專利名稱：藤黃酸類化合物的復(fù)合物,其制備方法及以該復(fù)合物為活性成份的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的藤黃酸類化合物的復(fù)合物，其制備方法和以該化合物為活性成份的藥物組合物，以及它們在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
已有研究表明，藤黃酸類化合物極微溶于水，但對腫瘤有抑制作用，特別是對肝癌和腸癌具有較好的抗癌作用，且其對白細胞的正常生長沒有影響。
一直以來，學(xué)界認為提高其藥用價值應(yīng)當從提高其水溶性著手，如公開號CN1309125A
公開日2001年8月22日的中國發(fā)明專利申請。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一類新的、具有藥用價值的藤黃酸類化合物的復(fù)合物。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是提供一種制備上述復(fù)合物的方法。
本發(fā)明進一步所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗腫瘤藥物的組合物。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是提供上述復(fù)合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的藤黃酸類化合物的復(fù)合物的通式為 式中R＝H或R＝OH，B表示含碳數(shù)大于8個小于20個的含氮有機堿性化合物。
本發(fā)明所指的藤黃酸類化合物為總藤黃酸、藤黃酸或新藤黃酸，其制備方法可參照《江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報》1980，(2)；1制備。
總藤黃酸的制備方法藤黃樹脂100g，碾碎加丙酮500ml，回流半小時，重復(fù)三次，合并提取液，濃縮至干，得到以含R為H和OH為主的混合物(即總藤黃酸)。
藤黃酸的制備方法總藤黃酸10g，加丙酮溶解，溶解液經(jīng)層析分離后，割取Rf值為0.49的色斑，用丙酮洗脫，濃縮至干，得到藤黃酸(R＝H)。
新藤黃酸的制備方法方法如藤黃酸的制備，總藤黃酸10g，加丙酮溶解，溶解液經(jīng)層析分離后，割取Rf值為0.23的色斑，用丙酮洗脫，濃縮至干，得到新藤黃酸(R＝OH)。
上述藤黃酸類化合物的復(fù)合物的B的優(yōu)選方案是普魯卡因、N，N’-二芐基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基間甲苯胺或十四叔胺中的任意一個。B的最優(yōu)選方案普魯卡因、N，N’-二芐基乙二胺中的任意一個發(fā)明人認為，就藥物而言，水溶性好誠然重要，但這不是提高其藥用價值的唯一途徑。本發(fā)明突破了以往對藤黃酸類化合物研究的固有成見，提供的藤黃酸類化合物的復(fù)合物由于其“B”的碳鏈較長，具有較以往藤黃酸類化合物及藤黃酸類化合物的復(fù)合物更高的脂溶性，從而使其在體內(nèi)吸收較慢，作用時間長，因而本發(fā)明是一種與以往藤黃酸類化合物的復(fù)合物不同的復(fù)合物，較易適于制成長效型藥物。并且，通過實驗證明，本發(fā)明提供的復(fù)合物的抗腫瘤活性不遜于藤黃酸類化合物及以往的藤黃酸類化合物的復(fù)合物(而尤以藤黃酸類化合物尤其是新藤黃酸與普魯卡因或N，N’-二芐基乙二胺的復(fù)合物最為突出)，且其在小白鼠體內(nèi)抑瘤試驗中表明，每兩天給藥一次的本發(fā)明的復(fù)合物比每天給藥一次的5-FU具有更好的抑瘤率和存活率，同時對小白鼠體內(nèi)的白細胞生長無影響，也無血管刺激性，具有較高的藥物開發(fā)研究價值。
本發(fā)明提供藤黃酸類化合物的復(fù)合物的制備方法為藤黃酸類化合物和含氮有機堿以1∶0.5-2.0的比例(摩爾比)在水和/或醇溶劑中反應(yīng)。
其優(yōu)選方案為藤黃酸類化合物和含氮有機堿以1∶0.8-1.5的比例(摩爾比)在水和/或醇溶劑中反應(yīng)。
本發(fā)明提供的抗腫瘤藥物的組合物除含有治療有效量的上述通式為活性成份為外，還應(yīng)含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。其優(yōu)選含0.1-99.9％(重量比)的活性成份，最優(yōu)選含有1-99.9％(重量比)的活性成份。所述的組合物中的復(fù)合物的R＝H或R＝OH。所述復(fù)合物也可為為R＝H的復(fù)合物及R＝OH的復(fù)合物的任意比例的混合物。
本發(fā)明提供的復(fù)合物和藥物組合物可用于制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病的藥物。
上文所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)載體，如稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑、香味劑、甜味劑等。
本發(fā)明的藥物組合物其劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射劑等。其制備方法可以按常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需劑型。
本發(fā)明提供的復(fù)合物的用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療疾病的類型和嚴重程度等變化，其日劑量可以是0.01-100mg/kg，優(yōu)選為0.1-100mg/kg?？梢砸淮位蚨啻问┯谩?br> 具體實施例方式
下面的實例可以使專業(yè)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本專利。
實例1、藤黃酸普魯卡因的制備將藤黃酸溶于濃度為0.8％(W/V)的Na2HPO4緩沖液中，加入20-25％NaCl(W/V)溶液，過濾，得無菌濾液。
于無菌濾液中加入10％丁醇(V/V)，1∶1(M)普魯卡因鹽酸鹽，攪拌，加入適量晶種，析出藤黃酸普魯卡因。過濾，分別用水、丁醇洗滌晶體，減壓下55-60℃干燥，得藤黃酸普魯卡因。
實例2、藤黃酸月桂胺復(fù)合物的制備取藤黃酸10g于燒杯中，加入適量的50％的乙醇溶解，攪拌下，慢慢加入月桂胺，攪拌均勻后，過濾，濾液冷凍干燥，得11g藤黃酸月桂胺復(fù)合物。
實例3、新藤黃酸普魯卡因的制備將新藤黃酸溶于濃度為0.8％(W/V)的Na2HPO4緩沖液中，加入20-25％NaCl(W/V)溶液，過濾，得無菌濾液。
于無菌濾液中加入10％丁醇(V/V)，1∶1(M)普魯卡因鹽酸鹽，攪拌，加入適量晶種，析出新藤黃酸普魯卡因。過濾，分別用水、丁醇洗滌晶體，減壓下55-60℃干燥，得新藤黃酸普魯卡因。
實例4、藤黃酸二芐基乙二胺的制備將藤黃酸溶于乙醇溶液中，慢慢加入10％(W/V)N，N’-二芐基乙二胺的水溶液中，攪拌半小時后，用1MHCl調(diào)PH至7.0-7.5，加入適量晶種，析出藤黃酸二芐基乙二胺。過濾，用水洗滌晶體，減壓下55-60℃干燥，得藤黃酸二芐基乙二胺。
實例5、新藤黃酸二芐基乙二胺的制備將新藤黃酸溶于乙醇溶液中，慢慢加入10％(W/V)N，N’-二芐基乙二胺的水溶液中，攪拌半小時后，用1MHCl調(diào)PH至7.0-7.5，加入適量晶種，析出新藤黃酸二芐基乙二胺。過濾，用水洗滌晶體，減壓下55-60℃干燥，得新藤黃酸二芐基乙二胺。
實例6.新藤黃酸二芐基乙二胺注射劑的制備新藤黃酸二芐基乙二胺 10g聚山梨酯80 15ml將新藤黃酸二芐基乙二胺10g加適量乙醇溶解，再加入15ml聚山梨酯80，攪勻，在攪拌下加入半量的注射用水中，加入適量活性炭及苯甲醇3ml，充分攪拌，煮沸30min，冷卻至室溫，冷藏過夜，濾過，加注射用水至1000ml，濾過，灌封，滅菌，即得。
實例7藤黃酸普魯卡因片的制備藤黃酸普魯卡因 10g淀粉 100g淀粉漿(8％) 適量硬脂酸鎂 1.4g
將藤黃酸普魯卡因加淀粉拌和均勻，加8％淀粉漿制成軟件，用14目尼龍篩制粒，70-80℃干燥，加硬脂酸鎂，經(jīng)10-12目鐵絲篩整粒，混勻，用12mm沖模壓片。
實例8總藤黃酸二芐基乙二胺膠囊劑的制備總藤黃酸二芐基乙二胺 10g微晶纖維素 40g乳糖 60g羥甲基淀粉鈉 4g淀粉漿 適量硬脂酸鎂 1g微粉硅膠 1g總藤黃酸二芐基乙二胺，微晶纖維素，乳糖，羥甲基淀粉鈉分別過篩，并混合均勻，加淀粉漿適量制成軟材，過20目篩制粒，濕顆粒于50℃下干燥，干顆粒過20目篩整粒，與硬脂酸鎂、微粉硅膠混勻，灌裝膠囊。
實例9.普魯卡因、N，N’-二芐基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基間甲苯胺、十四叔胺藤黃酸復(fù)合物對肝癌SMMC7721細胞生長的影響1.分別稱取上述化合物各50mg，加水溶解，如水不溶可以1mlDMSO助溶，完全溶解后，配成2.5mg/ml的貯備液。
2.取上述貯備改液適量，加細胞完全培養(yǎng)液，混勻，依次配制成藥物濃度分別為16ug/ml，8ug/ml，4ug/ml，2ug/ml，1ug/ml，0.5ug/ml，0.25ug/ml的培養(yǎng)液。
3.按規(guī)范進行培養(yǎng)，用酶標儀，570nm測光密度OD。
4.細胞存活率＝(加藥細胞OD/對照細胞OD)*100細胞抑制率(I)＝100-細胞存活率將對應(yīng)的藥物濃度C，細胞抑制率I，按公式1g(I/100-)＝A+B1gC進行線回歸，得方程后，IC50＝1g-1[(-A)/B]。
試驗結(jié)果數(shù)據(jù)

從上述實驗數(shù)據(jù)中可以看出，本發(fā)明提供的復(fù)合物，其抗腫瘤活性不遜于藤黃酸類化合物及以往的藤黃酸類化合物的復(fù)合物，其中普魯卡因和N，N’-二芐基乙二胺藤黃酸復(fù)合物的抗腫瘤活性有了較大的提高。
實例10、藤黃酸二芐基二乙胺、新藤黃酸普魯卡因、新藤黃酸、新藤黃酸賴氨酸復(fù)合物對腸癌SW480細胞生長的影響試驗方法同例9試驗結(jié)果數(shù)據(jù)如下

從上述實驗數(shù)據(jù)中可以看出，本發(fā)明提供的復(fù)合物，其抗腫瘤活性不遜于藤黃酸類化合物及以往的藤黃酸類化合物的復(fù)合物，其中普魯卡因和N，N’-二芐基乙二胺新藤黃酸復(fù)合物的抗腫瘤活性有了較大的提高。實例11.普魯卡因新藤黃酸復(fù)合物抑癌譜試驗實驗方法同實驗9。

從上表可以看出普魯卡因新藤黃酸復(fù)合物對多種腫瘤細胞有抑菌作用，尤其對肝癌、腸癌細胞作用強烈。
實例12.新藤黃酸普魯卡因復(fù)合物對小鼠移植肉瘤S180、小鼠移植Heps實體瘤的抑制作用藥物配制定量稱取新藤黃酸普魯卡因，加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。
給藥途徑ip給藥周期于接種后24h連續(xù)給藥10天，實驗組每二天給藥一次，陽性對照組每天給藥一次，停藥后第一天處死解剖。劑量設(shè)置共設(shè)五組A組新藤黃酸普魯卡因組(20，10，5mg/kg)B組5-FU(20mg/kg)C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)小鼠類型昆明種小鼠體重18-22g給藥體積0.4ml/20g實驗方法取上述規(guī)格小鼠50只，按移植性腫瘤研究法接種，接種后24小時稱鼠重，并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，生理鹽水和5-FU分別為陰、陽對照組，新藤黃酸普魯卡因組設(shè)高、中、低三個劑量組。于停藥后第一天稱重，處死并分離瘤塊，稱瘤重并進行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗)表1新藤黃酸普魯卡因ip對小鼠移植S180的抑制作用(x±SD)

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比表2新藤黃酸普魯卡因ip對小鼠移植Heps實體瘤的抑制作用(x±SD)

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結(jié)果結(jié)果表明與生理鹽水對照組相比，新藤黃酸普魯卡因有非常明顯地抑制小鼠S180、移植性Heps實體瘤的生長作用，并對小鼠體重增長無明顯影響，且新藤黃酸普魯卡因的抑瘤作用強于5-FU。
實例13.藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺復(fù)合物對小鼠移植性腫瘤生命的延長作用藥物配制定量稱取藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺，加入0.9％NaCl溶液配成所需濃度。
給藥途徑ip給藥周期于接種后24h連續(xù)給藥10天，實驗組每兩天給藥一次，陽性對照組每天給藥一次，停藥后共觀察60天。劑量設(shè)置共設(shè)五組A組藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺組(20，10，5mg/kg)B組5-FU(20mg/kg)C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)小鼠類型昆明種小鼠體重18-22g給藥體積0.4ml/20g實驗方法取上述規(guī)格小鼠50只，按移植性腫瘤研究法接種，接種后，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，生理鹽水和5-FU分別為陰、陽對照組，藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺組設(shè)高、中、低三個劑量組。給藥后，觀察荷瘤小鼠存活天數(shù)(存活60天以上小鼠按60天計)及存活率(按存活60天以上且無癥狀小鼠計)，并進行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗)表1藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺ip對EAC腹水型小鼠移植瘤延長生命作用

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比表2藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺ip對Heps腹水型小鼠移植肉瘤延長生命作用

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結(jié)果結(jié)果表明，與生理鹽水對照組相比，藤黃酸N，N’-二芐基乙二胺有延長EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠存活天數(shù)作用(P＜0.01)，且對EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠的生命延長率及存活率皆優(yōu)于5-FU。
實例14.新藤黃酸普魯卡因?qū)π∈笱邪准毎麛?shù)的影響實驗方法取18-22g小鼠，按移植性腫瘤研究法，接種S180，接種后次日稱重并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，ip給藥，共10天，于接種后24h連續(xù)給藥10天，實驗組每二天給藥一次，陽性對照組每天給藥一次，于停藥后的第一天稱重并由眼眶靜脈取血，鏡檢白細胞總數(shù)，同時解剖分離瘤塊，稱重并進行統(tǒng)計學(xué)處理。
A組新藤黃酸普魯卡因組(20，10，5mg/kg)B組5-FU(20mg/kg)C組空白對照組(生理鹽水0.4ml/20g)

··P＜0.01與生理鹽水對照組相比實驗結(jié)果結(jié)果表明與生理鹽水對照組相比，新藤黃酸普魯卡因有非常明顯地抑制小鼠S180的生長作用，其效果好于5-FU，且對小鼠外周血中白細胞無明顯影響。實例15.新藤黃酸普魯卡因血管刺激性試驗實驗方法取體重2.2-2.4kg健康家兔1只，把家兔置于固定器中，家兔左耳緣靜脈滴注新藤黃酸普魯卡因注射液20mg/kg共計6ml，右耳滴注氯化鈉注射敢液6ml/kg，滴注速度為20滴/分鐘，每天上午滴注一次，連續(xù)一周。觀察左右耳緣靜脈反應(yīng)，每日觀察注射部位血管有無發(fā)紅、水腫、周圍有無滲血，觸摸血管有無變硬現(xiàn)象，左右耳比較現(xiàn)察。于未次給藥后12小時，將動物處死，取下左右耳，切片檢查。
實驗結(jié)果兩只兔給藥后，每天左、右耳均正常，未發(fā)紅，無水腫，組織病理學(xué)檢查也無明顯異常。新藤黃酸普魯卡因的血管刺激性試驗表明，此藥品對家兔耳緣靜脈無明顯局部刺激作用。
權(quán)利要求
1.具有下述通式的藤黃酸類化合物的復(fù)合物 式中R＝H或R＝OH，B表示含碳數(shù)大于8個小于20個的含氮有機堿性化合物。
2.如權(quán)利要求1所述藤黃酸類化合物的復(fù)合物，其特征在于B優(yōu)選為普魯卡因、N，N’-二芐基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基間甲苯胺或十四叔胺中的任意一個。
3.如權(quán)利要求1所述藤黃酸類化合物的復(fù)合物，其特征在于B最優(yōu)選為普魯卡因和N，N’-二芐基乙二胺中的任意一個。
4.權(quán)利要求1的藤黃酸類化合物的復(fù)合物的制備方法，其特征在于藤黃酸類化合物和含氮有機堿以1∶0.5-2.0的比例(摩爾比)在水和/或醇溶劑中反應(yīng)。
5.如權(quán)利要求4所述的藤黃酸類化合物的復(fù)合物的制備方法，其特征在于其優(yōu)選方案為藤黃酸類化合物和含氮有機堿以1∶0.8-1.5的比例(摩爾比)在水和/或醇溶劑中反應(yīng)。
6.用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于其中含有治療有效量的權(quán)利要求1的復(fù)合物和藥學(xué)上可接受的載體。
7.按照權(quán)利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述的組合物中的復(fù)合物的R＝H。
8.按照權(quán)利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述的組合物中的復(fù)合物的R＝OH。
9.按照權(quán)利要求6所述的用于治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于所述的復(fù)合物為R＝H的復(fù)合物及R＝OH的復(fù)合物的任意比例的混合物。
10.權(quán)利要求1-3中任意一項復(fù)合物，在制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了下列通式的藤黃酸類化合物的復(fù)合物，式中R＝H或R＝OH，B表示含碳數(shù)大于8個小于20個的含氮有機堿性化合物。本發(fā)明提供的復(fù)合物具有較高的脂溶性，其在體內(nèi)吸收較慢，作用時間長，是一種與以往藤黃酸類化合物的復(fù)合物不同的復(fù)合物，較易適于制成長效型藥物。本發(fā)明還提供了上述藤黃酸類化合物的復(fù)合物的制備方法，本發(fā)明還提供了以上述復(fù)合物為活性成份的抗腫瘤藥物的組合物，本發(fā)明還提供了上述復(fù)合物和藥物組合物在制備治療肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病的藥物中的用途。
文檔編號A61P35/00GK1470516SQ0212664
公開日2004年1月28日 申請日期2002年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月23日
發(fā)明者金彪, 喬林, 沈國偉, 陳煒, 金 彪 申請人:杭州博大藥物研究所