2。
試驗(yàn)方法小鼠100只，隨機(jī)分為10組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型組和各給藥組。正常對(duì)照組和模型組腹腔注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)4天；各給藥組按表1-2腹腔注射給藥，每日1次，連續(xù)4天。最后一次腹腔注射2h后，正常對(duì)照組腹腔注射花生油10ml/kg，其余各組均腹腔注射0.12％四氯化碳(CCl4)花生油溶液10ml/kg。6h后心臟采血，離心取血清，測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和丙二醛(MDA)水平。處死后，取肝臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重，計(jì)算肝指數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論 結(jié)果見表1-2。與正常對(duì)照組相比較，模型組的血清ALT和MDA水平顯著升高(p＜0.01)，肝指數(shù)顯著升高(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷均具有保護(hù)作用，能降低血清血清ALT和MDA水平，降低肝指數(shù)；田基黃注射液、硫普羅寧注射液、低劑量HDL1注射液和低劑量HDL2注射液對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05，p＜0.01)；中、高劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-2黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
與正常對(duì)照組相比較#p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與硫普羅寧注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與田基黃注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，并且保護(hù)作用與給藥劑量相關(guān)，高劑量組的效果最好；各劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用均優(yōu)于田基黃注射液和硫普羅寧注射液?jiǎn)为?dú)使用的效果。提示，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥具有協(xié)同作用，在抗急性肝炎、急性肝損傷方面有顯著作用。
試驗(yàn)例3黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物健康大鼠，100只，體重180～200g，雌雄兼用，隨機(jī)分為10組，每組10只。
供試品氯化鈉注射液(正常對(duì)照組)250m1∶2.25g，山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司田基黃注射液自制，2ml，含田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)硫普羅寧注射液市購，2ml∶100mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司HDL1注射液自制，5ml∶249mg，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mgHDL2注射液自制，5ml∶241mg，含黃芪多糖126mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg給藥劑量見表1-3。
試驗(yàn)方法健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每周2次，共10周，作為正常對(duì)照組。其余大鼠，皮下注射40％CCl4花生油溶液3ml/kg，每周2次，共10周，誘導(dǎo)肝纖維化；隨后隨機(jī)分為9組，每組10只，分別為模型組和各給藥組。各組按表1-4腹腔注射給藥，每日1次，共10周。末次給藥24h后，下腔靜脈采血，測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和白蛋白水平(ALB)；同時(shí)，取肝組織作常規(guī)病理組織學(xué)檢查。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論結(jié)果見表1-3。與正常對(duì)照組相比較，模型組的血清ALT、AST水平均顯著升高(p＜0.01)，血清ALB水平顯著下降(p＜0.01)，病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)大鼠出現(xiàn)比較典型的肝纖維化，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對(duì)肝纖維化大鼠均具有保護(hù)作用，能降低血清AST和ALB水平，升高血清ALB水平，減輕肝纖維化程度和降低纖維化發(fā)生率；田基黃注射液、硫普羅寧注射液、低劑量HDL1注射液和低劑量HDL2注射液對(duì)肝纖維化大鼠具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05，p＜0.01)；中、高劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)肝纖維化大鼠具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-3黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)肝纖維化大鼠的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
與正常對(duì)照組相比較#p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與硫普羅寧注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與田基黃注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥對(duì)肝纖維化大鼠具有顯著的保護(hù)作用，并且保護(hù)作用與給藥劑量相關(guān)，高劑量組的效果最好；各劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)肝纖維化大鼠的保護(hù)作用均優(yōu)于田基黃注射液和硫普羅寧注射液?jiǎn)为?dú)使用的效果。提示，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥具有協(xié)同作用，在抗慢性肝炎、肝纖維化、慢性肝損傷方面有顯著作用。
試驗(yàn)例4黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物健康小鼠，100只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機(jī)分為10組，每組10只。供試品氯化鈉注射液(正常對(duì)照組)250ml∶2.25g，山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司田基黃注射液自制，2ml，含田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)硫普羅寧注射液市購，2ml∶100mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司HDL1注射液自制，5ml∶249mg，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mgHDL2注射液自制，5ml∶241mg，含黃芪多糖126mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg給藥劑量見表1-4。
試驗(yàn)方法健康小鼠10只，灌胃給予蒸餾水10ml/kg，每天1次，共5周，作為正常對(duì)照組。其余小鼠，灌胃給予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；隨后隨機(jī)分為9組，分別為模型組和各給藥組。此后，各組按表1-3尾腹腔注射給藥，每日1次，共8周。末次給藥24h后，下腔靜脈采血，測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同時(shí)，取肝組織作常規(guī)病理組織學(xué)檢查。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論 結(jié)果見表1-4。與正常對(duì)照組相比較，模型組的血清ALT、AST、TG水平均顯著升高(p＜0.01)，病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肝組織明顯受損，肝細(xì)胞脂肪性病變、空泡變性、凋亡等，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷均具有保護(hù)作用，能降低血清血清ALT、AST、TG水平，減輕肝組織病變；田基黃注射液、硫普羅寧注射液、低劑量HDL1注射液和低劑量HDL2注射液對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用(p＜0.05)；中、高劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷具有極顯著的保護(hù)作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-4黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
與正常對(duì)照組相比較#p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與硫普羅寧注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與田基黃注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，并且保護(hù)作用與給藥劑量相關(guān)，高劑量組的效果最好；各劑量HDL1注射液和 HDL2注射液對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷的保護(hù)作用均優(yōu)于田基黃注射液和硫普羅寧注射液?jiǎn)为?dú)使用的效果。提示，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥具有協(xié)同作用，在抗酒精性性肝損傷方面有顯著作用。
試驗(yàn)例5黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥抗鴨乙型肝炎病毒(DHBV)的作用受試動(dòng)物1日齡北京鴨，雌雄兼用。
供試品注射用阿昔洛韋(陽性對(duì)照組)0.25mg，湖北科益藥業(yè)股份有限公司田基黃注射液自制，2ml，含田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)硫普羅寧注射液市購，2ml∶100mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司HDL1注射液自制，5ml∶249mg，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg
HDL2注射液自制，5ml∶241mg，含黃芪多糖126mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg給藥劑量見表1-5。
試驗(yàn)方法1日齡北京鴨足靜脈注射DHBV-DNA陽性血清，每只0.2ml，感染后7天取血，分離血清，-20℃保存待檢。篩選出感染成功的陽性鴨60只，隨機(jī)分為10組，每組6只，分別為模型組、陽性對(duì)照組和各給藥組。感染后第13天開始，各組按表1-5靜脈注射給藥，每天1次，共2周。分別于給藥前、給藥第7天、給藥第14天和停藥后第3天，自鴨腿脛靜脈抽血，分離血清，-20℃保存待檢。用DHBV-DNADotBlot法檢測(cè)上述鴨血清，以雜交斑點(diǎn)吸光度(OD)值作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論 結(jié)果見表1-5。與模型組相比較，各給藥組對(duì)鴨DHBV病毒均有顯著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。給藥期間，陽性對(duì)照注射用阿昔洛韋對(duì)鴨DHBV病毒有極顯著的抑制作用(p＜0.001)，但是停藥后DHBV水平又升高；給藥期間，田基黃注射液、硫普羅寧注射液對(duì)鴨DHBV病毒均有顯著的抑制作用(p＜0.05)，但是停藥后硫普羅寧注射液給藥組的DHBV水平又明顯升高；低劑量HDL1注射液和低劑量HDL2注射液對(duì)鴨DHBV病毒均有顯著的抑制作用(p＜0.05)，中、高劑量HDL1注射液和HDL2注射液有極顯著的抑制作用(p＜0.01)，并且停藥后DHBV-DNA水平無明顯升高。
表1-5黃芪、田基黃、硫普羅寧聯(lián)合用藥對(duì)鴨DHBV-DNA的抑制作用(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝6)
與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與硫普羅寧注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與田基黃注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥對(duì)鴨DHBV病毒具有顯著的抑制作用，并且抑制作用與給藥劑量相關(guān)，高劑量組的效果最好；各劑量HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)鴨DHBV病毒的抑制作用均優(yōu)于田基黃注射液和硫普羅寧注射液?jiǎn)为?dú)使用的效果。給藥期間，高劑量組HDL1注射液和HDL2注射液對(duì)鴨DHBV病毒的抑制作用略低于陽性對(duì)照組注射用阿昔洛韋的效果，但是，停藥后注射用阿昔洛韋組出現(xiàn)明顯的反跳現(xiàn)象，而HDK1注射液和HDK2注射液組無明顯反跳現(xiàn)象。提示，黃芪、田基黃、硫普羅寧合并用藥具有協(xié)同作用，在抗病毒性肝炎方面有顯著作用，并且停藥后無反跳現(xiàn)象。
試驗(yàn)例6HDL1注射液、HDL2注射液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品HDL1注射液自制，5ml∶249mg，含黃芪總皂苷134mg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mgHDL2注射液自制，5ml∶241mg，含黃芪多糖126mmg(相當(dāng)于原藥材10g)、田基黃總黃酮15mg(相當(dāng)于原藥材1g)、硫普羅寧100mg考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量。
長(zhǎng)期試驗(yàn)置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置12個(gè)月。分別于第3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月，比較外觀后，測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較；12個(gè)月末增加無菌和熱原檢查。
試驗(yàn)結(jié)果溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化；長(zhǎng)期試驗(yàn)12個(gè)月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論上述考察結(jié)果表明，HDL1注射液、HDL2注射液的各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期儲(chǔ)存，適應(yīng)于工業(yè)大生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實(shí)施例中用HDL1代替以黃芪總皂苷、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分的藥物組合物，用HDL2代替以黃芪多糖、田基黃總黃酮、硫普羅寧為主要有效成分的藥物組合物。實(shí)施例4～13中所用的黃芪總皂苷為實(shí)施例1制備所得，所用的黃芪多糖為實(shí)施例2制備所得，所用的田基黃總黃酮為實(shí)施例3制備所得。
實(shí)施例1黃芪總皂苷的制備以及鑒別和含量測(cè)定黃芪總皂苷的制備取黃芪藥材，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
分別制備三批黃芪總皂苷，提取物得率見表2-1。
黃芪總皂苷的鑒別鑒別試驗(yàn)一取本品10mg，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)，紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別試驗(yàn)二取本品10mg，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取山，晾干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
分別對(duì)上述三批黃芪總皂苷進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，結(jié)果均符合要求。
黃芪總皂苷的含量測(cè)定總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷干品0.1mg)。
供試品溶液的制備取本品100mg，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓浦?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml納氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml、高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密稱取本品40mg，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
分別對(duì)上述三批黃芪總皂苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2-1。
通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為0.5～2％，總皂苷的含量不低于50％，黃芪甲苷的含量不低于2.0％。
表2-1黃芪總皂苷的含量測(cè)定結(jié)果和得率
實(shí)施例2黃芪多糖的制備以及鑒別和含量測(cè)定黃芪多糖的制備取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，合并提取液，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，濾過，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，濾過，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
分別制備三批黃芪多糖，得率見表2-2。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2mg，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
分別對(duì)上述三批黃芪多糖進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，結(jié)果均符合要求。
黃芪多糖的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5分鐘，置水浴中加熱15分鐘，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對(duì)照，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測(cè)定法取本品0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測(cè)定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
分別對(duì)上述三批黃芪多糖進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2-2。
通過本工藝制備的黃芪多糖得率為0.5～2％，多糖的含量不低于50％。
表2-2黃芪多糖的含量測(cè)定結(jié)果和得率
實(shí)施例3田基黃總黃酮的制備以及鑒別和含量測(cè)定田基黃總黃酮的制備取田基黃(田基黃)，切斷，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15，加乙醇至含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至適量，攪勻，冷藏靜置過夜，濾過，濾液加于已處理好的聚酰胺柱上，先用3倍柱體積的水洗脫，棄去洗脫液，再用4倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。
分別制備三批田基黃總黃酮，得率見表2-3。
田基黃總黃酮的鑒別取本品50mg，加甲醇10ml、鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約5分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
對(duì)上述三批田基黃總黃酮進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，結(jié)果均符合要求。
田基黃總黃酮的含量測(cè)定田基黃總黃酮的含量測(cè)定(以蘆丁計(jì))
對(duì)照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加適量80％乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷，加80％乙醇至刻度，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分別置25ml量瓶中，各加80％乙醇至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉溶液10ml，再加乙醇至刻度，搖勻，放置15分鐘，用分光光度法測(cè)定，在507nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法取本品0.5g，精密稱定，加水10ml使溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(50～60目，2g，內(nèi)徑12～15mm，濕法裝柱)上，用100ml水洗脫，棄去洗脫液，用80％乙醇洗脫，收集洗脫液約100ml，濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加80％乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個(gè)25ml量瓶中，甲瓶加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙量瓶中各加氫氧化鈉溶液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，用分光光度法測(cè)定，以乙瓶為空白，在507nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。
田基黃總黃酮的含量測(cè)定(以槲皮素計(jì))色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.2％磷酸溶液(50∶50)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時(shí)的槲皮素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密稱取本品0.2g，置圓底燒瓶中，加甲醇15ml、鹽酸1ml，混勻，加熱回流30分鐘，放冷，移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
對(duì)上述三批田基黃總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2-3。
通過本工藝制備的田基黃總黃酮得率為1～2％，田基黃總黃酮的含量以蘆丁(C27H30O16)計(jì)不低于60％，以槲皮素(C15H10O7)計(jì)不低于20％。
表2-3田基黃總黃酮的含量測(cè)定結(jié)果和得率
實(shí)施例4HDL注射液的制備1、處方HDL1注射液處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g聚山梨酯-80 30g注射用水加至5000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2注射液處方黃芪多糖126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g聚山梨酯-80 20g注射用水加至5000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后加入處方量的黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧，加熱攪拌溶解完全；補(bǔ)加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；(7)將溶液灌裝、熔封于玻璃安瓿中；(8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(9)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5注射用HDL的制備1、處方注射用HDL1處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 30g甘露醇 200g無菌注射用水加至3000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
注射用HDL2處方黃芪多糖126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 20g甘露醇 200g無菌注射用水加至3000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步騾(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)取配液量80％的無菌注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧加入加熱攪拌溶解完全，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補(bǔ)加無菌注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞；將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥；-40℃預(yù)凍4小時(shí)，低溫真空干燥-40℃～0℃18小時(shí)，然后升溫至20℃真空干燥4小時(shí)；(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；(10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6HDL氯化鈉注射液的制備1、處方HDL1氯化鈉注射液處方黃芪總皂苷 267g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 60g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2氯化鈉注射液處方黃芪多糖252g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 40g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧加入加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例7HDL葡萄糖注射液的制備1、處方HDL1葡萄糖注射液處方黃芪總皂苷 267g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 60g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2葡萄糖注射液處方黃芪多糖252g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧200g聚山梨酯-80 40g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧加入加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8HDL片的制備1、處方HDL1片處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g淀粉50.0g預(yù)膠化淀粉 50.0g微晶纖維素 30.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 20.0g
共制備 1000片注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2片處方黃芪多糖 126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮 15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧 100g淀粉 60.0g預(yù)膠化淀粉50.0g微晶纖維素30.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉20.0g
共制備1000片注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮、硫普羅寧、淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；(7)取樣，半成品化驗(yàn)；(8)按照化驗(yàn)確定的片重壓片；(9)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例9HDL膠囊的制備1、處方HDL1膠囊處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮 15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧 100g淀粉 60.0g預(yù)膠化淀粉 50.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量硬脂酸鎂 1.0g
共制備 1000粒注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2膠囊處方黃芪多糖126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g淀粉60.0g預(yù)膠化淀粉 60.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂2.0g
共制備 1000片注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮、硫普羅寧、淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗(yàn)；(9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊；(10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10HDL軟膠囊的制備1、處方HDL1軟膠囊處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g
共制備 1000粒注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2軟膠囊處方黃芪多糖126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g
共制備 1000粒注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧粉碎過100目篩，備用；(2)處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷；(3)加入黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧，研勻，過膠體磨；(4)取樣，半成品化驗(yàn)；(5)壓制成軟膠囊；(6)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例11HDL滴丸的制備1、處方HDL1滴丸處方黃芪總皂苷 134g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g聚乙二醇6000600g
注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2滴丸處方黃芪多糖126g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮15g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧100g聚乙二醇6000600g
注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融；(2)聚乙二醇6000全部熔融后加入黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧，攪拌溶解；(3)過60目篩過濾；(4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸；(5)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例12HDL顆粒的制備1、處方HDL1顆粒處方黃芪總皂苷 267g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧200g糖粉1500.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2顆粒處方黃芪多糖 252g(相當(dāng)于原藥材20kg)田基黃總黃酮 29g(相當(dāng)于原藥材2kg)硫普羅寧 200g糖粉 1500.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)將蔗糖粉碎過100目篩備用，黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；
(3)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮、硫普羅寧與糖粉、矯味劑以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(4)過20目篩制顆粒；(5)顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干顆粒過18目篩整粒；(7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量；(8)包裝；成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例13HDL口服液的制備1、處方HDL1口服液處方黃芪總皂苷 267g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧200g苯甲酸鈉40g甜菊甙 30g水 加至10000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為63.51％。
HDL2口服液處方黃芪多糖252g(相當(dāng)于原藥材10kg)田基黃總黃酮29g(相當(dāng)于原藥材1kg)硫普羅寧200g苯甲酸鈉40g甜菊甙 30g水 加至10000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為60.26％。
2、具體步驟(1)將黃芪總皂苷(或者黃芪多糖)、田基黃總黃酮和硫普羅寧加入配液量60％的水中加熱攪拌溶解完全；(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；(3)合并上述溶液，補(bǔ)加水至全量；(4)過0.8μm的微孔濾膜過濾；(5)半成品化驗(yàn)；(6)灌裝；成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物主要由下列重量份的原料藥制成黃芪400～10000份、田基黃50～1000份、硫普羅寧5～80份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，各原料藥的重量份為黃芪1000～5000份、田基黃100～500份、硫普羅寧10～40份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，各原料藥的重量份為黃芪2000份、田基黃200份、硫普羅寧20份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的黃芪、田基黃可以用適宜的溶劑和方法單獨(dú)或混合提取加工得到提取物，總提取物再與硫普羅寧、藥學(xué)上可接受的輔料混合加工制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的總提取物中所含的主要有效成分為黃芪總皂苷和田基黃總黃酮，或者為黃芪多糖和田基黃總黃酮，所含的主要有效成分的總含量不低于50％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可由下列原料藥制成黃芪總皂苷或者黃芪多糖、田基黃總黃酮和硫普羅寧，其重量份為黃芪總皂苷2～200份、田基黃總黃酮0.5～20份、硫普羅寧5～80份，或者為黃芪多糖2～200份、田基黃總黃酮0.5～20份、硫普羅寧5～80份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特在于，各原料藥的重量份為黃芪總皂苷5～100份、田基黃總黃酮1～10份、硫普羅寧10～40份，或者為黃芪多糖5～100份、田基黃總黃酮1～10份、硫普羅寧10～40份。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特在于，各原料藥的重量份為黃芪總皂苷10～40份、田基黃總黃酮2～4份、硫普羅寧20份，或者為黃芪多糖10～40份、田基黃總黃酮2～4份、硫普羅寧20份。
9.如權(quán)利要求6～8所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％、黃芪甲苷的含量不低于1.0％，黃芪多糖中多糖的含量不低于35％，田基黃總黃酮中總黃酮的含量以蘆丁不低于20％、以槲皮素計(jì)不低于3％。
10.如權(quán)利要求1～3、6～8所述的任一藥物組合物，其特征在于，該組合物可與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的治療肝臟疾病的藥物組合物及其制備方法，由黃芪400～10000份、田基黃50～1000份、硫普羅寧5～80份制成，也可以由黃芪總皂苷或者黃芪多糖2～200份、田基黃總黃酮0.5～20份、硫普羅寧5～80份制成?？芍瞥扇我慌R床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選為口服制劑和注射劑。本發(fā)明藥物組合物有效成分明確，含量確切，共同發(fā)揮抗病毒性肝炎、藥物性肝損傷、脂肪肝、酒精肝等功效，效果顯著，主要用于制備治療肝臟疾病的藥物。制備工藝簡(jiǎn)便易行，制劑質(zhì)量高且穩(wěn)定，適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1977882SQ20051004541
公開日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2005年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月5日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華