專利名稱：O－衍化諾卡硫星衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
許多臨床上重要病原菌的多重耐藥菌株，包括耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(MRSA)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)和腸球菌(Enterococci)菌株，正在成為世界性健康難題?，F(xiàn)在迫切需要發(fā)現(xiàn)新的藥物，以治療多重耐藥菌感染患者。許多噻唑基肽抗生素具有抗革蘭氏陽(yáng)性菌(包括多重耐藥菌株)的有效抗微生物活性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，新的諾卡硫星衍生物和相關(guān)噻唑基肽衍生物在納摩爾水平具有抗革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制活性。本文描述的諾卡硫星衍生物和相關(guān)噻唑基肽衍生物在體外表現(xiàn)出有效抗革蘭氏陽(yáng)性菌的抗微生物活性，并且在金黃色葡萄球菌全身感染動(dòng)物模型體內(nèi)有效。
本發(fā)明新的諾卡硫星衍生物衍生自噻唑基肽抗生素諾卡硫星I或II(參見J.E.Leet等，2001年4月17日授予的美國(guó)專利6,218,398(對(duì)應(yīng)于PCT申請(qǐng)WO 00/03722，公布于2000年1月27日))和諾卡硫星IV(參見W.Li等，PCT申請(qǐng)WO 02/13834(公布于2002年2月21日))。
諾卡硫星I具有下式結(jié)構(gòu)
諾卡硫星II與諾卡硫星I結(jié)構(gòu)相同，唯一不同的是OR2為H，而不是諾卡硫星I的OH。
其它諾卡硫星衍生物描述于2001年9月11日授予的美國(guó)專利6,287,827；2000年3月16日公布的PCT WO00/14100和2002年2月21日公布的PCT WO 02/14354。
現(xiàn)有技術(shù)尚不知道也沒有提出本文描述的新的諾卡硫星衍生物及其在治療感染性疾病中的用途。
發(fā)明概述本發(fā)明包括如下定義的式I化合物，包括其藥學(xué)可接受的鹽。這些化合物具有有效的抗生素活性，包括抗革蘭氏陽(yáng)性菌和分枝桿菌的活性
其中W為 Z選自-NH2和 R1選自 氫、-P(O)A1A2、-C(O)C1-6烷基、-C(O)芳基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NH芳基、-(CH2CH2O)mMe、-C1-6烯基、-C1-6炔基和-C1-6烷基；其中所述C1-6烷基任選被1-6個(gè)羥基取代或任選被1-2個(gè)選自(a)-(i)的相同或不同取代基取代(a)CO2R3；(b)CONR4R5；(c)OP(O)A1A2；(d)SO3H；(e)-O(CH2)nSiR63；(f)選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和嗎啉基的雜脂環(huán)基；(g)氰基；(h)環(huán)氧基；和(i)芳基；前提條件是R1和R2不同時(shí)為H；R2選自 氫、-P(O)A1A2、-SO3H、-C(O)C1-6烷基、-C(O)CH＝CHCO2R3、-C(O)芳基、-C(O)N(H)(C1-6烷基-T)、-C(O)N(Me)(C1-6烷基-T)、-(CH2CH2O)pH、-(CH2CH2O)qMe、-C1-6烯基、-C1-6烷基和-C1-6炔基；其中所述-C1-6烷基任選被1-6個(gè)羥基取代或任選被1-2個(gè)選自(j)-(v)的相同或不同的取代基取代(j)鹵基；(k)CO2R3；(l)CONR4R5；(m)OP(O)A1A2；(n)P(O)A1A2；(o)SO3H；(p)-O(CH2)rSiR63；
(q)選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、咪唑基和吡啶基的雜環(huán)基或雜脂環(huán)基；(r)氰基；(s)疊氮基；(t)芳基；(u)NR4R5；和(v) R3選自氫、C1-6烷基、烯丙基、芐基、2-羥乙基和2-四氫吡喃基；R4和R5各自獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、CH2CN、CH2CH2NH(叔丁氧基羰基)、C(＝NH)NH2和SO2N(C1-6烷基)2；或者R4和R5與連接它們的氮一起形成選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、咪唑基和吡啶的雜環(huán)基或雜脂環(huán)基；R6選自C1-6烷基和苯基；A1和A2各自獨(dú)立選自氫、-C1-6烷基、-OC1-6烷基、芐氧基、2-氯乙氧基和羥基；T選自氫、-OH、-(CH2CH2O)sH、-(CH2CH2O)tCH3和-NR4R5；m、n、p、q、r、s和t獨(dú)立為1-6；并且芳基為任選被鹵基或-CO2R3取代的苯基。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z為 在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z為-NH2。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z為 并包括以下(a)-(q)的基團(tuán)
(a)R1和R2為CH3；(b)R1和R2為P(O)(CH3)OH；(c)R1和R2為CH2OP(O)(OH)2；(d)R1為P(O)(CH3)OH，且R2為H；(e)R1為 且R2為H；(f)R1為H，且R2為P(O)(CH3)OH；(g)R1為H，且R2為CH2CONH2；(h)R1為H，且R2為CH2CO2CH3；(i)R1為H，且R2為CH2CH2CH2SO3H；(j)R1為H，且R2為CH2P(O)(OEt)2；(k)R1為H，且R2為CH2OP(O)(OH)2；(l)R1為H，且R2為CH2CH2Cl；(m)R1為H，且R2為 (n)R1為H，且R2為CH3；(o)R1為H，且R2為CONH(CH2CH2O)4H；(p)R1為H，且R2為 (q)R1為H，且R2為 在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z為-NH2。
R1為H，且R2為CH2CH2CH2SO3H。
另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案包括一種藥用組合物，所述組合物包含治療有效量的化合物I(包括其藥學(xué)可接受的鹽)和藥學(xué)可接受的載體、輔料或稀釋劑。
另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案包括一種治療或預(yù)防細(xì)菌或分枝桿菌感染的方法，所述方法包括給予有需要的哺乳動(dòng)物治療有效量的化合物I(包括其藥學(xué)可接受的鹽)。更優(yōu)選所述細(xì)菌感染是由革蘭氏陽(yáng)性菌或分枝桿菌引起。還更優(yōu)選引起該革蘭氏陽(yáng)性菌感染或分枝桿菌感染的微生物選自耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐萬古霉素金黃色葡萄球菌、耐萬古霉素糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、耐萬古霉素屎腸球菌(Enterococcus faecium)、耐青霉素肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)和結(jié)核分枝桿菌。
發(fā)明詳述本發(fā)明包含用于治療細(xì)菌感染的式I化合物，包括其藥學(xué)可接受的鹽。
本文公開的式I化合物的生理學(xué)上可接受的鹽在本發(fā)明范圍內(nèi)。本文和本權(quán)利要求書中采用的術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”包括無毒的堿加成鹽。合適的鹽包括但不限于例如由以下有機(jī)酸和無機(jī)酸衍生的鹽鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、乙酸、酒石酸、乳酸、亞磺酸、檸檬酸、馬來酸、富馬酸、山梨酸、烏頭酸、水楊酸、苯二甲酸等。本文采用的術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”也包括酸性基團(tuán)(例如羧酸根)與相反離子的鹽例如銨鹽、堿金屬(尤其是鈉或鉀)鹽、堿土金屬鹽(尤其是鈣或鎂)，以及與合適有機(jī)堿的鹽，例如低級(jí)烷基胺(甲胺、乙胺、環(huán)己基胺等)或取代低級(jí)烷基胺(例如羥基取代的烷基胺如二乙醇胺、三乙醇胺或三(羥甲基)-氨基甲烷)或與堿例如哌啶或嗎啉的鹽。
本發(fā)明的化合物可具有式I中描述有其立體化學(xué)的中心以外的手性中心，因此可以為非對(duì)映體混合物或單一非對(duì)映體。需要理解的是，所有這樣的異構(gòu)體形式及其任何混合物都包括在本發(fā)明中。例如，式I化合物中的基團(tuán)W是下式的糖殘基 需要理解的是，包括糖殘基的外消旋形式以及如下糖殘基的手性形式 另外，本發(fā)明的某些化合物可與水或普通有機(jī)溶劑形成溶劑合物。所述溶劑合物在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式I化合物可以采用流程1中所示的方法進(jìn)行制備。按照J(rèn).E.Leet等描述于美國(guó)專利6,218,398(2001年4月17日授予)(所述專利文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中)的方法，制備其中Z為下式的式II起始原料化合物 以及按照W.Li等描述于PCT申請(qǐng)WO 02/13834(2002年2月2日公布)的方法，制備其中Z為-NH2的式II起始原料化合物。
PCT WO 02/13834的實(shí)施例1、2和3中公開了本文的起始原料II的(其中Z為-NH2)的諾卡硫星IV的制備方法。諾卡硫星IV的結(jié)構(gòu)如下所示
實(shí)施例1、2和3(下文稱為制備1、2和3)在本文重復(fù)如下。
制備方法制備方法1通過生物轉(zhuǎn)化和分離合成諾卡硫星IV的方法向盛于500mL燒瓶的200mL諾卡硫星I的DMF(1mg/mL)溶液中加入400mg灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)蛋白酶(Sigma，目錄號(hào)P5147)。將燒瓶在27℃和200rpm下溫育45小時(shí)。將三個(gè)燒瓶的反應(yīng)混合物合并并離心(3000rpm，15分鐘)。上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸發(fā)至干，得到0.76g褐色殘余物。
將10mL DMF加入到褐色殘余物中，離心(13000rpm，5分鐘)除去不溶物。所得溶液采用Beckman System Gold的制備性HPLC系統(tǒng)，用YMC Pro-C18柱(20mmID×250mm長(zhǎng)，5μ粒徑，120?？讖?進(jìn)行制備性HPLC。洗脫液流速為10mL/分鐘。在每次色譜中，樣品(1-2mL)以1mM HCl(溶劑A)-乙腈(溶劑B)70/30(v/v)上樣到柱上，然后用以下梯度程序進(jìn)行分離30％B，12分鐘；30％-35％ B(或34％或33％ B)線性梯度，1分鐘；35％(或34％或33％ B)，30分鐘。在330nm下進(jìn)行檢測(cè)(UV)。用分析性HPLC檢測(cè)并合并含有諾卡硫星IV的流分。諾卡硫星IV溶液用真空蒸發(fā)至小量體積，然后冷凍并凍干。得到總量為258mg的諾卡硫星IV鹽酸鹽。
諾卡硫星IV(鹽酸鹽)的理化特性外觀有光澤的黃色粒狀粉末分子式 C58H57N13O17S5-HCl分子量 1367式量1403質(zhì)譜HR-ESIMS[M+H]+m/z 1368.26927ESI-MS/MS碎片離子m/z 1197，1179，1135紅外光譜主要IR帶(cm-1)3427，1650，1536，1474，1208，1128，604。
紫外光譜λmax(MeOH)nm 221，294，359(logε4.84，4.45，4.22)。
圓二色性CDλnm(Δε)(MeOH)357(+6.3)，306(-7.4)，266(+23.7)，239(-51.8)。
HPLC(Rt)8.8分鐘；(如分析性HPLC部分所述)。
1H-NMR 觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO-d6信號(hào)δ2.49)δ10.79(1H，s)，9.08(1H，s)，8.62(1H，s)，8.57(1H，br)，8.55(1H br)，8.51(1H，s)，8.44(1H，s)，8.22(1H，s)，7.98(1H，s)，7.86(1H，s)，7.84(1H，m)，7.72(1H，d，J＝8.4Hz)，7.67(1H，s)，7.34(2H，br)，7.18(1H，d，J＝6.6Hz)，6.50(4H，s)，6.00(1H，d，J＝12.0Hz)，5.72(2H，m)，5.21(1H，m)，5.05(1H，br)，5.03(1H，s)，4.96(1H，d，J＝5.3Hz)，4.78(1H，d，J＝10.2Hz)，4.52(1H，d，J＝10.9
Hz)，4.29(1H，d，J＝9.6Hz)，4.24(1H，m)，4.13(1H，d，J＝10.5Hz)，4.03(1H，d，J＝9.3Hz)，3.89(3H，s)，3.87(1H，m)，3.07(1H，br)，2.86(6H，s)，2.47(1H，m)，2.11(1H，br)，1.98(3H，s)，1.92(1H，d，J＝10.2Hz)，1.59(3H，s)，1.51(1H，m)，1.14(3H，br)，0.79(3H，d，J＝6.4Hz)。
13C-NMR 觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO-d6信號(hào)δ39.6)δ171.6，168.2，168.0，167.8，167.0，163.7，163.3，161.7，161.6，161.1，160.6，160.4，158.9，154.3，151.1，150.8，149.7，148.8，145.6，143.3，135.0，134.4，130.3，128.0，127.6，126.9，126.4，126.3，125.8，125.7，124.0，123.2，120.0，119.4，112.9，111.2，109.6，94.7，79.2，71.0，68.9，67.7，66.8，65.3，64.6，63.2，63.1，56.2，55.5，50.1，50.0，46.4，44.0，38.9，30.3，17.9，17.6，13.1。
制備方法2通過化學(xué)方法合成諾卡硫星IV將諾卡硫星I(3.1g，2.1mmol)的THF(10mL)懸浮液用氫碘酸(57％溶于水中，0.5mL，3.8mmol)和甲基碘(1.0mL，16mmol)處理。反應(yīng)混合物在密封試管內(nèi)45℃加熱16小時(shí)。然后讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫。然后將乙醚(25mL)加入到該混合物中，過濾收集所得黃色沉淀，用乙醚(3×25mL)洗滌并減壓干燥，得到3.4g含有諾卡硫星IV的氨碘酸鹽的粗產(chǎn)物(82％純度)(88％粗產(chǎn)物收率)。
一份粗制諾卡硫星IV(517mg)用制備性C-18柱進(jìn)行反相色譜純化，用CH3CN/H2O/TFA作為流動(dòng)相(梯度洗脫，20％ CH3CN/78％H2O/2％TFA至35％ CH3CN/63％ H2O/2％ TFA)。分離出呈TFA鹽形式的諾卡硫星IV(180mg，93％純度)。該物質(zhì)用于鑒定以及與生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)比。
諾卡硫星IV(三氟乙酸鹽)的理化特性外觀黃色粒狀粉末分子式 C58H57N13O17S7-TFA分子量 1367式量1482質(zhì)譜HR-ESIMS[M+H]+m/z 1368.269ESI-MS/MS碎片離子m/z 1197，1179，1153，1135，1117，719紅外光譜主要IR帶(cm-1)3438，1676，1536，1475，1204，1132，596紫外光譜λmax(MeOH)nm 219，294，359圓二色性CDλnm(Δε)(MeOH)3.55(+5.6)，305(-6.3)，265.5(+21.0)，239(-43.5)，210.5(+29.9)HPLC(Rt)8.8分鐘；(如分析性HPLC部分所述)。
該半合成物樣品與生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的樣品共同注入，它們具有相同的保留時(shí)間。
1H-NMR 觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO-d6信號(hào)δ2.50)δ10.84(1H，s)，10.78(1H，s)，9.11(1H，s)，8.65(1H，s)，8.59(1H，br)，8.57(1H，br)，8.54(1H，s)，8.46(1H，s)，8.22(1H，s)，7.99(1H，s)，7.89(1H，s)，7.86(1H，d，J＝11Hz)，7.75(1H，d，J＝8.5)，7.71(1H，s)，7.37(2H，m)，7.19(1H，d，J＝7.0Hz)，6.02(1H，d，J＝12.0Hz)，5.76(1H，dd，J＝11.2Hz，4.2Hz)，5.72(1H，d，J＝10Hz)，5.23(1H，m)，5.05(3H，m)，4.79(1H，d，J＝10.5)，4.53(1H，d，J＝11Hz)，4.30(1H，d，J＝9.5Hz)，4.25(1H，m)，4.16(3H，d，J＝0.5Hz)，4.05(1H，dd，J＝9.5Hz，1.5Hz)，3.91(1H，s)，3.87(1H，s)，3.13(1H，br)，2.88(6H，m)，2.50(1H，br)，2.12(1H，m)，2.0(3H，s)，1.94(1H，d＝14.5Hz)，1.60(3H，s)，1.52(1H，d，J＝7Hz)，1.17(3H，br)，0.8(3H，d，J＝7.0Hz)。
13C-NMR 觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO-d6信號(hào)δ39.6)δ171.3，168.0，167.8，167.6，166.8，163.6，163.1，161.4，160.9，160.4，160.2，158.7，154.1，150.9，150.6，149.5，148.6，145.39，143.1，134.8，134.2，130.1，127.8，127.4，126.7，126.3，126.1，125.6，125.5，123.8，123.0，119.8，119.3，112.7，111.0，109.4，94.5，78.9，72.2，70.9，68.8，67.5，66.3，65.1，64.4，63.0，62.7，56.0，49.9，49.7，46.5，42.1，38.1，30.0，17.7，17.3，12.9。
制備方法3諾卡硫星IV(游離堿)的合成方法向諾卡硫星IV-TFA鹽(制備方法2的化合物，35mg)的THF/CH3CN(3.5mL，6∶1)溶液中加入1，3-2-二氮雜磷雜苯/聚苯乙烯(26mg，2.3mmol/g)，將所得混合物在25℃攪拌30分鐘。然后過濾除去結(jié)合于樹脂的堿(1，3-2-聚苯乙烯固載的1，3-2-二氮雜磷雜苯)。所得濾餅用MeOH、THF、CH3CN和H2O洗滌。然后所得濾液減壓濃縮，以除去揮發(fā)物。所得溶液冷凍并凍干，得到24mg的諾卡硫星IV游離堿。
諾卡硫星IV(游離堿)的理化特性外觀 黃色粒狀粉末分子式 C58H57N13O17S5分子量1367式量 1367質(zhì)譜 HR-ESIMS[M+H]+m/z 1368.267ESI-MS/MS碎片離子m/z 1368.0，1196.9，1153.1，1134.8，1116.9，719.1HPLC(Rt) 8.8分鐘；(如分析性HPLC部分所述)。
游離堿樣品與半合成物(制備方法2的化合物)和生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(制備方法1的化合物)具有相同的保留時(shí)間。
1H-NMR觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO-d6信號(hào)δ2.50)δ10.74(1H，s)，9.10(1H，s)，8.65(1H，br)，8.60(1H，s)8.58(1H，br)，8.51(1H，s)，8.40(1H，s)，8.25(1H，s)，7.99(1H，s)，7.89(1H，s)，7.88(1H，d，J＝11.5Hz)，7.73(1H，m)，7.70(1H，br)，7.37(2H m)，7.18(1H，d，J＝7.0Hz)，6.00(1H，d，J＝12.0Hz)，5.74(1H，dd，J＝11.0Hz，4.5Hz)，5.69(1H，d，J＝8Hz)，5.22(1H，m)，5.05(2H，m)，5.00(1H，m)，4.77(1H，d，J＝10.5)，4.52(1H，d，J＝11Hz)，4.30(1H，d，J＝9.5Hz)，4.26(1H，s)，4.15(1H，m)，4.03(1H，m)，3.98(3H，br)，3.80(1H，m)，3.47(1H，m)，3.18(1H，m)，2.52(6H，m)，2.23(1H，m)，1.99(3H，s)，1.83(2H，m)，1.63(1H，m)，1.45(3H，s)，1.32(1H，m)，1.17(3H，br)，0.85(3H，d，J＝7.5Hz)。
通過包括烷基化、?；挽Ⅳ然趦?nèi)的本領(lǐng)域有機(jī)化學(xué)技術(shù)人員已知的各種方法，可完成從式II起始化合物到最終化合物I的轉(zhuǎn)化。這些方法通常使用市售可得的試劑或者有機(jī)合成的技術(shù)人員容易制備的試劑。通常通過在合適溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，在堿存在下，在有或沒有碘化鈉或催化量碘化四正丁銨下，用鹵代烷或磺酸酯處理式II化合物，完成本發(fā)明的烷基化反應(yīng)。合適的堿是有機(jī)化學(xué)技術(shù)人員眾所周知的，包括有機(jī)堿例如三乙胺和膦嗪堿以及例如無機(jī)堿碳酸鉀、氫氧化鈉和碳酸銫。通常，通過在合適溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中并且有時(shí)需要使用上述合適的堿，用?；瘎┨幚硎絀I化合物，完成?；磻?yīng)。合適的?；瘎┌人狨｛u和酐、氯甲酸烷基酯和異氰酸酯。通過在合適溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，用烷基膦酰二鹵或烷基膦酰一鹵處理式II化合物，完成膦羧化反應(yīng)。這些轉(zhuǎn)化實(shí)例將在具體各種式I化合物也可用作合成中間體，并且可以加工成其它式I實(shí)例化合物。制備具體實(shí)例化合物的加工方法本質(zhì)上是常規(guī)性的，有機(jī)合成技術(shù)人員可以對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)。這類轉(zhuǎn)化實(shí)例也將在具體實(shí)施方案部分中給出，并將提供額外實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)。
流程1 式I化合物表現(xiàn)了抗細(xì)菌和分枝桿菌例如金黃色葡萄球菌、肺炎葡萄球菌(Staphylococcus pneumoniae)和糞腸球菌的抗微生物活性。所述抗微生物活性包括抗革蘭氏陽(yáng)性菌(包括某些多重耐藥菌株)的作用。因此，本發(fā)明提供治療感染性疾病的方法。
當(dāng)式I化合物用作治療細(xì)菌感染的藥用組合物時(shí)，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體例如溶劑、稀釋劑等組合，并且以如下形式口服給予片劑、膠囊劑、分散粉劑、顆粒劑或，含有例如約0.05-5％的懸浮劑的混懸劑；含有例如約10％-50％的糖的糖漿劑；和含有例如約20％-50％的乙醇的酏劑等；或等滲介質(zhì)中無菌注射液或含有例如約0.05-5％懸浮劑的混懸液。這些藥物制劑可以含有與載體組合的例如約0.05％至最多約90％的活性成分，更常見為約5％-60％(重量)。
所用活性成分的有效劑量可以根據(jù)所用的具體化合物、給藥模式和待治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，一般而言，當(dāng)以約0.5-約500mg/kg動(dòng)物體重的日劑量給予本發(fā)明化合物時(shí)，可以獲得令人滿意的結(jié)果，優(yōu)選以分次劑量一天給予2-4次，或者以緩釋劑型給予本發(fā)明化合物。對(duì)于大多數(shù)大型哺乳動(dòng)物而言，總?cè)談┝繛榧s1mg-100mg，優(yōu)選約2-80mg。適合內(nèi)用的劑型包含有約0.5-500mg的所述活性化合物以及與之密切混合的固體或液體的藥學(xué)上可接受的載體。該給藥方案可以進(jìn)行調(diào)整，以提供最佳治療反應(yīng)。例如，可以每天給予幾個(gè)分次劑量，或者可以根據(jù)治療情況的緊急程度按比例減少劑量。
這些活性化合物可以以口服給予或者經(jīng)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給予。固體載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和高嶺土，而液體載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油例如玉米油、花生油和芝麻油，只要適合活性成分的性質(zhì)和所需的具體給藥形式。制備藥用組合物中所用的常規(guī)輔料最好可以包括例如矯味劑、著色劑、防腐劑和抗氧化劑(例如維生素E、抗壞血酸、BHT(丁基化羥基甲苯)和BHA(丁基化羥基苯甲醚)。
這些活性化合物也可經(jīng)胃腸外或腹膜內(nèi)給予。這些作為游離堿或藥理學(xué)上可接受的鹽的活性化合物的溶液或混懸液，可以在水中適當(dāng)?shù)嘏c表面活性劑例如羥丙基纖維素混合來制備。也可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇和它們的混合物油中制備分散體。在常規(guī)貯藏和使用條件下，這些制劑含有防腐劑，以防止微生物生長(zhǎng)。
適用于注射的藥物形式包括無菌水溶液或者分散液。在所有情況下，所述形式必須是無菌的，并且必須是以容易注射的流體形式存在。在生產(chǎn)和貯藏條件下，它必須保持穩(wěn)定，并且必須被保存以防微生物(例如細(xì)菌和真菌)的污染作用。所述載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油。
具體實(shí)施方案詳述組成本發(fā)明的化合物、其制備方法和其生物學(xué)作用在以下實(shí)施例中表現(xiàn)的更全面，所述實(shí)施例僅僅為了說明的目的，不應(yīng)認(rèn)為限制本發(fā)明的領(lǐng)域或范圍。所述實(shí)施例中采用的縮寫和符號(hào)是本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)縮寫和符號(hào)并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。
O-烷基化的通用方法在室溫下，在有或沒有碘化鈉(至多4當(dāng)量)或催化量的(約0.5當(dāng)量)的碘化四正丁銨時(shí)，向溶于合適體積溶劑(優(yōu)選溶劑N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氯甲烷、二甲亞砜、乙腈、水)的諾卡硫星I或II(1.0當(dāng)量)攪拌溶液中，加入1-3當(dāng)量的無機(jī)堿(氫化鈉、碳酸銫、碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉)或有機(jī)堿(三乙胺、二異丙基乙胺、磷腈堿例如叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)、2-叔丁基亞氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基-全氫化-13，2-二氮雜磷雜苯(BEMP)，聚苯乙烯固載BEMP)。
加入鹵代烷、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯(1.5-4.0當(dāng)量)，然后將所得反應(yīng)物攪拌直至諾卡硫星被消耗為止。真空除去溶劑，所得殘余物用制備性HPLC(高壓液相色譜)、用甲醇/水作為洗脫劑進(jìn)行純化，或者用MPLC(中壓液相色譜)在C18(ODS-A，S-75μm)制備性柱上、用乙腈/水作為洗脫劑進(jìn)行純化。將含有產(chǎn)物的流分合并，濃縮并冷凍干燥，得到所需產(chǎn)物的TFA鹽或HCl鹽。
氨基甲酸酯合成的通用方法在室溫下，向溶于合適體積溶劑(優(yōu)選溶劑N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氯甲烷、二甲亞砜、乙腈)的諾卡硫星I或II(1.0當(dāng)量)攪拌溶液中，加入3當(dāng)量的有機(jī)堿(三乙胺、二異丙基乙胺、磷腈堿例如叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)、聚苯乙烯固載的2-叔丁基亞氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基-全氫化-13，2-二氮雜磷雜苯(BEMP)。攪拌5-10分鐘后，所得反應(yīng)化合物在冰水浴中冷卻，然后加入4-硝基苯基氯甲酸酯(至多4當(dāng)量)并再攪拌10分鐘。向該溶液中加入胺(1-4當(dāng)量)。將反應(yīng)物攪拌直至反應(yīng)完成，然后用1N HCl猝滅。如果反應(yīng)混合物在加入HCl水溶液時(shí)變渾濁，通過加入額外的DMF或甲醇重新變成溶液。所得最終澄清溶液用MPLC在制備性C18(ODS-A，S-75μm)上用乙腈-水純化。將含有產(chǎn)物的流分合并，濃縮并冷凍干燥，得到黃色粉末。
膦酸酯合成的通用方法在0℃，向溶于合適體積溶劑(優(yōu)選溶劑N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氯甲烷、二甲亞砜、乙腈)的諾卡硫星I或II(1.0當(dāng)量)攪拌溶液/懸浮液中，加入至多3當(dāng)量的有機(jī)堿(三乙胺、二異丙基乙胺、磷腈堿例如叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)、固載于聚苯乙烯的2-叔丁基亞氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基-全氫化-13，2-二氮雜磷雜苯(BEMP)。加入烷基膦酰二氯(1-3當(dāng)量)，然后在0℃將所得混合物攪拌直至反應(yīng)完成。均相反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)猝滅并濃縮。殘余物懸浮在水(300mL)中，然后將殘留固體過濾。所得水溶液用色譜法純化(制備性C18，ODS-A，S-75μm，乙腈/水)。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，濃縮并冷凍干燥。
酯制備的通用方法在0℃，向溶于合適體積溶劑(優(yōu)選溶劑N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氯甲烷、二甲亞砜、乙腈、吡啶)的諾卡硫星(1.0當(dāng)量)攪拌溶液/懸浮液中，加入至多3當(dāng)量的無機(jī)堿(碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸氫鉀、碳酸鉀)或有機(jī)堿(吡啶、三乙胺、二異丙基乙胺、磷腈堿例如叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)、2-叔丁基亞氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基-全氫化-13，2-二氮雜磷雜苯(BEMP)、聚苯乙烯固載的BEMP。加入酰氯或酐(1-3當(dāng)量)，然后將所得混合物攪拌直至反應(yīng)完成。有時(shí)需要將所得反應(yīng)物從室溫升溫至回流溫度。將粗反應(yīng)物蒸發(fā)至干，然后所得淺黃色殘余物用制備性HPLC或MPLC色譜法(制備性C18，ODS-A，S-75μm，乙腈/水或甲醇/水)進(jìn)一步純化。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，濃縮并冷凍干燥。
實(shí)施例1(式IR1＝CH3，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，將諾卡硫星I(282mg，0.196mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液用叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)(0.120ml，0.392mmol)處理3分鐘。加入碳酸二叔丁酯(0.046ml，0.196mmol)，然后將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘直至吲哚羥基被保護(hù)成相應(yīng)的二碳酸二叔丁酯。然后加入甲基碘(0.012ml，0.196mmol)，反應(yīng)用HPLC監(jiān)測(cè)。2小時(shí)后，約70％轉(zhuǎn)變成甲基醚。然后再加入甲基碘(0.012ml，0.196mmol)，然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。然后加入1NHCl(0.3ml)，所得反應(yīng)混合物真空濃縮，除去N，N-二甲基甲酰胺。將粗殘余物溶于水/乙腈/甲醇中并在室溫下用三氟乙酸處理，直至HPLC監(jiān)測(cè)顯示吲哚羥基完全脫保護(hù)為止。然后所得溶液用MPLC在制備性C-18柱上、用乙腈/水作為洗脫劑進(jìn)行純化。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，真空濃縮除去大部分乙腈。殘余物冷凍并凍干，得到TFA鹽產(chǎn)物(40.5mg，14％收率)1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.8(1H，s)，10.3(1H，s)，9.10(1H，s)，8.68(1H，s)，8.59(1H，d，J＝9.2Hz)，8.54(1H s)，8.54(1H，s)，8.22(1H，s)，8.14(1H，s)，8.05(1H，s)，7.92(1H，s)，7.86(1H，d，J＝10.7Hz)，7.76(1H，d，J＝8.45Hz)，7.68(1H，s)，7.35(2H，dd，J＝8.3，7.3Hz)，7.19(1H，d，J＝7.35Hz)，6.51(1H，s)，6.03(1H，d，J＝12.5Hz)，5.75(1H，s)，5.72(2H，m)，5.21(1H，m)，5.06(2H，m)，4.79(1H，d，J＝10.5Hz)，4.54(1H，d，J＝11.5Hz)，4.30(1H，d，J＝9.6Hz)，4.26(1H，m)，4.20(3H，s)，4.16(1H，d，J＝9.7Hz)，4.05(1H，d，J＝9.7Hz)，3.91(3H，s)，3.13(1H，s)，2.87(6H，br)，2.47(1H，m)，2.12(1H，m)，2.00(3H，s)，1.94(1H，d，J＝14.5Hz)，1.60(3H，br)，1.23(1H，m)，1.16(3H，br)，0.80(3H，d，J＝6.9Hz)。
HRMS(ES)C62H63S5N14O18(MH+)的計(jì)算值1451.305；實(shí)測(cè)值1451.309。
實(shí)施例2(式IR1＝1-(2，3-環(huán)氧基)丙基，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在0℃，將一份氫化鈉(0.42mmol)加入到諾卡硫星I(0.14mmol)和活化4分子篩的四氫呋喃(5ml)混合物中。所得混合物攪拌10分鐘，然后加入表溴醇(0.21mmol)。所得反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10小時(shí)，然后減壓除去溶劑。加入乙醚(5ml)，沉淀出黃色固體，所述固體用制備性HPLC進(jìn)一步純化。將含有所需產(chǎn)物的流分冷凍和凍干，得到60mg黃色固體產(chǎn)物MS(MH+)＝1493。
實(shí)施例3(式IR1＝CH2CH(OH)CH2OH，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，向?qū)嵤├?的化合物(0.14mmol)的乙腈(3ml)和水(3ml)的混合物中，加入稀的HCl水溶液(0.1N)直至pH為3.0。然后將所得澄清溶液攪拌1小時(shí)，然后減壓除去溶劑。所得粗產(chǎn)物用制備性HPLC進(jìn)一步純化。將含有所需產(chǎn)物的流分冷凍并凍干，得到20mg黃色固體產(chǎn)物MS(MH+)＝1511。
實(shí)施例4(式IR1＝P+(N-吡咯烷)3，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，向諾卡硫星I(287mg，0.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺攪拌溶液中，加入六氯合磷氯酸苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷子基-鏻(110mg，0.21mmol)。5分鐘后，所得反應(yīng)混合物在C18反相硅膠柱上用含0.01％HCl的乙腈(10-35％)-水作為洗脫劑，進(jìn)行純化。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，濃縮并冷凍干燥，得到白色粉末產(chǎn)物。得到0.21g(60％)的HCl鹽1H NMR(DMSO，500MHz)δ10.78(1H，s)，9.77(1H，s)，9.12(1H，s)，8.75(1H，s)，8.73(1H，s)，8.66-8.58(2H，m)，8.54(1H，s)，8.21(1H，s)，8.19(1H，br s)，8.11(1H，s)，8.09(1H，s)，7.88(1H，d，J＝10.7Hz)，7.75(1H，d，J＝8.6Hz)，7.68(1H，s)，7.39-7.35(2H，m)，7.20(1H，d，J＝7.0Hz)，6.51(1H，s)，6.38(1H，br s)，6.03(1H，d，J＝12.2Hz)，5.80(1H，s)，5.79-5.76(1H，m)，5.71(1H，d，J＝10.1Hz)，5.25-5.22(1H，m)，5.09-5.02(3H，m)，4.78(1H，d，J＝10.4Hz)，4.50(1H，d，J＝11Hz)，4.29(1H，d，J＝9.8Hz)，4.26-4.24(1H，m)，4.16(1H，d，J＝10.7Hz)，4.06(1H，d，J＝8.2Hz)，3.9(3H，br s)，3.41-3.33(10H，m)，3.12(1H，s)，3.03-2.98(6H，m)，2.83-2.90(6H，m)，2.16-2.08(1H，m)，1.99(3H，s)，1.90-1.81(99H，m)，1.74-1.70(6H，m)，1.60(93H，s)，1.15(3H，br s)，0.80(3H，d，J＝6.7Hz)。LRMS(ES)C73H83N17O18PS5(M+)計(jì)算值1676.4，實(shí)測(cè)值1676.5。
實(shí)施例5(式IR1＝P(O)(CH3)OH，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(1.0g，0.7mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中。加入碳酸銫(0.7g，2.1mmol)，然后在室溫下將混合物攪拌30分鐘。將混合物冷卻至0℃，然后加入甲基膦酰二氯(0.07g，0.54mmol)并將混合物在0℃攪拌40分鐘。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(6ml)猝滅，所得混合物用色譜法純化(制備性C18，ODS-A，S-75μm，5％-15％-20％-40％乙腈/水)，得到鈉鹽產(chǎn)物(392mg，0.23mmol，33％收率)MS(MH+)1515.3；C62H63N14O20PS5·Na·0.5NaHCO3·7H2O的計(jì)算值C，43.98；H，4.58；N，11.49；P，1.81；S，9.39；Na，2.02。實(shí)測(cè)值C，44.06；H，4.56；N，11.42；P，1.69；S，9.06；Na，2.09。
實(shí)施例6(式IR1＝H，R2＝CH3，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(0.288g，0.20mmol)的四氫呋喃(6mL)和甲醇(4mL)溶液用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M己烷溶液，0.21mL，0.42mmol)處理。在氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)物攪拌5分鐘，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。將粗殘余物裝樣到C-18反相硅膠柱(YMC Gel，12nm，S-75μm)上，并用10％的乙腈水溶液分步增加到60％的乙腈水溶液梯度洗脫，進(jìn)行純化。合并合適流分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈。所得水溶液冷凍并凍干，得到黃色凍干固體產(chǎn)物(0.098g，0.068mmol，34％收率)MS(MH+)＝1451。
實(shí)施例7(式IR1＝H，R2＝(CH2)3SO3H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(0.575g，0.40mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液用氫氧化鈉(1.0N溶液，0.84mL，0.84mmol)處理，然后在室溫下攪拌約5分鐘。將亮黃色溶液用1，3-丙磺酸內(nèi)酯(0.054g，0.44mmol)處理并攪拌6-8小時(shí)。真空除去溶劑，所得殘余物用水(約10mL)和飽和碳酸氫鈉(1mL)萃取。將所得溶液裝載到C-18反相硅膠柱(YMCODS，12nm，S-75μm)上，并用水增加到30％乙腈水溶液階式梯度洗脫。將含產(chǎn)物流分合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈。所得水溶液冷凍干燥，得到黃色凍干固體產(chǎn)物(鈉鹽)(0.234g，0.148mmol，37％收率)MS(M-H)＝1557.41。
該化合物也可通過采用溶于DMP的BTPP(作為堿)來制備。
實(shí)施例8和實(shí)施例9(式IR1＝H，R2＝CH2C(O)NH2，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)和(式IR1＝CH2C(O)NH2，R2＝CH2C(O)NH2，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，將聚苯乙烯樹脂固載2-叔丁基亞氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氫化-1，3，2-二氮雜磷雜苯(BEMP)(0.28mmol)加入到諾卡硫星I(0.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中。將混合物攪拌10分鐘，然后加入2-溴乙酰胺(0.28mmol)，并在室溫下將混合物攪拌10小時(shí)。將混合物過濾，然后將濾液減壓濃縮。所得粗產(chǎn)物用制備性HPLC進(jìn)一步純化。將含有所需產(chǎn)物的流分冷凍并凍干，得到30mg黃色固體產(chǎn)物(式IR1＝H，R2＝CH2C(O)NH2，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)MS(MH+)＝1494。
通過使用聚苯乙烯樹脂固載BEMP(0.56mmol)和2-溴乙酰胺(0.56mmol)，相同條件下得到80mg黃色固體的雙-產(chǎn)物(式IR1＝CH2C(O)NH2，R2＝CH2C(O)NH2，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)MS(MH+)＝1551。
實(shí)施例10(式IR1＝H，R2＝4-羰-(2-四氫吡喃氧基)芐基，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將對(duì)甲苯磺酸一水合物(34mg，0.178mmol)加入到冷(冰/水浴)的4-氯甲基苯甲酸(3.03g，0.0178mol)和二氫吡喃(8.12ml，0.089mol)的二氯甲烷(85ml)的攪拌混合物中。除去冰浴，再在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)。然后將所得反應(yīng)混合物真空濃縮，然后將殘余物在乙醚和稀碳酸氫鈉水溶液之間分配。將醚液洗滌(用2x鹽水)，經(jīng)無水硫酸鈉干燥并真空濃縮，得到可結(jié)晶的油狀物(900mg)。所得固體用硅膠(10g)層析，用氯仿作為洗脫劑，得到2-四氫吡喃基-4-氯甲基苯甲酸酯的無色晶體(208mg)。MS(ESI)254。
將聚苯乙烯固載BEMP(182mg，0.42mmol)加入到諾卡硫星I(287mg，0.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(6ml)攪拌溶液中。在22℃繼續(xù)攪拌15分鐘，然后加入2-四氫吡喃基-4-氯甲基苯甲酸酯(80mg，0.3mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后加入三乙胺(56μL，0.42mmol)并繼續(xù)攪拌6天。將反應(yīng)混合物過濾，濾液用乙醚稀釋，沉淀出無色固體的產(chǎn)物(122mg，HPLC純度為96％)MS(ESI)1655。
實(shí)施例11(式IR1＝H，R2＝4-羧基(carbohydroxy)芐基，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將鹽酸(3ml，0.1N)加入到實(shí)施例10的化合物(92mg)的四氫呋喃(40ml)攪拌溶液中。在22℃下將混合物攪拌2小時(shí)。收集所得固體并干燥，得到黃色固體產(chǎn)物(50mg，HPLC純度＞95％)MS(ESI)1571。
實(shí)施例12(式IR1＝H，R2＝CH2OP(O)(OH)2，鈉鹽和銨鹽形式，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，將諾卡硫星I(5.85g，4.07mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(35ml)溶液用叔丁基亞氨基-三(吡咯烷子基)正膦(BTPP)(3.81g，12.21mmol)處理并攪拌約5分鐘。然后將混合物用O-氯甲基-O′，O″-二叔丁基磷酸酯(1.58g，6.10mmol)處理，然后在室溫下攪拌5小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，粘稠油狀殘余物加乙醚研磨。過濾收集粗固體。將所得固體用20％乙腈水溶液裝樣到C-18反相柱上，并用最終達(dá)到45％乙腈水溶液的階式梯度系統(tǒng)進(jìn)行純化。保留在溶液中達(dá)24小時(shí)的含產(chǎn)物流分經(jīng)歷叔丁基的損失，得到單叔丁基中間產(chǎn)物。收集合適流分并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，然后凍干，得到單叔丁基中間產(chǎn)物(3.4g)。將中間產(chǎn)物(0.40g，0.25mmol)的一部分用10％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40ml)處理，攪拌約5分鐘，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。油狀殘余物用水(40ml)、濃碳酸氫鈉(使得pH為7.5-8)和乙腈萃取，以使大多數(shù)不溶物溶解。所得產(chǎn)物通過C-18反相柱色譜法，用最終達(dá)到20％乙腈水溶液的梯度系統(tǒng)，進(jìn)行純化。將合適流分合并，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。然后，純化的終產(chǎn)物可通過凍干法以鈉鹽形式分離出來。為了分離出二銨鹽形式，將以上色譜柱所得水溶液再通過一個(gè)C-18反相色譜柱，但所述流動(dòng)相的水部分被0.1M乙酸銨緩沖液取代。梯度系統(tǒng)最終達(dá)到含40％乙腈的緩沖液。將合適流分合并并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。所得緩沖水溶液用冷凍干燥法干燥，得到淡黃色固體產(chǎn)物(0.083g，0.053mmol，11％收率)1H NMR(DMSO-d6，500MHz)；δ10.06(s，1H)，9.12(s，1H)，8.96(s，1H)，8.67(d，J＝7.6，1H)，8.52(d，J＝7.6，1H)，8.51(s，1H)，8.26(d，J＝6.7，1H)，8.25(s，1H)，8.05(bs，1H)，7.87(s，1H)，7.78(d，J＝10.97，1H)，7.62(bs，1H)，7.32(t，J＝7.6，1H)，7.19(d，J＝6.7，1H)，7.12(d，J＝7.2，1H)，6.38(bs，1H)，5.98(d，J＝11.9，1H)，5.73(s，1H)，5.68(d，J＝9.0，1H)，5.28-5.20(m，2H)，5.15(m，1H)，5.04(d，J＝13.3，1H)，4.94(d，J＝3.8，1H)，4.80(d，J＝10.5，1H)，4.62(d，J＝10.5，1H)，4.35(t，J＝9.5，1H)，4.25(m，1H)，4.09(d，J＝10.0，1H)，4.01(d，J＝9.0，1H)，3.92(s，3H)，3.75(m，1H)，2.64(s，1H)，2.58(s，1H)，2.36(s，1H)，2.01(s，3H)，1.80(d，J＝15.2，1H)，1.76(s，1H)，1.40(bs，3H)，1.14(d，J＝6.2，3H)，0.54(d，J＝6.2，3H)；HRMS C62H63N14O22S5P(MH+)計(jì)算值1547.266，實(shí)測(cè)值1547.268。
實(shí)施例13(式IR1＝H，R2＝CH2CH2Cl，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，將諾卡硫星I(513mg，0.36mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液用BTPP(0.22ml，0.72mmol)處理3分鐘。加入甲磺酸氯乙酯(0.041mg，0.36mmol)，并將所述反應(yīng)混合物攪拌過夜。真空除去溶劑，將殘余物溶于水/乙腈中，用1N HCl(0.72ml，0.72mmol)處理，然后用MPLC在制備C-18柱上用乙腈/水作為部分洗脫劑，進(jìn)行純化。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，真空濃縮除去大部分乙腈。殘余物冷凍并凍干，得到HCl鹽的產(chǎn)物(210mg，40％收率)HRMS(ES)C63H64ClN14O18S5(MH+)的計(jì)算值1499.281，實(shí)測(cè)值1499.283。
實(shí)施例14(式IR1＝H，R2＝-(CH2)3N+(CH3)3，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在室溫下，將諾卡硫星I(262mg，0.18mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液用BTPP(0.114ml，0.36mmol)處理3分鐘。加入溴化(3-溴丙基)三甲基銨(47mg，0.18mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。然后加入1N HCl(3ml)，將溶液真空濃縮以除去N，N-二甲基甲酰胺。殘余物用MPLC在制備C-18柱上用乙腈/水作為洗脫劑，進(jìn)行純化。將含有所需產(chǎn)物的流分合并，并真空濃縮以除去大部分乙腈。然后將殘余物冷凍并凍干，得到HCl鹽產(chǎn)物(193mg，69％收率)1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.8(1H，s)，10.0(1H，s)，9.25(1H，s)，8.86(1H，m)，8.66(1H，s)，8.59(2H，br)，8.55(1H，s)，8.28(1H，s)，8.22(1H，s)，8.13(1H，br)，7.86(1H，s)，7.74(1H，d，J＝10.0Hz)，7.64(1H，br)，7.55(1H，d，J＝10.0Hz)，7.46(1H，dd，J＝10.0，5.0Hz)，7.31(1H，d，J＝10.0Hz)，7.13(1H，d，J＝5Hz)，6.39(2H，br)，6.01(1H，d，J＝10Hz)，5.89(1H，m)，5.76(1H，s)，5.71(1H，d，J＝10.0Hz)，5.4(1H，d，J＝5.0Hz)，5.32(2H，s)，5.30(2H，s)，5.09(1H，m)，5.05(1H，m)，4.83(1H，dd，J＝15.0，10.0Hz)，4.41(1H，m)，4.11(1H，dd，J＝10.0，5.0Hz)，3.9(3H，s)，3.87(1H，m)，3.43(9H，br)，3.17(6H，br)，2.97(1H，br)，2.87(1H，br)，2.02(2H，s)，1.82(4H，m)，1.58(3H，br)，1.24(3H，br)，1.12(1H，m)，0.78(3H，d，J＝5.0Hz)；HRMS(ES)C67H74N15O18S5+(M+)的計(jì)算值1536.394，實(shí)測(cè)值1536.389。
實(shí)施例15(式IR1＝H，R2＝C(O)NH(CH2)3CH3，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(0.2874g，0.2mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中。加入膦嗪堿P1-t-Bu-三-(四亞甲基)(BTPP，0.2ml，0.6mmol)，將混合物攪拌10分鐘，然后冷卻至0℃。加入氯甲酸4-硝基苯酯(0.14g，0.7mmol)，將混合物在0℃攪拌10分鐘。加入正丁基胺(0.03ml，0.3mmol)，將混合物在0℃攪拌15分鐘，然后用1N HCl(3ml)猝滅。加入N，N-二甲基甲酰胺以溶解固體，將所得混合物用色譜法純化(制備性C18，ODS-A，S-75μm，20％-30％乙腈/水/0.5mL 1N HCl/L)，得到黃色粉末狀產(chǎn)物(0.0234g，7％收率)1H NMR(DMSO，500MHz)δ11.27(s，1H)，10.06(s，1H)，9.20(s，1H)，8.64(m，2H)，8.60(s，1H)，8.54(s，1H)，8.21(s，1H)，8.09(s，1H)，8.01(m，1H)，7.88(m，1H)，7.75(m，1H)，7.62(s，1H)，7.43(m，1H)，7.36(m，1H)，7.28(m，1H)，7.19(m，1H)，6.38(s，1H)，6.36(s，1H)，6.06(m，1H)，5.76(s，1H)，5.72(m，1H)，5.08，(m，2H)，4.89，(m，1H)，4.30(m，2H)，4.13(m，2H)，3.91(s，3H)，3.40(m，7H)，3.11(m，1H)，2.87(m，7H)，2.54(m，2H)，2.12(m，1H)，2.08(s，1H)，2.03(m，2H)，1.93(d，J＝15.0Hz，1H)，1.60(s，3H)，1.39(m，1H)，1.23(m，1H)，1.14(m，4H)，0.78(m，6H)；LRMS(ESI+)m/z＝1536.6，(ESI-)m/z＝1534.58。
實(shí)施例16(式IR1＝H，R2＝C(O)NH(CH2)3-(4-甲基哌嗪-1-基)，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)除了使用1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪(0.12g，0.6mmol)代替正丁基胺以外，按照例如實(shí)施例15的方法，分離出黃色粉末狀產(chǎn)物(0.1141g，41％收率)1H NMR(DMSO，500MHz)δ11.82(bs，1H)，11.36(s，1H)，10.06(s，1H)，9.21(s，1H)，8.92(bs，1H)，8.76(s，2H)，8.60(s，1H)，8.54(s，1H)，8.22(s，1H)，8.11(s，2H)，8.02(m，1H)，7.88(m，1H)，7.75(d，J＝10.0Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.45(s，1H)，7.28(d，J＝5.0Hz，1H)，7.21(m，1H)，6.38(s，1H)，6.06(d，J＝10.0Hz，1H)，5.77(s，1H)，5.71(m，2H).5.10(s，1H)，5.07(s，2H)，4.87(bs，1H)，4.35(m，1H)，4.26(m，1H)，4.11(m，2H)，3.92(s，2H)，3.86(s，1H)，3.59-3.30(m，15H)，3.10(s，3H)，2.88(s，6H)，2.77(s，3H)，2.13(d，J＝10.0Hz，1H)，2.04(s，3H)，1.92(d，J＝15.0Hz，1H)，1.84(m，1H)，1.59(s，3H)，1.13(s，3H)，0.77(s，3H)；HRMS(ES)C70H78S5N17O19(MH+)的計(jì)算值1620.426，實(shí)測(cè)值1620.428。
實(shí)施例17(式IR1＝H，R2＝P(O)(CH3)OH，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(1.0g，0.7mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(25ml)中。加入膦嗪堿P1-t-Bu-三-(四亞甲基)(BTPP，0.65ml，2.1mmol)，并將混合物攪拌5分鐘。將混合物冷卻至0℃，加入甲基膦酰二氯(0.09g，0.7mmol)，然后將混合物在0℃攪拌30分鐘。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(6ml)，然后加入足量水，溶解所得固體。所得混合物用色譜法純化(制備性C18，ODS-A，S-75μm，15％乙腈/水-30％乙腈/水)，得到黃色粉末狀產(chǎn)物(0.083g，8％收率)1H NMR(DMSO，500MHz)δ11.42(bs，1H)，10.08(s，1H)，9.01(s，1H)，8.71(s，1H)，8.56(s，1H)，8.53(s，1H)，8.20(s，1H)，8.07(bs，1H)，7.91(s，1H)，7.88(m，1H)，7.83(m，2H)，7.61(bs，1H)，7.24(t，J＝7.5Hz，1H)，7.12(d，J＝10.0Hz，1H)，7.09(d，J＝10.0Hz，1H)，6.35(s，1H)，6.02(d，J＝15.0Hz，1H)，5.74(s，1H)，5.70(d，J＝10.0Hz，1H)，5.13(d，J＝5.0Hz，1H)，5.02(m，2H)，4.90(d，J＝10.0Hz，1H)，4.55(d，J＝10.0Hz，1H)，4.28(d，J＝10.0Hz，1H)，4.13(m，2H)，3.99(d，J＝10.0Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.02(m，5H)，2.98(m，1H)，2.78(m，4H)，2.26(m，1H)，2.05(m，1H)，2.00(s，2H)，1.89(d，J＝15.0Hz，1H)，1.73(m，6H)，1.55(m，2H)，1.19(s，1H)，1.15(m，3H)，0.90(d，J＝15.0Hz，2H)，0.76(m，2H)；HRMS(ES)C62H64PS5N14O20(MH+)計(jì)算值1515.276，實(shí)測(cè)值1515.272。
實(shí)施例18(式IR1＝R2＝CH3，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)方法a將過量的醚性重氮甲烷加入到諾卡硫星I(100mg)的15ml四氫呋喃∶氯仿∶甲醇(1∶1∶1)溶液中。將所得溶液真空濃縮，殘余物在硅膠(10g)上層析，用氯仿∶甲醇∶水(95∶5∶1)作為洗脫劑，得到13mg產(chǎn)物，其具有73％純度，與一甲基化噻唑基肽衍生物共存MS(MH+)1465。
方法b向諾卡硫星I(2.00g，1.39mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(14mL)溶液中加入碳酸銫(1.81g，5.57mmol)和碘化四正丁基銨(261mg，0.71mmol)，所得混合物在室溫下攪拌5分鐘。向該混合物中加入硫酸二甲酯(1.32mL，13.9mmol)，并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。所得淺黃色渾濁液與最小量的N，N-二甲基甲酰胺混合，得到澄清溶液，用制備性HPLC(C-18反相硅膠，MeOH/H2O/0.1％ TFA系統(tǒng))進(jìn)行純化，得到1.9g標(biāo)題化合物的TFA鹽MS(MH+)1465；HRMS(ES)C63H65N14O18S5(MH+)的計(jì)算值1465.320，實(shí)測(cè)值1465.319。
實(shí)施例19(式I；R1＝R2＝CH2CO2CH3，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)向諾卡硫星I(1.00g，0.69mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中加入碳酸銫(0.50g，1.52mmol)，并將混合物用溴乙酸甲酯(0.15mL，1.52mmol)處理，然后將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將混合物用20％甲醇/氯仿溶液稀釋，濾除不溶物，然后用柱色譜(硅膠，2-15％MeOH/CHCl3)進(jìn)行純化，得到416mg棕色固體的標(biāo)題化合物MS(MH+)＝1581，MS(M-H)＝1579。
該化合物也可通過使用二異丙基乙胺(10當(dāng)量)和催化量的溶于DMF的BEMP(作為堿)，從諾卡硫星I和溴乙酸甲酯(8當(dāng)量)制備。
實(shí)施例20(式IR1＝R2＝CH2CO2H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)向?qū)嵤├?9的產(chǎn)物(0.1g，0.063mmol)的無水苯(2.0mL)懸浮液中加入氧化三正丁基錫(0.14mL，0.025mmol)。將所得化合物加熱至回流并保持5小時(shí)。此時(shí)，用HPLC分析反應(yīng)物，表明原料完全消耗和一種主要產(chǎn)物。將反應(yīng)物冷卻至室溫，邊攪拌邊加入1N鹽酸(0.25mL)。攪拌5分鐘后，減壓除去溶劑，得到黃色固體。將所得固體溶于3∶1的乙腈/水溶液(2mL)中，通過注射式過濾器過濾，用制備性HPLC(C-18反相硅膠，甲醇/水/0.1％ TFA作為流動(dòng)相)純化，得到6mg為黃色固體的標(biāo)題化合物(1 TFA鹽)MS(MH+)＝1554，MS(M-H)＝1552。
實(shí)施例21(式IR1＝R2＝P(O)(CH3)OH，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(2.0g，1.4mmol)懸浮于二氯甲烷(20ml)中。加入二異丙基乙胺(0.72ml，4.1mmol)并將混合物冷卻至0℃。加入甲基膦酰二氯(0.54g，4.1mmol)并將混合物在0℃攪拌30分鐘。將混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)猝滅，真空濃縮。殘余物懸浮于水(300ml)中，濾除剩余固體。水濾液用色譜法純化(制備性C18，ODS-A，S-75μm，20％乙腈/水)。含有產(chǎn)物的流分在冷卻(8℃)中真空濃縮，得到白色粉末狀產(chǎn)物(0.4g，21％收率)C63H66N14O22P2S5·0.6Na·7.7H2O的理論值C，43.35；H，4.67；N，11.23；S，9.18；Na，0.79.實(shí)測(cè)值C，43.07；H，4.71；N，11.00；S，9.42；Na，0.74；LRMS(ESI+)m/z＝1593.6；(ESI-)m/z＝1591.31.
實(shí)施例22(式IR1＝R2＝CH2OP(O)(OH)2，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)將諾卡硫星I(5.00g，3.48mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(150mL)溶液用BTPP(2.28g，7.30mmol)處理，攪拌約10分鐘，在此期間變成更深的紅色。反應(yīng)物用O-氯甲基-O′，O″-二叔丁基磷酸酯(1.89g，7.30mmol)處理，在室溫下攪拌2小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。殘余物用約30-40％乙腈水溶液萃取，同時(shí)加入少量體積N，N-二甲基甲酰胺以幫助溶解，然后裝載到C-18反相柱上，用10％乙腈水溶液增加到35％乙腈水溶液的階式梯度洗脫，導(dǎo)致一加合物和二加合物的分離。讓流分靜置16小時(shí)，在此期間產(chǎn)物每個(gè)磷酸酯部分經(jīng)歷叔丁基損失，得到二(一叔丁基)中間產(chǎn)物。將合適流分冷凍干燥，得到二(一叔丁基)加合物中間產(chǎn)物，然后用溶于二氯甲烷(5mL)的三氟乙酸(5mL)處理。當(dāng)HPLC顯示沒有叔丁基中間產(chǎn)物存在時(shí)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，終止反應(yīng)。粗殘余物用水處理，加入飽和碳酸氫鈉，將固體溶解。溶液用C-18 MPLC進(jìn)行純化，用10％乙腈水溶液增加到22.5％乙腈水溶液的洗脫。合并合適流分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。將水溶液冷凍干燥，得到黃色凍干固體產(chǎn)物(226mg，二鈉鹽)。
MS(MH+)＝1657.4，MS(M-H)＝1655.10。
實(shí)施例23和實(shí)施例24式IR1＝H，R2＝COMe，Z＝NHC(＝CH2)CONH2和式IR1＝COMe，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2向諾卡硫星I(2.88g，2.0mmol)的乙酸乙酯(50mL)的攪拌懸浮液中加入乙酸酐(0.5mL，5.3mmol)，然后加入碳酸氫鈉(1.51g，18.0mmol)，在50℃攪拌1小時(shí)。然后緩慢加入氯甲酸氯乙酯(1.10mL，10.0mmol)，然后在50℃再繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并讓它老化過夜。減壓除去溶劑，將其溶于水，在MPLC(C18柱)上用含有0.01％HCl的乙腈-水(10-35％)作為洗脫劑，進(jìn)行純化。將含有產(chǎn)物的流分合并，濃縮并凍干，得到1.50g和0.75g黃色粉末狀產(chǎn)物(以HCl鹽形式)。1H NMR(DMSO，500MHz)δ11.30(1H，s)，10.05(1H，s)，9.23(1H，s)，8.80-8.64(3H，br m)，8.58(1H，s)，8.54(1H，s)，8.22(1H，s)，8.08(1H，s)，8.03(1H，s)，7.90-7.80(1H，br m)，7.72-7.61(2H，brm)，7.44(1H，t，J＝7.7Hz)，7.28(1H，d，J＝7.2Hz)，7.23(1H，d，J＝8.0Hz)，6.36(2H，br s)，6.07(1H，d，J＝12.3Hz)，5.76(2H，br s)，5.70(1H，d，J＝8.3Hz)，5.15(1H，br s)，5.09-5.04(2H，m)，4.92(1H，br s)，4.63(1H，brs)，4.38(1H，d，J＝9.6Hz)，4.32(1H，br s)，4.13(1H，d，J＝10.3Hz)，4.06(1H，d，J＝6.8Hz)，3.93-3.89(3H，m)，3.85(1H，d，J＝7Hz)，3.57(5H，brs)，3.09(1H，s)，2.88-2.85(5H，br m)，2.24(1H，br s)，2.20-2.000(6H，m)，1.92(1H，d，J＝14.5Hz)，1.55(3H，s)，1.15(3H，s)，0.78(3H，d，J＝6.9Hz)。HRMS(ES)C63H63N14O19S5(M+H)的計(jì)算值1479.299，實(shí)測(cè)值1479.299。
和1H NMR(DMSO，500MHz)δ9.93(1H，s)，9.28(1H，s)，8.78(2H，br s)，8.67(1H，br s)，8.64-8.54(2H，m)，8.41(1H，s)，8.23(1H，s)，8.19(1H，s)，8.13-8.08(1H，m)，7.79-7.61(3H，m)，7.44(1H，t，J＝7.6Hz)，7.35(1H，d，J＝7.8Hz)，7.28(1H，d，J＝7.1Hz)，6.56(1H，s)，6.38(1H，s)，6.07(1H，d，J＝12.2Hz)，5.80(1H，s)，5.76-5.69(2H，m)，5.10-5.04(3H，m)，4.88(1H，br s)，4.60(1H，br m)，4.39(1H，d，J＝9.6Hz)，4.31-4.29(1H，m)，4.13(1H，d，J＝10.3Hz)，4.06(1H，d，J＝9.4Hz)，3.93(3H，s)，3.90-85(2H，m)，3.43(4H，br m)，3.1(1H，s)，2.92-2.80(4H，m)，2.14-1.91(7H，m)，1.55(3H，s)，1.16(3H，s)，0.78(3H，d，J＝6.8Hz).HRMS(ES)C63H63N14O19S5(M+H)的計(jì)算值1479.299，實(shí)測(cè)值1479.298。
實(shí)施例25(式IR1＝-CO(CH2)2CO2CH2CH3，R2＝H，Z＝NHC(＝CH2)CONH2)在0℃，將乙基琥珀酰氯(0.14mmol)加入到諾卡硫星I(0.035mmol)和吡啶(0.5ml)混合物中。將混合物攪拌約10分鐘，然后加入氯仿(1ml)，然后減壓除去溶劑。殘余物進(jìn)一步蒸發(fā)至干，所得淺黃色固體用制備性HPLC進(jìn)一步純化。將含有產(chǎn)物的流分冷凍并凍干，得到20mg黃色固體產(chǎn)物MS(MH+)＝1565。
實(shí)施例26和實(shí)施例27式IR1＝R2＝2-(N-嗎啉基)乙基，Z＝NHC(＝CH2)CONH2和式IR1＝H，R2＝2-(N-嗎啉基)乙基，Z＝NHC(＝CH2)CONH2向劇烈攪拌的諾卡硫星I(144mg，0.1mmol)的水(5mL)懸浮液中加入三乙胺(70μL，0.5mmol)，然后加入鹽酸1-(2-氯乙基)嗎啉(37mg，0.2mmol)。所得澄清反應(yīng)混合物在室溫下攪拌17小時(shí)，然后用制備性HPLC以甲醇/水(含有0.1％ TFA)純化。將含有產(chǎn)物的流分合并，濃縮并凍干，得到所需產(chǎn)物的TFA鹽17.4mg的二取代產(chǎn)物和90mg的一取代產(chǎn)物
式IR1＝R2＝2-(N-嗎啉基)乙基，Z＝NHC(＝CH2)CONH21H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.10(1H，s)，9.18(1H，s)，8.67(1H，s)，8.63-8.57(2H，m)，8.55(1H，s)，8.31(1H，br s)，8.21(1H，s)，8.19(1H，s)，7.88(1H，s)，7.80-7.75(2H，m)，7.70-7.66(1H，m)，7.48(1H，t，J＝7.5Hz)，7.32(1H，d，J＝4.6Hz)，7.17(1H，d，J＝8.5Hz)，6.57(1H，s)，6.38(1H，br m)，6.03(1H，d，J＝12.5Hz)，5.87(1H，d，J＝10.7Hz)，5.81(1H，s)，5.72(1H，d，J＝10.1Hz)，5.36(1H，d，J＝7.3Hz)，5.10(1H，s)，5.08-5.04(2H，m)，4.86(1H，s)，4.85-4.80(2H，m)，4.72(1H，J＝9.5Hz)，4.38(2H，d，J＝9.8Hz)，4.12(2H，d，J＝9.8Hz)，4.01-3.85(7H，m)，3.54-3.25(19H，m)，3.10(1H，s)，2.87(6H，br s)，2.14-2.09(1H，m)，2.02(3H，s)，1.94(1H，d，J＝14.0Hz)，1.24(2H，br s)，1.13(3H，d，J＝4.6Hz)，0.79(3H，d，J＝6.7Hz)。HRMS C73H83N16O20S5(M+H)的計(jì)算值1663.457；實(shí)測(cè)值1663.462。
式IR1＝H，R2＝2-(N-嗎啉基)乙基1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.41(1H，s)，10.05(1H，s)，9.23(1H，s)，8.66-8.56(4H，m)，8.55(1H，s)，8.22(1H，s)，8.13(1H，s)，8.10(1H，s)，7.86(1H，s)，7.75(1H，d，J＝10.08Hz)，7.72(1H，d，J＝4HZ)，7.63(1H，s)，7.50(1H，t，J＝7.8Hz)，7.33(1H，d，J＝7.1Hz)，7.14(1H，d，J＝8.03Hz)，6.38(1H，d，J＝13.3Hz)，6.37(1H，s)，6.02(1H，d，J＝12.04Hz)，5.88(1H，d，J＝12.6Hz)，5.76(1H，s)，5.71(1H，d，J＝9.7Hz)，5.38(1H，d，J＝8.5Hz)，5.24(1H，br s)，5.10(1H，s)，5.06(1H，d，J＝4.7Hz)，4.85(1H，d，J＝10.3Hz)，4.75(1H，d，J＝11.2Hz)，4.39(1H，d，J＝9.4Hz)，4.25(1H，br s)，4.12(2H，t，J＝11.3Hz)，3.92(3H，s)，3.87(1H，d，J＝7.2Hz)，3.51-3.42(13H，m)，3.41(1H，d，J＝5.2Hz)，3.10(1H，s)，2.87(6H，s)，2.54(1H，s)，2.43(1H，br s)，2.12(1H，d，J＝9.8Hz)，2.02(3H，s)，1.93(1H，d，J＝14.6Hz)，1.58(3H，s)，1.15(3H，d，J＝5.0Hz)，0.78(3H，d，J＝6.8Hz).HRMS C67H72N15O19S5(M+H)的計(jì)算值1550.373；實(shí)測(cè)值1550.370。
以類似方式，采用通用反應(yīng)或該反應(yīng)的通常變化，制備表1所述實(shí)施例28-87的化合物。任何進(jìn)一步修改是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。
表1.實(shí)施例28-87的分析數(shù)據(jù).



所述化合物的抗生素活性為了證明本發(fā)明化合物的抗微生物性質(zhì)，按照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS))推薦的標(biāo)準(zhǔn)，采用常規(guī)肉湯微量稀釋法，測(cè)得本發(fā)明化合物抗多種細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC)。除了肺炎鏈球菌在50％的Mueller-Hinton培養(yǎng)基和50％ Todd Hewitt培養(yǎng)基上進(jìn)行測(cè)試外，連續(xù)肉湯稀釋法采用Mueller-Hinton培養(yǎng)基。最終細(xì)菌接種液含有約5×105cfu/孔，在微量滴定板上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每孔體積為100μL，將滴定板在35℃在環(huán)境空氣中溫育18小時(shí)。MIC值定義為防止可見生長(zhǎng)的最低藥物濃度。獲得的一些結(jié)果示于下表2，證明本發(fā)明的化合物可用于治療細(xì)菌感染。
表2.式I化合物的抗菌活性。
用雌性ICR小鼠，評(píng)價(jià)多個(gè)式I化合物在全身感染模型的體內(nèi)抗生素活性。用懸浮于7％粘蛋白的6.5×106CFU的金黃色葡萄球菌A15090隔夜培養(yǎng)物，腹膜內(nèi)(IP)感染所述動(dòng)物。所述化合物以4個(gè)劑量水平(25、6.25、1.56和0.39mg/kg)進(jìn)行試驗(yàn)，并且制備為由10％DMSO、5％吐溫80和85％水組成的試驗(yàn)制劑。PD50(保護(hù)50％小鼠免于死亡的給予藥物劑量)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行5天。此間，每天檢查小鼠死亡率并記錄死亡。每一劑量水平的累積死亡率用于計(jì)算每種化合物的PD50值。在5天末，通過CO2吸入處死存活小鼠。用計(jì)算機(jī)程序，應(yīng)用Spearman-Karber方法實(shí)際計(jì)算PD50。感染后1小時(shí)和4小時(shí)，皮下(sc)給予所述溶液。發(fā)現(xiàn)幾個(gè)化合物的體內(nèi)效力(用PD50值表示)在0.16-10.00mg/kg范圍內(nèi)，即實(shí)施例5、6、7、8、12、13、17、18、21、27、37、41、47、50、53和63的化合物。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物，所述化合物包含其藥學(xué)可接受的鹽 其中W為 Z選自-NH2和 R1選自 氫、-P(O)A1A2、-C(O)C1-6烷基、-C(O)芳基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NH芳基、-(CH2CH2O)mMe、-C1-6烯基、-C1-6炔基和-C1-6烷基；其中所述C1-6烷基任選被1-6個(gè)羥基取代或任選被1-2個(gè)選自(a)-(i)的相同或不同取代基取代(a)CO2R3；(b)CONR4R5；(c)OP(O)A1A2；(d)SO3H；(e)-O(CH2)nSiR63；(f)選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和嗎啉基的雜脂環(huán)基；(g)氰基；(h)環(huán)氧基；和(i)芳基；前提條件是R1和R2不同時(shí)為H；R2選自 氫、-P(O)A1A2、-SO3H、-C(O)C1-6烷基、-C(O)CH＝CHCO2R3、-C(O)芳基、-C(O)N(H)(C1-6烷基-T)、-C(O)N(Me)(C1-6烷基-T)、(CH2CH2O)pH、-(CH2CH2O)qMe、-C1-6烯基、-C1-6烷基和-C1-6炔基；其中所述-C1-6烷基任選被1-6個(gè)羥基取代或任選被1-2個(gè)選自(j)-(v)的相同或不同的取代基取代(j)鹵基；(k)CO2R3；(l)CONR4R5；(m)OP(O)A1A2；(n)P(O)A1A2；(o)SO3H；(p)-O(CH2)rSiR63；(q)選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、咪唑基和吡啶基的雜環(huán)或雜脂環(huán)基；(r)氰基；(s)疊氮基；(t)芳基；(u)NR4R5；和(v) R3選自氫、C1-6烷基、烯丙基、芐基、2-羥乙基和2-四氫吡喃基；R4和R5各自獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、CH2CN、CH2CH2NH(叔丁氧基羰基)、C(＝NH)NH2和SO2N(C1-6烷基)2；或者R4和R5與連接它們的氮一起形成選自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、咪唑基和吡啶的雜環(huán)基或雜脂環(huán)基；R6選自C1-6烷基和苯基；A1和A2各自獨(dú)立選自氫、-C1-6烷基、-OC1-6烷基、芐氧基、2-氯乙氧基和羥基；T選自氫、-OH、-(CH2CH2O)sH、-(CH2CH2O)tCH3和-NR4R5；m、n、p、q、r、s和t獨(dú)立為1-6；并且芳基為任選被鹵基或-CO2R3取代的苯基。
2.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括其藥學(xué)可接受的鹽，其中Z為
3.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括其藥學(xué)可接受的鹽，其中Z為-NH2。
4.權(quán)利要求2的化合物，所述化合物選自(a)-(q)(a)R1和R2為CH3；(b)R1和R2為P(O)(CH3)OH；(c)R1和R2為CH2OP(O)(OH)2；(d)R1為P(O)(CH3)OH，且R2為H；(e)R1為 且R2為H；(f)R1為H，且R2為P(O)(CH3)OH；(g)R1為H，且R2為CH2CONH2；(h)R1為H，且R2為CH2CO2CH3；(i)R1為H，且R2為CH2CH2CH2SO3H；(j)R1為H，且R2為CH2P(O)(OEt)2；(k)R1為H，且R2為CH2OP(O)(OH)2；(l)R1為H，且R2為CH2CH2Cl；(m)R1為H，且R2為 (n)R1為H，且R2為CH3；(o)R1為H，且R2為CONH(CH2CH2O)4H；(p)R1為H，且R2為 (q)R1為H，且R2為
5.權(quán)利要求3的化合物，其中R1為H，且R2為CH2CH2CH2SO3H。
6.一種藥用組合物，所述組合物包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體、輔料或稀釋劑。
7.一種治療或預(yù)防細(xì)菌或分枝桿菌感染的方法，所述方法包括給予有需要的哺乳動(dòng)物治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述細(xì)菌或分枝桿菌感染是由革蘭氏陽(yáng)性菌或分枝桿菌引起的。
9.權(quán)利要求8的方法，其中引起所述革蘭氏陽(yáng)性菌感染或分枝桿菌感染的微生物選自耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、耐萬古霉素金黃色葡萄球菌、耐萬古霉素糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、耐萬古霉素屎腸球菌(Enterococcus faecium)、耐青霉素肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)和結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteria tuberculosis)。
全文摘要
本發(fā)明提供具有有效抗生素活性的式(I)化合物，所述活性包括抗革蘭氏陽(yáng)性菌和分枝桿菌的活性。
文檔編號(hào)C07H17/08GK1678340SQ03820632
公開日2005年10月5日 申請(qǐng)日期2003年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月3日
發(fā)明者T·W·胡德馬, X·鄭, B·N·奈杜, M·E·索倫森, A·雷古伊羅-倫, T·P·康諾利, J·D·馬蒂斯科拉, O·K·金, Y·張, D·M·施普林格, J·戈德里奇, Y·尤達(dá), J·J·布龍森 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司