專利名稱：通過抑制jnk治療或預防炎性或代謝性病癥的方法
本申請要求2003年3月24日提交的美國申請?zhí)?0/395,811的權益，美國申請?zhí)?0/395,811是2001年12月4日提交的美國申請?zhí)?0/004,645的部分繼續(xù)，美國申請?zhí)?0/004,645要求于2000年12月6日提交的美國臨時申請?zhí)?0/251,904的權益，各申請通過引用整體結合到本文中。
1.發(fā)明領域本發(fā)明廣泛涉及具有多種適應征功效包括Jun N-端激酶抑制劑活性的苯胺基嘧啶及其衍生物、有關組合物和方法。
2.發(fā)明背景通過使細胞暴露于環(huán)境壓力中或通過用促炎細胞因子處理細胞來激活Jun N-端激酶(JNK)途徑。JNK途徑的靶包括轉錄因子c-jun和ATF-2(Whitmarsh A.J.和Davis R.J..J.Mol.Med.74589-607，1996)。這些轉錄因子是堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)組的成員，它們以同源-和雜源-二聚體復合物與多種基因啟動子中的AP-1和AP-1-樣部位結合(Karin M.，Liu Z.G.和Zandi E.Curr Opin Cell Biol 9240-246，1997)。JNK與c-jun和ATF-2的N-端區(qū)域結合，使每個轉錄因子的激活區(qū)域內(nèi)的兩個部位磷酸化(Hibi M.，Lin A.，Smeal T.，Minden A.，Karin M.Genes Dev.72135-2148，1993；Mohit A.A.，Martin M.H.和Miller C.A.Neuron 1467-75，1995)。已確定三種JNK酶是不同基因的產(chǎn)物(Hibi等，同上；Mohit等，同上)。已鑒別十種不同的JNK同種型。這些代表三種不同基因的其它剪接形式JNK1、JNK2和JNK3。JNK1和JNK2在人組織中廣泛表達，而JNK3選擇性地在腦、心臟和睪丸中表達(Dong，C.，Yang，D.，Wysk，M.，Whitmarsh，A.，Davis，R.，F(xiàn)1avell，R.Science 2701-4，1998)。另一方面，剪接基因轉錄本產(chǎn)生四種JNK1同種型、四種JNK2同種型和兩種JNK3同種型。JNK1和JNK2在哺乳動物組織中廣泛表達，而JNK3幾乎只在腦中表達。通過JNK途徑成分的特異性相互作用和通過使用選擇性結合信號級聯(lián)的多種成分的支架蛋白實現(xiàn)JNK信號選擇。JIP-1(JNK-相互作用蛋白-1)與MAPK組件MLK→JNKK2→JNK12、JNK13結合。它不具備與其它多種MAPK級聯(lián)酶結合的親和力?？赡艽嬖谟糜谄渌麺APK信號級聯(lián)的不同支架蛋白以保持底物專一性。
JNKs通過在Thr-183和Tyr-185上雙磷酸化激活。兩種MAPKK水平酶JNKK1(又稱為MKK-4)和JNKK2(MKK-7)可在細胞中介導激活JNK(Lin A.，Minden A.，Martinetto H.，Claret F.-Z.，Lange-CarterC.，Mercurio F.，Johnson G.L.和Karin M.Science 268286-289，1995；Tournier C.，Whitmarsh A.J.，Cavanagh J.，Barrett T.和Davis R.J.Proc.Nat.Acad.Sci.USA 947337-7342，1997)。JNKK2特異性地使JNK磷酸化，而JNKK1也可磷酸化并活化p38。JNKK1和JNKK2均在哺乳動物組織中廣泛表達。JNKK1和JNKK2通過MEKK-1、MEKK-2、MEKK-3和MLK-3 MAPKKK酶激活(Lange-Carter C.A.，Pleiman C.M.，Gardner A.M.，Blumer K.J.和Johnson G.L.Science 260315-319，1993；Yan M.，Dai J.C.，Deak J.C.，Kyriakis J.M.，Zon L.I.，Woodgett J.R.和Templeton D.J.Nature 372798-781，1994；Deacon，K.和Blank，J.，J.Biol.Chem.27416604-16610，1999；Teramoto，H.，Coso，O.，Miyata，H.，Igishi，T.，Miki，T.和Gutkind，S.，J.Biol.Chem.27127225-27228，1996)。MEKK-1和MEKK-2均在哺乳動物組織中廣泛表達。
已證明多種疾病中JNK途徑被激活，提供將該途徑作為發(fā)現(xiàn)藥物的靶的理論基礎。此外，分子遺傳方法證實了該途徑在幾種疾病中所起的致病作用。例如，自身免疫性疾病和炎性疾病源自免疫系統(tǒng)的過度激活。激活的免疫細胞表達編碼炎性分子包括細胞因子、生長因子、細胞表面受體、細胞粘附分子和降解酶的多種基因。這些基因中的許多通過JNK途徑調(diào)節(jié)，通過激活轉錄因子AP-1和ATF-2包括TNFα、IL-2、E-選擇蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶例如膠原酶-1調(diào)節(jié)(Manning A.M.和Mecurio F.Exp.Opin.Invest.Drugs 6555-567，1997)。單核細胞、組織巨嗜細胞和組織肥大細胞是產(chǎn)生TNFα的關鍵來源。JNK途徑在細菌脂多糖興奮性巨嗜細胞，和在通過FceRII受體興奮的肥大細胞中調(diào)節(jié)TNFα產(chǎn)生(Swantek J.L.，Cobb M.H.，Geppert T.D.Mol.Cell.Biol.176274-6282，1997；Ishizuka，T.，TeredaN.，Gerwins，P.，Hamelmann E.，Oshiba A.，F(xiàn)anger G.R.，Johnson G.L.和Gelfland E.W.Proc.Nat.Acad.Sci.USA 946358-6363，1997)。抑制JNK激活有效調(diào)節(jié)從這些細胞中分泌的TNFα。因此，JNK途徑調(diào)節(jié)該關鍵促炎細胞因子的產(chǎn)生。Celltech Therapeutics Limited的國際公布號WO 98/18782公開了4-吡啶基-嘧啶化合物，按其描述這類化合物可用于預防和治療免疫疾病、與肥大細胞或嗜酸細胞有關的變應性疾病、以及與不適當激活血小板有關的疾病。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)促進類風濕性關節(jié)炎中的軟骨和骨侵蝕，和在其它自身免疫性疾病中促進全身性組織破壞。通過激活JNK途徑和AP-1調(diào)節(jié)誘導MMPs表達，包括MMP-3和MMP-9、II型和IV型膠原酶(Gum，R.，Wang，H.，Lengyel，E.，Jurez，J.和Boyd，D.Oncogene 141481-1493，1997)。在用TNFα、IL-1或Fas配體激活的人類風濕滑膜細胞中，JNK途徑被激活(Han Z.，Boyle D.L.，Aupperle K.R.，Bennett B.，Manning A.M.，F(xiàn)irestein G.S.J.Pharm.Exp.Therap.2911-7，1999；Okamoto K.，F(xiàn)ujisawa K.，Hasunuma T.，Kobata T.，Sumida T.和Nishioka K.Arth &Rheum 40919-92615，1997)。抑制JNK激活導致AP-1激活和膠原酶-1表達減少(Han等，同上)。因此在與類風濕性關節(jié)炎有關的細胞中，JNK途徑調(diào)節(jié)MMP表達。
不適當?shù)丶せ頣淋巴細胞引發(fā)和延長多種自身免疫性疾病，包括哮喘、炎性腸病和多發(fā)性硬化。JNK途徑在T細胞中通過抗原刺激和CD28受體共同刺激激活，并調(diào)節(jié)生長因子IL-2和細胞增殖產(chǎn)生(Su B.，Jacinto E.，Hibi M.，Kallunki T.，Karin M.，Ben-Neriah Y.Cell77727-736，1994；Fans M.，Kokot N.，Lee L.和Nel A.E.J.Biol.Chem.27127366-27373，1996)。CD28共同刺激和PMA/Ca2+離子載體激活后，JNKK1遺傳缺陷的小鼠外周T細胞表明增值和IL-2產(chǎn)生減少，為JNK途徑在這些細胞中的作用提供重要的證據(jù)(Nishina H.，Bachmann M.，Oliveria-dos-Santos A.J.等J.Exp.Med.186941-953，1997)。已知不存在副衛(wèi)細胞衍生的共同刺激信號時，通過抗原受體刺激激活的T細胞失去合成IL-2的能力，稱作克隆無反應性狀態(tài)。這是一個重要的過程，通過該過程自身反應性T細胞群從外周循環(huán)中消除。眾所周知，即使不改變JNK酶表達，無反應性T細胞也無法激活響應CD3-和CD28-受體共同刺激的JNK途徑(Li W.，Whaley C.D.，Mondino A.和Mueller D.L.Science 2711272-1276，1996)。近來，JNK-缺陷小鼠檢查表明JNK途徑在T細胞激活和T輔助1型和2型細胞的分化中起關鍵作用。剔除JNK1或JNK2的小鼠發(fā)育正常，表型不顯著。激活這些小鼠的天然CD4+T細胞無法產(chǎn)生IL-2，且增殖不良(Sabapathy，K，Hu，Y，Kallunki，T，Schreiber，M，David，J-P，Jochum，W，Wagner，E，Karin，M.Curr Biol 9116-125，1999)。在這些小鼠T細胞中誘導分化是可能的，產(chǎn)生Th1細胞(IFN-g和TNFβ產(chǎn)生者)和Th2效應細胞(IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13產(chǎn)生者)[22，23]。小鼠剔除JNK1或JNK2導致Th1效應細胞表達IFNg能力的選擇性缺陷。這提示在T細胞中JNK1和JNK2沒有多余的功能，它們在控制細胞生長、分化和死亡中起不同作用。因此，JNK途徑是調(diào)節(jié)T細胞響應抗原的的重要點。
心血管疾病(CVD)每年占全世界總死亡幾乎15％。血管壁生長調(diào)節(jié)異常導致血管性疾病例如動脈粥樣硬化和再狹窄，限制血液向生命器官流動。JNK途徑在血管細胞中通過致動脈粥樣化刺激激活，并調(diào)節(jié)局部細胞因子和生長因子產(chǎn)生(Yang，DD，Conze，D，Whitmarsh，AJ等，Immunity，9575，1998)。此外，血流、血液動力和血液體積的改變導致激活血管內(nèi)皮中的JNK，導致AP-1激活和促動脈粥樣硬化基因表達(Aspenstrom P.，Lindberg U.和Hall A.Curr.Biol.670-77，1996)。心臟、腎或腦局部缺血和與再灌注有關的局部缺血導致細胞死亡和疤痕形成，它們可最終導致充血性心力衰竭、腎衰竭或大腦機能障礙。在器官移植中，再灌注已局部缺血的供體器官導致白細胞介導的急性組織損傷和延緩移植機能。JNK途徑通過局部缺血和再灌注激活(Li Y.，Shyy J.，Li S.，Lee J.，Su B.，Karin M.，Chien S Mol.Cell.Biol.165947-5954，1996)，導致激活JNK應答基因和白細胞介導的組織損傷。在多種不同環(huán)境中，激活JNK可促進或抗細胞凋亡。局部缺血和再灌注后，JNK激活與心臟組織中增強細胞凋亡有關(Pombo CM，Bonventre JV，Avruch J，Woodgett JR，Kyriakis J.M，F(xiàn)orceT.J.Biol.Chem.2626546-26551，1994)。
癌癥的特征在于細胞生長、增殖和遷移失控。癌癥是導致500,000例死亡的第二大原因，估計美國1996年新增1百30萬病例。信號轉導途徑對細胞變形和癌癥的貢獻作用是普遍認同的觀念。導致AP-1的JNK途徑可能在癌癥中起至關重要的作用。在早期肺癌中，c-jun表達發(fā)生變化，且在非小細胞肺癌中可能介導生長因子信號(Yin T.，Sandhu G.，Wolfgang C.D.，Burrier A.，Webb R.L.，Rigel D.F.Hai T.和Whelan J.J.Biol.Chem.27219943-19950，1997)。在細胞中過度表達c-jun確實導致變形，從而阻斷c-jun活性抑制MCF-7群體形成(SzaboE.，Riffe M.，Steinberg S.M.，Birrer M.J.，Linnoila R.I.Cancer Res.56305-315，196)。DNA損傷劑、電離輻射和腫瘤壞死因子激活該途徑。除調(diào)節(jié)c-jun產(chǎn)生和活性外，激活JNK可調(diào)節(jié)p53磷酸化，因此可調(diào)節(jié)細胞周期進程(Chen T.K.，Smith L.M.，Gebhardt D.K.，Birrer M.J.，Brown P.H.Mol.Carcinogenesis 15215-226，1996)。與慢性髓細胞性白血病的t(9，22)費城染色體易位有關的癌基因BCR-Ab1激活JNK，導致造血細胞變形(Milne D.M.，Campbell L.E.，Campbell D.G.，MeekD W.J.Biol.Chem.2705511-5518，1995)。通過稱為JIP-1的自然產(chǎn)生的JNK抑制蛋白選擇性抑制JNK激活，阻斷BCR-Ab1表達引起的細胞變形(Raitano A.B.，Halpern J.R.，Hambuch T.M.，Sawyers C.L.Proc.Nat.Acad.Sci USA 9211746-11750，1995)。因此，JNK抑制劑可阻斷變形和腫瘤細胞生長。
還證實胰島素介導的疾病例如II型糖尿病和肥胖癥中涉及JNK(Hirosumi，J.等Nature 420333-336，2002；國際公布號WO02/085396)。不受理論限制，認為在胰島素受體底物(″IRS-1″)的Ser 307上磷酸化是TNF-α誘導和FFA-誘導胰島素抗性的原因(Hotamisigil，G.H.Science 271665-668，1996)。在肝細胞中胰島素抗性、其中在用TNF-α處理的細胞中出現(xiàn)IRS-1的Ser 307磷酸化增加的細胞模型中，該觀點得到證實(Hirosumi，J.同上)。還表明通過JNK抑制劑，TNF-α-誘導的Ser 307磷酸化被完全阻滯(同上)。其它研究證實抑制JNK途徑抑制了涉及特征在于胰島素抗性疾病的TNF-α脂解(國際公布號WO 99/53927)。
因此，本領域需要JNK途徑抑制劑。此外，需要含一種或多種抑制劑的藥用組合物以及治療對此類抑制劑敏感的動物病癥的方法。本發(fā)明滿足了這些需要并進一步提供了有關優(yōu)點。在本申請第2節(jié)中引用的任何參考文獻對本申請而言不認為是現(xiàn)有技術。
3.發(fā)明概述簡而言之，本發(fā)明廣泛涉及治療或預防JNK抑制敏感性病癥的方法，這類方法包括給予有需要的患者有效量的具有下式(I)的化合物包括其異構體、前藥和藥學上可接受的鹽 其中R1至R6定義同下。
式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽下文稱為“苯胺基嘧啶衍生物”。
一般而言，本發(fā)明涉及治療或預防JNK途徑抑制敏感性病癥的方法，這類方法包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
苯胺基嘧啶衍生物可用于治療或預防代謝性病癥，包括但不限于糖尿病(例如II型糖尿病、I型糖尿病、尿崩癥、糖尿病、成年型糖尿病、青少年糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、營養(yǎng)不良相關性糖尿病、趨酮癥性糖尿病或抗酮癥性糖尿病)；或肥胖癥(例如遺傳性肥胖癥、飲食性肥胖癥、激素相關性肥胖癥或藥物使用相關性肥胖癥)。
苯胺基嘧啶衍生物可用于治療或預防炎性病癥，包括但不限于聽力損失(例如源自外耳炎或急性中耳炎的聽力損失)；纖維變性相關性疾病(例如肺間質(zhì)纖維化、腎纖維化、囊性纖維化、肝纖維化、傷口愈合或灼傷愈合，其中所述灼傷是一度、二度或三度灼傷和/或熱、化學或電灼傷)；關節(jié)炎(例如類風濕性關節(jié)炎、類風濕性脊椎炎、骨關節(jié)炎或痛風)；變應性疾??；過敏性鼻炎；急性呼吸窘迫綜合征；哮喘；支氣管炎；炎性腸病(例如過敏性腸綜合征、粘液性結腸炎、潰瘍性結腸炎、節(jié)段性回腸炎、胃炎、食管炎、胰腺炎或腹膜炎)；或自身免疫性疾病(例如硬皮病、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、移植排斥、內(nèi)毒素性休克、膿毒癥、銀屑病、濕疹、皮炎或多發(fā)性硬化)。
苯胺基嘧啶衍生物還可用于治療或預防以下疾病肝病(例如肝炎、酒精引發(fā)的肝病、毒素引發(fā)的肝病、脂肪變性或硬化)；心血管疾病(例如動脈粥樣硬化、血管成形術后再狹窄、左心室肥大、心肌梗塞、慢性阻塞性肺病或中風)；局部缺血性損害(例如心臟、腎、肝或腦局部缺血性損害)；局部缺血-再灌注損傷(例如移植、手術創(chuàng)傷、低血壓、血栓形成或創(chuàng)傷損傷所致局部缺血-再灌注損傷)；神經(jīng)變性性疾病(例如癲癇、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化癥、外周神經(jīng)病、脊髓損傷或帕金森病)；或癌癥(例如以下器官的癌癥頭、頸、眼、口、喉、食管、胸、骨、肺、結腸、直腸、胃、前列腺、乳腺、卵巢、睪丸或其它生殖器官、皮膚、甲狀腺、血液、淋巴結、腎、肝、胰腺和腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥)。
在一個實施方案中，本發(fā)明治療或預防方法還包括給予有效量的另一種用于治療或預防本文中公開的疾病或障礙的藥物。在該實施方案中，其中其它治療藥物發(fā)揮療效的時間與苯胺基嘧啶衍生物發(fā)揮療效的時間重疊。
在一個實施方案中，本發(fā)明治療或預防代謝性病癥炎性病癥、肝病、心血管疾病、局部缺血性損害、神經(jīng)變性性疾病或癌癥的方法包括體內(nèi)抑制JNK。
在一個實施方案中，體內(nèi)抑制JNK包括體內(nèi)抑制TNF-α。
在一個實施方案中，JNK是JNK1。在另一個實施方案中，JNK是JNK2。在另一個實施方案中，JNK是JNK3。
通過參考以下詳細的描述和示例性實施例，本發(fā)明的這些和其它方面將是顯然的，這些實施例作為例證將說明本發(fā)明的非限定性實施方案。本文引用一些專利和其它文獻以更具體地描述本發(fā)明的各個方面。這些文獻中的每一篇通過引用整體結合到本文中。
4.發(fā)明詳述4.1定義本文中以上使用的術語具有以下含義“烷基”表示具有1至10個碳原子的直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基、環(huán)狀或非環(huán)狀烴，“低級烷基”具有相同含義，但只具有1至6個碳原子。代表性的飽和直鏈烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基等；飽和支鏈烷基包括異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基等。不飽和烷基在相鄰碳原子之間含至少一個雙鍵或三鍵(又分別稱為“烯基”或“炔基”)。代表性直鏈和支鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基等；代表性直鏈和支鏈炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1丁炔基等。代表性飽和環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等；不飽和環(huán)烷基包括環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基等。本文中的環(huán)烷基又稱為“碳環(huán)”環(huán)系統(tǒng)，包括具有8至14個碳原子的雙環(huán)和三環(huán)環(huán)系統(tǒng)，例如與一個或多個芳族(例如苯基)或非芳族(例如環(huán)己烷)碳環(huán)稠合的環(huán)烷基(例如環(huán)戊烷或環(huán)己烷)。
“鹵素”表示氟、氯、溴或碘。
“酮”表示羰基(即＝O)。
“芳基”表示芳族碳環(huán)部分例如-苯基或萘基。
“芳烷基”表示具有至少一個被芳基部分置換的烷基氫原子的烷基，例如芐基、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、-CH(苯基)2等。
“雜芳基”表示5元至10元芳族雜環(huán)，具有至少一個選自氮、氧和硫的雜原子，并含至少一個碳原子，包括單環(huán)和雙環(huán)環(huán)系統(tǒng)。代表性雜芳基為吡啶基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、噁唑基、苯并噁唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噁唑基、吡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基和喹唑啉基。
“雜芳基烷基”表示具有至少一個被雜芳基部分置換的烷基氫原子的烷基，例如-CH2吡啶基、-CH2嘧啶基等。
“雜環(huán)”表示含5至10個環(huán)原子的雜環(huán)。
“雜環(huán)”表示5元至7元單狀或7元至10元雙環(huán)飽和、不飽和或芳族雜環(huán)，其含有1至4個獨立選自氮、氧和硫的雜原子，其中氮和硫雜原子可任選被氧化，且氮雜原子可任選季銨化，包括其中以上任何雜環(huán)與苯環(huán)稠合的雙環(huán)。雜環(huán)可通過任何雜原子或碳原子連接。雜環(huán)包括定義同上的雜芳基。因此，除以上列舉的雜芳基外，雜環(huán)還包括嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、乙內(nèi)酰脲基、戊內(nèi)酰胺基、環(huán)氧乙烷基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫4-氮茚基、四氫嘧啶基(primidinyl)、四氫噻吩基、四氫噻喃基、四氫嘧啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基等。
“雜環(huán)烷基”表示具有至少一個被雜環(huán)置換的烷基氫原子的烷基，例如-CH2嗎啉基等。
本文中使用的術語“取代的”表示其中至少一個氫原子被取代基置換的任何以上基團(即芳基、芳烷基、雜環(huán)和雜環(huán)烷基)。在酮取代基(″C(＝O)″)的情況中，兩個氫原子被置換。取代基包括鹵素、羥基、烷基、取代的烷基(例如鹵代烷基、單或二取代的氨基烷基、烷氧基烷基等、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaRb、-NRaC(＝O)ORb-NRaSO2Rb、-ORa、-C(＝O)Ra-C(＝O)ORa-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)Ra、-OC(＝O)ORa、-OC(＝O)NRaRb-NRaSO2Rb或式-Y-Z-Ra基團，其中Y為烷二基，取代的烷二基或直鍵，Z為-O-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-N(Rb)-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-N(Rb)C(＝O)-、-C(＝O)N(Rb)-或直鍵，其中Ra和Rb相同或不同，獨立為氫、氨基、烷基、取代的烷基(包括鹵代烷基)、芳基、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基，或其中Ra和Rb與它們連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)。
“鹵代烷基”表示具有一個或多個被鹵素置換的氫原子的烷基，例如-CF3。
“羥烷基”表示具有一個或多個被羥基置換的氫原子的烷基，例如-CH2OH“磺酰基烷基”表示-SO2-(烷基)；“亞磺?；榛北硎?SO-(烷基)；“烷硫基”表示-S-(烷基)；
“羧基”表示-COOH。
“烷氧基”表示-O-(烷基)，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基等。
“患者”表示動物，包括但不限于動物例如牛、猴、馬、綿羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、犬、小鼠、大鼠、兔和豚鼠，并更優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
“?；北硎就榛?C＝O)。
“含氮非芳族雜環(huán)”表示嗎啉基、硫代嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、乙內(nèi)酰脲基、四氫4-氮茚基、四氫嘧啶基、噁唑烷基、噻唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基等。
當與苯胺基嘧啶衍生物聯(lián)合使用時，“有效量”為有效治療或預防病癥的量，例如通過給予JNK抑制劑可以治療或預防本文中所述的那些病癥。
“患者”包括動物(例如牛、馬、綿羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、犬、小鼠、大鼠、兔和豚鼠)，在一個實施方案中，哺乳動物為例如非靈長類和靈長類(例如猴和人)，在另一個實施方案中，哺乳動物為人。在某些實施方案中，患者為嬰兒、兒童、青少年或成人。
本文中使用的術語“前藥”為指進入動物體內(nèi)后代謝或轉化為活性形式的苯胺基嘧啶衍生物的任何衍生物。藥物化學領域的技術人員熟知前藥，前藥提供優(yōu)點例如增加吸收和延長半衰期。當例如羥基酯化或烷基化，或當羧基酯化時，可形成本發(fā)明的前藥。藥物釋放領域技術人員將容易認識到，通過適當選擇制備前藥衍生物的部分可控制苯胺基嘧啶衍生物的藥代動力學特性。
4.2本發(fā)明化合物與上所述，本發(fā)明涉及治療或預防JNK抑制敏感性病癥的方法，這些方法包括給予有需要的患者有效量的式(I)苯胺基嘧啶衍生物包括其異構體、前藥和藥學上可接受的鹽 其中R1為任選被1至4個獨立選自R7的取代基取代的芳基或雜芳基；R2為氫；R3為氫或低級烷基；R4代表1至4個任選取代基，其中各取代基相同或不同，并獨立選自鹵素、羥基、低級烷基和低級烷氧基；R5和R6相同或不同，并獨立為-R8、-(CH2)aC(＝O)R9、-(CH2)aC(＝O)OR9、-(CH2)aC(＝O)NR9R10、-(CH2)aC(＝O)NR9(CH2)bC(＝O)R10、-(CH2)aNR9C(＝O)R10、(CH2)aNR11C(＝O)NR9R10、-(CH2)aNR9R10、-(CH2)aOR9、-(CH2)aSOcR9或-(CH2)aSO2NR9R10；或R5和R6與它們連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；R7每次出現(xiàn)時，獨立為鹵素、羥基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、酰氧基、烷硫基、亞磺?；榛⒒酋；榛⒘u烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、-C(＝O)OR8、-OC(＝O)R8、-C(＝O)NR8R9、-C(＝O)NR8OR9、-SOcR8、-SOcNR8R9、-NR8SOcR9、-NR8R9、-NR8C(＝O)R9、-NR8C(＝O)(CH2)bOR9、-NR8C(＝O)(CH2)bR9、-O(CH2)bNR8R9或與苯基稠合的雜環(huán)；R8、R9、R10和R11相同或不同，且每次出現(xiàn)時，獨立為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基；或R8和R9與它們連接的一個或多個原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；a和b相同或不同，且每次出現(xiàn)時，獨立選自0、1、2、3或4；和c每次出現(xiàn)時，為0、1或2。
在本發(fā)明的一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基或雜芳基，條件是所述雜芳基不為吡啶基。當R1被取代時，它被定義同下的一個或多個取代基取代。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺(sulfonamide)取代。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、噁唑基、苯并噁唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噁唑基、吡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基或喹唑啉基。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基或雜芳基，條件是所述雜芳基不為咪唑并[1，2a]吡啶-3-基或吡唑并[2，3a]吡啶-3-基。當R1被取代時，它被定義同下的一個或多個取代基取代。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺取代。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基，優(yōu)選苯基。當R1為取代的芳基時，取代基定義同下。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺取代。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R5和R6與它們連接的氮原子一起形成取代的或未取代的含氮非芳族雜環(huán)，優(yōu)選哌嗪基、哌啶基或嗎啉基。
當R5和R6與它們連接的氮原子一起形成取代的哌嗪基、哌啶基或嗎啉基時，該哌嗪基、哌啶基或嗎啉基被一個或多個定義同下的取代基取代。當被取代時，優(yōu)選取代基為烷基、氨基、烷基氨基、烷基醚、?；?、吡咯烷基或哌啶基。
在本發(fā)明的一個實施方案中，在式(I)苯胺基嘧啶衍生物中，R3為氫，R4不存在，本發(fā)明化合物具有以下式(II) 在本發(fā)明一個更具體的實施方案中，在式(II)苯胺基嘧啶衍生物中，R1為任選被R7取代的苯基，具有以下式(III) 在本發(fā)明的還再一個實施方案中，在式(III)苯胺基嘧啶衍生物中，R7處于相對于嘧啶的對位，如下式(IV)代表 4.3制備本發(fā)明化合物苯胺基嘧啶衍生物通?？捎帽绢I域技術人員已知的有機合成技術、以下統(tǒng)用技術和實施例中描述的方法獲得。為此，可按照以下反應流程1至9制備苯胺基嘧啶衍生物
反應流程1 (過硫酸氫鉀制劑，mCPBA)可用二甲基甲酰胺縮醛例如二甲基甲酰胺二甲基縮醛或二甲基甲酰胺二乙基縮醛處理適當取代的甲基酮，得到相應的β-二甲氨基丁烯酮。在堿例如甲醇鈉的存在下，用硫脲處理氨基丁烯酮，隨后用烷基鹵例如甲基碘烷基化，得到4-取代的2-烷硫基嘧啶。用有機和無機氧化劑例如間-氯過苯甲酸或過硫酸氫鉀制劑(oxone)氧化該硫醚，得到砜，使該砜與對-氨基羰基苯胺縮合，反應形成需要的苯胺基嘧啶衍生物。
反應流程2 類似地，苯胺基嘧啶衍生物可用2-氯嘧啶衍生物制備。因此，使β-二甲氨基丁烯酮與脲縮合，隨后用氯化劑例如磷酰氯處理，得到4-取代的2-氯嘧啶。進一步用取代的苯胺處理，得到需要的苯胺基嘧啶衍生物。
反應流程3 苯胺基嘧啶衍生物也可通過使β-二甲氨基丁烯酮與適當取代的胍縮合制備。該必需的胍可在酸的存在下，通過使苯胺與腈氨反應合成或與1-吡唑基甲脒(pyrazoloamidine)反應合成。
反應流程4 使b-氨基酮與烷氧基羰基苯基胍環(huán)合，得到4-取代的2-(4-羧基苯基)氨基嘧啶。使苯甲酸衍生物與適當?shù)陌房s合，得到需要的酰胺。
反應流程5 使苯甲酸與N-Boc-哌嗪縮合，隨后用酸例如鹽酸脫去叔丁氧基羰基保護，得到哌嗪酰胺。隨后與羧酸衍生物縮合，得到二?；哙?bisacylpiper)。
反應流程6 與磺酰氯進行類似反應，得到相應的磺酰胺化合物。
反應流程7 具有對-烷基-和芳硫基的苯乙酮可通過使對-氯苯乙酮與烷基硫醇和芳基硫酚(thiol)反應制備。
反應流程8 具有對-烷基-和芳基亞磺?；谋桨坊奏ぱ苌锟赏ㄟ^用氧化劑例如過硫酸氫鉀制劑控制氧化硫醚制備。
反應流程9 具有對-烷基-和芳基磺?；谋桨坊奏ぱ苌锟赏ㄟ^用氧化劑例如過硫酸氫鉀制劑氧化硫醚制備。
苯胺基嘧啶衍生物可以是藥學上可接受的鹽或游離堿形式。游離堿的酸加成鹽可通過本領域熟知的方法制備，可用有機和無機酸形成。合適的有機酸包括馬來酸、富馬酸、苯甲酸、抗壞血酸、琥珀酸、甲磺酸、乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、葡糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、羥基乙酸、谷氨酸和苯磺酸。合適的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。其它鹽包括硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、glucaronate、蔗糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1，1′-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。術語“藥學上可接受的鹽”將包括任何和所有可接受的鹽形式。
藥學上可接受的鹽可通過常規(guī)和已知技術例如通過使本發(fā)明化合物與以上公開的合適酸反應形成。這類鹽典型地在中等溫度下高產(chǎn)率地形成，通常通過僅在合成的最后步驟經(jīng)適當?shù)乃嵝韵礈旆蛛x化合物來制備?？蓪⑿纬甥}的酸溶于適當?shù)挠袡C溶劑或含水有機溶劑中，例如烷醇、酮或酯。另一方面，如果需要苯胺基嘧啶衍生物為游離堿形式，其可按照已知技術通過最后的堿性洗滌步驟分離。例如，制備鹽酸鹽的典型技術是將游離堿溶于合適的溶劑中，該溶液經(jīng)如分子篩徹底干燥，然后鼓泡通入氯化氫氣體。
苯胺基嘧啶衍生物也存在各種異構體形式，包括構型異構體、幾何異構體和構象異構體，以及存在各種互變異構體形式，尤其氫原子連接點不同的那些異構體形式。本文中使用的術語“異構體”將包括化合物的所有異構體形式，包括化合物的互變異構體形式。
4.4使用方法可用苯胺基嘧啶衍生物或含苯胺基嘧啶衍生物的藥用組合物治療的病癥包括JNK途徑抑制敏感性的任何病癥，并因此從這種抑制劑給藥中受益。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療或預防代謝性病癥的方法，包括但不限于糖尿病(例如II型糖尿病、I型糖尿病、尿崩癥、糖尿病、成年型糖尿病、青少年糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、營養(yǎng)不良相關性糖尿病、趨酮癥性糖尿病或抗酮癥性糖尿病)；或肥胖癥(例如遺傳性肥胖癥、飲食性肥胖癥、激素相關性肥胖癥或藥物使用相關性肥胖癥)，這些方法包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療或預防炎性病癥的方法，包括但不限于聽力損失(例如源自外耳炎或急性中耳炎的聽力損失)；纖維變性相關性疾病(例如肺間質(zhì)纖維化、腎纖維化、囊性纖維化、肝纖維化、傷口愈合或灼傷愈合，其中灼傷是一度、二度或三度灼傷和/或熱、化學或電灼傷)；關節(jié)炎(例如類風濕性關節(jié)炎、類風濕性脊椎炎、骨關節(jié)炎或痛風)；變應性疾病；過敏性鼻炎；急性呼吸窘迫綜合征；哮喘；支氣管炎；炎性腸病(例如過敏性腸綜合征、粘液性結腸炎、潰瘍性結腸炎、節(jié)段性回腸炎、胃炎、食管炎、胰腺炎或腹膜炎)；或自身免疫性疾病(例如硬皮病、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、移植排斥、內(nèi)毒素性休克、膿毒癥、銀屑病、濕疹、皮炎或多發(fā)性硬化)，這些方法包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療或預防以下疾病的方法肝病(例如肝炎、酒精引發(fā)的肝病、毒素引發(fā)的肝病、脂肪變性或硬化)；心血管疾病(例如動脈粥樣硬化、血管成形術后再狹窄、左心室肥大、心肌梗塞、慢性阻塞性肺病或中風)；局部缺血性損害(例如心臟、腎、肝或腦局部缺血性損害)；局部缺血-再灌注損傷(例如移植、手術創(chuàng)傷、低血壓、血栓形成或創(chuàng)傷損傷所致局部缺血-再灌注損傷)；神經(jīng)變性性疾病(例如癲癇、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化癥、外周神經(jīng)病、脊髓損傷或帕金森病)；或癌癥(例如以下器官的癌癥頭、頸、眼、口、喉、食管、胸、骨、肺、結腸、直腸、胃、前列腺、乳腺、卵巢、睪丸或其它生殖器官、皮膚、甲狀腺、血液、淋巴結、腎、肝、胰腺和腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥)，這類方法包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療或預防以下疾病的方法外耳炎、急性中耳炎、聽力損失、肺間質(zhì)纖維化、肝纖維化、腎纖維化、傷口愈合或灼傷愈合(其中灼傷是一度、二度或三度灼傷和/或熱、化學或電灼傷)、慢性阻塞性肺病、過敏性鼻炎、急性呼吸窘迫綜合征、全身性紅斑狼瘡、腎病、胰腺炎、腹膜炎、膿毒癥、酒精或毒素引發(fā)的肝病、硬化癥、脂肪變性或局部缺血-再灌注損傷，這類方法包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及苯胺基嘧啶衍生物在制備用于治療或預防JNK抑制敏感性疾病的藥物中的用途。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及苯胺基嘧啶衍生物在制備用于治療或預防代謝性病癥的藥物中的用途，所述代謝性病癥包括但不限于糖尿病(例如II型糖尿病、I型糖尿病、尿崩癥、糖尿病、成年型糖尿病、青少年糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、營養(yǎng)不良相關性糖尿病、趨酮癥性糖尿病或抗酮癥性糖尿病)；或肥胖癥(例如遺傳性肥胖癥、飲食性肥胖癥、激素相關性肥胖癥或藥物使用相關性肥胖癥)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及苯胺基嘧啶衍生物在制備用于治療或預防炎性病癥的藥物中的用途，所述炎性病癥包括但不限于聽力損失(例如源自外耳炎或急性中耳炎的聽力損失)；纖維變性相關性疾病(例如肺間質(zhì)纖維化、腎纖維化、囊性纖維化、肝纖維化、傷口愈合或灼傷愈合，其中灼傷是一度、二度或三度灼傷和/或熱、化學或電灼傷)；關節(jié)炎(例如類風濕性關節(jié)炎、類風濕性脊椎炎、骨關節(jié)炎或痛風)；變應性疾病；過敏性鼻炎；急性呼吸窘迫綜合征；哮喘；支氣管炎；炎性腸病(例如過敏性腸綜合征、粘液性結腸炎、潰瘍性結腸炎、節(jié)段性回腸炎、胃炎、食管炎、胰腺炎或腹膜炎)；或自身免疫性疾病(例如硬皮病、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、移植排斥、內(nèi)毒素性休克、膿毒癥、銀屑病、濕疹、皮炎或多發(fā)性硬化)，所述用途包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及苯胺基嘧啶衍生物在制備用于治療或預防以下疾病的藥物中的用途肝病(例如肝炎、酒精引發(fā)的肝病、毒素引發(fā)的肝病、脂肪變性或硬化)；心血管疾病(例如動脈粥樣硬化、血管成形術后再狹窄、左心室肥大、心肌梗塞、慢性阻塞性肺病或中風)；局部缺血性損害(例如心臟、腎、肝或腦局部缺血性損害)；局部缺血-再灌注損傷(例如移植、手術創(chuàng)傷、低血壓、血栓形成或創(chuàng)傷損傷所致局部缺血-再灌注損傷)；神經(jīng)變性性疾病(例如癲癇、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化癥、外周神經(jīng)病、脊髓損傷或帕金森病)；或癌癥(例如以下器官的癌癥頭、頸、眼、口、喉、食管、胸、骨、肺、結腸、直腸、胃、前列腺、乳腺、卵巢、睪丸或其它生殖器官、皮膚、甲狀腺、血液、淋巴結、腎、肝、胰腺和腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥)，該用途包括給予有需要的患者有效量的苯胺基嘧啶衍生物。
在一個實施方案中，本發(fā)明的治療或預防方法還包括給予有效量的另一種用于治療或預防本文中公開的疾病或病癥的治療藥物。在該實施方案中，另一種治療藥物發(fā)揮療效的時間與苯胺基嘧啶衍生物發(fā)揮療效的時間重疊。
在一個實施方案中，治療或預防代謝性病癥炎性病癥、肝病、心血管疾病、局部缺血性損害、神經(jīng)變性性疾病或癌癥的方法包括體內(nèi)抑制JNK。
在一個實施方案中，體內(nèi)抑制JNK包括體內(nèi)抑制TNF-α。
在一個實施方案中，JNK是JNK1。在另一個實施方案中，JNK是JNK2。在另一個實施方案中，JNK是JNK3。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基或雜芳基，條件是雜芳基不為吡啶基。當R1被取代時，它被一個或多個定義同上的取代基取代。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺取代。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、噁唑基、苯并噁唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噁唑基、吡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基或喹唑啉基。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基或雜芳基，條件是雜芳基不為咪唑并[1，2a]吡啶-3-基或吡唑并[2，3a]吡啶-3-基。當R1被取代時，它被一個或多個定義同上的取代基取代。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺取代。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R1為取代的或未取代的芳基，優(yōu)選苯基或萘基。當R1為取代的芳基時，它被一個或多個定義同上的取代基取代。當被取代時，優(yōu)選R1被鹵素、砜或磺酰胺取代。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，在結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物中，R5和R6與它們連接的氮原子一起形成取代的或未取代的含氮非芳族雜環(huán)。
在本發(fā)明方法的另一個實施方案中，含氮非芳族雜環(huán)為哌嗪基、哌啶基或嗎啉基。當含氮非芳族雜環(huán)為取代的哌嗪基、哌啶基或嗎啉基環(huán)時，取代基的定義同上。當被取代時，優(yōu)選取代基為烷基、氨基、烷基氨基、烷基醚、?；?、吡咯烷基或哌啶基。
當用于本發(fā)明方法時，本發(fā)明苯胺基嘧啶衍生物可作為任選包含藥學上可接受載體或溶媒的組合物的成分給予。
苯胺基嘧啶衍生物還可與細胞毒藥物或放射療法聯(lián)合用于癌癥輔助治療。
4.5給藥與藥用組合物可用常規(guī)和熟知的制劑例如膠囊劑、微囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、錠劑、丸劑、栓劑、注射劑、混懸劑和糖漿劑經(jīng)口或腸胃外給予苯胺基嘧啶衍生物。給藥前，通常將苯胺基嘧啶衍生物配制成含有效劑量的一種或多種這類化合物和一種(或多種)藥學上可接受載體的組合的藥用組合物。這方面的合適制劑可通過一般采用以下常規(guī)有機或無機添加劑的方法制備例如賦形劑(例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石粉、磷酸鈣或碳酸鈣)、粘合劑(例如纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)、崩解劑(例如淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、碳酸氫鈉、磷酸鈣或檸檬酸鈣)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、輕質(zhì)無水sicilicacid、滑石粉或十二烷基硫酸鈉)、調(diào)味劑(例如檸檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橙粉)、防腐劑(例如苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯)、穩(wěn)定劑(例如檸檬酸、檸檬酸鈉或乙酸)、懸浮劑(例如甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸鋁)、分散劑(例如羥丙基甲基纖維素)、稀釋劑(例如水)和/或基質(zhì)蠟(例如可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。
在劑型中的苯胺基嘧啶衍生物的量可以不同，取決于多種因素，例如但不限于給予患者的途徑。但是，本發(fā)明典型的劑型包含苯胺基嘧啶衍生物的量為約0.10mg至約3500mg、約1mg至約2500mg、約10mg至約500mg、約25mg至約250mg、約50mg至約100mg。典型的劑型包含苯胺基嘧啶衍生物的量為約0.1、1、2、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、25、50、100、150、200、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000或3500mg。在一個特別的實施方案中，劑型包含1-吡唑基蒽酮衍生物的量為約1、2、5、10、25、50、100、250或500mg。在一個具體的實施方案中，劑型包含苯胺基嘧啶衍生物的量為約5、10、25或50mg。
此外，苯胺基嘧啶衍生物的作用可通過適當?shù)闹苿┭泳徎蜓娱L。例如，可制備緩慢溶解的苯胺基嘧啶衍生物的小丸并加入片劑或膠囊中?？赏ㄟ^制備幾種溶出速率不同的小丸并將這些小丸的混合物裝入膠囊中來改善該技術。片劑或膠囊可包薄膜衣，該薄膜衣在可預知的時間內(nèi)可阻止溶出。甚至可通過將化合物溶于或懸浮于油性或乳化的溶媒中制備長效腸胃外制劑，這些溶媒使化合物在血清中僅緩慢分散。
在某些實施方案中，苯胺基嘧啶衍生物可與例如至少一種其它治療藥物聯(lián)合用作輔助治療。苯胺基嘧啶衍生物和其它治療藥物可疊加作用，或更優(yōu)選協(xié)同作用。在一個優(yōu)選的實施方案中，同時給予苯胺基嘧啶衍生物和另一種治療藥物，該治療藥物可以是含苯胺基嘧啶衍生物的同一組合物的一部分或為與含苯胺基嘧啶衍生物的組合物不同的組合物。在另一個實施方案中，苯胺基嘧啶衍生物在另一種治療藥物給藥前或給藥后給藥。由于苯胺基嘧啶衍生物用于治療的許多疾病是慢性病，在一個實施方案中，聯(lián)合療法涉及交替給予苯胺基嘧啶衍生物和另一種治療藥物。給予苯胺基嘧啶衍生物或另一種治療藥物的延續(xù)時間可以是例如1個月、3個月、6個月、1年或更長時間，例如患者終生。在某些實施方案中，當本發(fā)明組合物與可能產(chǎn)生不良副作用包括但不限于毒性的另一種治療藥物同時給藥時，另一種治療藥物最好按引起不良副作用的閾值以下的劑量給藥。
另一種治療藥物可以是抗炎藥物。有效的抗炎藥物包括但不限于非甾體抗炎藥物，例如水楊酸、乙酰水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酸酯、奧沙拉秦、柳氮磺吡啶、對乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸鈉、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸(dichlofenac)、布洛芬、萘普生、萘普生鈉、非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬(flurbinprofen)、噁丙嗪、吡羅昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈噁昔康、pivoxicam、替諾昔康、萘丁美酮(nabumetome)、保泰松、羥布宗、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗和尼美舒利；白三烯拮抗劑包括但不限于齊留通、金硫葡糖、硫代蘋果酸金鈉以及金諾芬；和其它抗炎藥物包括但不限于秋水仙堿、別嘌醇、丙磺舒、磺吡酮和苯溴馬隆。有效治療關節(jié)炎包括類風濕性關節(jié)炎的抗炎藥物包括依那西普、英夫利昔單抗、anarkinra、塞來考昔和羅非考昔。
另一種治療藥物可以是抗癌藥物。有效的抗癌藥物包括但不限于氮芥類，例如環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、曲磷胺和苯丁酸氮芥；亞硝基脲類例如卡莫司汀(BCNU)和洛莫司汀(CCNU)；烷基磺酸鹽(酯)類例如白消安和曲奧舒凡；三氮烯類例如達卡巴嗪；含鉑化合物例如錫鉑和卡鉑；長春花生物堿例如長春新堿、長春堿、長春地辛和長春瑞濱；紫杉烷類化合物(taxoids)例如紫杉醇和多西他賽(Docetaxol)；表鬼臼毒素(epipodophyllins)例如依托泊苷、替尼泊苷、托泊替康、9-氨基喜樹堿、camptoirinotecan和克立那托；絲裂霉素類例如絲裂霉素C；DHFR抑制劑例如甲氨蝶呤和三甲曲沙；IMP-脫氫酶抑制劑例如麥考酚酸、噻唑呋啉(Tiazofurin)、利巴韋林和EICAR；核苷酸還原酶抑制劑例如羥基脲和去鐵胺；尿嘧啶類似物例如5-氟尿嘧啶、氟尿苷、去氧氟尿苷和雷替曲塞(Ratitrexed)；胞嘧啶類似物例如阿糖胞苷(ara C)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)和氟達拉濱；嘌呤類似物例如巰嘌呤和硫代鳥嘌呤；抗雌激素類例如他莫昔芬、雷洛昔芬和甲地孕酮；LHRH激動劑例如諾雷德(goscrclin)和醋酸亮丙立德；抗雄激素例如氟他胺和比卡魯胺；維生素D3類似物例如B 1089、CB 1093和KH 1060；光動力治療藥物例如vertoporfin(BPD-MA)、酞菁、光敏劑Pc 4和脫甲氧基竹紅菌甲素(hypocrellin A)(2BA-2-DMHA)；細胞因子例如α-干擾素、γ-干擾素和腫瘤壞死因子；異戊二烯化抑制劑例如洛伐他??；多巴胺能神經(jīng)毒素例如1-甲基-4-苯基吡啶鎓離子；細胞周期抑制劑例如星孢素；放線菌素例如放線菌素D和放線菌素D(Dactinomycin)；博來霉素例如博來霉素A2、博來霉素B2和培洛霉素；蒽環(huán)霉素例如柔紅霉素、多柔比星(阿霉素)、伊達比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星和米托蒽醌；MDR抑制劑例如維拉帕米；以及Ca2+ATP酶抑制劑例如毒胡蘿卜素(thapsigargin)。
另一種治療藥物還可以是抗生素(antiobiotic)(例如萬古霉素、青霉素、羥氨芐青霉素、氨芐青霉素、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢克肟、利福平、甲硝唑、強力霉素或鏈霉素)。另一種治療藥物也可以是PDE 4抑制劑(例如羅氟司特或咯利普蘭)。另一種治療藥物也可以是抗組胺藥(例如賽克力嗪、羥嗪、異丙嗪或苯海拉明)。另一種治療藥物也可以是抗瘧藥(例如青蒿素、蒿甲醚、artsunate、磷酸氯喹、鹽酸甲氟喹、海克多西環(huán)素、鹽酸氯胍、阿托伐醌或鹵泛群)。另一種治療藥物還可以是α-替加色羅(drotrecogin)。
提供以下實施例用于非限定性舉例說明。為此，應注意可能從與公認的這類有機化合物的縮寫符號一致的所示結構中省略了一個或多個氫原子，且本領域技術人員將容易地認識到它們的存在。
通過如下詳述的兩種方法中的一種得到以下實施例的保留時間數(shù)據(jù)方法A柱YMC Pro C-18，3.0μ球形硅膠，4.0×50mm，孔徑120。
梯度0-10min，20％A-90％A線性二元梯度。
流速2.0mL/min。
流動相A，0.1％甲酸/乙腈；B，0.1％三氟乙酸/水。
方法B柱YMC ODS-A，5.0μ球形硅膠，4.6×250mm，孔徑120。
梯度0-10min，20％A-90％A線性二元梯度，隨后10-25min，100％A。
流速1.0mL/min。
流動相A，0.1％三氟乙酸/乙腈；B，0.1％三氟乙酸/水。
4.6實施例實施例1合成4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酰胺 (2E)-3-(二甲氨基)-1-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮將1-(4-氯苯基)乙-1-酮(3.0g，19.3mmol)和N，N，二甲基甲酰胺二異丙基縮醛(20ml)的溶液在150℃下加熱16小時。冷卻該反應混合物至0℃，用己烷(20ml)處理。通過過濾收集得到的固體，用己烷洗滌，得到標題化合物EI-MS(m/z)209[M+1]+。
4-(4-氯苯基)嘧啶-2-硫酚向(2E)-3-(二甲氨基)-1-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮(1.5g，7.2mmol)的乙醇(25ml)溶液中加入硫脲(0.60g，7.9mmol)和碳酸鉀(K2CO3)(1.19g.8.63mmol)。將得到的懸浮液保持加熱至85℃保持12小時，然后冷卻至環(huán)境溫度。收集得到的固體，用水和己烷徹底洗滌，得到淺褐色固體EI-MS(m/z)222[M+1]+。
4-(4-氯苯基)-2-甲硫基嘧啶將4-(4-氯苯基)嘧啶-2-硫酚(1.2g，5.39mmol)溶于10ml氫氧化鉀(0.453g，5.39mmol)水溶液。在環(huán)境溫度下，加入甲基碘(503μl，5.39mmol)，攪拌該反應混合物30分鐘。得到的白色固體通過過濾收集，用少量水和己烷洗滌，得到標題化合物EI-MS(m/z)237[M+1]+。
4-(4-氯苯基)-2-(甲磺?；?嘧啶向4-(4-氯苯基)-2-甲硫基嘧啶(1.1g，4.65mmol)的丙酮(30ml)和水(10ml)溶液中加入過硫酸氫鉀制劑(oxone)(7.14g，11.62mmol)。攪拌該反應混合物18小時，然后用水稀釋，萃取到二氯甲烷中。萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到白色固體EI-MS(m/z)269[M+1]+。
4-{(4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基)氨基}苯甲酰胺在密封容器中，將4-(4-氯苯基)-2-(甲基磺?；?嘧啶(0.10g，0.37mmol)和4-氨基苯甲酰胺的2-丙醇(3ml)溶液加熱至120℃保持14小時。粗物質(zhì)濃縮，通過制備HPLC純化，得到標題化合物，為淺褐色固體LC/MS保留時間；6.30min(方法A)，M+1；325。
實施例2合成4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酰胺的另一種方法 N-{(4-氨基羰基)苯基}胍硝酸鹽向4-氨基羰基苯胺(20g，147mmol)和腈氨(14.2g，338mmol)在70mL乙醇中的懸浮液中滴加入濃硝酸(20mL)。將該反應混合物加熱回流過夜，然后冷卻。蒸發(fā)揮發(fā)性物質(zhì)，得到稠油狀物。將該殘余物溶于二氯甲烷和甲醇，得到黃色固體。該物質(zhì)過濾，用乙醚和水洗滌，在50℃下真空干燥，得到需要的產(chǎn)物(17.5g，66％收率)LC/MS保留時間；0.63min(方法A)，M+1；179。
4-{(4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基)氨基}苯甲酰胺在密閉的容器中，將(2E)-3-(二甲氨基)-1-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮(0.10g，0.48mmol)、4-(脒基氨基)苯甲酰胺硝酸鹽(0.116g，0.48mmol)和碳酸鉀(0.132g，0.96mmol)的乙醇(10ml)溶液加熱至120℃過夜。將該反應混合物冷卻至室溫，收集得到的固體，然后用乙醇、水和乙醚洗滌，得到標題化合物，為淺褐色固體，在所有的方面都與實施例1中制備的化合物相同。
實施例3合成代表性化合物下列化合物以適當?shù)募谆獮樵?，按實施?方法制備。

















實施例4合成4-[(4-{4-[(4-氯苯基)磺酰基]苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺
向?qū)β缺搅蚍?1)(3.2g，0.022mol)的DMF(40mL)溶液中加入NaH(60％礦物油分散體，0.8g)。冒泡停止后，加入對氯苯硫酚(0.011mol，0.55當量)。然后在110℃下攪拌該溶液3h。將該混合物冷卻至室溫，然后用乙醚(150mL)稀釋。該醚懸浮液用5％NaOH(水溶液50mL)、3％HCl(水溶液，2×50mL)洗滌，過濾，濃縮，得到2.88g對氯苯硫基苯乙酮(2)(100％)。然后將二芳基硫醚(2)溶于丙酮/水(4∶1，v/v，100mL)。將OXONE(13.5g，2.2當量)加入該溶液。在室溫下，攪拌反應物4h。此后，真空除去丙酮。該混合物用乙醚(100mL)和水(100mL)稀釋。振搖混合物，分離各液層。醚層干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到2.02g(62％)砜3。然后將砜(3)溶于二甲基甲酰胺二甲基縮醛(15mL)，加熱至110℃保持12h。然后濃縮反應混合物，除去過量二甲基甲酰胺二甲基縮醛。將一部分中間體烯-氨基酮(0.38g，1.09mmol)溶于乙醇(20mL)。向該溶液中加入K2CO3(0.45g，3當量)和4-胍基(guanadino)苯甲酰胺(4)(0.26g，1當量)。在密封管中，將該反應混合物在100℃下加熱12h。然后冷卻混合物至室溫，用水(30mL)稀釋，然后過濾。固體用水和乙醇洗滌。一部分該物質(zhì)通過制備HPLC純化，得到15mg需要的化合物，通過分析HPLC表明其純度為100％。LCMS(M+H＝465.0@6.47min。(方法A))。
實施例5合成4-{(4-[4-(4-吡啶基磺?；?苯基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺 以上化合物以2-巰基吡啶和適當?shù)牧虼?酚)為原料，按實施例4方法制備。LCMS(M+H＝432.1，@5.50min。(方法B))。
實施例6合成4-({4-[4-(2-吡啶基磺酰基)苯基]}嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
以上化合物以2-巰基吡啶和適當?shù)牧虼?酚)為原料，按實施例4方法制備。LCMS(M+H＝432.0，@5.58min。(方法B))。
實施例7合成4-({4-[4-(3-吡啶基磺?；?苯基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺 以上化合物以3-巰基吡啶和適當?shù)牧虼?酚)為原料，按實施例4方法制備。LCMS(M+H＝432.1，@5.55min。(方法B))。
實施例8合成4-({4-[4-(3-羥基丙硫基)苯基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺 以上化合物以3-巰基丙醇和適當?shù)牧虼?酚)為原料，按實施例4方法制備。LCMS(M+H＝381.0，@5.55min。(方法B))。
實施例9合成4-[(4-{4-[(3-羥丙基)磺?；鵠苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺 向3-巰基丙醇(5g，0.054mol)的DMF(40mL)溶液中加入NaH(2.2g，60％礦物油分散體)。冒泡停止后，加入對氯苯乙酮(5.25mL，0.041mol，0.75當量)，將混合物在100℃下攪拌3h。冷卻反應，用乙醚(200mL)稀釋，依次用5％HCl(水溶液)(2×30mL)、水(2×50mL)、鹽水(40mL)洗滌。醚層干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到硫基芳基酮(5)(6.1g，0.29mol，72％)。將酮(5)(0.72g，3.4mmol)溶于丙酮/水(4∶1 v/v，20mL)。加入OXONE(4.2g)，攪拌混合物2h。然后濃縮混合物，用乙醚(75mL)稀釋，依次用水(3×50mL)、鹽水(50mL)洗滌。然后醚層干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到芳基砜(6)。標題化合物按前述實施例4方法用酮(6)制備，得到39mg(3％)分析純物質(zhì)。LCMS(M+H＝413.0@5.04min。(方法A))。
實施例10合成4-({4-[4-(3-嗎啉-4-基丙硫基)苯基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
然后將苯乙酮(5)溶于甲苯(50mL)。向該溶液中加入乙二醇(2.6mL，2當量)和對甲苯磺酸(0.7g)。反應用Dean Stark分水器回流2-3h。共沸除去水后，冷卻反應，然后用10％NaHCO3(水溶液50mL)、水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。有機萃取液干燥(MgSO4)，過濾，濃縮。然后將粗縮醛溶于CH2Cl2(20mL)。在另一個燒瓶中，將(COCl)2(2.26mL，26.0mmol)溶于CH2Cl2(20mL)，冷卻至-78℃。然后將DMSO(3.7mL，52.0mmol)/CH2Cl2(5mL)溶液滴加入該冷溶液中。攪拌該混合物2min，然后，將該粗縮醛加入CH2Cl2(20mL)。攪拌15min后，緩慢加入Et3N(16.5mL，5當量)。攪拌得到的混合物5min，然后在1h內(nèi)，升溫至室溫。然后將混合物傾入分液漏斗，用5％NaHCO3(100mL)洗滌。然后有機層用鹽水(50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到粗醛(7)。然后將醛(7)(0.5g)溶于MeOH/AcOH(10mL)。向該溶液加入嗎啉(0.21mL)。攪拌混合物10min，然后，加入NaBH3CN(0.19g)。30min后，濃縮反應混合物，用3M NaOH堿化，用CH2Cl2(3×15mL)萃取。濃縮有機萃取液，然后溶于丙酮/水(9∶1 v/v，20mL)。然后將P-TsOH(0.1g)加入到該溶液中，攪拌混合物12h。此后，濃縮混合物，用1M NaOH堿化，用CH2Cl2(3×15mL)萃取。然后有機萃取液干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到粗芳基酮(8)，將其溶于二甲基甲酰胺二甲基縮醛(15mL)，加熱至100℃保持12h。然后將混合物濃縮，溶于EtOH(15mL)。向該溶液中加入K2CO3(0.31g)和4-胍基苯甲酰胺(4)(0.14)。在密封管中，將反應混合物在100℃下加熱12h。然后混合物冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，然后過濾。固體用水和乙醇洗滌。該物質(zhì)通過制備HPLC純化，得到標題化合物(33mg，4％)LCMS 4.62min.(方法A)，M+H＝450。
實施例11合成4-[(4-{4-[3-(二甲氨基)丙硫基]苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺 除在醛(7)的還原氨基化過程中用二甲胺代替嗎啉外，該標題化合物通過實施例10的方法制備。LCMS(M+H＝408.0@4.62min.(方法B))。
實施例12合成4-[(4-{4-[3-(4-甲基哌嗪基)丙硫基]苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺 除在醛(7)的還原氨基化時，用N-甲基哌嗪代替嗎啉外，該標題化合物通過實施例10的方法制備。LCMS(M+H＝463.0@4.47min.(方法B))。
實施例13合成4-[4-{4-[(1-甲基-4-哌啶基)磺?；鵠苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺 將4-巰基吡啶(2.8g，25.0mmol)溶于DMF(25mL)。然后將NaH(1g，60％礦物油分散體)加入該溶液。冒泡停止后，加入對氯苯乙酮(1.4mL，11mmol)，加熱混合物至110℃保持14h。然后，冷卻混合物，用乙醚(100mL)稀釋。混合物用5％NaOH(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(50mL)洗滌。醚萃取液干燥(MgSO4)，過濾，濃縮。得到的油通過快速層析純化(9∶1至7∶3己烷/乙酸乙酯梯度)。濃縮需要的組分，得到1.37g(54％)硫基苯乙酮(9)。然后將硫化物(9)(1.37g)溶于丙酮/水(9∶1 v/v，35mL)。向該溶液中加入OXONE(7.4g，2當量)。攪拌混合物2h。然后濃縮混合物，用10％NaHCO3中和，用CH2Cl2(3×50mL)萃取。有機萃取液干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到二芳基砜(10)(1.25g，80％)。將砜(10)(0.53g.2.0mmol)溶于THF(7mL)。在室溫下，向該溶液中加入Super Hydride(6.3mL，1M的THF溶液)。在室溫下，攪拌該溶液1h，隨后用MeOH(0.6mL)猝滅。然后濃縮混合物。將殘余物溶于1N HCl(50mL)。該含水混合物用乙醚(3×50mL)萃取。棄去有機層。將水層堿化，用CH2Cl2(3×15mL)萃取。有機層濃縮。將殘余物溶于AcOH/MeOH(1∶1 v/v，10mL)。加入CH2O(37％水溶液1mL)和NaBH3CN(0.1g)。攪拌混合物30min。然后濃縮混合物，用10％NaOH(水溶液)堿化，用CH2Cl2(3×15mL)萃取。有機萃取液干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到粗酮(11)。將芳基酮(10)在二甲基甲酰胺二甲基縮醛(15mL)中回流，并加熱至100℃保持12h。然后將混合物濃縮，溶于EtOH(15mL)。向該溶液中加入K2CO3(0.31g)和4-胍基苯甲酰胺(4)(0.14g)。在密封管中，在100℃下加熱反應混合物12h。然后混合物冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，然后過濾。固體用水和乙醇洗滌。該物質(zhì)通過制備HPLC純化，得到6.0mg標題化合物(0.5％，以砜(10)計)。LCMS(M+H＝452@6.13min.(方法A))。
實施例14合成4-[(4-{4-[(4-甲基哌嗪基)磺酰基]苯基}嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺 將N-甲基哌嗪(piperizine)(1.16mL，0.01mol)溶于CH2Cl2(30mL)和Et3N(4.4mL，0.033mol)。該溶液冷卻至0℃，立即加入4-乙?；交酋Ｂ?2.29g，0.01mol)。攪拌反應物15min.，傾入分液漏斗，用水(3×20mL)、然后用鹽水(10mL)萃取。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到芳基酮(12)。按實施例13中所述方法，用未純化的酮(12)制備標題化合物。分析樣品通過制備HPLC純化(0.028mg，0.6％)LCMS(M+H＝453.2@5.48min.(方法A))。
實施例15合成4-{2-[(4-氨基甲酰基苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸 使4-乙?；郊姿嵋一?3.00g，15.62mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(6.2g，52.10mmol)的混合物回流18小時，冷卻，濃縮，定量得到4-[(2E)-3-(二甲氨基)丙-2-烯?；鵠苯甲酸乙基酯。使4-[(2E)-3-(二甲氨基)丙-2-烯?；鵠苯甲酸乙基酯、碳酸鉀(3.55g，25.74mmol)和4-(脒基氨基)苯甲酰胺(3.10g，12.87mmol)的ETOH(120mL)溶液回流18小時。混合物冷卻，過濾，分別依次用ETOH、水、乙醚洗滌，得到4-{2-[(4-氨基甲?；交?氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸乙基酯(2.60g，46％收率)。使該化合物在ETOH(30mL)、水(20mL)和NaOH(0.640g，16mmol)中回流2小時。反應混合物冷卻，酸化至pH 3，過濾，得到1.00g(42％收率)標題化合物。HPLC/ES-MS(20-100％乙腈)R.T.4.7min.(方法A)；(m/z)335[M+1]+。
實施例16合成(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-N，N-二甲基甲酰胺 4-胍基(guanidino)-苯甲酸甲基酯攪拌下，向4-胍基苯甲酸(20.0g，93mmol)的甲醇(600mL)懸浮液中滴加入亞硫酰氯(12mL)。該反應混合物在室溫下攪拌過夜。反應物真空濃縮，得到白色粉末。將粗物質(zhì)溶于二氯甲烷，并蒸發(fā)得到標題化合物，為白色粉末(17.95g，100％收率)HPLC保留時間；1.27min(方法A)。M+1；193。
(2E)-3-二甲氨基-1-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮將1-(4-氯苯基)乙-1-酮(35.0g，226mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二異丙基縮醛(35mL)溶液加熱回流16小時。反應混合物冷卻至室溫，用己烷(50mL)處理。得到的固體過濾收集，用己烷洗滌，得到標題化合物，為黃色固體(47.12g，99％收率)HPLC保留時間；6.45min(方法B)。M+1；209。
4-[4-(4-氯苯基)-嘧啶-2-基氨基]苯甲酸將4-胍基-苯甲酸甲基酯(17.95g，93mmol)、(2E)3-二甲氨基-1-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮(19.44g，93mmol和碳酸鉀(38.50g，279mmol)的1-丙醇溶液加熱回流24小時。將反應混合物冷卻至室溫。得到的固體過濾收集，用乙醇洗滌，得到標題化合物，它無需進一步純化可直接使用。EI MS(m/z)339[M+1]+。向4-[4-(4-氯苯基)-嘧啶-2-基氨基]苯甲酸甲基酯在甲醇(100mL)中的懸浮液中加入5N NaOH(100mL)。將反應混合物加熱回流4小時，然后冷卻至室溫。得到的固體過濾收集，用己烷洗滌，真空干燥，得到標題化合物，為黃色固體(27.36g，100％收率)HPLC保留時間；7.29min(方法A)。M+1；325。
(4-{[4-(4-氯苯基)-嘧啶-2-基]氨基}苯基)-N，N-二甲基甲酰胺在室溫下，向4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酸(200mg，0.615mmol)中加入亞硫酰氯(4mL)和催化量的DMF。然后將得到的懸浮液回流1小時，真空濃縮所得澄清淺黃色溶液。然后向該燒瓶中加入二甲胺(615μL 2.0M的THF溶液，1.23mmol)和三乙胺(124mg，1.23mmol)的四氫呋喃(4.5mL)溶液。然后在室溫下，將溶液攪拌18小時，用水(5mL)稀釋，過濾。剩余的固體通過制備HPLC純化，得到標題化合物。HPLC/ES-MSRT 6.74min.(方法A)；(m/z)353[M+1]+。
實施例17合成更多的代表性化合物 下列化合物按以上方法制備























































實施例18合成4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酸哌嗪酰胺鹽酸鹽 R1＝4-氯苯基將氯化氫氣體緩慢鼓泡通入叔丁基4--{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酸哌嗪酰胺(3.0g，6.1mmol)的乙酸(61mL)溶液中，保持20分鐘。將該溶液濃縮，真空泵干燥，得到2.6g(99％)標題化合物；ES-MS，m/z 394(M+1)+LC/MS保留時間，5.84min.(方法A)。
實施例19合成4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酸4-乙基哌嗪酰胺 將4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基哌嗪酮(0.5g，1.54mmol)、N-乙基哌嗪(0.18g，1.54mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.44g，2.31mmol)和羥基苯并三唑(0.31g，2.31mmol)的二甲基甲酰胺(15mL)溶液攪拌18h。加入水(50ml)，固體過濾。使該固體在制備HPLC(C-18柱，30％乙腈至100％乙腈/水-兩者均含0.1％三氟乙酸)上純化，得到標題化合物0.27g(42％)收率；ES-MS，m/z422(M+1)+LC/MS保留時間，5.92min.(方法A)。
實施例20合成4-?；被哙ゎ惢衔?
4-氨基哌啶基4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基酮鹽酸鹽將(叔丁氧基)-N-{1-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基](4-哌啶基)}甲酰胺(4.00g，7.87mmol)在50mL EtOH中攪拌，隨后加入無水HCl氣體。將反應物攪拌30min，然后濃縮至殘余物。向該殘余物加入少量EtOH，隨后用乙醚稀釋。將形成的黃色固體過濾，干燥，得到3.00g 4-氨基哌啶基4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基酮鹽酸鹽HPLC保留時間；5.89min.(方法B)M+1；408.4N-{1-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基)苯基)羰基]-4-哌啶基}乙酰胺在10mL THF和三乙胺(0.293mg，2.91mmol)中，攪拌4-氨基哌啶基4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基酮鹽酸鹽(300mg，0.582mmol)。加入乙酸酐(89.mg，0.873mmol)，將該反應物攪拌40分鐘。溶液濃縮，通過制備HPLC純化，得到N-{1-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]-4-哌啶基}乙酰胺(0.120g，46％收率)HPLC保留時間；6.92min.(方法B)M+1；450.4下列化合物按以上方法制備。



實施例21合成哌嗪乙酰胺 2-{4-[(4-{[4(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基)苯基)羰基]哌嗪基}乙酸乙酯將4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯甲酸(5g，15.3mmol)溶于二甲基甲酰胺。然后加入HOBT(2.82g，18.4mmol)和EDCI(3.53g，18.4mmol)。將反應物攪拌15分鐘，然后加入2-哌嗪基乙酸乙酯(2.14mL，18.4mmol)。在室溫下，將反應物攪拌過夜。加入水(150mL)。固體過濾收集，通過硅膠柱層析(90％EtOAc/己烷，Rt＝0.25)純化，得到4.3g(45％收率)2-{4-[(4-{[4(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}乙酸乙酯HPLC保留時間；9.932min.(方法B)M+1；480.22-{4-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}乙酸向2-{4-[(4-{[4(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}乙酸乙酯(5.0g，15.3mmol)中加入乙醇(69mL)和NaOH(1.14g，29.2mmol，4.1當量)水(46mL)溶液。將該反應物在75℃下加熱1.5小時。將反應物酸化至pH＝3，過濾，干燥，得到4.3g 2-{4-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}乙酸(83.3％)HPLC保留時間；9.260min.(方法B)M+1；452.32-{4-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}N-乙基乙酰胺將2-{4-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}乙酸(0.200g，0.44mmol)溶于DMF，然后在冰鹽水溶液中攪拌15分鐘，然后加入HOBT(0.072g，0.53mmol)，再加入EDCI(0.102g，0.53mmol)，再攪拌30分鐘。加入乙胺(0.030mL，0.53mmol)，在室溫下，將反應物攪拌過夜。反應用10mL水猝滅，形成沉淀。將沉淀過濾收集，通過制備HPLC純化，得到2-{4-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)羰基]哌嗪基}N-乙基乙酰胺HPLC保留時間；9.508min.(方法B)M+1；479.2下列化合物按以上方法制備。


實施例22還原氨基化 4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基4-[(甲基乙基)氨基]哌啶基酮鹽酸鹽將1-[(4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2基]氨基}苯基)羰基]哌啶-4-酮(400mg，0.980mmol)溶于10mL EtOH和異丙胺(58mg，0.980mmol)。加入氰基硼氫化鈉(62mg，0.986mmol)，在室溫下，將混合物攪拌18小時。反應用水猝滅，用乙酸乙酯萃取，隨后進行快速層析(EtOAc/MeOH；90∶10)，得到殘余物。將該殘余物溶于用HCl(g)飽和的ETOH，用乙醚稀釋，過濾，得到4-{[4-(4-氯苯基)嘧啶-2-基]氨基}苯基4-[(甲基乙基)氨基]哌啶基酮鹽酸鹽(0.150g，30％收率)HPLC保留時間；6.02min.(方法B)M+1；450.4。
下列化合物按以上方法制備。



實施例23逆向合成磺酰胺 (2E)-1-(4-硝基苯基)-3-二甲氨基)丙-2-烯-1-酮將4-硝基苯乙酮(20.0g，121mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(200ml)的混合物回流18小時，冷卻，濃縮，定量得到(2E)-1-(4-硝基苯基)-3-二甲氨基)丙-2-烯-1-酮。
1-乙?；?4-[(4-{[4-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基}氨基}苯基)羰基}哌嗪向(2E)-1-(4-硝基苯基)-3-二甲基氨基)丙-2-烯-1-酮(250mg，1.14mmol)和{4-{(4-乙?；哙夯?羰基]苯基}氨基甲脒(carboxamidine)(394mg，1.36mmol)在甲醇(6ml)的混合物中加入2.0M甲醇鈉的甲醇溶液2mL。然后將反應混合物回流18小時，然后用1N HCl酸化至pH～4。然后過濾此時形成的固體，通過柱層析純化，用10％甲醇/氯仿，得到320mg(69％)需要的產(chǎn)物。
1-乙?；?4-[(4-{[4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基}氨基}苯基)羰基}哌嗪向含幾滴乙酸的1-乙?；?4-[(4-{[4-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基}氨基}苯基)羰基}哌嗪(150mg，0.34mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入100mg10％披鈀碳。然后在50psi下，將該溶液氫化6h，此時沒有原料存在。然后溶液通過硅藻土(Celite)墊過濾，得到135mg(95％)基本上純的還原物質(zhì)，為棕色油狀物。
1-乙?；?4-{[4-({4-[4-(苯基磺酰基)氨基苯基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]羰基}哌嗪向含催化量DMAP的1-乙?；?4-[(4-{[4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基}氨基}苯基)羰基}哌嗪(100mg，0.24mmol)的吡啶(5mL)溶液中加入苯磺酰氯(50mg，0.29mmol)，在室溫下，將該溶液攪拌過夜。真空除去吡啶，殘余物萃取至二氯甲烷，用1N HCl洗滌。蒸發(fā)溶劑，得到粗哌嗪，通過制備HPLC(經(jīng)25min 10-60％CH3CN)純化，得到分析純樣品，為黃色固體M+1；557.3。HPLC保留時間；9.59min(方法B)。
下列化合物按以上方法制備。




實施例24合成更多代表性化合物 具有需要R1部分的實施例18化合物可按以上方法修飾，進一步得到本發(fā)明代表性化合物。例如，以下化合物按以上方法制備。











實施例25合成硫醚 3-二甲氨基-1-[4-(4-羥丁基硫基)苯基]丙烯酮攪拌下，向4-羥基丁硫醇(5.0g，47mmol)的DMF(100mL)溶液中加入NaH(60％礦物油分散體，2.1g)。冒泡停止后，加入對氯苯乙酮(4.3mL，33mmol)。然后在110℃下，將該溶液攪拌3h。冷卻混合物至室溫，然后用乙醚(200mL)稀釋。醚懸浮液依次用5％HCl(水溶液，2×100mL)、水(100mL)、鹽水(50mL)洗滌。乙醚萃取液干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到粗1-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]乙酮，該產(chǎn)物使用時無需純化。將1-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]乙酮溶于二甲基甲酰胺二甲基縮醛(100mL)，攪拌回流12h。將混合物冷卻，然后濃縮至約原體積的一半。加入己烷，使3-二甲氨基-1-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]丙烯酮沉淀?；旌衔镞^濾，用己烷(50mL)洗滌，干燥，得到3-二甲氨基-1-[4-(4-羥基-丁基硫基)苯基]丙烯酮(6.4g，23mmol)HPLC保留時間；5.58min.(方法B)M+1；279.8。
4-{4-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸然后將3-二甲基氨基-1-[4-(4-羥基丁基硫基)-苯基]丙烯酮(6.4g，23mmol)溶于nPrOH(150mL)。向該溶液中加入4-胍基苯甲酸甲酯鹽酸鹽(1.1當量，5.4g)和K2CO3(3當量，9.5g)。該混合物回流下攪拌24h。然后，加入10％NaOH(水溶液，50mL)，再在回流下攪拌混合物1h。然后使混合物冷卻至室溫，濃縮至約原體積的一半。然后將混合物的pH調(diào)至pH 4-5使4-{4-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸析出。該酸立即過濾，用水(50mL)、冷EtOH(50mL)洗滌，然后干燥(8.6g，21mmol，88％)HPLC保留時間；6.37min.(方法B)M+1；396.0。-(4-{4-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯基)甲酮將4-{4-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸(0.34g，0.86mmol)溶于THF(5mL)。向該溶液中加入1-糠?；哙?0.170g)、EDCI(0.180g)和HOBt(0.127g)。將混合物攪拌12h。然后混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，依次用2％NaOH(水溶液，30mL)、水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。使粗固體進行制備HPLC(30-80乙腈/水梯度，20min)。濃縮需要的組分，除去大部分乙腈，然后含水混合物用CH2Cl2/2％NaOH(水溶液)萃取。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到[4-(呋喃-2-羰基)-哌嗪-1-基]-(4-{4-[4-(4-羥基丁基硫基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯基)甲酮(0.042g，9％)HPLC保留時間；10.07min.(方法B)M+H＝558.3。
下列化合物按以上方法制備。







實施例26合成磺酰胺化合物 1-[4-(嗎啉-4-磺?；?苯基]乙酮向4-乙?；交酋Ｂ?5.5g，25mmol)在CH2Cl2(75mL)和Et3N(2當量，7.0mL，50mmol)中的懸浮液中滴加入嗎啉(1.5當量，3.3mL，38mmol)。將混合物在室溫下攪拌30min。然后混合物用CH2Cl2(100mL)稀釋，依次用5％HCl(2×50mL)、水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到粗1-[4-(嗎啉-4-磺?；?苯基]乙酮(2)(4.78g，18mmol，71％)HPLC保留時間；5.82min.(方法B)
M+1，270.0。
4-{4-[4-(嗎啉-4-磺?；?-苯基]-嘧啶-2-基氨基}苯甲酸將粗1-[4-(嗎啉-4-磺酰基)苯基]乙酮(4.78g，18mmol)懸浮于二甲基甲酰胺二甲基縮醛(50mL)，回流12h。使反應冷卻，將混合物濃縮至約原體積的一半。然后該溶液用己烷研磨，使烯氨基酮中間體沉淀。將該烯氨基酮過濾，用己烷(2×50mL)洗滌，真空干燥，然后溶于nPrOH(150mL)。向該溶液中加入4-胍基苯甲酸甲基酯鹽酸鹽(1.1當量，3.7g)和K2CO3(3當量，6.4g)。將該混合物攪拌回流24h。然后，加入10％NaOH(水溶液，50mL)，再將混合物攪拌回流1h。然后使混合物冷卻至室溫，濃縮至約原體積的一半。然后將混合物的pH調(diào)至pH 4-5，使酸沉淀。將4-{4-[4-(嗎啉-4-磺?；?苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸立即過濾，用水(50mL)、冷EtOH(50mL)洗滌，然后干燥(4.6g，10.5mmol，68％)HPLC保留時間；6.6min.(方法B)M+1，441.0。(4-{4-[4-(嗎啉-4-磺?；?苯基]嘧啶-2-基氨基}苯基)甲酮將4-{4-[4-(嗎啉-4-磺?；?-苯基]-嘧啶-2-基氨基}-苯甲酸(0.25g，0.57mmol)溶于THF(5mL)。向該溶液中加入1-糠酰基哌嗪(0.123g)、EDCI(0.131g)和HOBt(0.092g)。將該混合物攪拌12h。然后混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，依次用2％NaOH(水溶液，30mL)、水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。使粗固體進行制備HPLC(20-70乙腈/水梯度，20min)。將需要的組分濃縮，除去大部分乙腈，然后含水混合物用CH2Cl2/2％NaOH(水溶液)萃取。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到[4-(呋喃-2-羰基)哌嗪-1-基](4-{4-[4-(嗎啉-4-磺?；?-苯基]嘧啶-2-基氨基}苯基)甲酮(0.177g，52％)HPLC保留時間；9.62min.(方法B)M+H＝603.3
下列化合物按以上方法制備。
















實施例27合成砜 1-[4-(四氫吡喃-4-硫基)苯基]乙酮攪拌下，向Na2S(17.4g，0.22mol)的水(26mL)溶液中加入CS2(14.7mL，0.24mol)。將該混合物在60-70℃下攪拌6h。向得到的紅色Na2CS3溶液中加入4-氯四氫吡喃(0.074mol)。將混合物在60-70℃下攪拌12h。然后使混合物冷卻至～10℃。攪拌下，將H2SO4(濃)滴加入該混合物中直至持續(xù)存在混濁黃色。然后混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取。棄去水層，CH2Cl2層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。將粗硫酚(47.5mmol，～64％)溶于DMF(100mL)，用NaH(1.9g，48mmol)處理。冒泡停止后，加入對氯苯乙酮(4.3mL，33mmol)。然后將溶液在110℃下攪拌3h。使混合物冷卻至室溫，然后用乙醚(200mL)稀釋。該醚懸浮液依次用5％HCl(水溶液，2×100mL)、水(100mL)、鹽水(50mL)洗滌。醚萃取液干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到粗1-[4-(四氫-吡喃-4-硫基)-苯基]-乙酮1，其通過層析(SiO2，9∶1己烷/EtOAc)純化，得到純1-[4-(四氫吡喃-4-硫基)苯基]乙酮1(7.4mmol，16％以4-氯四氫吡喃計)HPLC保留時間；5.41min.(方法B)M+1；269.0。
3-二甲氨基-1-[4-(四氫吡喃-4-磺?；?苯基]丙烯酮將1-[4-(四氫-吡喃-4-硫基)-苯基]-乙酮1(7.4mmol)溶于丙酮/水(9∶1 v/v，100mL)。將Oxone(2.1當量，9.1g)加入該溶液。將反應物在室溫下攪拌5h?；旌衔镞^濾，真空除去絕大部分丙酮。然后溶液用水(50mL)稀釋，用CH2Cl2(3×50mL)萃取。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到中間體四氫吡喃基砜，將其溶于二甲基甲酰胺二甲基縮醛(100mL)，攪拌回流12h。使混合物冷卻，然后濃縮至約原體積的一半。加入己烷，使烯氨基酮中間體沉淀。混合物過濾，用己烷(50mL)洗滌，干燥，得到3-二甲氨基-1-[4-(四氫-吡喃-4-磺?；?-苯基]-丙烯酮(2.2g，7mmol)HPLC保留時間；5.18min.(方法B)M+1；324.0。
4-{4-[4-(四氫吡喃-4-磺酰基)-苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸然后將3-二甲氨基-1-[4-(四氫-吡喃-4-磺?；?-苯基]-丙烯酮溶于nPrOH(80mL)。向該溶液中加入4-胍基苯甲酸甲基酯鹽酸鹽(1.1當量，1.7g)和K2CO3(3當量，2.9g)。將混合物攪拌回流24h。然后，加入10％NaOH(水溶液，50mL)，再將混合物攪拌回流1h。然后使混合物冷卻至室溫，濃縮至約原體積的一半。然后將混合物的pH調(diào)至pH 4-5，使4-{4-[4-(四氫-吡喃-4-磺?；?-苯基]-嘧啶-2-基氨基}-苯甲酸4沉淀。將該酸立即過濾，用水(50mL)、冷EtOH(50mL)洗滌，然后干燥(2.4g，5.5mmol，79％收率)HPLC保留時間；6.07min.(方法B)M+1；593.3。-(4-{4-[4-(四氫吡喃-4-磺?；?苯基]嘧啶-2-基氨基)苯基)甲酮將4-{4-[4-(四氫吡喃-4-磺?；?-苯基]嘧啶-2-基氨基}苯甲酸4(0.26g，0.6mmol)溶于THF(5mL)。向該溶液中加入1-(N，N-二甲氨基丙基)哌嗪(0.130g)、EDCI(0.136g)和HOBt(0.096g)。將該混合物攪拌12h。然后混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，依次用2％NaOH(水溶液，30mL)、水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。使粗固體進行制備HPLC(20-70乙腈/水梯度，20min)。將需要的組分濃縮，除去大部分乙腈，然后含水混合物用CH2Cl2/2％NaOH(水溶液)萃取。有機層干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到[4-(3-二甲氨基-丙基)哌嗪-1-基]-(4-{4-[4-(四氫吡喃-4-磺酰基)苯基]嘧啶-2-基氨基}苯基)甲酮5(0.079g，22％)HPLC保留時間；7.93min.(方法B)M+1＝593.3下列化合物按以上方法制備。






實施例28測定化合物活性實驗可按以下方法測定苯胺基嘧啶衍生物的活性。
JNK2測定向10μL測試化合物的20％DMSO/80％稀釋緩沖液溶液中加入30μL 50ng His6-JNK2的相同稀釋緩沖液溶液，該稀釋緩沖液由20mM HEPES(pH 7.6)、0.1mM EDTA、2.5mM氯化鎂、0.004％Triton×100、2μg/mL亮抑酶肽、20mMβ-磷酸甘油、0.1mM釩酸鈉和2mM DTT的水溶液組成。在室溫下，將該混合物預溫育30分鐘。加入60μl 10μg GST-c-Jun(1-79)的試驗緩沖液，該試驗緩沖液由20mM HEPES(pH 7.6)、50mM氯化鈉、0.1mM EDTA、24mM氯化鎂、1mM DTT、25mM PNPP、0.05％Triton×100、11μM ATP和0.5μCiγ-32P ATP的水溶液組成，在室溫下，使反應進行1小時。加入150μL 12.5％三氯乙酸終止該c-Jun磷酸化作用。30分鐘后，在過濾板上收獲沉淀，用50μL閃爍液稀釋，通過計數(shù)器定量。按使c-Jun磷酸化減少至對照值50％的測試化合物的濃度計算IC50值。在該測定中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物IC50值為0.01-10μM。
JNK3測定向10μL測試化合物的20％DMSO/80％稀釋緩沖液溶液中加入30μL 200ng His6-JNK3的相同稀釋緩沖液溶液，該稀釋緩沖液由20mM HEPES(pH 7.6)、0.1mM EDTA、2.5mM氯化鎂、0.004％Triton×100、2μg/mL亮抑酶肽，20mMβ-磷酸甘油，0.1mM釩酸鈉和2mM DTT的水溶液組成。在室溫下，將該混合物預溫育30分鐘。加入60μl 10μg GST-c-Jun(1-79)的試驗緩沖液溶液，該試驗緩沖液由20mM HEPES(pH 7.6)、50mM氯化鈉、0.1mM EDTA、24mM氯化鎂、1mM DTT、25mM PNPP、0.05％Triton×100、11μM ATP和0.5μCiγ-32P ATP的水溶液組成，在室溫下，使反應進行1小時。加入150μL 12.5％三氯乙酸終止該c-Jun磷酸化作用。30分鐘后，在過濾板上收獲沉淀，用50μL閃爍液稀釋，通過計數(shù)器定量。按使c-Jun磷酸化減少至對照值50％的測試化合物的濃度計算IC50值。在該測定中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物IC50值為0.01-10μM。
Jurkat T-細胞Il-2生成測定Jurkat T細胞(克隆E6-1)從American Tissue Culture Collection購買，保持在由含2mM L-谷氨酰胺(Mediatech)、10％胎牛血清(Hyclone)和青霉素/鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基組成的生長培養(yǎng)基中。所有細胞在37℃下、95％空氣和5％CO2中培養(yǎng)。將細胞在200μL培養(yǎng)基中按密度0.2×106細胞/孔平板接種?；衔飪湟?20mM)用生長培養(yǎng)基稀釋，然后向各孔中加入25μl濃縮10x的溶液，混合，將細胞預溫育30分鐘。所有樣品中化合物溶媒(二甲基亞砜)保持在終濃度為0.5％。30分鐘后，細胞用PMA(乙酸肉豆寇佛波醇；終濃度50ng/mL)和PHA(植物凝集素；終濃度2μg/mL)活化。加入PMA和PHA的濃縮10x的生長培養(yǎng)基溶液，每孔加入25μL。將細胞板培養(yǎng)10小時。通過離心使細胞沉淀，除去培養(yǎng)基，在-20℃下保存。按生產(chǎn)商(Endogen)的說明，通過用于IL-2存在的夾心ELISA分析培養(yǎng)基等分試樣。按Il-2生成減少至對照值50％的測試化合物的濃度計算IC50值。在該測定中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物IC50值為0.1-30μM。
大鼠體內(nèi)LPS-誘導的TNF-α生成測定使得自Charles River Laboratories的7周齡雄CD大鼠適應環(huán)境一周后再使用。在短暫的異氟烷麻醉下，將22-號連接針(over-the-needle)的導管經(jīng)皮插入側尾靜脈。在注射0.05mg/kg LPS(大腸桿菌(E.Coli)055B5)前15至180min，通過尾靜脈導管靜脈內(nèi)注射或經(jīng)口管飼給予大鼠測試化合物。用2.5mL/kg標準注射用鹽水沖洗導管。在LPS刺激后90分鐘，通過心臟穿刺采血。用肝素鋰分離管制備血漿，在-80℃冷凍直至分析時使用。用大鼠特異性TNF-αELISA試劑盒(Busywork)測定TNF-α水平。按使TNF-α生成減少至對照值50％時的測試化合物劑量計算ED50值。在該測定中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物ED50值為1-30mg/kg。
檢測磷酸化的c-Jun培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)至80％融合，然后用終濃度0.5％DMSO的化合物(30μM)預處理。30分鐘后，用TNFα(30ng/ml)刺激細胞20分鐘。洗滌細胞，從板上刮下，用2x Laemmli緩沖液溶胞，加熱至100℃保持5分鐘。將全細胞溶胞產(chǎn)物(約30μg)在三甘氨酸(Tris-glycine)緩沖的10％SDS-聚丙烯酰胺凝膠(Novex，San Diego，CA)上分離，轉移至硝基纖維素膜(Amersham，Piscataway，NJ)。膜用5％脫脂奶粉(BioRad，Hercules，CA)封閉，與二氧磷基-cJun的抗體(1∶1000#91645)(New England Biolabs，Beverly，MA)一起溫育，然后在含0.1％吐溫-20和5％脫脂奶粉的磷酸鹽緩沖鹽水中與驢抗-兔化辣根(donkeyanti-rabbit horse radish)過氧化物酶結合抗體(1∶2500)(Amersham)一起溫育。免疫反應性蛋白用化學發(fā)光和放射自顯影(Amersham)檢測。在該測定中，如果顯示30μM化合物抑制cJun磷酸化大于50％，則選擇它們作為JNK途徑的抑制劑。
實施例29代表性化合物的活性通過實施例28中所述試驗測定代表性苯胺基嘧啶衍生物抑制JNK2的能力。該試驗中，如上所述，優(yōu)選的苯胺基嘧啶衍生物的IC50值為0.01-10μM。至此，在JNK2測定中，具有10μM或小于10μMIC50值的苯胺基嘧啶衍生物包括編號1、3-2、3-4、3-9、3-10、3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-22、3-23、3-24、3-25、3-26、3-27、3-29、3-30、3-34、3-36、3-37、3-40、17-2、17-3、17-6、17-18、17-20、17-21、17-22、17-23、17-24、17-25、17-26、17-27、17-28、17-29、17-30、17-31、17-32、17-33、17-34、17-35、17-37、17-54、17-86、17-91、17-106、17-118、17-119、17-121、17-127、17-128、17-129、17-130、17-131、17-132、17-133、17-134、17-135、17-136、17-137、17-139、17-140、17-141、17-142、17-143、17-144、17-147、17-148、17-149、17-150、17-151、17-152、17-153、17-154、17-157、17-158、17-159、17-160、17-161、17-162、17-163、17-164、17-169、17-171、17-190、17-215、18、20-1、20-2、20-3、20-4、20-5、20-6、22-10、22-11和25-52的化合物。在JNK2測定中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物的IC50值為1μM或小于1μM，這些化合物包括編號3-2、3-4、3-9、3-13、3-14、3-15、3-23、3-24、3-25、3-40、17-20、17-21、17-22、17-24、17-29、17-30、17-31、17-32、17-33、17-34、17-37、17-127、17-129、17-137、17-141、17-147、17-154、17-169、17-171、17-190、18、20-1、20-3、20-4、22-10、22-11和25-52的化合物。
本發(fā)明不限于實施例中公開的具體實施方案的范圍，此類實施方案將作為本發(fā)明幾個方面的示例，且功能等價的任何實施方案均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。的確除了本文中所示和所述的那些修改之外，本發(fā)明的各種修改對本領域技術人員而言是顯而易見的，它們將落入權利要求書范圍內(nèi)。
權利要求
1.一種用具有以下結構的化合物或其藥學上可接受的鹽制備用于治療或預防代謝性病癥的藥物的方法 其中R1為任選被1至4個獨立選自R7的取代基取代的芳基或雜芳基；R2和R3相同或不同，并獨立為氫或低級烷基；R4代表1至4個任選取代基，其中各取代基相同或不同，并獨立選自鹵素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R5和R6相同或不同，并獨立為-R8、-(CH2)aC(＝O)R9、-(CH2)aC(＝O)OR9、-(CH2)aC(＝O)NR9R10、-(CH2)aC(＝O)NR9(CH2)bC(＝O)R10、-(CH2)aNR9C(＝O)R10、-(CH2)aNR11C(＝O)NR9R10、-(CH2)aNR9R10、-(CH2)aOR9、-(CH2)aSOcR9或-(CH2)aSO2NR9R10；或R5和R6與它們連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；R7每次出現(xiàn)時，獨立為鹵素、羥基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、酰氧基、烷硫基、亞磺?；榛?、磺酰基烷基、羥烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、-C(＝O)OR8、-OC(＝O)R8、-C(＝O)NR8R9、-C(＝O)NR8OR9、-SOcR8、-SOcNR8R9、-NR8SOcR9、-NR8R9、-NR8C(＝O)R9、-NR8C(＝O)(CH2)bOR9、-NR8C(＝O)(CH2)bR9、-O(CH2)bNR8R9或與苯基稠合的雜環(huán)；R8、R9、R10和R11相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基；或R8和R9與它們連接的一個或多個原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；a和b相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立選自0、1、2、3或4；和c每次出現(xiàn)時為0、1或2。
2.權利要求1的方法，其中所述代謝性病癥為肥胖癥。
3.權利要求1的方法，其中所述代謝性病癥為遺傳性肥胖癥、飲食性肥胖癥、激素相關性肥胖癥或藥物使用相關性肥胖癥。
4.權利要求1的方法，其中所述代謝性病癥為I型糖尿病、尿崩癥、糖尿病、成年型糖尿病、青少年糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、營養(yǎng)不良相關性糖尿病、趨酮癥性糖尿病、抗酮癥性糖尿病。
5.權利要求1的方法，其中所述代謝性病癥為過敏性腸綜合征、粘液性結腸炎、潰瘍性結腸炎、節(jié)段性回腸炎、亨廷頓舞蹈病、胃炎、食管炎、胰腺炎或腎炎。
6.一種用具有以下結構的化合物或其藥學上可接受的鹽制備藥物的方法 其中R1為任選被1至4個獨立選自R7的取代基取代的芳基或雜芳基；R2和R3相同或不同，并獨立為氫或低級烷基；R4代表1至4個任選取代基，其中各取代基相同或不同，并獨立選自鹵素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R5和R6相同或不同，并獨立為-R8、-(CH2)aC(＝O)R9，-(CH2)aC(＝O)OR9、-(CH2)aC(＝O)NR9R10、-(CH2)aC(＝O)NR9(CH2)bC(＝O)R10、-(CH2)aNR9C(＝O)R10、-(CH2)aNR11C(＝O)NR9R10、-(CH2)aNR9R10、-(CH2)aOR9、-(CH2)aSOcR9或-(CH2)aSO2NR9R10；或R5和R6與它們連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；R7每次出現(xiàn)時，獨立為鹵素、羥基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、酰氧基、烷硫基、亞磺酰基烷基、磺酰基烷基、羥烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、-C(＝O)OR8、-OC(＝O)R8、-C(＝O)NR8R9、-C(＝O)NR8OR9、-SOcR8、-SOcNR8R9、-NR8SOcR9、-NR8R9、-NR8C(＝O)R9、-NR8C(＝O)(CH2)bOR9、-NR8C(＝O)(CH2)bR9、-O(CH2)bNR8R9或與苯基稠合的雜環(huán)；R8、R9、R10和R11相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基；或R8和R9與它們連接的一個或多個原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；a和b相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立選自0、1、2、3或4；和c每次出現(xiàn)時為0、1或2，所述藥物用于治療或預防外耳炎、急性中耳炎、聽力損失、肺間質(zhì)纖維化、肝纖維化、腎纖維化、傷口愈合、灼傷愈合、慢性阻塞性肺病、變應性疾病、過敏性鼻炎、急性呼吸窘迫綜合征、全身性紅斑狼瘡、腎病、胰腺炎、腹膜炎、膿毒癥、酒精或毒素引發(fā)的肝病、硬化、脂肪變性或局部缺血-再灌注損傷。
7.一種用具有以下結構的化合物或其藥學上可接受的鹽制備用于治療或預防JNK抑制敏感性疾病的藥物的方法 其中R1為任選被1至4個獨立選自R7的取代基取代的芳基或雜芳基；R2和R3相同或不同，并獨立為氫或低級烷基；R4代表1至4個任選取代基，其中各取代基相同或不同，并獨立選自鹵素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R5和R6相同或不同，并獨立為-R8、-(CH2)aC(＝O)R9、-(CH2)aC(＝O)OR9、-(CH2)aC(＝O)NR9R10、-(CH2)aC(＝O)NR9(CH2)bC(＝O)R10、-(CH2)aNR9C(＝O)R10、-(CH2)aNR11C(＝O)NR9R10、-(CH2)aNR9R10、-(CH2)aOR9、-(CH2)aSOcR9或-(CH2)aSO2NR9R10；或R5和R6與它們連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；R7每次出現(xiàn)時，獨立為鹵素、羥基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、酰氧基、烷硫基、亞磺酰基烷基、磺?；榛?、羥烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、-C(＝O)OR8、-OC(＝O)R8、-C(＝O)NR8R9、-C(＝O)NR8OR9、-SOcR8、-SOcNR8R9、-NR8SOcR9、-NR8R9、-NR8C(＝O)R9、-NR8C(＝O)(CH2)bOR9、-NR8C(＝O)(CH2)bR9、-O(CH2)bNR8R9或與苯基稠合的雜環(huán)；R8、R9、R10和R11相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基；或R8和R9與它們連接的一個或多個原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)；a和b相同或不同，且每次出現(xiàn)時獨立選自0、1、2、3或4；和c每次出現(xiàn)時為0、1或2。
全文摘要
本發(fā)明廣泛涉及治療或預防JNK抑制敏感性病癥例如代謝性病癥的方法，這類方法包括給予有需要的患者有效量的具有以上結構(I)的苯胺基嘧啶衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中R
文檔編號C07D417/04GK1791410SQ200480013588
公開日2006年6月21日 申請日期2004年3月24日 優(yōu)先權日2003年3月24日
發(fā)明者Y·薩托, S·S·巴沃特 申請人:信號藥品公司