專利名稱：含銅的胺氧化酶的抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物化學領域，涉及肼基化合物及其作為含銅的胺氧化酶(E.C.1.4.3.6)及與之明顯等同的酶的抑制劑的用途。本發(fā)明化合物具有醫(yī)療用途，如可作為治療各種包括但不限于各種炎癥的疾病。具體地講，可采用這些化合物治療急性和慢性炎性癥狀或疾病，例如慢性關節(jié)炎、腸炎和慢性皮膚病，以及與碳水合物代謝有關的疾病和與脂肪細胞分化或功能和平滑肌細胞功能畸變有關的疾病。
背景技術：
VAP-1是人內皮細胞粘附分子，具有多種與其它與炎癥相關的粘附分子不同的獨特的性能。這種分子具有特殊而受約束的表達模式，并介導淋巴細胞與血管內皮的結合(Salmi，M.和Jalkanen，S.，Science2571407-1409(1992))。炎癥引起VAP-1上調至血管內皮細胞的表面，導致白細胞進入皮膚、腸和發(fā)炎的滑膜中(Salmi，M.和Jalkanen，S.，Science 2571407-1409(1992)；Salmi，M.等，J.Exp.Med 1782255-2260(1993)；Arvillomi，A.等，Eur.J.Immunol.26825-833(1996)；Salmi，M.等，J.Clin.Invest.992165-2172(1997)；(Salmi，M.和Jalkanen，S.，J.Exp.Med.183569-579(1996)；J.Exp.Med.186589-600(1997))。VAP-1最令人感興趣的性質之一為催化細胞外的含單胺氧化酶活性的區(qū)域(Smith，D.J.等，J.Exp.Med.18817-27(1998))。
人VAP-1 cDNA的克隆和排序表明它對與一類稱作含銅的胺氧化酶(E.C.1.4.3.6)的酶同源的跨膜蛋白質進行編碼。酶測試表明VAP-1具有單胺氧化酶(MAO)活性，該活性存在于所述蛋白質的細胞外結構域中(Smith，D.J.等，J.Exp.Med.18817-27(1998))。因此，VAP-1是一種外酶。對VAP-1 MAO活性的分析表明VAP-1屬于膜結合的MAO的稱為對氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)類。它們在氨基酸序列、輔因子、底物特異性和對某些抑制劑的敏感性方面，與廣泛分布的線粒體MAO-A和B黃素蛋白不同。然而，某些底物和抑制劑對SSAO和MAO的活性相同。哺乳類SSAO可代謝各種內源的單胺或從食物或異生物質中吸收的單胺。它們主要作用于脂族或芳族一級單胺，例如甲基胺或芐基胺(Lyles，GA.，Int.J.Biochem.Cell Biol.8259-274(1996))。所以，位于血管內皮細胞表面中的VAP-1可按以下反應途徑對一級單胺的循環(huán)發(fā)生作用。
尚未完全鑒定出人體中的VAP-1 SSAO的生理底物，但可確定甲胺是VAP-1 SSAO的良好底物。甲胺是肌酐、肝氨酸和腎上腺素降解的各種人生化途徑的產物，在各種哺乳動物的組織和血液中可發(fā)現(xiàn)這種物質。它也可來自食物，通過腸內細菌對食物前體的降解產生。在一定的生理學和病理學條件(如糖尿病)下，血液中的甲胺濃度會升高。另一種可能的生理學底物為氨基丙酮。
已有提出VAP-1 SSAO通過直接與存在于在白細胞表面表達的VAP-1配體上的胺底物相互作用的新機理，從而其活性與白細胞粘附內皮細胞的途徑直接相關(Salmi等.Immunity，(2001))。該出版物描述了VAP-1 SSAO活性與白細胞對內皮細胞的粘附過程直接相關。因此可期望采用VAP-1 SSAO活性的抑制劑來減少白細胞在炎癥區(qū)域的粘附，并因而減少傳入發(fā)炎區(qū)域的白細胞和減少發(fā)炎過程。
在人臨床組織樣本中，在發(fā)炎部位誘發(fā)產生VAP-1的表達。VAP-1水平的提高導致H2O2(由VAP-1 SSAO細胞外結構域對存在于血液中的單胺的作用產生)生成量的提高。在內皮細胞的局部環(huán)境中生成的H2O2會誘發(fā)其它細胞活動。H2O2是已知的信號分子，它可正調節(jié)其它粘附分子，而且所增加的粘附分子的表達可使白細胞傳入VAP-1表達區(qū)域得到增強。VAP-1 SSAO反應的其它產物也會產生促進發(fā)炎的生物作用。因此，VAP-1 SSAO產物的活性與發(fā)炎過程的加劇有關，而這一過程可被特定的SSAO抑制劑阻止。
VAP-1 SSAO涉及大量與VAP-1 SSAO的循環(huán)胺底物的含量增加有關的其它藥理學疾病。這些底物的氧化去氨基作用會引起內皮細胞環(huán)境中的有毒醛和氧自由基含量的增加，這會損害細胞而導致血管損傷。已報道I型和II型糖尿病患者的甲胺和氨基丙酮水平較高，提出可用特定的SSAO活性抑制劑治療發(fā)生于糖尿病后期的血管病，例如視網膜變、神經病和腎病。
Takahashi，H.等在Yakugaku Zasshi 101(12)1154-1156(1981)中報道了大量關于N-烷基氨基麻黃堿，包括N-(異亞丙基氨基)-麻黃堿(或R，S-(+)-(2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基)甲基腙-2-普魯本辛)的合成 合成這些腙化合物以評價其對支氣管肌肉系統(tǒng)的作用，結果發(fā)現(xiàn)未表現(xiàn)出任何明顯的活性。
Grifantini，M.等在Farmaco，Ed，Sci.23(3)197-203(1968)中報道了具有抗抑郁和單胺氧化酶抑制性質的N-氨基-1-麻黃堿和N-氨基-d-假麻黃堿的幾種烷基和?；苌锏暮铣?。在所公開的化合物中有腙紅-(β-羥基-α-甲基苯乙基)甲基腙環(huán)己酮，其結構如下 對調節(jié)VAP-1活性的特定VAP-1 SSAO抑制劑的研究對治療急性和慢性炎性癥狀或疾病，例如慢性關節(jié)炎、腸炎和皮膚病及與碳水合物代謝有關的疾病(包括糖尿病和糖尿病引起的并發(fā)癥)是有益的。另外，脂肪細胞分化或功能和平滑肌細胞功能畸變(尤其是動脈粥樣硬化)和各種血管病適合用VAP-1 SSAO抑制劑治療。
發(fā)明概述本發(fā)明主要涉及用作一類稱作對氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)的含銅的胺氧化酶，包括稱作血管粘附蛋白-1(VAP-1)的人SSAO的抑制劑的式I或II的肼基化合物。作為VAP-1 SSAO抑制劑，本發(fā)明的化合物可起阻止經SSAO活性介導的白細胞粘附以及VAP-1SSAO的其它功能的作用。因此本發(fā)明的化合物可用于治療大量結締組織、皮膚、胃腸道、中樞神經系統(tǒng)和肺系統(tǒng)的炎性癥狀和疾病，包括慢性關節(jié)炎、腸炎和慢性皮膚病。所述化合物也可用于治療與碳水合物代謝有關的疾病(如糖尿病)、與脂肪細胞分化或功能或平滑肌細胞功能畸變有關的疾病(例如動脈粥樣硬化和肥胖癥)及各種血管病(例如粉瘤的和非粉瘤性動脈粥樣硬化、局部缺血性心臟病和末梢aterial閉塞)。
本發(fā)明的另一方面是要提供用于治療響應于SSAO活性下降的疾病的藥用組合物，所述組合物包括有效量的式I或II的化合物與一種或多種藥學上可接受的載體或稀釋劑的混合物。
本發(fā)明的詳細描述本發(fā)明一方面使用一組特定的具有如下定義通式I或II的肼基化合物制備用于抑制含銅的胺氧化酶的藥用制劑。
本發(fā)明另一方面使用一組特定的具有如下定義通式I或II的肼基化合物制備用于治療炎性疾病或病癥、與碳水合物代謝相關的疾病、與脂肪細胞分化或功能或平滑肌細胞功能畸變相關的疾病、或血管病的藥用制劑。
本發(fā)明又一方面涉及抑制含銅的胺氧化酶的方法，所述方法包括使所述胺氧化酶與抑制有效量的消旋體或光學純形式(作為消旋體或異構體)的式I或II的肼基化合物或其藥學上可接受的溶劑合物、水合物或鹽接觸； 其中R1為氫、(C1-C4)烷基、芳烷基、(C2-C5)烷?；⒎减；螂s芳酰基；R2為氫或任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的芳烷基；R3-R6可相同或不同，為氫、任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的芳烷基、任選取代的苯基或任選取代的雜芳基；R1和R2可表示一個任選取代的雜環(huán)；R2和R3可表示一個任選取代的雜環(huán)；R3和R5可表示一個飽和的、任選取代的碳環(huán)；R7為氫、(C1-C4)烷基、(C2-C5)烷?；蚍纪榛?；R8為(C1-C4)烷基或芳烷基；n為1、2或3；X為氯、溴、碘或R2-硫酸根，其中R2的意義如此處定義。
在一個實施方案中，所述接觸在體外發(fā)生。在另一個實施方案中，所述接觸在體內發(fā)生。
本發(fā)明也涉及使用式I或II的肼基化合物的消旋體或異構體、或其藥學上可接受的溶劑合物、水合物或鹽治療或預防炎性疾病或癥狀的方法 其中R1為氫、(C1-C4)烷基、芳烷基、(C2-C5)烷?；?、芳?；螂s芳?；籖2為氫或任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的芳烷基；R3-R6可相同或不同，為氫、任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的芳烷基、任選取代的苯基或任選取代的雜芳基；R1和R2可表示一個任選取代的雜環(huán)；R2和R3可表示一個任選取代的雜環(huán)；R3和R5可表示一個飽和的、任選取代的碳環(huán)；R7為氫、(C1-C4)烷基、(C2-C5)烷?；蚍纪榛?；R8為(C1-C4)烷基或芳烷基；n為1、2或3；X為氯、溴、碘或R2-硫酸根，其中R2的意義如此處定義。
在一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防結締組織的炎性癥狀和疾病。具體說來，所述化合物可用于治療諸如類風濕性關節(jié)炎、強直性脊椎炎、銀屑病關節(jié)炎和骨關節(jié)炎這類癥狀或疾病。
在另一個實施方案中，所述式I或II的化合物用于治療或預防胃腸道炎性癥狀和疾病，具體例如Crohn病、潰瘍性結腸炎和腸易激惹綜合征。
在又一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療中樞神經系統(tǒng)炎性癥狀和疾病，包括多發(fā)性硬化病、早老性癡呆癥和與缺血休克有關的缺血-再灌注損傷。
在另一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防肺炎或肺病。具體說來，所述化合物可用于治療或預防諸如哮喘和成人呼吸窘迫綜合征這類癥狀或疾病。
在另一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防慢性皮炎，特別如銀屑病、變應性損傷、扁平苔癬和玫瑰糠疹的皮炎。
在又一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防與碳水合物代謝有關的病癥及其并發(fā)癥，例如糖尿病和糖尿病引起的并發(fā)癥、微脈管和大脈管病例如動脈粥樣硬化、血管視網膜病、腎病和神經病例如多發(fā)性神經病、單神經病和植物神經病。
在又一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防與脂肪細胞分化或功能畸變有關或由其引起的疾病，例如動脈粥樣硬化或肥胖癥。
在另一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防與平滑肌細胞功能畸變有關或由其引起的疾病，例如動脈粥樣硬化。
在另一個實施方案中，所述式I或II的肼基化合物用于治療或預防血管疾病，例如粉瘤和非粉瘤性動脈硬化、缺血性心臟病和Raynaud氏病和癥狀。
優(yōu)選的化合物是式I或II中的n為1的那些化合物。其中R1為氫，和/或R2為氫，或任選取代的C1-C4烷基、芐基的那些也是優(yōu)選的化合物。R2的芐基的優(yōu)選取代基為低級烷基(特別是甲基)和硝基、低級烷氧基(特別是甲氧基)和鹵素(特別是氯)。取代的芐基的特別優(yōu)選的實施方案為對甲苯基、對硝基芐基、對甲氧基芐基和對氯芐基。R2適用基團包括氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、芐基、對硝基芐基、對甲氧基芐基和對氯代芐基。根據一個實施方案，烷基可被含3-9，優(yōu)選3-6個碳原子的環(huán)烷基取代。
優(yōu)選的式I或II化合物也包括那些其中R3、R4、R5和R6(可相同或不相同)為氫、任選取代的C1-C4烷基或任選取代的苯基，特別是n為1的化合物。R3、R4、R5和R6優(yōu)選為氫和任選取代的苯基。優(yōu)選取代的苯基是那些被低級烷基(特別是甲基)、烷氧基(例如甲氧基)，或鹵素(例如氯或氟)所取代的苯基。特別優(yōu)選的取代苯基包括鄰甲苯基、間甲苯基、對甲苯基、對氟代苯基和對氯代苯基。
根據一個優(yōu)選的實施方案，R5和R6之一為氫，而其它為任選取代的苯基，且n優(yōu)選為1。
另一組優(yōu)選的式I或II化合物是那些其中n為1，R1和R2或R2和R3結合在一起形成任選取代的5-12元雜環(huán)，優(yōu)選5-7元單環(huán)或與其它環(huán)稠合而成的環(huán)(即環(huán)系統(tǒng))。所述5-7元環(huán)既可為螺環(huán)也可為稠合環(huán)。該環(huán)可為飽和環(huán)或可包括雙鍵的環(huán)。該環(huán)或環(huán)系統(tǒng)可為非取代環(huán)或取代環(huán)，其中的取代基可為低級烷基(特別是甲基)、硝基、低級烷氧基(特別是甲氧基)和鹵素(特別是氯)。
根據一個實施方案，n為1且R3和R5一起形成如上述雜環(huán)基般可被取代的飽和碳環(huán)基。適用的環(huán)包括環(huán)戊烷、環(huán)己烷、4-甲基-環(huán)己烷、環(huán)庚烷或包括在金剛烷環(huán)系統(tǒng)中環(huán)。
如果所述取代基R1、R2、R3和R5中的兩個如上所述形成一個環(huán)，則剩余兩個取代基優(yōu)選為氫。當n＞1，R2和R3或R3和R5形成一個環(huán)時，這些基團一般在相鄰碳原子上。當n＞1時，優(yōu)選在所述分子中的R3和/或R4最多有一個基團不為氫，該基團優(yōu)選與帶R2的碳相鄰。
R1和R2一起優(yōu)選為飽和雜環(huán)，例如吡唑烷、六氫噠嗪和1，2，3，4-四氫2，3-二氮雜萘。
根據另一個實施方案，n為1，由取代基R2和R3形成的雜環(huán)為一5-6元含氮飽和環(huán)。所述環(huán)可為非取代環(huán)或取代環(huán)。根據一個優(yōu)選實施方案，所述取代基為烷基或烷氧基。根據另一個實施方案，該5-6元含氮飽和環(huán)可與另一個環(huán)稠合成1，2，3，4-四氫喹啉、1，2，3，4-四氫異喹啉或2，3-二氫吲哚結構?？商峒暗奶貏e優(yōu)選的實施方案為哌啶、1，2，3，4-四氫異喹啉和6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫-異喹啉。
如R2和R3一起形成雜環(huán)，則R4優(yōu)選為氫。
一種優(yōu)選的Ia或IIa的化合物的亞屬的消旋體或異構體，或其藥學上可接受的溶劑合物、水合物或其鹽 其中n為1；R1為氫；R2為氫、C1-C4烷基或苯基(C1-C3)烷基；R3為氫、C1-C4烷基或任選取代的苯基；或R5為氫、C1-C4烷基或任選取代的苯基；或R3和R5與它們相連的碳原子一起形成5-7元環(huán)烷基環(huán)；R4和R6獨立地為氫或C1-C4烷基；和R7為氫；R8為C1-C4烷基；和X為氯、溴、碘。
用于本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽的實例包括(1R，2S)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇馬來酸氫鹽、(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽、(1R*，2S*)-1-(2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，1-二甲基碘化、(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1，2-二苯基乙醇馬來酸氫鹽、2-(1-甲基肼基)-1-苯基乙醇馬來酸氫鹽、2-(1-甲基肼基)-2-苯基乙醇馬來酸氫鹽、1[2-甲氧基-2-(間甲氧基苯基)乙基]-1-甲基肼富馬酸氫鹽、
2-氨基-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-甲醇鹽酸鹽、2-(1-甲基肼基)-1-(對甲氧基苯基)乙醇富馬酸氫鹽。
C1-C4烷基本身或作為烷氧基或烷?；囊徊糠郑瑸橹辨溁蛑ф溚榛?，因此可包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基和異丁基。
用于本文的術語“芳烷基”應解釋為與烷基相連的任何芳基，該烷基為1-6個碳原子鏈且既可為直鏈也可支鏈基團。所述鏈優(yōu)選含1-3個碳原子。芳基可為環(huán)上有6-12個，優(yōu)選6-10個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳基，例如苯基、萘基或四氫萘基。優(yōu)選的芳基為可被取代或非取代的苯基。優(yōu)選的取代基為低級烷基(即C1-C4烷基，特別是甲基)，或鹵素、低級烷氧基(例如甲氧基)，或硝基?？商峒暗奶貏e優(yōu)選的實施方案有芐基、對甲基芐基、對氯代芐基、2-苯基乙基和3-苯基丙基。
用于本文的術語“(C2-C5)烷酰基”指連接有烷基的羰基，例如上述C1-C4烷基中的任一種。例如，該術語包括但不限于乙?；?、丙酰基、丁?；?-甲基丙?；?。
本文所用的術語“雜環(huán)”表示穩(wěn)定的5-7元單或雙環(huán)或穩(wěn)定的7-12元雙環(huán)雜環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)中的任一環(huán)可為飽和或不飽和，且它由碳原子和1-3個選自N、O和S的雜原子組成，其中的氮和硫雜原子可任選被氧化，所述氮雜原子可任選被季銨化，并包括其中任何上述雜環(huán)稠合成一個苯環(huán)的任何雙環(huán)基團。特別有用的是含1個氧或硫、1-3個氮原子，或與1或2個氮原子相連的1個氧或硫的環(huán)。所述雜環(huán)可在任何使結構穩(wěn)定的雜原子或碳原子上成鍵。這類雜環(huán)基的實例包括哌啶基、哌嗪基、N-芐基哌啶基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基(2-oxopyrrolodinyl)、2-氧代氮雜基、氮雜基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎寧環(huán)基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并二氫吡喃基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并[b]噻吩基、苯并[2，3-c]1，2，5-噁二唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基亞砜、硫代嗎啉基砜和噁二唑基。這里嗎啉代與嗎啉基相同。
優(yōu)選的雜環(huán)為飽和雜環(huán)，例如吡咯烷、哌啶，或1，2，3，4-四氫異喹啉、6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉、吡唑烷、四氫噠嗪。
用于本文的術語“雜芳基”指含有5-14個環(huán)原子的基團；6、10或14個π電子分布在環(huán)上；并含碳原子和1、2或3個氧、氮或硫雜原子(雜芳基實例有噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并吡喃基、呫噸基、氧硫雜蒽基(phenoxathiinyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、中氮茚基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、啶基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異噁唑基、呋咱基和吩噁嗪基)。
示例性的基團包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-呋喃基、3-呋喃基、1-噻吩基、2-噻吩基。
用于本文的術語“雜芳?；敝概c上述雜芳基相連的羰基。
用于本文的術語“芳?；敝概c芳基相連的羰基。
用于本文的術語“鹵素”或“鹵代基”本身或作為另一基團的一部分指氯、溴、氟或碘。
除非本文中另有說明，否則術語“取代基”指一個或多個獨立地選自鹵代基、鹵代(C1-C6)烷基、芳(C1-6)烷基、芳基、硝基、C1-6烷氧基和C1-6烷基的基團，條件是所生成的化合物穩(wěn)定。優(yōu)選的任選取代基包括鹵代基、芳(C1-6)烷基、芳基和C1-6烷基。
用于本文的術語“環(huán)烷基”本身或作為其它基團的一部分指含3-9個碳原子的環(huán)烷基。典型實例有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和環(huán)壬基。
用于本文的術語“鹵代烷基”指被一或多個氯、溴、氟或碘，優(yōu)選氟和氯所取代的任何上述烷基，例如氯甲基、碘甲基；三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和2-氯乙基。
本文所公開的部分化合物可含一或多個不對稱中心，并因此產生對映異構體、非對映異構體和其它立體異構形式。本發(fā)明還包括外消旋混合物、其拆分形式及其混合物，以及可根據本領域技術人員所熟知的方法分離出的單一的對映體。除非另有說明，否則當本文所述化合物含烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心時，將包括E和Z幾何異構體。
用于本文的術語“立體異構體”是對僅在其原子的空間取向上有所區(qū)別的單個分子的所有異構體的總稱。立體異構體包括對映異構體和具有多于一個彼此間不互為鏡象的手性中心的化合物的異構體(非對映異構體)。
術語“不對稱中心”或“手性中心”指連接有四個不同基團的碳原子。
術語“對映異構體”或“對映異構的”指鏡象不能重疊的分子，并因而有光學活性，其中的對映體以一個方向旋轉偏振光面，而它的鏡象以相反方向旋轉偏振光面。
術語“外消旋的”指等量對映異構體的混合物，因此不具有光學活性。
術語“拆分”指對一種分子的兩種對映異構體形式中的一種的分離、濃縮或消耗。短語“對映體過量”指其中存在的一種對映體的濃度遠大于其鏡象分子的濃度的混合物。
當任何組成或式I或II發(fā)生不止一次的任意變化時，對每種情況的定義與每次其它情況的定義彼此獨立。另外只要取代基的組合和/或變化產生穩(wěn)定的化合物，則是允許的。
可通過下列路線中的一種制備本發(fā)明的化合物。
以氨基醇III為原料，經N-亞硝基衍生物IV或經噁二嗪V合成化合物I。于微酸水溶液中用亞硝酸鈉由氨基醇III得到亞硝基衍生物(A.A.Potekhin，A.O.Safronov，Zhur.Org.Khim.，1981，17，379-386；H.Takahashi，T.Senda，K.Higashiyama，Chem.Pharm.Bull.，1991，39，836-842；J-K.Shen，H.Katayama，N.Takatsu，I.Shiro，J.Chem.Soc.PerkinTrans.1，1993，2087-2097)或用其它熟知的N-亞硝化方法得到亞硝基衍生物(M.A.Zolfigol，M.H.Zebarjadian，G.Chehardoli，H.Keypour，S.Salehzadeh，M.Shamsipur，J.Org.Chem.，2000，66，3619-3620)。可在四氫呋喃中用氫化鋁鋰(H.Takahashi，T.Senda，K.Higashiyama，Chem.Pharm.Bull.，1991，39，836-842)或可在乙酸水溶液中用鋅粉(D.L.Trepanier，V.Sprancmanis，K.G.Wiggs，J.Org.Chem.，1964，29，668-672)對亞硝基化合物IV進行還原。對得自氨基醇III和氧雜吖丙啶VI(E.Schmitz，S.Schramm，Cs.Szántay，Zs.Kardos，Liebigs Ann.Chem.，1983，1043-1046)的噁二嗪V(R9和R10為(C1-C4)烷基或可一起表示一個5-7元飽和碳環(huán))進行酸水解，生成肼基醇I。在丙酮或乙腈中用烷基鹵化物或烷基硫酸酯對肼基醇I季銨化得到化合物II。通過相應的環(huán)氧乙烷衍生物VII的肼解制備化合物I(R2＝H)。經分級結晶或層析分離出在環(huán)氧乙烷開環(huán)時形成的區(qū)域異構體(M.Kim，J.D，White，J.Am.Chem.Soc.，1977，99，1172-1180；T.Okawara，S.Ehara，H.Kagotani，Y.Okamoto，M.Eto，K.Harano，T.Yamasaki，M.Furukawa，J.Org.Chem.，1996，61，4125-4129；T.Taguchi，J.Ishibashi，T.Matsuo，M.Kojima，J.Org.Chem.，1964，29，1097-1103)。 在R3≠R4和R5≠R6時，氨基醇III以單一的非對映異構體使用?；衔颕和II的對映異構體的合成以對映異構體純的氨基醇III或環(huán)氧化物VII為原料。在無明顯外消旋化下發(fā)生轉化。
本發(fā)明化合物I以酸加成鹽的形式使用。“藥學上可接受的酸加成鹽”是指任何式I和II的堿化合物的無毒有機和無機酸加成鹽。形成適用鹽的示例性無機酸包括氫氯酸、氫溴酸和磷酸。形成適用鹽的示例性有機酸包括乙酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、甲磺酸和水楊酸。
本發(fā)明提供一種通過選擇性抑制VAP-1 SSAO活性來治療VAP-1介導的疾病的方法，所述方法包括向有需要的動物給服治療有效量的選自式I或II所表示的化合物，其中將式I或II的一種或多種化合物與一種或多種無毒的藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或輔劑及其它活性成分(如需要)一起給藥。
本發(fā)明的化合物可用于治療炎性癥狀和疾病，包括但不限于結締組織的炎性癥狀和疾病，例如關節(jié)強硬性脊椎炎、Reiter氏綜合征、銀屑病關節(jié)炎、骨關節(jié)炎或變性關節(jié)病、類風濕性關節(jié)炎、Sjgren綜合征、BehCet氏綜合征、復發(fā)性多軟骨炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化病、嗜酸性細胞增多性肌膜炎、多發(fā)性肌炎和皮肌炎、風濕性多肌痛、脈管炎、顳動脈炎、結節(jié)性多動脈炎、Wegener氏肉芽腫病、混合性結締組織病和幼年型類風濕關節(jié)炎；胃腸道炎性癥狀和疾病，例如Crohn氏病、潰瘍性結腸炎、腸易激惹綜合征(痙攣性結腸)、肝纖維變性癥、口腔粘膜炎(口炎)和復發(fā)性阿弗他口腔炎；中樞神經系統(tǒng)炎性癥狀和疾病，例如多發(fā)性硬化、早老性癡呆和與缺血休克有關的缺血-再灌注損傷；肺炎癥狀和疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病和成人呼吸窘迫綜合征；和皮膚炎性癥狀和疾病，例如接觸性皮炎、特應性皮炎、銀屑病、玫瑰糠疹、扁平苔癬和毛發(fā)紅糠疹。
另外，本發(fā)明化合物可用來治療與碳水合物代謝有關的疾病及其并發(fā)癥，例如糖尿病和糖尿病并發(fā)癥，包括但不限于微脈管癥和大脈管癥，例如動脈粥樣硬化、血管視網膜病、視網膜病、腎病和腎病綜合征；神經病，例如多發(fā)性神經病、單神經病、植物神經病，足潰瘍、關節(jié)病和高風險感染；與脂肪細胞分化或功能的畸變相關或由其引起的疾病，例如動脈粥樣硬化和肥胖癥；以及血管病，例如粉瘤和非粉瘤性動脈硬化，局部缺血心臟病，包括心肌梗死、末梢aterial阻塞、閉塞性血栓性血管炎(Buerger病)及Raynaud病和癥狀。
具體說來，本發(fā)明化合物可用于治療動脈粥樣硬化。已知VAP-1在脂肪細胞、平滑肌細胞、內皮細胞中表達，并與炎癥相關。動脈粥樣硬化斑由蓄積的細胞間和細胞外脂質、平滑肌細胞、結締組織和葡糖胺聚糖構成。動脈硬化的最早觀測到的損害是產生了脂肪條紋(由裝脂泡沫細胞構成，它是隨單核白細胞的循環(huán)而遷移進入內膜的內皮下層的巨噬細胞)，它后來參與形成了纖維斑(由結締組織包圍的內膜平滑肌細胞、細胞間和細胞外脂質構成)。
術語“治療炎癥”是指為預防、緩解、控制或治療炎性癥狀或疾病，給有需要的患者服用本發(fā)明的化合物。這種治療不必完全緩解炎性癥狀或疾病。而且，這種治療可與其它本領域技術人員所知的減輕炎癥常規(guī)治療相結合。
可將本發(fā)明化合物在約0.1μg/kg-300mg/kg，優(yōu)選0.1μg/kg-10mg/kg體重的有效范圍內進行給藥?？蓪⒈景l(fā)明化合物以一次日劑量給藥，或將總日劑量以每日兩、三或四次的分劑量進行給藥。
可將本發(fā)明的藥用組合物給予可獲得本發(fā)明化合物的有益效果的任何動物。所述動物主要指人，但本發(fā)明并不受其限定。
可將本發(fā)明的藥用組合物以任何可達到所需目的的方式進行給藥。例如，可經胃腸外、皮下、靜脈內、關節(jié)腔內、鞘內、肌內、腹膜內或真皮內注射給藥，或者經皮、口腔、口粘膜(oromucosal)、經眼或吸入給藥。另外，或者同時可經口服途徑給藥。特別優(yōu)選口服給藥。給藥量取決于受體的年齡、病況、體重、結合治療的藥物種類(如果有)、治療次數、所需效果的性質。
除所述藥理學活性化合物外，所述化合物的藥用制劑可含適用的藥學上可接受的載體，這些載體包括促進活性化合物形成可藥用的制劑的賦形劑和輔劑。本發(fā)明的藥用制劑可通過已知的方法，例如通過常規(guī)的混合、制粒、制糖錠劑、溶解或凍干方法制備。因此，可通過將所述活性化合物與固體賦形劑相混合，如需要或必要在加入適用輔劑后，任選研磨所生成的混合物并將所述顆?；旌衔锛庸さ玫狡瑒┗蛱清V芯來制備所述口服藥用制劑。
適用的賦形劑具體有填充劑，例如糖類例如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇、纖維素制劑和/或磷酸鈣，如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；粘合劑，例如淀粉糊，例如用玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如需要，可加入崩解劑，例如上述淀粉和羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽(例如藻酸鈉)。輔劑有上述所有試劑、流動調節(jié)劑和潤滑劑，例如硅膠、滑石、硬脂酸或其鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)和/或聚乙二醇。如需要，可將糖錠芯適當包衣以抵抗胃液。為此目的，可采用濃縮糖類溶液，它可任選含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆液和適用的有機溶劑或溶劑混合物。為制備抵抗胃液的包衣，采用適用的纖維素制劑溶液，例如乙酰纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯。緩釋和延長釋放制劑可用特殊的賦形劑，如甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物、甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物和甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物。例如，可將染料或顏料加入片劑或糖錠劑包衣中，以區(qū)別或以對活性化合物藥劑的組合作出鑒別。
其它可用于口服的藥用制劑包括由明膠制成的推入配合膠囊，和由明膠和增塑劑例如甘油或山梨糖醇制成的軟密封膠囊。所述推入配合膠囊可含顆粒狀的活性化合物，該化合物可與填充劑(例如乳糖)，粘合劑(例如淀粉)和/或潤滑劑(例如滑石或硬脂酸鎂)和任選的穩(wěn)定劑相混合。在軟膠囊中，優(yōu)選將所述活性化合物溶于或懸浮于適當的液體例如脂肪油或液體石蠟中。另外還可加入穩(wěn)定劑。
適用于胃腸外給藥的制劑包括水溶形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性鹽和堿性溶液。特別優(yōu)選的鹽為馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、S，S酒石酸鹽或R，R酒石酸鹽。而且，所述活性化合物的懸浮液以適當的油性注射懸浮液形式給藥。適用的親油溶劑或溶媒包括脂肪油，例如芝麻油或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(所述化合物可溶于PEG-400)。水性注射混懸液可含有提高所述懸浮液粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。所述混懸液也可任選含有穩(wěn)定劑。
下列實施例是對本發(fā)明的方法和組合物的舉例說明，但并不對其作出限定。在本發(fā)明的精神和范圍內，通常可對本發(fā)明的各種條件和參數作出適當的變化和調整，這對本領域的技術人員而言將是顯而易見的。
實施例1(1R，2S)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-馬來酸氫鹽(1)在冰浴中及劇烈攪拌下，向(1R，2S)-2-甲氨基-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽(2.02g，10mmol)的水(50ml)懸浮液中逐滴加入NaNO2(1.38g，20mmol)的水(10ml)溶液中，隨后逐滴加入AcOH(0.30g，5mmol)。在室溫下攪拌該混合物8小時，隨后用EtOAc(4×50ml)萃取。干燥(Na2SO4)經合并的有機相，并減壓蒸發(fā)得到1.86g N-亞硝基衍生物的油狀產物，無需進一步提純直接用于后續(xù)步驟。
往攪拌著的LiAlH4(0.73g，19.2mmol)的THF(50ml)懸浮液中逐滴加入(1R，2S)-2-甲氨基-N-亞硝基-1-苯基-1-丙醇(1.86g，9.6mmol)的THF(20ml)溶液，攪拌該混合物并回流3小時。用H2O(1.5ml)和THF(20ml)的混合物分解過量的LiAlH4。濾出所生成的沉淀并用EtOAc(2×75ml)洗滌。干燥(無水Na2SO4)經合并的濾液，并減壓蒸發(fā)。用當量的馬來酸在EtOH和Et2O中的混合物處理半固體殘余物，得到結晶的馬來酸氫鹽，將其濾出并重結晶。1H-NMR(400MHz，D2O)δ(ppm)1.19(3H，d，J＝6.8Hz，CHCH3)，3.09(3H，s，NCH3)，3.66(1H，m，NCH)，5.40(1H，m，OCH) 6.30(2H，s，CHCOOH)7.45(5H，m，C6H5)。
實施例2(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽(2)向1-氧雜-2-氮雜螺[2.5]辛烷(0.60g，5.3mmol)的乙醚(20ml)溶液中加入(1R*，2S*)-2-甲氨基-1-苯基-1-丙醇(0.86g，5.3mmol)的乙醚(5ml)溶液。室溫下攪拌所得的反應混合物30分鐘，再蒸發(fā)至干。向殘余物中加入5％的氫氯酸(30ml)，在環(huán)境溫度下攪拌該混合物1小時。用Et2O(2×30ml)洗滌該混合物，在冰冷卻下用Na2CO3堿化，并用EtOAc(3×50ml)萃取。將經合并的EtOAc萃取物干燥并蒸發(fā)，得到固體殘余物，再將所得的固體殘余物溶于甲醇(5ml)中，用22％乙醇溶的鹽酸(2ml)和乙醚將其轉化為結晶的鹽酸鹽。濾出晶體，并從甲醇/乙醚中重結晶。1H-NMR(400MHz，D2O)δ(ppm)1.20(3H，d，J＝6.8Hz，CHCH3)，3.09(3H，s，NCH3)，3.67(1H，m，NCH)，5.41(1H，br s，OCH)，7.47(5H，m，C5H5).
實施例3(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽(2)在45分鐘內，向冰冷卻并攪拌著的鋅粉(2.62g，40mmol)的水(10ml)懸浮液中滴加入(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-N-亞硝基-1-苯基-1-丙醇(1.94g，10mmol，根據實施例1由(1R*，2S*)-2-甲氨基-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽制備)的AcOH(18ml)溶液。通過外部冷卻，使加入過程中反應混合物的溫度維持在20-25℃。加入完成后，于50℃下攪拌該混合物1小時，隨后進行抽濾，鋅殘余物用H2O(15ml)和AcOH(5ml)的混合物洗滌。將濾液和洗液合并，真空濃縮至約10ml。在冰冷卻下，用NaOH溶液把該溶液堿化，再用Et2O(4×50ml)萃取。干燥并蒸發(fā)經合并的乙醚萃取物，得到黃色油狀物，使其溶于甲醇(5ml)中，再用22％乙醇溶的鹽酸(2ml)和乙醚使其轉化為結晶的鹽酸鹽。濾出晶體并從甲醇/乙醚中重結晶。1H-NMR(400MHz，D2O)參見實施例2實施例4(1R*，2S*)-1-(2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，1-二甲基碘化(4)向(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇(1.05g，5.8mmol，根據實施例1由(1R*，2S*)-2-甲基氨基-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽制備)的CH3CN(15ml)溶液中加入MeI(1ml，16mmol)。室溫下使所得混合物在密封燒杯中放置24小時。過濾析出的晶體，用CH3CN洗滌并重結晶。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1.16(3H；d，J＝6.8Hz，CHCH3)，3.31(3H，s，NCH3)，3.32(3H，s，NCH3)，3.69(1H，m，NCH)，5.61(1H，m，OCH)，7.30(1H，m，C6H5)7.41(4H，m，C6H5).
實施例5(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1，2-二苯基乙醇馬來酸氫鹽(5)在冰浴及劇烈攪拌下，向(1R*，2S*)-2-(1-甲氨基)-1，2-二苯基乙醇(2.27g，10mmol)的H2O(30ml)懸浮液中逐滴加入NaNO2(1.38g，20mmol)的H2O(10ml)溶液，隨后逐滴加入AcOH(0.90g，15mmol)。在室溫下攪拌所得的混合物8小時，隨后用EtOAc(4×50ml)萃取。干燥(Na2SO4)經合并的有機相，并減壓蒸發(fā)得到2.04g結晶的N-亞硝基衍生物，產物無需進一步提純直接用于后續(xù)步驟。
將(1R*，2S*)-2-(1-甲氨基)-N-亞硝基-1，2-二苯基乙醇(2.04g，8.0mmol)分成小批加到攪拌著及冰冷卻的LiAlH4(0.61g，16.1mmol)的THF(80ml)懸浮液中，在環(huán)境溫度下攪拌該混合物3小時。用H2O(1.2ml)和THF(20ml)混合物分解過量的LiAlH4，濾出所生成的沉淀并用EtOAc(2×75m1)洗滌。干燥(無水Na2SO4)經合并的濾液，并減壓蒸發(fā)。用當量的馬來酸在EtOH和Et2O中的混合物處理所得的油狀產物，得到結晶的馬來酸氫鹽，將其濾出并重結晶。1H-NMR(400MHz，D2O)δ(ppm)2.95(3H，s，NCH3)，4.45(1H，d，J＝5.2Hz，NCH3)，5.66(1H，d，J＝5.2Hz，NCH3)，6.30(2H，s，CHCOOH)7.15-7.45(10H，om，2xC6H5).
實施例62-(1-甲基肼基)-1-苯基乙醇馬來酸氫鹽(6)和2-(1-甲基肼基)-2-苯基乙醇馬來酸氫鹽(6a)向攪拌著的肼水合物(12.5g，0.25mol)的EtOH(10ml)溶液中逐滴加入氧化苯乙烯(3.00g，25mmol)。該反應放熱使反應物回流。完成添加后，使所得混合物在60℃下保持10分鐘。蒸發(fā)出溶劑，使油狀殘余物溶于EtOH中，并用等量馬來酸處理。過濾析出的2-(1-甲基肼基)-1-苯基乙醇馬來酸氫鹽晶體，并從EtOH中重結晶。1H-NMR(400MHz，D2O)δ(ppm)3.38(2H，m，NCH2)，5.07(1H，m，OCH)，6.29(2H，s，CHCOOH)，7.45(5H，m，C6H5).
用Et2O處理濾液，得到結晶的2-(1-甲基肼基)-2-苯基乙醇馬來酸氫鹽，將所得晶體過濾，并從EtOH和Et2O的混合物中重結晶兩次。1H-NMR(400MHz，D2O)δ(ppm)3.91(2H，m，OCH2)，4.32(1H，m，NCH)，6.30(2H，s，CHCOOH)，7.47(5H，m，C6H5).
實施例71-[2-甲氧基-2-(間甲氧基苯基)乙基]-1-甲基肼富馬酸氫鹽在冰浴及劇烈攪拌下，向2-甲氨基-1-(間甲氧基苯基)-1-乙醇鹽酸鹽(4.39g，20.2mmol)的H2O(20ml)溶液中逐滴加入NaNO2(2.81g，40.7mmol)的水(10ml)溶液，隨后逐滴加入AcOH(2.10g，35.0mmol)。在0℃下攪拌所得混合物3小時，置于冰箱中12小時，再用等體積的H2O稀釋，用固體Na2CO3堿化，用Et2O(3×50ml)萃取。干燥(Na2SO4)經合并的乙醚萃取物，并減壓蒸發(fā)得到3.53g黃色粘性油狀物，產物無需進一步提純直接用于后續(xù)步驟。
用正己烷洗滌55％氫化鈉懸懸浮液(2.00g，45.9mmol)，并懸浮于THF(50ml)中。用N2吹掃，將2-甲氨基-N-亞硝基-1-(間甲氧基苯基)-1-乙醇(3.00g，14.3mmol)的THF(90ml)溶液脫氣，并在攪拌下逐滴加入到NaH懸浮液中，在0℃下連續(xù)用N2吹掃1小時。在0℃下繼續(xù)攪拌2小時，隨后在0℃下向該攪拌著的懸浮液中逐滴加入MeI(3.40g，24.0mmol)的THF(30ml)溶液。將所得混合物溫熱至室溫，加入MeOH分解過量的NaH。蒸干所述溶液，將殘余物溶解于H2O(50ml)中，用Et2O(3×50ml)萃取。將經合并的乙醚萃取物用H2O(50ml)洗滌，接著干燥(Na2SO4)，并減壓蒸發(fā)得到2.70g粘稠的黃色油狀物，產物無需進一步提純直接用于后續(xù)步驟。
將N-甲基-2-甲氧基-2-(間甲氧基苯基)-N-亞硝基-乙胺(2.70g，12.0mmol)的THF(30ml)溶液逐滴加到攪拌及冰冷卻的LiAlH4(1.80g，47.4mmol)的THF(90ml)懸浮液中。在0℃下攪拌所得的混合物3小時，隨后溫熱至室溫。用H2O(3.6ml)和THF(25ml)的混合物分解過量的LiAlH4，濾出所生成的沉淀物，并用EtOAc(2×75ml)洗滌。干燥(無水Na2SO4)經合并的濾液，并減壓蒸發(fā)。將油狀殘余物溶解于EtOH(20ml)中，并與當量的富馬酸的熱EtOH(25ml)溶液混合。將析出的鹽冷卻后，過濾并用EtOH洗滌。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2.44(3H，s，NCH3)，2.60(1H，m，NCH2)，2.81(1H，m，NCH2)，3.14(3H，s，CHOCH3)，3.75(3H，s，C6H4OCH3)，4.45(1H，m OCH)，6.57(2H，s，CHCOOH)，6.86(3H，m，C6H4)，7.27(1H，m，C6H4)。
實施例82-氨基-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-甲醇鹽酸鹽(8)在冰浴及劇烈攪拌下，向6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-甲醇(2.23g，10mmol)的水(50ml)懸浮液中逐滴加入NaNO2(1.38g，20mmol)的水(10ml)溶液，隨后逐滴加入AcOH(O.90g，15.0mmol)。在室溫下攪拌該混合物8小時后，再用EtOAc(4×50ml)萃取。將經合并的有機相干燥(Na2SO4)，并減壓蒸發(fā)得到2.37g結晶的N-亞硝基衍生物，產物無需進一步提純直接用于后續(xù)步驟。
在1小時內向攪拌著的6，7-二甲氧基-2-亞硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-甲醇(2.37g，9.4mmol)、鋅粉(2.46g，37.6mmol)和H2O(15ml)的懸浮液中逐滴加入冰醋酸(3.00g，50mmol)。通過外部冷卻使加入過程中反應混合物的溫度維持在25-30℃。接著在60℃下攪拌反應混合物1小時，冷卻，抽濾出過量的鋅粉，并用H2O(15ml)洗滌。用NaOH水溶液將經合并的濾液和洗液堿化，并用CHCl3(4×50ml)萃取。將經合并的有機相干燥(無水Na2SO4)并減壓蒸發(fā)。將固體殘余物溶于甲醇(5ml)，并用22％乙醇溶的鹽酸(2ml)和乙醚將其轉化為結晶的鹽酸鹽。濾出晶體并從甲醇/乙醚中重結晶。1H-NMR(D2O)δ(ppm)3.08(2H，m，CH2CH2N)，3.49(1H，m，CH2N)，3.76(1H，m，CH2N)，3.85(3H，s，OCH3)，3.86(3H，s，OCH3)，3.94(1H，m，CH2O)，4.19(1H，dd，J＝12.8，4.0Hz，CH2O)，4.47(1H，m，CHN)，6.93(1H，s，C6H2)，6.93(1H，s，C6H2).
實施例92-(1-甲基肼基)-1-(對甲氧基苯基)乙醇富馬酸鹽(9)將2-甲氨基-N-亞硝基-1-(對甲氧基苯基)乙醇(1.15g，5.5mmol，根據實施例1由2-甲氨基-1-(對甲氧基苯基)乙醇制備)分成小部分加到攪拌及冰冷卻的LiAlH4(0.42g，11mmol)的THF(40ml)懸浮液中，在環(huán)境溫度下攪拌該混合物2小時。用H2O(0.8ml)和THF(10ml)的混合物分解過量的LiAlH4，濾出所生成的沉淀物，并用EtOAc(3×50ml)洗滌。將經合并的濾液和洗液干燥(無水Na2SO4)并減壓蒸發(fā)。用當量的富馬酸的EtOH和Et2O混合物處理所述油狀產物，得到結晶的富馬酸鹽，將產物過濾并重結晶。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2.57(3H，s，NCH3)，2.74(2H，m，NCH2)，3.73(3H，s，OCH3)，4.83(1H，m，OCH)，6.57(2H，s，CHCOOH)，6.89(2H，d，J＝8.8Hz，C6H4)，7.26(2H，d，J＝8.4Hz，C6H4).表1.合成的外消旋化合物的物理參數 表2.合成的對映體化合物的物理參數
實施例10VAP-1 SSAO活性的體外抑制作用基本如文獻所述，用所述配對比色法(coupled colourimetric method)測定VAP-1 SSAO對單胺氧化酶和相關酶的活性(Holt，A.，等，Anal.Biochem.244384-392(1997))。將表達于中國倉鼠卵巢(CHO)細胞的重組人體VAP-1 SSAO用作活性測定的VAP-1 SSAO的來源。天然CHO細胞的SSAO活性很小。這些細胞及其培養(yǎng)現(xiàn)有技術已有描述(Smith，D.J.，等，J.Exp.Med.18817-27(1998))。通過將約3.6×108個細胞懸浮在25ml溶胞緩沖液(150mMNaCl、10mM Tris-Base pH7.2，1.5mM MgCl2，1％NP40)中，并在旋轉臺上于4℃下培養(yǎng)過夜來制備細胞裂解液。在室溫下經18000g離心該裂解液5分鐘，使其澄清，其上清液直接用于本測試。如下所述，在96孔微量滴定板中進行所述VAP-1 SSAO測試。如需要，向每一孔中加入預定量的抑制劑。各測試中抑制劑的量不同，但總的來說，其終濃度在1nM-50μM間。對照組不含抑制劑。該抑制劑在水中占總體積的1/20。然后加入下列試劑。為使總反應體積達到200μl而加入0.2M的磷酸鉀緩沖液(pH7.6)、45μl的含1mM 2，4-二氯苯酚的新配制的顯色溶液、500μM的4-氨基安替比林和4U/ml辣根過氧化物酶及一定量的含VAP-1SSAO的CHO細胞裂解液(引起每小時0.6A490的變化)。這都處于所述測試的線性響應區(qū)域。在37℃下溫育該板30分鐘，用Wallac VictorII多標記計數器在490nm下測定背景吸收。加入20μl 10mM的芐基胺(最終濃度＝1mM)，并于37℃下溫育該板1小時以引發(fā)所述酶的反應。在490nm處測得吸光度的增加，表明VAP-1 SSAO具有活性。經校正背景吸光度并用GraphPad Prism計算IC50值后，采用與對照物相比的抑制率來表示抑制作用。
實施例11VAP-1 SSAO活性與總的大鼠MAO活性的對比在14ml KCl-EDTA溶液中漂洗1g大鼠的肝樣本幾次除去全部血液，由此制得大鼠MAO。隨后將1g肝樣本在4ml冰冷卻的磷酸鉀緩沖液(0.1M，pH7.4)中用Ultra-Turrax勻漿器(設定在11000rpm，4×10s)均化。在4℃及500g下離心10分鐘后，小心取出上清液并于4℃及12300g下離心15分鐘。倒出上清液，使沉積的線粒體再懸浮于4ml新鮮的磷酸鹽緩沖液中，并如上述般進行離心。將所述線粒體懸浮于4ml磷酸鹽緩沖液中，并用Ultra-Turrax勻漿器(設定為11000rpm，2×10s)均化。將所述線粒體制劑分成幾分并放置于-70℃下。除用1mM香草酸代替2，4-二氯苯酚外，用與測定VAP-1 SSAO相同的方法測定總MAO活性。如需要，向每一孔中加入預定量的抑制劑。各測試中抑制劑的量不同，但總體上最終濃度在10nM-800μM間。對照物不含抑制劑。所述抑制劑在水中占總體積的1/20。然后加入下列試劑。為使總反應體積達到300μl而加入0.2M的磷酸鉀緩沖液(pH7.6)、50μl新配制的顯色溶液(同上)和50μlMAO制劑。在37℃下將該板溫育30分鐘，用Wallac Victor II多標簽計數器在490nm下測定背景吸光度。加入20μl 5mM的酪胺(最終濃度為0.5mM)并于37℃下培養(yǎng)該板1小時以引發(fā)所述酶的反應。在490nm處測得吸光度的增加，表明MAO具有活性。在校正背景吸光度和用GraphPadPrism計算IC50值后，采用與對照物相比的抑制率表示抑制作用。加入氯吉蘭和帕吉林(各為MAO-A和-B的抑制劑)到一些孔中(使得濃度為0.5μM)作為對MAO抑制作用的陽性對照。
表3中顯示出實施例1-9的化合物特異性對人MAO中VAP-1SSAO的抑制活性的能力，及在大鼠MAO中對VAP-1 SSAO的專一性。該結果表明本發(fā)明的化合物是人VAP-1 SSAO活性的特異性抑制劑。因此希望本發(fā)明的化合物在治療其中人粘附分子VAP-1的SSAO活性起主要作用的疾病和癥狀方面有治療用途。
表3實施例1-9的效能和專一性
4 ＞50 ＞500 ≈102 0.35 39 1115 0.41 54 1326 0.065 8.90 1377 0.41 44 1071 0.22 31 1418 ＞10 78 ＜89 0.31 36 116100.30 36 120110.17 16 94120.29 40 138131,52 25 1614129 ＞800 ＞6151.38 10 7164.00 2496217342316
18 2.60 22 920 0.52 55 9821 0.26 41 15822 1.20 11 923 0.26 28 10824 0.35 11 3229 0.27 23 8530 0.31 21 6833 0.052 9.10 17534 0.28 44 15735 0.029 6.00 20736 0.017 5.00 29437 0.42 44 10538 ＞50 ＞500 ≈1041 21.9 111542 3.70 1062943 0.52 10.0 1945 8.10 45 646 ＞10 614＜6147 ＞10 1500 ＜15048 0.28 31 11049 0.14 9.80 7050 0.035 9.90 283
實施例12對小鼠中由膠原誘發(fā)的關節(jié)炎的抑制作用文獻中的模型在研究自身免疫關節(jié)炎的基礎機理和評估潛在抗關節(jié)炎藥的效力中，常用的模型是小鼠膠原誘發(fā)的關節(jié)炎(CIA)(van den Berg和Joosten，1999，發(fā)炎的體內模型(In Vivo Models ofInflammation)(Morgan DW和Marshall LA編輯)，第51-75頁，Birkhauser Verlag，Basel)。已經證明通過各種機理起作用的化合物在該模型中是有效的，這些化合物包括環(huán)加氧酶抑制劑、白介素4和10、白三烯合成抑制劑和抗-TNF抗體(Joosten等，J.Immunol.1594094-4102.1997；van den Berg和Joosten，1999，發(fā)炎的體內模型(In VivoModels of Inflammation)(Morgan DW和Marshall LA編輯)，第51-75頁，Birkhauser Verlag，Basel))。所用模型的描述對14只小鼠進行研究，以獲得統(tǒng)計學有效的結果。為了關節(jié)炎誘發(fā)DBA，通過用牛II型膠原(100μg)在弗氏完全佐劑中的乳液對每只小鼠(雄性，10-12周，約25g)的背部進行四次皮下注射來進行免疫。第21天，經腹膜內注射100μg II型膠原在PBS中的稀釋液來激發(fā)動物。該品系對由牛II型膠原誘發(fā)的CIA具有高度的敏感性。第二次免疫后，在1-2周內，多關節(jié)炎開始發(fā)展，在第38天，疾病發(fā)生率約為80％(Joosten等，J.Immunol.1594094-4102.1997)。從第21天開始記錄關節(jié)炎的發(fā)展。在第二次激發(fā)后，關節(jié)炎發(fā)生前(第23天)開始處理動物2.5周。在第23天開始用實施例的化合物9(每天兩次，每次10mg kg-1)經腹膜內給藥，并持續(xù)到第37天。結果在累積記錄(Kruskal-Wallis測試后的Dunn測試，得到p＜0.05)中觀察到減少。
結果列于

圖1現(xiàn)己完全對本發(fā)明作出了描述，本領域的普通技術人員應明白，可在各種條件、制劑和其它參數的廣泛和等價的范圍內實施本發(fā)明，而不影響本發(fā)明或其任何實施方案的范圍。本文所引用的各種專利和出版物通過引用結合到本文中來。
權利要求
1.式I或II的肼基化合物的消旋體或異構體，或其藥學上可接受的溶劑合物、水合物或鹽在制備用于抑制含銅的胺氧化酶的藥用制劑中的用途 其中R1為氫、(C1-C4)烷基、芳烷基、(C2-C5)烷?；?、芳?；螂s芳?；?，R2為氫或任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的芳烷基；R3-R6可相同或不同，為氫、任選取代的(C1-C4)烷基、任選取代的芳烷基、任選取代的苯基或任選取代的雜芳基；R1和R2可表示一個任選取代的雜環(huán)，R2和R3可表示一個任選取代的雜環(huán)，R3和R5可表示一個飽和的、任選取代的碳環(huán)；R7為氫、(C1-C4)烷基、(C2-C5)烷?；蚍纪榛籖8為(C1-C4)烷基或芳烷基；n為1、2或3；X為氯、溴、碘或R2-硫酸根，其中R2的意義如此處定義。
2.權利要求1的化合物在制備用于治療炎性疾病或癥狀、與碳水合物代謝有關的疾病，與脂肪細胞分化或功能或平滑肌細胞功能的畸變有關的疾病，或血管疾病的藥物中的用途。
3.權利要求1或2的用途，其中n為1。
4.權利要求1至3中任一項的用途，其中R1為氫。
5.權利要求1或2的用途，其中R2為任選被烷基、硝基、甲氧基或鹵素取代的芐基。
6.權利要求5的用途，其中R2為在對位被甲基、硝基、甲氧基或氯取代的芐基。
7.權利要求1或2的用途，其中R6為任選被烷基、硝基、甲氧基或鹵素取代的苯基，且R5為氫。
8.權利要求7的用途，其中所述苯基在對位被甲基、硝基、甲氧基或氯取代。
9.權利要求1或2的用途，其中n為1且R3和R5一起形成環(huán)己烷環(huán)。
10.權利要求1或2的用途，其中n為1且R2和R3與它們所連接的原子一起形成任選被烷基、硝基、甲氧基或鹵素取代的吡咯烷、哌啶、四氫異喹啉或吡唑烷基，R4為氫。
11.權利要求10的用途，其中R2和R3一起形成任選取代的選自1，2，3，4-四氫異喹啉、哌啶和6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫-異喹啉的雜環(huán)。
12.權利要求1或2的用途，其中n為1且R3和/或R4為(C1-C4)烷基，優(yōu)選甲基。
13.權利要求2的用途，其中所述炎性疾病或癥狀為結締組織炎性疾病或癥狀。
14.權利要求13的用途，其中所述結締組織炎性疾病或癥狀選自關節(jié)強硬性脊椎炎、Reiter氏綜合征、銀屑病關節(jié)炎、骨關節(jié)炎或變性關節(jié)病、類風濕性關節(jié)炎、Sjgren氏綜合征、BehCet氏綜合征、復發(fā)性多軟骨炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化病、嗜酸性細胞增多性肌膜炎、多發(fā)性肌炎和皮肌炎、風濕性多肌痛、脈管炎、顳動脈炎、結節(jié)性多動脈炎、Wegener氏肉芽腫病、混合結締組織病和幼年型類風濕關節(jié)炎。
15.權利要求2的用途，其中所述炎性疾病或癥狀為胃腸道炎性疾病或癥狀。
16.權利要求15的用途，其中所述胃腸道炎性疾病或癥狀選自Crohn氏病、潰瘍性結腸炎、腸易激惹綜合征(痙攣性結腸)、肝纖維變性癥、口腔粘膜炎(口炎)和復發(fā)性阿弗他口腔炎。
17.權利要求2的用途，其中所述炎性疾病或癥狀為中樞神經系統(tǒng)炎性疾病或癥狀。
18.權利要求17的用途，其中所述中樞神經系統(tǒng)炎性疾病或癥狀選自多發(fā)性硬化、早老性癡呆和與缺血休克有關的缺血-再灌注損傷。
19.權利要求2的用途，其中所述炎性疾病或癥狀為肺炎疾病或癥狀。
20.權利要求19的用途，其中所述肺炎疾病或癥狀選自哮喘、慢性阻塞性肺疾病和成人呼吸窘迫綜合征。
21.權利要求2的用途，其中所述炎性疾病或癥狀為皮膚炎性疾病或癥狀。
22.權利要求21的用途，其中所述皮膚炎性疾病或癥狀選自接觸性皮炎、特應性皮炎、銀屑病、玫瑰糠疹、扁平苔癬和毛發(fā)紅糠疹。
23.權利要求2的用途，其中所述與碳水合物代謝有關的疾病選自糖尿病、動脈粥樣硬化、血管視網膜病、視網膜病、腎病、腎病綜合征、多發(fā)性神經病、單神經病、植物神經病，足潰瘍、關節(jié)病和高風險感染。
24.權利要求2的用途，其中所述與脂肪細胞分化或功能或平滑肌細胞功能畸變有關的疾病選自動脈粥樣硬化和肥胖癥。
25.權利要求2的用途，其中所述血管疾病選自粉瘤性動脈硬化、非粉瘤性動脈硬化，局部缺血性心臟病、末梢ateria1阻塞、閉塞性血栓性血管炎(Buerger氏病)及Raynaud氏病和癥狀。
26.權利要求1或2的用途，其中所述式I的化合物或其藥學上可接受的鹽選自(1R，2S)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇馬來酸氫鹽(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽(1R*，2S*)-1-(2-羥基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，1-二甲基碘化(1R*，2S*)-2-(1-甲基肼基)-1，2-二苯基乙醇馬來酸氫鹽2-(1-甲基肼基)-1-苯基乙醇馬來酸氫鹽2-(1-甲基肼基)-2-苯基乙醇馬來酸氫鹽1-[2-甲氧基-2-(間甲氧基苯基)乙基]-1-甲基肼富馬酸氫鹽2-氨基-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-甲醇鹽酸鹽2-(1-甲基肼基)-1-(對甲氧基苯基)乙醇富馬酸氫鹽。
27.一種抑制含銅的胺氧化酶的方法，所述方法包括使所述胺氧化酶與抑制有效量的權利要求1至26中任一項所定義的式I或II的肼基化合物接觸。
28.權利要求27的方法，其中所述接觸在體外發(fā)生。
29.權利要求27的方法，其中所述接觸在體內發(fā)生。
30.一種治療炎性疾病或癥狀、與碳水合物代謝有關的疾病，與脂肪細胞分化或功能或平滑肌細胞功能畸變有關的疾病，或血管疾病的方法，該方法包括向需要此種治療或預防的動物給服有效量的權利要求1至26中任一項所定義的式I或II的肼基化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及作為含銅的胺氧化酶的抑制劑的肼基化合物，含銅的胺氧化酶一般稱作氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)，包括稱作血管粘附蛋白－1(VAP－1)的人SSAO。這些SSAO抑制劑具有作為治療各種癥狀和疾病，包括但不限于各種炎性癥狀和疾病(具體有慢性炎癥，例如慢性關節(jié)炎、腸炎和慢性皮膚病)、與碳水合物代謝有關的疾病和與脂肪細胞分化或功能和平滑肌細胞功能畸變有關的疾病以及血管疾病的藥物的醫(yī)療用途。所述化合物、其藥學上可接受的溶劑合物或其鹽的通式如(Ⅰ)和(Ⅱ)其中R
文檔編號C07D498/04GK1450998SQ01815102
公開日2003年10月22日 申請日期2001年7月4日 優(yōu)先權日2000年7月5日
發(fā)明者D·J·史密斯, M·亞爾卡寧, F·費勒普, L·拉扎, Z·斯扎康伊, G·貝爾納斯 申請人:拜奧泰治療公司