專利名稱：嘧啶化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，它們具有細(xì)胞周期抑制活性，有用的是它們的抗細(xì)胞增殖(例如抗癌)活性，因此它們可用于治療溫血動物，如人的治療方法。本發(fā)明還涉及制備所述嘧啶衍生物的方法，涉及包含它們的藥物組合物以及它們在制備藥物中的應(yīng)用或者在溫血動物，如人中生產(chǎn)抗細(xì)胞增殖作用的應(yīng)用。
被稱為細(xì)胞周期蛋白的一組細(xì)胞內(nèi)蛋白在細(xì)胞周期中起著重要作用。細(xì)胞周期蛋白的合成和降解受到嚴(yán)密控制，致使細(xì)胞周期期間它們的表達(dá)水平產(chǎn)生波動。細(xì)胞周期蛋白與細(xì)胞周期蛋白依賴性絲氨酸/蘇氨酸激酶(CDKs)結(jié)合，這種結(jié)合對于細(xì)胞內(nèi)的CDK(例如CDK1、CDK2、CDK4和/或CDK6)活性是必需的。雖然這些因子如何結(jié)合調(diào)節(jié)CDK活性的細(xì)節(jié)還不太清楚，但這兩種物質(zhì)間的平衡指示了細(xì)胞是否發(fā)展經(jīng)過細(xì)胞周期。
最近的致癌基因和腫瘤抑制基因研究的焦點已經(jīng)確認(rèn)，進(jìn)入細(xì)胞周期的規(guī)律是腫瘤中致有絲分裂的關(guān)鍵控制點。并且，CDKs可能位于許多致癌基因信號傳輸途徑的下游。通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白和/或消除內(nèi)源性抑制劑使CDK失調(diào)可能是致有絲分裂信號傳輸途徑和腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)鍵。
因此認(rèn)為，細(xì)胞周期激酶的抑制劑，尤其是CDK2、CDK4和/或CDK6(它們分別在S-階段、G1-S和G1-S階段起作用)的抑制劑應(yīng)具有選擇性細(xì)胞增殖，例如哺乳動物癌細(xì)胞生長的抑制劑的價值。
本發(fā)明基于下列發(fā)現(xiàn)某些2，4-嘧啶化合物出人意料地抑制細(xì)胞周期激酶，對CDK2、CDK4和CDK6表現(xiàn)出選擇性，因此具有抗細(xì)胞增殖特性。預(yù)期這些特性在與異常細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病治療中具有價值，這些疾病是例如癌癥(實體腫瘤和白血病)、纖維增生性和分化性疾病、牛皮癬、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、卡波濟(jì)氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自體免疫疾病、急性和慢性炎癥、骨骼疾病和與視網(wǎng)膜血管增殖有關(guān)的眼病。
本發(fā)明提供式(I)的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯， 其中Q1和Q2獨立地選自芳基或碳連接的雜芳基；Q1和Q2中的一個或兩個在環(huán)碳原子上被選自下列的取代基取代氨磺?；?sulphamoyl)、N-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)或式(Ia)或(Ia′)的取代基 其中Y是-NHS(O)2-、-S(O)2NH-或-S(O)2-；Z是RaO-、RbRcN-、RdS-、ReRfNNRg-、C3-8環(huán)烷基、苯基或雜環(huán)基；其中所述苯基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上任選被一個或多個選自Rh的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Ri的基團(tuán)取代；Ra、Rb、Re、Rd、Re、Rf和Rg獨立地選自氫、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、苯基、雜環(huán)基和C3-8環(huán)烷基；其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基和C3-8環(huán)烷基可任選地被一個或多個選自Rj的基團(tuán)取代；n是0或1；m是1、2或3，此外，當(dāng)Z是C3-8環(huán)烷基、苯基或雜環(huán)基時，m可以是0；
Q3是氮連接的雜環(huán)；其中所述雜環(huán)的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個Rk基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rm的基團(tuán)取代；G是-O-、-S-或-NR2-；R2選自氫、C1-6烷基、C3-6鏈烯基和C3-6炔基；其中所述C1-6烷基、C3-6鏈烯基和C3-6炔基可任選被一個或多個選自Rn的基團(tuán)取代；R1選自氫、鹵素、羥基、硝基、氨基、N-(C1-3烷基)氨基、N，N-二-(C1-3烷基)氨基、氰基、三氟甲基、三氯甲基、C1-3烷基[可任選被1或2個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、氰基、氨基、N-(C1-3烷基)氨基、N，N-二-(C1-3烷基)氨基、羥基和三氟甲基]、C3-5鏈烯基[可任選被三個鹵素取代基或者被一個三氟甲基取代基取代]、C3-5炔基、C1-3烷氧基、巰基、C1-3烷硫基、羧基和C1-3烷氧羰基；Q1的環(huán)碳原子上可任選被一至四個獨立選自下列的取代基取代鹵素、巰基、硝基、甲?；⒓柞０被?、羧基、氰基、氨基、脲基、氨基甲?；?、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基[其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基和C2-4炔基可任選被一個或多個選自Ro的基團(tuán)取代]、C1-4鏈烷酰基，C1-4烷氧羰基、雜環(huán)基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0或1[可任選被羥基取代]、N′-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)脲基、N′-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N-C1-4烷基氨基，N，N-二-(C1-4烷基)氨基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲?；虲1-4鏈烷酰氨基；或者除上述取代基以外，Q1還可獨立地被一至兩個獨立選自芳基、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基的取代基取代；其中所述芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Rp的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rq的基團(tuán)取代；或者除上述取代基以外，Q1還可被一個C1-4烷氧基或被一個羥基取代基取代；Q2的環(huán)碳原子上可任選被一至四個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、巰基、硝基、甲?；?、甲酰氨基、羧基、氰基、氨基、脲基、氨基甲?；?、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基[其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基可任選被一個或多個選自Rr的基團(tuán)取代]、C1-4鏈烷酰基、C1-4烷氧羰基、雜環(huán)基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0或1[可任選被羥基取代]、N′-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)脲基、N′-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N′N′-二-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、N-C1-4烷基氨基甲?；，N-二-(C1-4烷基)氨基甲酰基、C2-4鏈烯氧基、C2-4炔氧基和C1-4鏈烷酰氨基；或者除上述取代基以外，Q2還可任選被一至兩個獨立選自芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的取代基取代；其中所述芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Rs的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rt的基團(tuán)取代；Rj、Rn、Ro和Rr獨立地選自羥基、鹵素、氨基、氰基、甲?；?、甲酰氨基、羧基、硝基、巰基、氨基甲酰基、氨磺酰基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、C1-4鏈烷酰基、C1-4鏈烷酰氧基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲?；?、C1-4鏈烷酰基氨基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0-2、C1-4烷基磺?；被-(C1-4烷基)氨磺?；?、N-(C1-4烷基)2氨磺?；-(C1-4烷基)氨基甲?；?、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基、苯基、苯硫基、苯氧基、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基；其中所述苯基、苯硫基、苯氧基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Ru的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rv的基團(tuán)取代；Rh、Rk、Rp、Rs和Ru獨立地選自羥基、鹵素、氨基、氰基、甲?；?、甲酰氨基、羧基、硝基、巰基、氨基甲酰基、氨磺?；?、C1-4烷基[可任選被一個或多個選自下列的基團(tuán)取代鹵素、氰基、氨基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基或羥基]、C2-4鏈烯基[可任選被一個或多個選自鹵素的基團(tuán)取代]、C2-4炔基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、C1-4鏈烷?；?、C1-4鏈烷酰氧基、C1-4烷氧基[可任選被一個或多個選自鹵素的基團(tuán)取代]、C1-4烷氧羰基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲酰基、C1-4鏈烷酰基氨基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0-2、C1-4烷基磺酰基氨基、N-(C1-4烷基)氨磺?；?、N-(C1-4烷基)2氨磺酰基、苯基、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基；并且R1、Rq、Rt和Rv獨立地選自C1-4烷基、C1-4鏈烷?；1-4烷基磺?；1-4烷氧羰基、氨基甲酰基、N-(C1-4烷基)氨基甲?；?、N，N-(C1-4烷基)氨基甲?；⑵S基、芐氧羰基、苯甲?；捅交酋；?。
“芳基”是完全的或部分不飽和的、單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，它包含4-12個原子。“芳基”優(yōu)選是包含5或6個原子的單環(huán)或者包含9或10個原子的雙環(huán)。“芳基”更優(yōu)選是苯基、萘基、四氫萘基或二氫化茚基?！胺蓟碧貏e優(yōu)選是苯基、萘基或二氫化茚基?！胺蓟弊顑?yōu)選是苯基。
“碳連接的雜芳基”是完全不飽和的5或6元單環(huán)或者9或10元雙環(huán)，所述環(huán)中的至少一個原子選自氮、硫或氧。該環(huán)通過碳原子與-NH-(Q1的)或G(Q2的)連接?！疤歼B接的雜芳基”優(yōu)選是呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、咪唑基、吡唑基、呋咱基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吲哚基、喹啉基或苯并咪唑基。“碳連接的雜芳基”更優(yōu)選是吡啶基、噻唑基或吡唑基?！疤歼B接的雜芳基”特別優(yōu)選是吡啶基。
“雜環(huán)基”是飽和的、部分飽和的或不飽和的、包含4-12個原子的單環(huán)或雙環(huán)，所述4-12個原子中的至少一個原于選自氮、硫或氧，除非另有說明，該雜環(huán)基可以是碳或氮連接的，其中的-CH2-基團(tuán)可任選被-C(O)-置換，并且環(huán)硫原子可任選地被氧化形成S-氧化物。“雜環(huán)基”優(yōu)選是吡咯烷基、嗎啉代、哌啶基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、異噻唑基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基、噻二唑基、哌嗪基、異噁唑基、噻唑基、噻唑烷基、吡咯烷基、硫代嗎啉代、吡唑基、吡咯啉基、高哌嗪基、四氫吡喃基、咪唑基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、異噁唑基、4-吡啶酮、1-異喹啉酮、2-吡咯烷酮、4-噻唑烷酮、咪唑并[1，2-a]吡啶或3-氮雜-8-氧雜雙環(huán)[3，2，1]己烷?！半s環(huán)基”更優(yōu)選是吡咯烷基、嗎啉代、哌啶基、異噁唑基、噻二唑基、噻唑基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、呋喃基、哌嗪基、硫代嗎啉代、吡唑基、咪唑基、2-吡咯烷酮、咪唑并[1，2-a]吡啶或3-氮雜-8-氧雜雙環(huán)[3，2，1]己烷?！半s環(huán)基”尤其優(yōu)選是嗎啉代、異噁唑基、噻二唑基、噻唑基或吡啶基。
“氮連接的雜環(huán)基”是包含4-12個原子的飽和的、部分飽和的或完全飽和的單環(huán)或雙環(huán)，所述4-12個原子中的一個原子是氮原子(如上所示連接形成酰胺)，其它的原子可以都是碳原子或者它們是碳原子和1-3個選自氮、硫和氧的雜原子，其中的-CH2-基可任選地被-C(O)-置換并且環(huán)硫原子可任選地被氧化形成S-氧化物。應(yīng)該清楚，在形成這種氮連接中，氮原子是非季銨化的，即形成中性化合物?！暗B接的雜環(huán)”優(yōu)選是吡咯-1-基、吡咯啉-1-基、吡咯烷-1-基、咪唑-1-基、咪唑啉-1-基、咪唑烷-1-基、吡唑-1-基、吡唑啉-1-基、吡唑烷-1-基、三唑-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、嗎啉代、硫代嗎啉代、吲哚-1-基、二氫吲哚-1-基或苯并咪唑-1-基。“氮連接的雜環(huán)”更優(yōu)選是哌啶-1-基。
在本說明書中，術(shù)語“烷基”包括直鏈和支鏈的烷基，但涉及單個具體烷基時，如“丙基”則僅指直鏈基團(tuán)。類似的約定也適用于其它一般性術(shù)語。“鹵素”是氟、氯、溴和碘。
C2-4鏈烯基的實例是乙烯基和烯丙基；C2-6鏈烯基的實例是C3-5鏈烯基是乙烯基和烯丙基；C3-6鏈烯基的實例是C3-5炔基和烯丙基；C3-6炔基的實例是丙炔-2-基；C2-4炔基的實例是乙炔基和丙炔-2-基；C2-6炔基的實例是乙炔基和丙炔-2-基；C1-4鏈烷?；膶嵗且阴；捅；?；C1-4烷氧羰基的實例是C1-3烷氧羰基、甲氧羰基、乙氧糖基、丙氧羰基是叔丁氧羰基；C1-4亞烷基的實例是亞甲基、亞乙基和亞丙基；C1-4烷基的實例是C1-3烷基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基；C1-6烷基的實例是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和3-甲基丁基；C1-4烷氧基的實例是C1-3烷氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基和丁氧基；C2-4鏈烯氧基的實例是烯丙氧基；C2-4炔氧基的實例是丙炔氧基；C1-4烷基S(O)a(其中a是0或1)的實例是C1-3烷硫基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；捅鶃喕酋；?；C1-4烷基S(O)a(其中a是0-2)的實例是甲硫基、乙硫基、丙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；?、丙基亞磺酰基、甲磺?；?、乙基磺酰基和丙基磺?；籆1-4烷基磺?；膶嵗羌谆酋；鸵一酋；籒-C1-4烷基氨基甲?；膶嵗荖-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲?；蚇-丙基氨基甲?；?；N，N-二-(C1-4烷基)-氨基甲?；膶嵗荖，N-二-甲基氨基甲?；?、N-乙基-N-甲基氨基甲?；蚇，N-二乙基氨基甲?；?；N-C1-4烷基氨基的實例是N-(C1-3烷基)氨基、甲基氨基、乙基氨基和丙基氨基；N，N-二-(C1-4烷基)氨基的實例是N，N-二-(C1-3烷基)氨基、二甲基氨基、N-乙基-N-甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-丙基氨基和二丙基氨基；C1-4鏈烷?；被膶嵗且阴０被⒈０被投□０被?；C3-8環(huán)烷基的實例是環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基；C1-4鏈烷酰基的實例是乙?；捅；?；C1-4鏈烷酰氧基的實例是乙酰氧基和丙酰氧基；N′-(C1-4烷基)脲基的實例是N′-甲基脲基和N-乙基脲基；N′，N′-二-(C1-4烷基)脲基的實例是N′，N′-二甲基脲基、N′，N′-二異丙基脲基和N′-甲基-N′-丙基脲基；N′-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基的實例是N′-甲基-N-乙基脲基和N′-甲基-N-甲基脲基；N′，N′-二-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基的實例是N′，N′-二甲基-N-乙基脲基和N′-甲基-N′-丙基-N-丁基脲基；N-(C1-4烷基)氨磺?；膶嵗荖-甲基氨磺酰基和N-異丙基氨磺?；?；N，N-二-(C1-4烷基)氨磺酰基的實例是N-甲基-N-乙基氨磺?；蚇，N-二丙基氨磺?；?；并且C1-4烷基磺酰基氨基的實例是甲磺?；被⒁一酋；被捅酋；被?。
本發(fā)明的嘧啶衍生物的一種適宜的可藥用鹽是，例如具有足夠堿性的本發(fā)明嘧啶衍生物的酸加成鹽，例如與無機(jī)酸或有機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、檸檬酸或馬來酸形成的酸加成鹽。此外，具有充分酸性的本發(fā)明嘧啶衍生物的合適的可藥用鹽是堿金屬鹽，例如鈉鹽或鉀鹽，和堿土金屬鹽例如鈣鹽或鎂鹽，銨鹽或者與獲得生理可接受陽離子的有機(jī)堿形成的鹽，例如與甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥基乙基)胺形成的鹽。
本發(fā)明式(I)化合物可以以前藥的形式施用，所述前藥在人或動物體內(nèi)分解釋放出式(I)化合物。前藥的實例包括式(I)化合物的在體內(nèi)可水解的酯。
含有羧基或羥基的式(I)化合物的在體內(nèi)可水解的酯是例如在人或動物體內(nèi)水解以生成母酸或醇的可藥用酯。對于羧基，合適的可藥用酯包括C1-6烷氧基甲基酯例如甲氧基甲酯、C1-6烷酰氧基甲酯。例如新戊酰氧基甲基、鄰苯二甲酰氨基酯，C3-8環(huán)烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯例如1-環(huán)己基羰基氧基乙基；1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮基甲基酯例如5-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮基甲基；和C1-6烷氧基羰基氧基乙基酯例如1-甲氧基羰基氧基乙基，并且可在本發(fā)明化合物中的任何羧基上形成。
含有羥基的式(I)化合物的在體內(nèi)可水解的酯包括無機(jī)酯例如磷酸酯和α-酰氧基烷基醚以及相關(guān)化合物，它們在體內(nèi)通過酯水解釋放出母羥基。α-酰氧基烷基醚的實例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。對于羥基，體內(nèi)可水解的酯形成基團(tuán)的選擇包括鏈烷?；?、苯甲?；?、苯基乙?；腿〈谋郊柞；捅交阴；?、烷氧基羰基(以生成烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲?；?以生成氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙?；汪然阴；?。在苯甲?；系娜〈膶嵗◤沫h(huán)氮原子上經(jīng)由亞甲基連接在苯甲?；h(huán)的3-位或4-位上的嗎啉代和哌嗪子基。
某些式(I)化合物可能具有手性中心和/或幾何異構(gòu)中心(E-和Z-異構(gòu)體)，并且應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括具有CDK抑制活性的所有這樣的旋光非對映異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體。
本發(fā)明涉及具有CDK抑制活性的任何和所有互變異構(gòu)形式的式(I)化合物。
還應(yīng)當(dāng)理解，一些式(I)化合物可以以溶劑化以及非溶劑化形式例如水合物形式存在。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括具有CDK抑制活性的所有這樣的溶劑化形式。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯，其中R1、Q1、Q2、和G具有任何上文定義的含義，或者任何下列值。適當(dāng)?shù)脑挘魏味x、權(quán)利要求或上下文中的實施方案可使用這些值。
Q1和Q2優(yōu)選獨立地選自苯基和吡啶基。
Q1優(yōu)選為苯基。
Q2優(yōu)選為苯基或吡啶基。
優(yōu)選地，Q1是苯基，Q2選自苯基和吡啶基。
更優(yōu)選地Q1和Q2是苯基。
優(yōu)選地，Q1和Q2中的一個或者Q1和Q2都在環(huán)碳原子上被一個選自下列的取代基取代氨磺?；-(C1-4烷基)氨磺?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被羥基取代)、C1-4烷基磺酰基或式(Ia)的取代基，其中Y是-S(O)2NH-或-S(O)2-；Z是RaO-，RbRcN-或一個雜環(huán)基團(tuán)；其中雜環(huán)基團(tuán)是在環(huán)碳上由一個或多個選自Rh的基團(tuán)任選取代；Ra、Rb和Rc獨立地選自氫，C1-4烷基和苯基；N是0；M是2或另外當(dāng)Z是雜環(huán)基時m可以是0。
更優(yōu)選Q1和Q2之一或Q1和Q2都在環(huán)碳原子上被一個選自下列的取代基取代氨磺?；琋-(C1-4烷基)氨磺?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?任選被羥基取代)，C1-4烷基磺酰基或式(Ia)的取代基，其中Y是-S(O)2NH-或-S(O)2-；Z是RaO-、RbRcN-、噻唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡啶基或嗎啉代；其中噻唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡啶基或嗎啉代的環(huán)碳原子可任選被一個或多個甲基取代；Ra、Rb和Rc獨立地選自氫、C1-4烷基和苯基；n是0；m是2，或者此外，當(dāng)Z是噻唑基、異噁唑基、噻二唑基或吡啶基時，m可以是0。
特別優(yōu)選地，Q1和Q2中的一個或者Q1和Q2二者都在環(huán)碳原子上被一個選自下列的基團(tuán)取代氨磺?；?、甲磺?；?、N-(2-二乙基氨基乙基)氨磺?；?、2-(N-甲基-N-苯基氨基)乙基磺?；?、2-嗎啉代乙基磺酰基、N-(5-甲基噻二唑-2-基)氨磺?；，N-二-(2-羥基乙基)氨磺?；?、N-(噻唑-2-基)氨磺酰基、N-(3，4-二甲基異噁唑-5-基)氨磺?；-(吡啶-2-基)氨磺?；蚇-甲基氨磺?；?。
更特別優(yōu)選地，Q1和Q2中的一個或者Q1和Q2二者都在環(huán)碳原子上被一個選自氨磺?；蚇-甲基氨磺?；娜〈〈?。
優(yōu)選地，Q1被一個選自下列的基團(tuán)取代氨磺?；?、N-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或者式(Ia)或(Ia′)的取代基；并且另外Q2可任選地被氨磺?；〈?br> 更優(yōu)選地，Q1在相對于-NH-的對位或間位被下列基團(tuán)取代氨磺酰基、N-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或者式(Ia)或(Ia′)的取代基；并且另外，Q2可任選在G的對位被氨磺酰基取代。
尤其優(yōu)選地，Q1在相對于-NH-的對位或間位被下列基團(tuán)取代氨磺酰基、N-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或者式(Ia)或(Ia′)的取代基；并且另外，Q2可任選在G的對位被氨磺酰基取代。
在本發(fā)明一個方面，G優(yōu)選為-O-。
在本發(fā)明一個方面，G優(yōu)選為-S-。
在本發(fā)明另一個方面，G優(yōu)選為-NR2-。
在本發(fā)明另一個方面，G優(yōu)選為-O-或-NR2-。
在本發(fā)明一個方面，當(dāng)G是-NR2-時，R2優(yōu)選為氫。
在另一個本發(fā)明方面，當(dāng)G是-NR2-時，R2優(yōu)選不是氫。
G優(yōu)選是-O-或-NR2-，其中R2選自氫、C1-6烷基和C3-6鏈烯基；其中所述C1-6烷基和C3-6鏈烯基可任選被一個或多個鹵素、氰基或苯基取代。
G更優(yōu)選是-O-或-NR2-，其中R2選自氫、C1-6烷基和C3-6鏈烯基；其中所述C1-6烷基和C3-6鏈烯基可任選被一個或多個鹵素或苯基取代。
G尤其優(yōu)選是-O-、-NH-、-(4，4，4-三氟丁基)N-、-(3-溴-2-丙烯基)N-或-(3-苯基-2-丙烯基)N-。
G更尤其優(yōu)選是-O-或-NH-。
R1優(yōu)選是氫或鹵素。
R1更優(yōu)選是氫、氯或溴。
Q1可任選被一個C1-4烷氧基取代基取代和一個選自下列的基團(tuán)取代氨磺酰基、N-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或者式(Ia)或(Ia′)的取代基。
Q1更優(yōu)選被一個選自氨磺?；?、N-(C1-4烷基)氨磺酰基或N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；幕鶊F(tuán)取代。
Q2優(yōu)選被一個或兩個選自下列的基團(tuán)取代鹵素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基和雜環(huán)基。
Q2更優(yōu)選在環(huán)碳原子上任選地被一至二個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、氰基、甲基、甲氧基和嗎啉代。
Q2尤其優(yōu)選在環(huán)碳原子上任選地被一至二個獨立地選自氰基和甲氧基的取代基取代。
Q2優(yōu)選是苯基、2-嗎啉代苯基、2-氰基苯基、4-溴苯基、2-氟-5-甲基苯基、4-甲氧基苯基或4-氨磺酰基苯基。
Q2更優(yōu)選是苯基、2-氰基苯基、4-甲氧基苯基或4-氨磺?；交?br> 因此，本發(fā)明的一個優(yōu)選方面提供了如上所示的式(I)的嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯，其中Q1和Q2獨立地選自苯基和吡啶基；Q1和Q2中的一個或者Q1和Q2二者都在環(huán)碳原子上被一個選自下列的基團(tuán)取代氨磺酰基、N-(C1-4烷基)氨磺酰基、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被羥基取代)、C1-4烷基磺?；蛘呤?Ia)的取代基，其中Y是-S(O)2NH-或-S(O)2-；Z是RaO-、RbRcN-或雜環(huán)基；其中的雜環(huán)基可任選地在環(huán)碳原子上被一個或多個選自Rh的基團(tuán)取代；Ra、Rb和Rc獨立地選自氫、C1-4烷基和苯基；n是0；m是2，或者此外，當(dāng)Z是雜環(huán)基時，m可以是0；G是-O-或-NR2-，其中R2選自氫、C1-6烷基和C3-6鏈烯基；其中所述C1-6烷基和C3-6鏈烯基可任選被一個或多個鹵素或苯基取代；R1是氫或鹵素。
因此，本發(fā)明的一個更優(yōu)選方面提供了如上所示的式(I)的嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯，其中Q1是C1-4烷氧基任選取代的苯基，Q2是由一個或多個鹵素、氰、甲基、甲氧基和嗎啉代任選取代的苯基；Q1在-NH-的對位被選自以下基團(tuán)取代氨磺酰基、甲磺酰基、N-(2-二乙氨基乙基)氨磺?；?、2-(N-甲基-N-苯基氨基)乙基磺?；?、2-嗎啉代乙基磺?；?、N-5-甲基噻唑-2-基)氨磺酰基、N，N-二-(2-羥乙基)氨磺?；-(噻唑-2-基)氨磺?；-(3，4-二甲基異噁唑基-5-基)氨磺?；-(吡啶-2-基)氨磺?；蚇-甲基氨磺酰基；Q2是選自氨磺?；芜x取代；G是-O-，-NH-，-(4，4，4-三氟丁基)N-，-(3-溴-2-丙烯基)N-或-3-苯基-2-丙烯基)N-；R1是氫、氯或溴。
在一個本發(fā)明方面中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物是實施例1、20、21、29或31的化合物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
在另一個本發(fā)明方面，優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括任何實施例的化合物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
優(yōu)選的本發(fā)明方面是涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的那些。
式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯可通過適于制備在化學(xué)上相關(guān)的化合物的任何已知方法制得。當(dāng)用于制備式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯時，這樣的方法是作為本發(fā)明另外的特征提供的，并且可通過下述代表性實施例舉例說明，其中除非另有說明，否則R1、Q1、Q2和G具有上文關(guān)于式(I)嘧啶衍生物所定義的任何含義，并且除非在環(huán)Q1或Q2上畫出另一取代基，否則環(huán)可攜帶任何上述取代基(任選按照需要保護(hù)的)。當(dāng)在環(huán)Q1上畫出取代基時，這包括(除非另有說明)在環(huán)Q2上還攜帶取代基的可能性，或者環(huán)Q2上攜帶取代基以代替在環(huán)Q1上的取代基。必需原料可通過標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)化學(xué)方法獲得(參見例如Advanced Organic Chemistry(Wiley-Interscience)，Jerry March-還用于反應(yīng)條件和試劑的一般指導(dǎo))。在隨同的非限制性方法和實施例中描述了這樣的原料的制備?；蛘?，必需原料可通過在本領(lǐng)域技術(shù)人員知識范圍內(nèi)的類似于所舉例說明的方法的方法制得。
因此，作為本發(fā)明另一特征，本發(fā)明提供了下列方法，包括a)對于其中G是-NR2-的式(I)化合物，將式(II)嘧啶 其中L是如下所定義的可置換基團(tuán)，與式(III)化合物反應(yīng) 其中G是-NR2-；b)將式(IV)嘧啶 其中L是如下所定義的可置換基團(tuán)，與式(V)化合物反應(yīng) c)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia)，且Y是-S(O)2NH-的式(I)化合物，將式(VI)化合物 其中L是可置換基團(tuán)；與式(VII)胺反應(yīng)Z-(CH2)m-NH2(VII)d)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia)，且Y是-NHS(O)2-的式(I)化合物，將式(VIII)化合物 與式(IX)化合物反應(yīng)Z-(CH2)m-SO2L(IX)其中L是可置換基團(tuán)；e)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia′)的式(I)化合物，將式(VI)化合物與式(X)胺反應(yīng) 然后如果需要的話i)將式(I)化合物轉(zhuǎn)化成另一式(I)化合物；ii)除去任何保護(hù)基；iii)形成可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以理解，還可以制備這樣的式(I)化合物，其中一個Q1和Q2或者Q1和Q2都在一個環(huán)碳原子上被選自下列的基團(tuán)取代氨磺?；-(C1-4烷基)氨磺?；?任選被鹵素或羥基取代)、或N，N-二(C1-4烷基)氨磺?；?任選被鹵素或羥基取代)。
L是可置換基團(tuán)，L的合適的值是例如鹵素、磺酰氧基或硫基，例如氯、溴、甲磺酰氧基、甲苯-4-磺酰氧基、甲磺?；?、甲硫基和甲基亞磺?；?br> 上述反應(yīng)的具體反應(yīng)條件如下方法a)式(II)嘧啶與式(III)化合物可以在下列條件下反應(yīng)i)任選在合適的酸例如無機(jī)酸如鹽酸或硫酸存在下，或者在有機(jī)酸例如乙酸或甲酸存在下進(jìn)行反應(yīng)。該反應(yīng)優(yōu)選在合適的惰性溶劑或稀釋劑例如二氯甲烷(DCM)、乙腈、丁醇、環(huán)丁砜、四氫呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷-2-酮中于例如0℃-150℃溫度下、方便起見在接近回流溫度下進(jìn)行；或者ii)在標(biāo)準(zhǔn)Buchwald條件下(例如參見J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Org.Chem.，62，1568和6066)，例如在乙酸鈀存在下，在合適的溶劑例如芳族溶劑如甲苯、苯或二甲苯中，使用合適的堿例如無機(jī)堿如碳酸銫或有機(jī)堿例如叔丁氧基鉀，在合適的配體例如2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘存在下，在25-80℃溫度下進(jìn)行。
式(II)嘧啶可依據(jù)下述反應(yīng)方案制得 其中L是如上所定義的可置換基團(tuán)。
式(IIB)和(III)化合物可商購獲得，或者通過本領(lǐng)域已知方法制得。方法b)式(IV)嘧啶和式(V)苯胺可在下列條件下反應(yīng)i)在合適的溶劑例如酮如丙酮或醇例如乙醇或丁醇或芳烴例如甲苯或N-甲基吡咯烷存在下，任選在合適的酸例如上文定義的酸(或合適的路易斯酸)存在下，在0℃-回流溫度下、優(yōu)選回流溫度下進(jìn)行反應(yīng)；或者ii)在如上所述的標(biāo)準(zhǔn)Buchwald條件下進(jìn)行反應(yīng)。
式(IV)嘧啶可依據(jù)下述反應(yīng)方案制得 其中L是如上所定義的可置換基團(tuán)。
式(V)苯胺可商購獲得，或者可通過本領(lǐng)域已知方法制得。
式(IVA)嘧啶可商購獲得，或者可通過例如將其中L是-OH的式(IVA)化合物(即尿嘧啶)與POCl3反應(yīng)以生成其中L是-Cl的式(IVA)化合物來制得。方法c)可在堿例如叔胺如三乙胺存在下以及在催化劑例如二甲基氨基吡啶存在下將式(VI)化合物與式(VII)胺偶聯(lián)在一起。適用于該反應(yīng)的溶劑包括腈例如乙腈和酰胺例如二甲基甲酰胺。方便起見，該反應(yīng)在0-120℃溫度下進(jìn)行。
式(VI)化合物(例如當(dāng)L是氯時)可依據(jù)下列方案制得 其中Pg是合適的硫保護(hù)基例如如下所述的保護(hù)基。
式(VII)胺和式(VIa)胺可商購獲得，或者可通過本領(lǐng)域已知的方法制得。方法d)可在如上文方法c)中描述的條件下，將式(IX)化合物與式(VIII)胺偶聯(lián)在一起。
式(VIII)胺可依據(jù)下列方案制得 其中Pg是合適的氨基保護(hù)基例如如下所述的保護(hù)基。
式(IX)化合物可商購獲得，或者可通過本領(lǐng)域已知的方法制得。方法e)可在如上文方法c)中描述的條件下，將式(VI)化合物與式(X)胺偶聯(lián)在一起。
式(X)胺可商購獲得，或者可通過本領(lǐng)域已知的方法制得。
將一種式(I)化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)化合物的實例有i)當(dāng)G是-NR2-時，將作為氫的R2轉(zhuǎn)化成其它R2，例如 其中L是可置換基團(tuán)；ii)當(dāng)G是-NR2-時，將作為取代的側(cè)鏈的R2轉(zhuǎn)化成另一取代的側(cè)鏈，例如 其中Ms是甲磺?；襈u是引入如式(I)中所定義的R2的任選取代基的親核試劑(NB羥基部分無需在如上所示的末端碳上)；iii)將一個式(Ia)側(cè)鏈轉(zhuǎn)化成另一式(Ia)側(cè)鏈。
iv)使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將R1的一個值轉(zhuǎn)化成R1的另一個值，例如將作為羥基的R1轉(zhuǎn)化成C1-4烷氧基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在上述方法c)、d)和e)中描述的形成側(cè)鏈(Ia)或(Ia′)和在上述i)和ii)中形成側(cè)鏈R2還可以在中間體上進(jìn)行。
本發(fā)明優(yōu)選方法是方法b)。
應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明化合物中的各個環(huán)取代基可在進(jìn)行上述方法之前或者之后立即通過標(biāo)準(zhǔn)芳族取代反應(yīng)引入或者通過常規(guī)官能團(tuán)修飾來生成，并且這也包括在本發(fā)明方法中。這樣的反應(yīng)和修飾包括例如通過芳族取代反應(yīng)引入取代基、將取代基還原、將取代基烷基化和將取代基氧化。用于這些方法的試劑和反應(yīng)條件是化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的。芳族取代反應(yīng)的特別實例包括使用硝酸引入硝基，在FriedelCrafts條件下使用例如酰鹵和路易斯酸(例如氯化鋁)引入?；辉贔riedel Crafts條件下使用例如烷基鹵和路易斯酸(例如氯化鋁)引入烷基；和引入鹵素基團(tuán)。修飾的特別實例包括通過例如用鎳催化劑氫化或者在鹽酸存在下、加熱條件下用鐵處理來將硝基還原成氨基；將烷硫基氧化成烷基亞磺?；蛲榛酋；?。
還應(yīng)當(dāng)理解，在某些上述反應(yīng)中，可能必需/最好將化合物中的任何敏感基團(tuán)保護(hù)起來。需要或最好進(jìn)行保護(hù)的情況以及合適的保護(hù)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的?？梢罁?jù)標(biāo)準(zhǔn)慣例使用常規(guī)保護(hù)基(參見例如T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley and Sons，1991)。因此，在某些本文所述的反應(yīng)中，如果反應(yīng)物包含基團(tuán)例如氨基、羧基或羥基，可能最好將基團(tuán)保護(hù)起來。
對于氨基或烷基氨基，合適的保護(hù)基是例如?；?，例如鏈烷?；缫阴；?，烷氧基羰基例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基例如芐氧基羰基，或芳?；绫郊柞；?。上述保護(hù)基的脫保護(hù)條件必需根據(jù)所選的保護(hù)基而變。因此，例如，?；珂溚轷；蛲檠趸驶蚍减；赏ㄟ^例如用合適的堿如堿金屬氫氧化物例如氫氧化鋰或氫氧化鈉水解來除去?；蛘?，酰基例如叔丁氧基羰基可通過例如用合適的酸如鹽酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸處理來除去，芳基甲氧基羰基例如芐氧基羰基可通過例如用催化劑例如披鈀碳?xì)浠蛘咄ㄟ^用路易斯酸例如三(三氟乙酸)硼處理來除去。對于伯氨基，合適的保護(hù)基是例如鄰苯二甲?；?，其通過用烷基胺例如二甲基氨基丙基胺或肼處理來除去。
對于羥基，合適的保護(hù)基是例如?；珂溚轷；缫阴；?，芳?；绫郊柞；?，或芳基甲基例如芐基。上述保護(hù)基的脫保護(hù)條件必需根據(jù)所選的保護(hù)基而變。因此，例如，酰基如鏈烷?；蛲檠趸驶蚍减；赏ㄟ^例如用合適的堿如堿金屬氫氧化物例如氫氧化鋰或氫氧化鈉水解來除去。或者，芳基甲基例如芐基可通過例如用催化劑，如披鈀碳?xì)浠瘉沓ァ?br> 對于巰基，合適的保護(hù)基是例如?；?，如鏈烷?；?，如乙酰基、芳酰基，如苯甲?；?，或者芳基甲基，例如芐基。上述保護(hù)基的脫保護(hù)條件將根據(jù)保護(hù)基的選擇發(fā)生必要的變化。因此，例如?；?，如鏈烷?；蚍减；捎眠m宜的堿，如堿金屬氫氧化物，如氫氧化鋰或氫氧化鈉通過水解除去。或者，乙?；虮郊柞；捎免c和氨通過分解除去。
對于羧基，合適的保護(hù)基是例如酯化基團(tuán)，例如可通過例如用堿如氫氧化鈉水解來除去的甲基或乙基，或例如可通過例如用酸如有機(jī)酸例如三氟乙酸處理來除去的叔丁基，或例如可通過例如用催化劑如披鈀碳?xì)浠瘉沓サ钠S基。
可在合成中的任何適宜步驟使用化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)技術(shù)來除去保護(hù)基。
許多本文限定的中間體是新的，例如式II和IV中間體，它們作為本發(fā)明另外的特征提供。測定如上所述，在本發(fā)明中定義的嘧啶衍生物具有抗細(xì)胞增殖活性例如抗癌活性，據(jù)信這是由于它們的CDK抑制活性所致。這些性質(zhì)可通過例如使用下列方法來評價CDK4抑制測定使用下列縮寫HEPES是N-(2-羥基乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)DTT是二硫蘇糖醇PMSF是苯基甲基磺酰氟使用測定摻入到測試底物(GST-成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤)內(nèi)的[γ-33-P]-三磷酸腺苷的閃爍近似測定法(SPA-得自Amersham)，在96孔格式板中在體外激酶測定中測試化合物。將測試化合物(在DMSO和水中稀釋至合適的濃度)置于每個孔中，將p16作為抑制劑對照或DMSO作為正對照置于對照孔中。
將在25μl培養(yǎng)緩沖液中稀釋的大約0.5μlCDK4/細(xì)胞周期蛋白D1部分純化酶(其量取決于酶活性)加到每個孔中，然后加入20μlGST-Rb/ATP/ATP33混合物(含有0.5μgGST-Rb和0.2μM ATP以及0.14μCi[γ-33-P]-三磷酸腺苷)，并將所得混合物輕微振搖，然后在室溫培養(yǎng)60分鐘。
然后向每個孔中加入含有(0.8mg/孔蛋白A-PVT SPA珠子(Amersham))、20pM/孔抗-谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶、兔子IgG(得自分子探針)、61mM EDTA和含0.05％疊氮化鈉的50mM HEPES pH7.5的150μL終止溶液。
用Topseal-S板密封器將平板密封，放置2個小時，然后以2500rpm、1124×g旋轉(zhuǎn)5分鐘。將平板在Topcount上讀取，每個孔讀取30秒。
用于稀釋酶和底物混合物的培養(yǎng)緩沖液含有50mM HEPES pH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100pM釩酸鈉、100μM NaF、10mM甘油磷酸鈉BSA(1mg/ml終體積)。
可使用另一已知的CDK4抑制劑代替p16作為對照。測試底物在該測定中，僅使用一部分與GST尾融合的成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤(Science 1987 Mar 13；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)。進(jìn)行成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤氨基酸379-928(得自成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤質(zhì)粒ATCCpLRbRNL)的PCR，將該序列克隆到用于擴(kuò)增氨基酸792-928的pGEX 2T融合載體內(nèi)(Smith D.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；該載體含有用于誘導(dǎo)表達(dá)的tac啟動子、用于在任何大腸桿菌宿主中使用的內(nèi)lac Iq基因、和用于凝血酶分裂的編碼區(qū)域-得自PharmaciaBiotech)。再將該序列克隆到pGEX 2T內(nèi)。
使用標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)表達(dá)技術(shù)將由此獲得的成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤792-928序列在大腸桿菌(BL21(DE3)pLysS細(xì)胞)中表達(dá)，并如下所述純化。
將大腸桿菌粘重懸在10ml/g NTN緩沖液(50mM Tris pH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1ug/ml亮抑蛋白酶肽，1ug/ml抑肽酶和1ug/ml胃蛋白酶抑制劑)中，并超聲2×45秒/100ml勻化物。離心后，將上清液負(fù)載到10ml谷胱甘肽瓊脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)上，并用NETN緩沖液洗滌。用激酶緩沖液(50mM HEPES pH7.5，10mM MgCl2，1mM DTT，1mM PMSF，1ug/ml亮抑蛋白酶肽，1ug/ml抑肽酶和1ug/ml胃蛋白酶抑制劑)洗滌，用50mM還原谷胱甘肽在激酶緩沖液中的溶液將蛋白稀釋。將含有GST-Rb(792-927)的級分匯集，并用激酶緩沖液透析過夜。通過使用8-16％Tris-甘氨酸凝膠(Novex，San Diego，USA)的十二烷基硫酸鈉(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠)分析終產(chǎn)物。CDK4和細(xì)胞周期蛋白D1按照下述方法將CDK4和細(xì)胞周期蛋白D1從RNA中克隆到MCF-7細(xì)胞系(得自ATCC號HTB22，乳腺癌系)內(nèi)。該RNA是由MCF-7細(xì)胞，然后用低聚dT引物逆轉(zhuǎn)錄制得的。使用PCR來擴(kuò)增每個基因的完全編碼序列[CDK4氨基酸1-303；Ref.Cell 1992 Oct 16；71(2)323-334；Matsushime H.，Ewen M.E.，Stron D.K.，Kato J.Y.，Hanks S.K.，Roussel M.F.，Sherr C.J.和細(xì)胞周期蛋白D1氨基酸1-296；Ref.Cold Spring Harb.Symp.Quant.Biol.，1991；5693-97；ArnoldA.，Motokura T.，Bloom T.，Kronenburg，Ruderman J.，JuppnerH.，Kim H.G.]。
定序后，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將PCR產(chǎn)物克隆到昆蟲表達(dá)載體pVL1393(得自Invitrogen1995編入目錄號V1392-20)。然后將PCR產(chǎn)物雙重表達(dá)[使用標(biāo)準(zhǔn)病毒Baculogold共感染技術(shù)]到昆蟲SF21細(xì)胞系統(tǒng)(Spodoptera Frugiperda細(xì)胞，得自Fall Army Worm的卵巢細(xì)胞—可商購獲得)內(nèi)。
下列實施例提供了在SF21細(xì)胞中(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic)(對于每個細(xì)胞周期蛋白D1 & CDK4的病毒，具有雙重感染MOI3)制備細(xì)胞周期蛋白D1/CDK4的詳細(xì)描述。制備細(xì)胞周期蛋白D1/CDK4的實施例使用在滾式瓶培養(yǎng)物中生長至2.33×106個細(xì)胞/ml的SF21細(xì)胞以0.2×10E6個細(xì)胞/ml接種到滾式瓶中。將滾式瓶在滾柱裝置上于28℃培養(yǎng)。
3天(72小時)后，得自2個瓶的平均值為1.86×10E6個細(xì)胞/ml(99％存活)。然后用雙重病毒以MOI3/每個病毒感染培養(yǎng)物。
感染10×500ml，JS303細(xì)胞周期蛋白D1病毒效價-9×10E7pfu/ml。JS304 CDK4病毒效價-1×10E8 pfu/ml。
細(xì)胞周期蛋白D1(對于每個500ml瓶)1.86×10E6×500×3/0.9×108＝31ml病毒。
CDK4(對于每個500ml瓶)1.86×10E6×500×3/1×108＝31ml病毒。
在加入培養(yǎng)物之前，將病毒混合在一起，并將培養(yǎng)物再置于滾柱裝置上于28℃培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)染3天(72小時)后，收獲5升培養(yǎng)物。收獲物中的總細(xì)胞數(shù)目為1.58×10E6個細(xì)胞/ml(99％存活)。將細(xì)胞以250ml批量在Heraeus Omnifuge 2.0RS中以2500rpm于4℃旋轉(zhuǎn)30分鐘。棄去上清液，將20個沉降團(tuán)(~4×10E8個細(xì)胞/沉降團(tuán))在液氮中迅速冷凍，并在CCRF冷室中于-80℃貯存。然后通過重懸在裂解緩沖液(50mMHEPES pH7.5，10mM氯化鎂，1mM DTT，10mM甘油磷酸鹽，0.1mM PMSF，0.1mM氟化鈉，0.1mM原釩酸鈉，5ug/ml抑肽酶，5ug/ml亮抑蛋白酶肽和20％w/v蔗糖)中、并加入冰冷的去離子水將SF21細(xì)胞進(jìn)行低滲裂解。離心后，將上清液負(fù)載到Pores HQ/M1.4/100陰離子交換柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。將CDK4和細(xì)胞周期蛋白D1用375mM NaCl在裂解緩沖液中的溶液共洗脫下來，通過蛋白質(zhì)印跡法，使用合適的抗-CDK4和抗-細(xì)胞周期蛋白D1抗體(得自Santa CruzBiotechnology，California，US)檢查其存在。p16對照(Nature 366.704-7071993Serrano M.Hannon GJ.BeachD)將p16(CDK4/細(xì)胞周期蛋白D1的天然抑制劑)從HeLa cDNA(得自ATCC CCL2的Hela細(xì)胞，得自子宮頸的人上皮癌；Cancer Res.12264，1952)中擴(kuò)增，克隆到具有5′His尾的pTB375 NBSE中，并用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)pLysS細(xì)胞(得自Promega；Ref.Studier F.W.和Moffat B.A.，J.Mol.Biol.，189，113，1986)中。將1升培養(yǎng)物生長至適當(dāng)OD，然后用IPTG誘導(dǎo)以過夜表達(dá)p16。然后通過在50mM磷酸鈉，0.5M氯化鈉，PMSF，0.5μg/ml亮抑蛋白酶肽和0.5μg/ml抑肽酶中超聲來裂解細(xì)胞。將該混合物旋轉(zhuǎn)，把上清液加到鎳蝥合物珠子中，并混合1.5小時。將珠子在磷酸鈉，NaCl pH6.0中洗滌，并將p16產(chǎn)物洗脫到具有200mM咪唑的磷酸鈉，NaCl pH7.4。
按照下列方法用pTB375 NBPE構(gòu)建pTB NBSE-pTB375用于生成pTB375的背底載體是pZEN0042(參見UK專利2253852)，并在pAT153衍生背底中含有得自質(zhì)粒RP4的tetA/tetR誘導(dǎo)四環(huán)素抗性序列和得自質(zhì)粒pKS492的cer穩(wěn)定性序列。通過加入由T7基因10啟動子、多克隆位點和T7基因10終止序列構(gòu)成的表達(dá)試劑盒來生成pTB375。此外，設(shè)計用來減少從背底載體的轉(zhuǎn)錄讀取的終止子序列包括在表達(dá)試劑盒的上游。pTB375 NBPE除去存在于pTB375中的獨特的EcoRI限制位點。將含有關(guān)于限制酶NdeI、BamHI、PstI和EcoRI的識別序列的新的多克隆位點引入到pTB375內(nèi)，其中是引入到位于破壞存在于pTB375中的初始BamHI位點的NdeI和BamHI位點之間。pTB375 NBSE
將含有關(guān)于限制酶NdeI、BamHI、SmaI和EcoRI的識別序列的新的多克隆位點引入到pTB375 NBPE內(nèi)NdeI和EcoRI位點之間。含有這些限制位點的低聚核苷酸在與存在于NdeI位點內(nèi)的起始密碼子(ATG)相同的閱讀框架中還含有6個位于NdeI和BamHI之間的6個組氨酸密碼子。
按照類似于上述的方法，可構(gòu)建設(shè)計用來評價CDK2和CDK6抑制的測定。CDK2(EMBL登記號X62071)可以與細(xì)胞周期蛋白A或細(xì)胞周期蛋白E(見EMBL登記號M73812)一起使用，關(guān)于這些測定的進(jìn)一步詳細(xì)描述公開于PCT國際出版物WO99/21845，該文獻(xiàn)的有關(guān)生物化學(xué)&生物學(xué)評價章節(jié)引入本發(fā)明以作參考。
如果使用具有細(xì)胞周期蛋白E部分的CDK2，可如下所述進(jìn)行共純化將Sf21細(xì)胞重懸在裂解緩沖液(50mM Tris pH8.2，10mM MgCl2，1mM DTT，10mM甘油磷酸鹽，0.1mM原釩酸鈉，0.1mM NaF，1mM PMSF，1ug/ml亮抑蛋白酶肽和1ug/ml抑肽酶)中，并在10ml Dounce均化器中均化2分鐘。離心后，將上清液負(fù)載到Poros HQ/M 1.4/100陰離子交換柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。在0-1M NaCl梯度(在沒有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液中)將CDK2和細(xì)胞周期蛋白E共洗脫下來，洗脫20個柱體積。通過使用抗-CDK2和抗-細(xì)胞周期蛋白E抗體的蛋白質(zhì)印跡法(Santa Cruz Biotechnology，California，US)來檢查共洗脫。
雖然式(I)化合物的藥理性質(zhì)隨著結(jié)構(gòu)的改變而變化，但是在上述測定中，可在250μM-1nM的IC50濃度或劑量證實式(I)化合物所具有的一般活性。
當(dāng)在上述體外測定中測試時，所測定的實施例23的CDK2抑制活性為IC50＝0.347μM。
本發(fā)明化合物的體內(nèi)活性可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來評價，例如通過測定抑制細(xì)胞生長和評價細(xì)胞毒性來評價。
細(xì)胞生長抑制可通過用Sulforhodamine B(SRB)將細(xì)胞染色來測定，SRB是一種熒光染料，其將蛋白染色，并因此給出孔中蛋白(即細(xì)胞)的估計量(參見Boyd，M.R.(1989)NCI臨床前抗腫瘤藥物開發(fā)篩選的狀況.Prin.Prac Oncol 101-12)。因此，提供關(guān)于測定細(xì)胞生長抑制的下列詳細(xì)描述-
在96孔平板中，將細(xì)胞以100μl的體積鋪在適當(dāng)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)基是用于MCF-7、SK-UT-1B和SK-UT-1的Dulbecco改性的Eagle培養(yǎng)基。將細(xì)胞過夜附著，然后將抑制劑化合物以最大濃度為1％DMSO(v/v)的不同濃度加入。測定對照平板以得到用藥前的細(xì)胞的值。將細(xì)胞在37℃(5％CO2)培養(yǎng)3天。
在3天結(jié)束時，將TCA以16％(v/v)的終濃度加到平板中。然后將平板在4℃培養(yǎng)1小時，取出上清液，用自來水洗滌平板。干燥后，加入100μl SRB染料(0.4％SRB在1％乙酸中的溶液)，在37℃培養(yǎng)30分鐘。取出過量SRB，用1％乙酸洗滌平板。將與蛋白結(jié)合的SRB溶解在10mM Tris pH7.5中，并在室溫振搖30分鐘。在540nm讀取OD，從抑制劑濃度對吸收度的半對數(shù)曲線確定出引起50％抑制的抑制劑濃度。將光密度降至低于當(dāng)在開始實驗時鋪細(xì)胞所獲得的光密度的化合物的濃度給出毒性的值。
當(dāng)在SRB測定中測試時，本發(fā)明化合物的一般IC50值為1mM-1nM。
依據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了包含如上所定義的式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯和可藥用稀釋劑或載體的藥物組合物。
本發(fā)明組合物可呈口服給藥的形式，例如呈片劑或膠囊形式，適于非胃腸道注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)注射或輸注)的形式，例如呈無菌溶液、懸浮液或乳液的形式，適于局部給藥的形式，例如呈膏劑或霜劑的形式，或適于直腸給藥的形式，例如呈栓劑形式。
上述組合物一般可用常用賦形劑以常規(guī)方式制得。
本發(fā)明嘧啶化合物通常以5-5000mg/平方米身體面積，即約0.1-100mg/kg的單位劑量施用給溫血動物，并且這通常提供了治療有效劑量。單位劑型例如片劑或膠囊通常含有例如1-250mg活性組分。優(yōu)選使用1-50mg/kg的日劑量。然而，日劑量必須根據(jù)所治療的對象、特定的給藥途徑、和所治療的疾病的嚴(yán)重程度而改變。因此，最佳劑量可由治療任何特定患者的醫(yī)師決定。
依據(jù)本發(fā)明另一方面，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療溫血動物例如人的方法中的如上所定義的式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明定義的嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯是有效的細(xì)胞周期抑制劑(抗細(xì)胞增殖劑)，據(jù)信該特征(不想受縛于理論)是由于其CDK抑制性質(zhì)所致。因此，預(yù)計本發(fā)明化合物可用于治療僅由或部分由CDK酶介導(dǎo)的疾病或病癥，即本發(fā)明化合物可用于在需此治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK抑制作用。因此，本發(fā)明化合物提供了通過抑制CDK酶來治療惡性細(xì)胞增殖的方法，即化合物可用于產(chǎn)生僅由或部分由CDK抑制介導(dǎo)的抗增殖作用。預(yù)計本發(fā)明的這類嘧啶衍生物具有寬范的抗癌性質(zhì)，這是因為CDK涉及多種常見的人癌癥，例如白血病和乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和卵巢癌。因此，預(yù)計本發(fā)明嘧啶衍生物具有抗這些癌的抗癌活性。此外還預(yù)計本發(fā)明嘧啶衍生物具有抗一系列白血病、淋巴惡性腫瘤和實體瘤例如組織中例如肝臟、腎、前列腺和胰腺中的癌和肉瘤。特別是，預(yù)計本發(fā)明化合物能有利地減慢原發(fā)性或復(fù)發(fā)性實體瘤例如結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺和皮膚腫瘤的生長。更特別地，依據(jù)本發(fā)明化合物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯能抑制與CDK有關(guān)的這些原發(fā)性和復(fù)發(fā)性實體瘤的生長，尤其是其生長和擴(kuò)散顯著依賴于CDK的腫瘤，包括例如一些結(jié)腸、乳腺、肺、外陰和皮膚的腫瘤。
還預(yù)計，本發(fā)明嘧啶衍生物具有抗廣泛的其它病癥中的其它細(xì)胞增殖疾病的活性，這些其它病癥包括白血病、纖維增殖和分化性病癥、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟(jì)氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和具有視網(wǎng)膜血管增殖的眼疾病。
因此，依據(jù)本發(fā)明該方面，本發(fā)明提供了用作藥物的如上所定義的式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯；和如上所定義的式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯在制備用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗癌、細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)作用的藥物中的應(yīng)用。特別是，通過抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2，在S或G1-S期產(chǎn)生細(xì)胞周期抑制作用。
依據(jù)本發(fā)明另一方面，本發(fā)明提供了在需此治療的溫血動物例如人中產(chǎn)生抗癌、細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)作用的方法，包括給所述動物施用有效量的如上所定義的嘧啶衍生物。特別是，通過抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2，在S或G1-S期產(chǎn)生的抑制作用。
預(yù)防或治療特定細(xì)胞增殖疾病所需的上述劑量必須根據(jù)所治療的對象、給藥途徑和所治療的疾病的嚴(yán)重程度而改變。可采用例如1-100mg/kg、優(yōu)選1-50mg/kg的單位劑量。
上文所定義的CDK抑制活性可作為單獨的治療應(yīng)用，或者除了本發(fā)明化合物以外，還采用一種或多種其它物質(zhì)和/或治療。這樣的聯(lián)合治療可通過同時、依次或單獨施用本發(fā)明各組分來實現(xiàn)。在腫瘤醫(yī)療領(lǐng)域，聯(lián)合使用不同形式的治療來治療各癌癥患者是標(biāo)準(zhǔn)慣例。在腫瘤醫(yī)療領(lǐng)域，除了上文定義的細(xì)胞周期抑制治療以外，這樣的聯(lián)合治療的其它組分可以是手術(shù)、放療或化療。這樣的化療可使用下列3類主要的治療劑(i)通過與上文限定的機(jī)制相同或不同的機(jī)制起作用的其它細(xì)胞周期抑制劑；(ii)細(xì)胞抑制劑例如抗雌激素(例如他莫昔芬、托米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如anastrozole、來曲唑、伏氯唑、依西美)、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、乙酸環(huán)丙孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如乙酸性瑞林、luprolide)、睪酮5α-二氫還原酶抑制劑(例如芬甾酮)、抗侵襲劑(例如金屬蛋白酶抑制劑如marimastat和尿激酶纖溶酶原激活劑受體功能抑制劑)以及生長因子功能抑制劑(這樣的生長因子包括例如血小板衍生生長因子和肝細(xì)胞生長因子，這樣的抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和(iii)腫瘤治療中使用的抗增殖/抗腫瘤藥物及其組合例如抗代謝物(例如抗葉酸劑如甲氨蝶呤、氟代嘧啶例如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷)；抗腫瘤抗體(例如蒽環(huán)例如阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素和去甲氧柔紅霉素，絲裂霉素-C、更生霉素、光輝霉素)；鉑衍生物(例如順鉑、卡鉑)；烷化劑(例如氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝脲、噻替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿例如長春新堿和taxoids例如紫杉醇、taxotere)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替堪)。依據(jù)本發(fā)明的該方面，本發(fā)明提供了包含如上所定義的式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯和如上所定義的用于癌癥聯(lián)合治療的其它抗腫瘤物質(zhì)的藥物。還可以施用抗吐劑，例如當(dāng)施用如上所述的聯(lián)合治療時施用抗吐劑。
除了治療應(yīng)用，式(I)化合物及其可藥用鹽還可用作開發(fā)和標(biāo)準(zhǔn)化體外和體內(nèi)測試系統(tǒng)的藥理工具，這樣的測試系統(tǒng)是為了在實驗動物例如貓、狗、兔子、猴子、大鼠和小鼠中評價細(xì)胞周期活性抑制劑的作用，這是開發(fā)新的治療劑的一部分。
在上述其它藥物組合物、加工、方法、應(yīng)用以及藥物制備特征中，也可以使用本文所述的本發(fā)明化合物的其它且優(yōu)選的實施方案。
用下列非限制性實施例舉例說明本發(fā)明，其中在適當(dāng)時可使用化學(xué)技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和類似于這些實施例中描述的技術(shù)，并且除非另有說明，否則(i)蒸發(fā)是通過在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行的，并且后處理操作是在除去殘余固體例如干燥劑后通過過濾進(jìn)行的；(ii)除非另有說明，否則操作是在室溫、一般是18-25℃在空氣中進(jìn)行的，或者本領(lǐng)域技術(shù)人員可在惰性氣氛下例如氬氣氛下進(jìn)行的；(iii)柱色譜(采用快速方法)和中壓液相色譜(MPLC)是在得自E.Merck，Darmstadt，Germany的Merck Kieselgel二氧化硅(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相二氧化硅上進(jìn)行的；(iv)給出產(chǎn)率僅是為了舉例說明，并且不一定是可達(dá)到的最大產(chǎn)率；(v)給出的熔點是用Mettler SP62自動熔點儀、油浴裝置或Koffler電熱板裝置測定的。
(vi)式(I)終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)一般是通過核(一般是質(zhì)子)磁共振(NMR)和質(zhì)譜技術(shù)證實的；質(zhì)子磁共振化學(xué)位移值是在氘化DMSO-d6(除非另有說明)中以δ標(biāo)度(距離四甲基甲硅烷的ppm低場)使用VarianGemini 2000或在250MHz場強(qiáng)度操作的Bruker AM250光譜計在300MHz場強(qiáng)度測定的(除非另有說明)；峰多重性如下所示s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；m，多重峰；br，寬峰；質(zhì)譜(MS)是通過電噴霧在VG平臺上進(jìn)行的；
(vii)通常不全面描繪中間體的特征，通過薄層色譜(TLC)、高壓液相色譜(HPLC)、紅外(IR)、MS或NMR分析純度。
(viii)本文中使用下列縮寫DMF N，N-二甲基甲酰胺；NMP N-甲基吡咯烷-2-酮；DMSO 二甲亞砜；Rt 保留時間(ix)系統(tǒng)A柱 4.6mm×10cm Hichrom RPB 5A溶劑 A＝95％水，5％乙腈+0.1％甲酸B＝95％乙腈，5％水+0.1％甲酸洗脫時間 10分鐘，其中9.5分鐘為5-95％B的梯度洗脫波長 254nm，帶寬10nm質(zhì)量檢測器 平臺LC實施例12-(4-氨磺?；桨被?-4-(2-氰基苯氨基)嘧啶將2-氯-4-(2-氰基苯氨基)嘧啶(250mg，1.09mmol)溶于正丁醇(3ml)并加入磺胺(150mg，0.87mmol)。所得懸浮液用甲醇處理直至所有的固體溶解。將反應(yīng)混合物在95℃加熱12小時后，使之冷卻到室溫。然后使用氨的甲醇溶液將反應(yīng)混合物堿化至pH9-10并從二氧化硅上蒸發(fā)(5ml)。殘余物經(jīng)柱色譜，用0-15％2.0M氨的甲醇溶液的二氯甲烷溶液洗脫純化，得到固體產(chǎn)物(256mg)。 實施例2-11采用類似于實施例1中所述的方法，使用適宜的4-磺?；桨泛?-氯-4-苯氨基嘧啶中間體制備下列化合物。
1產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化兩次，然后用甲醇重結(jié)晶。
2在500MHz NMR儀上測定。實施例132-(4-氨磺?；桨被?-4-[2-氟-5-甲基-N-(4，4，4-三氟丁基)苯氨基]嘧啶2-氯-4-(N-4，4，4-三氟丁基-2-氟-5-甲基苯氨基)嘧啶(215mg，0.62mmol)溶于正丁醇(2ml)并加入磺胺(85mg，0.50mmol)。所得懸浮液用甲醇處理直至所有的固體溶解。將反應(yīng)混合物在95℃加熱12小時后，使之冷卻到室溫。過濾收集沉淀的固體，用少量甲醇洗滌并真空干燥，得到白色固體(132mg)。 實施例14-22通過類似于實施例13中所述的方法，使用適宜的4-磺?；桨泛?-氯-4-苯氨基嘧啶中間體制備下列化合物。
1在Micromass OpenLynx系統(tǒng)上用系統(tǒng)A通過LCMS進(jìn)行色譜和MS。實施例232-(4-氨磺?；桨被?-4-(2-氰基苯氨基)-5-氯嘧啶2，5-二氯-4-(2-氰基苯氨基)嘧啶(265mg，1.00mmol)溶于正丁醇(1ml)并加入磺胺(207mg，1.20mmol)。所得懸浮液加熱回流2小時后，使之冷卻到室溫。然后使用氨的甲醇溶液將反應(yīng)混合物堿化至并從二氧化硅上蒸發(fā)。殘余物經(jīng)柱色譜，用0-15％2.0M氨的甲醇溶液的二氯甲烷溶液洗脫純化，得到固體產(chǎn)物(42.6mg)。
NMR(303.1K)7.09(2H，s)，7.41-7.59(5H，m)，7.65(1H，d)，7.74-7.86(1H，m)，7.94(1H，d)，8.25(1H，s)，9.46(1H，s)，9.78(1H，s)；MS(M+H)+401，403.實施例24-28采用類似于實施例23中所述的方法，使用適宜的4-磺?；桨分苽湎铝谢衔铩?實施例292，4-二-(4-氨磺酰基苯氨基)-5-溴嘧啶將5-溴-2，4-二氯嘧啶(228mg，1.0mmol)、4-磺胺(180mg，1.05mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(174μl，1.0mmol)的正丁醇(30ml)溶液在100℃加熱16小時。溶液中形成膠狀物。加入乙醚(20ml)，使膠狀物固化，進(jìn)而沉淀。過濾收集固體并用熱的甲醇研制，得到白色固體的變體產(chǎn)物(55mg)。NMR(s，2H)，7.30(s，2H)，7.64(d，2H)，7.80(m，4H)，7.88(d，2H)，8.36(s，1H)，8.93(s，1H)，9.88(s，1H).實施例302-(3-氨磺?；桨被?-4-[(2-嗎啉代)苯氨基]嘧啶在該實施例中，使用Zymate XP機(jī)器人進(jìn)行操作，其中經(jīng)ZymateMaster Laboratory Station添加溶液，并在Stem RS5000Reacto-Station中攪拌。在Micromass OpenLynx系統(tǒng)中，使用SystemA通過LCMS證實化合物的結(jié)構(gòu)。
往3-氨基苯磺酰胺(172mg，1.0mmol)在1，4-二噁烷(8ml)中的溶液中加入2-氯-4-[(2-嗎啉代)苯氨基]嘧啶(290mg，1mmol)和氯化氫(4.0M的1，4-二噁烷溶液，50μl)。該混合物在100℃加熱60小時。冷卻反應(yīng)混合物，過濾所得固體，用1，4-二噁烷洗滌并干燥(在48℃真空干燥)，得到淺棕色固體(358mg)。Rt5.88；MS(M+H)+427。實施例312-(4-氨磺?；桨被?-4-(4-甲氧基苯氧基)-5-氯嘧啶將2，5-二氯-4-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶(方法25；0.65g，2.4mmol)和磺胺(0.38g，2.2mmol)的NMP(1.5ml)溶液在100℃加熱4小時。將反應(yīng)混合物分配到水和乙酸乙酯中。蒸發(fā)該有機(jī)溶液，殘余物經(jīng)柱色譜，用0.1％甲酸、4％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫純化，得到固體產(chǎn)物(0.17g，19％)。NMR3.81(s，3H)，7.05(d，2H)，7.10(s，2H)，7.22(d，2H)，7.50(d，4H)，8.50(s，1H)，10.6(br s，1H)；MS[M-H]-405，407.原料的制備上述實施例的原料是市售的或者采用標(biāo)準(zhǔn)方法由已知化合物方便地制備。用下列方法制備上述反應(yīng)中使用的某些原料。方法12-氯-4-(2-氟-5-甲基(N-4，4，4-三氟丁基)苯氨基)嘧啶將2-氯-4-(2-氟-5-甲基苯氨基)嘧啶(750mg，3.16mmol)、4，4，4-三氟-1-溴丁烷(725mg，3.80mmol)和碳酸鉀(525mg，3.80mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3ml)中。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌12小時后，在二氧化硅(5ml)上蒸發(fā)并經(jīng)柱色譜，用乙酸乙酯(0-40％)異己烷洗脫純化，經(jīng)蒸發(fā)得到固體(976mg)。
NMR(373K)1.79(m，2H)，2.28(m，2H)，2.33(s，3H)，3.91(t，2H)，6.19(d，1H)，7.28(m，3H)，8.03(d，1H)；MS(M+H)+347，349.方法2-10采用類似于方法1中描述的方法，用適宜的2-氯-4-苯氨基嘧啶和有關(guān)的烷基化試劑制備下列化合物。
1其中顯示的質(zhì)譜是M+。方法112-氯-4-(2-氰基苯氨基)嘧啶將2，4-二氯嘧啶(3g，0.02mol)、鄰氨基苯甲腈(2.38g，0.02mol)和濃鹽酸(計算量的)加到水(5ml)中。將該反應(yīng)混合物溫?zé)岬?0℃，以溶解原料并將所得溶液在室溫攪拌12小時。過濾收集已形成的沉淀固體，真空干燥，得到淺黃色固體(5.14g)。
NMR6.78(d，1H)，7.39(t，1H)，7.61(d，1H)，7.71(t，1H)，7.85(d，1H)，8.20(d，1H)，10.22(br s，1H)；MS(M+H)+231.1，233.1.方法122-氯-4-(4-溴苯氨基)嘧啶將2，4-二氯嘧啶(3g，20.14mmol)、4-溴苯胺(3.46g，20.14mmol)和二-異丙基乙基胺(3.86ml，22.15mmol)溶于正丁醇(5ml)。將反應(yīng)混合物在120℃加熱12小時，冷卻并在二氧化硅(5ml)上蒸發(fā)。殘余物經(jīng)柱色譜，用乙酸乙酯(50％)異己烷洗脫純化，經(jīng)蒸發(fā)得到固體(4.77g)。
NMR6.74(d，1H)，7.55(m，4H)，8.16(d，1H)，10.09(br s，1H)；MS(M+H)+284.1，286.1，288.0.方法13-17采用類似于方法12中描述的方法，用適宜的2，4-二氯嘧啶和有關(guān)苯胺制備下列化合物。
方法184-[2-(N，N-二乙基氨基)乙基氨基]苯磺酰胺如Therapie，1965，20(4)，p.917-29中所述制備上述原料。方法192，4，5-三氯嘧啶將5-氯尿嘧啶(10.0g，68.5mmol)溶于三氯氧化磷(60ml)并加入五氯化磷(16.0g，77mmol)。將反應(yīng)混合物在回流下(110℃)攪拌16小時后，使之冷卻到20℃。然后在25℃下，將反應(yīng)混合物緩慢地、小心地倒入水(200ml)中并劇烈攪拌。然后充分?jǐn)嚢?0分鐘后，加入EtOAc(250ml)。蒸發(fā)有機(jī)層，水層再萃取到乙酸乙酯(250ml)中。然后合并有機(jī)層，并用碳酸氫鈉(200ml水溶液)、鹽水(200ml)洗滌，然后蒸發(fā)得到黃色液體。粗品經(jīng)柱色譜，用二氯甲烷洗脫純化，得到黃色液體的產(chǎn)物(6.37g，51％)。NMR(CDCl3)8.62(s，1H)；MS(M+)182，184，186.方法204-[2-羥基-3-(二甲基氨基)丙氧基]苯胺鹽酸鹽用10％的批鈀木碳(0.4g)將4-[2-羥基-3-(二甲基氨基)丙氧基]硝基苯(方法21，3.75g)的乙醇(40ml)溶液催化氫化過夜。濾過硅藻土除去催化劑并濃縮濾液。將殘余物溶于含少量異丙醇的乙醚中并加入氯化氫的乙醚溶液(1M，16ml)。蒸發(fā)除去乙基，將固體殘余物懸浮在異丙醇中。該混合物在蒸汽浴上加熱數(shù)分鐘后，使之冷卻。過濾收集不溶性固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到產(chǎn)物(3.04g，72.4％)。
NMR2.80(s，6H)，3.15(m，2H)，3.88(m，2H)，4.25(m，1H)，5.93(br S，1H)，6.88(m，4H)；MS(M+H)+211；C11H18N2O2.1.6HCl理論值C；49.2，H；7.4，N；10.4，Cl；21.7％；實測值C；49.2，H；7.2.N；10.1；Cl；19.1％.方法214-[2-羥基-3-(二甲氨基)丙氧基]硝基苯將4-(2，3-環(huán)氧丙氧基)硝基苯(如Synthetic Communications，1994，24，833中制得；4.3g)溶于甲醇(30ml)和DMF(10ml)。加入二甲胺的甲醇溶液(2M，17ml)并將該混合物攪拌過夜。蒸發(fā)除去揮發(fā)性物質(zhì)，將殘余物分配到飽和碳酸氫鈉(100ml)和乙酸乙酯(100ml)中。分離有機(jī)層并用飽和氯化鈉溶液洗滌(2×100ml)，并干燥(MgSO4)。濃縮，得到油狀產(chǎn)物，該油狀產(chǎn)物在高真空下緩慢結(jié)晶(4.79g，89.9％)。
NMR(CDCl3)2.33(s，6H)，2.98(m，1H)，2.54(m，1H)，4.00(m，3H)，7.00(d，2H)，8.20(d，2H)；MS(M+H)+241.方法224-{2-[(N-甲基-N-苯基)氨基]乙基磺?；鶀苯胺往4-{2-[(N-甲基-N-苯基)氨基]乙基磺?；鶀硝基苯(方法23；10g，31.25mmol)的乙醇(100ml)溶液中加入5ml水、1ml HCl(濃)和25g鐵釘粉。將反應(yīng)物在回流下加熱3小時。將反應(yīng)物冷卻，加入苛性堿堿化并過濾。用另外的100ml沸乙醇萃取殘余的鐵并再次過濾。往合并的濾液中加入水(400ml)，過濾收集產(chǎn)物。粗品溶于用炭處理過的丙酮(80ml)中，過濾并加入水使之沉淀。過濾收集產(chǎn)物(6g)。Mp158-159℃；NMR2.8(s，3H)，3.2(m，2H)，3.5(m，2H)，6.1(s，2H)，6.5(d，2H)，6.6(m.3H)，7.1(t，2H)，7.5(d，2H)；MS(M+H)+291.方法234-{2-(N-甲基-N-苯基)氨基]乙基磺?；鶀硝基苯往1-[(2-氯乙基)磺?；鵠-4-硝基苯(US 5,716,936；5g，22.8mmol)的水(50ml)中加入乙酸鈉(3g，36.6mmol)和N-甲基苯胺(3.3g，30.8mmol)。將反應(yīng)物加熱回流1小時。大致冷卻后，潷析熱的上清水溶液。殘余的油狀物用冷水洗滌。過濾收集所得固體并風(fēng)干。粗品在苯/石油醚中重結(jié)晶，得到紅色結(jié)晶(5.3g)。Mp111-113℃。該物質(zhì)無需進(jìn)一步表征即可使用。方法244-[(2-[N-嗎啉代]乙基)磺?；鵠苯胺采用類似于上面方法22中使用的方法(A-C部分)，使用嗎啉代替N-甲基苯胺。
NMR2.2(m，4H)，3.3(m，4H)，3.4(m，4H)，6.05(br s，2H)，6.6(d，2H)，7.4(d，2H)；MS(M+H)+271.方法252，5-二氯-4-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶將2，4，5-三氯嘧啶(1.0g，5.4mmol)和4-甲氧基苯酚(0.64g，5.2mmol)的NMP(2.5ml)溶液用無水碳酸鉀(1.65g，12mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌18小時。將反應(yīng)物分配到水和乙酸乙酯中。蒸發(fā)有機(jī)層并經(jīng)柱色譜，用10％乙酸乙酯的異己烷溶液洗脫純化，得到固體產(chǎn)物(1.33g，90％)。NMR3.78(s，3H)，7.00(d，2H)，7.20(d，2H)，8.77(s，1H)；MS(M+H)+271，273.實施例32下面舉例說明在人類中治療或預(yù)防用的含有式(I)化合物或其可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯(下文中稱為化合物X)的代表性藥物劑型
注解上述制劑可通過藥物領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法制得。可通過常規(guī)方法將片劑(a)-(c)包衣，以例如提供鄰苯二甲酸乙酸纖維素包衣。
權(quán)利要求
1.式(I)的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯， 其中Q1和Q2獨立地選自芳基或碳連接的雜芳基；Q1和Q2中的一個或Q1和Q2兩個在環(huán)碳原子上被選自下列的取代基取代氨磺?；?氨磺酰基)、N-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或式(Ia)或(Ia′)的取代基 其中Y是-NHS(O)2-、-S(O)2NH-或-S(O)2-；Z是RaO-、RbRcN-、RdS-、ReRfNNRg-、C3-8環(huán)烷基、苯基或雜環(huán)基；其中所述苯基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上任選被一個或多個選自Rh的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選被選自Ri的基團(tuán)取代；Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf和Rg獨立地選自氫、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、苯基、雜環(huán)基和C3-8環(huán)烷基；其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基和C3-8環(huán)烷基可任選地被一個或多個選自Rj的基團(tuán)取代；n是0或1；m是1、2或3，此外，當(dāng)Z是C3-8環(huán)烷基、苯基或雜環(huán)基時，m可以是0；Q3是氮連接的雜環(huán)；其中所述雜環(huán)的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個Rk基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rm的基團(tuán)取代；G是-O-、-S-或-NR2-；R2選自氫、C1-6烷基、C3-6鏈烯基和C3-6炔基；其中所述C1-6烷基、C3-6鏈烯基和C3-6炔基可任選被一個或多個選自Rn的基團(tuán)取代；R1選自氫、鹵素、羥基、硝基、氨基、N-(C1-3烷基)氨基、N，N-二-(C1-3烷基)氨基、氰基、三氟甲基、三氯甲基、C1-3烷基[可任選被1或2個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、氰基、氨基、N-(C1-3烷基)氨基、N，N-二-(C1-3烷基)氨基、羥基和三氟甲基]、C3-5鏈烯基[可任選被三個鹵素取代基或者被一個三氟甲基取代基取代]、C3-5炔基、C1-3烷氧基、巰基、C1-3烷硫基、羧基和C1-3烷氧羰基；Q1的環(huán)碳原子上可任選被一至四個獨立選自下列的取代基取代鹵素、巰基、硝基、甲?；⒓柞０被?、羧基、氰基、氨基、脲基、氨基甲?；1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基[其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基和C2-4炔基可任選被一個或多個選自Ro的基團(tuán)取代]、C1-4鏈烷?；?，C1-4烷氧羰基、雜環(huán)基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0或1[可任選被羥基取代]、N′-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)脲基、N′-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N-C1-4烷基氨基，N，N-二-(C1-4烷基)氨基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲?；虲1-4鏈烷酰氨基；或者除上述取代基以外，Q1還可獨立地被一至兩個獨立選自芳基、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基的取代基取代；其中所述芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Rp的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rq的基團(tuán)取代；或者除上述取代基以外，Q1還可被一個C1-4烷氧基或被一個羥基取代基取代；Q2的環(huán)碳原子上可任選被一至四個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、巰基、硝基、甲酰基、甲酰氨基、羧基、氰基、氨基、脲基、氨基甲酰基、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基[其中所述C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基可任選被一個或多個選自Rr的基團(tuán)取代]、C1-4鏈烷?；?、C1-4烷氧羰基、雜環(huán)基、C1-4烷基S(O)a，其中a是0或1[可任選被羥基取代]、N′-(C1-4烷基)脲基、N′，N′-二-(C1-4烷基)脲基、N′-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N′N′-二-(C1-4烷基)-N-(C1-4烷基)脲基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、N-C1-4烷基氨基甲?；，N-二-(C1-4烷基)氨基甲酰基、C2-4鏈烯氧基、C2-4炔氧基和C1-4鏈烷酰氨基；或者除上述取代基以外，Q2還可任選被一至兩個獨立選自芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的取代基取代；其中所述芳基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Rs的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rt的基團(tuán)取代；Rj、Rn、Ro和Rr獨立地選自羥基、鹵素、氨基、氰基、甲?；⒓柞０被?、羧基、硝基、巰基、氨基甲?；?、氨磺?；?、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、C1-4鏈烷?；?、C1-4鏈烷酰氧基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲酰基、C1-4鏈烷?；被?、C1-4烷基S(O)a，其中a是0-2、C1-4烷基磺?；被-(C1-4烷基)氨磺?；-(C1-4烷基)2氨磺?；?、N-(C1-4烷基)氨基甲?；?、N-(C1-4烷基)2氨基甲?；?、苯基、苯硫基、苯氧基、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基；其中所述苯基、苯硫基、苯氧基、C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基的環(huán)碳原子上可任選被一個或多個選自Ru的基團(tuán)取代；并且其中如果所述雜環(huán)基包含-NH-基，該氮原子可任選地被選自Rv的基團(tuán)取代；Rh、Rk、Rp、Rs和Ru獨立地選自羥基、鹵素、氨基、氰基、甲酰基、甲酰氨基、羧基、硝基、巰基、氨基甲?；?、氨磺?；?、C1-4烷基[可任選被一個或多個選自下列的基團(tuán)取代鹵素、氰基、氨基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基或羥基]、C2-4鏈烯基[可任選被一個或多個選自鹵素的基團(tuán)取代]、C2-4炔基、N-C1-4烷基氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、C1-4鏈烷?；?、C1-4鏈烷酰氧基、C1-4烷氧基[可任選被一個或多個選自鹵素的基團(tuán)取代]、C1-4烷氧羰基、N-C1-4烷基氨基甲?；?、N，N-二-(C1-4烷基)氨基甲?；?、C1-4鏈烷?；被?、C1-4烷基S(O)a，其中a是0-2、C1-4烷基磺?；被?、N-(C1-4烷基)氨磺酰基、N-(C1-4烷基)2氨磺?；⒈交?、C3-8環(huán)烷基和雜環(huán)基；并且Ri、Rq、Rt和Rv獨立地選自C1-4烷基、C1-4鏈烷?；1-4烷基磺?；?、C1-4烷氧羰基、氨基甲酰基、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-4烷基)氨基甲?；?、芐基、芐氧羰基、苯甲?；捅交酋；?br> 2.權(quán)利要求1的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1是苯基。
3.權(quán)利要求1或2的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q2是苯基。
4.權(quán)利要求1-3任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1和Q2中的一個或者Q1和Q2二者都在環(huán)碳原子上被一個選自下列的基團(tuán)取代氨磺?；⒓谆酋；?、N-(2-二乙基氨基乙基)氨磺?；?、2-(N-甲基-N-苯基氨基)乙基磺?；?-嗎啉代乙基磺?；?、N-(5-甲基噻二唑-2-基)氨磺?；，N-二-(2-羥基乙基)氨磺?；?、N-(噻唑-2-基)氨磺?；-(3，4-二甲基異噁唑-5-基)氨磺?；?、N-(吡啶-2-基)氨磺?；蚇-甲基氨磺?；?。
5.權(quán)利要求1-3任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1在相對于-NH-的對位或間位被下列基團(tuán)取代氨磺?；?、N-(C1-4烷基)氨磺酰基(可任選被鹵素或羥基取代)、N，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)、C1-4烷基磺?；?可任選被鹵素或羥基取代)或者式(Ia)或(Ia′)的取代基。
6.權(quán)利要求1-5任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中G是-O-、-NH-、-(4，4，4-三氟丁基)N-、-(3-溴-2-丙烯基)N-或-(3-苯基-2-丙烯基)N-。
7.權(quán)利要求1-6任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中R1是氫或鹵素。
8.權(quán)利要求1-7任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1可任選地被C1-4烷氧基取代。
9.權(quán)利要求1-8任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q2可任選地在環(huán)碳原子上被一至兩個獨立選自鹵素、氰基、甲基、甲氧基和嗎啉代的取代基取代。
10.權(quán)利要求1-9任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，選自2-(4-氨磺?；桨被?-4-(2-氰基苯氨基)嘧啶；2-(4-N-甲基氨磺酰基苯氨基)-4-苯氨基-5-溴嘧啶；2-(4-氨磺?；桨被?-4-苯氨基-5-溴嘧啶；2，4-二-(4-氨磺酰基苯氨基)-5-溴嘧啶；或2-(4-氨磺?；桨被?-4-(4-甲氧基苯氧基)-5-氯嘧啶。
11.一種如權(quán)利要求1-10任一項的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯的制備方法，包括a)對于其中G是-NR2-的式(I)化合物，將式(II)嘧啶 其中L是如下所定義的可置換基團(tuán)，與式(III)化合物反應(yīng)， 其中G是-NR2-；b)將式(IV)嘧啶 其中L是如下所定義的可置換基團(tuán)，與式(V)化合物反應(yīng)， c)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia)，且Y是-S(O)2NH-的式(I)化合物，將式(VI)化合物 其中L是可置換基團(tuán)；與式(VII)的胺反應(yīng)，Z-(CH2)m-NH2(VII)d)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia)，且Y是-NHS(O)2-的式(I)化合物，將式(VIII)化合物 與式(IX)化合物反應(yīng)，Z-(CH2)m-SO2L(IX)其中L是可置換基團(tuán)；e)對于其中側(cè)鏈?zhǔn)鞘?Ia′)的式(I)化合物，將式(VI)化合物與式(X)的胺反應(yīng)， 之后，如果需要的話i)將式(I)化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)化合物；ii)除去所有保護(hù)基；iii)形成可藥用鹽或在體內(nèi)可水解的酯。
12.一種藥物組合物，它包含權(quán)利要求1-10任一項的式(I)嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，和可藥用稀釋劑或載體。
13.用于預(yù)防性或治療性治療溫血動物，例如人的方法的權(quán)利要求1-10任一項的式(I)嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
14.用作藥物的權(quán)利要求1-10任一項的式(I)嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
15.權(quán)利要求1-10任一項的式(I)嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯在制備用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗癌、細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)作用的藥物中的應(yīng)用。
16.在需此治療的溫血動物例如人中產(chǎn)生抗癌、細(xì)胞周期抑制(抗細(xì)胞增殖)作用的方法，包括給所述動物施用有效量的權(quán)利要求1-10任一項的式(I)嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
全文摘要
式(I)的嘧啶衍生物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q
文檔編號C07D417/12GK1406231SQ0180584
公開日2003年3月26日 申請日期2001年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月1日
發(fā)明者E·J·皮爾斯, G·A·布雷奧爾特, J·J·莫里斯 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司