專利名稱：懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥材懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法，屬中草藥化學(xué)提煉制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
藥用懷山藥系薯蕷科植物薯蕷，藥用部分為根莖，主要化學(xué)成分有甘露聚糖、尿囊素、多巴胺、山藥堿、植酸、槭素II和16種氨基酸，還含有淀粉、鞣質(zhì)、粘液汁、糖蛋白、多酚氧化酶、膽甾醇、麥角甾醇、β-谷甾醇、油菜甾醇和皂甙類等成分，此外尚含碘、磷、鈣等多種無機(jī)元素。
懷山藥提取物中的懷山藥皂甙，具有α-糖苷酶抑制活性，同時(shí)有己糖激酶激活活性和醛糖還原酶抑制活性，故可用作降血糖藥物治療糖尿病及其并發(fā)癥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提取一種由原藥材懷藥提取物懷山藥皂甙的方法。
本發(fā)明的目的是提供一種既具有α-糖苷酶抑制活性，又具有醛糖還原酶抑制活性和己糖激酶激活活性的懷山藥提取物，其有效部分即為具有良好降血糖活性的水溶性懷山藥皂甙。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來達(dá)到的。
本發(fā)明的一種懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法，其特征在于，該方法包括以下幾個(gè)工藝步驟a.原藥材懷山藥經(jīng)過粉碎后，用甲醇冷浸提取，提取時(shí)間為10-24小時(shí)，共提取兩次，其溶劑用量為原藥材的3-5倍；b.然后過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，溫度控制為30-50℃左右，濃縮后得到浸膏；c.將浸膏放置于200ml-300ml蒸餾水中，使其成為水懸浮液；d.將水懸浮液用無水乙醚脫脂萃取2-3次；e.將經(jīng)無水乙醚脫脂萃取后的水層用正丁醇飽和水萃取2-3次；f.收集水飽和正丁醇的萃取液，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，溫度控制在50℃，濃縮而得浸膏；
g.將上述浸膏用熱甲醇溶解達(dá)到飽和狀態(tài)，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色結(jié)晶；h.將上述結(jié)晶用蒸餾水溶解，上大孔型吸附樹脂，先用2-5倍層析柱體積的蒸餾水洗脫，再用20％乙醇、70％乙醇、無水乙醇依次洗脫，收集70％乙醇的洗脫液，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行加熱濃縮，然后將其冷凍干燥，最后主要成分為懷山藥皂甙的乳白色無定形粉末。
上述方法制得的懷山藥皂甙，具有α-糖苷酶抑制活性，其作用機(jī)理是懷山藥皂甙通過與消化道內(nèi)的許多酶作用，特別是對(duì)α-糖苷酶的抑制活性，從而控制了機(jī)體對(duì)葡萄糖等營養(yǎng)成分的吸收，使其具有了抗?fàn)I養(yǎng)性。同時(shí)懷山藥皂甙具有己糖激酶激活活性，從而加快了糖代謝途徑中糖的降解。對(duì)于糖尿病并發(fā)癥中的眼部病變、神經(jīng)病變和腎部病變的病人而言，懷山藥還具有醛糖還原酶抑制活性，從而能消除體內(nèi)山梨醇的蓄積，因此懷山藥皂甙可作為治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物。
本發(fā)明的提取工藝，使用設(shè)備簡單，分離提取操作容易。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的具體實(shí)施例如上所述，現(xiàn)再詳細(xì)敘述于后。
本實(shí)施例中的具體工藝步驟如下a.稱取原藥材懷山藥1000克(干料)，經(jīng)過粉碎后，用甲醇浸提取，冷浸提取時(shí)間為24小時(shí)，共提取兩次，溶劑量為原藥材的3-5倍；b.然后過濾，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)的溫度控制在45℃，濃縮后得到浸膏；c.將浸膏放置于300ml蒸餾水中，使其成為水懸浮液；d.將水懸浮液在分液漏斗中用無水乙醇脫脂萃取2次；e.將經(jīng)無水乙醇脫脂萃取后收集的水液層在分液漏斗中進(jìn)行濃縮，加熱溫度為50℃；f.收集水飽和正丁醇的萃取液，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，溫度控制在50℃，濃縮而得浸膏；g.將上述浸膏用熱甲醇溶解達(dá)到飽和狀態(tài)，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色結(jié)晶；h.將上述結(jié)晶用蒸餾水溶解，上大孔型吸附樹脂，先用2-5倍層析柱體積的蒸餾水洗脫，再用20％乙醇、70％乙醇、無水乙醇依次洗脫，收集70％乙醇的洗脫液，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行加熱濃縮，然后將其冷凍干燥，最后主要成分為懷山藥皂甙的乳白色無定形粉末。
為了說明本發(fā)明制備物懷山藥皂甙可降低血液血糖濃度的效果，特做了一些有關(guān)試驗(yàn)一、懷山藥皂甙對(duì)動(dòng)物小鼠的降血糖作用和體內(nèi)酶學(xué)作用。
試驗(yàn)1懷山藥皂甙一次給藥對(duì)正常小鼠血糖含量的影響取正常小鼠50只，隨機(jī)分為5組，分別灌胃生理鹽水、拜糖蘋(100mg/kg)、懷山藥皂甙(30mg/kg、60mg/kg、100mg/kg)。禁食4h后斷尾取血測定血漿血糖濃度。結(jié)果見表1。
表1 懷山藥皂甙一次給藥對(duì)正常小鼠血糖含量的影響

與生理鹽水組比較1p＜0.005上述拜糖蘋對(duì)照試劑為德國拜耳公司產(chǎn)品上述試驗(yàn)結(jié)果表明，懷山藥皂甙30mg/kg、60mg/kg、100mg/kg劑量均能明顯降低正常小鼠血糖。
試驗(yàn)2，懷山藥皂甙連續(xù)多次給藥對(duì)正常小鼠血糖含量的影響取正常小鼠30只，隨機(jī)分為3組，分別灌胃生理鹽水、拜糖蘋(100mg/kg)、懷山藥皂甙(100mg/kg)，連續(xù)八天。末次給藥后禁食4h，斷尾取血測定血漿血糖濃度。由表2的結(jié)果可見，表2懷山藥皂甙連續(xù)多次給藥對(duì)正常小鼠血糖含量的影響

與生理鹽水組比較1p＜0.005上述拜糖蘋對(duì)照試劑為德國拜耳公司產(chǎn)品上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，懷山藥皂甙對(duì)此給藥同樣能夠引起正常小鼠血糖的降低，其效果與市售降糖藥物拜糖蘋相當(dāng)。
試驗(yàn)3懷山藥皂甙對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖含量的影響四氧嘧啶糖尿病小鼠35只，分為3組(組間血糖值差異不超過0.1mmol/L)，分別灌胃生理鹽水、拜糖蘋(100mg/kg)、懷山藥皂甙(100mg/kg)，連續(xù)八天。末次給藥后禁食4h，取血測定血漿血糖濃度。其結(jié)果見表3。
表3懷山藥皂甙對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖含量的影響

與生理鹽水組比較1p＜0.005上述拜糖蘋對(duì)照試劑為德國拜耳公司產(chǎn)品上述試驗(yàn)結(jié)果表明，懷山藥皂甙能夠有效的降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖，在同等劑量下，其效果略好于口服降糖藥物拜糖蘋。
試驗(yàn)4懷山藥皂甙對(duì)小鼠體內(nèi)酶活的影響將正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠各10只，灌胃生理鹽水，再將四氧嘧啶糖尿病小鼠15只灌胃懷山藥皂甙(100mg/kg)，連續(xù)八天。末次給藥后禁食4h，取血后斷頭法處死，測定體內(nèi)α-葡萄糖苷酶、己糖激酶和醛糖還原酶活性，結(jié)果見表4。
表4懷山藥皂甙在小鼠體內(nèi)的酶作用

與生理鹽水組比較2p＜0.05與糖尿病模型組比較1p＜0.05。
試驗(yàn)結(jié)果顯示1.糖尿病模型組與生理鹽水組(正常小鼠)比較而言，α-葡萄糖苷酶和己糖激酶的活性內(nèi)有變化，而醛糖還原酶的活性有明顯上升(酶活吸光度值上升0.023)，說明高血糖可激活醛糖還原酶。
2.給藥組與糖尿病模型組比較而言，α-葡萄糖苷酶的活性有明顯抑制(抑制率為26.21％)，醛糖還原酶的活性也受到抑制(抑制率位13.16)，而己糖激酶的活性則被激活(激活率為27.50％)通過以上各試驗(yàn)，總的來說，本發(fā)明制備物懷山藥皂甙對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠具有體內(nèi)α-葡萄糖苷酶抑制活性，同時(shí)有己糖激酶的激活活性，以及醛糖還原酶的抑制活性。
權(quán)利要求
1.一種懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法，其特征在于該方法具有以下工藝過程和工藝步驟a.原材料原藥材懷山藥經(jīng)過粉碎后，用甲醇和/或水冷浸提取，提取時(shí)間為10-24小時(shí)，共提取兩次，溶劑用量為原藥材的3-5倍；b.然后過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，溫度控制在30-50℃左右，濃縮后得到浸膏；c.將浸膏懸浮于200-300ml蒸餾水中，使其成為水懸浮液；d.經(jīng)無水乙醚脫脂萃取后的水層用正丁醇飽和水溶液萃取2-3次；e.收集水飽和正丁醇的萃取液，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，溫度控制在40-50℃左右，濃縮而得浸膏；f.將上述浸膏用熱甲醇溶解達(dá)到飽和狀態(tài)，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色結(jié)晶；g.將上述結(jié)晶用蒸餾水溶解，上大孔型吸附樹脂，先用2-5倍層析柱體積的蒸餾水洗脫，再用20％乙醇、70％乙醇、無水乙醇依次洗脫，收集70％乙醇的洗脫液，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行加熱濃縮，然后將其冷凍干燥，最后得到主要成分為懷山藥皂甙的乳白色無定形粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法所提取的懷山藥皂甙產(chǎn)物，其用途可用作制備降血糖藥物和治療糖尿病并發(fā)癥藥物的主要活性成分或主要原料。
全文摘要
本發(fā)明涉及中草藥材懷山藥提取物懷山藥皂甙的提取方法，屬中草藥化學(xué)提煉制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明懷山藥皂甙的提取方法為懷山藥經(jīng)粉碎后用冷甲醇浸泡，然后過濾，將濾液濃縮，得到的浸膏制成水懸浮液，經(jīng)脫脂萃取，再用水飽和正丁醇萃取，經(jīng)再次濃縮后的浸膏，用熱的甲醇配制成飽和溶液，然后放置于冰箱內(nèi)，將析出的沉淀物用蒸餾水溶解，上大孔徑吸附樹脂，然后收集、濃縮得白色無定型粉末，其主要成分既是懷山藥皂甙。該制備物可作為制備降血糖藥物和治療糖尿病并發(fā)癥藥物的主要活性成分或主要原料。
文檔編號(hào)C07G3/00GK1560061SQ200410016839
公開日2005年1月5日 申請(qǐng)日期2004年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月10日
發(fā)明者沈忠明, 殷建偉, 高宏武 申請(qǐng)人:上海大學(xué)