專利名稱：藤黃酸類化合物的復合物,其制備方法和以該復合物為活性成份的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新穎的藤黃酸類化合物的復合物，其制備方法和以該復合物為活性成份的藥物組合物，以及它們在制備治療腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
已有研究表明，藤黃酸類化合物對于腫瘤細胞有抑制作用，但藤黃酸類化合物在水中的溶解度極小，因此影響了它們的藥用價值。
近幾年來學界致力于提高藤黃酸類化合物的水溶解度的研究，尋找合適的、能與藤黃酸類化合物復合從而提高其在水中溶解度的化合物。
中國藥科大學尤啟冬等人，提出了以精氨酸和賴氨酸與藤黃酸類化合物的復合物(公開號CN1309125A
公開日2001年8月22日的中國發(fā)明專利申請)，認為能夠提高藤黃酸類化合物的水溶解度，但未能公布實驗數據及溶解度。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一類新的、水溶解度高的、具有藥用價值的藤黃酸類化合物的復合物。
本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是提供一種制備上述復合物的方法。
本發(fā)明進一步所要解決的技術問題是提供一種抗腫瘤的藥物組合物。
本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是提供上述復合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
本發(fā)明提供的藤黃酸類化合物的復合物的通式為 式中R＝H或R＝OH，B表示葡萄糖胺類化合物。
本發(fā)明所指的藤黃酸類化合物為總藤黃酸、藤黃酸或新藤黃酸，其制備方法可參照《江西醫(yī)學院學報》1980，(2)1。將藤黃樹脂100g，碾碎加丙酮500ml，回流半小時，重復三次，合并提取液，濃縮至干，得到以含R為H和OH為主的混合物，即總藤黃酸。
總藤黃酸10g，加丙酮溶解，溶解液經層析分離后，割取Rf值為0.49的色斑，用丙酮洗脫，濃縮至干，得到R＝H的化合物即藤黃酸。
總藤黃酸10g，加丙酮溶解，溶解液經層析分離后，割取Rf值為0.23的色斑，用丙酮洗脫，濃縮至干，得到R＝OH的化合物即新藤黃酸。
上述藤黃酸類化合物的復合物的優(yōu)選方案是B為氨基葡萄糖或葡甲胺。
一般來說，堿性化合物與藤黃酸類化合物復合，能增加其在水中溶解度，但堿性化合物數目巨大，復合后效果改善的程度也參差不齊。發(fā)明人經過大量的實驗發(fā)現有的堿性化合物與藤黃酸類化合物復合后并不能提高溶解度，比如與苯甲胺、乙苯胺、3，5-二氨基苯甲酸的復合物，其溶解度為1∶500g/ml。本發(fā)明提供的復合物具有較高的水溶解度，以下為部分實驗對象的溶解度實驗數據統(tǒng)計對比表

顯然，藤黃酸類化合物與葡萄糖胺類化合物的復合物在水中溶解度較藤黃酸類化合物與精氨酸和賴氨酸的復合物有非常明顯的提高。
同時，發(fā)明人經過大量的實驗還發(fā)現，溶解度的提高并不是提高抗腫瘤活性的充分條件。比如，實驗顯示，新藤黃酸與三乙胺的復合物、總藤黃酸與乙胺的復合物雖然溶解度較高分別為1∶10g/ml及1∶20，但其抗腫瘤的指標并不高于藤黃酸類化合物，新藤黃酸與2，3二氨基丙酸的復合物、總藤黃酸與正丁胺的復合物的溶解度也較藤黃酸類化合物有較大提高均為1∶70g/ml，但其抗腫瘤的指標并不高于藤黃酸類化合物。
就藥物的制備成本而言，總藤黃酸及總藤黃酸類的復合物小于藤黃酸及藤黃酸類的復合物，藤黃酸及藤黃酸類的復合物小于新藤黃酸及新藤黃酸類的復合物。本發(fā)明提供的復合物溶解度不僅較以往的明顯提高，并且其抗腫瘤活性相對于成本相當的復合物也明顯地提高，并且發(fā)明人發(fā)現新藤黃酸的葡萄糖胺類化合物的復合物的抗腫瘤活性在藤黃酸類化合物的復合物中具有明顯的抗腫瘤活性優(yōu)勢。通過實驗還發(fā)現，本發(fā)明提供的復合物在殺死腫瘤細胞的同時，對正常的造血系統(tǒng)和白細胞沒有明顯影響，無明顯血管刺激性。因此本發(fā)明提供的復合物相對于其它復合物具有較高的藥用價值。
本發(fā)明提供的藤黃酸類化合物復合物的制備方法藤黃酸類化合物與葡萄糖胺類化合物以1∶0.8-2.0的比例(摩爾比)，在水和/或醇溶劑中反應。其優(yōu)選方案是藤黃酸類化合物以1∶0.8-1.5的比例(摩爾比)，與葡甲胺或氨基葡萄糖在水和/或醇溶劑中反應。
本發(fā)明提供的抗腫瘤的藥物組合物含有效治療量的上述通式的復合物為活性成份，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體。其優(yōu)選含有重量比0.1-99.9％的活性成份，最優(yōu)選含有重量比1-99.9％的活性成份。
本發(fā)明提供的復合物和藥物組合物可用于制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病腫瘤的藥物。
上文所述的種藥學上可接受的載體是指稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、吸收促進劑、吸附載體、潤滑劑、香味劑、甜味劑等。
本發(fā)明的藥物組合物其劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射劑等。其制備方法可以按照藥學領域的常規(guī)生產方法制備。例如使活性成份與一種或多種載體混合，然后將其制成所需劑型。
本發(fā)明通式的復合物的施用量可根據用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療疾病的類型和嚴重程度等變化，其日劑量可以是0.001-100mg/kg，優(yōu)選0.1-100mg/kg，可一次或多次施用。
具體實施例方式
下面的實施例可以使專業(yè)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本專利。實施例1總藤黃酸葡甲胺復合物的制備取總藤黃酸10g(0.0157摩爾)于燒杯中，加入適量蒸餾水，攪拌，慢慢加入葡甲胺3g(0.0154摩爾)至溶解完全，過濾，濾液冷凍干燥，得13g左右固體，即為總藤黃酸葡甲胺復合物。實施例2藤黃酸氨基葡萄糖復合物的制備取藤黃酸10g(0.0159摩爾)于燒杯中，加入適當的乙醇溶解后，再慢慢加入適量的蒸餾水，攪拌下，慢慢加入氨基葡萄糖3.1g(0.017摩爾)，溶解完全后，過濾，濾液冷凍干燥，得14g藤黃酸氨基葡萄糖復合物。實施例3新藤黃酸葡甲胺復合物的制備取新藤黃酸10g(0.0155摩爾)于燒杯中，加入適當的乙醇溶解后，攪拌下，慢慢加入葡甲胺3.1g(0.0159摩爾)，溶解完全后，過濾，濾液冷凍干燥，得14g新藤黃酸葡甲胺復合物。實施例4藤黃酸氨基葡萄糖復合物粉針劑的制備藤黃酸氨基葡萄糖復合物10g右旋糖酐 40g將藤黃酸氨基葡萄糖復合物10g加適量注射用水溶解，右旋糖酐40g加適量注射用水溶解，將兩溶液混合均勻，加注射用水稀釋至2000ml，用0.22um的微孔濾膜過濾，無菌條件下，分別裝于10ml西林瓶中，裝盤，送入凍干箱中，冷凍干燥后，出箱，軋蓋，即可。實施例5總藤黃酸葡甲胺復合物片的制備總藤黃酸葡甲胺復合物10g淀粉100g淀粉漿(8％) 適量硬脂酸鎂0.4g將總藤黃酸葡甲胺復合物加淀粉拌和均勻，加8％淀粉漿制成軟件，用14目尼龍篩制粒，70-80℃干燥，加硬脂酸鎂，經10-12目鐵絲篩整粒，混勻，用12mm沖模壓片。實施例6總藤黃酸葡甲胺復合物顆粒劑的制備總藤黃酸葡甲胺復合物10g可溶淀粉80g糖粉20g香精適量將總藤黃酸葡甲胺復合物溶于水，加入淀粉80g、糖粉20g，再加香精適量，混勻，用14-16目篩制粒，60℃以下干燥，包裝。實施例7新藤黃酸葡甲胺復合物膠囊劑的制備新藤黃酸葡甲胺復合物10g微晶纖維素 40g乳糖60g羥甲基淀粉鈉4g淀粉漿 適量硬脂酸鎂 1g微粉硅膠 1g新藤黃酸葡甲胺復合物，微晶纖維素，乳糖，羥甲基淀粉鈉分別過篩，并混合均勻，加淀粉漿適量制成軟材，過20目篩制粒，濕顆粒于50℃下干燥，干顆粒過20目篩整粒，與硬脂酸鎂、微粉硅膠混勻，灌裝膠囊。實施例8；藤黃酸葡甲胺復合物口服液的制備藤黃酸葡甲胺復合物 10g糖精 0.5g香精 0.1g注射用水 1000ml將藤黃酸葡甲胺復合物、糖精、香精分別溶于注射用水后，混和，稀釋至1000ml，分裝，即得。
實施例9、抑制瘤株試驗以新藤黃酸葡甲胺進行抑制瘤株選擇性試驗1.稱取上述化合物50mg，加水溶解，完全溶解后，配成2.5mg/ml的貯備液。
2.取上述貯備改液適量，加細胞完全培養(yǎng)液，混勻，依次配制成藥物濃度分別為16ug/ml，8ug/ml，4ug/ml，2ug/ml，1ug/ml，0.5ug/ml，0.25ug/ml的培養(yǎng)液。
3.按規(guī)范進行培養(yǎng)，用酶標儀，570nm測光密度OD。
4.細胞存活率＝(加藥細胞OD/對照細胞OD)*100細胞抑制率(I)＝100-細胞存活率將對應的藥物濃度C，細胞抑制率I，按公式lg(I/100-)＝A+BlgC進行線回歸，得方程后，IC50＝lg-1[(-A)/B]。下表為實驗結果

從上表我們可以看出新藤黃酸葡甲胺對肝癌和腸癌的腫瘤細胞具有很強的抑制作用，對肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病的腫瘤細胞具有相當的抑制作用。同樣，藤黃酸類化合物與葡萄糖胺類化合物的其它復合物對上述腫瘤細胞也具有相同的抑制作用實施例10對肝癌SMMC7721細胞生長的影響的對比試驗在本實施例中對下表中的物質進行了對肝癌SMMC7721細胞生長的影響的對比試驗。實驗方法同實施例9

實驗結果分析本發(fā)明提供的復合物對抑制肝癌SMMC7721細胞的生長具有較明顯的優(yōu)勢?？偺冱S酸葡萄糖胺類復合物相對于總藤黃酸精氨酸復合物在該項目上的效果有一定提高，藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于藤黃酸精氨酸類復合物、新藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于新藤黃酸賴氨酸類復合物則有非常明顯的提高，并且新藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于所有藤黃酸類化合物的復合物在該項目上的效果處于非常領先的地位。
實施例11對腸癌SW480細胞生長的影響的對比試驗在本實施例中對下表中的物質進行了對腸癌SW480細胞生長的影響的對比試驗。
實驗方法同實施例9


實驗結果分析本發(fā)明提供的復合物對抑制腸癌SW480細胞的生長具有較明顯的優(yōu)勢，總藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于總藤黃酸精氨酸復合物在該項目上的效果有一定提高，藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于藤黃酸精氨酸類復合物、新藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于新藤黃酸賴氨酸類復合物則有非常明顯的提高，并且新藤黃酸葡萄糖胺類復合物相對于所有藤黃酸類化合物的復合物在該項目上的效果處于非常領先的地位。
實施例12新藤黃酸葡甲胺復合物對小鼠移植肉瘤S180、小鼠移植Heps實體瘤的抑制作用藥物配制定量稱取新藤黃酸葡甲胺，加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。
給藥途徑ip給藥周期于接種后24h連續(xù)給藥9天，每天一次，停藥后第一天處死解剖。
劑量設置共設五組A組新藤黃酸葡甲胺組(8，4，2mg/kg)B組新藤黃酸賴氨酸(8mg/kg)C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)小鼠類型昆明種小鼠體重18-22g給藥體積0.4ml/20g
實驗方法取上述規(guī)格小鼠50只，按移植性腫瘤研究法接種，接種后24小時稱鼠重，并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，生理鹽水和新藤黃酸賴氨酸分別為陰、陽對照組，新藤黃酸葡甲胺組設高、中、低三個劑量組。于停藥后第一天稱重，處死并分離瘤塊，稱瘤重并進行統(tǒng)計學處理(t檢驗)表1新藤黃酸葡甲胺ip對小鼠移植S180的抑制作用(x±SD)

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比表2新藤黃酸葡甲胺ip對小鼠移植Heps實體瘤的抑制作用(x±SD)


··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結果結果表明與生理鹽水對照組相比，新藤黃酸葡甲胺有非常明顯地抑制小鼠S180、移植性Heps實體瘤的生長作用，并對小鼠體重增長無明顯影響，且新藤黃酸葡甲胺的抑瘤作用強于新藤黃酸賴氨酸。
實施例13藤黃酸氨基葡萄糖對小鼠移植性腫瘤生命的延長作用藥物配制定量稱取藤黃酸氨基葡萄糖，加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。
給藥途徑ip給藥周期于接種后24h給藥，每天一次，共給藥10天，給藥后共觀察60天。
劑量設置共設五組A組藤黃酸氨基葡萄糖組B組藤黃酸賴氨酸C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)小鼠類型昆明種小鼠體重18-22g給藥體積0.4ml/20g
實驗方法取上述規(guī)格小鼠50只，按移植性腫瘤研究法接種，接種后，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，生理鹽水和藤黃酸賴氨酸分別為陰、陽對照組，藤黃酸氨基葡萄糖組設高、中、低三個劑量組。給藥后，觀察荷瘤小鼠存活天數(存活60天以上小鼠按60天計)及存活率(按存活60天以上且無癥狀小鼠計)，并進行統(tǒng)計學處理(t檢驗)表1藤黃酸氨基葡萄糖ip對EAC腹水型小鼠移植瘤延長生命作用

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比表2藤黃酸氨基葡萄糖ip對Heps腹水型小鼠移植肉瘤延長生命作用


··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結果結果表明，與生理鹽水對照組相比，藤黃酸氨基葡萄糖有延長EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠存活天數作用(P＜0.01)，且對EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠的生命延長率及存活率皆優(yōu)于藤黃酸賴氨酸。
實施例14新藤黃酸葡甲胺對小鼠血中白細胞數的影響實驗方法取18-22g小鼠，按移植性腫瘤研究法，接種S180，接種后次日稱重并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，ip給藥，共9d，于停藥后的第一天稱重并由眼眶靜脈取血，鏡檢白細胞總數，同時解剖分離瘤塊，稱重并進行統(tǒng)計學處理。
A組新藤黃酸葡甲胺組(8，4，2mg/kg)B組新藤黃酸賴氨酸(8mg/kg)C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)


··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結果結果表明與生理鹽水對照組相比，新藤黃酸葡甲胺有非常明顯地抑制小鼠S180的生長作用，其效果好于新藤黃酸賴氨酸，且對小鼠外周血中白細胞無明顯影響。高劑量組的白細胞還有所增加。
實施例15新藤黃酸葡甲胺血管刺激性試驗實驗方法取體重2.2-2.4kg健康家兔2只，把家兔置于固定器中，家兔左耳緣靜脈滴注新藤黃酸葡甲胺注射液8mg/kg共計6ml，右耳滴注氯化鈉注射敢液6ml/kg，滴注速度為20滴/分鐘，每天上午滴注一次，連續(xù)一周。觀察左右耳緣靜脈反應，每日觀察注射部位血管有無發(fā)紅、水腫、周圍有無滲血，觸摸血管有無變硬現象，左右耳比較現察。于未次給藥后12小時，將動物處死，取下左右耳，切片檢查。
實驗結果兩只兔給藥后，每天左、右耳均正常，未發(fā)紅，無水腫，組織病理學檢查也無明顯異常。新藤黃酸葡甲胺的血管刺激性試驗表明，此藥品對家兔耳緣靜脈無明顯局部刺激作用。
權利要求
1.具有下述通式的藤黃酸類化合物的復合物 式中R＝H或R＝OH，B表示葡萄糖胺類化合物。
2.如權利要求1所述的藤黃酸類化合物的復合物，其特征在于B為葡甲胺。
3.如權利要求1所述的藤黃酸類化合物的復合物，其特征在于B為氨基葡萄糖。
4.權利要求1的藤黃酸類化合物的復合物的制備方法，其特征在于藤黃酸類化合物與葡萄糖胺類化合物以1∶0.8-2.0的比例(摩爾比)，在水和/或醇溶劑中反應。
5.如權利要求4所述的藤黃酸類化合物的復合物的制備方法，其特征在于其優(yōu)選方案為藤黃酸類化合物以1∶0.8-1.5的比例(摩爾比)，與葡甲胺或氨基葡萄糖在水和/或醇溶劑中反應。
6.用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于其中含有效治療量的權利要求1的復合物和藥學上可接受的載體。
7.如權利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述復合物的R＝H。
8.如權利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述復合物的R＝OH。
9.如權利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述復合物為R＝H的復合物及R＝OH的復合物的任意比例的混合物。
10.權利要求1-3中任意一項復合物，在制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供了下列通式的藤黃酸類化合物的復合物，式中R＝H或R＝OH，B表示葡萄糖胺類化合物。該復合物不僅具有較高水溶解度，并且其抗腫瘤活性也非常高，對正常的造血系統(tǒng)和白細胞沒有明顯影響，無明顯血管刺激性，具有較高的藥用價值。本發(fā)明還提供了一種制備上述復合物的方法以及以上述復合物為活性成份的一種抗腫瘤藥物組合物，本發(fā)明還提供了該復合物及上述抗腫瘤藥物組合物在用于制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病腫瘤的藥物中的用途。
文檔編號C07D493/00GK1390839SQ02124510
公開日2003年1月15日 申請日期2002年6月17日 優(yōu)先權日2002年6月17日
發(fā)明者金彪, 董輝, 喬林, 沈國偉 申請人:杭州博大藥物研究所