專利名稱：：神經(jīng)變性狀況的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療神經(jīng)變性狀況，尤其其中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)尤其TGF-β1的增加是有益的狀況的方法。更具體地，本發(fā)明提供了神經(jīng)變性狀況的治療，尤其諸如脫髓鞘病，如多發(fā)性硬化、阿爾茨海默氏病和帕金森病和與頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)和顱內(nèi)出血相關(guān)的變性后遺癥的治療，借此例如通過髓鞘再生可以從受損的狀況改善或者恢復(fù)神經(jīng)元功能。還提供了包含不飽和脂肪酸部分的已知和新化合物的新用途，用于生產(chǎn)能夠有效治療此類狀況的藥物，更具體地關(guān)于神經(jīng)系統(tǒng)功能恢復(fù)能夠?qū)崿F(xiàn)以前未達(dá)到的成功水平的藥物。本發(fā)明人的共同待決的未公布的專利申請(qǐng)PCT/GB04/002089(本文引用作為參考)涉及植物和真菌油用于治療神經(jīng)變性疾病的用途。這些油在它們的脂類的sn-2位具有高百分比的必需脂肪酸γ-亞麻酸(GLA)，通常是油的總sn-2脂肪酸的40％以上。文獻(xiàn)中詳細(xì)報(bào)導(dǎo)n-3和n-6不飽和模式的必需脂肪酸(EFA)在多種人類生理疾病(包括自身免疫病)中是有益的(WO02/02105)。Harbige(1998)Proc.Nut.Soc.57，555-562綜述了在自身免疫病狀態(tài)中膳食補(bǔ)加n-3和n-6酸，尤其提到富含γ-亞麻酸(GLA)和/或亞油酸(LA)的油的好處的證據(jù)。Bates等人注意到早在1957年就已經(jīng)提到包含亞油酸和γ-亞麻酸殘基的油脂在治療炎癥和自身免疫病中可能更有效，但是發(fā)現(xiàn)施用3g油/天(Naudicelle月見草油7∶1LA∶GLA)的復(fù)發(fā)患者在試驗(yàn)中病情比對(duì)照更嚴(yán)重。盡管MS的病因仍然未知，但是研究已經(jīng)表明MS患者比正常個(gè)體具有更高的神經(jīng)-抗原自身反應(yīng)性T細(xì)胞水平。這些T細(xì)胞尤其與髓磷脂堿性蛋白(MBP)和髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)反應(yīng)并且與健康對(duì)照相比處于增加的活化狀態(tài)。MS中的軸突損傷，例如，慢性炎癥、脫髓鞘和膠質(zhì)細(xì)胞增生(astrogliosis)的實(shí)際過程是復(fù)雜的，但是認(rèn)為白質(zhì)炎癥和脫髓鞘決定疾病嚴(yán)重性，而最近研究表明MS中的軸突損傷在該疾病的早期就開始并且造成殘疾(DeStefano等人，2001)。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是用于MS的免疫介導(dǎo)效應(yīng)的最常用的動(dòng)物模型。在豚鼠中的研究已經(jīng)表明亞油酸部分地抑制EAE的發(fā)病率和嚴(yán)重性(Meade等人(1978))。(Harbige等人(1995)，1997b)闡明了亞油酸和γ-亞麻酸對(duì)EAE的臨床和組織病理學(xué)表現(xiàn)的疾病修飾效果。取決于劑量，γ-亞麻酸在急性大鼠EAE中是完全保護(hù)的，而亞油酸對(duì)臨床嚴(yán)重性具有劑量依賴性作用，但是不消除該作用。盡管存在這些實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，但是認(rèn)識(shí)到人類疾病，多發(fā)性硬化，是高度復(fù)雜的并且可以通過T細(xì)胞和其他免疫應(yīng)答因子的活性加重和減輕?；趦H用亞油酸得到的結(jié)果，認(rèn)為n-6脂肪酸促進(jìn)自身免疫和炎性疾病。已經(jīng)證明在離體γ-亞麻酸喂飼的小鼠中TGF-β1和PGE2產(chǎn)生非特異增加。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)TGF-β1在急性和復(fù)發(fā)的EAE中起保護(hù)作用((Racke等人(1993)；Santambrogio等人(1993))，并且PG抑制劑如吲哚美辛增加，并從而使得所述疾病惡化(Ovadia&Paterson(1982))。細(xì)胞因子涉及MS的發(fā)病機(jī)理，許多研究表明對(duì)髓鞘有毒性的炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β和IFN-γ)的增加與該疾病的復(fù)發(fā)期一致。相反地，消炎和免疫抑制性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的水平似乎在復(fù)發(fā)期減小并隨著患者疾病減輕而增加。從而，生物活性TGF-β1和促炎性TNF-α、IL-1β和IFN-γ之間的平衡似乎在MS復(fù)發(fā)-緩解期間失調(diào)。在從EAE的天然恢復(fù)期期間，TGF-β1分泌性T細(xì)胞抑制EAE效應(yīng)細(xì)胞，TGF-β1在CNS中表達(dá)并且在EAE中口-耐受性-誘導(dǎo)的保護(hù)中表達(dá)，TGF-β和PGE2在腦中表達(dá)(Karpus&Swanborg(1991)；Khoury等人(1992))。Harbige(1998)推斷飲食γ-亞麻酸對(duì)EAE的效果通過包括TGF-β1的類Th3機(jī)制介導(dǎo)并且可能通過超氧化物歧化酶抗氧化活性介導(dǎo)。琉璃苣油(每100％脂肪酸含量通常20-23％γ-亞麻酸和34-40％亞油酸)和爪哇毛霉菌(Mucorjavanicus)真菌油(見圖1)已經(jīng)被證明在用于鑒定MS候選者的EAE動(dòng)物模型中有效，而從來沒有在人類疾病中被證明顯著有效。含有低水平γ-亞麻酸的富含高水平亞油酸的油(EPO亞油酸∶γ-亞麻酸7∶1)部分抑制大鼠中EAE的發(fā)病率和嚴(yán)重性(Mertin&Stackpoole，1978)，而Bates的上面涉及的Naudicelle研究導(dǎo)致患者惡化。盡管多發(fā)性硬化患者在過去大約30年里使用琉璃苣油和其他含有GLA/LA的油，如月見草油，但是多數(shù)患者不能從該疾病恢復(fù)，沒有表現(xiàn)顯著改善，潛在的疾病持續(xù)發(fā)展直到死亡。已經(jīng)提出使用特別是富含γ-亞麻酸和亞油酸的琉璃苣油作為提供多發(fā)性硬化中的免疫抑制的方法(US4,058,594)。關(guān)鍵的是，所建議的劑量為每天2.4g油，并且沒有提供功效的實(shí)際證據(jù)。該劑量比在PCT/GB04/002089研究中發(fā)現(xiàn)的在人體內(nèi)無效的低5g/天劑量低得多。還表明其他更引人注目的免疫抑制劑治療，包括T細(xì)胞耗竭劑和調(diào)節(jié)劑如環(huán)膦酰胺在EAE模型中也有效，當(dāng)這些用于人多發(fā)性硬化癥中時(shí)，雖然癥狀得到改善，但是潛在的疾病繼續(xù)惡化。T細(xì)胞實(shí)際上在人體產(chǎn)生有益的細(xì)胞因子，如TGF-β1，以及有害的細(xì)胞因子。InstituteofNeurology，UK的DavidBaker在英國多發(fā)性硬化協(xié)會(huì)(UKMSSociety)在2004年5月10日UKMSFrontiers會(huì)議上以標(biāo)題為“EverythingstopsEAE，nothingstopsMS”的文章總結(jié)了在EAE和MS中有效之間的差異。已清楚僅免疫抑制不能治愈MS。這是幾乎確定的，因?yàn)槌俗陨砻庖卟。琈S患者中根本的代謝失調(diào)導(dǎo)致膜異常、細(xì)胞因子失調(diào)和隨后的免疫攻擊和病變。盡管在復(fù)發(fā)-緩解疾病中患者進(jìn)入癥狀緩解階段，但是潛在的脫髓鞘卻持續(xù)進(jìn)行。MS的“金標(biāo)準(zhǔn)(goldstandard)”治療仍然是干擾素，如用β-Avonex、Rebif和其他干擾素制劑。該金標(biāo)準(zhǔn)治療僅解決一些，例如，30％患者的需要并且甚至在這些患者中，癥狀改善也限于減小的復(fù)發(fā)嚴(yán)重性。盡管在一定比例的患者中癥狀可以減輕，但是由于潛在的變性，該疾病傾向于進(jìn)一步發(fā)展到殘疾和死亡。在他們的還未公布的PCT/GB04/002089研究中，本發(fā)明人已經(jīng)令人驚奇地確定用含有高水平sn-2γ-亞麻酸(在sn-2＞40％殘基是γ-亞麻酸)和適宜的伴隨脂肪酸含量的甘油三酯油的“高劑量”治療，可以實(shí)現(xiàn)MS的幾乎所有癥狀顯著水平的改善，該方法優(yōu)于當(dāng)前的金標(biāo)準(zhǔn)治療提供的改善?？紤]到以前用其他含有γ-亞麻酸的制劑而沒有取得成功，如Naudicelle研究，該成功尤其令人驚奇。PCT/GB04/002089研究證明在18個(gè)月期間內(nèi)，服用高劑量(15g/天)所選高sn-2γ-亞麻酸琉璃苣油的患者顯示出EDSS得分的重要(p＜0.001)而明顯的改善、復(fù)發(fā)率減小、肌痙攣狀態(tài)和疼痛感覺癥狀的癥狀減輕，和認(rèn)知功能的改善的客觀測(cè)量。該琉璃苣油的5g/天的低劑量沒有效果。服用該琉璃苣油的最高劑量的患者在試驗(yàn)期保持TGF-β1的外周血單核細(xì)胞(PBMC)產(chǎn)生水平，他們的促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β顯著且明顯(＜70％)減少并且他們具有保持或者增加的PBMC膜長鏈ω-6脂肪酸二高-γ-亞麻酸(DHLA)和花生四烯酸(AA)，相比服用安慰劑的患者在試驗(yàn)期期間這些脂肪酸損失。預(yù)計(jì)該免疫抑制將減小活性病變和神經(jīng)變性的增加，高sn-2GLA油治療顯然靶定關(guān)鍵膜脂類成分的保持和/或增加，所述成分在MS中特異損失，這與代謝缺陷的校正相一致，所述代謝缺陷不能通過當(dāng)前療法有效治療。低劑量(5g/天)沒有效果這一事實(shí)支持該推斷。已知γ-亞麻酸(183n-6，或者GLA)在體內(nèi)被快速轉(zhuǎn)化成長鏈ω-6多不飽和脂肪酸二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸(Phylactos等人1994，Harbige等人1995，2000)。因此，為了確定MS中怎樣增加膜長鏈ω-6脂肪酸的水平，本發(fā)明人已經(jīng)綜述了他們用幾種含有GLA的油得到的結(jié)果真菌(來自爪哇毛霉菌)和植物(Boragoofficianalis，月見草Oenotheraspp.或者黑穗狀醋栗Ribesspp)以及合成的三-GLA油作為GLA遞送系統(tǒng)在MS的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型(稱作慢性復(fù)發(fā)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(CREAE))中得到的結(jié)果。不像MS，大鼠中EAE的誘導(dǎo)不產(chǎn)生脫髓鞘的組織學(xué)特征(Brosnan等人1988)，但是誘導(dǎo)急性單相疾病模式，MS的特征是CNS脫髓鞘并且在臨床復(fù)發(fā)-緩解的病例中占多數(shù)。然而，慢性復(fù)發(fā)和脫髓鞘EAE模型(CREAE)的特征是脫髓鞘和復(fù)發(fā)期。在已闡明髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)是MS中重要的神經(jīng)抗原靶標(biāo)(Genain等人1999)并且闡明與MBP相比，在MS中外周血自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞對(duì)該神經(jīng)抗原的更大的應(yīng)答(KerlerodeRosbo等人1993，1997)情況下，MOG誘導(dǎo)的CREAE已經(jīng)成為所選動(dòng)物模型，其具有與MS中觀察到的特征非常相似的特征(Fazakerely等人1997，Genain等人1999，Amor等人1994)。來自發(fā)明人的CREAE和大鼠EAE喂飼研究的證據(jù)表明富集的黑穗狀醋栗(blackcurrant)種子油(72％w/w183n-6，GLA)不提供針對(duì)EAE的保護(hù)(見表3)。重要的是，黑穗狀醋栗種子油具有低sn-2GLA，多數(shù)GLA在sn-1和sn-3位(Lawson和Hughes1988)。此外，含有三個(gè)GLA部分的結(jié)構(gòu)化triacylgcerol(TG-GLA)提供了類似于用于CREAE中的琉璃苣油的保護(hù)效果(表2)。這將也與sn-2GLA是重要的一致，即，外面對(duì)sn-1和sn-3GLA在體內(nèi)經(jīng)酶促除去并且可能經(jīng)歷氧化，僅剩下sn-2GLA。已知特定脂肪酶在體內(nèi)能夠從triacylgycerol分子除去sn-1和sn-3脂肪酸但是明顯保護(hù)sn-2位產(chǎn)生該選擇性水解(Lawson和Hughes1988，Kyle1990)。該綜述使得發(fā)明人假設(shè)具有sn-2-γ亞麻酸、二高γ-亞麻酸或者花生四烯酸殘基的甘油酯在校正MS代謝中甚至優(yōu)于他們?cè)缦仍囼?yàn)中的高sn-2-γ亞麻酸琉璃苣油。這將允許攝入更低劑量的脂類和/或可能減少導(dǎo)致有益效果的治療時(shí)間。EP0520624(EfamolHoldings)的表3比較了月見草和琉璃苣油的甘油三酯含量，已教導(dǎo)對(duì)于多種GLA應(yīng)答失調(diào)，前者比后者在治療上更有效。該文件指出琉璃苣油具有27種不同的甘油三酯成分，僅20％的成分具有sn-2GLA。第3頁40-42行指出生物學(xué)試驗(yàn)已經(jīng)表明當(dāng)以不同油來源提供GLA時(shí)，等量GLA實(shí)際上可能具有非常不同的效果。關(guān)鍵地，它然后教導(dǎo)讀者，月見草油(EPO)而不是琉璃苣油中存在的一種特定級(jí)分造成前者在升高PGE1(見EP0520624表圖第4頁和表2)從而造成消炎效果中的優(yōu)秀效果該組分鑒定為二-linoeoyl-單-γ-亞麻基-甘油(DLMG)，陳述它為EPO中總甘油三酯的18-19％。關(guān)鍵地，第6頁清楚地教導(dǎo)GLA在sn-1、2或3的位置對(duì)于該效果不是重要的。Dines等人(1994)在ProceedingsofthePhysiologicalSociety，AberdeenMeeting14-16September1994報(bào)導(dǎo)用EP0520624所提倡類型的含有γ-亞麻酸的油治療糖尿病神經(jīng)病神經(jīng)元損傷的研究并再次指出琉璃苣油在治療該神經(jīng)變性中不是非常有效，而月見草油有效。該文章斷定琉璃苣油含有干擾GLA活性的其他成分。本發(fā)明人鑒于他們關(guān)于高sn-2-γ-亞麻酸琉璃苣油的結(jié)果，現(xiàn)在開始闡明實(shí)際上在甘油酯，尤其是甘油三酯中sn-2-γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸殘基的存在導(dǎo)致治療EAE、CREAE和人類疾病MS中的功效。在第一方面，本發(fā)明提供了治療需要神經(jīng)變性疾病治療的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用治療有效劑量的確定結(jié)構(gòu)的脂類甘油酯，所述甘油酯包含用一個(gè)或多個(gè)脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，所述方法的特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸的殘基的脂肪酸部分。尤其有利地治療的神經(jīng)變性疾病是涉及脫髓鞘的疾病。本發(fā)明特異阻止?jié)撛诘纳窠?jīng)變性并恢復(fù)神經(jīng)元功能。具體地，所述方法正?；窠?jīng)元膜組成，并恢復(fù)健康PBMC自發(fā)釋放的TGF-β1/TNFα比率和TGF-β1與其他PBMC釋放的細(xì)胞因子的比率。最有利地，該方法阻止所有類型的多發(fā)性硬化，尤其是復(fù)發(fā)緩解的、原發(fā)進(jìn)行性和慢性進(jìn)行性MS中的神經(jīng)變性和部分或完全恢復(fù)神經(jīng)元功能，如通過例如MRI或者CAT掃描或者通過EDSS得分所測(cè)量的那樣。此類方法還可以用于治療中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷和顱內(nèi)出血后的大腦損傷，其中在所述中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷和顱內(nèi)出血中存在脫髓鞘或神經(jīng)元損傷。此外，提供了在治療其他慢性脫髓鞘作用，如阿爾茨海默氏病和帕金森病中的應(yīng)用。優(yōu)選地，以足夠使患者中的TGF-β水平保持或者升高到治療水平的持續(xù)時(shí)間和劑量施用所述脂類。治療水平指至少與健康受試者一致的水平。優(yōu)選地，所述劑量為例如在每天施用18個(gè)月后從患者血液分離的外周血單核細(xì)胞(PBMC)自發(fā)釋放的TGF-β1/TNF-α比率為0.4到3.0，至少0.5，更優(yōu)選至少0.75，最優(yōu)選至少1。優(yōu)選地，所述劑量為例如每天施用18個(gè)月后在患者血液中產(chǎn)生TGF-β1/IL-1β比率為至少0.5，更優(yōu)選至少0.75，最優(yōu)選至少1。優(yōu)選地，12個(gè)月后，更優(yōu)選6個(gè)月后產(chǎn)生所述水平。通常，經(jīng)口施用時(shí)，每天施用的脂類的量為0.5到30g，更優(yōu)選1到20g，最優(yōu)選1到18g，通常3到5g。當(dāng)sn-2部分為γ-亞麻酸殘基的sn-2部分時(shí)，劑量可以在這些范圍的更高末端部分，尤其當(dāng)sn-1和sn-3部分是相對(duì)惰性的時(shí)，例如，為代謝使用的酸，如飽和脂肪酸時(shí)。當(dāng)sn-2部分是二高-γ-亞麻酸殘基的sn-2部分時(shí)，劑量可以更小，而當(dāng)sn-2部分是花生四烯酸殘基的sn-2部分時(shí)，功效更高，但是給藥應(yīng)該更小心，因?yàn)樵诟咚娇赡芫哂胁恍枰母弊饔?。更?yōu)選地，所述方法的特征在于所述脂類是下面通式I的含有至少一個(gè)sn-2γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸部分的甘油單酯、甘油二酯或者甘油三酯式I其中R1和R3獨(dú)立地選自氫和?；?，R2選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸殘基構(gòu)成的組。對(duì)于本發(fā)明，將?；x為在選自烷基和鏈烯基鏈的任選取代的烴基鏈的末端包含至少一個(gè)羰基，該羰基通過它的碳直接連接到式1中所示甘油殘基的氧上。優(yōu)選地，酰基R1和R3是式-CO-(CH2)n-CH3的飽和的脂肪酸部分，其中n為選自1到22，更優(yōu)選4到16，甚至更優(yōu)選5到12，最優(yōu)選6到10的整數(shù)。尤其優(yōu)選地，?；鶠樾了岷凸锼岬孽；绕涫窃趕n-2位具有γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或花生四烯酸部分的1，3-二辛酸甘油酯或者1，3-二癸酸甘油酯。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的甘油酯為甘油三酯。US4701469描述了一些潛在的用于營養(yǎng)藥物性用途的甘油三酯，本發(fā)明人已經(jīng)確定它們可以用于本發(fā)明方法中，盡管US4701469僅特別描述1，3-二辛基甘油三酯，其中sn-2酸為EFA，僅描述了制備的1，3-二辛?；嘉逑┧岣视汀?jù)說這些甘油三酯可特別用于免疫調(diào)節(jié)等，但是盡管指出了許多疾病，沒有列出在神經(jīng)變性和MS中的免疫抑制中的用途。盡管最優(yōu)選地，包括在式I化合物中的基團(tuán)R1到R3是具有結(jié)構(gòu)或代謝功能的簡(jiǎn)單的飽和脂肪酸或者天然存在的脂肪酸，如中等鏈或者長鏈脂肪酸，但是存在其他可能。尤其優(yōu)選地，脂肪酸是主要用于代謝產(chǎn)生能量的那些脂肪酸。當(dāng)脂肪酸是結(jié)構(gòu)脂肪酸，即用于膜中時(shí)，它們便利地為諸如γ-亞麻酸、亞油酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸殘基。殘基指脂肪酸羧基酯化到甘油分子的羥基之一上后剩余的部分。用于sn-1和sn-3的其他優(yōu)選的酸選自與主要導(dǎo)向至結(jié)構(gòu)膜庫的脂肪酸相反的在人體內(nèi)代謝產(chǎn)生能量的脂肪酸此類優(yōu)選的酸包括油酸和棕櫚酸。當(dāng)sn-1和sn-3脂肪酸鏈(R1和R3)不飽和時(shí)，它也可以是其他必需脂肪酸的脂肪酸鏈，如n-3酸，如十八碳四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸(docosahyexanoicacid)。當(dāng)脂肪酸被任選取代時(shí)，它們將優(yōu)選被羥基、氧代、羧基、烷基、鏈烯基和烷氧基取代。烴基鏈優(yōu)選為長1到30個(gè)碳原子，更優(yōu)選4到28個(gè)碳原子，更優(yōu)選4到24個(gè)碳原子的烴基鏈。最優(yōu)選地，烴基鏈為脂肪酸的烴基鏈，更尤其單或者多不飽和脂肪酸的烴基鏈。許多用于本發(fā)明方法的優(yōu)選脂類是已知的并且可以通過本領(lǐng)域已知的化學(xué)方法制備。例如，許多是通過商業(yè)途徑可獲得的，如三γ-亞麻精，其稱作TLG，但是在本文稱作GGG，反映了基團(tuán)R1R2R3是相同的，其中G代表γ-亞麻酸殘基。GGG可以通過商業(yè)途徑從Nu-Check-PrepInc獲得。EP0300844描述了它的合成，使用三乙酸甘油酯與γ-亞麻酸甲酯的基于堿催化的酯交換得到混合物，該混合物含有80％GGG、未反應(yīng)的γ-亞麻酸甲酯和10％單-和二-甘油酯。Triarachidin是已知的并且可以通過商業(yè)途徑例如從Sigma少量得到。通過使用由于具有血管生成增強(qiáng)活性而申請(qǐng)專利的固定化脂肪酶(US4888324)從花生四烯酸合成了AAA。然而，盡管可以使用三和二-γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸甘油二酯或甘油三酯，但是本發(fā)明人優(yōu)選使用單-γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸sn-2酯甘油三酯，因?yàn)樗麄兪┯幂^少的免疫調(diào)節(jié)和促炎脂肪酸γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸而關(guān)于所希望的膜正?；图膊⌒揎椥Ч３謘n-2γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸部分提供的增強(qiáng)的活性。優(yōu)選的新的脂類可以通過本文實(shí)施例中提出的過程和方法得到。最優(yōu)選的脂類是這樣的脂類，其中僅一個(gè)γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸部分在sn-2酯化到甘油上，側(cè)翼sn-1和sn-3酸是不飽和的中等鏈或者長鏈酸。從而，本發(fā)明的另一方面提供了本文公開的新的脂類，包括式II的化合物其中R1和R3相同并且為-C(O)(CH2)nCH3，其中n選自4到14，更優(yōu)選地選自6到10，最優(yōu)選選自7、8或9，R2選自γ-亞麻?；?、二高-γ-亞麻?；突ㄉ南；１景l(fā)明的另一方面提供了合成通式III的化合物的方法其中R1和R3相同并且為-C(O)(CH2)nCH3，其中n選自4到14，更優(yōu)選地選自6到10，最優(yōu)選選自7、8或9，R2是γ-亞麻?；鶜埢?、二高-γ-亞麻?；鶜埢突ㄉ南；鶜埢?，所述方法包括將1，3-二羥基丙酮與式X-C(O)(CH2)nCH3，其中X選自Cl、Br和I的化合物反應(yīng)，得到相應(yīng)的1，3-二-(C(O)(CH2)nCH3)2-酮化合物，還原酮基得到相應(yīng)的1，3-二-(C(O)(CH2)nCH3)2-醇，并將其與γ-亞麻酰氯或者二高-γ-亞麻酰氯或花生四烯酰氯反應(yīng)。本發(fā)明的再一方面提供了合成通式IV化合物的方法其中R1至R3相同并且選自γ-亞麻?；鶜埢⒍?γ-亞麻?；鶜埢蚧ㄉ南；鶜埢?，所述方法包括將相應(yīng)的γ-亞麻酰氯、二高-γ-亞麻酰氯或花生四烯酰氯與甘油反應(yīng)。在下面描述這些化合物中一些化合物的合成并在下面的圖中顯示了合成方案。例如，可以實(shí)施甘油的一步酯化，其使用GLA和偶聯(lián)劑，如DCCI/DMAP(1，1-二環(huán)己基碳二亞胺/4-二甲基氨基吡啶)偶聯(lián)試劑。該方法得到良好產(chǎn)率但是產(chǎn)生雜質(zhì)，其除非被除去，否則使得最終的油混濁。可以使用偶聯(lián)劑如EDCI(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)防止所述問題，所述偶聯(lián)劑產(chǎn)生水溶性副產(chǎn)物，這些副產(chǎn)物較易除去。Jpn.KokaiTokkyoKohoJP05310638A222Nov1993Heisei，6pp.描述了使用DCCI和類似但是不同的反應(yīng)制備三-α-亞麻精(LnLnLn，其中Ln為亞油酸)。一種備選方法提供了兩步序列，其利用GLA-Cl(從γ-亞麻酸和草酰氯制備)和甘油在二氯甲烷/吡啶中的反應(yīng)，該方法具有良好產(chǎn)率，放大時(shí)通過柱層析產(chǎn)率達(dá)到250g。Jpn.KokaiTokkyoKohoJP04328199A217Nov1992Heisei，5pp.(日本)Concentrationofa-linolenictriglyceridebyflashchromatography。Ando，Yukiki，Watanebe，Yoichi，Takagi，Yoshiaki(NisshinOilMillsLtd，Japan)描述用于純化三-α-亞麻精(LnLnLn)的相關(guān)但是不同的技術(shù)。比較實(shí)例tricaprin(三癸酸甘油酯)是通過商業(yè)途徑可以從Sigma獲得的已知化合物。通過將癸酸甲酯與sodiumglyceroxide反應(yīng)，隨后通過柱層析純化粗產(chǎn)物得到所述化合物(見，E.S.Lutton和A.J.Fehl，Lipids，5，90-99(1970))。一種備選方法涉及甘油與癸酸的酸催化反應(yīng)，隨后四次結(jié)晶(見，L.H.Jenson和A.J.Mabis，ActaCryst.，21，770(1966))。本申請(qǐng)人還提供了改進(jìn)方法，其允許甘油與3當(dāng)量以上的癸酰氯反應(yīng)并通過重結(jié)晶純化三癸酸甘油酯產(chǎn)物。本發(fā)明的其他方面提供了如上述的甘油三酯油的用途，用于生產(chǎn)治療本發(fā)明方法中提出的神經(jīng)變性疾病的藥物。尤其優(yōu)選的藥物用于阻止和逆轉(zhuǎn)所有類型的多發(fā)性硬化中的神經(jīng)變性，尤其是復(fù)發(fā)緩解的、原發(fā)進(jìn)行性和慢性進(jìn)行性神經(jīng)變性和神經(jīng)元完整性功能的部分或完全恢復(fù)，如通過例如MRI或者CAT掃描或者通過EDSS得分測(cè)量的那樣?？梢匀缜笆鲋委熎渌鸗GF-β1應(yīng)答疾病?？梢酝ㄟ^藥學(xué)中已知的任一種常規(guī)載體施用用于本發(fā)明的脂類。最方便地，將它們以純油或者與食物的混合物、以含有此類油的膠囊形式或者以腸包衣形式施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員將想到其他形式，見RemingtonPharmaceuticalSciences，第19版。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到其他有益的試劑可以與所述脂類聯(lián)合用于本發(fā)明或者與所述脂類形成治療方案的一部分。這些試劑可以是離子通道阻斷劑，例如，鈉通道阻斷劑、干擾素(α、β或γ)、T細(xì)胞耗竭劑、類固醇或者其他姑息劑。將還認(rèn)識(shí)到當(dāng)免疫和炎性應(yīng)答受到調(diào)節(jié)時(shí)，考慮到這些系統(tǒng)的復(fù)雜性質(zhì)，將需要小心進(jìn)行此類聯(lián)合。然而，考慮到對(duì)本發(fā)明油的延遲應(yīng)答，在TGF-β1水平正?；?，在治療的第一個(gè)月中更短作用試劑可能是有益的，只要額外的治療不妨礙該正?；^程。用于本發(fā)明的結(jié)構(gòu)脂類(structuredlipids)的合成與比較實(shí)例的合成在下文中一起描述。這些脂類的一些是新的，而其他是已知的，但是還沒有用于本發(fā)明的治療?，F(xiàn)在僅以舉例的方式參考下面的非限制性表、實(shí)施例和附圖描述本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)這些將想到落入本發(fā)明范圍的其他實(shí)施方案。表表1顯示了多種甘油三酯油的組成％總脂肪酸含量和在EAE中的保護(hù)效果。表2顯示了PCT/GB04/002089中描述的高sn-2GLA琉璃苣油試驗(yàn)中的三個(gè)治療組的參數(shù)。表3顯示了多種形式的GLA對(duì)SJL小鼠中的EAE發(fā)生率和臨床得分的影響較低得分表明改善的治療效果。表4表明富集的黑穗狀醋栗(Blackcurrent)油——一種高GLA但是低sn-2GLA的植物油——不能匹配EAE中的真菌和琉璃苣油。附圖圖1顯示安慰劑和高sn-2γ-亞麻酸，PCT/GB04/002089試驗(yàn)油，處理的人類MS患者在第18個(gè)月時(shí)自發(fā)外周血單核細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生情況。圖2顯示與高劑量(15g/天)相比，安慰劑和低劑量(5g/天)高sn-2GLA琉璃苣油對(duì)人類MS患者EDSS得分的影響，以直方圖表示，x軸為治療月數(shù)。圖3以直方圖顯示了安慰劑、低劑量和高劑量高sn-2GLA琉璃苣油對(duì)人類MS患者平均復(fù)發(fā)率(％)的影響，x軸為月數(shù)。圖4顯示了合成用于本發(fā)明方法和用途的單一脂肪酸三酰甘油酯的反應(yīng)方案。圖5顯示了合成對(duì)照化合物tricaprin的反應(yīng)方案。圖6顯示了合成本發(fā)明的混合脂肪酸三酰甘油酯CGC的反應(yīng)方案。圖7顯示了合成本發(fā)明的混合脂肪酸三酰甘油酯C-DHGLA-C的反應(yīng)方案。圖8顯示了合成對(duì)照化合物GCG、1，3-二辛酰基，2-γ-亞麻酸的反應(yīng)方案。圖9顯示了合成本發(fā)明的混合脂肪酸三酰甘油酯C-AA-C的反應(yīng)方案。圖10-19顯示了如下面實(shí)施例中給出的在SJL和C57BL小鼠中EAE研究的結(jié)果。(DHLA＝DHGLAA＝AA)實(shí)施例高sn-2琉璃苣油(PCT/GB04/002089)試驗(yàn)28名活躍復(fù)發(fā)-緩解(在此前18個(gè)月復(fù)發(fā)二次)多發(fā)性硬化患者(年齡18到65歲)進(jìn)入雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)中以研究18個(gè)月內(nèi)膠囊化琉璃苣油對(duì)臨床活性和實(shí)驗(yàn)參數(shù)的影響。該油為高sn-2γ-亞油酸(GLA)含量(＞40％的sn-2殘基為γ-亞油酸)，具有低monene(例如，erusicacid)含量并且沒有加入維生素E——一種已知的免疫調(diào)節(jié)劑。在兩家內(nèi)城醫(yī)院從神經(jīng)病學(xué)門診診所招募患者；在第一次(基線)訪問時(shí)得到醫(yī)院知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)包括在前3個(gè)月內(nèi)任何形式的類固醇或者免疫抑制藥物治療、妊娠、高脂血、規(guī)則地使用阿司匹林或者相關(guān)藥物和補(bǔ)充維生素或者脂肪酸。僅滿足所有下面標(biāo)準(zhǔn)的患者包括在試驗(yàn)中(a)能夠在治療前提供知情同意，完全理解可以在任何時(shí)間無損害地撒消同意；(b)年齡18到60歲(包括18和60歲)的男性或女性門診患者；(c)已經(jīng)證實(shí)診斷為臨床確診復(fù)發(fā)性MS；(d)在過去2年里已經(jīng)具有至少3次有記載的臨床復(fù)發(fā)；(e)具有0.0-5.5(包括0.0和5.5)的基線擴(kuò)展殘疾得分等級(jí)(ExpandedDisabilityScoringScale，EDSS)得分，條件是他們都有詳細(xì)記載的惡化；和(f)通過醫(yī)療史、體檢和臨床化學(xué)、尿和血液學(xué)測(cè)試證實(shí)除了MS相關(guān)癥狀是健康的。由PharmacyDepartment將患者隨機(jī)分成三組，每組包含12名患者●第一臨床組(n＝12)接受安慰劑(5g聚乙二醇400)●第二臨床組(n＝12)接受低劑量(5g)精煉Borageofficinalis●第三臨床組(n＝12)接受高劑量(15g)精煉Borageofficinalis。添加為每天1克油膠囊的形式(對(duì)于低劑量5/天，15/天高劑量)，持續(xù)18個(gè)月。Borageofficinalis油和ω-6多不飽和脂肪酸是一般公認(rèn)為對(duì)人消費(fèi)安全(GRAS)的食物成分。在EC規(guī)定下沒有分類或者標(biāo)記要求。臨床評(píng)估包括擴(kuò)展殘疾等級(jí)得分(EDSS)和臨床復(fù)發(fā)記錄。在添加的第1個(gè)、第3個(gè)、第6個(gè)、第12個(gè)、第15個(gè)和第18個(gè)月采取靜脈血(50ml)用于實(shí)驗(yàn)室研究。每次訪問研究下面的生物化學(xué)和免疫學(xué)參數(shù)以與治療前數(shù)據(jù)比較和在組數(shù)據(jù)之間比較●刺激和未刺激的體外外周血單核細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生情況涉及MS的發(fā)病機(jī)理的TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β中的改變。細(xì)胞因子和相關(guān)基因表達(dá)。●血清中可溶性粘附分子，尤其ICAM-1和VCAM-1●外周血單核細(xì)胞膜脂肪酸和血漿磷脂脂肪酸組分。結(jié)果在表1和2和圖1到5中顯示。初級(jí)結(jié)果參數(shù)為基線(第0月)和治療結(jié)束(第18個(gè)月)之間臨床復(fù)發(fā)數(shù)。次級(jí)結(jié)果參數(shù)包括到第一次臨床復(fù)發(fā)的時(shí)間；復(fù)發(fā)嚴(yán)重性(如通過EDSS得分和使用類固醇治療評(píng)估的)；和與基線相比在第3、6、9、12和18個(gè)月EDSS的改變并且其定義為EDSS增加至少1.0點(diǎn)，持續(xù)3個(gè)月，或者EDSS從基線EDSS增加至少1.5點(diǎn)，持續(xù)3個(gè)月。11名患者在安慰劑組中，7名患者服用低劑量琉璃苣油，10名患者服用高劑量琉璃苣油。所研究的藥物耐受良好，并且在18個(gè)月的試驗(yàn)期間沒有嚴(yán)重的不利事件。PBMC的分離和培養(yǎng)將肝素化全血用等體積Hanks平衡鹽溶液(Sigma，UK)稀釋并將所得稀釋的血液在Lymphoprep(Nycomed，Oslo，Norway)上分層。以800g密度離心30分鐘后，從界面除去PBMC并用Hanks溶液稀釋。然后通過以250g離心10分鐘將細(xì)胞洗滌2次。將所得最終團(tuán)粒重新懸浮在培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基由RPMI-1640培養(yǎng)基(Sigma，UK)補(bǔ)加2mML-谷氨酰胺、100U青霉素和100μg鏈霉素(Sigma，UK)和10％自體血漿組成。向組織培養(yǎng)管(BibbySterilinLtd，Stone，UK)加入2×106個(gè)/mlPBMC(＞95％存活，通過臺(tái)盼藍(lán)排阻判斷)并在37℃用5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)。在前面的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中確定抗原濃度、細(xì)胞密度和培養(yǎng)時(shí)間以確定最大細(xì)胞因子產(chǎn)生(數(shù)據(jù)未顯示)。還制備常規(guī)cytospin制備物以用于隨后的微分計(jì)數(shù)。培養(yǎng)后，通過以250g離心10分鐘從培養(yǎng)物除去細(xì)胞，然后除去所得上清液，等分試樣并在-70℃保存。制備血漿樣品以250g離心10ml肝素化血液10分鐘。然后除去所得血漿層，等分試樣并在-70℃保存。檢測(cè)促炎細(xì)胞因子用通過商業(yè)途徑可獲得的能夠以ELISA形式檢測(cè)細(xì)胞因子的成對(duì)抗體(R&DsystemsLtd，Abingdon，UK)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液和血漿中TNF-α、IL-1β和IFN-γ。對(duì)TNF-α和IFN-γELISAs的靈敏度為15.6-1000pg/ml，對(duì)于IL-1β的靈敏度為3.9-250pg/ml。檢測(cè)生物活性TGF-β1通過靈敏度為15.6-1000pg/ml的商業(yè)途徑可獲得的EmaxELISA系統(tǒng)(Promega，Southampton，UK)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液和血漿中生物活性TGF-β1。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用斯氏t檢驗(yàn)和曼-懷U檢驗(yàn)(Mann-WhitneyU-test)比較細(xì)胞因子產(chǎn)生的差異，并且當(dāng)p值小于0.05時(shí)認(rèn)為差異是顯著的。結(jié)果兩名患者產(chǎn)生腹瀉，后來證實(shí)他們服用了高劑量的琉璃苣油。一名患者腹瀉輕微，但是第二名患者中等嚴(yán)重，該患者后來中斷了該研究藥物。記錄沒有中斷并且當(dāng)停藥后腹瀉停止，但是再刺激時(shí)又出現(xiàn)腹瀉。因此，該患者從試驗(yàn)撒出。用高劑量琉璃苣油治療的剩余患者在所有初級(jí)和次級(jí)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)上表現(xiàn)出極好的臨床改善。例如，6個(gè)月治療后他們的平均EDSS得分已經(jīng)從基線EDSS得到提高(圖1)。更重要地，治療6個(gè)月后，當(dāng)與安慰劑組中復(fù)發(fā)數(shù)相比較時(shí)，臨床復(fù)發(fā)平均數(shù)已經(jīng)顯著減少(圖2)。相反，接受低劑量琉璃苣油的患者當(dāng)與安慰劑組比較時(shí)沒有表現(xiàn)出任何臨床改善。除了它對(duì)MS疾病活性的有益效果，高劑量琉璃苣油還提供了對(duì)肌肉痙攣狀態(tài)(僵硬)和疼痛感覺癥狀的一定的癥狀減輕，并且還提供了改善的認(rèn)知功能。如從下圖可以看到，在高劑量組中，9、12和18個(gè)月后復(fù)發(fā)率下降到0。在第15個(gè)月時(shí)看到的增加是由于從該組撤出的患者。下面是三個(gè)簡(jiǎn)短病史用以闡明高劑量高sn-2GLA琉璃苣油的治療益處。前兩個(gè)病史來自試驗(yàn)，而第三個(gè)是試驗(yàn)后患者，從該患者得到MRI研究?；颊?(治療)第一名患者是48歲婦女，她已經(jīng)患有臨床活性、復(fù)發(fā)緩解型MS9年了。她最初在地方衛(wèi)生局(HealthAuthority)作為全職管理員工作，但是她由于嚴(yán)重MS而不能執(zhí)行她的職責(zé)。因此，她后來作為兼職秘書工作，但是由于肌肉僵硬和感覺紊亂而仍然在運(yùn)動(dòng)方面具有困難。她還經(jīng)歷嚴(yán)重臨床復(fù)發(fā)，平均每9個(gè)月復(fù)發(fā)一次。多數(shù)這些復(fù)發(fā)導(dǎo)致入院進(jìn)行類固醇治療?？紤]到她的活躍MS，將她募集到琉璃苣油試驗(yàn)。沒有與研究相關(guān)的不利事件，服用藥物4個(gè)月后，她在行走和感覺癥狀方面經(jīng)歷良好的改善。治療后約9個(gè)月，她足夠健康而可以開始全職工作了。此外，她在臨床試驗(yàn)的18個(gè)月持續(xù)時(shí)間內(nèi)保持不復(fù)發(fā)。在試驗(yàn)結(jié)束后，治療記錄顯示她服用高劑量琉璃苣油?；颊?(對(duì)照)第二名病例是46歲婦女，她也已經(jīng)患有臨床活性復(fù)發(fā)緩解MS8年了。她最初為售貨員，但是診斷為MS后失業(yè)。她的癥狀包括活動(dòng)困難和在兩條腿中的疼痛感覺癥狀。她在臨床試驗(yàn)前2年里已經(jīng)經(jīng)歷了三次臨床復(fù)發(fā)，并且已經(jīng)入院兩次進(jìn)行類固醇治療。因此，將她募集到琉璃苣油試驗(yàn)中，但是她的行走繼續(xù)惡化。進(jìn)入試驗(yàn)6個(gè)月后，她需要使用拐杖并且還接受巴氯芬治療以降低四肢痙攣狀態(tài)。開始琉璃苣油試驗(yàn)后約10個(gè)月，她因?yàn)閲?yán)重的臨床復(fù)發(fā)而入院進(jìn)行類固醇治療。她后來患膀胱失調(diào)并且開始使用輪椅進(jìn)行長路程。在18個(gè)月試驗(yàn)結(jié)束后打開治療記錄，發(fā)現(xiàn)她服用的是安慰劑。之后，對(duì)于超過50碼的路程她開始使用步行架。患者3治療(試驗(yàn)之外)第3個(gè)病例是26歲男人，他在2001年4月被確診為MS。他的癥狀在1999年開始，那時(shí)他陳述彌散的頑固性疼痛，該疼痛影響身體的多個(gè)部分，尤其影響胸和腹的左邊。接著是手和腳間歇性麻木，伴隨著波動(dòng)性虛弱。還存在尿頻和尿急形式的令人苦惱的膀胱癥狀。2001年MS的診斷是基于他的復(fù)發(fā)緩解癥狀，并且通過陽性腦脊液分析和大腦的磁共振成像(MRI)得到證實(shí)，MRI表明在兩個(gè)腦半球中存在多個(gè)白質(zhì)異常。癥狀不響應(yīng)多種藥物療法。在2003年4月，開始經(jīng)口補(bǔ)充本發(fā)明高劑量琉璃苣油?；颊邎?bào)告在開始該經(jīng)口補(bǔ)充給藥的3個(gè)月內(nèi)他的癥狀顯著改善。他的疼痛感覺癥狀完全消失。他報(bào)告自2003年5月就沒有麻木或者虛弱，并且注意到他的膀胱控制的顯著改善。經(jīng)口補(bǔ)充給藥沒有導(dǎo)致不利事件。進(jìn)行重復(fù)大腦MRI以證實(shí)所報(bào)告的N先生癥狀的改善。重復(fù)MRI表明白質(zhì)異常的大小和分布減小。實(shí)施例結(jié)構(gòu)sn-2脂類在下面的所有實(shí)施例中，通過使用更高純度的起始物質(zhì)γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸(如可以從例如SigmaAldrich得到)得到更高純度。GLA95是指95％純的γ-亞麻酸。合成實(shí)施例1三γ亞麻精的合成1)酰氯方法將2.0g(7.2mmol，3.1當(dāng)量)GLA95(95％純?chǔ)?亞麻酸)溶于10mlDCM中。氮?dú)庀?-3分鐘內(nèi)逐滴加入溶于5mlDCM的1.01g(0.71ml，8.0mmol，3.4當(dāng)量)草酰氯。室溫?cái)嚢柽^夜。真空濃縮反應(yīng)混合物除去DCM和過量草酰氯。然后氮?dú)庀略?-3分鐘內(nèi)將該酰氯逐滴加到215mg(2.3mmol，1當(dāng)量)甘油、0.58ml(3.1當(dāng)量)吡啶和10mlDCM的攪拌的混合物中。室溫下攪拌混合物過夜。然后濾除形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。將溶液用1×4ml水、0.1NHCl、5％碳酸氫鈉和5％NaCl洗滌。用硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮得到黃色油。在硅膠柱上純化該油，用含10％醚的己烷作為洗脫溶劑。得到透明無色油，將其樣品酯交換化并隨后通過GC分析。該產(chǎn)物含有96.3％GLA。2)DCCI方法氮?dú)庀聦?.19gGLA95(3.15當(dāng)量)、230mg(1當(dāng)量)甘油、153mgDMAP(0.5當(dāng)量)在10mlDCM中攪拌。加入溶于5mlDCM中的1.85gDCCI(3.6當(dāng)量)。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。過濾形成的DCU并用DCM洗滌。將DCM用1×5ml1NHCl、水、5％碳酸氫鈉和水洗滌。用硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮得到油。在硅膠柱上純化該油，用含10％醚的己烷作為洗脫溶劑。得到1.47g(67％)稍微混濁的油。將該產(chǎn)物的樣品酯交換化并隨后通過GC分析。該產(chǎn)物含有95.8％GLA。放大將20g(0.072mol，3.1當(dāng)量)GLA95(γ-亞麻酸，95％)溶于100mlDCM中。氮?dú)庀?-4分鐘內(nèi)加入13.7g(9.3ml，0.11mol，4.78當(dāng)量)草酰氯。氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。真空濃縮反應(yīng)混合物除去DCM和過量草酰氯。然后氮?dú)庀略诩s5分鐘內(nèi)將該油滴加到2.14g(0.023mol，1當(dāng)量)甘油、100mlDCM和5.8ml(5.68g，0.072mol，3.1當(dāng)量)吡啶的攪拌的混合物中。室溫下攪拌混合物過夜。然后濾除形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。將DCM溶液用1×25ml水、10％碳酸氫鈉、0.1NHCl、5％NaCl洗滌。(在該過程形成乳狀液，特別在開始時(shí))。將DCM用硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮得到褐色油(～21g)。在硅膠柱上純化該油，首先使用含5％醚的己烷然后使用含10％醚的己烷。得到15.6g(77％產(chǎn)率)透明油。通過t1c，該物質(zhì)含有少量游離GLA。(該物質(zhì)在后來被純化)。大規(guī)模放大以10倍規(guī)模重復(fù)上面的反應(yīng)。從而，使用200gGLA95、1LDCM、137g草酰氯，和21.4g甘油。加入酰氯時(shí)，用冷水浴冷卻反應(yīng)混合物并將溫度保持在35℃以下。產(chǎn)生250g褐色油。將其最初在500g硅膠柱上純化。將油溶于200ml己烷中并應(yīng)用于柱子。首先用己烷，然后用含5％醚的己烷，然后用含10％醚的己烷洗脫。收集級(jí)分并通過tlc分析，最終產(chǎn)生兩批油。第一級(jí)分A(66g)含有少量前沿移動(dòng)的雜質(zhì)和少量GLA(比TGL移動(dòng)慢)，第二級(jí)分B(99g)沒有前沿移動(dòng)雜質(zhì)并且含有少許GLA。用169gGLA重復(fù)大規(guī)模反應(yīng)并得到如上兩種級(jí)分。這次有85g“A”級(jí)分和54g“B”級(jí)分。合并兩批“A”并在500g硅膠柱上再純化。以類似方式處理“B”級(jí)分(還向該批產(chǎn)品中加入來自小規(guī)模反應(yīng)的15g物質(zhì))。再次純化來自上面的一些級(jí)分并最終得到259g油。在高真空下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸餾該油到恒重-256g。這代表65％的總產(chǎn)率。產(chǎn)物分析GC將小樣品酯交換并進(jìn)行GC分析GLA含量為97.1％。主要雜質(zhì)是亞油酸-1.91％。注釋用于合成的最初GLA95含有96.2％GLA和2.42％亞油酸。HPLC使用反相柱(HypersilC184.6×100mm)進(jìn)行HPLC方法，用80/20乙腈/THF洗脫。通過210nmUV檢測(cè)。這表明產(chǎn)物為三種成分的混合物。主峰(93.6％)是所需要的產(chǎn)物。較慢移動(dòng)的雜質(zhì)(占產(chǎn)物的5.0％)可能是GGLI甘油三酯(LI＝亞油酸)。第二雜質(zhì)稍快移動(dòng)并且占產(chǎn)物的1.4％。注釋210nm處的吸收在不同脂肪酸含量的甘油三酯之間明顯不同。例如，三γ亞麻精的UV吸收是三亞麻精的5-6倍?？偨Y(jié)通過兩步酰氯途徑從96.2％GLA制備了254g三-6，9，12-亞麻酸甘油酯)(γ亞麻酸甘油三酯，三γ亞麻精，GGG)。它是透明的、淺黃色油，將其在冷藏箱中氮?dú)庀卤４?。GLA含量為97.1％并且沒有檢測(cè)到C20:1、C22:1或者C24:1酸。HPLC純度為93.6％。使用GLA98(98％γ-亞麻酸Scotia)或者更高純度的起始物質(zhì)可以容易地實(shí)現(xiàn)更高純度GGG的合成。比較脂類1合成Tricaprin(三癸酸甘油酯)小規(guī)模室溫氮?dú)庀聰嚢韪视?3.0g，0.0325mol，1當(dāng)量)、吡啶(8.1ml，0.10mol，3.1當(dāng)量)和二氯甲烷(100ml)。然后5分鐘內(nèi)逐滴加入癸酰氯(21ml，19.25g，0.10mol，3.1當(dāng)量)，用水浴在外部冷卻以保持溫度在30-35℃。當(dāng)加入完成時(shí)，加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP(0.12g，1mmol，0.03當(dāng)量)并在室溫下氮?dú)庀聰嚢杌旌衔镞^夜。通過過濾除去沉淀的吡啶鹽酸鹽并用二氯甲烷洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的水溶液(20ml)洗滌合并的洗滌液和濾液。然后用MgSO4干燥二氯甲烷層并真空除去溶劑。殘留的油靜置結(jié)晶。該物質(zhì)從異丙醇(40m1)重結(jié)晶得到15.6g(86％產(chǎn)率)蠟狀白色固體。分析GC-99.8％純度HPLC(C184.6×100mm，ACN/THF85/151ml/min，λ210nm)-94.9％純度大規(guī)模以15倍規(guī)模重復(fù)上面的反應(yīng)。室溫氮?dú)庀聰嚢韪视?45.0g，0.49mol，1當(dāng)量)、吡啶(121.5ml，1.50mol，3.1當(dāng)量)和二氯甲烷(1.5L)。然后15分鐘內(nèi)逐滴加入癸酰氯(315ml，288.8g，1.50mol，3.1當(dāng)量)，用水浴在外部冷卻以保持溫度在30-35℃。當(dāng)加入完成時(shí)，加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP(1.8g，15mmol，0.03當(dāng)量)并在室溫氮?dú)庀聰嚢杌旌衔镞^夜。通過過濾除去沉淀的吡啶鹽酸鹽并用二氯甲烷洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的水溶液(300ml)洗滌合并的洗滌液和濾液。然后用MgSO4干燥二氯甲烷層并真空除去溶劑。殘留的油靜置結(jié)晶。該物質(zhì)從異丙醇(400ml)重結(jié)晶得到228g(86％產(chǎn)率)蠟狀白色固體。分析GC-99.8％純度HPLC(C184.6×100mm，ACN/THF85/151ml/min，λ210nm)-94.9％純度生產(chǎn)另一批產(chǎn)品并與上面的小規(guī)模批次產(chǎn)品合并并從異丙醇重結(jié)晶得到44g產(chǎn)物。合并上面的批次(268g)并再進(jìn)行分析GC99.9％純度HPLC97.9％總結(jié)通過一步方法(下面給出的方案)從癸酰氯(98％)制備了263g三癸酸甘油酯(tricaprin，CCC)。它是白色、低熔點(diǎn)固體并將其在冷藏箱中氮?dú)庀卤４妗含量為脂肪酸含量的99.9％并且HPLC純度為97.9％。合成實(shí)施例22-γ亞麻酸1，3-二癸酸甘油酯(1，3-二癸酸2-十八碳三(6-Z，9-Z，12-Z)烯酸甘油酯或CGC)該甘油三酯是新的。不像CGC，它的異構(gòu)體CLnC(Ln＝α-亞麻酸)已經(jīng)經(jīng)鑒定(見，K.Long等人Biotechnol.Lett.，20，369-372(1998)和H.Mu，P.Kalo等人Eur.J.LipidSci.Technol.，102，202-211(2000))為椰子油的成分。此外，已經(jīng)描述了CLxC(Lx＝未指定雙鍵位置的亞麻酸)(見J.Gresti等人J.DairySci.，76，1850-1869(1993))。用于合成CGC的兩種中間體是已知的(見L.ElKihel等人Arzneim-Forsch./DrugRes.，46，1040-1044(1996)和US4178299)。下面描述的最后一步是新穎的并且前兩步也是具有創(chuàng)造性的，因?yàn)樗鼈儽纫郧皥?bào)導(dǎo)的方法更適于大規(guī)模生產(chǎn)。通過將1，3-二癸酸甘油酯與GLA-酰氯在二氯甲烷-吡啶中的反應(yīng)制備CGC。通過1，3-二癸酰氧基丙-2-酮的硼氫化鈉還原制備1，3-二癸酸甘油酯，1，3-二癸酰氧基丙-2-酮又是通過用1，3-二羥基丙酮與癸酰氯反應(yīng)制備。必須小心處理中間產(chǎn)體1，3-二癸酸甘油酯，因?yàn)樗┞队谒?、堿和熱時(shí)可以經(jīng)歷酰基轉(zhuǎn)移作用。已經(jīng)描述了制備1，3-二癸酸甘油酯的較老的方法(見A.P.J.Mank等人Chem.PhysicsLipids，16，107-114(1976))。通過癸酸到縮水甘油酯(來自表氯醇)的催化加成通用、靈活的合成1，3-甘油二酯和甘油三酯的吸引力較低，這是由于更嚴(yán)格的反應(yīng)條件和?；D(zhuǎn)移問題。通過在硅膠上小心的柱層析純化終產(chǎn)物CGC，所述層析除去副產(chǎn)物。小規(guī)模1，3-二癸酰氧基丙-2-酮室溫氮?dú)庀聦⒐秕Ｂ?40.0ml，36.8g，0.19mol，1.98當(dāng)量)在10-15分鐘內(nèi)逐滴加入到1，3-二羥基丙酮二聚體(8.68g，0.048mol，1.0當(dāng)量)、吡啶(15.6ml，0.19mol)、4-二甲基氨基吡啶(0.18g，0.0014mol，0.03當(dāng)量)和二氯甲烷(DCM，150ml)的攪拌的懸浮液中。通過在冷水浴中冷卻保持反應(yīng)混合物的溫度低于30℃。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×25ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。將溶液用MgSO4干燥并真空濃縮得到淺黃色半固體。然后將其從甲醇(150ml)結(jié)晶得到白色固體。產(chǎn)率為28.2g(73％)。1，3-二癸酸甘油酯將上面的酮(28.2g，0.071mol)溶于四氫呋喃(THF，200ml)中。然后加入水(10ml)，冷卻溶液到5℃，并在10℃下逐份加入硼氫化鈉(5.38g，0.14mol)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1h，然后真空濃縮除去THF。殘留物在乙酸乙酯和5％氯化鈉溶液之間分配。用乙酸乙酯再次萃取水相并用MgSO4干燥合并的萃取物并真空濃縮成蠟狀固體。將其從己烷結(jié)晶兩次得到11.2g(40％)白色固體。(通過HPLC，99％+純度)。2-γ-亞麻酸1，3-二癸酸甘油酯(CGC)將γ-亞麻酸(GLA95，8.34g，0.03mol)溶于二氯甲烷(DCM，60ml)。所得溶液在室溫氮?dú)庀聰嚢璨⒃?分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(3.9ml，5.67g，0.044mol)。將混合物在室溫下攪拌過夜并真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后15分鐘內(nèi)將殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)在10-15℃逐滴(冰/水冷卻)加入1，3-二癸酸甘油酯(11.2g，0.028mol)、DCM(50ml)、吡啶(2.42ml，2.37g，0.03mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.10g，0.0008mol，0.03當(dāng)量)的攪拌的溶液中。通過冰-水冷卻保持溫度，室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×20ml部分洗滌合并的洗滌液和濾液。將溶液用MgSO4干燥并真空除去溶劑。通過在硅膠上柱層析純化殘留的褐色油。用己烷然后用5％醚/己烷洗脫得到10.3g(56％)無色油。通過13CNMR和GLC證實(shí)結(jié)構(gòu)。通過HPLC測(cè)定純度。大規(guī)模1，3-二癸酰氧基丙-2-酮室溫氮?dú)庀聦⒐秕Ｂ?272ml，250g，1.3mol，2當(dāng)量)在10-15分鐘內(nèi)逐滴加入到1，3-二羥基丙酮二聚體(59.1g，0.65mol，1.0當(dāng)量)、吡啶(106ml，103.7g1.3mol)、4-二甲基氨基吡啶(2.38g，0.02mol，0.03當(dāng)量)和二氯甲烷(DCM，750ml)的攪拌的懸浮液中。通過在冷水浴中冷卻保持反應(yīng)混合物的溫度低于30℃。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×150ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。將溶液用MgSO4干燥并真空濃縮得到淺黃色半固體。然后將其從甲醇(500ml)結(jié)晶得到白色固體。產(chǎn)率為158g(60％)。1，3-二癸酸甘油酯將上面的酮(158g，0.40mol)溶于四氫呋喃(THF，2.25L)中。然后加入水(50ml)，冷卻溶液到5℃，并在10℃以下逐份加入硼氫化鈉(5.66g，1.5當(dāng)量)。通過HPLC(C18，用ACN以1ml/min洗脫λ210nm)監(jiān)控反應(yīng)混合物(注釋實(shí)際上僅加入約4.5g硼氫化物，因?yàn)樗蠸M已經(jīng)反應(yīng))。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1h，然后真空濃縮除去THF。殘留物在乙酸乙酯和5％氯化鈉溶液之間分配。用乙酸乙酯再次萃取水相并用MgSO4干燥合并的萃取物并真空濃縮成蠟狀固體。將其從己烷結(jié)晶兩次得到96g(60％)白色固體。(通過HPLC，98％純度)。2-γ-亞麻酸1，3-二癸酸甘油酯(CGC)將γ-亞麻酸(GLA95，120.2g，0.43mol)溶于二氯甲烷(DCM，750ml)。所得溶液在室溫氮?dú)庀聰嚢璨⒃?5分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(55.7ml，82.3g，0.65mol，1.5當(dāng)量)。將混合物在室溫下攪拌過夜并真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后在30-40分鐘內(nèi)將殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)在10-15℃逐滴(冰/水冷卻)加入1，3-二癸酸甘油酯(164.7g，0.41mol)、DCM(650ml)、吡啶(33.3ml，32.5g，0.41mol)和4-二甲基氨基吡啶(1.50g，0.012mol，0.03當(dāng)量)的攪拌的溶液中。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×150ml部分洗滌合并的洗滌液和濾液。將溶液用MgSO4干燥并真空除去溶劑得到褐色油(275g)。上面的三種反應(yīng)的規(guī)模是每種所實(shí)施反應(yīng)的最大規(guī)模。硼氫化物還原除了產(chǎn)生1，3-二癸酸甘油酯之外還以可變產(chǎn)率產(chǎn)生一種副產(chǎn)物。該副產(chǎn)物的存在極大地影響所分離的純1，3-二癸酸甘油酯的產(chǎn)率；只能通過粗產(chǎn)物的兩次結(jié)晶除去所述副產(chǎn)物。因?yàn)橥ㄟ^柱層析純化終產(chǎn)物CGC，所以用于最后步驟的1，3-二癸酸甘油酯必須盡可能純。從上面的反應(yīng)產(chǎn)生約440g粗CGC，其為褐色油。在一系列硅膠柱上使用己烷，然后通過2-3％醚/己烷純化該粗CGC產(chǎn)品。純化需要7或8條柱子，使用3-4千克硅膠，25-30升溶劑(回收溶劑使得該數(shù)字降低-實(shí)際上使用100升以上)。通過HPLC(Cl84.6×100mm，用85/15ACN/THF以1ml/min洗脫，紫外檢測(cè)λ210nm)檢測(cè)所得產(chǎn)物——一種透明的幾乎無色的油(264克)的純度為96.4％。GC表明66.1/33.9C/G比。NMR分析表明該產(chǎn)物具有正確的CGC結(jié)構(gòu)并且至少為95％純度δc(500MHz，CDCl3)172.65(2-GLA羰基)，173.25(1，3-癸酸羰基)。信號(hào)比2.04∶1。在173.0處沒有信號(hào)，表明不存在1.3-GLA。在172.79的微弱信號(hào)可能是GLA或者2-癸酸中的油酸雜質(zhì)?？偨Y(jié)通過三步方法(下面給出的方案)已經(jīng)從癸酰氯(98％)制備了264g1，3-二癸酸-2-γ-亞麻酸甘油酯(1，3-二癸酸甘油酯-2-GLA，CGC)。它是幾乎無色的油(稍微黃色)并且在氮?dú)庀略诶洳叵渲斜４?。HPLC純度為96.4％。合成實(shí)施例31，3-二癸酸-2-二高-γ-亞麻酸酯(1，3-二癸酸2-二十碳-(8Z，11Z，14Z)-三烯酸甘油酯或者C(DHLA)C)該甘油三酯似乎為新的-還沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)于它的參考文獻(xiàn)。將DHLA(3.93g，12.8mmol，1當(dāng)量)溶于二氯甲烷(DCM，20ml)中并在室溫氮?dú)庀聰嚢琛?-2分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(1.69ml，2.46g，19.4mmol，1.5當(dāng)量)，并在室溫下攪拌過夜。真空濃縮所得溶液除去DCM和過量草酰氯。然后將殘余油狀酰氯(DHLA-Cl)在5分鐘內(nèi)在25℃下逐滴加入1，3-二癸酸甘油酯(4.91g，12.2mmol，0.95當(dāng)量)、吡啶(0.98ml，0.96g12.1mmol，0.95當(dāng)量)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP，8mg，0.07mmol，0.03當(dāng)量)的攪拌的混合物中。在加入期間反應(yīng)溫度升高到32℃。在30-35℃攪拌反應(yīng)物并通過HPLC監(jiān)控。1.5小時(shí)后停止反應(yīng)。濾除沉淀的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×10ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。然后用MgSO4干燥溶液并真空濃縮得到粗產(chǎn)物，其為黃-橙色油(8.9g，HPLC測(cè)定純度為86％)。將該油在硅膠(250g)上層析。用己烷和二乙醚-己烷(2-6％)洗脫得到純化的產(chǎn)物，其為淡黃色油。用脫色炭處理己烷溶液并真空除去溶劑得到C(DHLA)C，其為透明無色油(6.48g，HPLC測(cè)得純度98.9％)。合成實(shí)施例4Triarachidin(三(二十碳)四(5-Z，8-Z，11-Z，14Z)烯酸甘油酯)或AAA)將花生四烯酸(50.9g，0.17mol，3當(dāng)量)溶于二氯甲烷(DCM，175ml)并在室溫氮?dú)庀聰嚢琛Ｈ缓笙驍嚢璧娜芤涸?分鐘內(nèi)加入草酰氯(21.9ml，31.9g，0.25mol，4.4當(dāng)量)并且溫度升高4℃。室溫下攪拌所得黃綠色混合物過夜，然后真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后向甘油(5.11g，0.055mol，1當(dāng)量)、吡啶(13.5ml，13.2g，0.17mol，3當(dāng)量)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP，0.20g，0.002mol，0.03當(dāng)量)的預(yù)熱的(25℃)攪拌混合物在15分鐘內(nèi)逐滴加入殘留的油狀酰氯(A-Cl)。在加入期間反應(yīng)混合物的溫度升高到42℃，并觀察到輕微回流。在30-40℃攪拌混合物并通過HPLC監(jiān)控。2小時(shí)后，沒有觀察到進(jìn)一步形成產(chǎn)物。濾除沉淀的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×50ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。然后用MgSO4干燥溶液并真空濃縮得到粗產(chǎn)物，其為黃-橙色油(57g)。將該油在硅膠(約600g)上柱層析。用己烷和二乙醚(2-4％)-己烷洗脫得到22.8g油狀產(chǎn)物。從39.8g花生四烯酸生產(chǎn)第二批(17.8g)。將這兩批合并并真空除去殘留溶劑得到40.5g(43％)流動(dòng)的淡黃色油。HPLC純度84.8％GLC分析94.3％AA(花生四烯酸)。比較脂類21，3-二(十八碳-6Z，9Z，12Z-烯酰氧基)丙-2-酮(1，3-二(γ-亞麻酰氧基)丙-2-酮，GonG)階段1GCG的中間體將γ-亞麻酸(GLA95，197g，0.71mol，2.2當(dāng)量)溶于2L3頸燒瓶中所含的二氯甲烷(DCM，600ml)中。室溫氮?dú)庀聰嚢杷萌芤骸Ｔ?5-20℃15分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(93ml，136g，1.07mol，3.3當(dāng)量)。室溫下攪拌褐色混合物過夜然后真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后室溫氮?dú)庀孪?，3-二羥基丙酮二聚體(28.99g，0.32mol，1.0當(dāng)量)、吡啶(52ml，50.9g0.64mol，2.0當(dāng)量)、4-二甲基氨基吡啶(2.36g，0.02mol，0.06當(dāng)量)和二氯甲烷(DCM，600ml)的攪拌混合物中在20分鐘內(nèi)在25℃逐滴加入殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)。讓反應(yīng)混合物的溫度升高到40℃，然后在氮?dú)庀略贁嚢杌旌衔?小時(shí)(通過HPLC監(jiān)控)。濾除形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×150ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。然后用MgSO4干燥溶液并真空濃縮得到約200g黃色油。通過在硅膠(600g)上的柱層析部分純化該材料。用己烷然后用乙醚-己烷混合物(2-15％)洗脫得到42g淡黃色油。將該油再次在硅膠(600g)上層析并用己烷然后用1-10％乙醚-己烷洗脫得到產(chǎn)物(95.9％純度)，其為淡黃色油。產(chǎn)率為42g(17％)。1，3-二(十八碳-6Z，9Z，12Z-烯酰氧基)丙-2-醇(1，3-二(γ-亞麻酰氧基)丙-2-醇或1，3-二-γ-亞麻精，GolG)階段2GCG的中間體將1，3-二(γ-亞麻酰氧基)丙-2-酮(GonG，25.5g，0.04mol，1當(dāng)量)溶于四氫呋喃(THF，375ml)和水(12.7ml)中。在-20℃劇烈攪拌溶液，注意保持反應(yīng)溫度低于-15℃。向經(jīng)攪拌的溶液在3分鐘內(nèi)逐份加入硼氫化鈉(790mg，0.02mol，1.25當(dāng)量)。再在-20℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘，然后加入己烷(380ml)。然后將仍然冷的混合物用水(2×200ml)洗滌，MgSO4干燥，并真空濃縮得到標(biāo)題混合物，其為褐色油(27.8g)(HPLC純度82.6％，小于1％轉(zhuǎn)移的物質(zhì))。制備另一批并與第一批合并得到50g粗產(chǎn)物。通過柱層析在硅膠(400g)上純化該物質(zhì)。用己烷和二乙醚-己烷混合物(5-20％)洗脫得到36.1g產(chǎn)物，其為灰白色油(91.5％純度)。(提示應(yīng)該注意不要讓化合物在硅膠上過夜，因?yàn)樗坪踅?jīng)歷轉(zhuǎn)移作用反應(yīng)，得到GGol)1，3-二-γ-亞麻精2-癸酸酯(1，3-雙十八碳-(6Z，9Z，12Z)-三烯酸2-癸酸甘油酯或者GCG)將癸酰氯(13.5ml，12.4g，0.065mol，1.1當(dāng)量)在約10分鐘內(nèi)加入1，3-二-γ-亞麻精(36.1g，0.059mol，1當(dāng)量)、無水吡啶(5.7ml，5.6g，0.07mol，1.1當(dāng)量)、4-二甲基氨基吡啶(0.2g，0.002mol，0.03當(dāng)量)和二氯甲烷(DCM，150ml)的攪拌的溶液中。在加入過程中保持溫度在17℃-23℃。然后在30-35℃攪拌反應(yīng)物并通過HPLC監(jiān)控。1h、1.5h和2h后加入另外1-2ml癸酰氯。如通過HPLC測(cè)定的，另外的加入似乎增加向產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化。3h后，過濾反應(yīng)混合物并用DCM洗滌濾液。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×50ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。然后用MgSO4干燥DCM萃取物并真空濃縮得到粗產(chǎn)物，其為淡黃色油(HPLC純度90％)。通過在硅膠(600g)上柱層析純化該油。用己烷和二乙醚-己烷(1.5-2.5然后3.5％)洗脫得到產(chǎn)物(GCG)，其為透明油(35.5g，HPLC純度96.1％)。通過對(duì)含有僅少量雜質(zhì)的一些級(jí)分進(jìn)一步層析得到另外7.5g純的脂類。合成實(shí)施例51，3-二癸酸2-花生四烯酸甘油酯(1，3-二癸酸2-二十碳四-(5-Z，8-Z，11-Z，14-Z)烯酸甘油酯或者CAC)該甘油三酯是已知的。將紅花油施用于大鼠后已經(jīng)將CAC鑒定為淋巴脂類的成分。WO03013,497描述了含有花生四烯酸的甘油三酯(通過培養(yǎng)Mortierellaalpina產(chǎn)生)，其可用于腦機(jī)能減退導(dǎo)致的疾病，尤其用于認(rèn)知增強(qiáng)。用于CAC合成的兩種中間體是已知的。從1，3-二癸酸甘油酯合成CAC和CAC的純化都是新的。這里通過將1，3-二癸酸甘油酯與溶于二氯甲烷-吡啶中的花生四烯酰氯反應(yīng)制備CAC。通過硼氫化鈉還原1，3-二癸酰氧基丙-2-酮制備1，3-二癸酸甘油酯，1，3-二癸酰氧基丙-2-酮又是通過癸酰氯與1，3-二羥基丙酮反應(yīng)制備。必須小心處理中間體1，3-二癸酸甘油酯，因?yàn)樗┞队谒帷A和熱時(shí)可以經(jīng)歷?；D(zhuǎn)移作用。通過癸酸到縮水甘油酯(來自表氯醇)的催化加成合成1，3-二癸酸甘油酯的較老方法6由于更嚴(yán)格的反應(yīng)條件和?；D(zhuǎn)移問題而吸引力較低。通過在硅膠上小心的柱層析純化終產(chǎn)物CAC，所述層析除去副產(chǎn)物。2-花生四烯酸1，3-二癸酸甘油酯(CAC)將花生四烯酸(AA96，8.34g，0.03mol)溶于二氯甲烷(DCM，60ml)中。室溫氮?dú)庀聰嚢杷萌芤翰⒃?分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(3.9ml，5.67g，0.044mol)。室溫下攪拌混合物過夜然后真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后在15分鐘內(nèi)(冰/水冷卻)在10-15℃下將殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)逐滴加入1，3-二癸酸甘油酯(11.2g，0.028mol)、DCM(50ml)、吡啶(2.42ml，2.37g，0.03mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.10g，0.0008mol，0.03當(dāng)量)的攪拌的溶液中。通過冰-水冷卻保持溫度。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×20ml部分洗滌合并的洗滌液和濾液。然后用MgSO4干燥溶液并真空濃縮除去溶劑。通過硅膠上的柱層析純化殘留的褐色油。用己烷然后用5％醚/己烷洗脫得到10.3g(56％)無色油。通過13CNMR和GLC證實(shí)結(jié)構(gòu)。通過HPLC測(cè)定純度。大規(guī)膜1，3-二癸酰氧基丙-2-酮室溫氮?dú)庀聦⒐秕Ｂ?272ml，250g，1.3mol，2當(dāng)量)在10-15分鐘內(nèi)逐滴加入到1，3-二羥基丙酮二聚體(59.1g，0.65mol，1.0當(dāng)量)、吡啶(106ml，103.7g1.3mol)、4-二甲基氨基吡啶(2.38g，0.02mol，0.03當(dāng)量)和二氯甲烷(DCM，750ml)的攪拌的懸浮液中。通過在冷水浴中冷卻保持反應(yīng)混合物的溫度低于30℃。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去形成的吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×150ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。將溶液用MgSO4干燥并真空濃縮得到淺黃色半固體。然后將其從甲醇(500ml)結(jié)晶得到白色固體。產(chǎn)率為158g(60％)。1，3-二癸酸甘油酯將上面的酮(158g，0.40mol)溶于四氫呋喃(THF，2.25L)中。然后加入水(50ml)，冷卻溶液到5℃，并在10℃以下逐份加入硼氫化鈉(5.66g，1.5當(dāng)量)。通過HPLC(C18，用ACN以1ml/min洗脫λ210nm)監(jiān)控反應(yīng)混合物(注釋實(shí)際上僅加入約4.5g硼氫化物，因?yàn)樗蠸M已經(jīng)反應(yīng))。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1h，然后真空濃縮除去THF。殘留物在乙酸乙酯和5％氯化鈉溶液之間分配。用乙酸乙酯再次萃取水相并用MgSO4干燥合并的萃取物并真空濃縮成蠟狀固體。將其從己烷結(jié)晶兩次得到96g(60％)白色固體。(通過HPLC，98％純度)。2-花生四烯酸1，3-二癸酸甘油酯(CAC)將花生四烯酸(AA96，78.8g，0.26mol)溶于二氯甲烷(DCM，425ml)。所得溶液在室溫氮?dú)庀聰嚢璨⒃?5分鐘內(nèi)15-20℃下逐滴加入草酰氯(33.9ml，49.4g，0.39mol，1.5當(dāng)量)。將混合物在室溫下攪拌過夜并真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后在30-40分鐘內(nèi)將殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)在10-15℃逐滴(冰/水冷卻)加入1，3-二癸酸甘油酯(94.2g，0.24mol)、DCM(450ml)、吡啶(19.1ml，18.6g，0.24mol)和4-二甲基氨基吡啶(1.721.50g，0.014mol，0.06當(dāng)量)的攪拌的溶液中。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×150ml部分洗滌合并的洗滌液和濾液。將溶液用MgSO4干燥并真空除去溶劑得到褐色油(171g)。上面的三種反應(yīng)的規(guī)模是每種所實(shí)施反應(yīng)的最大規(guī)模。硼氫化物還原除了產(chǎn)生1，3-二癸酸甘油酯之外還以可變產(chǎn)率產(chǎn)生一種副產(chǎn)物。該副產(chǎn)物的存在極大地影響所分離的純1，3-二癸酸甘油酯的產(chǎn)率；只能通過粗產(chǎn)物的兩次結(jié)晶除去所述副產(chǎn)物。因?yàn)橥ㄟ^柱層析純化終產(chǎn)物CAC，所以用于最后步驟的1，3-二癸酸甘油酯必須盡可能純。從上面的反應(yīng)產(chǎn)生約412g粗CAC，其為褐色油。在一系列硅膠柱上使用己烷然后1-3％醚/己烷純化該物質(zhì)。純化需要7或8條柱子，使用3-4千克硅膠和100升溶劑。通過HPLC(C184.6×100mm，用85/15ACN/THF以1ml/min洗脫，紫外檢測(cè)λ210nm)檢測(cè)所得產(chǎn)物——一種透明的非常淡黃色油(295克)的純度為95.8％。GC表明66.3/32.1的C/A比(通過A中的5％雜質(zhì)帶入1.6％雜質(zhì))。總結(jié)已經(jīng)通過三步法(下面給出的方案)從癸酰氯(98％)和花生四烯酸(95％)制備了295g1，3-二癸酸-2-花生四烯酸甘油酯(1，3-二癸酸甘油酯-2-AA，CAC)。它是非常淡黃色的油并且在冷藏箱中氮?dú)庀卤４妗PLC純度為95.8％。合成實(shí)施例72-γ-亞麻酸1，3-二油酸甘油酯(1，3-二(十八碳)-9Z-烯酸2-十八碳三(6-Z，9-Z，12-Z)烯酸甘油酯或者OGO)該甘油三酯是已知的已經(jīng)通過常規(guī)化學(xué)合成制備了碳-14標(biāo)記的形式并且通過生物化學(xué)合成使用脂肪酶制備了正常的未標(biāo)記的形式。OGO不是琉璃苣油的主要成分但是它的異構(gòu)體OOG是主要成分(9％)。用于CGC合成的兩種中間體是已知的。最后一步是新的。認(rèn)為CGC的用途、其從1，3-二油酸甘油酯的合成和純化都是新的。通常，甘油三酯CXC在專利和產(chǎn)品成本上比OXO優(yōu)選。在這里通過將1，3-二油酸甘油酯與二氯甲烷-吡啶中的GLA-酰氯反應(yīng)制備OGO。通過1，3-二油酰基丙-2-酮的硼氫化鈉還原制備1，3-二油酸甘油酯，1，3-二油?；?2-酮通過油酰氯與1，3-二羥基丙酮反應(yīng)制備。必須小心處理中間體1，3-二油酸甘油酯，因?yàn)樗┞队谒?、堿和熱時(shí)可以經(jīng)歷?；D(zhuǎn)移作用。通過單-三苯甲基甘油或者縮水甘油酯制備1，3-二油酸甘油酯的較老方法7、8由于更多步驟和?；D(zhuǎn)移問題而吸引力較低。通過在硅膠上小心的柱層析純化終產(chǎn)物OGO，所述層析除去副產(chǎn)物。小規(guī)模1，3-二油?；?2-酮將155.1g油酸(155.1g，0.55mol，1.0當(dāng)量，Croda094RV05192)溶于二氯甲烷(DCM，500ml)。室溫(RT)氮?dú)庀聰嚢枞芤翰⒃?5-20℃約20分鐘內(nèi)逐滴加入104.4g(1.5當(dāng)量)1ml草酰氯(104.4g，71.8ml，0.82mol，1.5當(dāng)量)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜。真空除去過量草酰氯和DCM并在室溫氮?dú)庀?5-20分鐘內(nèi)將殘留的油狀酰氯逐滴加入1，3-二羥基丙酮二聚體(22.5g，0.24mol單體)、吡啶(40.4ml)、4-二甲基氨基吡啶(1.83g)和二氯甲烷(DCM，500ml)的攪拌的懸浮液中。通過在冰/水浴中冷卻保持反應(yīng)混合物的溫度低于20℃。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％氯化鈉、5％碳酸氫鈉、0.1N鹽酸和5％氯化鈉的1×150ml部分洗滌合并的濾液和洗滌液。然后用MgSO4干燥溶液并真空濃縮成橙色/褐色半固體。將它在甲醇中研磨并存放在冰箱中過夜。然后從二異丙基醚(DIPE)和甲醇結(jié)晶沉淀的固體(HPLC純度90％)得到51.3g米白色固體，其HPLC純度為95％。從DIPE/甲醇進(jìn)一步結(jié)晶得到41g(27％)98％純度的產(chǎn)物。1，3-二油酸甘油酯將上面的酮(32.8g，0.053mol)溶于四氫呋喃(THF，250ml)中。然后加入水(10ml)，冷卻溶液到5℃，并在10℃以下逐份加入硼氫化鈉。用HPLC(C18，ACN/THF90/10，2ml/min流速，λ210nm)跟蹤反應(yīng)，所有起始酮都反應(yīng)后，停止加入硼氫化物(加入830mg，0.022mol)。然后真空濃縮混合物除去THF。殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。用乙酸乙酯再次萃取水相并用MgSO4干燥合并的萃取物并真空濃縮成油(～33g)，該油冷卻時(shí)固化。-20℃下從100ml己烷結(jié)晶產(chǎn)物過夜(HPLC純度68％)。從己烷(50ml)重結(jié)晶該產(chǎn)物(92％純度，21.1g)得到18.28g(56％產(chǎn)率)產(chǎn)物，其HPLC純度為97.5％。2-γ亞麻酸1，3-二油酸甘油酯(O-G-O)將γ-亞麻酸(GLA95，41.2g，0.15mol，1.1當(dāng)量)溶于二氯甲烷(DCM，250ml).所得溶液在室溫氮?dú)庀聰嚢璨⒃?分鐘內(nèi)逐滴加入草酰氯(19.1ml，28.2g，0.22mol，l.65當(dāng)量)。將混合物在室溫下攪拌過夜并真空濃縮除去DCM和過量草酰氯。然后15分鐘內(nèi)將殘留的油狀酰氯(GLA-Cl)在10-15℃逐滴(冰/水冷卻)加入1，3-二油酸甘油酯(83.5g，0.13mol)、DCM(250ml)、吡啶(10.9ml，10.6g，0.14mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.49g，0.004mol，0.15當(dāng)量)的攪拌的溶液中。通過冰-水冷卻保持溫度。室溫氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物過夜。通過過濾除去吡啶鹽酸鹽并用DCM洗滌。然后用5％NaCl、5％NaHCO3、0.1NHCl、5％NaCl的1×80ml部分洗滌合并的洗滌液和濾液。將溶液用MgSO4干燥并真空除去溶劑。在硅膠上通過柱層析純化殘留的褐色油。用己烷然后用5％醚/己烷洗脫得到63.6g(54％)無色油。通過HPLC測(cè)定純度。總結(jié)通過三步法(下面給出的方案)從油酰氯(98％)制備了64g1，3-油酸-2-γ-亞麻酸甘油酯(1，3-二油酸-2-GLA，OGO)。它幾乎是無色油(稍帶黃色)并且將其在冷藏箱中氮?dú)庀卤４?。HPLC純度為89.4％。結(jié)構(gòu)脂類的13CNMR數(shù)據(jù)GGGδc(125.7MHz，CDCl3)172.69(1C，C-2羰基)，173.09(2C，C-1，C-3羰基)CGCδc(125.7MHz，CDCl3)172.76(1C，C-2羰基)，173.17(2C，C-1，C-3羰基)CACδc(125.7MHz，CDCl3)172.65(1C，C-2羰基)，173.28(2C，C-1，C-3羰基)C(DHLA)Cδc(125.7MHz，CDCl3)172.83(1C，C-2羰基)，173.30(2C，C-1，C-3羰基)GCGδc(125.7MHz，CDCl3)172.91(1C，C-2羰基)，173.11(2C，C-1，C-3羰基)OGOδc(125.7MHz，CDCl3)172.69(1C，C-2羰基)，173.25(2C，C-1，C-3羰基)AAAδc(125.7MHz，CDCl3)172.66(1C，C-2羰基)，173.04(2C，C-l，C-3羰基)CCCδc(125.7MHz，CDCl3)172.81(1C，C-2羰基)，173.21(2C，C-1，C-3羰基)實(shí)驗(yàn)步驟在以125.728MHz運(yùn)行的Joel500MHz光譜計(jì)上用5-mm寬頻帶探針在21℃收集具有抑制NOE的質(zhì)子-去偶的13CNMR譜。Waltz去偶是所選的去偶方式并且僅在14.89s采集時(shí)間期間進(jìn)行門控。弛豫延遲設(shè)置為30秒并且脈沖角度為90°。所用的譜窗為約35ppm(從173.5到172.6ppm)，具有170ppm偏移量。光譜內(nèi)在參照在77.0ppm的CDCl3。通常，取決于樣品的濃度和純度，為達(dá)到足夠的信噪比收集的掃描的大致次數(shù)為300-1200次。實(shí)驗(yàn)的總采集時(shí)間為2-8h，例如，1272次掃描；數(shù)據(jù)點(diǎn)65，536個(gè)。當(dāng)可能減少采集時(shí)間時(shí)，使用高達(dá)20％w/v的濃溶液。引用的化學(xué)位移隨著溶液濃度而變。生物學(xué)研究慢性復(fù)發(fā)性實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(CREAE)研究EAE的誘導(dǎo)和臨床評(píng)估在C57B1/6和SJL小鼠中誘導(dǎo)CREAE。如前所述(Morris-Downes，MM.，等人2002)在第0天和第7天對(duì)動(dòng)物皮下注射磷酸緩沖鹽水(PBS)中的100μg神經(jīng)抗原肽MOG35-55(氨基酸序列MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGKGenemedSynthesis，Inc)或者1mg小鼠脊髓勻漿物(SCH)皮下注射，其中在補(bǔ)加480μg結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriatuberculosis)和60μgMycobacteriabutyricium(DIFCO，Detroit，USA)的不完全弗氏佐劑(DIFCO，Detroit，USA)中通過室溫下超聲處理10分鐘乳化。除了優(yōu)化疾病，小鼠還在用MOG抗原免疫后和在SCH第0、1、7和8天1h和24h接受溶于PBS中的百日咳桿菌(Bordetellapertussis)毒素200ng(腹膜內(nèi))。從第5天開始對(duì)動(dòng)物稱重并由兩名有經(jīng)驗(yàn)的研究人員每天檢查臨床神經(jīng)病學(xué)病征并根據(jù)以前確認(rèn)的分級(jí)方案分級(jí)(Morris-Downes，MM.等人2002和其它文獻(xiàn))0＝正常；1＝跛行尾巴和足；2＝受損的翻正反射；3＝部分后肢麻痹；4＝完全后肢麻痹；5＝瀕死；6＝死亡。表現(xiàn)出比通常觀察到的等級(jí)的臨床病征較輕的病征的動(dòng)物得分比所指出的等級(jí)小0.5。參考文獻(xiàn)Morris-Downes，MM.，等人(2002).Pathologicalandregulatoryeffectsofanti-myelinantibodiesinexperimentalallergicencephalomyelitisinmice.J.Neuroimmunol.125.114-124。通過非參數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析為每個(gè)試驗(yàn)組與各自對(duì)照組比較平均組EAE得分(MannWhitneyU檢驗(yàn))。所有MOG-CREAE研究都包含治療對(duì)照組(C-C-C或者選自上面研究的鹽水)。在三個(gè)劑量水平測(cè)試每種結(jié)構(gòu)脂類，所有治療都在接種后第7天經(jīng)口施用2周。所有治療組都將含有10只動(dòng)物。研究完成(第21天)時(shí)，除去腦和脊髓并處理一半樣品以研究CNS血管周圍單核細(xì)胞白細(xì)胞-浸潤位點(diǎn)和脫髓鞘的病征。研究如下研究2脊髓勻漿物(SCH)SJL小鼠中EAE。EAE誘導(dǎo)第0天+第7天皮下1mgSCH。第0、1、7和8天腹膜內(nèi)200ng百日咳毒素。10只小鼠/組。從第7到21天用CCC或者CGC處理小鼠。研究3SJL小鼠中SCHEAE治療為PSD7到21，包括這兩天。研究4C57BL小鼠中MOGEAE治療為PSD7到21，包括這兩天。研究5SJL小鼠中SCHEAE治療為PSD5到18，包括這兩天。研究6C57BL小鼠中MOGEAE治療為第5到21天(包括這兩天)，只是C-DHLA-C組中治療為第5到15天(包括這兩天)。在PSD25淘汰動(dòng)物。[來自未治療組的5只動(dòng)物，來自對(duì)照CCC治療組的3只動(dòng)物，來自GGG150μl治療組的5只動(dòng)物和來自GGG350μl治療組的2只動(dòng)物在PSD20采樣用于組織學(xué)分析]。研究7SJL小鼠中SCHEAE處理為第6到20天(包括這兩天)。研究2-SJL小鼠中脊髓勻漿物(SCH)-受試的CGC(50/150/350μl)；CCC(350μl)GGG.(50/350μl)[觀察到嚴(yán)重疾病]研究3-SCH/SJL小鼠-受試的CCC(50/150/350μl)CGC(25/50/150/350μl)GGG(50/150/350μl)OGO(25/50/150/350μl)[觀察到嚴(yán)重疾病]研究4-MOG/C57BL小鼠-受試的CCC(50/150/350μl)CGC(25/50/150/350μl)GGG(50/150/350μl)OGO(25/50/150/350μl)研究6-MOG/C57BL小鼠-受試的CCC(150μl)C-DHLA-C(50μl)CAC(50/350μl)AAA(50/150μl)GCG(50μl)CGC(50μl)GGG.(150/350μl)[病理CCC；GGG]所提交的腦和脊髓樣品的組織學(xué)檢查表明實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎的典型損害。局部和彌散損害的特征是神經(jīng)膠質(zhì)瘤病、髓磷脂空泡形成、軸索變性和具有淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的血管周圍套袖。脊髓損害通常位于軟膜下白質(zhì)中，腦損害通常出現(xiàn)在腦白質(zhì)中。在脊髓中的損害比腦中更嚴(yán)重，具有腦損害的所有動(dòng)物都在脊髓中具有損害，但不是所有具有脊髓損害的動(dòng)物都具有腦中的損害。使用半定量5點(diǎn)分級(jí)系統(tǒng)概述了個(gè)體小鼠之間嚴(yán)重性的變化。未受治療的小鼠具有3-4的組織學(xué)得分，其與1.5-3的EAE得分相關(guān)。一只小鼠基本沒有表現(xiàn)出組織學(xué)改變，具有0得分。在GGG治療的小鼠中，大多數(shù)都不表現(xiàn)異常。來自該組的兩只小鼠分別具有2和3的組織學(xué)得分，其與1和1.5的EAE嚴(yán)重性得分相關(guān)。四個(gè)研究的結(jié)果在下面的圖11到20中顯示。這些結(jié)果表明化合物(G-G-G、A-A-A、C-G-C、C-DHGLA-C和C-A-C都能夠減小CREAE的嚴(yán)重性，而化合物G-C-G和C-C-C不能治療該疾病。如果調(diào)節(jié)劑量，認(rèn)為化合物O-G-O也有效。如在說明書中提示的，花生四烯酸化合物是有效的，但是導(dǎo)致某些動(dòng)物死亡。幸存的動(dòng)物具有大大減小的疾病。可以進(jìn)一步減小這些化合物的劑量以提供具有滿意治療的存活。一些研究對(duì)于化合物C-G-C和G-G-G顯示出鐘形響應(yīng)曲線，表明非常高的劑量不是最優(yōu)的，如上面所給出?？梢杂杉夹g(shù)人員，例如，通過劑量按比例上升并監(jiān)視來自PBMC的TGF-β1/TNF-α自動(dòng)釋放比例變化方便地確定此類劑量?？紤]到PCT/GB04/002089高sn-2γ-亞麻酸的結(jié)果，低sn-2black-current油和G-C-G在CREAE中缺乏功效和圖20中C-G-C和C-DHGLA-C的低劑量功效，可以看到sn-2-γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸脂類提供了新的MS治療，其遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過任何當(dāng)前的治療結(jié)果，因?yàn)閾p害得到修復(fù)并且困難癥狀得到解決在其他治療中迄今還沒有解決在數(shù)年里減少EDSS。參考文獻(xiàn)AmorS，GroomeN，LiningtonC，MorrisMM，DornmairK，GardinierMV，MatthieuJM，BakerD.IdentificationofepitopesofmyelinoligodendrocyteglycoproteinfortheinductionofexperimentalallergicencephalomyelitisinSJLandBiozziAB/Hmice，JImmunol.1994Nov15；153(10)4349-56.BeckJ，RondotP，CatinotLetal.Increasedproductionofinterferongammaandtumornecrosisfactorprecedesclinicalmanifestationinmultiplesclerosisdocytokinestriggeroffexacerbations？ActaNeurolScand1988；78318-23.BertolottoA，CapobiancoM，MalucchiSetal.Transforminggrowthfactorbetal(TGFbetal)mRNAlevelcorrelateswithmagneticresonanceimagingdiseaseactivityinmultiplesclerosispatients.NeurosciLett1999；26321-4.BertolottoA，MalucchiS，CapobiancoMetal.QuantitativePCRrevealsincreasedlevelsoftumornecrosisfactor-alphamRNAinperipheralbloodmononuclearcellsofmultiplesclerosispatientsduringrelapses.JInterferonCytokineRes1999；19575-81.BrosnanCF.，SelmajKandRaineCS.Hypothesisarolefortumornecrosisfactorinimmune-mediateddemyelinationanditsrelevancetomultiplesclerosis.JNeuroimmunol198818，87-94.BrosnanCFandRaineCS.Mechanismsofimmuneinjuryinmultiplesclerosis.BrainPathol.19966，243-257.BurnsJ，BartholomewB，LoboS.Isolationofmyelinbasicprotein-specificTcellspredominantlyfromthememoryT-cellcompartmentinmultiplesclerosis.AnnNeurol1999；4533-9.CannellaB，RaineCS.Theadhesionmoleculeandcytokineprofileofmultiplesclerosislesions.AnnNeurol1995；37424-35.ChouYK，BourdetteDN，OffnerHetal.FrequencyofTcellsspecificformyelinbasicproteinandmyelinproteolipidproteininbloodandcerebrospinalfluidinmultiplesclerosis.JNeuroimmunol1992；38105-14.DeStefanoN，NarayananS.，F(xiàn)rancisGS.，ArnaoutelisR.，TartagliaMC.，AntelJP.，matthewsPMandAmoldDL.Evidenceofaxonaldamageintheearlystagesofmultiplesclerosisanditsrelevaucetodisability.ArchNeurol.200158(1)，65-70.EwingC，BernardCC.Insightsintotheaetiologyandpathogenesisofmultiplesclerosis.ImmunolCellBiol1998；7647-54.FazakerlyJK.Molecularbiologyofmultiplesclerosis.WileyandSonsLtd.1997，255-273.FredriksonS，SoderstromM，HillertJetal.Multiplesclerosisoccurrenceofmyelinbasicproteinpeptide-reactiveTcellsinhealthyfamilymembers.ActaNeurolScand1994；89184-9.GenainCP.，CannellaB.，hauserSLandRaineCS.Identificationofautoantibodiesassociatedwithmyelindamageinmultiplesclerosis.NatureMed19995，170-175.GrossCE，BednarMM，HowardDBandSpomMB(1993)TransforminggrowthfactorbetaIreducesinfarctsizeafterexperimentalcerebralischemiainarabbitmodel.Stroke24，558-562.Harbige，LS，CrawfordMA，JonesJ，PreeceAWandFortiA.Dietaryinterventionstudiesonthephosphoglyceridefattyacidsandelectrophoreiticmobilityoferythrocytesinmultiplesclerosis.Prog.LipidRes198625，243-248.HarbigeLS.Nutritionandimmunitywithemphasisoninfectionandautoimmunedisease.(1996)NutrHealth，10(4)285-312.HarbigeLS(1998)Dietaryn-6andn-3fattyacidsinimmunityandautoimmuedisease.ProceedingsoftheNutritionSociety57，555-562.HarbigeLS，YeatmanN，AmorS&CrawfordMA(1995)PreventionofexperimentalautoimmuneencephalomyelitisinLewisratsbyanovelsourceofy-linolenicacid.BritishJournalofNutrition74，701-715.HarbigeLS.，LaywardL.，Morris-DownesMM.，DumondeDCandAmorS.Theprotectiveeffectsofomega-6fattyacidsinexperimentalautoimmuneencephalomyelitis(EAE)inrelationtotransforminggrowthfactor-beta1(TGF-betal)up-regulationandincreasedprostaglandinE2(PGE2)production.ClinExpImmunol2000122，445-452.HenrichNoackP，PrehnJH，andKriegisteinJ.(1996)TGF-betaIprotectshippocampalneuronsagainstdegenerationcausedbytransientglobalischaemia.Dose-responserelationshipandpotentialneuroprotectivemechanisms.Stroke，27，1609-1614.HirschRL，PanitchHS，JohnsonKP.Lymphocytesfrommultiplesclerosispatientsproduceelevatedlevelsofgammainterferoninvitro.JClinImmunol1985；5386-9.HollifieldRD，HarbigeLS，PhM-DinhD，ShariefM.EvidenceforcytokineDysregulationinMultipleSclerosisPeripheralBloodMononuclearcellproductionofpro-inflammmatoryandanti-inflammatorycytokinesduringrelapseandremission.Autoimmunity，200336(3)133-141.ImamuraK，SuzumuraA，HayashiFetal.Cytokineproductionbyperipheralbloodmonocytes/macrophagesinmultiplesclerosispatients.ActaNeurolScand1993；87281-5.IssazadehS，LorentzenJC，MustafaMIetal.CytokinesinrelapsingexperimentalautoimmuneencephalomyelitisinDAratspersistentmRNAexpressionofproinflammatorycytokinesandabsentexpressionofinterleukin-10andtransforminggrowthfactor-beta.JNeuroimmunol1996；69103-15.JohnsLD，SriramS.ExperimentalallergicencephalomyelitisneutralizingantibodytoTGFbetalenhancestheclinicalseverityofthedisease.JNeuroimmunol1993；471-7.KerlerodeRosboN，HoffmanM，MendelIetal.Predominanceoftheautoimmuneresponsetomyelinoligodendrocyteglycoprotein(MOG)inmultiplesclerosisreactivitytoextracellulardomainofMOGisdirectedagainstthreemainregions.EurJImmunol1997；273059-69.KerlerodeRosboN，MiloR，LeesMBetal.Reactivitytomyelinantigensinmultiplesclerosis.Peripheralbloodlymphocytesrespondpredominantlytomyelinoligodendrocyteglycoprotein.JClinInvest1993；922602-8.KhalilN.TGF-betafromlatenttoactive.MicrobesInfect1999；11255-63.KrupinskiJ，KumarP，KumarS，andKaluzaJ.(1996)IncreasedexpressionofTGF-betaIinbraintissueafterischemicstrokeinhumans.Stroke，27，852-857.KurodaY，ShimamotoY.Humantumornecrosisfactor-alphaaugmentsexperimentalallergicencephalomyelitisinrats.JNeuroimmunol1991；34159-64.LuCZ，JensenMA，ArnasonBG.Interferongamma-andinterleukin-4-secretingcellsinmultiplesclerosis.JNeuroimmunol1993；46123-8.MaimoneD，RederAT，GregoryS.Tcelllymphokine-inducedsecretionofcytokinesbymonocytesfrompatientswithmultiplesclerosis.CellImmunol1993；146；96-106.MartinoG，HartungH-P.ImmunopathogenesisofmultiplesclerosistheroleofTcells.CurrOpinNeurol1999；12309-21.McCarronRM，WangL，RackeMKetal.Cytokine-regulatedadhesionbetweenencephalitogenicTlymphocytesandcerebrovascularendothelialcells.JNeuroimmunol1993；4323-30.McDonaldWI，CompstonA，EdanG，GoodkinD，HartungHP，LublinFD，McFarlandHF，PatyDW，PolmanCH，ReingoldSC，Sandberg-WollheimM，SibleyW，ThompsonA，vandenNoortS，WeinshenkerBY，WolinskyJS.RecommendeddiagnosticcriteriaformultiplesclerosisguidelinesfromtheInternationalPanelonthediagnosisofmultiplesclerosis.AnnNeurol.2001Jul；50(1)121-7.MerrillJE，StromSR，EllisonGWetal.Invitrostudyofmediatorsofinflammationinmultiplesclerosis.JClinImmunol1989；984-96.MerrillJE，ZimmermanRP.NaturalandinducedcytotoxicityofoligodendrocytesbymicrogliaisinhibitablebyTGFbeta.Glia1991；4；327-31.MiyazonoK，HellmanU，WernstedtCetal.Latenthighmolecularweightcomplexoftransforminggrowthfactorbeta1.Purificationfromhumanplateletsandstructuralcharacterization.JBiolChem1988；2636407-15.MokhtarianF，ShiY，ShirazianDetal.Defectiveproductionofanti-inflammatorycytokine，TGF-betabyTcelllinesofpatientswithactivemultiplesclerosis.JImmunol1994；1526003-10.NavikasV，LinkH.Reviewcytokinesandthepathogenesisofmultiplesclerosis.JNeurosciRes1996；45322-33.NoseworthyJH.Progressindeterminingthecausesandtreatmentofmultiplesclerosis.Nature1999399(6738Suppl)，A40-47.OtaK，MatsuiM，MilfordELetal.T-cellrecognitionofanimmunodominantmyelinbasicproteinepitopeinmultiplesclerosis.Nature1990；346183-7.PerkinGD，WolinskyJS.Fastfacts-MultipleSclerosis，1stEdn.Oxford，UKHealthPress，2000.PhilippeJ，DebruyneJ，Leroux-RoelsGetal.InvitroTNF-alpha，IL-2andIFN-gammaproductionasmarkersofrelapsesinmultiplesclerosis.ClinNeurolNeurosurg1996；98286-90.PhylactosAC，GhebremeskelK，CosteloeK，LeafAA，HarbigeLS，CrawfordMA.(1994)Polyunsaturatedfattyacidsandantioxidautsinearlydevelopment.Possiblepreventionofoxygen-induceddisordera.EurJClinNutr.48Suppl2S17-23.PrehnJH，PerucheB，UnsickerKandKriegisteinJ.(1993)Isoform-specificeffectsoftransforminggrowthfactor-betaondegenerationofprimaryneuronalculturesinducedbycytotoxichypoxiaorglutamate.J.Neurochem.60，1665-1672.RackMK，SriramS，CalrimiJ，CannellaB，RaineCS&McFarimDE(1993)Long-termtreatmentofchronicrelapsingexperimentalallergicencephalomyelitisbytransforminggrowthfactor-p2.JournalofNeuroimmunology，46，175-183.RackeMK，CannellaB，AlbertPetal.Evidenceofendogenousregulatoryfunctionoftransforminggrowthfactor-beta1inexperimentalallergicencephalomyelitis.IntImmunol1992；4615-20.RieckmannP，AlbrechtM，KitzeBetal.CytokinemRNAlevelsinmononuclearbloodcellsfrompatientswithmultiplesclerosis.Neurology1994；441523-6.RieckmannP，AlbrechtM，KitzeBetal.Tumornecrosisfactor-alphamessengerRNAexpressioninpatientswithrelapsing-remittingmultiplesclerosisisassociatedwithdiseaseactivity.AnnNeurol1995；3782-8.RuddleNH，BergmanCM，McGrathKMetal.Anantibodytolymphotoxinandtumornecrosisfactorpreventstransferofexperimentalallergicencephalomyelitis.JExpMed1990；1721193-200.SantambrogioL，HochwaldGM，SaxenaB，LeuCH，MartzJE，CarlinoJA，RuddleNH，PalladinoMA，GoldLI&ThorbeckeGJ(1993)StudiesonthemechanismsbywhichTransformingGrowthFactor-pprotectsagainstallergicencephalomyelitis.JournalofImmunology151，1116-1127.SchieferHB，HancockDS，LoewFM.Long-termeffectsofpartiallyhydrogenatedherringoilontheratmyocardium.DrugNutrInteract.1982；1(2)89-102.SchluesenerHJ，LiderO.Transforminggrowthfactorsbeta1andbeta2cytokineswithidenticalimmunosuppressiveeffectsandapotentialroleintheregulationofautoimmuneTcellfunction.JNeuroimmunol1989；24249-58.SelmajK，RaineCS，CannellaBetal.Identificationoflymphotoxinandtumornecrosisfactorinmultiplesclerosislesions.JClinInvest1991；87949-54.SelmajK，RaineCS，F(xiàn)arooqMetal.Cytokinecytotoxicityagainstoligodendrocytes.Apoptosisinducedbylymphotoxin.JImmunol1991；1471522-9.ShariefMK，ThompsonEJ.Invivorelationshipoftumornecrosisfactor-alphatoblood-brainbarrierdamageinpatientswithactivemultiplesclerosis.JNeuroimmunol1992；3827-33.Tejada-SimonMV，HongJ，RiveraVMetal.ReactivitypatternandcytokineprofileofTcellsprimedbymyelinpeptidesinmultiplesclerosisandhealthyindividuals.EurJImmunol2001；31907-17.VartanianT，LiY，ZhaoMetal.Interferon-gamma-inducedoligodendrocytecelldeathimplicationsforthepathogenesisofmultiplesclerosis.MolMed1995；1732-43.VivienD，BemaudinM，BuissonA，DivouxD，MacKenzieETandNouvelotA.(1998)EvidenceoftypeIandtypeIItransforminggrowthfactor-betareceptorsincentralnervoustissueschangesinducedbyfocalcerebralischemiaJ.Neurochem.70，2296-2304.ZhangJ，Markovic-PleseS，LacetBetal.Increasedfrequencyofinterleukin2-responsiveTcellsspecificformyelinbasicproteinandproteolipidproteininperipheralbloodandcerebrospinalfluidofpatientswithmultiplesclerosis.JExpMed1994；179973-84.JapanesePatent6172263(1994)Y.Kosugietal，AgencyofIndustrialScience&TechnologyHigh-purityarachidonicacidtriglycerideanditsproduction.USPatent4,888,324(1989)N.Catsimpoolasetal，Angio-MedicalCorporationMethodforenhancingangiogenesiswithlipidcontainingmolecules.Y.KosugiandN.Azuma，JAmer.OilChem.Soc.，71，1397-1403(1994).SynthesisofTriacylglycerolfrompolyunsaturatedfattyacidbyimmobilizedipase.J.W.Hagemanetal.J.Amer，OilChem.Soc.，49，118-xxx(1972)Preparationofglycerinandtheiruses.E.S.LuttonandA.J.Fehl，Lipids，5，90-99(1970).Thepolymorphismofoddandevensaturatedsingleacidtriglycerides，C8-C22.D.Horrobin，A.McMordie，M.S.Manku(ScotiaHoldingsPLCUK)Eur.Pat.ApplEP6090783Aug1994.Phospholipidscontainingtwodifferentunsaturatedfattyacidsforuseintherapy，nutrition，andcosmetics.Y.-S.Huang，X.Lin，P.R.ReddenandD.F.Horrobin，J.Am.OilChem.Soc.，72，625-631，(1995).InvitroHydrolysisofNaturalandSyntheticγ-LinolenicAcid-ContainingTriacylglycerolsbyPancreaticLipaseK.Osada，K.Takahashi，M.HatanoandM.Hosokawa，NipponSuisanGakkaishi.，57，119-125(1991).Chem.Abstr.，115278299MolecularSpeciesofEnzymically-synthesizedPolyunsaturatedFattyacid-richTriglycerides.J.-W.Liu，S.DeMichele，M.Bergana，E..Bobik，Jr.，C.Hastilow，Lu-TeChuang，P.MukerjiandJ.-S.Huang.，J.Am.OilChem.Soc..，78，489-493(2001)CharacterizationofOilExhibitingHighγ-LinolenicAcidfromaGeneticallytransformedCanolaStrain.D.R.Kodali，D.Atkinson，T.G.RedgraveandD.Small，J.LipidRes.，28，403-413(1987).Structureandpolymorphismof18-CarbonFattyAcidTriacylglycerolsEffectofUnsaturationandSubstitutioninthe2-PositionP.H.BentleyandW.McCrae，J.Org.Chem.35，2082-2083(1970)AnEfficientSynthesisofSymmetrical1，3-Diglycerides.M.Berger，K.LaumenandM.P.Schneider，J.Am.Oil.Chem.Soc.，69，955-959，(1992).EnzymaticEsterificationofGlycerol1.Lipase-CatalyzedSynthesisofRegioisomericallyPure1，3-sn-Diacylglycerols.A.P.J.Mank，J.P.WardandD.A.vanDorp，Chem.PhysicsLipids，16，107-114(1976).Aversatile，flexiblesynthesisof1，3-diglyceridesandtriglycerides.L.Hartman，Chem.Rev.，58，845-867(1958)andreferencestherein.AdvancesintheSynthesisofGlyceridesofFattyAcids表1多種油的組成(％總FAs)特征和它們?cè)贓AE中的保護(hù)效果FGO，真菌油；BOO，琉璃苣油；EPO，月見草油；SAF，紅花油。表2治療組-PCT/GB04/002089琉璃苣油-MS試驗(yàn)表3在SJL小鼠中MOG誘導(dǎo)的CREAE中三?；视王?GLA(TG-GLA)、乙基酯-GLA(EE-GLA)和PCT/GB04/002089BoragoOfficinalis油-GLA(BOR-GLA)的分子種類比較a對(duì)動(dòng)物給以100μl受試脂類；b給予250μlBOR-GLA。與對(duì)照比較差異顯著，cp＜0.05表4富集的black-currant種子油(73％GLA)對(duì)EAE發(fā)病率的影響注釋Blackcurrant油延遲發(fā)病但是不提供完全保護(hù)。敏化(免疫)后7天喂飼動(dòng)物。權(quán)利要求1.治療需要神經(jīng)變性疾病治療的患者的方法，其包括對(duì)該患者施用治療有效劑量的結(jié)構(gòu)明確的脂類甘油酯，該甘油酯包含用一種或多種脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸的脂肪酸部分。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述神經(jīng)變性疾病涉及脫髓鞘作用。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療特異阻止?jié)撛诘纳窠?jīng)變性和恢復(fù)神經(jīng)元功能。4.權(quán)利要求1的方法，其關(guān)于γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸脂類的含量正常化神經(jīng)元膜組成。5.權(quán)利要求1的方法，其如從外周血單核細(xì)胞釋放的自發(fā)釋放所測(cè)量的，恢復(fù)健康TGF-β1/TNFα比。6.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是多發(fā)性硬化。7.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化、原發(fā)進(jìn)行性多發(fā)性硬化和慢性進(jìn)行性多發(fā)性硬化。8.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是多發(fā)性硬化并且如通過一次或多次MRI掃描、CAT掃描或者通過EDSS得分所測(cè)量的，所述治療部分或完全恢復(fù)神經(jīng)元功能或者神經(jīng)元完整性。9.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療是中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷和顱內(nèi)出血后的大腦損傷、阿爾茨海默氏病或者帕金森病的治療，其中所述疾病中存在脫髓鞘或神經(jīng)元損傷。10.權(quán)利要求1的方法，其中以足夠保持或者升高患者中TGF-β1水平到治療水平的持續(xù)時(shí)間和劑量施用所述脂類。11.權(quán)利要求1的方法，其中以一定的持續(xù)時(shí)間和劑量施用所述脂類，所述持續(xù)時(shí)間和劑量足夠保持或者升高患者中TGF-β1水平，使得每天施用18個(gè)月后從患者血液分離的外周血單核細(xì)胞自發(fā)釋放的TGF-β1/TNF-α比為0.4到3.0，至少0.5，更優(yōu)選至少0.75，最優(yōu)選至少1。12.權(quán)利要求11的方法，其中劑量為每天施用18個(gè)月后在從患者血液分離的PBMC中產(chǎn)生至少為0.75的TGF-β1/IL-1β比。13.權(quán)利要求1的方法，其中所施用的脂類的量為每天0.5到30g，通常3到5g。14.權(quán)利要求1的方法，其中所述脂類是甘油一酯、甘油二酯或甘油三酯，其含有至少一種sn-2γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸或花生四烯酸部分，所述脂類具有通式I式I其中R1和R3獨(dú)立地選自氫和酰基，R2選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸殘基，R2的羰基碳原子連接到甘油部分的氧上。15.權(quán)利要求1的方法，其中R1和R3是式-CO-(CH2)n-CH3的飽和的脂肪酸部分，其中n為選自1到22的整數(shù)。16.權(quán)利要求15的方法，其中R1和R3相同并且n是5到12的整數(shù)。17.權(quán)利要求16的方法，其中n是6到10的整數(shù)。18.權(quán)利要求14的方法，其中R1和R3是選自必需脂肪酸或者人體可代謝的生理上可接受的脂肪酸。19.權(quán)利要求14的方法，其中R1、R2和R3都相同并且選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸殘基。20.藥物組合物，其特征是它包含結(jié)構(gòu)明確的脂類甘油酯，該甘油酯包含用一種或多種脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸的脂肪酸部分。20.用于治療神經(jīng)變性的藥物組合物，其特征是它包含結(jié)構(gòu)明確的脂類甘油酯，該甘油酯包含用一種或多種脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸的脂肪酸部分。21.用于治療脫髓鞘疾病的藥物組合物，包含用一種或多種脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸的脂肪酸部分。22.式II的脂類其中R1和R3相同并且為-C(O)(CH2)nCH3，其中n選自4到14，更優(yōu)選地選自6到10，最優(yōu)選選自7、8或9，R2選自γ-亞麻?；?、二高-γ-亞麻?；突ㄉ南；鶜埢?。23.具有明確結(jié)構(gòu)的脂類甘油酯用于生產(chǎn)治療神經(jīng)變性疾病的藥物的用途，其中所述甘油酯包含用一種或多種脂肪酸部分進(jìn)行酯化的甘油部分，特征是所述脂類在sn-2位具有選自γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸的脂肪酸部分。24.權(quán)利要求23的用途，其中所述神經(jīng)變性疾病是脫髓鞘疾病。25.權(quán)利要求23的用途，其中所述疾病是多發(fā)性硬化。26.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物關(guān)于脂類γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸和花生四烯酸水平正?；窠?jīng)元膜組成。27.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物使從患者的外周血單核細(xì)胞自發(fā)釋放的TGF-β1/TNFα比恢復(fù)到健康水平。28.權(quán)利要求23的用途，其中所述治療用于多發(fā)性硬化或者與頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)和顱內(nèi)出血相關(guān)的神經(jīng)變性后遺癥或者阿爾茨海默氏病或者帕金森病導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷。29.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物修復(fù)CNS損害。30.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物減輕肌痙攣和/或疼痛。31.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物消除復(fù)發(fā)。32.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物在1年的治療期內(nèi)提高EDSS得分至少1個(gè)單位。33.權(quán)利要求23的用途，其中所述藥物足夠在1年的治療期內(nèi)將EDSS高于2.5的患者的EDSS恢復(fù)到低于2。34.權(quán)利要求23的用途，其中存在膀胱控制改善。35.合成通式III其中R1和R3相同并且為-C(O)(CH2)nCH3，其中n選自4到14，更優(yōu)選地選自6到10，最優(yōu)選選自7、8或9，R2是γ-亞麻?；鶜埢?、二高-γ-亞麻酰基殘基或花生四烯?；鶜埢幕衔锏姆椒?，所述方法包括將1，3-二羥基丙酮與式X-C(O)(CH2)nCH3，其中X選自Cl、Br和I的化合物反應(yīng)，得到相應(yīng)的1，3-二-(C(O)(CH2)nCH3)2-酮化合物，還原酮基得到相應(yīng)的1，3-二-(C(O)(CH2)nCH3)2-醇，并將其與γ-亞麻酰鹵或者二高-γ-亞麻酰鹵或花生四烯酰鹵反應(yīng)，其中鹵素為氯、溴或碘。36.合成通式IV其中R1至R3相同并且選自γ-亞麻酰基殘基、二高-γ-亞麻?；鶜埢蚧ㄉ南；鶜埢幕衔锏姆椒ǎ龇椒ò▽⑾鄳?yīng)的γ-亞麻酰鹵、二高-γ-亞麻酰鹵或花生四烯酰鹵與甘油反應(yīng)，其中鹵素為氯、溴或碘。37.脂類，其選自1，3-二癸酸-2-十八碳三(6-Z，9-Z，12-Z)烯酸甘油酯、1，3-二癸酸-2-二十碳-(8Z，11Z，14Z)-三烯酸甘油酯、三(二十碳)四5-Z，8-Z，11-Z，14Z-烯酸甘油酯。38.權(quán)利要求37的脂類，其用于治療。全文摘要提供了治療需要神經(jīng)變性疾病治療的患者的方法，其包括對(duì)該患者施用治療有效劑量的脂類甘油酯，該甘油酯包含甘油部分和脂肪酸部分，脂肪酸部分選自γ－亞麻酸、二高－γ－亞麻酸和花生四烯酸，特征是所選的脂肪酸部分連接到甘油部分的sn－2位。優(yōu)選地，所述方法是其中以使得患者中TGF－β1水平保持在或者升高到治療水平的持續(xù)時(shí)間和劑量施用所述脂類。文檔編號(hào)C07C69/587GK1867328SQ200480030644公開日2006年11月22日申請(qǐng)日期2004年8月13日優(yōu)先權(quán)日2003年8月18日發(fā)明者L·S·哈比格,M·J·利奇,M·夏里夫,P·巴拉克羅夫申請(qǐng)人:英國技術(shù)集團(tuán)國際有限公司