專利名稱：新的硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶醇以及它們相應(yīng)的磷酸酯和作為靶向細(xì)胞毒素劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的硝基苯基氮芥(mustard)和硝基苯基氮丙啶醇、它們相應(yīng)的磷酸酯、它們作為靶向細(xì)胞毒素劑、作為低含氧量腫瘤中的生物還原藥物的用途以及它們與硝基還原酶組合在細(xì)胞清除(cell ablation)、包括基因?qū)蛐悦盖八幆煼?GDEPT)和抗體導(dǎo)向性酶前藥療法(ADEPT)中的用途。
背景技術(shù)：
腫瘤選擇性前藥(可在體內(nèi)選擇性轉(zhuǎn)化為更具活性的化合物的相對無活性的化合物)的使用是癌癥治療中一種有價值的概念(參見例如Denny，Eur.J.Med.Chem.(2001)36，577)。
例如，前藥可在酶的影響下轉(zhuǎn)化為抗腫瘤藥，所述的酶可與將結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體結(jié)合。這種前藥與這種酶單克隆/抗體綴合物的組合代表了一種非常有效的臨床藥物。這種癌癥療法的途徑通常稱為“抗體導(dǎo)向性酶前藥療法”(ADEPT)，在WO88/07378中有公開。
另一種稱為“病毒導(dǎo)向性酶前藥療法”(VDEPT)的治療途徑已經(jīng)作為采用前藥來治療患者腫瘤細(xì)胞的方法被提出。腫瘤細(xì)胞用病毒載體來靶向，這種病毒載體載有編碼能激活前藥的酶的基因?；蛲ㄟ^組織特異性啟動子或增強(qiáng)子序列來被轉(zhuǎn)錄性調(diào)節(jié)。病毒載體進(jìn)入腫瘤細(xì)胞并表達(dá)酶，目的在于前藥在腫瘤細(xì)胞內(nèi)被轉(zhuǎn)化為活性藥物(Huber等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)88，8039)?；蛘?，已經(jīng)使用非病毒方法來傳送基因。這些方法包括磷酸鈣共沉淀、顯微注射、脂質(zhì)體、直接DNA攝取和受體介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)送。它們在Morgan & French，Annu.Rev.Biochem.，1993，62；191中進(jìn)行了綜述。術(shù)語“GDEPT”(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?用于包括病毒和非病毒傳送系統(tǒng)(Denny等人，US 6,310,237)。
4-硝基芳族化合物被哺乳動物和細(xì)菌兩者的黃素蛋白酶還原，它分階段影響至多6個電子的加入。主要的酶代謝物通常是4-電子還原類型(羥胺)。
大量硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶已經(jīng)作為用于與硝基還原酶組合的基因?qū)蛐悦盖八幆煼?GDEPT)的前藥進(jìn)行了報道。具體而言，CB 1954[5-(氮丙啶-1-基)-2，4-二硝基苯甲酰胺，(1)，見下文]被報道為從E.coli B分離的需氧硝基還原酶NTR(nfsB基因產(chǎn)物)的底物(Boland等人，Biochem.Pharmacol.1991，41，867-875；Anlezark等人，Biochem.Pharmacol，1992，44，2289-2295；Parkinson等人，J.Med.Chem.2000，43，3624)。這種化合物已經(jīng)用作ADEPT(Knox等人，Biochem.Pharmacol.，1995，49，1641-1647)和GDEPT(Bridgewater等人.Eur.J.Cancer，1995，31A，2362-2370；Bailey等人，Gene Ther.，1996，3，1143-1150；Bailey和Hart，Gene Ther，1997，4，80-81；Green等人，Cancer Gene Ther.，1997，4，229-238)申請、包括臨床試驗(yàn)的前藥(Chung-Faye等人，Clin.Cancer Res.，2001，7，2662-2668)。
類似地，二硝基苯基氮芥SN 23862(2)同樣是NTR的底物，表現(xiàn)出對表達(dá)該酶的細(xì)胞系的選擇性毒性。它通過硝基還原被激活(Palmer等人，J.Med.Chem.，1995，38，1229；Kestell等人，Cancer Chemother.Pharmacol.，2000，46，365-374)。4-SO2Me衍生物(3)也是底物(Atwell等人，Anti-Cancer DrugDes.，1996，11，553)，區(qū)域異構(gòu)體(4)和(5)亦如此(Friedlos等人，J.Med.Chem.，1997，40，1270)。
然而，當(dāng)這種類型的化合物在低含氧量腫瘤組織中被內(nèi)源性還原酶激活時，它們作為生物還原性前藥不是非常有效，在野生型AA8細(xì)胞系中采用克隆源性(clonogenic)分析法在低含氧量條件下所測定的效價比是富氧條件下的2-5倍(Palmer等人，J.Med.Chem.1996，39，2518-2528)。
出于增溶化合物的目的，已經(jīng)描述了一些氮芥的磷酸類似物。最常知的是磷酸雌莫司汀(Estracyt；6)，已經(jīng)證明它與各種微管相關(guān)蛋白的微管蛋白結(jié)合域結(jié)合(Moraga等人，Biochim.Biophys.Acta，1992，1121，97-103)，并且已經(jīng)蒸發(fā)它在晚期乳腺癌中有活性(Keren-Rosenberg等人，Semin.Oncol.，1997，24(增刊3)，26-29)，但是還沒有證明它可被NTP或低氧激活。另一研究還已經(jīng)證明磷酸雌莫司汀是放射敏化劑(Kim等人，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys，1994，29，555-557)。苯酚氮芥磷酸酯類似物7是在低氧條件下不被激活的羧肽酶底物(Matsui等人，日本專利07082280 A2，1995)，增溶氮芥8已經(jīng)被描述為磷酸酶抑制劑，但是還沒有證明它在低氧條件下被激活(Workman，Chem.-Biol.Interact.，1978，20，103-112)。
本發(fā)明的目的是，提供用作靶向細(xì)胞毒素劑或生物還原性前藥的特定類別的帶有短鏈醇的硝基苯基氮芥和氮丙啶以及它們相應(yīng)的磷酸酯，或者是至少給公眾提供一種有用的選擇。
發(fā)明簡述和詳述在第一方面，本發(fā)明提供了新的式I磷酸酯化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中
X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或者二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式(I)磷酸酯化合物選自以式(Ia)、(Ib)或(Ic)表示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中Y可代表 或 且其中，n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me。
優(yōu)選式(I)磷酸酯化合物選自磷酸2-[[2-[雙(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；磷酸3-[[5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯；磷酸3-[[5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯；
磷酸2-[[2-[雙(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-({2-[雙(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基}氨基)乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-[[2-[雙(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸3-({3-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰基}氨基)丙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；和甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯。
在第二方面，本發(fā)明提供了式(II)醇化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；
R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；條件是，排除以下化合物， 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式(II)醇化合物選自以式(IIa)、(IIb)或(IIc)表示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中Y可代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me，條件是，排除以下化合物，
優(yōu)選的式(II)化合物選自N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(2-羥基乙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(4-羥基丁基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(5-羥基戊基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(6-羥基己基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；5-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-4-(甲磺?；?-2-硝基苯甲酰胺；甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羥基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯；5-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；
甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；2-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；和甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯。
在本發(fā)明的第三方面，提供了制備通式(I)所示的磷酸酯及其可藥用的鹽和衍生物的方法，
其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基或-N(CH2CH2W)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；該方法包括以下步驟(i)使式(II)化合物磷酸化， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
在第四方面，提供了制備式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物及其可藥用的鹽和衍生物的方法，
其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W1是鹵素且W2是-OSO2Me；該方法包括以下步驟使式(IIa’)、(IIb’)或(IIc’)化合物與有效量的甲磺酸銀(AgOMs)在溶劑中反應(yīng)，任選加熱，
其中Y可代表 其中W’1和W’2各自為鹵素；得到上文定義的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
可以理解，在上文剛剛定義的其中W’1和W’2為碘和/或溴的方法中，碘和/或溴可部分或全部被-OSO2Me替換。當(dāng)W’1和W’2之一或之二表示氯時，氯是惰性的并且不被-OSO2Me替換。
優(yōu)選溶劑選自MeCN或其它極性非質(zhì)子溶劑。
在第五方面，提供了制備式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物及其可藥用的鹽和衍生物的方法， 其中Y可代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me，該方法包括以下步驟使式(IIa)、(IIb)或(IIc)所示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物磷酸化，
其中Y代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me。
在第六方面，提供了通過上文定義的制備方法中任一種所獲得的式(I)、式(Ia)、(Ib)或(Ic)或者式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
在第七方面，本發(fā)明提供了用作適于下述用途的前藥的方法，(i)GDEPT(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?或ADEPT(抗體導(dǎo)向性酶前藥療法)與至少一種硝基還原酶的組合；或者(ii)用作一種或多種低氧選擇性細(xì)胞毒素；該方法包括以下步驟對受治療者的腫瘤細(xì)胞給予治療有效量的如上定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或者它們的混合物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
優(yōu)選硝基還原酶通過大腸桿菌(E.coli)的nfsB基因或梭菌屬(Clostridia)中的直向同源基因來編碼。
優(yōu)選該方法還包括照射腫瘤細(xì)胞的步驟。
在第八方面，本發(fā)明提供了用作適于GDEPT(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?或ADEPT(抗體導(dǎo)向性酶前藥療法)與至少一種硝基還原酶的組合的前藥、用作抗癌劑的方法，該方法包括以下步驟以治療有效量施用如上定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或者它們的混合物以靶向于受治療者的腫瘤細(xì)胞， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
優(yōu)選硝基還原酶通過大腸桿菌的nfsB基因或梭菌屬中的直向同源基因來編碼。
優(yōu)選該方法還包括照射腫瘤細(xì)胞的步驟。
可以理解，對于ADEPT有必要提供還原輔助因子，因?yàn)樵诩?xì)胞外可能不以顯著濃度存在?？梢韵胂?，可以使用合成的輔助因子通過與細(xì)胞內(nèi)酶類似之處來刺激前藥的活化。GDEPT沒有這樣的問題，因?yàn)橛袛?shù)種顯著濃度的細(xì)胞內(nèi)還原輔助因子，例如NADH和NADPH。
在本發(fā)明的第九方面，提供了采用至少一種硝基還原酶的細(xì)胞清除方法，其中該方法包括以下步驟以清除細(xì)胞有效量施用如上定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；其中所述的細(xì)胞表達(dá)至少一種硝基還原酶。
優(yōu)選硝基還原酶通過大腸桿菌的nfsB基因或梭菌屬中的直向同源基因來編碼。
優(yōu)選清除靶向的細(xì)胞是受治療者的組織中的腫瘤細(xì)胞。
采用至少一種硝基還原酶的細(xì)胞清除方法優(yōu)選通過ADEPT或GDEPT技術(shù)進(jìn)行。
優(yōu)選細(xì)胞清除提供了基本上最小的副作用。
在第十方面，本發(fā)明提供了一種提供抗癌療法的方法，其中如上定義的式(I)化合物以治療有效量施用于受治療者的腫瘤細(xì)胞。
優(yōu)選所述方法的治療有效量為所述受治療者最大耐受劑量的約20％至100％。
優(yōu)選該方法還包括照射腫瘤細(xì)胞的步驟。
在本發(fā)明的第十一方面，提供了如下定義的藥物組合物，該組合物包括治療有效量的式(I)化合物或式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物以及可藥用的賦形劑、添加劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
可藥用的賦形劑、添加劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑應(yīng)當(dāng)優(yōu)選是無毒的，并且應(yīng)當(dāng)對活性成分的效力沒有干擾。載體或其它材料的精確性質(zhì)取決于施用途徑，所述的施用途徑可以是口服、注射如表皮、皮下或靜脈內(nèi)注射。應(yīng)當(dāng)理解，這些因素可容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要過多的試驗(yàn)來確定。
口服給藥的藥物組合物可以是片劑、膠囊、散劑或液體形式。片劑可包含固體載體或添加劑。液體藥物組合物通常包含液體載體如水、石油、動物或植物油、礦物油或合成油?？梢园ㄉ睇}水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇類如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。膠囊可包含固體載體如明膠。
對于靜脈內(nèi)、表皮或皮下注射，活性成分為胃腸道外可接受的溶液的形式，它是無熱原的，具有適宜的pH、等張性和穩(wěn)定性。相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員完全能夠采用例如等張溶媒如氯化鈉注射液、Ringer’s注射液或乳酸鹽Ringer’s注射液來制備適宜的溶液?？梢愿鶕?jù)需要加入防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其它添加劑。
在本發(fā)明的第十二方面，提供了有效量的如上定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物在制備藥物中的用途， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的藥物(i)用于GDEPT或(ii)用作低氧選擇性細(xì)胞毒素以靶向于需要其的受治療者的癌細(xì)胞。
在本發(fā)明的第十三方面，提供了有效量的如上定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物在制備藥物中的用途， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；
R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的藥物用于細(xì)胞清除療法以靶向于需要其的受治療者的癌細(xì)胞。
雖然本發(fā)明的化合物通常用于靶向于人類受治療者的腫瘤細(xì)胞或腫瘤組織，但是它們可用于靶向于其它溫血動物受治療者的腫瘤細(xì)胞或組織，例如其它靈長類、農(nóng)場動物如牛和運(yùn)動動物及寵物如馬、狗和貓。
如說明書全文中所用的術(shù)語“治療有效量”應(yīng)理解為如上定義的式(I)或式(II)化合物或者如上定義的化合物Ia-Ic或IIa-IIc中任一化合物或其混合物足以對具有癌細(xì)胞的受治療者表現(xiàn)出益處的量。實(shí)際的施用量、速率和時間過程將取決于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度。治療方案在全科醫(yī)師和其它醫(yī)生的能力范圍內(nèi)。
如說明書全文中所用的術(shù)語“鹵素”包括氯、溴或碘。
應(yīng)當(dāng)理解，如上定義的本發(fā)明化合物可單獨(dú)施用或者與其它治療、特別是放射療法和細(xì)胞毒素化療藥物組合施用，同時還是依次施用取決于所治療的病癥。
如說明書全文中所用的術(shù)語“其可藥用的衍生物和鹽”包括由鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸和羥乙磺酸等形成的酸衍生鹽以及由碳酸鈉和碳酸鉀、氫氧化鈉和氫氧化鉀、氨、三乙胺和三乙醇胺等形成的堿衍生鹽。
如說明書全文中所用的術(shù)語“細(xì)胞清除”應(yīng)理解為通過施用被酶如硝基還原酶激活的前藥來殺死已經(jīng)被工程化以表達(dá)該酶的細(xì)胞。結(jié)果，細(xì)胞清除可用于通過硝基還原酶的特定酶表達(dá)來選擇性清除特定的靶細(xì)胞或組織，例如它們由組織來特異性地表達(dá)，然后可用于將前藥激活為活性代謝物來清除特定的靶細(xì)胞或組織。(Gusterson等人，Endocrine Related Cancer，1997，4，67-74)表述“基本最小的副作用”應(yīng)理解為殺死鄰近非靶細(xì)胞是最少的，因?yàn)橛扇缟隙x的式(I)或式(II)化合物或者如上定義的化合物Ia-Ic或IIa-IIc中任一化合物或者它們的混合物被酶激活所產(chǎn)生的活化代謝物在靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞之間沒有擴(kuò)散或擴(kuò)散很少。
式(I)的可藥用鹽包括式(I)堿性或酸性化合物與有機(jī)和無機(jī)酸和/或有機(jī)和無機(jī)堿形成的可藥用鹽。適于形成鹽的酸的實(shí)例有鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸、羥乙磺酸等。適于形成鹽的堿的實(shí)例有碳酸鈉和碳酸鉀、氫氧化鈉和氫氧化鉀、氨、三乙胺和三乙醇胺等。
本發(fā)明的其它方面由下述僅以舉例的方式給出的描述并參考其合成流程從而是顯而易見的。
其中X是-CONH-的式(I)化合物的實(shí)例可通過流程1所述的方法來制備，其中Z如上文式(I)中定義。
流程1 下述表1a和2a給出了通式(I)和(II)范圍內(nèi)的代表性化合物的物理數(shù)據(jù)，這些化合物能夠通過本發(fā)明的方法來制備。
其中Y可代表 或
表1a.母體醇類化合物的代表性實(shí)例
Aα-甲基氮芥注釋已知化合物的參考文獻(xiàn)1.Khan AH，Ross WCJ.抑制腫瘤生長的硝基苯基氮丙啶及相關(guān)化合物。
構(gòu)效關(guān)系.II.Chem.-Biol.Int，1971，4，11-22。
2 NZ專利號2407853.共同懸而未決的NZ申請?zhí)?218514.Wilson WR，Pullen SM，Hogg A，Helsby NA，Hicks KO，Denny WA.對采用三維細(xì)胞培養(yǎng)物的硝基還原酶自殺基因療法中副作用的定量。Cancer Res.，2002，62，1425-1432。
表1a中化合物可通過流程2a-2k中描述的通用方法來制備，它們在下文實(shí)施例1-20中例證。
其中Y可代表
或
表1b.式Ia-Ic磷酸酯的實(shí)例
Aα-Me
表1b化合物可通過流程3描述的通用方法來制備，它們在下文實(shí)施例26-39中例證。
流程2a 流程2b (i) SOCl2/MeOH；(ii)二乙醇胺；(iii)MsCl/py，然后LiBr；(iv)KOH；(v)(COCl)2/催化劑，DMF，然后2-氨基乙醇流程2c (i)SOCl2/催化劑DMF或(COCl)2/催化劑DMF，然后2-氨基乙醇(ii)SOCl2/催化劑DMF或(COBr)2/催化劑DMF，然后3-氨基-1-丙醇(iii)LiBr(1.4當(dāng)量)/DMF；(iv)NaI(過量)/MeCN。
流程2d (i)SOCl2/催化劑DMF，然后RNH2；(ii)HN(CH2CH2Cl)2；(iii)LiBr/3-甲基丁酮流程2e (i)二異丙醇胺；(ii)MsCl/Et3N；(iii)1N HCl/THF；(iv)LiBr(過量).
流程2f (i)3，4-二氫-2H-吡喃，p-TsOH；(ii)二乙醇胺；(iii)MsCl/Et3N；(iv)1N HCl/THF；(v)LiBr(1.2eq).
流程2g 流程2h (i)LiCl(1.2eq)(ii)NaI或LiBr(1.2eq)然后MeSO3Ag(1.5eq)流程2i (i)NaI(1.5eq)流程2j
流程2k 流程3 (i)Et2NP(OtBu)2或i-Pr2NP(OtBu)2/1H-四唑，然后mCPBA或H2O2(ii)TFA/CH2Cl2在流程3中，X、Y、Z和R如上文式(I)和(II)中所述。
實(shí)施例通過下述實(shí)施例1-25(醇)和實(shí)施例26-39(磷酸酯)解釋說明本發(fā)明和實(shí)施本發(fā)明的最佳模式。
實(shí)施例1(流程2a).N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-3)將5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酸[Palmer等人，J.Med.Chem.，1994，37，2175](1)(2.50g，7.1mmol)在含有DMF(2滴)的SOCl2(20mL)中的混懸液回流加熱1小時，然后減壓濃縮至干，并用苯重蒸。將所得苯甲酰氯粗品溶于Me2CO(50mL)中，將冷(-5℃)溶液用3-氨基-1-丙醇(1.09g，14.5mmol)在水(25mL)中的冷溶液處理。將反應(yīng)混合物于室溫振搖5分鐘，然后用水(25mL)稀釋，濃縮至一半體積，用CH2Cl2(2×)萃取。有機(jī)萃取液用0.1N HCl和水洗滌，然后后處理，得到固體，將其進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-3(2.37g，82％)mp(EtOAc/i-Pr2O)90-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.63(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.42(s，1H，H-6)，4.46(t，J＝5.1Hz，1H，OH)，3.82(t，J＝5.9Hz，4H，N(CH2CH2Cl)2)，3.68(t，J＝5.9Hz，4H，N(CH2CH2Cl)2)，3.49(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.29(q，部分模糊，J＝5.9Hz，2H，CONHCH2)，1.68(五，J＝6.7Hz，2H，CH2CH2CH2).分析.(C14H18Cl2N4O6)C，H，N，Cl。
實(shí)施例2(流程2a).N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-8)將粉末狀5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酸(2)(1.10g，2.49mmol)在苯(170mL)中的混懸液于20℃用草酰溴(1.10mL，11.7mmol)和DMF(2滴)處理。將混合物于20℃攪拌2小時，然后減壓濃縮，在苯存在下在高真空中重蒸至干。將所得酰基溴溶于Me2CO(20mL)中，溶液用3-氨基-1-丙醇(0.39g，5.19mmol)在水(10mL)中的冷溶液于-5℃處理。將混合物于室溫振搖5分鐘，然后用水稀釋并用EtOAc(2×)萃取。將有機(jī)萃取液進(jìn)行后處理，所得殘余物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-8(1.06g，85％)mp(EtOAc/i-Pr2O)85-86℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.64(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.41(s，1H，H-6)，3.77-3.64(m，8H，N(CH2CH2Cl)2)，4.46(br s，1H，OH)，3.49(t，J＝6.3Hz，2H，CH2OH)，3.33-3.25(m，部分模糊，2H，CONHCH2)，1.68(五，J＝6.72Hz，2H，CH2CH2CH2).分析.(C14H18Br2N4O6)C，H，N，Br。
實(shí)施例3(流程2a).N-(2-羥基乙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-7)。
使?；?2)與2-氨基乙醇進(jìn)行類似反應(yīng)，得到IIa-7(0.78g，46％)mp(MeOH/EtOAc/pet.醚)151-152℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(t，J＝5.7Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.43(s，1H，H-6)，4.76(t，J＝5.6Hz，1H，OH)，3.77-3.64(m，8H，N(CH2CH2Br)2)，3.53(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.31(q，部分模糊，J＝6.1Hz，2H，CONHCH2)；分析.(C13H16Br2N4O6)C，H，N，Br。
實(shí)施例4(流程2a).N-(4-羥基丁基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-9)。
使酰基溴(2)和4-氨基-1-丁醇在冷Me2CO中進(jìn)行類似反應(yīng)，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-9(69％)，為黃色固體mp(EtOAc/iPr2O)123-124℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.62(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.39(s，1H)，4.39(t，J＝5.1Hz，1H)，3.78-3.64(m，8H)，3.47-3.40(m，2H)，3.27-3.20(m，2H)，1，61-1.44(m，4H).分析.(C15H20Br2N4O6)C，H，N，Br。
實(shí)施例5(流程2a).N-(5-羥基戊基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-10)。
使酰基溴(2)和5-氨基-1-戊醇在冷Me2CO中進(jìn)行類似反應(yīng)，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-10(66％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.62(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.34(t，J＝5.1Hz，1H)，3.79-3.64(m，8H)，3.44-3.37(m，2H)，3.26-3.18(m，2H)，1.59-1.29(m，4H)。HRMS(FAB)C16H2379Br2N4O6[M+H+]m/z計算值524.9984，實(shí)測值524.9964。
實(shí)施例6(流程2a).N-(6-羥基己基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-11)。
使酰基溴(2)和6-氨基-1-己醇在冷Me2CO中進(jìn)行類似反應(yīng)，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-11(72％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.61(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.31(t，J＝5.2Hz，1H)，3.79-3.64(m，8H)，3.43-3.36(m，2H)，3.27-3.19(m，2H)，1.58-1.26(m，4H)。HRMS(FAB)C17H2579Br2N4O6[M+H+]m/z計算值539.0141，實(shí)測值539.0137。
實(shí)施例7.(流程2b).5-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺(IIa-7s)。
將5-氟-4-(甲磺?；?-2-硝基苯甲酸[Atwell等人，ACDD，1996，11，553](3)在過量SOCl2/催化量DMF中加熱，得到?；龋c無水MeOH反應(yīng)，得到5-氟-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸甲酯(4)mp(EtOAc/己烷)134-135℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.49(d，J＝5.9Hz，1H)，8.14(d，J＝9.3Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.46(s，3H).分析.(C9H8FNO6S)C，H，N。
將4(1.48g，5.34mm0l)和二乙醇胺(1.40g，13.3mmol)在DMA(6mL)中的混合物于30℃攪拌1小時，然后用EtOAc(60mL)稀釋。溶液用鹽水(2×)洗滌并減壓濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜法純化，用EtOAc/MeOH洗脫，然后從EtOAc/iPr2O中重結(jié)晶，得到5-[雙(2-羥基乙基)氨基]-4-(甲磺?；?-2-硝基苯甲酸甲酯(5)(1.41g，73％)mp 99-100℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.56(s，1H)，7.73(s，1H)，4.62(t，J＝4.9Hz，2H)，3.89(s，3H)，3.59-3.49(m，8H)，3.45(s，3H).分析.(C13H18N2O8S)C，H，N。
于0℃，將5(1.48g，4.08mmol)在無水吡啶(15mL)中的溶液用MsCl(0.80mL，10.3mmol)逐滴處理。將反應(yīng)物于0℃攪拌2小時，然后倒入10％NaBr水溶液中。收集所得二甲磺酸酯粗品，用水充分洗滌，干燥，溶于DMF(15mL)中，用NaBr(21.6g，25mmol)于70℃攪拌1.5小時。將冷的混合物倒入水中，所得固體經(jīng)硅膠色譜法純化，用CH2Cl2洗脫，然后從CH2Cl2/iPr2O中重結(jié)晶，得到5-[雙(2-溴乙基)氨基]-4-(甲磺?；?-2-硝基苯甲酸甲酯(6)(1.47g，74％)mp 161-162℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.58(s，1H)，7.94(s，1H)，3.90(s，3H)，3.82(t，J＝7.0Hz，4H)，3.63(t，J＝6.9Hz，4H)，3.48(s，3H).分析.(C13H16Br2N2O6S)C，H，N。
于10℃將6(1.00g，2.05mmol)在二烷/MeOH(1∶1，20mL)中的溶液用4N KOH水溶液(5mL)處理，并于10℃攪拌45分鐘。將混合物用1N HBr水溶液酸化至pH2，減壓濃縮至較小體積，然后用飽和NaBr水溶液(20mL)稀釋。分離所得半固體，從MeOH/H2O中結(jié)晶兩次，得到5-[雙(2-溴乙基)氨基]-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸(7)(0.70g，72％)
mp 174-176℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.50(s，1H)，7.88(s，1H)，3.79(t，J＝7.0Hz，4H)，3.62(t，J＝7.0Hz，4H)，3.48(s，3H).分析.(C12H14Br2N2O6S)C，H，N。
將7(260mmg，0.55mmol)在無水苯(50mL)中的微細(xì)分散的混懸液用(COBr)2(2.13mL，0.20mmol)和催化量DMF處理?；旌衔飻嚢?小時，然后減壓濃縮至干，用苯高真空重蒸。所得?；宕制啡苡贛e2CO(10mL)中，于-5℃用2-氨基乙醇(101mg，1.65mmol)在水(5mL)中的冷溶液處理。將混合物于0℃攪拌5分鐘，然后用1N HBr水溶液酸化至pH4，并減壓濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到IIa-7s(222mg，78％)mp(EtOAc/iPr2O)126-127℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.6Hz，1H)，8.51(s，1h)，7.68(s，1H)，4.79(t，J＝5.4Hz，1H)，3.76(t，J＝7.1Hz，4H)，3.62(t，J＝7.0Hz，4H)，3.54(q，J＝5.9Hz，2H)，3.48(s，3H)，3.31(D2O交換后，t，J＝6.0Hz，2H)。
HRMS(FAB)C14H2079Br2N3O6S(MH+)m/z計算值515.9440；實(shí)測值515.9425。
實(shí)施例8(流程2c).甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羥基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(IIa-13)和5-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-14)。
將5-(雙{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}氨基)-2，4-二硝基苯甲酸[制備該化合物的方法在共同懸而未決的NZ申請?zhí)?21851中公開](9)在過量SOCl2(60mL)和催化量DMF中回流加熱1小時。減壓蒸發(fā)，然后在苯中共沸，得到?；却制?。將它溶于無水Me2CO中，于0℃用0℃的3-氨基-1-丙醇處理5分鐘。用0.2N HCl使混合物酸化至pH2-3，濃縮至一半體積，然后加入NaBr固體，然后用EtOAc(2×)萃取。蒸發(fā)，殘余物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(5-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(8)(68％)，為黃色膠狀；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.54(t，J＝5.7Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.45(s，1H)，4.43(t，J＝5.1Hz，1H)，4.33(t，J＝5.2Hz，4H)，3.69(t，J＝5.2Hz，4H)，3.57(q，J＝5.9Hz，2H)，3.26(D2O交換后，t，J＝7.0Hz，2H)，3.12(s，6H)，1.66(五，J＝6.7Hz，2H)。
HRMS(FAB)C16H25N4O12S(MH+)m/z計算值529.0910；實(shí)測值529.0904將8的DMF溶液用LiBr(1.4當(dāng)量)處理，然后如上所述進(jìn)行后處理，將產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到少量二溴氮芥，用EtOAc/MeOH(19∶1)洗脫，得到IIa-13(31％)，為黃色膠狀1H NMR[(CD3)2SO]δ8.60(t，J＝5.6Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.44(s，1H)，4.45(t，J＝5.2Hz，1H)，4.33(t，J＝5.1Hz，2H)，3.74(t，J＝5.2Hz，2H)，3.72-3.66(m，4H)，3.49(q，J＝5.9Hz，2H)，3.27(D2O交換后，t，J＝7.0Hz，2H)，3.14(s，3H)，1.68(五，J＝6.7Hz，2H)。HRMS(FAB)C15H2279BrN4O9S(MH+)m/z計算值515.0270；實(shí)測值515.0283。
使酰基氯(9)(用(COCl)2/DMF活化)和2-氨基乙醇進(jìn)行類似反應(yīng)，得到甲磺酸2-(5-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(10)。將10(1.42g，2.76mmol)和NaI(3.3g，22mmol)在無水MeCN(45mL)中的攪拌混合物回流加熱1小時，然后減壓濃縮。將殘余物在EtOAc和水之間分配，有機(jī)層用水洗滌并蒸發(fā)。將殘余物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶4)洗脫，然后從MeOH/EtOAc/i-Pr2O中重結(jié)晶，得到IIa-14(2.9g，81％)mp 142-143℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(t，J＝5.7Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.76(t，J＝5.5Hz，1H)，3.68(t，J＝6.9Hz，4H)，3.57-3.49(m，2H)，3.39(t，J＝6.9Hz，4H)，3.34-3.26(m，部分模糊，2H).分析.(C13H16I2N4O6)C，H，N。
實(shí)施例9.2-(氮丙啶-1-基)-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIa-1)。
將2-氯-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(16)[其制備參見下述實(shí)施例14](118mg，0.34mmol)和Et3N(200mg)在EtOAc(200mL)中的溶液用氮丙啶(100mg)于室溫處理3小時。將混合物用EtOAc稀釋，用水洗滌三次，干燥后減壓濃縮至約20mL，收集黃色固體，得到101mg產(chǎn)物(84％)；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.63(m，1H)，8.29(d，J＝2.8Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.39(m，2H)，3.25(m，2H)，2.37(s，4H)，1.56(m，2H)，1.43(m，2H)，1.33(m，4H).分析.(C15H20N4O6)C，H，N。
實(shí)施例10(流程2d).2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-2)和2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-7)將2-氯-3，5-二硝基苯甲酸(1)(18g，81mmol)用含有一滴DMF的SOCl2(250ml)處理并回流加熱6小時。蒸發(fā)試劑，然后用苯共沸，得到?；却制罚瑢⑵淙苡赥HF(200mL)中，滴加至由25mL 2-氨基乙醇在THF(400mL)中組成的溶液中，用干冰丙酮浴冷卻。攪拌20分鐘后，將反應(yīng)混合物用1NHCl酸化至pH4-5，蒸發(fā)大部分溶劑，將殘余物在水(250mL)和EtOAc(300mL)之間分配。水相用EtOAc萃取，所合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3、1N HCl和鹽水分別洗滌，然后濃縮，得到2-氯-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(2)21.34g(91％)，為白色固體mp(EtOAc)159-160℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.86(m，1H，CONH)，8.56(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.54(m，4H).分析.(C9H8ClN3O6)C，H，N。
于50℃將12(1.52g，5.3mmol)和Et3N(4mL)在p-二烷(60mL)中的溶液用N，N-雙(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(3.0g，16.5mmol)處理24小時。將混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，將其進(jìn)行硅膠色譜法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脫并將洗脫液減壓濃縮，得到溶于最少量EtOAc中的油性殘余物。緩慢加入石油醚直至開始變渾濁，將溶液靜置過夜，沉淀出2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-2)(2.07g，100％)，為黃色晶體mp(EtOAc/石油醚)109-111℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.72(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.72(m，4H，2xCH2Cl)，3.55(m，2H)，3.42(m，4H，2xCH2N)，3.34(m，2H)；13CNMRδ165.3，145.8，145.3，141.0，136.3，127.5，122.1，59.1，54.1，42.1，41.5。
HRMS(FAB)[MH+]C13H1735Cl2N4O6m/z計算值395.0525；實(shí)測值395.0525將IIb-2(1.20g，3.0mmol)和LiBr(5.0g，58mmol)在3-甲基-2-丁酮(20mL)中的溶液回流加熱6小時，然后冷卻并倒入水中。用EtOAc萃取，得到粗品(＜95％純度)，將其用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr(5.0g，58mmol)另外處理4小時，然后進(jìn)行后處理，進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，得到IIb-7(1.39g，95％)mp(EtOAc/石油醚)105-108℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.73(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.59-3.29(m，12H)；13C NMRδ165.3，145.4，145.3，141.1，136.5，127.4，122.1，59.3，53.9，42.1，30.0。
HRMS(FAB)C13H1779Br2N4O6[M+H+]m/z計算值482.9515；實(shí)測值482.9492；分析(C13H16Br2N4O6)H，N，Br；C實(shí)測值32.9；計算值32.3％。
實(shí)施例11(流程2d).2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-3)和2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-8)。
于0℃使?；?11)(17g)與3-氨基丙醇(7.5g)在Me2CO(120mL)中如上所述進(jìn)行反應(yīng)，得到2-氯-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(13)(5.06g，26％)mp(EtOAc/石油醚)120-121℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.79(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.50(m，1H，OH)，3.49(m，2H)，3.32(m，2H)，1.70(m，2H).分析.(C10H10ClN3O6)C，H，N。
將13(1.39g，4.58mmol)和Et3N(4mL)在p-二烷(60mL)中的溶液用N，N-雙(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(2.9g，16.0mmol)于50℃處理24小時。如上所述進(jìn)行后處理，得到IIb-3(1.84g，100％)mp(EtOAc/石油醚)89-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.71(m，1H，CONH)，8.30(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.52(m，1H，OH)，3.71(m，4H，2xCH2Cl)，3.50(m，2H)，3.42(m，4H，2xCH2N)，3.32(m，2H)，1.71(m，2H)；13C NMR δ165.1，145.7，145.5，141.0，136.4，127.3，122.1，58.4，54.1，41.5，36.7，31.8。
HRMS(FAB)C14H1935Cl2N4O6[M+H+]m/z計算值409.0682；實(shí)測值409.0678。
如上所述，用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr處理IIb-3兩次，得到IIb-8(74％產(chǎn)率)mp(EtOAc/石油醚)89-94℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.72(m，1H，CONH)，8.30(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，3.77-3.44(m，12H)，1.70(m，2H)；13C NMR δ165.1，145.5，145.3，141.2，136.5，127.3，122.1，58.4，54.0，36.7，31.8，29.9。HRMS(FAB)C14H1979Br2N4O6[M+H+]m/z計算值496.9671；實(shí)測值496.9658。
實(shí)施例12(流程2d).2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-4)和2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-9)。
使?；?11)(2.65g，10mmol)與4-氨基丁醇(1.9g)如上所述進(jìn)行反應(yīng)，然后用1N HCl酸化至pH4-5，蒸發(fā)大部分溶劑，得到殘余物。將其在水(50mL)和EtOAc(100mL)之間分配。將水相用EtOAc萃取，所合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3、1N HCl和鹽水分別洗滌，然后濃縮，得到2-氯-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(14)1.11g(35％)mp(EtOAc)121-124℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.79(m，1H)，8.52(d，J＝2.7Hz，1H)，4.43(m，1H)，3.43(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，4H)；13C NMRδ162.6，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.2，39.1，29.8，25.3.分析.(C11H12ClN3O6)C，H，N。
將14(0.75g，2.3mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-雙(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(1.5g，8.0mmol)于50℃處理24小時。將混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，將其進(jìn)行硅膠色譜法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脫，得到IIb-4(0.99g，100％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(d，J＝2.8Hz，1H)，8.69(m，1H)，8.27(d，J＝2.8Hz，1H)，4.37(m，1H)，3.70(m，4H)，3.38(m，6H)，3.25(m，2H)，1.56(m，2H)，1.47(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.7，145.5，141.0，136.4，127.2，122.0，60.2，54.2，41.5，39.2，29.8，25.2。
HRMS(FAB)C15H2135Cl2N4O6[M+H+]m/z計算值423.0838；實(shí)測值423.0847。
將IIb-4(0.96g，3.04mmol)和LiBr(5g)在3-甲基-2-丁酮(15mL)中的溶液回流加熱6小時，然后冷卻并倒入水中。用EtOAc萃取，得到粗品(＜95％純度)，將其用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr(5g)再另外處理4小時，然后進(jìn)行后處理并進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至3∶1)洗脫，得到IIb-9(1.01g，87％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.72(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.58(m，2H)，1.49(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.2，54.1，39.2，29.9，29.8，25.2。
HRMS(FAB)C15H2179Br2N4O6[M+H+]m/z計算值510.9828；實(shí)測值510.9832。
實(shí)施例13(流程2d).2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-5)和2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-10)。
使?；?11)和5-氨基戊醇如上所述進(jìn)行類似反應(yīng)，得到2-氯-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(15)，1.3g(39％)，mp(EtOAc)105-108℃；1.3g(39％)，mp(EtOAc)105-108℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.79(m，1H)，8.50(d，J＝2.7Hz，1H)，4.35(m，1H)，3.39(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，2H)，1.44(m，2H)，1.36(m，2H)；13C NMRδ162.7，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.5，39.1，32.0，28.4，22.8.分析.(C12H14ClN3O6)C，H，N。
于50℃將15(0.63g，2.3mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-雙(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(1.5g，8.0mmol)處理24小時。將混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，將其進(jìn)行硅膠色譜法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脫，得到IIb-5(0.82g，100％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.69(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，4.32(m，1H)，3.70(m，4H)，3.40(m，6H)，3.25(m，2H)，1.55(m，2H)，1.47(m，2H)，1.37(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.7，145.5，141.0，136.4，127.2，122.0，60.5，54.2，41.5，39.3，32.0，28.3，22.9。
HRMS(FAB)C16H2335Cl2N4O6[M+H+]m/z計算值437.0995；實(shí)測值437.0991.
使IIb-5(1.3g)和LiBr進(jìn)行類似反應(yīng)，得到IIb-10(1.35g，86％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.71(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.55(m，2H)，1.48(m，2H)，1.37(m，2H)；13C NMRδ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.5，54.1，39.3，32.0，29.8，28.4，22.9。
HRMS(FAB)C16H2379Br2N4O6[M+H+]m/z計算值524.9984；實(shí)測值524.9975。
實(shí)施例14(流程2d).2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-6)和2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-11)。
使酰基氯(11)和6-氨基己醇如上所述進(jìn)行類似反應(yīng)，得到2-氯-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(16)，0.9g(26％)，mp(EtOAc)88-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.78(m，1H)，8.49(d，J＝2.7Hz，1H)，4.32(m，1H)，3.39(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，2H)，1.44(m，2H)，1.34(m，4H)；13CNMR δ162.7，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.5，39.1，32.3，28.6，26.2，25.1.分析.(C13H16ClN3O6)C，H，N。
于50℃將16(0.67g，2.5mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-雙(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(1.5g，8.0mmol)處理24小時。將混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，將其進(jìn)行硅膠色譜法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脫，得到IIb-6(0.87g，100％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.70(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.70(m，4H)，3.38(m，6H)，3.25(m，2H)，1.54(m，2H)，1.40(m，2H)，1.32(m，4H)；13C NMRδ165.0，145.7，145.6，141.0，136.4，127.2，122.0，60.5，54.2，41.5，39.2，32.3，28.5，26.3，25.1。
HRMS(FAB)C17H2535Cl2N4O6[M+H+]m/z計算值451.1151；實(shí)測值451.1154。
使IIb-6(0.97g)和LiBr進(jìn)行類似反應(yīng)，得到IIb-11(0.96g，81％)，為黃色泡沫；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.70(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.54(m，2H)，1.43(m，2H)，1.32(m，4H)；13C NMRδ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.6，54.1，39.2，32.4，29.9，28.5，26.3，25.1。
HRMS(FAB)C17H2579Br2N4O6[M+H+]m/z計算值539.0141；實(shí)測值539.0135。
實(shí)施例15(流程2e).2-[雙(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-7a)。
使2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]苯甲酰胺(17)(1.02g)[制備方法參見共同懸而未決的NZ專利號521851]和二異丙醇胺(0.8g)如上所述進(jìn)行反應(yīng)，得到2-[雙(2-羥基丙基)氨基]-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]苯甲酰胺(18)(1.29g，100％)為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.22(br，1H)，8.66(d，J＝2.8Hz，1H)，8.29(d，J＝2.8Hz，1H)，4.99(m，1H)，4.85(br，1H)，4.62(br，1H)，3.94(m，2H)，3.77(m，2H)，3.53(m，4H)，3.26(m，2H)，1.48(m，10H)，0.98(m，6H)；13CNMRδ166.5，147.8，142.4，138.2，132.6，128.8，123.8，98.1，64.8，63.5，61.5，60.1，30.1，25.0，20.5，20.2，19.1。
HRMS(FAB)C20H31N4O9[M+H+]m/z計算值471.2091；實(shí)測值471.2089.
使18和MsCl如上所述進(jìn)行反應(yīng)，得到甲磺酸1-甲基-2-[{2-[(甲磺?；?氧基]丙基}-2，4-二硝基-6-({[2-(四氫-2H)吡喃-2-基氧基)乙基]氨基}羰基)苯氨基]乙基酯(19)(2.52g，100％)為黃色泡沫；將其直接用于下一步驟。
將19(2.52g，4.03mmol)在THF(150mL)中的溶液用1N HCl(100mL)處理，將溶液于20℃攪拌1小時，然后用水稀釋(100mL)，用飽和NaHCO3中和，并用EtOAc(3×80mL)萃取。所合并的有機(jī)相用鹽水洗滌并干燥，蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)硅膠色譜法純化，用EtOAc/MeOH(100∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]丙基}-4，6-二硝基苯氨基)-1-甲基乙基酯(20)(0.80g，37％)為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(m，1H)，8.72(m，1H)，8.35(m，1H)，4.92(m，2H)，3.56(m，2H)，3.30(m，6H)，3.16(s，6H)，1.32(m，6H)；13C NMRδ165.9，145.8，143.4，139.4，133.6，128.0，123.1，76.3，59.2，57.3，42.2，37.7，18.6。
HRMS(FAB)C17H27N4O12S2[M+H+]m/z計算值543.1067；實(shí)測值543.1074。
于60℃將20(0.52g，0.96mmol)用在EtOAc(50mL)中的LiBr(0.5g，5.8mmol)處理3小時，將產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脫，得到IIb-7a(0.31g，62％)為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)127-130℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.91(m，1H，CONH)，8.70(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.80(m，1H)，4.42(m，2H)，3.55(m，4H)，1.62(m，6H)；13C NMRδ165.8，144.8，143.5，139.6，133.6，128.0，122.9，60.6，59.2，47.9，42.2，23.4.分析.(C15H20Br2N4O6)C，H，N。
實(shí)施例16(流程2f).甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-13).
將13(1.22g，4.0mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液在冰浴中冷卻，加入3，4-二氫-2H-吡喃(1.0mL)和對甲苯磺酸(0.1g)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時，然后減壓濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至2∶1)洗脫，得到2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(21)(1.45g，94％)為淺黃色油；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.81(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.57(m，1H)，3.72(m，2H)，3.46-3.25(m，4H)，1.82-1.44(m，8H).13C NMRδ162.7，148.4，145.9，140.3，128.2，125.8，120.5，98.0，64.2，61.3，36.5，30.2，28.9，24.9，19.1。
HRMS(FAB)C15H1935ClIN3O7[M+H+]m/z計算值388.0912；實(shí)測值388.0915。
使21(1.45g，3.75mmol)和二乙醇胺(1.67g)如上所述進(jìn)行反應(yīng)，得到2-[雙(2-羥基乙基)氨基]-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(22)(1.62g，95％)為黃色泡沫；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.96(m，1H，CONH)，8.66(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.95(m，2H)，4.56(m，1H)，3.79-3.16(m，14H)，1.80-1.45(m，8H)；13C NMRδ166.2，148.1，143.6，139.3，133.8，128.9，123.8，98.5，64.8，61.7，58.5，54.6，37.3，30.6，29.2，25.4，19.6。
HRMS(FAB)C19H29N4O6[M+H+]m/z計算值457.1935；實(shí)測值457.1939。
使22(1.62g，3.55mmol)和MsCl(2mL)如上所述進(jìn)行反應(yīng)，得到甲磺酸2-[{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基-6-({[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]-氨基}羰基)苯氨基]乙基酯(23)(2.17g，100％)為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(d，J＝2.8Hz，1H)，8.71(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.26(m，4H)，3.71-3.37(m，10H)，3.13(s，6H)，3.10(m，2H)，1.82-1.43(m，8H)；13CNMRδ165.1，146.3，145.4，140.9，135.9，127.4，122.2，98.0，67.2，64.3，51.4，45.7，36.5，30.2，28.7，24.9，19.1，8.5。
HRMS(FAB)C21H33N4O13S2[M+H+]m/z計算值613.1486；實(shí)測值613.1481。
將23(2.95g，3.55mmol)的THF(120mL)溶液用1N HCl(80mL)處理，將溶液于20℃攪拌1小時，然后用水(100mL)稀釋，用飽和NaHCO3中和，用EtOAc(3×80mL)萃取。所合并的有機(jī)相用鹽水洗滌并干燥，蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)硅膠色譜法純化，用EtOAc/MeOH(100∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(2-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(24)(1.4g，75％)為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)130-133℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.72(m，1H)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H)，4.29(m，4H)，3.47(m，8H)，3.14(s，6H)，1.71(m，2H)；13C NMRδ165.2，146.3，145.3，140.8，135.9，127.5，122.3，67.3，58.4，51.4，36.8，36.5，31.7.分析.(C16H24N4O12S2)C，H，N。
于60℃將24(0.25g，0.45mmol)用在EtOAc(50mL)中的LiBr(53mg，0.61mmol)處理3小時，產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脫，得到IIb-13(0.16g，66％)為黃色泡沫；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.73(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(m，2H)，3.65-3.44(m，10H)，3.13(s，3H)，1.70(m，2H)；13C NMRδ165.1，145.7，145.4，141.0，136.2，127.3，122.1，67.5，58.4，51.1，36.7，36.5，31.7，29.6。
HRMS(FAB)C15H2279BrN4O9S[M+H+]m/z計算值513.0291；實(shí)測值513.0281。
實(shí)施例17(流程2g).甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-12)。
將固體IIb-7(300mg，0.62mmol)和甲磺酸銀(130mg，0.65mmol)在無水MeCN(15mL)中回流加熱3小時，然后冷卻并過濾。將AgBr固體用EtOAc洗滌，得到98％產(chǎn)率的AgBr。減壓除去溶劑，殘余物通過硅膠色譜法分離，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，相繼得到-原料(IIb-7)(28mg，9％)-IIb-12(123mg，38％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.58(m，4H)，3.44(m，4H)，3.14(s，3H，OSO2CH3)；13C NMRδ165.3，145.8，145.2，140，9，135.1，127.5，122.2，67.5，59.2，54.2，51.0，42.1，36.4，29.7；HRMS m/z C14H2079BrN4O9S計算值499.01344；實(shí)測值499.01324最后用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脫柱子，得到甲磺酸2-(2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(25)(159mg，53％)，為黃色固體mp 128-132℃(EtOAc/石油醚)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.78(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.29(m，4H，2xCH2OMs)，3.56(m，2H)，3.45(m，6H)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)；13C NMRδ165.4，146.3，145.1，140，6，135.8，127.6，122.3，67.3，59.2，51.3，42.1，36.4；HRMSC15H23N4O12S2m/z計算值515.0754；實(shí)測值515.0744
實(shí)施例18(流程2h)。甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-2m)。
于60℃將25(5.3g，10.3mmol)的DMF(100mL)溶液用LiCl(524mg，12.4mmol)處理2小時，然后冷卻并倒入稀HCl中，用EtOAc(3×150mL)萃取。將產(chǎn)物進(jìn)行后處理并進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到IIb-2(2.4g，59％)，然后得到IIb-2m(1.94g，41％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，-CH2O-Ms)，3.58(m，4H)，3.44(m，4H)，3.14(s，3H，-OSO2CH3)；13C NMRδ165.3，145.8，145.2，140，9，135.1，127.5，122.2，67.5，59.2，54.2，51.0，42.1，36.4，29.7。
以如下所述的可選方法制備IIb-2m將IIb-2(12.50g，31.6mmol)的3-甲基-2-丁酮(150mL)溶液于25℃用NaI(5.69g，38.0mmol)處理，混合物于70℃攪拌2小時，然后減壓濃縮。將殘余物在水(250mL)和EtOAc(250mL)之間分配，所分離的有機(jī)層用水洗滌，干燥(Na2SO4)，然后減壓濃縮。將所得油(15.23g)溶于CH3CN(80mL)中，用甲磺酸銀(9.63g，47.4mmol)處理，混合物于25℃攪拌1小時，然后減壓濃縮。將殘余物用EtOAc(200mL)萃取，過濾，固體用EtOAc(100mL)洗滌，蒸發(fā)EtOAc溶液，如上所述通過硅膠色譜法分離油性混合物，得到原料(3.61g，29％)、IIb-2m(4.55g，32％)和25(4.98g，31％)。當(dāng)用LiBr替換NaI時，該反應(yīng)得到類似結(jié)果。
實(shí)施例19(流程2i).2-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-14)和甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-15)。
于60℃將25(6.7g，13.0mmol)用在EtOAc(200mL)中的NaI(2.9g，20mmol)處理3小時，產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脫，得到IIb-14(3.3g，44％)，為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)129-131℃；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.72(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.70(m，1H，CONH)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.80(m，1H)，3.55(m，2H)，3.43(m，4H)，3.31(m，6H)；13C NMRδ165.3，145.2，144.7，141.0，136.3，127.3，122.0，59.3，54.7，42.1，2.94.分析(C13H16N4I2O6)C，H，N。
由稍后的洗脫液得到IIb-15(1.35g，19％)，為黃色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.74(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H)，3.56(m，2H)，3.43(m，2H)，3.31(m，6H)，3.13(s，3H)；13CNMRδ165.3，145.5，145.2，140.8，136.1，127.4，122.1，67.5，59.2，55.4，50.6，42.1，36.5，2.6。
HRMS(FAB)C14H20IN4O9S[M+H+]m/z計算值546.9996；實(shí)測值546.9997。
實(shí)施例20(流程2j).3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-7)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-12)。
將在EtOAc(50mL)中的甲磺酸2-(3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(26)[制備方法參見NZ申請?zhí)?21851](310mg，0.6mmol)用LiBr(78mg，0.9mmol)處理，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚洗脫(由1∶1至1∶0)，得到IIc-7(70mg，25％)，為泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.66(m，1H)，3.70(m，4H)，3.60(m，4H)，3.45(m，2H)，3.22(m，2H)；13C NMRδ161.4，145.8，140.2，137.5，129.2，127.6，122.6，59.0，52.6，41.7，30.0。
HRMS(FAB)C13H1779Br2N4O6[M+H+]m/z計算值482.9515；實(shí)測值482.9508。
進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc-12(118mg，39％)mp.94-97℃；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.27(m，2H)，3.63(m，4H)，3.57(m，2H)，3.45(m，2H)，3.26(m，2H)，3.15(s，3H)；13C NMRδ161.4，146.2，140.5，137.7，129.2，127.5，122.9，66.8，59.0，50.0，41.7，36.6，29.9.分析.(C14H19BrN4O9S)C，H，N。
實(shí)施例21(流程2j).3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-8)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-13)。
將在EtOAc(200mL)中的甲磺酸2-(3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(27)[制備方法參見共同懸而未決的NZ申請?zhí)?21851](716mg，1.36mmol)用LiBr(175mg，2.0mmol)處理，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，得到IIc-8(289mg，42％)，為黃色固體；mp(EtOAc/石油醚)142-144℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.23(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.62(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.47(m，1H，CHOH)，3.68(m，4H)，3.57(m，4H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.2，146.9，140.2，137.5，129.4，127.7，122.6，58.3，52.6，36.4，31.6，30.1。
HRMS(FAB)C14H1979Br2N4O6[M+H+]m/z計算值496.9671；實(shí)測值496.9667進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc-13(270mg，39％)mp.115-117℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.43(m，1H，CHOH)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.66(m，4H，2xCH2N)，3.59(m，2H)，3.44(m，2H)，3.22(m，2H)，3.15(s，3H，CH3SO3)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.1，146.2，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，52.9，50.0，36.6，36.4，31.6，30.0.分析.(C15H21BrN4O9S)C，H，N。
實(shí)施例22(流程2j).3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-9)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-14)。
將在EtOAc(100mL)中的甲磺酸2-(3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(28)[制備方法參見NZ申請?zhí)?21851](500mg，0.92mmol)用LiBr(110mg，1.4mmol)處理，然后進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，得到IIc-9(100mg，21％)，為泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.38(m，1H)，3.69(m，4H)，3.57(m，4H)，3.40(m，2H)，3.14(m，2H)，1.47(m，4H)；13C NMRδ161.0，145.8，140.2，137.6，129.3，127.6，122.6，60.2，52.6，30.0，29.6，24.8。
HRMS(FAB)C15H2079Br2N4O6[M+H+]m/z計算值510.9828；實(shí)測值510.9819進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc-14(117mg，30％)mp.114-117℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.27(m，2H)，3.65(m，4H)，3.57(m，2H)，3.35(m，2H)，3.16(m，2H)，3.15(s，3H)，1.47(m，4H)；13C NMRδ160.0，146.1，140.6，137.8，129.2，127.5，122.9，66.8，60.2，52.9，50.0，36.6，29.9，29.6，24.9.分析.(C16H23BrN4O9S)C，H，N。
實(shí)施例23(流程2k).甲磺酸2-(3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(27)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-13)。
將固體IIc-8(2.15g，4.3mmol)加入甲磺酸銀(0.992g，4.9mmol)在無水MeCN(40mL)中的熱溶液中。將混合物回流加熱3小時，然后冷卻并過濾。減壓除去溶劑，通過硅膠色譜法分離殘余物，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，相繼得到IIc-13(0.5g，25％)、IIc-8(0.3g，14％)和27(0.4g，18％)。實(shí)施例24(流程2k)。甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-6)。
于60℃將27(9.0g，17.0mmol)的DMF(110mL)溶液用LiCl(860mg，20.4mmol)處理2小時，然后冷卻，倒入稀HCl中，并用EtOAc(3×150mL)萃取。產(chǎn)物進(jìn)行后處理并進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脫，，得到IIc-6(4.0g，50％)，為黃色晶體mp 104-109℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.44(m，1H，CHOH)，4.26(m，2H)，3.72(m，2H)，3.65(m，2H)，3.59(m，2H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，3.15(s，3H)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.1，146.4，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，52.9，50.1，41.4，36.6，36.4，31.6.分析.(C15H21ClN4O9S)C，H，N。
實(shí)施例25(流程2k)。甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-15)。
于60℃將27(5.28g，10.0mmol)的EtOAc(250mL)溶液用NaI(1.8g，12.0mmol)處理2小時，產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶0)洗脫，得到IIc-15(2.29g，41％)，為黃色晶體mp 100-103℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ10.05(s，1H)，7.40(d，J＝11.5Hz，1H)，7.09(s，1H)，6.70(d，J＝11.5Hz，1H)，2.50(m，2H)，2.21(m，2H)，2.03(s，3H)，1.52(m，4H)；13C NMRδ161.1，145.8，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，53.9，49.9，41.4，36.6，36.4，31.6.分析.(C15H21IN4O9S)C，H，N。
磷酸酯的制備(流程3)實(shí)施例26.磷酸2-[[2-[雙(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯(Ib-7P)。
將醇IIb-7(2.58g，5.33mmol)和二乙基氨基亞磷酸二叔丁基酯(93％，2.0mL，6.9mmol)在無水DMF(20mL)中的溶液在N2中用1H-四唑(3wt.％，在CH3CN中，55mL，18.7mmol)處理，于20℃攪拌1.5小時。然后將反應(yīng)混合物冷卻至-50℃，快速加入3-氯過氧苯甲酸(55％，2.68g，8.54mmol)溶液，以使得溫度保持低于-5℃。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，用CH2Cl2(150mL)稀釋。將溶液用5％Na2S2O5水溶液(2×50mL)、10％NaHCO3水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)洗滌，干燥，低于30℃下減壓濃縮，殘余物用i-Pr2O/己烷振搖，冷卻。將所得固體經(jīng)硅膠色譜法純化，用CH2Cl2/EtOAc洗脫，然后從CH2Cl2/己烷中重結(jié)晶(低于40℃)，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[雙(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯(Ib-7E)(2.59g，72％)，為不穩(wěn)定的黃色固體mp 99-101℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(t，J＝5.6Hz，1H)，8.76(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(g，J＝6.1Hz，2H)，3.62-3.42(m，10H)，1.43(s，18H)。HRMS(FAB)C21H3479Br2N4O9P(MH+)m/z計算值675.0430，實(shí)測值675.0398；C21H3479Br81BrN4O9P(MH+)m/z計算值677.0410，實(shí)測值677.0397；C21H3481Br2N4O9P(MH+)m/z計算值679.0389，實(shí)測值679.0398。分析.(C21H33Br2N4O9P)。
將Ib-7E(2.80g，4.14mmol)和TFA(15mL)在無水CH2Cl2(15mL)中的溶液于20℃攪拌1小時，然后減壓濃縮。用CH3CN(2×)共沸除去殘余的TFA，將所得殘余物溶于EtOAc中。加入過量己烷，沉淀出半固體，將其在于20℃高真空干燥，得到Ib-7P(98％)，為黃色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，3.97(q，J＝6.3Hz，2H)，3.62-3.43(m，10H)。HRMS(FAB)C13H1879Br2N4O9P(MH+)m/z計算值562.9178，實(shí)測值562.9171；C13H1879Br81BrN4O9P(MH+)m/z計算值564.9158，實(shí)測值564.9152；C13H1881Br2N4O9P.(MH+)m/z計算值566.9137，實(shí)測值566.9121。用NaHCO3(2.0當(dāng)量)處理二酸Ib-7P，得到二鈉鹽。
實(shí)施例27.磷酸3-[[5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯(Ia-3P)。
使IIa-3進(jìn)行類似的磷酸化，然后將產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(2∶3)洗脫，得到磷酸二叔丁基酯3-[[5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯(Ia-3E)(76％)，為黃色固體mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)120-121℃(分解)；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.70(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.45(s，1H)，3.96(q，J＝6.7Hz，2H)，3.82(t，J＝5.8Hz，4H)，3.69(t，J＝5.8Hz，4H)，3.34(D2O交換后，t，J＝6.8Hz，2H)，1.86(五，J＝6.6Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C22H35Cl2N4O9P)C，H，N。
將酯Ia-3E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ia-3P(99％)，為吸濕性黃色固體。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(t，J＝5.6Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.45(s，1H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.82(t，J＝5.8Hz，4H)，3.69(t，J＝5.8Hz，4H)，3.31(q，J＝6.5Hz，2H)，1.84(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C14H2035Cl2N4O9P[M+H]+m/z計算值489.0345；實(shí)測值489.0344。C14H2035Cl37ClN4O9P[M+H]+m/z計算值491.0316；實(shí)測值491.0317。C14H2037Cl2N4O9P[M+H]+m/z計算值493.0286；實(shí)測值493.0312。用NaHCO3(2∶0當(dāng)量)處理二酸I-3P，得到二鈉鹽。
實(shí)施例28.磷酸3-[[5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯(Ia-8P)。
使IIa-8進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脫，得到磷酸二叔丁基酯3-[[5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯(Ia-8E)(66％)，為黃色固體mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)110-111℃(分解)。
1H NMR((CD3)2SO)δ8.70(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.44(s，1H)，3.96(q，J＝6.7Hz，2H)，3.79-3.63(m，84H)，3.35(D2O交換后，t，J＝6.8Hz，2H)，1.86(五，J＝6.6Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C22H35Br2N4O9P)C，H，N。
將酯Ia-8E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ia-8P(99％)，為吸濕性黃色固體。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.43(s，1H)，3.93(q，J＝6.7Hz，2H)，3.79-3.63(m，8H)，3.31(q，J＝6.5Hz，2H)，1.85(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C14H2079Br2N4O9P(MH+)m/z計算值576.9335；實(shí)測值576.9314。C14H2079Br81BrN4O9P(MH+)m/z計算值578.9314；實(shí)測值578.9305。C14H2081Br2N4O9P(MH+)m/z計算值580.9294；實(shí)測值580.9297。用NaHCO3(2.0當(dāng)量)處理二酸Ia-8P，得到二鈉鹽。
實(shí)施例29.磷酸2-[[2-[雙(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-2P)。
使IIb-2進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(13∶7)洗脫，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[雙(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-2E)(72％)，為黃色固體mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)107-108℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(q，J＝6.1Hz，2H)，3.72(t，J＝6.8Hz，4H)，3.53(q，J＝5.5Hz，2H)，3.43(t，J＝6.8Hz，4H)，1.43(s，18H).分析.(C21H33Cl2N4O9P)C，H，N，P.CRL 11363。
將酯Ib-2E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ib-2P(98％)，為黃色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.89(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，3.98(q，J＝6.2Hz，2H)，3.72(t，J＝6.7Hz，4H)，3.51(q，J＝5.6Hz，2H)，3.43(t，J＝6.7Hz，4H)。HRMS(FAB)C13H1835Cl2N2O9P[M+H]+m/z計算值475.0189；實(shí)測值475.0189C13H1835Cl37ClN2O9P[M+H]+m/z計算值477.0159；實(shí)測值477.0167C13H1835Cl2N2O9P[M+H]+m/z計算值479.0130；實(shí)測值479.0160用NaHCO3(1.0當(dāng)量)處理二酸Ib-2P，得到一鈉鹽。
實(shí)施例30.甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ib-2mP)。
使IIb-2m進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2-(6-叔丁氧基-8，8-二甲基-6-氧化-5，7-二氧雜-2-氮雜-6-磷雜壬-1-?；?-4，6-二硝基苯氨基]乙基酯(Ib-2mE)(80％)，為黃色泡沫。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，4.02(q，j＝6.2Hz，2H)，3.74-3.43(m，8H)，3.13(s，3H)，1.43(s，18H).13C NMRδ265.6，146.2，145.3，140.8，135.6，127.5，122.4，81.7，67.5，64.2，54.3，51.3，41.4，36.5，29.5。
將酯Ib-2mE用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ib-2mP(68％)，為黃色固體。Mp(EtOAc/CH2Cl2)132-134℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.92(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.8Hz，1H)，4.29(t，J＝5.4Hz，2H)，3.98(q，J＝6.0Hz，2H)，3.58-3.40(D2O交換后，m，8H)，3.13(s，2H).13C NMRδ165.5，146.1，145.3，140.8，135.7，127.6，122.3，67.5，63.3，63.2，54.3，51.3，41.3，36.5.分析(C14H20ClN4O12PS)C，H，N。
實(shí)施例31.磷酸2-({2-[雙(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鶀氨基)乙基酯(Ib-7aP)。
用二乙基氨基亞磷酸二叔丁基酯(93％，489mg，2.0mmol)使醇IIb-7a(0.67g，1.3mmol)進(jìn)行類似的磷酸化，然后進(jìn)行快速硅膠柱色譜法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫，得到Ib-7aE，為黃色固體(0.74g，81％)mp(EtOAc/石油醚)121-123℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.09(m，1H)，8.73(m，1H)，8.32(m，1H)，4.44(m，2H)，4.00(m，2H)，3.39(m，2H)，3.60(m，4H)，1.62(m，6H)，1.44(s，18H).13C NMR δ165.9，144.8，143.6，139.6，133.2，128.0，123.1，81.6，64.0，60.4，39.9，29.4，23.5.分析.(C23H37Br2N4O9P)C，H，N。
將Ib-7aE(100mg)用TFA(6mL)進(jìn)行類似處理，然后從CH2Cl2/EtOAc中結(jié)晶，得到Ib-7aP，為黃色固體(70mg，85％)mp 157-161℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.07(m，1H)，8.72(m，1H)，8.36(m，1H)，4.43(m，2H)，4.00(m，2H)，3.52(m，6H)，1.62(m，6H).13C NMRδ165.9，144.8，143.6，139.7，133.4，128.1，123.1，63.2，60.4，47.9，39.9，23.5.分析.(C15H21Br2N4O9P)C，H，N。
實(shí)施例32.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ib-12P)。
使IIa-12進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc洗脫，得到甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2-(6-叔丁氧基-8，8-二甲基-6-氧化-5，7-二氧雜-2-氮雜-6-磷雜壬-1-?；?-4，6-二硝基苯氨基]乙基酯(Ib-12E)(66％)，為黃色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，4.02(q，J＝6.2Hz，2H)，3.62-3.43(m，8H)，3.13(s，3H)，1.43(s，18H)。HRMS(FAB)C22H3779BrN4O12PS[M+H]+m/z計算值693.1029；實(shí)測值693.1010。
將酯Ib-12E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ib-12P(98％)，為黃色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.92(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，3.98(q，J＝6.0Hz，2H)，3.58-3.40(D2O交換后，m，8H)，3.13(s，2H)。HRMS(FAB)C14H2179BrN4O12PS[M+H]+m/z計算值578.9798；實(shí)測值578.9784。C14H2181Br81BrN4O12PS[M+H]+m/z計算值580.9777；實(shí)測值580.9784。用NaHCO3(1.0當(dāng)量)處理二酸Ib-12P，得到一鈉鹽。
實(shí)施例33.磷酸2-[[2-[雙(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯(Ib-14P)。
使Ib-14進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(3∶1)洗脫，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[雙(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯(Ib-14E)(67％)，為黃色固體mp(CH2Cl2/i-Pr2O/己烷)108-110℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.91(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.30(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(q，J＝6.3Hz，2H)，3.53(q，J＝5.7Hz，2H)，3.45(t，J7.8Hz，4H)，3.24(D2O交換后，t，J＝7.6Hz，4H)，1.44(s，18H).分析.(C21H33I2N4O9P)，C，H，N，P。
將酯Ib-14E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ib-14P(97％)，為黃色泡沫。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，3.98(q，J＝6.4Hz，2H)，3.49(after D2O exchange t，J＝5.6Hz，2H)，3.45(t，J＝7.8Hz，4H)，3.29(t，J＝7.7Hz，4H)。
HRMS(FAB)C13H18I2N4O9[M+H]+m/z計算值658.3911；實(shí)測值658.3907。用NaHCO3(2.0當(dāng)量)處理二酸Ib-14P，得到二鈉鹽。
實(shí)施例34.甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯(Ib-15P)。
用二乙基氨基亞磷酸二叔丁基酯(93％，1.15g，4.5mmol)使醇IIb-15(1.68g，3.1mmol)進(jìn)行類似的磷酸化，然后進(jìn)行快速硅膠柱色譜法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫，從EtOAc/石油醚中結(jié)晶，得到Ib-15E，為黃色固體(2.23g，97％)mp(EtOAc/石油醚)109-111℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(m，1H)，8.76(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.27(m，2H)，4.00(m，2H)，3.53(m，2H)，3.46(m，4H)，3.14(s，3H)，1.43(s，18H).13C NMRδ165.5，145.6，145.2，140.8，135.6，127.4，122.4，81.7，67.5，64.2，55.4，50.7，39.9，36.5，29.3，2.6.分析.(C22H36IN4O12PS)，C，H，N。
將Ib-15E(405mg)用TFA(6mL)進(jìn)行類似處理，產(chǎn)物從CH2Cl2/石油醚中結(jié)晶，得到二酸Ib-15P，為黃色固體(306mg，89％)mp 147-150℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(m，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，4.27(m，2H)，4.00(m，2H)，3.46(m，6H)，3.31(m，2H)，3.12(s，3H).13CNMRδ165.5，145.6，145.2，140.8，135.7，127.6，122.3，67.6，63.3，55.5，50.7，39.9，36.5，2.7.分析.(C14H20IN4O9PS)，C，H，N。
實(shí)施例35.甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-6P)。
使IIc-6進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶1)洗脫，得到甲磺酸2-[(2-氯乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧雜-2-氮雜-7-磷雜己-1-?；?-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-6E)(98％)，為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)98-102℃。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.29(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.79(五，J＝6.7Hz，2H)，1.42(s，18H).13C NMRδ161.3，146.4，140.4，137.6，129.1，127.6，123.0，81.2，66.8，64.1，64.0，52.9，50.1，41.4，36.6，35.9，29.3.分析.(C23H38ClN4O12PS)C，H，N。
將酯Ic-6E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ic-6P(84％)，為黃色固體mp(EtOAc/CH2Cl2)98-102℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.84(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(D2O交換后，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.76(pent，J＝6.7Hz，2H).分析.(C15H22ClN4O12PS)C，H，N。
實(shí)施例36.磷酸3-({3-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲?；鶀氨基)丙基酯(Ic-8P)。
用二乙基氨基亞磷酸二叔丁基酯(93％，1.25g，5.0mmol)使醇IIc-8(1.41g，2.83mmol)進(jìn)行類似的磷酸化，然后進(jìn)行快速硅膠柱色譜法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫，得到Ic-8E，為黃色固體(1.77g，91％)mp(EtOAc/石油醚)112-114℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.86(m，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，3.92(m，2H)，3.70(m，4H)，3.60(m，4H)，3.22(m，2H)，1.78(m，2H)，1.41(s，18H).13C NMRδ161.4，145.9，139.9，137.3，129.2，127.8，122.5，81.3，64.1，52.5，35.9，30.1，29.4.29.1.分析.(C22H35Br2N4O9P)，C，H，N。
將Ic-8E(900mg)用TFA(10mL)進(jìn)行類似處理，得到二酸Ic-8P，為黃色泡沫(754mg，100％)1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(m，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，3.86(m，2H)，3.73(m，4H)，3.60(m，4H)，3.22(m，2H)，1.76(m，2H).13C NMRδ161.3，145.9，140.1，137.4，129.2，127.6，122.5，62.9，52.5，36.0，30.0，29.3。
HRMS(FAB)C14H2079Br2N4O9P.[M+H]+m/z計算值576.9335，實(shí)測值576.9326。
實(shí)施例37.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-12P)。
使IIc-12進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶0)洗脫，得到(Ic-12E)(99％)，為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)82-86℃(分解)。
1H NMR[(CD3)2SO]δ9.00(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.42(s，18H).分析.(C22H36BrN4O12PS)C，H，N。
將酯Ic-12E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ic-12P(100％)，為黃色固體mp(EtOAc/CH2Cl2)93-97℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(D2O交換后，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H).分析.(C14H20BrN4O12PS)C，H，N。
實(shí)施例38.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-13P)。
使IIc-13進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶3)洗脫，得到甲磺酸2-[(2-溴乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧雜-2-氮雜-7-磷雜己-1-?；?-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-13E)(70％)，為黃色固體mp(CH2Cl2/i-Pr2O)95-96℃(分解)。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.79(五，J＝6.7Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C23H38BrN4O12PS)C，H，N，P。
將酯Ic-13E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ic-13P(98％)，為吸濕性黃色固體。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.84(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(after D2O exchange，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.76(pent，J＝6.7Hz，2H)。
HRMS(FAB)C15H2379BrN4O12PS[M+H]+m/z計算值592.9954；實(shí)測值592.9956。用NaHCO3(1∶0當(dāng)量)處理二酸Ic-13P，得到一鈉鹽。
實(shí)施例39.甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-15P)。
使IIc-15進(jìn)行類似的磷酸化，然后產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶3)洗脫，得到甲磺酸2-[(2-碘乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧雜-2-氮雜-7-磷雜己-1-酰基)-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-15E)(58％)，為黃色固體mp(EtOAc/iPr2O)90-100℃。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.86(t，J＝5.6Hz，1H)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.5Hz，1H)，4.27(t，J＝5.2Hz，2H)，3.91(q，J＝6.7Hz，2H)，3.67(t，J＝5.2Hz，2H)，3.60(t，J＝7.1Hz，2H)，3.26-3.17(D2O交換后，m，部分模糊，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.78(五，J＝6.6Hz，2H).分析.(C23H38IN4O12PS)C，H，N，P。
將酯Ic-15E用TFA進(jìn)行類似處理，得到二酸Ic-15P(97％)，為吸濕性黃色固體mp(CH3CN/EtOAc)84-86℃.1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.57(d，J＝9.5Hz，1H)，4.25(t，J＝5.2Hz，2H)，3.81(D2O交換后，q，J＝6.7Hz，2H)，3.62(D2O交換后，t，J＝5.2Hz，2H)，3.56(t，J＝7.1Hz，2H)，3.26(t，J＝6.9Hz，2H)，3.20(q，J＝6.5Hz，2H)，3.09(s，3H)，1.73(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C15H22IN4O12PS(MH+)m/z計算值640.9816；實(shí)測值640.9795。分析.(C15H22IN4O12PS)C，H。
表2.表1a和1b中新化合物的燃燒分析數(shù)據(jù)
式(I)代表性醇(列于表1a)顯示出對人癌細(xì)胞系的選擇性細(xì)胞毒性，該細(xì)胞系用E.coli硝基還原酶cDNA(NTR)(表3，第2和3欄)或低氧條件下的人細(xì)胞色素P450還原酶(P450R)(表3，第4和5欄)轉(zhuǎn)染。在該表中，給出選擇性比例來表明對NTR表達(dá)(第3欄)或低氧(第5欄)的選擇性程度。然而，P450R過表達(dá)不是低氧選擇性所要求的。
由細(xì)胞增殖試驗(yàn)、然后在20％氧氣或0％氧氣(缺氧，采用厭氧室獲得)的氣相中接觸4小時藥物，得到IC50值。細(xì)胞在需氧條件下另外生長5天，采用sulphorhodamine B分析評價細(xì)胞密度，以確定抑制控制50％生長所需的前藥濃度。
表3.表1a中醇類化合物的代表性實(shí)例的選擇性細(xì)胞毒性
通過

圖1中代表性實(shí)施例(Ib-7P)的數(shù)據(jù)證明了磷酸酯作為低含氧量細(xì)胞毒素的活性。這采用Rif-1腫瘤體內(nèi)切除分析，其中有氧腫瘤細(xì)胞采用15Gy放射斷種，并且對藥物對抗其余低含氧量細(xì)胞的細(xì)胞毒性進(jìn)行定量。意外的是，發(fā)現(xiàn)在它們各自的最大耐受劑量(Ib-7P＝750μmol/kg；IIb-7＝1000μmol/kg)，磷酸酯Ib-7P的活性超過其母體醇(IIb-7)的活性。該實(shí)驗(yàn)證明，磷酸酯Ib-7P對抗低含氧量細(xì)胞的活性比參比低氧細(xì)胞毒素替拉扎明高，并且對抗低含氧量細(xì)胞的活性高于對抗有氧細(xì)胞的活性(即放射后給予高于沒有放射時給予)。因此，Ib-7P在體內(nèi)作為低氧-選擇性細(xì)胞毒素起作用。雖然對抗有氧腫瘤細(xì)胞的活性較低，但是該活性顯然證明該化合物還具有作為單一藥物的功效(無放射時)。
表4的數(shù)據(jù)說明了式(I)磷酸酯對抗人腫瘤異種移植物的低含氧量細(xì)胞的顯著活性。在這些實(shí)驗(yàn)中，SiHa人宮頸癌細(xì)胞在CD-1裸鼠(免疫缺陷)中生長。在給予最于使有氧細(xì)胞斷種的全身劑量(15Gy)的電離放射(鈷-60γ射線)后5分鐘，以相當(dāng)于最大耐受劑量(MTD)的75％或20％的劑量施用化合物。18小時后切除腫瘤，用蛋白酶合劑分解，采用克隆源性(clonogenic)分析確定細(xì)胞存活。殺死細(xì)胞的對數(shù)由經(jīng)處理和對照腫瘤之間的克隆源性數(shù)/克腫瘤組織的差異來計算。所有所測試的磷酸酯在75％MTD時表現(xiàn)出較大的對抗低含氧量細(xì)胞的作用(表4，第4欄)。這是對低氧有選擇性的，正如在沒有放射時殺死細(xì)胞較少所證明的。然而，僅施用化合物所殺死的細(xì)胞數(shù)量在所有情況下是顯著的(表4，第5欄)，這證明化合物作為單一藥物也具有抗腫瘤活性。還證明了相同化合物在相當(dāng)于僅20％MTD的劑量下對抗低含氧量細(xì)胞的活性(表4，第7欄)。參比低含氧量細(xì)胞毒素替拉扎明和參比氮芥(苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥和環(huán)磷酰胺)在其各自的20％MTD時沒有活性。
表4.式(I)磷酸酯對抗裸鼠的SiHa人腫瘤異種移植物中的有氧和的含氧量細(xì)胞的活性?；衔镌邴}水中單次腹腔注射施用。
a關(guān)于對照，在同一實(shí)驗(yàn)中，僅用溶媒(鹽水)處理。殺死細(xì)胞的log對數(shù)＝log10(對照腫瘤的克隆源性/克腫瘤)-log10(所處理腫瘤的克隆源性/克腫瘤)。
b在同一實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于僅放射的平均值。殺死細(xì)胞的log對數(shù)＝log10(僅放射的腫瘤的克隆源性/克腫瘤)-log10(經(jīng)放射和化合物處理的腫瘤的克隆源性/克腫瘤)。
c未檢測作為NTR活化細(xì)胞毒素的式(I)磷酸酯的代表性實(shí)例見圖2。在WiDr體內(nèi)生長延遲分析中，含有WiDrWT和WiDrNTR細(xì)胞混合物的異種移植物生長至300mm3，用單一劑量的前藥以MTD進(jìn)行處理。監(jiān)測腫瘤隨時間的生長，當(dāng)平均腫瘤體積＞1600mm3時，將動物處以安樂死。數(shù)據(jù)以死亡時間給出。意外的是，當(dāng)以各自的最大耐受劑量(750μmol/kg)施用時，觀察到磷酸酯(Ib-7P)的活性超過其母體醇(IIb-7)的活性。在(i)首次治療失敗時間(77-天vs.17-天)和(ii)總存活數(shù)(40％vs.6％)方面，Ib-7P優(yōu)于IIb-7。

Ib-2mP、Ib-7P、Ib-12P和Ic-12P磷酸酯以相當(dāng)于最大耐受劑量的75％的劑量腹腔注射施用于雌性CD-1裸鼠后的藥動學(xué)。將化合物的一鈉鹽溶于磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.4)中，加入1當(dāng)量碳酸氫鈉。通過少量尾靜脈放血獲得系列血樣，每份制得10μl血漿。加入3體積甲醇沉淀出蛋白質(zhì)，通過采用UV或質(zhì)譜檢測的HPLC測定磷酸酯和相應(yīng)的醇的濃度。
化合物Ib-2mP(1.333mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ib-7P(0.562mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ib-12P(1mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ic-12P(1.33mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 數(shù)據(jù)表明，磷酸酯在小鼠內(nèi)可有效地轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醇。醇在低含氧量細(xì)胞或NTR-表達(dá)細(xì)胞中被硝基還原酶激活。
在前述說明書中，已經(jīng)對試劑做了描述，或者其整體有已知的等同物，則這些等同物如同單獨(dú)給出的那樣引入本文。
雖然已經(jīng)參考某些實(shí)施方案和實(shí)施例描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，可以對實(shí)施方案和實(shí)施例做進(jìn)一步的變通而不背離本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.式(I)磷酸酯化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或者二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me。
2.如權(quán)利要求1所要求的式(I)磷酸酯化合物，選自以(Ia)、(Ib)或(Ic)表示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中Y代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me。
3.如權(quán)利要求1或2所要求的式(I)磷酸酯化合物，選自磷酸2-[[2-[雙(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；磷酸3-[[5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯；磷酸3-[[5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲?；鵠氨基]丙基酯；磷酸2-[[2-[雙(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-({2-[雙(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鶀氨基)乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-[[2-[雙(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸3-({3-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰基}氨基)丙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；和甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯。
4.式(II)醇化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；條件是，排除以下化合物，
5.如權(quán)利要求4所要求的式(II)醇化合物，選自以式(IIa)、(IIb)或(IIc)表示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me，條件是，排除以下化合物，
6.如權(quán)利要求5所要求的式(II)醇化合物，選自如權(quán)利要求5所定義的式(IIb)或(IIc)化合物。
7.如權(quán)利要求5或6所要求的式(II)醇化合物，選自N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(3-羥基丙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(2-羥基乙基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(4-羥基丁基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(5-羥基戊基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(6-羥基己基)-5-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；5-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺；甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羥基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯；5-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羥基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羥基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[雙(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；2-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；和甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯。
8.制備通式(I)所示的磷酸酯及其可藥用的鹽和衍生物的方法， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基或-N(CH2CH2W)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；該方法包括以下步驟(i)使式(II)化合物磷酸化， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
9.制備式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物及其可藥用的鹽和衍生物的方法， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W1是鹵素且W2是-OSO2Me；該方法包括以下步驟使式(IIa’)、(IIb’)或(IIc’)化合物與有效量的甲磺酸銀(AgOMs)在溶劑中反應(yīng)，任選加熱， 其中Y可代表 其中W’1和W’2各自為鹵素；得到此權(quán)利要求上文中定義的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
10.如權(quán)利要求9所要求的方法，其中溶劑選自MeCN或其它極性非質(zhì)子溶劑。
11.制備式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物及其可藥用的鹽和衍生物的方法， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me，該方法包括以下步驟使式(IIa)、(IIb)或(IIc)所示的化合物及其可藥用的鹽和衍生物磷酸化， 其中Y代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me。
12.通過權(quán)利要求8所定義的方法獲得的式(I)化合物。
13.通過權(quán)利要求11所定義的方法獲得的式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物。
14.通過權(quán)利要求9或10所定義的方法獲得的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
15.采用至少一種硝基還原酶的細(xì)胞清除方法，該方法包括如下步驟以清除細(xì)胞有效量施用上文權(quán)利要求1至3中任一項所定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；其中所述的細(xì)胞表達(dá)至少一種硝基還原酶。
16.如權(quán)利要求15所要求的方法，其中所述的至少一種硝基還原酶通過大腸桿菌的nfsB基因或梭菌屬中的直向同源基因來編碼。
17.如權(quán)利要求15或16所要求的方法，其中細(xì)胞清除提供了基本上最小的副作用。
18.如權(quán)利要求15至17中任一項所要求的方法，其中表達(dá)至少一種硝基還原酶的細(xì)胞是受治療者的組織中的腫瘤細(xì)胞。
19.如權(quán)利要求15至18中任一項所要求的方法，其中細(xì)胞清除通過GDEPT(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?進(jìn)行。
20.如權(quán)利要求15至19中任一項所要求的方法，其中細(xì)胞清除通過ADEPT(抗體導(dǎo)向性酶前藥療法)進(jìn)行。
21.如權(quán)利要求15至20中任一項所要求的方法，其中細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。
22.提供抗癌療法的方法，其中如上定義的權(quán)利要求1至3中任一項的式(I)化合物以治療有效量施用于受治療者的腫瘤細(xì)胞。
23.如權(quán)利要求22所要求的方法，其中所施用的治療有效量為所述受治療者最大耐受劑量的約20％至100％。
24.如權(quán)利要求21或22所要求的方法，其中式(I)或式(II)化合物與至少一種硝基還原酶組合施用，用于細(xì)胞清除。
25.如權(quán)利要求24所要求的方法，其中細(xì)胞清除通過GDEPT(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?或ADEPT(抗體導(dǎo)向性酶前藥療法)進(jìn)行。
26.如權(quán)利要求24或25所要求的方法，其中至少一種硝基還原酶通過大腸桿菌的nfsB基因或梭菌屬中的直向同源基因來編碼。
27.如權(quán)利要求21至26中任一項所要求的方法，還包括照射腫瘤細(xì)胞的步驟。
28.藥物組合物，該組合物包括治療有效量的如權(quán)利要求1-3中任一項所定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物以及可藥用的賦形劑、添加劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
29.有效量的如權(quán)利要求1至3中任一項所定義的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可藥用的鹽和衍生物或它們的混合物在制備藥物中的用途， 其中X在任意可用的環(huán)位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的環(huán)位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自獨(dú)立地選自鹵素或-OSO2Me；Z在任意可用的環(huán)位置代表-NO2、-鹵素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任選被一個或多個基團(tuán)取代的低級C1-6烷基，所述的基團(tuán)包括羥基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的藥物用于清除表達(dá)至少一種硝基還原酶的細(xì)胞。
30.如權(quán)利要求29所要求的方法，其中藥物還用于GDEPT(基因?qū)蛐悦盖八幆煼?或ADEPT(抗體導(dǎo)向性酶前藥療法)。
31.如權(quán)利要求29或30所要求的方法，其中至少一種硝基還原酶通過大腸桿菌的nfsB基因或梭菌屬中的直向同源基因來編碼。
32.如權(quán)利要求29至31中任一項所要求的用途，其中藥物用于以基本上最小的副作用清除靶細(xì)胞。
33.如權(quán)利要求29至31中任一項所要求的用途，其中藥物用于哺乳動物細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶醇、它們相應(yīng)的磷酸酯、它們作為靶向細(xì)胞毒素劑、作為低含氧量腫瘤中的生物還原藥物的用途以及它們與硝基還原酶組合在細(xì)胞清除、包括基因?qū)蛐悦盖八幆煼?GDEPT)和抗體導(dǎo)向性酶前藥療法(ADEPT)中的用途。
文檔編號C07C317/00GK1902159SQ200480039430
公開日2007年1月24日 申請日期2004年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月31日
發(fā)明者W·A·丹尼, G·J·阿特韋爾, 楊尚金, W·R·威爾森, A·V·帕特森, N·A·赫爾斯比 申請人:奧克蘭聯(lián)合服務(wù)有限公司