專利名稱：具有crth2拮抗活性的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種作為藥物的化合物，制備上述化合物的方法，包含上述化合物的組合物及它們?cè)谥委熀皖A(yù)防變應(yīng)性疾病，例如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎，和由作用于細(xì)胞上CRTH2受體的前列腺素D2(PGD2)介導(dǎo)的其他炎性疾病中的用途，其中所述細(xì)胞包括嗜酸性細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和Th2淋巴細(xì)胞。
PGD2是一種類花生酸，類花生酸是細(xì)胞響應(yīng)局部組織損壞、正常刺激或非正常刺激或經(jīng)細(xì)胞的激活途徑合成的一類化學(xué)介質(zhì)。類花生酸結(jié)合到身體各種組織的特異細(xì)胞表面受體上并在這些組織中介導(dǎo)各種效應(yīng)。已知PGD2是由肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和Th2淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，并且在用抗原攻擊的哮喘患者氣道內(nèi)探測(cè)到高濃度的PGD2(Murray等(1986)，N.Engl.J.Med.315800-804)。把PGD2滴注到氣道中可以引發(fā)許多哮喘反應(yīng)的特征，包括支氣管收縮(Hardy等，(1984)N.Engl.J.Med.311209-213；Sampson等，(1997)Thorax 52513-518)和嗜酸性細(xì)胞蓄積(Emery等，(1989)J.Appl.Physiol.67959-962)。
外源給予PGD2誘導(dǎo)炎癥應(yīng)答的可能性，已經(jīng)通過(guò)使用過(guò)量表達(dá)人類PGD2合酶的轉(zhuǎn)基因小鼠而得到證實(shí)，該小鼠響應(yīng)抗原顯示出嗜酸細(xì)胞性肺部炎癥加重和產(chǎn)生Th2細(xì)胞因子(Fujitani等，(2002)J.Immunol.168443-449)。
人們發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)PGD2特異性受體是DP受體，其與cAMP的細(xì)胞內(nèi)水平提高有關(guān)。但是人們認(rèn)為，PGD2通過(guò)與G蛋白偶聯(lián)的受體相互作用而介導(dǎo)很多的促炎活性，其中G蛋白偶聯(lián)的受體被稱為CRTH2(在Th2細(xì)胞上表達(dá)的化學(xué)引誘物受體-同源分子)，其由Th2淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞來(lái)表達(dá)(Hirai等，(2001)J.Exp.Med.193255-261，和EP0851030、EP-A-1211513和Bauer等，EP-A-1170594)。PGD2對(duì)Th2淋巴細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞活化的效應(yīng)由CRTH2介導(dǎo)似乎是清楚的，因?yàn)檫x擇性CRTH2激動(dòng)劑13，14-二氫-15-酮-PGD2(DK-PGD2)和15R-甲基-PGD2能夠誘導(dǎo)這樣的應(yīng)答，并且可以用抗-CRTH2抗體阻斷PGD2的上述效應(yīng)(Hirai等，2001；Monneret et al，(2003)J.Pharmacol.Exp.Ther.304349-355)。相反地，選擇性DP激動(dòng)劑BW25C不會(huì)促進(jìn)Th2淋巴細(xì)胞或嗜酸性細(xì)胞的遷移(Hirai等，2001；Gervais等，(2001)J.Allergy Clin.Immunol.108982-988)。在這些證據(jù)的基礎(chǔ)上，針對(duì)CRTH2受體拮抗PGD2對(duì)于處理Th2-依賴型變應(yīng)性疾病例如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和特應(yīng)性皮炎的炎性成分是一條很有吸引力的途徑。
EP-A-1170594提示，它所涉及的方法能夠用于鑒別用于治療變應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、自身免疫性疾病、再灌注損傷及許多炎性疾病的化合物，這些疾病都是由PGD2對(duì)CRTH2受體的作用所介導(dǎo)的。
WO-A-03066046和WO-A-03066047教導(dǎo)了可結(jié)合到CRTH2上的化合物。這些化合物不是全新的，但卻是與類似的化合物一起第一次公開(kāi)在GB 1356834，GB 1407658和GB 1460348中，據(jù)稱這類化合物具有抗炎、止痛和解熱的活性。WO-A-03066046和WO-A-03066047教導(dǎo)了，它們所涉及的化合物是CRTH2受體活性的調(diào)節(jié)劑，并因此可用于治療或預(yù)防呼吸道阻塞疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和其他許多疾病，包括各種骨和關(guān)節(jié)、皮膚和眼睛、胃腸道、中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)及其他組織的疾病，和同種異體移植物排斥。這些文獻(xiàn)中所述的化合物是吲哚類，其中羧酸基團(tuán)在吲哚環(huán)系統(tǒng)的3-位，而喹啉、喹唑啉或苯并噻唑基團(tuán)在1-位。
本發(fā)明涉及可與CRTH2結(jié)合并因此可以用于治療由PGD2對(duì)CRTH2受體的活性介導(dǎo)的疾病和情況的新型化合物。
在本發(fā)明中，提供通式(I)的化合物
其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地是氫、鹵素、C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、-CON(R9)2，、-SOR9、-SO2R9、-SO2N(R9)2、-N(R9)2、-NR9COR9、-CO2R9、-COR9、-SR9、-OH、-NO2或-CN；每個(gè)R9各自獨(dú)立地是氫或C1-C6烷基；R5和R6各自獨(dú)立地是氫、或C1-C6烷基或與它們連接的碳原子一起形成C3-C7環(huán)烷基；R7是氫或C1-C6烷基；n是1或2；X是一個(gè)鍵，或者當(dāng)n是2時(shí)，X也可以是NR9基團(tuán)；其中R9如上述定義；當(dāng)X是一個(gè)鍵時(shí)，R8是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、聯(lián)苯基或9-14元二環(huán)或三環(huán)雜芳基；當(dāng)X是NR9時(shí)，基團(tuán)R8也可以是苯基、萘基或5-7元雜芳環(huán)；和R8基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、芳基、-O-芳基、雜芳基、-O-雜芳基、-CON(R9)2、-SOR9、-SO2R9、SO2(R9)2、-N(R9)2、-NR9COR9、-CO2R9、-COR9、-SR9、-OH、-NO2或-CN的取代基所取代；其中R9如上述定義；或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑合物、絡(luò)合物或前藥。
通式(I)的化合物是針對(duì)CRTH2受體的PGD2的拮抗劑，因此可以用于治療由結(jié)合到CRTH2上的PGD2所介導(dǎo)的疾病。這些疾病包括變應(yīng)性疾病、哮喘疾病和炎性疾病，其實(shí)例是變應(yīng)性哮喘、常年性變應(yīng)性鼻炎、季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性超敏反應(yīng)(包括接觸性皮炎)、結(jié)膜炎，尤其是變應(yīng)性結(jié)膜炎、嗜酸細(xì)胞性支氣管炎、食物過(guò)敏、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病、肥大細(xì)胞增生病和其他PGD2介導(dǎo)的疾病，例如自身免疫性疾病，如高IgE綜合癥和全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、痤瘡、多發(fā)性硬化病、同種異體移植物排斥、再灌注損傷、慢性阻塞性肺病、及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。
在WO-A-9950268中披露了類似而不相同的化合物。該類化合物與本發(fā)明的化合物的區(qū)別在于，它們不含有連接到吲哚環(huán)3-位的砜/磺酰胺部分。另外，也沒(méi)有教導(dǎo)將該類化合物用于治療由PGD2介導(dǎo)的疾病例如哮喘和變應(yīng)性疾病。而是稱該類化合物是用于治療糖尿病的并發(fā)癥。
PL 65781和JP43-24418也涉及吲哚衍生物。然而，這兩篇文獻(xiàn)披露的化合物與本申請(qǐng)的化合物的區(qū)別在于，它們是吲哚N-磺酰胺而不是如本發(fā)明化合物的3-砜或3-磺酰胺。在PL 65781和JP43-24418中披露的化合物與吲哚美辛的結(jié)構(gòu)相似，并且與吲哚美辛類似，也具有抗炎和解熱的活性。因此，雖然在這些文獻(xiàn)公開(kāi)的時(shí)候可能還沒(méi)有認(rèn)識(shí)到，但它們所述的化合物是COX抑制劑，其活性與本發(fā)明的化合物是完全不同的。當(dāng)然，雖然有時(shí)它們也可以用于治療關(guān)節(jié)炎疾病，但COX抑制劑是不適于治療許多疾病和情況的，例如哮喘和炎性腸病，而本發(fā)明的化合物卻可以用于治療這些疾病。
WO-A-03/097042和WO-A-03/097598披露了可結(jié)合到CRTH2受體上的化合物。這些化合物是吲哚乙酸類，但是在WO-A-03/097042中，吲哚系統(tǒng)的2-3位稠合到5-7元碳環(huán)上。而在WO-A-03/097598中，吲哚的3-位有一個(gè)吡咯烷基。
WO-A-03/101981和WO-A-03/101961都涉及CRTH2拮抗劑。WO-A-03/101961中所述的化合物與當(dāng)X是一個(gè)鍵時(shí)的本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)相似。但它們與通式(I)化合物不同，因?yàn)榕c吲哚3-位連接的基團(tuán)，在該化合物中是-S-基，而在通式(I)的化合物中則是SO或SO2基團(tuán)。另外，該類化合物中相當(dāng)于通式(I)化合物中R8的基團(tuán)是芳基或雜芳基。它們?cè)谌缤ㄊ?I)化合物的該位置上沒(méi)有脂肪族取代基。令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，雖然這些化合物具有較高的內(nèi)在活性，但與本發(fā)明的化合物相比，它們并不適于作為藥物應(yīng)用。這是因?yàn)閃O-A-03/101961中的某些化合物是細(xì)胞色素P450s的抑制劑，并且和與這些化合物同時(shí)給藥的任何藥劑的代謝有關(guān)。相反地，本發(fā)明人已經(jīng)證明，令人驚奇地，本發(fā)明的化合物不會(huì)抑制細(xì)胞色素P450s。另外，我們所做的初步結(jié)合試驗(yàn)表明，WO-A-03/101961中所述的硫化化合物似乎以較低的脫離率(off rate)結(jié)合到人的嗜酸性粒細(xì)胞上，這會(huì)導(dǎo)致作用持續(xù)的時(shí)間不可預(yù)測(cè)。
WO-A-03/10981涉及與本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)相似的化合物，其與通式(I)的化合物區(qū)別在于吲哚環(huán)系統(tǒng)3-位上的取代基是苯基、萘基或雜芳基，而沒(méi)有如通式(I)化合物的SO、SO2或SO2NR9連接基團(tuán)。顯而易見(jiàn)地，包含連接基團(tuán)可能會(huì)對(duì)化合物的活性有實(shí)質(zhì)性的影響。此外，在吲哚3-位上的取代基不能是如本發(fā)明的脂肪族基團(tuán)。
WO-A-2004/007451涉及CRTH2抑制劑，其結(jié)構(gòu)與X是一個(gè)鍵的本發(fā)明的化合物相似，不同點(diǎn)在于該類化合物中相當(dāng)于通式(I)化合物中R8的基團(tuán)是苯基、萘基或5-7元雜芳基。事實(shí)上，在該位置，其所有的示例化合物都具有一個(gè)取代的苯基。這就與本發(fā)明的化合物有明顯的不同，因?yàn)楸景l(fā)明化合物的R8是二環(huán)或三環(huán)雜芳環(huán)或烷基、烯基、或炔基。特別令人驚奇地，已經(jīng)證明，由于和現(xiàn)有化合物在結(jié)構(gòu)上有顯著的不同，含有烷基、烯基、及炔基的化合物具有較大的活性。
在本發(fā)明中，“C1-C6烷基”是指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴鏈，并任選由一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基或一個(gè)或多個(gè)C3-C7環(huán)烷基所取代。其例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、正己基、三氟甲基、2-氯乙基、甲叉環(huán)丙基、甲叉環(huán)丁基、甲叉環(huán)丁基及甲叉環(huán)戊基。
“C1-C4烷基”和“C1-C18烷基”，除了它們分別包含1-4和1-18個(gè)碳原子以外，具有相似的含義。
C3-C7環(huán)烷基是指飽和的3-7元碳環(huán)。這些基團(tuán)的例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基及環(huán)己基。
術(shù)語(yǔ)“C2-C6烯基”和“C2-C6炔基”是指具有2到6個(gè)碳原子并分別包含至少一個(gè)碳-碳雙鍵或至少一個(gè)碳-碳三鍵的直鏈或支鏈的烴鏈。如烷基一樣，它們可以任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基或一個(gè)或多個(gè)C3-C7環(huán)烷基所取代。
在本發(fā)明中，“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
在本申請(qǐng)上下文中的術(shù)語(yǔ)“芳香族部分”和“芳基”是指具有5-14個(gè)環(huán)碳原子并最多包含三個(gè)環(huán)的芳環(huán)系統(tǒng)。芳香族部分的例子是苯和萘。芳基可以被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、5-7元雜環(huán)或SO2R9的取代基所取代，其中R9如上述定義。
術(shù)語(yǔ)“雜芳環(huán)部分”和“雜芳基”是指芳環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個(gè)環(huán)碳原子被氮、氧或硫原子所取代。其例子包括單環(huán)系統(tǒng)，例如吡啶、嘧啶、吡唑、噻吩、噁唑及異噁唑。其他例子包括稠環(huán)系統(tǒng)，例如喹啉、異喹啉、喹唑啉、苯并噻唑、苯并噁唑、苯并咪唑及吲哚基團(tuán)。
除非另有說(shuō)明，雜芳環(huán)部分具有5-14個(gè)環(huán)碳原子，但是，例如“5-7元雜芳環(huán)”則包含5-7個(gè)環(huán)原子。二環(huán)和三環(huán)雜芳基分別包含兩個(gè)或三個(gè)稠合環(huán)。二環(huán)雜芳基可以是，例如6，6環(huán)或6-5環(huán)系統(tǒng)，例如上面所列舉的那些。
如芳基一樣，雜芳基也可以被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代，選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、5-7元雜環(huán)或SO2R9，其中R9如上述定義。
術(shù)語(yǔ)“5-7元雜環(huán)”是指具有5-7個(gè)環(huán)原子的非芳族環(huán)系統(tǒng)，并且其中至少一個(gè)環(huán)碳原子被氮、氧或硫原子所取代。其例子包括哌啶、嗎啉、咪唑啉、哌嗪及四氫呋喃。
通式(I)和(II)化合物適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)和獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽包括堿加成鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽、鋅鹽、鎂鹽及其他金屬鹽，和膽堿鹽、二乙醇胺鹽、乙醇胺鹽、乙二胺鹽及其他眾所周知的堿加成鹽。
適當(dāng)?shù)?，藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽也可以包括有機(jī)酸鹽，尤其是羧酸鹽，包括但不限于乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環(huán)戊酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、煙酸鹽、巴莫酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、3-苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖醛酸鹽、pivolate、樟腦酸鹽、十一酸鹽及琥珀酸鹽，有機(jī)磺酸鹽，例如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)氯苯磺酸鹽及對(duì)甲苯磺酸鹽；和無(wú)機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、硫氰酸鹽、過(guò)硫酸鹽、磷酸鹽及磺酸鹽。
藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)不可接受的鹽作為中間體，仍然可能是具有價(jià)值的。
前藥是在體內(nèi)釋放根據(jù)通式(I)的活性母體藥物的任何共價(jià)鍵合的化合物。前藥的例子包括通式(I)化合物的烷基酯，例如下列通式(II)的酯。
如果本發(fā)明的化合物具有一個(gè)手性中心或其他形式的異構(gòu)中心，那么這些異構(gòu)體的所有形式，包括對(duì)映體和非對(duì)映異構(gòu)體，也在本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。包含一個(gè)手性中心的本發(fā)明的化合物可以作為外消旋混合物、對(duì)映體富含混合物使用，或外消旋混合物可以用眾所周知的技術(shù)分離，并且也可以單獨(dú)使用各對(duì)映體。
在通式(I)的化合物中，優(yōu)選下列基團(tuán)各自獨(dú)立地是或可以任意組合
R1是鹵素或氫；R2是鹵素或氫；R3是鹵素或氫；R4是鹵素或氫。
在更優(yōu)選的化合物中，R1、R3和R4是氫，R2是鹵素，特別是氟。
在更優(yōu)選的通式(I)化合物中，R5和R6各自獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基。但是，在具有更大活性的化合物中，R5和R6中的至少一個(gè)，優(yōu)選兩個(gè)都是氫。
通式(I)的化合物優(yōu)選具有選自H或C1-C6烷基的R7；最適當(dāng)?shù)氖?，R7是甲基。
在特別優(yōu)選的通式(I)化合物中，n是2。
當(dāng)X是一個(gè)鍵時(shí)，優(yōu)選R8是C1-C6烷基、聯(lián)苯基或二環(huán)雜芳基，上述任意基團(tuán)都可以被鹵素、苯基、-CO2R9CON(R9)2或-SO2R9取代，其中R9如上述定義。
X為一個(gè)鍵時(shí)的更優(yōu)選化合物包括，R8是C1-C4烷基、聯(lián)苯基或二環(huán)雜芳基的化合物，上述任意基團(tuán)都可以被苯基、-CO2R9CON(R9)2或-SO2R9取代，其中R9是氫或C1-C4烷基。
當(dāng)X是NR9時(shí)，優(yōu)選R9是氫或甲基并且R8是任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)取代的苯基；C1-C6烷基，任選被芳基取代；或雜芳基。
更優(yōu)選地，當(dāng)X是NR9時(shí)，R8是苯基、芐基或吡啶基，任選可以被一個(gè)或多個(gè)鹵素、甲基或甲氧基取代。
下面是最優(yōu)選的化合物1.[3-(丁基-1-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸2.[3-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸3.(3-羧甲磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸4.(3-氨甲?；谆酋；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸
5.[5-氟-3-(2-甲磺?；?乙磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸6.[3-(苯并噻唑-2-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸7.[3-(苯并噻唑-2-亞磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸8.[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-2-磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸9.[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-8-基磺酰基)-吲哚-1-基]-乙酸10.(5-氟-2-甲基-3-苯甲磺?；?1H-吲哚-1-基)-乙酸11.[3-(4-氯-苯氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸12.[3-(3-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸13.[3-(4-氟-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸14.[3-(2-氯-苯氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸15.(3-芐氨磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸16.[5-氟-3-(2-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸17.[5-氟-3-(4-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸18.(5-氟-2-甲基-3-苯氨磺?；?吲哚-1-基)-乙酸19.[3-(3，4-二氯-芐氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸20.[5-氟-3-(3-甲氧基-苯氨磺酰基)-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸21.(5-氟-2-甲基-3-間甲苯氨磺?；?吲哚-1-基)-乙酸22.(5-氟-2-甲基-3-對(duì)甲苯氨磺?；?吲哚-1-基)-乙酸23.[3-(4-氯-芐氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸24.[3-(芐基-甲基-氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸25.[5-氟-2-甲基-3-(吡啶-3-基氨磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸；或上述任一化合物的C1-C6烷基、芳基、(CH2)mOC(＝O)C1-C6烷基、(CH2)mN(R11)2、CH((CH2)mO(C＝O)R12)2酯；其中m是1或2；R11是氫或甲基；R12是C1-C18烷基。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種通式(II)的化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、n、X、R7和R8如通式(I)的定義；R10是C1-C6烷基、芳基、(CH2)mOC(＝O)C1-C6烷基、(CH2)mN(R11)2、CH((CH2)mO(C＝O)R12)2；m是1或2；R11是氫或甲基；R12是C1-C18烷基。
通式(II)的化合物是全新的，并可以作為通式(I)化合物的前藥使用。當(dāng)通式(II)的化合物作為前藥時(shí)，它經(jīng)過(guò)患者的血液或組織中的酯酶作用下，隨后轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬铩?br> 當(dāng)通式(II)的化合物作為前藥使用時(shí)，特別適合的R10基團(tuán)的例子包括甲基、乙基、丙基、苯基、CH2OC(＝O)tBu、CH2CH2N(Me)2CH2CH2NH2或CH(CH2O(C＝O)R12)2，其中R12如上述定義。
通式(I)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如通式(I)的定義并且X是一個(gè)鍵，可以用適當(dāng)?shù)难趸瘎┩ㄟ^(guò)氧化通式(Ia)的化合物來(lái)制備，通式(Ia)的化合物是通式(I)的一種化合物，其中n是0并且X是一個(gè)鍵，所述氧化劑例如是過(guò)氧單硫酸鉀、m-CPBA、過(guò)氧化氫或其他眾所周知的氧化劑。
除用作前藥外，其中R10是C1-C6烷基的通式(II)化合物也可以用于通式(I)化合物的制備方法中，該方法包括將通式(II)的化合物與堿，例如氫氧化鈉或氫氧化鋰反應(yīng)。該反應(yīng)可以在水性溶劑或有機(jī)溶劑或兩者的混合物中進(jìn)行。用于該反應(yīng)的一種典型的溶劑是四氫呋喃和水的混合物。用相同的方法也可以由通式(IIa)的化合物制備如上述定義的通式(Ia)化合物，其中通式(IIa)的化合物除了n是0以外，與通式(II)的化合物相同。
X是一個(gè)鍵的通式(II)和(IIa)化合物可以由通式(III)的化合物 其中R1、R2、R3、R4、R7和R8如通式(I)的定義并且n是0，1或2；和通式(IV)的化合物X-CR5R6-CO2R10(IV)其中R5和R6如通式(I)的定義，R10如通式(II)定義，并且X是離去基團(tuán)，特別是鹵素基團(tuán)，例如溴，相互反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)在強(qiáng)堿性環(huán)境下進(jìn)行，例如在過(guò)量氫化鈉存在下，及在極性有機(jī)溶劑中，例如二甲基甲酰胺。
通式(IV)的化合物是眾所周知的，很容易得到或者可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備出來(lái)。
通式(III)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R7和R8如通式(I)的定義并且n是2，可以由通式(V)的化合物
其中R1、R2、R3、R4和R7如通式(I)定義；和通式(VI)的化合物R8-SO2Cl(VI)其中R8如通式(I)定義，相互反應(yīng)來(lái)制備。
上述反應(yīng)是在路易斯酸例如溴化銦(III)的存在下完成的。該反應(yīng)可以在極性有機(jī)溶劑，特別是含氯溶劑例如1，2-二氯乙烷中進(jìn)行。
通式(V)和(VI)的化合物是本領(lǐng)域眾所周知的，很容易得到或者可用已知的方法制備出來(lái)。
X是NR9的通式(II)化合物可以由通式(VII)的化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如通式(I)定義，R10如通式(II)定義；和通式(VIII)的化合物HNR8R9(VIII)其中R8和R9如通式(I)定義；相互反應(yīng)來(lái)制備。
反應(yīng)溶劑可以是極性有機(jī)溶劑，例如二氯甲烷。
通式(VIII)的化合物是眾所周知的，很容易得到或者可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備出來(lái)。
通式(VII)的化合物可以由通式(IX)的化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如通式(I)定義，R10如通式(II)定義；和氯磺酸相互反應(yīng)來(lái)制備。
上述反應(yīng)優(yōu)選在非極性有機(jī)溶劑中進(jìn)行。
通式(IX)的化合物是眾所周知的，很容易得到或者可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備出來(lái)。
通式(III)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R7和R8如通式(I)定義并且n是0，可以由通式(IX)的化合物，其中R1、R2、R3、R4和R7如通式(I)定義并且R10如通式(II)定義，和通式(X)的化合物R8-SH(X)其中R8如通式(I)定義；相互反應(yīng)來(lái)制備。
上述反應(yīng)是在碘和碘化鉀存在的條件下進(jìn)行的。該反應(yīng)可以在水性溶劑或有機(jī)溶劑或兩者的混合物中進(jìn)行。用于上述反應(yīng)的典型溶劑是混合物，例如乙醇和水的混合物。
通式(I)的化合物是針對(duì)CRTH2受體的PGD2的拮抗劑，而且通式(II)的化合物是通式(I)的化合物的前藥。通式(I)和(II)的化合物因此在治療由PGD2通過(guò)CRTH2受體介導(dǎo)的疾病和情況的方法中是有用的，其中該方法包括將適量的通式(I)或(II)化合物施用于需要治療的患者。
在本發(fā)明的第三方面，提供通式(I)或(II)的化合物，用于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，特別是用于治療或預(yù)防由PGD2通過(guò)CRTH2受體介導(dǎo)的疾病和情況。
此外，也提供通式(I)或(II)的化合物在制備治療或預(yù)防由PGD2通過(guò)CRTH2受體介導(dǎo)的疾病和情況的藥劑中的用途。
如上所述，這些疾病和情況包括變應(yīng)性哮喘、常年性變應(yīng)性鼻炎、季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性過(guò)敏反應(yīng)(包括接觸性皮炎)、結(jié)膜炎，尤其是變應(yīng)性結(jié)膜炎、嗜酸細(xì)胞性支氣管炎、食物過(guò)敏、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病、肥大細(xì)胞增生病和其他PGD2介導(dǎo)的疾病，例如自身免疫性疾病，如高IgE綜合癥和全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、痤瘡、多發(fā)性硬化病、同種異體移植物排斥、再灌注損傷、慢性阻塞性肺病、及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。
通式(I)或(II)的化合物必須根據(jù)它們所要治療的疾病或情況，按照適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行配制。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種藥物組合物，其包含通式(I)或(II)的化合物和藥學(xué)賦形劑或載體。也可以包含被認(rèn)為適合用于治療或預(yù)防上述疾病或情況的其他活性物質(zhì)。
載體或(如果存在不止一種載體的話)每一種載體都必須與制劑其他組分具有可接受的相容性并且對(duì)受體無(wú)害。
所述制劑包括適合于口腔、直腸、鼻、支氣管(吸入)、局部(包括滴眼劑、口腔含化(buccal)和舌下)、陰道或非胃腸(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和真皮內(nèi))給藥的制劑，并可以用藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備出來(lái)。
給藥途徑取決于所要治療的疾病，但優(yōu)選將組合物制備成用于口腔、鼻、支氣管或局部給藥的制劑。
可以將上述活性劑與載體混合來(lái)制備組合物。一般地，將活性劑與液體載體或精細(xì)分離的固體載體或兩者的混合物均勻且緊密地混合，制備成制劑，然后如果需要，將產(chǎn)品制成一定形狀。本發(fā)明提供一種制備藥物組合物的方法，包括將通式(I)或(II)的化合物與藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體或賦形物結(jié)合或組合。
本發(fā)明中的口服制劑可以呈現(xiàn)為離散單位，例如每個(gè)單位都包含預(yù)定量活性劑的膠囊、囊劑(sachet)或片劑；粉末或顆粒；活性劑在水性液體或非水性液體中的溶液或混懸液；或水包油型液體乳劑或油包水型液體乳劑；或大丸劑等。
對(duì)于口服組合物(例如片劑和膠囊)，術(shù)語(yǔ)“可接受的載體”包括賦形物例如一般的賦形劑，例如粘合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、西黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、蔗糖及淀粉；填充劑和載體，如玉米淀粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉及海藻酸；和潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉及其他硬脂酸金屬鹽、硬脂酸甘油、硅酮油、滑石蠟、油及膠體硅。也可以使用調(diào)味劑，例如薄荷、冬青油、櫻桃調(diào)味劑等等。如果需要，也可以加入著色劑以使得劑型容易辨認(rèn)。片劑也可以用本領(lǐng)域眾所周知的方法包衣。
片劑可以任選和一種或多種助劑通過(guò)壓縮或制模來(lái)制備。制備壓縮片劑的方法包括，在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器里壓縮自由流動(dòng)形式，例如粉末或顆粒形式的活性劑，任選可混入粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。制備模印片劑的方法包括，將用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)過(guò)的粉末化合物的混合物在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器里模制。片劑任選可包衣或刻痕，并可制備成緩釋或控釋活性劑的制劑。
其他適于口服的制劑包括在調(diào)味基質(zhì)中包含活性劑的錠劑，所述調(diào)味基質(zhì)通常是蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠；在惰性基質(zhì)中包含活性劑的軟錠劑，所述惰性基質(zhì)例如是明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠；和在適當(dāng)液體載體中包含活性劑的漱口劑。
為了局部應(yīng)用于皮膚，通式(I)或(II)的化合物可以制成乳膏、軟膏、膠凍劑、溶液或混懸液等。可用作藥物的乳膏或軟膏制劑是本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)制劑，例如，如藥學(xué)標(biāo)準(zhǔn)教科書，例如英國(guó)藥典中所述。
通式(I)或(II)的化合物可以通過(guò)鼻、支氣管或口腔含化給藥用于治療呼吸道，例如氣霧劑或噴霧劑，其可以把藥學(xué)活性組分以粉末形式或溶液或混懸液的液滴形式分散開(kāi)。具有粉末分散性質(zhì)的藥物組合物除活性組分外，通常包括沸點(diǎn)低于室溫的液體推進(jìn)劑和，如果需要，還包含添加劑，例如液體或固體非離子或陰離子表面活性劑和/或稀釋劑。藥學(xué)活性組分在溶液中的藥物組合物，除溶液和藥學(xué)活性組分外，包括適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑，此外如果需要，還包含其他的溶劑和/或穩(wěn)定劑。也可以用壓縮氣體代替推進(jìn)劑，如果需要，可以通過(guò)適當(dāng)?shù)膲嚎s和膨脹裝置來(lái)制備。
非胃腸道制劑通常是無(wú)菌的。
一般的，化合物的劑量是約0.01至100mg/kg；以把藥物在血漿中的濃度維持在有效抑制CRTH2受體上的PGD2的濃度上。通式(I)或(II)化合物精確的治療有效量和這些化合物的最佳給藥途徑是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過(guò)比較制劑的血液濃度和具有治療效果所需的濃度就可以確定的。
通式(I)或(II)的化合物可以與一種或多種通常用于治療上述所列舉的疾病和情況的活性劑聯(lián)合使用，雖然這些活性劑不一定是針對(duì)CRTH2受體的PGD2的抑制劑。
因此，上述的藥物組合物還可以包含一種或多種這樣的活性劑。
本發(fā)明也提供一種通式(I)或(II)化合物在制備用于治療由PGD2通過(guò)CRTH2受體介導(dǎo)的疾病和情況的制劑中的用途，其中該制劑還包含用于治療相同疾病和情況的其他活性劑。
這些可能具有完全不同的作用模式的其他活性劑包括用于變應(yīng)性和其他炎性疾病的現(xiàn)有治療劑，包括β2激動(dòng)劑，例如沙美特羅；皮質(zhì)類固醇，例如氟替卡松；抗組胺劑，例如氯雷他定；白三烯拮抗藥，例如孟魯司特；抗-IgE抗體治療劑，例如omalizumab；
抗感染藥，例如夫西地酸(特別是用于治療特應(yīng)性皮炎)；抗真菌藥，例如克霉唑(特別是用于治療特應(yīng)性皮炎)；免疫抑制劑例如他可莫司和特別是在炎性皮膚疾病中選用的吡美莫司。
CRTH2拮抗劑也可以與治療炎性適應(yīng)癥發(fā)展的治療劑合用，其中所述治療劑包括作用于其他受體的其他PGD2拮抗劑，例如DP拮抗劑；4型磷酸二酯酶的抑制劑，例如cilonilast；調(diào)節(jié)細(xì)胞因子產(chǎn)生的藥物，例如TNFα轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑；調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-5活性的藥物，例如阻斷性單克隆抗體和可溶性受體；PPAR-γ激動(dòng)劑，例如羅格列酮；5-脂氧合酶抑制劑，例如齊留通。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種產(chǎn)品，其包含通式(I)或(II)的化合物和一種或多種上述的藥劑作為組合制劑，同時(shí)、分別或相繼用于治療由PGD2對(duì)CRTH2受體的作用所介導(dǎo)的疾病和情況。
下面將用非限制性的實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明，其中

圖1顯示的是CRTH2激動(dòng)劑對(duì)于CHO/CRTH2細(xì)胞中鈣動(dòng)員的影響。
實(shí)施例1-3-磺酰基吲哚衍生物的合成(方法A)1.3-(丁基-1-磺?；?-5-氟-2-甲基-1H-吲哚的合成在室溫下，向含有5-氟-2-甲基吲哚(50mg，0.34mmol)和丁磺酰氯(418mg，2.67mmol)的1，2-二氯乙烷(2ml)攪拌溶液中一次性加入溴化銦(III)(94.7mg，0.267mmol)。將混合物置于微波條件(85℃，150W)下45分鐘，冷卻到室溫，然后真空濃縮以得到棕色的殘留物。采用硅膠急驟柱色譜法純化，用10％乙酸乙酯∶己烷至100％乙酸乙酯洗脫，得到灰白色的固體砜(55mg，15％)。
2.[3-(丁基-1-磺?；?-5-氟-2-甲基-1-吲哚-1-基]-乙酸(化合物1)的合成將DMF(1ml)中的3-(丁基-1-磺?；?-5-氟-2-甲基-1H-吲哚(55mg，0.204mmol)0℃下在超過(guò)1分鐘的時(shí)間里滴入到含氫化鈉(11mg，0.29mmol；60％在液狀石蠟中)的DMF(1ml)攪拌混懸液中。該溶液在0℃下攪拌45分鐘，然后滴入溴乙酸乙酯(0.032ml，0.29mmol)，將得到的混合物室溫下攪拌18小時(shí)。用10％的檸檬酸將混合物的pH值調(diào)整到4，然后萃取到乙酸乙酯(2×10ml)中。干燥上述有機(jī)混合萃取物并在真空中濃縮以獲得殘留物。將該殘留物吸收到THF(1ml)中，然后室溫下一次性加入溶解在水(1ml)中的一水合氫氧化鋰(19mg，0.464mmol)。將上述混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用10％的檸檬酸將混合物的pH值調(diào)整到4。用乙酸乙酯萃取上述產(chǎn)物，干燥上述有機(jī)混合萃取物并在真空中濃縮以獲得殘留物，用二乙醚研磨該殘留物以獲得呈灰白色固體狀的羧酸(5.4mg，8％)，δH(400MHz，MeOD)7.57(1H，dd J 9.8，2.3Hz，Ar)，7.43(1H，dd J 9.1，4.0Hz，Ar)，7.04(1H，td J 9.1，2.5Hz，Ar)，4.79(2H，s，CH2CO2H)，3.23-3.19(2H，m，SO2CH2)，2.70(3H，s，CCH3)，1.77-1.70(2H，m，CH2CH2CH2CH3)，1.47-1.41(2H，m，CH2CH2CH2CH3)，0.93(3H，t J 7.6Hz，CH2CH2CH2CH3)；Tr＝1.38min，m/z(ES+)(M+H)+308.24.Tr＝1.82min(98％)，m/z(ES+)(M+H)+328.20。
除需適當(dāng)選擇起始原料外，用與化合物1相同的一般方法制備化合物2。
化合物2-3-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，MeOD)8.03(2H，d，J 8.6Hz Ar)，7.80(2H，d，J 8.6Hz，Ar)，7.77-7.74(1H，dd，J 9.6，2.5Hz，Ar)，7.66-7.64(2H，dd，J 8.0，1.3Hz，Ar)，7.49-7.39(4H，m，Ar)，7.07(1H，td，J 9.1，2.5Hz，Ar)，5.07(2H，s，CH2)，2.76(3H，s，CH3)；Tr＝1.52min，m/z(ES+)(M+H)+424.1。
實(shí)施例2-3-磺?；胚嵫苌锏暮铣?方法B)1.2-甲磺胺基-乙硫醇(2-methylsulfanyl-ethanethiol)將碘甲烷(10ml，22.83g，0.161mol)的丙酮(50ml)溶液滴加到乙二硫醇(11.24ml，12.62g，0.134mol)和碳酸鉀(37.04g，0.268mol)的丙酮(150ml)攪拌混懸液中。所得到的混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。加入水(150ml)，再將該混合物攪拌15分鐘。用二氯甲烷(3×200ml)萃取上述反應(yīng)混合物，合并有機(jī)洗液，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)(壓力維持在2000mbar以上以確保產(chǎn)物不會(huì)同時(shí)蒸發(fā))，得到2-甲基磺胺基-乙硫醇。LC/MS顯示產(chǎn)物中含有＜5％的起始原料及單甲基化和二甲基化材料的2∶1混合物。該材料在下一步中使用而不需要進(jìn)一步純化。
2.[5-氟-2-甲基-3-(2-甲磺胺基-乙磺胺基)-吲哚-1-基]-乙酸乙酯室溫下向(5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸乙酯(1.20g，5.10mmol)和2-甲基磺胺基-乙硫醇(1.04g，6.12mmol)的1∶1 EtOH∶H2O(40ml)攪拌溶液中加入碘(1.29g，5.10mmol)和碘化鉀(0.847g，5.10mmol)。將混合物加熱到100℃并攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌16小時(shí)。向該反應(yīng)混合物小心加入飽和NaHCO3(水溶液)進(jìn)行冷卻，然后用DCM(2×50ml)萃取。合并有機(jī)洗液，用飽和硫代硫酸鈉(2×70ml)洗滌，在硫酸鎂上干燥并蒸發(fā)，得到油。用色譜法(3×12cm柱；洗脫液為4∶1 己烷∶EtOAc)純化該粗油，得到酯(1.17g，67％)。δH(400MHz，CDCl3)7.36(1H，dd J 9.2，2.5Hz，Ar)，7.11(1H，dd J 8.8，4.1Hz，Ar)，7.05(1H，td J 9.2，2.3Hz，Ar)，4.79(2H，s，CH2CO2Et)，4.21(2H，q J 7.2Hz，CO2CH2CH3)，2.86-2.79(2H，m，CH2CH2)，2.59-2.55(2H，m，CH2CH2)，2.50(3H，s，SCH3)，2.04(3H，s，CCH3)，1.25(3H，t J7.2Hz，CO2CH2CH3)。
3.[5-氟-3-(2-甲磺?；?乙磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸乙酯室溫下將臭氧(8.43g，13.7mmol)加入到[5-氟-2-甲基-3-(2-甲磺胺基-乙磺胺基)-吲哚-1-基]-乙酸乙酯(1.17g，3.43mmol)的4∶1 1，4-二噁烷∶H2O的攪拌溶液中。30分鐘后向該反應(yīng)混合物中小心加入飽和碳酸氫鈉(50ml；小心沸騰)進(jìn)行冷卻，然后用DCM(2×100ml)萃取。合并有機(jī)洗液并用鹽水(2×100ml)洗滌。然后用DCM(100mol)返萃取上述水洗液。合并所有有機(jī)層液，在硫酸鎂上干燥并蒸發(fā)，得到淺綠色的結(jié)晶固體。將該固體混懸于DCM中，過(guò)濾收集，得到酯(1.06g，76％)。δH(400MHz，CDCl3)7.66(1H，dd J 9.1，2.5Hz，Ar)，7.22(1H，dd J 9.0，4.0Hz，Ar)，7.08(1H，td J 8.9，2.5Hz，Ar)，4.86(2H，s，CH2CO2Et)，4.26(2H，q J 7.1Hz，CO2CH2CH3)，3.61-3.57(2H，m，CH2CH2)，3.48-3.44(2H，m，CH2CH2)，2.99(3H，s，SCH3)，2.71(3H，s，CH3)，1.30(3H，t J 7.1Hz，CO2CH2CH3)。
4.化合物5-[[5-氟-3-(2-甲磺?；?乙磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸將一水合氫氧化鋰(132mg，3.14mmol)一次性地加入到[5-氟-3-(2-甲磺?；?乙磺酰基)-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸乙酯(1.06g，，2.61mmol)的THF∶水(5∶1；15ml)攪拌溶液中，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。真空濃縮該混合物，得到殘留物，并在乙酸乙酯和10％檸檬酸之間進(jìn)行分配。分離有機(jī)層并用乙酸乙酯(3×100ml)萃取該水溶液。合并有機(jī)萃取液、干燥并真空濃縮，得到灰白色固體。然后用二氯甲烷研磨該固體，得到呈灰白色固體狀的羧酸(438mg，44％)，δH(400MHz，d6-丙酮)7.58-7.63(2H，m，Ar)7.09(1H，td J 9.2，2.6Hz，Ar)，5.22(2H，s，CH2CO2H)，3.60-3.66(2H，m，SO2CH2CH2)，3.45(2H，m，SO2CH2CH2)，3.02(3H，s，SO2CH3)，2.75(3H，s，CH3)；Tr＝1.08min(98％)，m/z(ES+)(M+H)+378.16。
使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚贤ㄟ^(guò)相似途徑制備化合物3和4。
化合物3-(3-羧甲磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸Tr＝1.16min，m/z(ES+)(M+H)+330.10。
化合物4-(3-氨甲酰甲磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸Tr＝1.50min，m/z(ES+)(M+H)+329.17。
實(shí)施例3-3-磺?；胚嵫苌锏暮铣?方法B2)用與上面實(shí)施例2第2步相似的方法合成下面的中間體。但是，對(duì)酸的水解作用發(fā)生在氧化作用前，以獲得砜或亞砜衍生物。-乙酸δH(400MHz，MeOD)8.95-8.94(1H，m，Ar)，8.36(1H，dd J 8.3，1.7Hz，Ar)，7.64-7.60(2H，m，Ar)，7.45(1H，dd J 8.8，4.2Hz，Ar)，7.29(1H，t J 7.8Hz，Ar)，7.09(1H，dd J 9.2，2.6Hz，Ar)，7.00(1H，td J 9.2，2.6Hz，Ar)，6.85(1H，app d J 7.3Hz，Ar)，5.14(2H，s，CH2CO2H)，2.52(3H，s，CCH3)；Tr＝1.30min，m/z(ES+)(M+H)+367.39。-乙酸δH(400MHz，MeOD)8.01(1H，d J 8.6Hz，Ar)，7.93(1H，d J 7.8Hz，Ar)，7.82(1H，d J 8.1Hz，Ar)，7.76(1H，app td J 7.1，1.4Hz，Ar)，7.53(1H，app td J 7.0，1.1Hz，Ar)，7.47(1H，dd J 9.1，4.2Hz，Ar)，7.16(1H，dd J 9.0，2.4Hz，Ar)，7.03(1H，td J 9.2，2.6Hz，Ar)，6.87(1H，d J8.8Hz，Ar)，5.14(2H，s，CH2CO2H)，2.55(3H，s，CCH3)；Tr＝1.37min，m/z(ES+)(M+H)+367.24。-乙酸δH(400MHz，MeOD)7.81(1H d J 8.3Hz，Ar)，7.71(1H，d J 7.8Hz，Ar)，7.50-7.43(2H，m，Ar)，7.31-7.24(2H，m，Ar)，7.06(1H td J 9.0，2+4Hz，Ar)，5.15(2H，s，CH2CO2H)，2.60(3H，s，CCH3)；Tr＝1.49min，m/z(ES+)(M+H)+373.34。
(3-芐磺胺基-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸δH(250MHz，d6-DMSO)7.46(1H，dd J 8.8，4.3Hz，Ar)，7.21-7.18(3H，m，Ar)，7.14(1H，dd J 9.5，2.5Hz，Ar)，7.01-6.92(3H，m，Ar)，4.99(2H，s，CH2CO2H)，3.75(2H，s，ArCH2)，2.01(3H，s，CH3)；Tr＝1.56min(100％)m/z(ES+)(M+H)+330.16。
然后用下面的方法氧化上述中間體得到通式(I)的化合物，其中n是1或2。
1.化合物6-[3-(苯并噻唑-2-磺?；?-5-氟-2-甲基吲哚-1-基]-乙酸和化合物7-[3-(苯并噻唑-2-亞磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸室溫下將過(guò)氧化單硫酸鉀(131.0mg，214mmol)一次性地加入到[3-(苯并噻唑-2-基磺胺基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸(20.0mg，53.6mmol)的1，4-二噁烷∶水(0.3ml；4∶1)攪拌溶液中。將該混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，然后加入碳酸氫鈉的飽和溶液(5ml)。產(chǎn)物用乙酸乙酯(3×2ml)萃取，合并萃取液并用鹽水洗滌，干燥并真空濃縮，得到固體，用制備型HPLC純化該固體，得到砜，呈灰白色固體狀的化合物6(10.0mg，46％)，δH(400MHz，MeOD)8.11(2H，obs dd J 7.9，2.8Hz，Ar)，7.79(1H，dd J 9.6，2.5Hz，Ar)，7.65-7.57(2H，m，Ar)，7.43(1H，dd J 8.8，4.3Hz，Ar)，7.06(1H，td J 9.1，2.5Hz，Ar)，4.76(2H，s，CH2CO2H)，2.85(3H，s，CCH3)；Tr＝1.44min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+405.21，和亞砜，呈灰白色固體狀的化合物7(3.2mg，15％)，δH(400MHz，MeOD)8.16(1H，app d J 9.1Hz，Ar)，8.01(1H，d J8.1Hz，Ar)，7.62-7.54(2H，m，Ar)，7.47(1H，dd J 9.1，4.0Hz，Ar)，7.23(1H，dd J 9.6，2.5Hz，Ar)，7.02(1H，td J 9.1，2.0Hz，Ar)，5.10(2H，s，CH2CO2H)，2.78(3H，s，CCH3)；Tr＝1.34min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+389.09。
除需適當(dāng)選擇起始原料外，用與化合物6和7相同的一般方法制備化合物8到10。
化合物8-[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-2-磺酰基)-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，MeOD)8.57(1H，d J 8.6Hz，Ar)，8.20(1H，d J 8.6Hz，Ar)，8.13(1H，d J 8.6Hz，Ar)，8.02(1H，d J 8.1Hz，Ar)，7.89-7.82(2H，m，Ar)，7.73(1H，app t J 8.1Hz，Ar)，7.42(1H，dd J 8.8，4.3Hz，Ar)，7.05(1H，tu79.1，2.5Hz，Ar)，5.08(2H，s，CH2CO2H)，2.86(3H，s，CCH3)；Tr＝1.39min(92％)，m/z(ES+)(M+H)+399.26。
化合物9-[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-8-基磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，MeOD)8.89(1H，app d J 4.3Hz，Ar)，8.71(1H，dd J7.3Hz，Ar)，8.34(1H，app d J 8.3Hz，Ar)，8.20(1H，app d J 8.3Hz，Ar)，7.80(1H，t J 8.1Hz，Ar)，7.58(1H，dd J 10.1，2.5Hz，Ar)，7.53(1H，dd J8.3，4.3Hz，Ar)，7.34(1H，dd J 8.8，4.3Hz，Ar)，6.95(1H，td J 9.1，2.5Hz，Ar)，5.02(2H，s，CH2CO2H)，2.97(3H，s，CCH3)；Tr＝1.78min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+399.29。
化合物10-(5-氟-2-甲基-3-苯甲磺酰基-1H-吲哚-1-基)-乙酸δH(250MHz，d6-DMSO)7.61(1H，dd J 9.0，4.5Hz，Ar)，7.35(1H，ddJ 9.8，2.5Hz，Ar)，7.30-7.19(3H，m，Ar)，7.10(1H，td J 9.1，2.6Hz，Ar)，7.02(2H，m，Ar)，5.10(2H，s，CH2CO2H)，4.51(2H，s，ArCH2)，2.06(3H，s，CH3)；Tr＝1+30min(100％)m/z(ES+)(M+H)+362.13.
實(shí)施例4-3-氨磺酰基吲哚衍生物的合成(方法C)如下所述的方法用于制備X是NR9的通式(I)的化合物。
1.[3-(4-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸乙酯在0℃下將氯磺酸(0.042ml，0.63mmol)在超過(guò)1分鐘的時(shí)間里滴入到(5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸乙酯(100mg，0.43mmol)的醚(1ml)攪拌溶液中。將該溶液在0℃下攪拌10分鐘，真空濃縮得到殘留物，與二氯甲烷(2×2ml)共沸。用二氯甲烷吸收該殘留物，然后加入N，N-二異丙基乙胺(0.075ml，0.43mmol)和4-氯苯氨(53.4mg，0.42mmol)。得到的混合物在室溫下攪拌40分鐘，然后真空濃縮得到殘留物，在乙酸乙酯(5ml)和水(5ml)之間進(jìn)行分配。然后把有機(jī)層分離出來(lái)，再用飽和氫氧化鈉溶液(20ml)洗滌，干燥并真空濃縮得到殘留物，再用急驟柱色譜法(Flashmaster)在硅膠上用15％乙酸乙酯∶庚烷洗脫來(lái)進(jìn)行純化，得到呈灰白色固體狀的磺胺(6mg，3％)，δH(400MHz，CDCl3)7.63(1H，dd J 9.5，2.4Hz，Ar)，7.18-7.12(3H，m，Ar)，7.05-6.99(1H，m，Ar)，6.96-6.90(2H，m，Ar)，6.55(1H，s，NH)，4.73(2H，s，NCH2)，4.20(2H，q J 7.3Hz，OCH2CH3)，2.33(3H，s，CCH3)，1.22(3H，t J 7.3Hz，OCH2CH3)；Tr＝1.57min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+425。
2.化合物11-[3-(4-氯-苯氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸將溶于水(2ml)中的一水合氫氧化鋰(7.0mg，0.17mmol)一次性地加入[3-(4-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸乙酯(6mg，0.014mmol)的四氫呋喃(2ml)攪拌溶液中。得到的混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用1M的鹽酸將混合物的pH值調(diào)節(jié)到1。用乙酸乙酯(2×10ml)萃取上述產(chǎn)品，合并有機(jī)萃取液，然后干燥并真空濃縮得到灰白色固體狀的羧酸(4.3mg，77％)，δH(400MHz，CDCI3)8.74(1H，s，NH)，7.70(1H，dd J 9.5，2.6Hz，Ar)，7.13-7.06(3H，m，Ar)，6.99-6.92(3H，m，Ar)，4.67(2H，s，NCH2)，2.41(3H，s，CH3)；Tr＝1.84min(91％)，m/z(ES+)(M+H)+397。
除需適當(dāng)選擇起始原料外，用相同的一般方法制備化合物12到25。
化合物12-[3-(3-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，CDCl3)7.63(1H，dd J 9.3，2.6Hz，Ar)，7.17-7.14(1H，m，Ar)，7.10-6.98(5H，m，Ar，NH)，6.86-6.84(1H，m，Ar)，4.73(2H，s，NCH2)，2.46(3H，s，CH3)；Tr＝1.84min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+397。
化合物13-[3-(4-氟-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，CDCl3)8.45(1H，s，NH)，7.66(1H，dd J 9.7，2.3Hz，Ar)，7.11(1H，dd J 9，4.2Hz，Ar)，6.97-6.90(3H，m，Ar)，6.81-6.77(2H，m，Ar)，4.64(2H，s，NCH2)，2.29(3H，s，CH3)；Tr＝1.79min(99％)，m/z(ES+)(M+H)+381。
化合物14-[3-(2-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，CDCl3)7.69(1H，s，NH)，7.58-7.49(2H，m，Ar)，7.23-7.13(3H，m，Ar)，7.03-6.93(2H，m，Ar)，4.70(2H，s，NCH2)，2.44(3H，s，CH3)；Tr＝1.83(100％)，m/z(ES+)(M+H)+397。
化合物15-(3-芐氨磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)7.99(1H，t J 6.3Hz，Ar)，7.58(2H，m，Ar)，7.21(4H，m，Ar)，7.09(1H，td J 9.23，2.65Hz，Ar)，5.11(2H，s，CH2CO2H)，3.92(2H，d J 6.31Hz，NCH2)2.56(3H，s，CH3)，Tr＝1.31min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+377.25。
化合物16-[5-氟-3-(2-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸
δH(400MHz，d6-DMSO)9.18(1H，s，SO2NH)，7.52(1H，dd J 9.00，4.4Hz，Ar)，7.47(1H，dd J 10.2，2.6Hz，Ar)，7.23(1H，dd J 7.9，1.6Hz，Ar)，7.09-7.01(2H，m，Ar)，6.84(1H，t J 7.7Hz，Ar)，6.77(1H，d J 7.2Hz，Ar)，5.05(2H，s，CH2CO2H)，3.24(3H，OCH3)，2.30(3H，s，CH3)；Tr＝1.31min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+393.25。
化合物17-[5-氟-3-(4-(2-甲氧基-苯氨磺酰基)-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)9.62(1H，s，SO2NH)，7.49(1H，dd J 10.3，2.6Hz，Ar)，7.36(1H，dd J 9.0，4.6Hz，Ar)，6.98(1H，dd J 9.2，2.8Hz，Ar)，6.93(2H，d J 9.1Hz，Ar)，6.74(2H，d J 9.1Hz，Ar)，4.45(2H，s，CH2CO2H)，3.64(3H，s，OCH3)，2.36(3H，s，CH3)；Tr＝1.27min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+393.26。
化合物18-(5-氟-2-甲基-3-苯氨磺?；?吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)10.15(1H，s，SO2NH)，7.60(1H，dd J 10.1，2.6Hz，Ar)，7.53(1H，dd J 9.1，4.5Hz，Ar)，7.17(2H，m，Ar)，7.07(1H，dd J 9.1，2.6Hz，Ar)，7.03(2H，m，Ar)，6.96(1H，t J 7.3Hz，Ar)，5.03(2H，s，CH2CO2H)，2.48(3H，s，CH3)；Tr＝1.28min(96％)，m/z(ES+)(M+H)+363.25。
化合物19-[3-(3，4-二氯-芐氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)7.92(1H，bs，SO2NH)，7.47(1H，dd J 10.3，2.6Hz，Ar)，7.40(1H，d J 8.3Hz，Ar)，7.37(1H，d J 1.7Hz，Ar)，7.31(1H，dd J 9.0，4.6Hz，Ar)，7.13(1H，dd J 8.2，2.0Hz，Ar)，6.96(1H，td J 9.3，2.7Hz，Ar)，4.32(2H，s，CH2CO2H)，3.93(2H，s，NCH2)，2.49(3H，s，CH3)；Tr＝1.43min(97％)，m/z(ES+)(M+H)+445.15。
化合物20-[5-氟-3-(3-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)10.22(1H，s，SO2NH)，7.60(1H，dd J 9.9，2.5Hz，Ar)，7.50(1H，dd J 9.1，4.1Hz，Ar)，7.05(2H，m，Ar)，6.61(2H，m，Ar)，6.50(1H，d 8.7Hz，Ar)，4.88(2H，s，CH2CO2H)，3.60(3H，s，OCH2)，2.54(3H，s，CH3)；Tr＝1.28min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+393.28。
化合物21-(5-氟-2-甲基-3-間-甲苯氨磺?；?吲哚-1-基)-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)10.11(1H，s，SO2NH)，7.61(1H，dd J 10.1，2.6Hz，Ar)，7.55(1H，dd J 9.1，4.5Hz，Ar)，7.08(1H，dd J 9.2，2.6Hz，Ar)，7.03(1H，d J 7.8，Ar)，6.85-6.81(2H，m，Ar)，6.76(1H，d J 7.6Hz，Ar)，5.08(2H，s，CH2CO2H)，2.50(3H，s，CH3)，2.15(3H，s，ArCH3)，Tr＝1.33min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+377.24。
化合物22-(5-氟-2-甲基-3-對(duì)甲苯氨磺?；?吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)9.90(1H，bs，SO2NH)，7.55(1H，dd J 10.2，2.6Hz，Ar)，7.32(1H，dd J 9.1，4.6，Ar)，6.94(5H，m，Ar)，4.31(2H，s，CH2CO2H)，2.45(3H，s，CH3)，2.15(3H，s，CH3)，Tr＝1.33min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+377.25。
化合物23-[3-(4-氯-芐氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)8.04(1H，t J 5.9Hz，NH)，7.58-7.51(2H，m，Ar)，7.25(2H，d J 8.6Hz，Ar)，7.18(2H，d J 8.6Hz，Ar)，7.07(1H，td J9.5，2.7Hz，Ar)，5.07(2H，s，CH2CO2H)，3.93(2H，d J 6.3Hz，NCH2)2.56(3H，s，CH3)；Tr＝1.38min(91％)，m/z(ES+)(M+H)+411.07。
化合物24-[3-(芐基-甲基-氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸
δH(400MHz，d6-DMSO)7.52(1H，dd J 10.0，2.6Hz，Ar)，7.46(1H，dd J 8.9，4.4Hz，Ar)，7.39-7.28(5H，m，Ar)，7.03(1H，td J 9.4，2.8Hz，Ar)，4.46(2H，s，CH2CO2H)，4.10(2H，s，NCH2)，2.60(3H，s，NCH3)，2.48(3H，s，CH3)；Tr＝1.43min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+391.15。
化合物25-[5-氟-2-甲基-3-(嘧啶-3-基氨磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸δH(400MHz，d6-DMSO)10.42(1H，s，SO2NH)，8.25(1H，d J 2.6Hz，Ar)，8.19(1H，d，3.3Hz，Ar)，7.59-7.55(2H，m，Ar)，7.40(1H，d J 8.3Hz，Ar)，7.24-7.21(2H，m，Ar)，5.10(2H，s，CH2CO2H)，2.49(3H，s，CH3)；Tr＝0.96min(100％)，m/z(ES+)(M+H)+364.1。
實(shí)施例5-CRTH2拮抗劑活性的測(cè)定材料和方法材料鈣-3染料，購(gòu)自Molecular Devices(Wokingham，UK)。單-多分解介質(zhì)，得自Dainippon Pharmaceuticals(Osaka，Japan)。Macs抗-CD16微珠，得自Miltenyi biotec(Bisley，Surrey)。ChemoTx盤，購(gòu)自Neuroprobe(Gaithesburg，MD)。包被聚-D-賴氨酸的96-孔板，得自Greiner(Gloucestershire，UK)。[3H]PGD2，得自Amersham Biosciences(Buckinghamshire，UK)。[3H]SQ29548購(gòu)自Perkin Elmer LifeSciences(Buckinghamshire，UK)。除非特別說(shuō)明，其他的所有試劑都得自Sigma-Aldrich(Dorset，UK)。
方法細(xì)胞培養(yǎng)用CRTH2或DP受體(CHO/CRTH2和CHO/DP)轉(zhuǎn)染中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，在37℃下的潮濕空氣(5％CO2)中在含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1mg ml-1活性G418的極限必需培養(yǎng)基(MEM)中培養(yǎng)。細(xì)胞每2至3天傳代一次。對(duì)于放射性配體結(jié)合測(cè)定，在三層燒瓶或175cm2方形瓶(用于膜制備)中制備細(xì)胞。對(duì)于鈣動(dòng)員測(cè)定，在測(cè)定前細(xì)胞按每孔80,000個(gè)細(xì)胞的密度在96孔板中生長(zhǎng)24小時(shí)。
細(xì)胞膜的制備可以由CHO/CRTH2和CHO/DP細(xì)胞，或者由血小板(作為TP受體的一個(gè)來(lái)源)來(lái)制備膜。用PBS洗滌生長(zhǎng)到匯合狀態(tài)的CHO細(xì)胞，并用Versene溶液(每瓶15ml)使之脫壁。當(dāng)細(xì)胞在175cm2方形瓶中生長(zhǎng)時(shí)，通過(guò)在PBS中刮取來(lái)收集細(xì)胞。將上述細(xì)胞混懸液離心(1,700rpm，10分鐘，4℃)，并再混懸于15ml緩沖液(1xHBSS，補(bǔ)充10mM HEPES，pH 7.3)。然后用設(shè)置為4-6的Ultra Turrax均化該細(xì)胞混懸液20秒。上述勻漿在1,700rpm下離心10分鐘，收集上清液，并在4℃下2,000rpm離心1小時(shí)。所得到的沉淀物再混懸于緩沖液中，以200-500μl等份貯存在-80下。蛋白質(zhì)濃度可以用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)，采用Bradford(1976)的方法來(lái)測(cè)定。血小板以600xg離心1O分鐘來(lái)洗滌，并再混懸于冰冷的測(cè)定緩沖液(10mMTris-HCl，pH 7.4，5mM葡萄糖，120mM NaCl，1OμM吲哚美辛)中，然后直接在4℃下2,000rpm離心30分鐘。所得到的沉淀物按照上述方法進(jìn)行處理。
放射性配體結(jié)合試驗(yàn)[3H]PGD2(160Ci/mmol)結(jié)合試驗(yàn)用上述制備的膜進(jìn)行。而測(cè)定在最終體積為1OOμl的緩沖液(1XHBSS/HEPES 10mM，pH 7.3)中進(jìn)行。細(xì)胞膜(15μg)。細(xì)胞膜15mg與不同濃度的競(jìng)爭(zhēng)性配體在室溫下預(yù)孵育15分鐘。然后加入[3H]PGD2(mol，最終濃度)，并在室溫下繼續(xù)孵育1小時(shí)。向每個(gè)孔中加入200μl冰冷的測(cè)定緩沖液終止反應(yīng)，然后用Unifilter細(xì)胞收集器(PerkinElmer Life Sciences)通過(guò)Whatman GF/B玻璃纖維過(guò)濾器快速過(guò)濾，再用300μl冰冷的緩沖液洗滌6次。Unifilter盤在室溫下干燥最少1小時(shí)，加入40μl OptiphaseHi-Safe 3(Wallac)液體閃爍液后，用Beta Trilux計(jì)數(shù)器(PerkinElmerLife Sciences)測(cè)定保持在過(guò)濾器上的放射性。非特異性結(jié)合在10μM非標(biāo)記PGD2的存在下確定。該測(cè)定一式兩份進(jìn)行。
對(duì)CRTH2和DP受體的放射性配體結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果列在表1中。
表1中的結(jié)果證明，通式(I)的化合物對(duì)CRTH2受體具有高度親和力。在進(jìn)行比較的情況下，通式(I)化合物對(duì)于CRTH2受體的親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)DP受體的親和力。
表1-放射性配體結(jié)合數(shù)據(jù)(對(duì)CRTH2受體和DP受體的Ki)
TP受體放射性配體結(jié)合在由血小板制備的膜上進(jìn)行。15-40μg蛋白質(zhì)與不同濃度的競(jìng)爭(zhēng)性配體在室溫下在測(cè)定緩沖液(10mMTris-HCl，pH 7.4，5mM葡萄糖，120mM NaCl，10μM吲哚美辛)中預(yù)孵育15分鐘。然后加入[3H]SQ29548(38Ci/mmol，最終濃度為10nM)，室溫下繼續(xù)孵育30分鐘。向每個(gè)孔中加入200μl冰冷的測(cè)定緩沖液終止反應(yīng)，然后用Unifilter細(xì)胞收集器(PerkinElmer LifeSciences)通過(guò)Whatman GF/C玻璃纖維過(guò)濾器快速過(guò)濾，再用300μl冰冷的緩沖液洗滌6次。用如上所述的方法測(cè)定放射性。
在此項(xiàng)測(cè)定中研究的所有化合物都以低親和力(Ki＞10μM)結(jié)合到TP受體上。
通式(I)的化合物與CHO細(xì)胞中表達(dá)的CRTH2受體結(jié)合的親和力范圍從非常高到中等。事實(shí)上，在與[3H]PGD2競(jìng)爭(zhēng)中測(cè)定的Ki值從500pM到1μM不等。通式(I)的化合物對(duì)DP和TP受體無(wú)活性(或只具有非常弱的活性)。通式(I)化合物對(duì)CRTH2受體的結(jié)合選擇性，比對(duì)DP和TP的結(jié)合選擇性大200倍。
鈣動(dòng)員測(cè)定將細(xì)胞接種于聚-D-賴氨酸包被的96-孔板上，密度為每孔80,000個(gè)細(xì)胞，在37℃下孵育過(guò)夜以使得細(xì)胞附著。用HBSS洗滌細(xì)胞兩次，37℃下在補(bǔ)充4mM丙磺舒的100μl HBSS和100μl鈣-3-染料(Molecular Devices)溶液中孵育1小時(shí)。在超過(guò)50秒的時(shí)程中用Flexstation(Molecular Devices)監(jiān)測(cè)熒光的變化，并在17s時(shí)加入激動(dòng)劑。
CRTH2激動(dòng)劑對(duì)于CHO-CRTH2細(xì)胞中鈣動(dòng)員的影響PGD2導(dǎo)致CHO/CRTH2細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)Ca2+動(dòng)員劑量依賴性地增加，EC50＝2.4+0.5nM(n＝3)(圖1)。
通式(I)的化合物對(duì)由PGD2誘導(dǎo)的鈣動(dòng)員的影響
PGD2刺激的Ca2+流出(flux)被通式(I)的化合物完全抑制，在鈣測(cè)定中每個(gè)化合物的IC50值與其在放射性配體結(jié)合中的Ki值相當(dāng)。通式(I)化合物的IC50值從5nM到1μM不等。幾種通式(I)化合物的結(jié)果列于表2中。通式(I)化合物的劑量增加導(dǎo)致CHO/CRTH2細(xì)胞中的PGD2劑量響應(yīng)曲線劑量依賴性地且平行地位移，由此顯示出這些化合物是競(jìng)爭(zhēng)性CRTH2拮抗劑。
通式(I)化合物的拮抗效應(yīng)似乎是CRTH2選擇性的，因?yàn)閷?duì)CHO/CRTH2細(xì)胞中的ATP刺激的Ca2+流出未見(jiàn)有抑制效果。
表2-PGD2誘導(dǎo)的鈣流出的抑制作用
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物 其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地是氫、鹵素、C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、-CON(R9)2、-SOR9、-SO2R9、-SO2N(R9)2、-N(R9)2、-NR9COR9、-CO2R9、-COR9、-SR9、-OH、-NO2或-CN；每個(gè)R9各自獨(dú)立地是氫或C1-C6烷基；R5和R6各自獨(dú)立地是氫、或C1-C6烷基或與它們連接的碳原子一起形成C3-C7環(huán)烷基；R7是氫或C1-C6烷基；n是1或2；X是一個(gè)鍵，或者當(dāng)n是2時(shí)，X也可以是NR9基；其中R9如上述定義；當(dāng)X是一個(gè)鍵時(shí)，R8是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、聯(lián)苯基或9-14元二環(huán)或三環(huán)雜芳基；當(dāng)X是NR9時(shí)，基團(tuán)R8也另外可以是苯基、萘基或5-7元雜芳環(huán)；和R8基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、芳基、-O-芳基、雜芳基、-O-雜芳基、-CON(R9)2、-SOR9、-SO2R9、SO2(R9)2、-N(R9)2、-NR9COR9、-CO2R9、-COR9、-SR9、-OH、-NO2或-CN的取代基所取代；其中R9如上述定義；或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑合物、絡(luò)合物或前藥。
2.通式(II)的化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、n、X、R7和R8如通式(I)的定義；R10是C1-C6烷基、芳基、(CH2)mOC(＝O)C1-C6烷基、(CH2)mN(R11)2、CH((CH2)mO(C＝O)R12)2；m是1或2；R11是氫或甲基；R12是C1-C18烷基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中下列基團(tuán)各自獨(dú)立地或任意組合地是R1是鹵素或氫；R2是鹵素或氫；R3是鹵素或氫；R4是鹵素或氫。
4.如權(quán)利要求1到3任一所述的化合物，其中R1、R3和R4是氫并且R2是鹵素。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中R2是氟。
6.如權(quán)利要求1到5任一所述的化合物，其中R5和R6各自獨(dú)立地為氫或C1-C4烷基。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中R5和R6中的至少一個(gè)是氫。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中R5和R6都是氫。
9.如權(quán)利要求1到8任一所述的化合物，其中R7是氫或C1-C6烷基。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中R7是甲基。
11.如權(quán)利要求1到10任一所述的化合物，其中n是2。
12.如權(quán)利要求1到11任一所述的化合物，其中X是一個(gè)鍵并且R8是C1-C6烷基、聯(lián)苯基或二環(huán)雜芳基，上述任意基團(tuán)都可以被鹵素、苯基、-CO2R9CON(R9)2或-SO2R9取代，其中R9如上述定義。
13.如權(quán)利要求12所述的化合物，其中R8是C1-C4烷基、聯(lián)苯基、二環(huán)雜芳基或5-7元雜環(huán)，上述任意基團(tuán)都可以被苯基、-CO2R9CON(R9)2或-SO2R9取代，其中R9是氫或C1-C4烷基。
14.如權(quán)利要求1到11任一所述的化合物，其中X是NR9，NR9是氫或甲基并且R8是任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)取代的苯基；C1-C6烷基，任選被芳基取代；或雜芳基。
15.如權(quán)利要求14所述的化合物，其中R8是苯基、芐基或吡啶基，其任選可以被一個(gè)或多個(gè)鹵素、甲基或甲氧基取代。
16.[3-(丁基-1-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸(3-羧甲磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸(3-氨甲?；谆酋；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸[5-氟-3-(2-甲磺?；?乙磺酰基)-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(苯并噻唑-2-磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(苯并噻唑-2-亞磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-2-磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸[5-氟-2-甲基-3-(喹啉-8-基磺?；?-吲哚-1-基]-乙酸(5-氟-2-甲基-3-苯甲磺?；?1H-吲哚-1-基)-乙酸[3-(4-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(3-氯-苯氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(4-氟-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(2-氯-苯氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸(3-芐氨磺?；?5-氟-2-甲基-吲哚-1-基)-乙酸[5-氟-3-(2-甲氧基-苯氨磺酰基)-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[5-氟-3-(4-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸(5-氟-2-甲基-3-苯氨磺酰基-吲哚-1-基)-乙酸[3-(3，4-二氯-芐氨磺酰基)-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[5-氟-3-(3-甲氧基-苯氨磺?；?-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸(5-氟-2-甲基-3-間甲苯氨磺酰基-吲哚-1-基)-乙酸(5-氟-2-甲基-3-對(duì)甲苯氨磺?；?吲哚-1-基)-乙酸[3-(4-氯-芐氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[3-(芐基-甲基-氨磺?；?-5-氟-2-甲基-吲哚-1-基]-乙酸[5-氟-2-甲基-3-(吡啶-3-基氨磺酰基)-吲哚-1-基]-乙酸；或上述任意化合物的C1-C6烷基、芳基、(CH2)mOC(＝O)C1-C6烷基、(CH2)mN(R11)2、CH((CH2)mO(C＝O)R12)2酯；其中m是1或2；R11是氫或甲基；R12是C1-C18烷基。
17.一種制備如權(quán)利要求1到13或16任一所述的通式(I)化合物的方法，其中n是1或2并且X是一個(gè)鍵，該方法包括用適當(dāng)?shù)难趸瘎┭趸ㄊ?Ia)的化合物，其中通式(Ia)的化合物是一種n是0并且X是一個(gè)鍵的通式(I)的化合物。
18.一種制備如權(quán)利要求1到16任一所述的通式(I)化合物的方法，包括將如權(quán)利要求2所定義并且其中R10是C1-C6烷基的通式(II)化合物與堿反應(yīng)。
19.如權(quán)利要求1到16任一所述的化合物用作藥物。
20.用于治療變應(yīng)性哮喘、常年性變應(yīng)性鼻炎、季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性過(guò)敏反應(yīng)(包括接觸性皮炎)、結(jié)膜炎，尤其是變應(yīng)性結(jié)膜炎、嗜酸細(xì)胞性支氣管炎、食物過(guò)敏、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病、肥大細(xì)胞增生病、其他PGD2介導(dǎo)的疾病，例如自身免疫性疾病，如高IgE綜合癥和全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、痤瘡、多發(fā)性硬化病、同種異體移植物排斥、再灌注損傷及慢性阻塞性肺??；或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的化合物。
21.如權(quán)利要求1到16任一所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防下列疾病的藥劑中的用途變應(yīng)性哮喘、常年性變應(yīng)性鼻炎、季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性過(guò)敏反應(yīng)(包括接觸性皮炎)、結(jié)膜炎，尤其是變應(yīng)性結(jié)膜炎、嗜酸細(xì)胞性支氣管炎、食物過(guò)敏、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病、肥大細(xì)胞增生病、其他PGD2介導(dǎo)的疾病，例如自身免疫性疾病，如高IgE綜合癥和全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、痤瘡、多發(fā)性硬化病、同種異體移植物排斥、再灌注損傷及慢性阻塞性肺??；或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。
22.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1到16任一所述化合物和藥物賦形劑或載體.
23.制備成口腔、直腸、鼻、支氣管(吸入)、局部(包括滴眼劑、口腔含化和舌下)、陰道或非胃腸(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和真皮內(nèi))給藥的如權(quán)利要求22所述的組合物。
24.制備成口腔、鼻、支氣管或局部給藥的如權(quán)利要求23所述的組合物。
25.如權(quán)利要求22到24任一所述的組合物，其還包含一種或多種用于治療由PGD2通過(guò)CRTH2受體介導(dǎo)的疾病和情況的其他活性藥劑。
26.如權(quán)利要求25所述的組合物，其中所述其他活性藥劑選自β2激動(dòng)劑，例如沙美特羅；皮質(zhì)類固醇，例如氟替卡松；抗組胺劑，例如氯雷他定；白三烯拮抗藥，例如孟魯司特；抗-IgE抗體治療劑，例如omalizumab；抗感染藥，例如夫西地酸(特別是用于治療特應(yīng)性皮炎)；抗真菌藥，例如克霉唑(特別是用于治療特應(yīng)性皮炎)；免疫抑制劑例如他可莫司和特別是在炎性皮膚疾病中選用的吡美莫司；作用于其他受體的其他PGD2拮抗劑，例如DP拮抗劑；
4型磷酸二酯酶抑制劑，例如cilonilast；調(diào)節(jié)細(xì)胞因子產(chǎn)生的藥物，例如TNFα轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑；調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-5活性的藥物，例如阻斷性單克隆抗體和可溶性受體；PPAR-γ激動(dòng)劑，例如羅格列酮；
5-脂氧合酶抑制劑，例如齊留通。
27.一種制備如權(quán)利要求22到26任一所述藥物組合物的方法，包括將如權(quán)利要求1到16任一所述的化合物與藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體或賦形物聯(lián)合或結(jié)合。
28.一種產(chǎn)品，其包含如權(quán)利要求1到16任一所述的化合物和一種或多種權(quán)利要求26所述的藥劑作為聯(lián)合制劑，同時(shí)、分別或相繼用于治療由PGD2對(duì)CRTH2受體的作用所介導(dǎo)的疾病或情況。
29.如權(quán)利要求21的用途，其中該藥劑還包含一種用于治療由PGD2通過(guò)CRTH2和/或DP受體介導(dǎo)的疾病和情況的其他活性藥劑。
30.如權(quán)利要求29的用途，其中所述其他活性劑是如權(quán)利要求26所述的藥劑中的一種。
全文摘要
通式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑合物、絡(luò)合物及前藥可以用于治療變應(yīng)性疾病，例如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和特應(yīng)性皮炎。
文檔編號(hào)C07D401/00GK1867547SQ200480030071
公開(kāi)日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2004年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月14日
發(fā)明者戴維·米德?tīng)柮姿? 馬克·理查德·阿什湯, 愛(ài)德華·安德魯·博伊德, 弗雷德里克·阿瑟·布魯克菲爾德, 理查德·愛(ài)德華·阿默, 埃里克·羅伊·佩蒂弗 申請(qǐng)人:奧克薩根有限公司