專利名稱：用于病毒性疾病的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的異噁唑化合物，和下列組分的組合A)該異噁唑類非核苷抑制劑，B)其它抗病毒活性物質(zhì)例如(i)二氫嘧啶化合物和/或(ii)核苷類似物例如拉米夫定，和必要時C)免疫調(diào)節(jié)劑例如干擾素(該組合是二重、三重或四重組合)，涉及制備所述異噁唑化合物和組合的方法，及其作為藥物、特別是治療和預(yù)防HBV感染的藥物的應(yīng)用。
對于本發(fā)明目的，“組合”不僅是指含有所有組分的劑型(所謂地固定組合)和含有彼此分隔的組分的組合包裝，而且還指同時或順序施用的組分，只要使用它們來治療或預(yù)防同一疾病即可。
乙型肝炎病毒屬于嗜肝DNA病毒。其引起急性和/或持續(xù)的/進行性慢性疾病。乙型肝炎病毒還在病理狀態(tài)中引起許多其它臨床表現(xiàn)—特別是慢性肝臟炎癥、肝硬化、和肝癌。此外，丁型肝炎病毒共感染可能對該疾病的進展有不利影響。
對于病毒抑制已提出了幾種可能性
1.通過能顯著減少病毒DNA和病毒核心蛋白的二氫嘧啶化合物來抑制病毒；
2.通過HBV聚合酶底物的類似物例如拉米夫定、FTC、AdefovirDipivoxil、Abacavir、β-L-FDDC、L-FMAU和BMS 200 475來抑制HBV聚合酶；
3.通過免疫成分來抑制HBV，例如用干擾素治療慢性肝炎；
4.通過其作用方式未知或者是推測主題的其它活性物質(zhì)來抑制，例如AT-61＝N-[(1E)-2-氯-2-苯基-1-(1-哌啶基羰基)乙烯基]苯甲酰胺，該化合物能明顯干擾前基因組RNA包裝到不完全核心顆粒內(nèi)的過程；參見King等人，Antimicrob.Agents and Chemother.42，3179-3186(1998)；
5.刺激宿主的免疫防御，例如用胸腺素-α進行刺激。
被批準(zhǔn)用于治療慢性肝炎的治療劑僅僅有干擾素和拉米夫定。然而，干擾素僅具有中等活性，并具有不希望的副作用；雖然拉米夫定具有良好活性，但是在治療期間會迅速發(fā)展成抗藥性，并且在大多數(shù)情況下，停止治療后會發(fā)生回彈作用。干擾素與拉米夫定的組合沒有協(xié)同活性。
迄今為止治療HBV-感染患者所采用的治療劑例如干擾素或拉米夫定都是作為單一治療使用。從臨床研究已知這兩種抑制劑的組合在控制HBV疾病方面沒有任何優(yōu)點。
對于Adefovir Dipivoxil、BMS 200 475和其它上述抑制劑，至今仍沒有任何可利用的通常有效的臨床實驗。
因此需要能進行更好的、更有效的治療的新治療劑。
WO99/45908已經(jīng)公開了具有抗病毒活性、特別是抗肝炎病毒活性的在3-位被取代的異噁唑化合物，例如來氟米特(＝N-(4-三氟甲基苯基)-5-甲基異噁唑-4-甲酰胺)。然而，我們用這些化合物進行的研究沒有顯示出任何抗乙型肝炎病毒的活性。
如WO99/45908中所述，來氟米特在體內(nèi)通過開環(huán)迅速代謝成N-(4-三氟甲基苯基)-2-氰基-4-氧代丁酰胺。該異構(gòu)化只有對于異噁唑化合物才是可能的，因為其在與異噁唑環(huán)的氮原子相鄰的碳原子上有一個氫原子(3-位)。
已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在3-位被取代的異噁唑化合物明顯優(yōu)于WO99/45908的異噁唑化合物，并且能高度有效地抗肝炎病毒。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，A)異噁唑化合物、B)其它HBV-抗病毒活性物質(zhì)、和必要時的C)免疫調(diào)節(jié)劑的組合僅具有部分或者完全不具有現(xiàn)有技術(shù)的缺點。
因此，本發(fā)明涉及下式化合物
其中R1和R2彼此獨立地為任選被一個或多個鹵素原子取代的烷基，X是選自下列的二價基團C＝Y(jié)、-N(R4)-C(＝Y(jié))-、-CH2-或式-(CH2)nC(＝Y(jié))-所示基團，n是1-4的整數(shù)，R3和R4彼此獨立地為氫或任選被鹵素取代的烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是芳基或6-元雜芳基，所述基團可任選被1-3個彼此獨立地選自下列的基團取代鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基、烷氧基羰基、氨基羰基氨基、一-和二烷基氨基、氰基、氨基、一-和二烷基氨基羰基—對于鄰位取代，被選自鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基的基團取代。
下列內(nèi)容適用于化合物I
在本說明書中，烷基以及一-和二烷基氨基和一-和二烷基氨基羰基中的烷基部分是具有1-8個碳原子、優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、正戊基、正己基、2-乙基己基或正辛基。
在本說明書中，烷氧基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
在本說明書中，烷硫基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基，例如甲硫基、乙硫基和丙硫基。
在本說明書中，烷氧基羰基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基和正己氧基羰基。
在本說明書中，鹵素是氟、氯、溴或碘。
優(yōu)選的鹵代烷基是三氟甲基。
芳基一般是具有6-10個碳原子的芳基，優(yōu)選為苯基和萘基。
在本說明書中，雜芳基優(yōu)選為吡啶基或嘧啶基。
優(yōu)選的式(I)化合物是定義如下的那些，其中
R1和R2彼此獨立地為任選被鹵素取代的C1-C8烷基，
X是選自C＝Y(jié)和CH2的二價基團，
R3和R4彼此獨立地為H或任選被鹵素取代的C1-C6-烷基，
Y是氧原子或硫原子，且
A是苯基、吡啶基或嘧啶基，所述基團可任選被1-3個選自下列的基團取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷氧基羰基、氨基甲?；?、一-C1-C6-烷基氨基羰基、二-C1-C6-烷基氨基羰基、氰基—對于鄰位取代，被選自鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷硫基的基團取代。
特別優(yōu)選的式(I)化合物是定義如下的那些，其中
R1和R2彼此獨立地為C1-C6烷基或三氟甲基，
X是C＝Y(jié)，
R3和R4彼此獨立地為氫、或C1-C6-烷基，優(yōu)選為氫或甲基，
Y是氧原子或硫原子，且
A是單取代-三取代、優(yōu)選3，4-或3，5-二取代的苯基或吡啶基，其取代基彼此獨立地選自烷基、鹵素、CF3，特別是3-甲基-4-氟和3-氯-4-氟-苯基。
本發(fā)明異噁唑化合物可通過將相應(yīng)的酰氯2與胺HNAR3反應(yīng)而制得
(反應(yīng)方案1)
雜環(huán)構(gòu)建化合物2可通過例如如下所示的類似于G.Storck，J.E.McMurry，J.Am.Chem.Soc.1967，89，5461的方法合成
(反應(yīng)方案2)
對于該反應(yīng)方案，例如，在脫水條件下用吡咯烷6將酮基酯5轉(zhuǎn)化成烯氨基酯7，然后在堿例如三乙胺和脫水劑例如異氰酸苯酯或三氯氧化磷存在下將烯氨基酯7與脂族硝基化合物反應(yīng)，以生成異噁唑8。然后裂解掉乙基酯，例如用氫氧化鈉水溶液裂解掉乙基酯，可通過例如用亞硫酰氯處理來將所得酸9轉(zhuǎn)化成酰氯。
3-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)乙酰氯和-丙酰氯可通過例如類似于文獻(xiàn)中的方法制得(J.Org.Chem.59，2882-2884(1994)，Ann.Chim.26(7)，340(1902))。
可商購獲得的苯胺或雜環(huán)胺可用作胺組分3。
一般可用于反應(yīng)方案1和2中的反應(yīng)的堿是二(三甲基甲硅烷基)氨基鈉或鋰(Natrium-oder Lithiumbistrimethylsilylamid)；堿金屬氫氧化物例如氫氧化鈉、氫氧化鋰或氫氧化鉀；碳酸氫鈉；氫化鈉；有機三-(C1-C6)-烷基胺例如三乙胺或二異丙基乙胺；雜環(huán)例如1，4-二氮雜二環(huán)[5，4，0]-十一碳-7-烯(DBU)、吡啶、二氨基吡啶、甲基哌啶或N-甲基嗎啉。
對于反應(yīng)方案1中的反應(yīng)，優(yōu)選的堿包括有機胺例如三乙胺、二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉，N-甲基嗎啉可以與載體結(jié)合，例如嗎啉代甲基-聚苯乙烯。
對于反應(yīng)方案2中的反應(yīng)，優(yōu)選的堿包括氫氧化鋰、吡啶、二異丙基乙胺和三乙胺。
硫代酰胺(Y＝S的式I)可通過用Lawesson試劑(＝2，4-二-(4-甲氧基苯基)-1，3，2，4-dithiaphosphetane2，4-二硫化物；參見R.Shabana等人，Tetrahedron1980(36)，3047-3051)處理酰胺4來合成；該反應(yīng)可在甲苯中于升高的溫度下進行。
脲[X＝-N(R4)-C(＝Y(jié))-]可用例如3-氨基-2，5-二甲基異噁唑作為原料來合成(A.Pascual，Helv.Chim.Acta 1989(72)，556-569)，將其轉(zhuǎn)化成氨基甲酰氯后，以類似方法與胺HNAR3反應(yīng)。
胺(X＝CH2)可通過用例如用硼烷/二甲基硫醚絡(luò)合物還原而由在反應(yīng)方案1中描述的相應(yīng)的甲酰胺獲得(J.March，Advanced OrganicChemistry，第4版，New York1992，1212頁)。
在反應(yīng)方案1和2中的反應(yīng)可在惰性有機溶劑中進行。這些溶劑包括飽和直鏈、支鏈和環(huán)狀烴例如己烷、環(huán)己烷或石油餾份，醇例如甲醇、乙醇或異丙醇，醚例如乙醚、1，4-二氧雜環(huán)己烷或四氫呋喃，鹵代烴例如二氯甲烷、氯仿、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烷或四氯乙烷，芳烴例如苯、甲苯或二甲苯，偶極非質(zhì)子傳遞溶劑例如硝基甲烷、二甲基甲酰胺或乙腈，或它們的混合物。二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、甲苯、乙醇和二甲基甲酰胺是特別優(yōu)選的。
對于反應(yīng)方案1中的反應(yīng)，優(yōu)選的溶劑包括氯代烴例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯甲烷，和醚例如四氫呋喃。反應(yīng)方案2中的反應(yīng)優(yōu)選在芳烴例如甲苯，氯代烴例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，醚例如四氫呋喃，或鏈烷醇例如乙醇中進行。
反應(yīng)方案1和2中的反應(yīng)一般在0-150℃、優(yōu)選0-90℃溫度下進行。這些反應(yīng)可在常壓、減壓或升壓(例如0.5-5巴)下進行，一般使用常壓。
因此，本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法，其中
R1-R3和A具有上述含義，
X是C＝Y(jié)或式-(CH2)nC(＝Y(jié))-所示基團，
Y是氧原子，且
N是1-4的整數(shù)，
包括將下式所示的酰氯
其中R1和R2、以及X和Y具有上述含義，與式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法，其中R1-R3和A具有上述含義，X是C＝Y(jié)，且Y是硫原子，包括用Lawessons試劑處理這樣的式(I)化合物，其中R1-R3和A具有上述含義，X是C＝Y(jié)，且Y是氧原子。
本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法，其中
R1-R3和A具有上述含義，且X是CH2，包括將這樣的式(I)化合物還原，其中R1-R3和A具有上述含義，X是C＝Y(jié)，且Y是氧原子。本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法，其中R1和R4與A具有上述含義，X是-N(R4)-C(＝Y(jié))-，且Y是氧原子，包括將下式化合物
其中R1和R2具有上述含義，與羰基供體和式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。
對于本發(fā)明目的，術(shù)語“羰基供體”包括例如氯甲酸三氯甲酯、羰基二咪唑和光氣。
本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法，其中
R1-R4和A具有上述含義，
X是-N(R4)-C(＝Y(jié))-，且
Y是硫原子，
包括將下式化合物
其中R1和R2具有上述含義，與硫代羰基供體和式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。
對于本發(fā)明目的，術(shù)語“硫代羰基供體”包括例如N，N’-硫代羰基二咪唑和硫光氣。
本發(fā)明還涉及下列組分的組合A)至少一種異噁唑化合物，B)至少一種不同于A的HBV-抗病毒活性物質(zhì)，優(yōu)選為(i)HBV DNA抑制劑或HBV核心蛋白抑制劑和/或(ii)HBV聚合酶抑制劑，和必要時的(C)至少一種免疫調(diào)節(jié)劑。因此，本發(fā)明還涉及用于治療和預(yù)防HBV感染的核苷和非核苷抑制劑和必要時免疫調(diào)節(jié)劑的組合，以及這些組合在治療HBV引起的疾病中的應(yīng)用。
合適的異噁唑化合物A是上述化合物I。
HBV DNA抑制劑或HBV核心蛋白抑制劑B(i)是表現(xiàn)出細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外抑制HBV DNA和使細(xì)胞中HBV核心蛋白半衰期至少減半的非核苷抑制劑。
優(yōu)選的HBV核心蛋白抑制劑B(i)是例如二氫嘧啶化合物，優(yōu)選在德國出版的專利說明書19817264(＝WO99/54326)、19817265(＝WO99/54312)和19817262(＝WO99/54329)中描述的二氫嘧啶化合物。
優(yōu)選的二氫嘧啶B(i)是例如下式所示化合物
或其異構(gòu)形式
和它們的鹽，其中R1是苯基、呋喃基、噻吩基、三唑基、吡啶基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、或下式所示基團
或
其中上述環(huán)系可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次或多次鹵素、三氟甲基、硝基、氰基、三氟甲氧基、羧基、羥基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷氧基羰基和C1-C6-烷基，其中所述烷基又可被具有6-10個碳原子的芳基或鹵素取代，并且上述環(huán)系可任選被-S-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-CF3和-A-CH2-R11取代，其中R6是任選被鹵素取代的苯基，R7-R10彼此獨立地為氫、苯基、羥基取代的苯基、羥基、C1-C6-?；駽1-C6-烷基，其中所述烷基又可被羥基、C1-C6-烷氧基羰基、苯基或羥基取代的苯基取代，A是基團-O-、-S-、-SO-或-SO2-，R11是苯基，所述苯基可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次至多次鹵素、硝基、三氟甲基、C1-C6-烷基和C1-C6-烷氧基，R2是指式-XR12或-NR13R14所示基團，其中X是單鍵或氧，R12是氫，直鏈或支鏈C1-C6-烷氧基羰基，直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和C1-C8-烴基，所述烴基可任選含有1或2個相同或不同的選自下列的雜鏈單元-O-、-CO-、-NH-、-N-(C1-C4-烷基)-、-S-或-SO2-，并且所述烴基可任選被下列基團取代鹵素、硝基、氰基、羥基、具有6-10個碳原子的芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基、雜芳基或式-NR15R16基團，其中R15和R16彼此獨立地為氫、芐基或C1-C6-烷基，R13和R14彼此獨立地為氫、C1-C6-烷基或具有3-6個碳原子的環(huán)烷基，R3是氫、氨基或下式所示基團
或者是甲?；⑶杌?、羥基取代的C1-C6-烷硫基、三氟甲基或吡啶基，或者是具有最高達(dá)8個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和烴基，所述烴基可任選被相同或不同的下列基團取代一次或多次具有6-10個碳原子的芳氧基、疊氮基、鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6-烷氧基羰基、5-元-7-元雜環(huán)、C1-C6-烷硫基或C1-C6-烷氧基(其中所述烷硫基或烷氧基又可被疊氮基、氨基、羥基取代)和/或基團-(CO)a-NR17R18，其中a是0或1，R17和R18彼此獨立地為氫或具有6-10個碳原子的芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基或C1-C6-烷基，所述基團任選被C1-C6-烷氧基羰基、氨基、羥基、苯基或芐基取代，所述苯基或芐基任選被羥基、羧基、C1-C6-烷基或C1-C6-烷氧基相同或不同地取代一次或多次，和/或C1-C6-烷基可任選被-NH-CO-CH3或-NH-CO-CF3取代，或者R17和R18與它們所連接的氮原子一起是嗎啉基、哌啶基或吡咯烷基環(huán)，或者R3是任選被甲氧基取代的苯基，或者R2和R3一起是下式所示基團
R4是氫、C1-C4-烷基、C2-C4-鏈烯基、苯甲?；蚓哂?-6個碳原子的?；?，優(yōu)選氫、甲基、苯甲?；駽2-C6?；?，且R5是吡啶基、嘧啶基或吡嗪基，所述基團分別可被相同或不同的下列取代基取代最高達(dá)3次鹵素、羥基、氰基、三氟甲基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷基、C1-C6-烷硫基、烷氧羰基、C1-C6-酰氧基、氨基、硝基、一-或二-C1-C6-烷基氨基。
非常特別優(yōu)選的二氫嘧啶B是下列化合物及其異構(gòu)形式和鹽
式II和IIa化合物包括式(II)和(IIa)異構(gòu)體及其混合物。如果R4是氫，異構(gòu)體(II)和(IIa)存在互變異構(gòu)平衡
上述二氫嘧啶II和IIa及其不同的制備方法公開在德國出版的專利說明書19817264(＝WO99/54326)和19817265(＝WO99/54312)中。
還優(yōu)選的二氫嘧啶B(i)是下式化合物
和其異構(gòu)形式
和/或它們的鹽，其中R1是苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、或下式所示基團
或
其中上述環(huán)系可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次或多次鹵素、三氟甲基、硝基、氰基、三氟甲氧基、羧基、羥基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷氧基羰基和C1-C6-烷基，其中所述烷基又可被具有6-10個碳原子的芳基或鹵素取代，和/或上述環(huán)系又可任選被-S-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-CF3和-A-CH2-R11取代，其中R6是任選被鹵素取代的苯基，R7-R10彼此獨立地為氫、苯基、羥基取代的苯基、羥基、C1-C6-?；駽1-C6-烷基，其中所述烷基又可被羥基、C1-C6-烷氧基羰基、苯基或羥基取代的苯基取代，A是基團-O-、-S-、-SO-或-SO2-，R11是苯基，所述苯基可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次至多次鹵素、硝基、三氟甲基、C1-C6-烷基和C1-C6-烷氧基，R2是指式-OR12或-NR13R14所示基團，其中R12是氫，C1-C6-烷氧基羰基，或直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和C1-C8-烴基，所述烴基可任選含有1或2個相同或不同的選自下列的雜鏈單元-O-、-CO-、-NH-、-N-(C1-C4-烷基)-、-S-和-SO2-，并且所述烴基可任選被下列基團取代鹵素、硝基、氰基、羥基、具有6-10個碳原子的芳基或具有6-10個碳原子的芳烷基、雜芳基或式-NR15R16基團，其中R15和R16彼此獨立地為氫、芐基或C1-C6-烷基，R13和R14彼此獨立地為氫、C1-C6-烷基或具有3-6個碳原子的環(huán)烷基，R3是氫、氨基或下式所示基團
或者是甲?；⑶杌?、羥基取代的C1-C6-烷硫基、三氟甲基，或具有最高達(dá)8個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和烴基，所述烴基可任選被相同或不同的下列基團取代一次或多次具有6-10個碳原子的芳氧基、疊氮基、氰基、羥基、羧基、C1-C6-烷氧基羰基、5-元-7-元雜環(huán)、C1-C6-烷硫基或C1-C6-烷氧基(其中所述烷硫基或烷氧基又可被疊氮基、氨基或羥基取代)和/或基團-(CO)a-NR17R18，其中a是0或1，R17和R18彼此獨立地為氫或芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基或C1-C6-烷基，所述基團任選被C1-C6-烷氧基羰基、氨基、羥基、苯基或芐基取代，所述苯基或芐基任選被羥基、羧基、C1-C6-烷基或C1-C6-烷氧基相同或不同地取代一次或多次，和/或C1-C6-烷基任選被-NH-CO-CH3或-NH-CO-CF3取代，或者R17和R18與它們所連接的氮原子一起是嗎啉基、哌啶基或吡咯烷基環(huán)，D是氧原子或硫原子，且R5是氫、鹵素或具有最高達(dá)6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
化合物III和IIIa可以以立體異構(gòu)形式存在，這些立體異構(gòu)形式作為像和鏡像相關(guān)(對映體)或者不作為像和鏡像相關(guān)(非對映體)。因此，化合物III和IIIa包括對映體和非對映體及其各自的混合物。同樣象非對映體一樣，可通過已知方式將外消旋形式分離成立體異構(gòu)單一組分。
在2-位含有任選取代的噁唑基或噻唑基的二氫嘧啶III和IIIa及其不同的制備方法公開在德國出版的專利說明書198 17 262(＝WO99/54 329)中。
下列內(nèi)容適用于化合物II、IIa、III和IIIa
在本說明書中，烷基本身以及一-和二烷基氨基和一-和二烷基氨基羰基中的烷基部分是具有1-8個碳原子、優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、正戊基、正己基、2-乙基己基或正辛基。
在本說明書中，鏈烯基是具有2-6個碳原子、優(yōu)選3-5個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基，例如乙烯基、丙烯基、異丙烯基、叔丁烯基、正戊烯基和正己烯基。
在本說明書中，具有3-6個碳原子的環(huán)烷基是環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)丁基、環(huán)己基，優(yōu)選為環(huán)戊基和環(huán)己基。
在本說明書中，?；蔷哂?-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈?；?，例如乙酰基和丙?；?br> 在本說明書中，烷氧基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
在本說明書中，烷硫基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基，例如甲硫基、乙硫基和丙硫基。
在本說明書中，烷氧基羰基是具有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基和正己氧基羰基。
在本說明書中，芳烷基是在芳基部分中優(yōu)選具有6-10個碳原子、特別是6個碳原子(優(yōu)選為苯基或萘基，特別是苯基)，在烷基部分中優(yōu)選具有1-4個碳原子、特別是1或2個碳原子的芳烷基，其中烷基部分可以是直鏈或支鏈。優(yōu)選的芳烷基是芐基和苯乙基。
在本說明書中，芳基是具有6-10個碳原子的芳基，優(yōu)選為苯基和萘基。
在本說明書中，雜芳基是5-元-7-元環(huán)，該環(huán)具有優(yōu)選1-3個、特別是1或2個相同或不同的選自氧、硫和氮的雜原子。優(yōu)選的實例包括呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、1，2，4-噁嗪基、1，3，2-噁嗪基、1，3，6-噁嗪基、和1，2，6-噁嗪基，特別是吡啶基和嘧啶基。
在本說明書中，鹵素是氟、氯、溴或碘。
優(yōu)選的鹵代烷基是三氟甲基。
化合物II或IIa和III或IIIa還可以呈鹽的形式。對于本發(fā)明目的，生理上可接受鹽是優(yōu)選的。
生理上可接受鹽可以是化合物II或IIa和III或IIIa與無機酸或有機酸的鹽。優(yōu)選無機酸的鹽，所述無機酸是例如鹽酸、氫溴酸、磷酸或硫酸，或有機羧酸或磺酸的鹽，所述有機羧酸或磺酸是例如乙酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸或萘二磺酸。
生理上可接受鹽還可以是化合物II或IIa和III或IIIa的金屬鹽或銨鹽。特別優(yōu)選的實例是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽，和源自氨或有機胺的銨鹽，所述有機胺是例如乙胺、二乙胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、賴氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺。
本發(fā)明還涉及下列組分的組合
A)至少一種異噁唑化合物，
B)至少(i)一種二氫嘧啶化合物和/或(ii)一種HBV聚合酶抑制劑，和必要時
C)至少一種免疫調(diào)節(jié)劑。
對于本發(fā)明目的，稱為HBV聚合酶抑制劑的物質(zhì)B(ii)是在內(nèi)源性聚合酶測定(Ph.A.Furman等人，Antimicrobial Agents andChemotherapy，Vol.36(No.12)，2688(1992))中導(dǎo)致HBV-DNA雙螺旋的形成被抑制，從而獲得最大50％零值活性的那些
優(yōu)選的HBV聚合酶抑制劑B(ii)包括例如3TC＝拉米夫定＝4-氨基-1-[(2R-順式)-2-(羥基甲基)-1，3-氧雜硫雜環(huán)戊烷-5-基(oxathiolan-5-yl)]-嘧啶-2(1H)-酮，參見歐洲專利382526(＝US專利5 047 407)和WO91/11186(＝US專利5 204 466)；Adefovir Dipivoxil＝9-(2-[[二[(新戊酰氧基)-甲氧基]-氧膦基]-甲氧基]-乙基)-腺嘌呤，參見歐洲專利481 214(＝US專利5 663 159和5 792 756)，US專利4 724 233和4 808 716；BMS 200 475＝[1S-(1.α，3.α，4.β)]-2-氨基-1，9-二氫-9-[4-羥基-3-(羥基甲基)-2-亞甲基-環(huán)戊基]-6H-嘌呤-6-酮，參見歐洲專利481 754(＝US專利5 206 244和5 340 816)，WO98/09964和99/41275；Abacavir＝(-)-(1S-順式)-4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇，參見歐洲專利349 242(＝US專利5 049 671)和EP專利434 450(＝US專利說明書5 034 394)；FTC＝(2R-順式)-4-氨基-5-氟-1-[2-(羥基甲基)-1，3-氧雜硫雜環(huán)戊烷-5-基]-嘧啶-2(1H)-酮，參見WO92/14743(＝US專利5 204 466，5 210085，5 539 116，5 700 937，5 728 575，5 814 639，5 827 727，5 852 027，5 892 025，5 914 331，5 914 400)和WO92/18517；β-L-FDDC＝5-(6-氨基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-四氫-2-呋喃甲醇，參見WO94/27616(＝US專利5 627 160，5 561 120，5 631 239和5 830 881)；L-FMAU＝1-(2-去氧-2-氟-β-L-阿拉伯呋喃糖基)-5-甲基-嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮，參見WO99/05157，WO99/05158和US-PS 5 753 789。
本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方案涉及A)上述異噁唑化合物(I)和B)(ii)拉米夫定的組合。
其它優(yōu)選的HBV-抗病毒劑B包括例如下式苯基丙烯酰胺及其鹽
其中R1和R2彼此獨立地為C1-C4-烷基，或者與它們所連接的氮原子一起形成具有5-6個環(huán)原子、且環(huán)原子包括碳和/或氧的環(huán)，R3-R12彼此獨立地為氫、鹵素、C1-C4-烷基、任選取代的C1-C4-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基，R13是氫、C1-C4-烷基、C1-C7-酰基或芳烷基，且X是鹵素或任選取代的C1-C4-烷基。
這些苯基丙烯酰胺及其制備方法公開在WO98/33501中，該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本發(fā)明以作參考。AT-61是其中X是氯，A是1-哌啶基，且Y和Z分別是苯基的上式化合物。
優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)劑C)包括例如所有干擾素如α-干擾素、β-干擾素和γ-干擾素，特別是α-2a-干擾素和α-2b-干擾素，白介素例如白介素-2，多肽例如胸腺素-α-1和Thymoctonan，咪唑并喹啉衍生物例如Levamisole，免疫球蛋白和治療疫苗。
本發(fā)明另一優(yōu)選的實施方案涉及下列組分的組合A)至少一種異噁唑化合物，B)(i)至少一種二氫嘧啶化合物，(ii)拉米夫定，和必要時C)干擾素。
本發(fā)明組合抑制HBV病毒復(fù)制的效力顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)已知的治療劑或其已知組合，這是不可預(yù)知的。與用單一化合物進行的單一治療相比，本發(fā)明組合給HBV引起的病癥的治療提供了有價值的優(yōu)點，即主要是協(xié)同抗病毒活性，但是對于50％細(xì)胞存活的毒性(“Tox-50”)，與單一化合物的Tox-50相比，本發(fā)明組合也具有良好的耐受性。
已經(jīng)證實了，在人醫(yī)療和獸醫(yī)中，為了達(dá)到理想結(jié)果，以約0.5-約500、優(yōu)選1-100mg/kg體重/24小時的總量(需要時以多個單劑量的形式施用)施用化合物(I)或本發(fā)明組合是有利的。單一劑量含有優(yōu)選約1-約80、特別是1-30mg/kg體重的活性物質(zhì)或活性物質(zhì)混合物。然而，有可能必須偏離上述劑量，這特別取決于所治療個體的種類和體重、病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、制劑類型以及藥物的給藥方式、進行給藥的時間空隙或時間間隔。
在本發(fā)明組合中，組分A、B和必要時C的量的比例可在寬的限度內(nèi)改變；優(yōu)選為5-1000mg A/5-500mg B，特別是10-500mg A/20-400mg B，以及5-1000mg A/5-500mg B和/或1-10百萬I.U.(國際單位)C。
必要時一起使用的組分C可優(yōu)選以特別是2-7百萬I.U.的量使用，在最高達(dá)一年的時間內(nèi)每周給藥約3次。
本發(fā)明化合物(I)和本發(fā)明組合在上述藥物制劑中的濃度一般為占整個混合物重量的約0.1-99.5％、優(yōu)選約0.5-95％。
本發(fā)明包括這樣的藥物制劑，其除了含有無毒惰性可藥用載體以外，還含有一種或多種化合物(I)或一種或多種本發(fā)明的組合，或者所述藥物制劑由本發(fā)明化合物(I)或組合組成，以及制備這些制劑的方法。
上述藥物制劑除了含有本發(fā)明化合物(I)或本發(fā)明組合以外，還含有其它藥物活性物質(zhì)。
上述藥物制劑可通過已知方法以通常方式制得，例如通過將活性物質(zhì)與載體混合而制得。
活性物質(zhì)可全身作用和/或局部作用。對于此，可將它們以合適的途徑施用，例如通過經(jīng)口、非胃腸道、經(jīng)肺、經(jīng)鼻、舌下、經(jīng)舌、頰、直腸、透皮、結(jié)膜或經(jīng)耳途徑給藥或者作為植入物給藥?；钚晕镔|(zhì)可以以適于這些給藥途徑的給藥劑型施用。
迅速和/或以改變的方式遞送活性物質(zhì)的給藥劑型適于口服給藥，例如不具有或具有(例如腸溶衣)包衣的片劑、膠囊、包衣片劑、粒徑、丸劑、粉劑、乳劑、懸浮劑和溶液劑。
非胃腸道給藥可通過避免吸收步驟的方式(靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心臟內(nèi)、脊柱內(nèi)或腰內(nèi))進行或者通過包括吸收的方式(肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、透皮、或腹膜內(nèi))進行。適于非胃腸道給藥的給藥劑型特別是溶液、懸浮液、乳液、冷凍干燥物和無菌粉末形式的注射劑和輸注劑。
適于其它給藥途徑的是例如吸入用藥物劑型(特別是粉末吸入劑、噴霧劑)、鼻用滴劑/溶液、噴霧劑；用于經(jīng)舌、舌下或頰給藥的片劑或膠囊，栓劑，耳和眼用制劑，陰道用膠囊、水懸浮液(洗劑、搖動混合物)、親脂性懸浮液、膏劑、霜劑、奶乳劑、糊劑、粉塵劑或植入物。
可通過自身已知的方式將活性物質(zhì)轉(zhuǎn)化成所述給藥劑型。這需要使用惰性無毒可藥用助劑。這些助劑特別包括載體(例如微晶纖維素)、溶劑(例如液體聚乙二醇)、乳化劑(例如十二烷基硫酸鈉)、分散劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然生物聚合物(例如白蛋白)、穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑如抗壞血酸)、著色劑(例如無機顏料如氧化鐵)或掩蔽矯味劑和/或香料。
本發(fā)明化合物(I)和組合的適應(yīng)癥領(lǐng)域
1.治療可導(dǎo)致感染性肝炎的急性和慢性病毒感染，例如乙型肝炎病毒感染；特別優(yōu)選治療慢性乙型肝炎感染和治療急性乙型肝炎病毒感染；
2.治療與丁型肝炎病毒共感染的急性和慢性HBV感染；和
3.治療與器官移植、尤其是肝臟移植有關(guān)的感染。
因此，本發(fā)明還涉及用于控制疾病的化合物(I)。
本發(fā)明還涉及包含至少一種化合物(I)和必要時其它藥物活性物質(zhì)的藥物。
本發(fā)明還涉及化合物(I)在制備用于治療和預(yù)防病毒性疾病、特別是乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明還涉及用于控制疾病的如上所定義的組合。
本發(fā)明還涉及包含至少一種如上所定義的組合和必要時其它藥物活性物質(zhì)的藥物。
本發(fā)明還涉及如上所定義的組合在制備用于治療和預(yù)防上述疾病、尤其是病毒性疾病特別是乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
除非另有說明，否則在下列實施例中的百分比都是按重量計的。實施例1.制備實施例實施例1N-(4-氟-3-甲基苯基)-5-異丙基-3-甲基異噁唑-4-甲酰胺
將10.97g(69.3mmol)異丁?；宜嵋阴ズ?.93g(69.3mmol)吡咯烷在50ml甲苯中的溶液在具有脫水器的裝置中加熱回流3小時。然后減壓除去甲苯，將殘余物溶解在5.73g(76.3mmol)硝基乙烷、28ml(201mmol)三乙胺和120ml氯仿的混合物中。將該溶液冷卻至5℃，滴加11.7g(76.3mmol)三氯氧化磷在20ml氯仿中的溶液。加入完成后，將該混合物在室溫再攪拌15小時，并倒入100ml冰水中。分離出有機相，依次用6M鹽酸、5％濃度的氫氧化鈉溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，并用硫酸鈉干燥。通過蒸餾除去溶劑，通過硅膠色譜純化(流動相為二氯甲烷)，獲得了7.52g(55％)5-異丙基-3-甲基異噁唑-4-甲酸乙酯，為無色油狀物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ＝1.28(d，6H)ppm，1.31(t，3H)ppm，2.35(s，3H)ppm，3.71(五重峰，1H)ppm，4.27(q，2H)ppm.
將7.5g(38.0mmol)該酯、70ml乙醇、20ml水和3.04g(76.1mmol)氫氧化鈉的混合物加熱回流2小時。冷卻后，通過減壓蒸餾除去大部分乙醇。用濃鹽酸將水相酸化，然后用二氯甲烷萃取數(shù)次。用硫酸鈉將合并的萃取液干燥，并除去溶劑。將殘余物與石油醚攪拌。通過過濾和減壓干燥分離出了5.13g(80％)5-異丙基-3-甲基異噁唑-4-甲酸。
1H-NMR(200MHz，DMSO-D6)δ＝1.25(d，6H)ppm，2.60(s，3H)ppm，3.39(五重峰，1H)ppm.MS(DCI/NH3)170[M+H]+.
向2g(11.8mmol)上述酸中加入7.03g(59.1mmol)亞硫酰氯。在攪拌下將該混合物加熱回流直至不再有氣體釋放出來(約1小時)。減壓除去亞硫酰氯，所得酰氯(棕色油狀物)不用純化直接用于隨后的反應(yīng)。
將56.3mg(0.3mmol)酰氯、37.5mg(0.3mmol)4-氟-3-甲基苯胺和2.4ml 1，2-二氯乙烷的混合物與124mg嗎啉代甲基-聚苯乙烯(負(fù)載3.69mmol/g)混合，并在室溫攪拌16小時。過濾出樹脂，并用二氯甲烷洗滌。減壓除去揮發(fā)性組分，獲得了80mg (96％)N-(4-氟-3-甲基苯基)-5-異丙基-3-甲基異噁唑-4-甲酰胺，為無色固體。
LC-MS(C18柱，50×2.1mm，3.5μm；梯度乙腈+0.1％甲酸[A]，水+0.1％甲酸[B]至4分鐘A/B＝1∶9，4-6分鐘A/B＝9∶1；流速0.5ml/分鐘；離子化ESI正極(Ionisierung ESI positiv))Rt4.3分鐘，m/z276[M]+。實施例2N-(4-氟-3-甲基苯基)-3，5-二甲基異噁唑-4-甲酰胺
將2.53g(18.8mmol)4-氟-3-甲基苯胺和2.88ml(20.7mmol)三乙胺在30ml二氯甲烷中的溶液冷卻至0℃，并滴加3.0g(18.8mmol)3，5-二甲基異噁唑羰酸酰氯在10ml二氯甲烷中的溶液。將該溶液在0℃再攪拌1小時，然后依次用1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鈉將有機相干燥，并減壓除去揮發(fā)性組分。通過硅膠色譜純化剩余的殘余物(二氯甲烷/乙酸乙酯梯度)。獲得了N-(4-氟-3-甲基苯基)-3，5-二甲基異噁唑-4-甲酰胺，為無色固體(4.0g，86％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ＝2.30(s，3H)ppm，2.51(s，3H)ppm，2.67(s，3H)ppm，6.97(t，1H)ppm，7.23(m，1H)ppm，7.41(m，1H)ppm.MS(DCI/NH3)249(M+H)+.實施例3N-(4-氟-3-甲基苯基)-3，5-二甲基異噁唑-4-硫代甲酰胺
將100mg(0.40mmol)N-(4-氟-3-甲基苯基)-3，5-二甲基異噁唑-4-甲酰胺、80mg(0.20mmol)Lawesson試劑和5ml甲苯的混合物在90℃加熱1小時。通過減壓蒸餾除去甲苯，然后通過硅膠色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯梯度)。獲得了N-(4-氟-3-甲基苯基)-3，5-二甲基異噁唑-4-硫代甲酰胺，為無色固體(106mg，100％)。1H-NMR(200MHz，DMSO-D6)δ＝2.26(s，3H)ppm，2.32(s，3H)ppm，2.52(s，3H)ppm，7.22(t，1H)ppm，7.67(m，2H)ppm，11.65(s，br，1H)ppm.MS(DCI/NH3)265(M+H)+.
下列實施例的化合物是按照類似于實施例1-3的方法合成的。LCMS方法方法AC18柱，150×2.1mm，5μm；梯度乙腈+0.1％甲酸[A]，水+0.1％甲酸[B]至9分鐘A/B＝1∶9，9-10.1分鐘A/B＝9∶1；流速0.5ml/分鐘；烘箱溫度40℃，UV檢測210-350nm，離子化ESI正極方法BC18柱，50×2.1mm，3.5μm；梯度乙腈+0.1％甲酸[A]，水+0.1％甲酸[B]至4分鐘A/B＝1∶9，4-6分鐘A/B＝9∶1；流速0.5ml/分鐘；烘箱溫度40℃，UV檢測208-400nm，離子化ESI正極方法CC18柱，150×2.1mm，5μm；梯度乙腈[A]，0.01N鹽酸[B]，水[C]至4分鐘A/B/C＝10∶45∶45，4-9分鐘A/B/C＝90∶5∶5；流速0.6ml/分鐘；烘箱溫度40℃，UV檢測210nm，離子化ESI正極
實施例32N-[(3，5-二甲基-4-異噁唑基)甲基]-4-氟-3-甲基苯胺
在氬氣氛下，將500mg(2.01mmol)實施例2化合物溶解在30ml四氫呋喃中，在0℃加入0.65g(8.56mmol，4.28ml)硼烷/二甲基硫醚絡(luò)合物。然后將該混合物加熱煮沸2小時。加入4.13ml1N鹽酸，并將該混合物在回流狀態(tài)下再攪拌1小時。冷卻至室溫，加入12.5ml 0.5M氫氧化鈉溶液，然后用乙酸乙酯萃取，并用飽和氯化鈉溶液洗滌有機相。用硫酸鎂將其干燥，通過蒸餾除去溶劑。然后通過硅膠色譜純化殘余物(1.二氯甲烷，2.環(huán)己烷∶乙酸乙酯6∶1)，并重結(jié)晶。以54％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(0.253g)。MS(EI/POS)234[M+H]+1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ＝2.22(d，3H)ppm；2.27(s，3H)ppm；2.38(s，3H)ppm，3.30(寬s，1H)ppm；3.95(s，2H)ppm；6.35-6.50(m，2H)ppm；6.85(t，1H)ppm.
下列實施例33是按照類似于實施例32的方法，使用實施例30的化合物作為原料制得的。實施例334-氟-N-[(5-異丙基-3-丙基-4-異噁唑基)甲基]-3-甲基苯胺
產(chǎn)率13％MS(DCI/NH3)＝291[M+H]+，308[M+NH4]+1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝0.95(t，3H)ppm；1.33(d，6H)ppm；1.60-1.80(m，2H)ppm；2.21(d，3H)ppm；2.70(t，2H)ppm；2.95-3.11(m，1H)ppm；3.22(寬s，1H)ppm；3.95(s，2H)ppm；6.37-6.50(m，2H)ppm；6.86(t，1H)ppm.實施例34步驟A3，5-二甲基-4-異噁唑胺
將12.00g(84.44mmol)3，5-二甲基-4-硝基異噁唑加到430ml水中，并加入106.15g(1.984mol)氯化銨。在4℃，用2小時加入46.93g(7.17mol)鋅，向該反應(yīng)溶液中加入乙酸乙酯，將有機相經(jīng)由硅藻土過濾。用硫酸鎂干燥后，通過蒸餾除去溶劑，以86％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(8.10g)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝2.20(s，3H)ppm；2.28(s，3H)ppm；2.51(寬s，2H)ppm.步驟BN-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)-N’-(4-氟-3-甲基苯基)脲
將1.25g(10.00mmol)3-甲基-4-氟苯胺溶解在40ml二氯甲烷中，加入4.29g(20.00mmol)1，8-二(二甲基氨基)萘。在0℃滴加0.72ml(6.00mmol)氯甲酸三氯甲酯(置于10ml二甲基甲烷中)，并將該混合物在室溫攪拌1小時。然后用50ml二氯甲烷稀釋，并用冰水、1N鹽酸和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。用硫酸鎂干燥后，在濾液中加入1.12g(10.00mmol)步驟A的胺，并將該混合物加熱煮沸4小時。抽濾出沉淀，用二氯甲烷洗滌，并用乙醇重結(jié)晶。以27％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(0.71g)。MS(DCI/NH3)264[M+H]+1H-NMR(200MHz，D6-DMSO)δ＝2.10(s，3H)ppm；2.20(d，3H)ppm；2.26(s，3H)ppm；7.00(t，1H)ppm；7.28-7.30(m，1H)ppm；7.34(dd，1H)ppm；7.68(寬s，1H)ppm；8.72(寬s，1H)ppm.實施例35N-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)-N’-(4-氟-3-甲基苯基)硫脲
將1.25g(10.00mmol)3-甲基-4-氟苯胺溶解在50ml甲苯中，并加入2.18g(11.00mmol)N，N’-硫代羰基二咪唑。然后將該混合物加熱煮沸45分鐘。冷卻至50℃后，加入1.12g(10.00mmol)實施例34(步驟A)的化合物，并將該反應(yīng)溶液在70℃攪拌4小時。通過蒸餾除去溶劑后，將殘余物與乙酸乙酯攪拌，抽濾出晶體，并用乙醇重結(jié)晶。以54％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(1.50g)。MS(DCI/NH3)280[M+H]+1H-NMR(200MHz，D6-DMSO)δ＝2.10(s，3H)ppm；2.20(d，3H)ppm；2.25(s，3H)ppm；7.05-7.18(m，1H)ppm；7.18-7.38(m，2H)ppm；8.95(寬s，1H)ppm；9.80(寬s，1H)ppm.實施例363-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)-N-(4-氟-3-甲基苯基)丙酰胺
將1.00g(7.99mmol)4-氟-3-甲基苯胺溶解在20ml二氯甲烷中，加入1.21g(11.99mmol)三乙胺。在0℃，加入1.50g(7.99mmol)3-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)丙酰氯在10ml二氯甲烷中的溶液。將該混合物在0℃攪拌1小時，然后用水、1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌。用硫酸鎂干燥，然后經(jīng)由硅膠過濾，將濾液濃縮，除去殘余物，并用乙酸乙酯/正戊烷重結(jié)晶。以54％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(1.19g)。熔點136-137℃。實施例37N-[3-(3，5-二甲基-4-異噁唑基)丙基]-N-(4-氟-3-甲基苯基)胺
將0.50g(1.81mmol)實施例3化合物溶解在30ml四氫呋喃中，在0℃加入0.58g(7.69mmol)硼烷/二甲基硫醚絡(luò)合物。在回流狀態(tài)下攪拌2小時后，并將該混合物再冷卻至0℃，加入3.71ml1N鹽酸后，加熱煮沸1小時。在室溫加入11ml1N氫氧化鈉溶液，用乙酸乙酯萃取，然后用飽和氯化鈉溶液洗滌。用硫酸鎂干燥后，通過蒸餾除去溶劑，通過快速硅膠色譜純化(1.環(huán)己烷，2.環(huán)己烷/乙酸乙酯5∶1，2∶1)，用乙酸乙酯/正戊烷重結(jié)晶，以58％的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)化合物(0.273g)。熔點74-76℃。2.應(yīng)用實施例
本發(fā)明化合物的抗病毒活性是按照M.A.Sells等人，Proc.Natl.Acad.Sci.84，1005-1009(1987)和B.E.Korba等人，AntiviralResearch 19，55-70(1992)描述的方法確定的。
在96孔微量滴定板中進行抗病毒測試。向微量滴定板的第一豎行中僅加入生長培養(yǎng)基和HepG2.2.15細(xì)胞。該行用作病毒對照。
首先將測試化合物的貯備液(50mM)溶解在DMSO中，在HepG2.2.15生長培養(yǎng)基中制備進一步的稀釋液。在各種情況下通常將測試濃度為100μM(第一個測試濃度)的本發(fā)明化合物吸移到微量滴定板的第二豎行中，然后用生長培養(yǎng)基+2％胎牛血清進行稀釋，每次稀釋2倍，稀釋210倍(25μl)。
這樣微量滴定板的每個孔含有225μl HepG2.2.15細(xì)胞在生長培養(yǎng)基+2％胎牛血清中的懸浮液(5×104個細(xì)胞/ml)。
將測試混合物在37℃和5％CO2(v/v)條件下培養(yǎng)4天。
然后抽吸出上清液并棄去，把225μl新制備的生長培養(yǎng)基加到各孔中。再一次加入本發(fā)明化合物，其中都是以10倍濃縮的溶液形式加入的，溶液體積為25μl。將該混合物再培養(yǎng)4天。
在收集上清液或細(xì)胞以測定抗病毒活性之前，用光學(xué)顯微鏡或通過生物化學(xué)檢測法(例如Alamar-Blue染色或臺盼藍(lán)染色)測定HepG2.2.15細(xì)胞的細(xì)胞毒性變化。
然后收集上清液，并真空吮吸到覆蓋有尼龍膜的96孔斑點印跡室上(依據(jù)生產(chǎn)商的使用說明)。測定細(xì)胞毒性
在例如光學(xué)顯微鏡下通過測定細(xì)胞形態(tài)變化來確定HepG2.2.15細(xì)胞中測試物誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制變化。可通過觀察例如細(xì)胞溶解、空泡形成或改變的細(xì)胞形態(tài)觀測到與未處理細(xì)胞相比的測試物誘導(dǎo)的HepG2.2.15細(xì)胞改變。50％細(xì)胞毒性(Tox.-50)表示有50％細(xì)胞表現(xiàn)出與相應(yīng)的細(xì)胞對照相似的形態(tài)。
還用其它宿主細(xì)胞，例如HeLa細(xì)胞、人外周血液原代細(xì)胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系例如H-9細(xì)胞測定一些本發(fā)明化合物的相容性。
本發(fā)明化合物一般耐受高達(dá)10μM的濃度(Tox.-50)。測定抗病毒活性
將上清液或細(xì)胞轉(zhuǎn)移到斑點裝置(上文)的尼龍膜上后，把HepG2.2.15細(xì)胞的上清液變性(1.5M NaCl/0.5N NaOH)、中和(3MNaCl/0.5M Tris HCl，pH7.5)和洗滌(2×SSC)。通過將該濾器在120℃培養(yǎng)2-4小時，DNA被烘烤到了該膜上。DNA雜交
通常用非放射性地高辛配基(Digoxigenin)標(biāo)記的乙型肝炎特異性DNA探針來測定該尼龍濾器上被處理的HepG2.2.15細(xì)胞的病毒DNA，其中每次都是依據(jù)生產(chǎn)商的使用說明將所述探針用地高辛配基標(biāo)記、純化和用于雜交。
在5×SSC、1×阻斷試劑、0.1wt％N-月桂酰肌氨酸、0.02wt％SDS和100μg青魚精子DNA中進行預(yù)雜交和雜交。在60℃預(yù)雜交30分鐘，用20-40ng/ml地高辛配基化的變性HBV特異性DNA在60℃特異性雜交14小時。然后洗滌濾器。通過地高辛配基抗體測定HBV DNA
依據(jù)生產(chǎn)商的說明通過免疫學(xué)方法測定地高辛配基標(biāo)記的DNA
將濾器洗滌，并在阻斷劑中預(yù)雜交(依據(jù)生產(chǎn)商的說明)。然后用連接在堿性磷酸酯酶上的抗-DIG抗體將濾器雜交30分鐘。洗滌后，加入堿性磷酸酯酶的底物CSPD，與濾器一起培養(yǎng)5分鐘，然后包在塑料膜中，并在37℃再培養(yǎng)15分鐘。通過將濾器露置于X-射線膜上(根據(jù)信號強度培養(yǎng)10分鐘-2小時)來顯現(xiàn)出乙型肝炎特異性DNA的化學(xué)發(fā)光信號。
半最大抑制濃度(IC-50，50％抑制濃度)確定為，與未處理的樣本相比乙型肝炎特異性帶由本發(fā)明化合物減少50％時的濃度。
令人驚奇的是，用本發(fā)明化合物處理產(chǎn)生乙型肝炎病毒的HepG2.2.15細(xì)胞使得細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中的病毒DNA減少了或者使得細(xì)胞內(nèi)病毒DNA減少了，其中病毒DNA是以病毒顆粒形式從細(xì)胞釋放到細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中的。
活性數(shù)據(jù)
本發(fā)明化合物對病毒表現(xiàn)出預(yù)料不到的有價值的效果。令人驚奇的是，本發(fā)明化合物具有抗乙型肝炎(HBV)的抗病毒活性，并且適于治療病毒引起的疾病，特別是急性和慢性持續(xù)性HBV病毒感染。HBV引起的慢性病毒性疾病可導(dǎo)致嚴(yán)重程度不等的病理狀態(tài)；眾所周知，在很多情況下，慢性乙型肝炎病毒感染會導(dǎo)致肝硬化和/或肝細(xì)胞癌。
權(quán)利要求
1.下式化合物
其中R1和R2彼此獨立地為任選被一個或多個鹵素原子取代的烷基，X是選自下列的二價基團C＝Y(jié)、-N(R4)-C(＝Y(jié))-、-CH2-或式-(CH2)nC(＝Y(jié))-所示基團，n是1-4的整數(shù)，R3和R4彼此獨立地為氫或任選被鹵素取代的烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是芳基或6-元雜芳基，所述基團可任選被1-3個彼此獨立地選自下列的基團取代鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基、烷氧基羰基、氨基羰基氨基、一-和二烷基氨基、氰基、氨基、一-和二烷基氨基羰基—對于鄰位取代，被選自鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基的基團取代。
2.權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1和R2彼此獨立地為任選被鹵素取代的C1-C8烷基，X是選自C＝Y(jié)和CH2的二價基團，R3和R4彼此獨立地為H或任選被鹵素取代的C1-C6-烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是苯基、吡啶基或嘧啶基，所述基團可任選被1-3個選自下列的基團取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷氧基羰基、氨基甲?；?、一-C1-C6-烷基氨基羰基、二-C1-C6-烷基氨基羰基、氰基—對于鄰位取代，被選自鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷硫基的基團取代。
3.權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1和R2彼此獨立地為C1-C6烷基或三氟甲基，X是C＝Y(jié)，R3和R4彼此獨立地為氫、或C1-C6-烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是單取代-三取代的苯基或吡啶基，其取代基彼此獨立地選自烷基、鹵素、CF3。
4.權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1和R2彼此獨立地為C1-C6烷基或三氟甲基，X是C＝Y(jié)，R3和R4彼此獨立地為氫或C1-C6-烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是二取代的苯基或吡啶基，其取代基彼此獨立地選自烷基、鹵素、CF3和苯基。
5.權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1和R2彼此獨立地為C1-C6烷基或三氟甲基，X是C＝Y(jié)，R3和R4彼此獨立地為氫或甲基，Y是氧原子，且A是3-甲基-4-氟-苯基或3-氯-4-氟-苯基。
6.選自實施例1、2、和4-9的化合物的化合物。
7.制備權(quán)利要求1-6的式(I)化合物的方法，其中R1-R3和A具有權(quán)利要求1-6中給出的含義，X是C＝Y(jié)或式-(CH2)nC(＝Y(jié))-所示基團，Y是氧原子，且n是1-4的整數(shù)，包括將下式所示的酰氯
其中R1和R2具有權(quán)利要求1-6中給出的含義，且X和Y具有上述含義，與式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。
8.制備式(I)化合物的方法，其中R1-R3和A具有權(quán)利要求1-4中給出的含義，X是C＝Y(jié)，且Y是硫原子，包括用Lawessons試劑處理這樣的式(I)化合物，其中R1-R3和A具有上述含義，X是C＝Y(jié)，且Y是氧原子。
9.制備式(I)化合物的方法，其中R1-R3和A具有權(quán)利要求1或2中給出含義，且X是CH2，包括將這樣的式(I)化合物還原，其中R1-R3和A具有上述含義，X是C＝Y(jié)，且Y是氧原子。
10.制備式(I)化合物的方法，其中R1和R4與A具有權(quán)利要求1中給出的含義，和X是-N(R4)-C(＝Y(jié))-，且Y是氧原子，包括將下式化合物
其中R1和R2具有上述含義，與羰基供體和式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。
11.制備式(I)化合物的方法，其中R1和R4與A具有權(quán)利要求1中給出的含義，X是-N(R4)-C(＝Y(jié))-，且Y是硫原子，包括將下式化合物
其中R1和R2具有上述含義，與硫代羰基供體和式NHAR3胺反應(yīng)，其中A和R3具有上述含義。
12.下列組分的組合
A)至少一種異噁唑化合物，
B)至少一種不同于A的HBV-抗病毒活性物質(zhì)，和必要時
C)至少一種免疫調(diào)節(jié)劑。
13.權(quán)利要求12的組合，其中所述異噁唑化合物相當(dāng)于下式
其中R1和R2彼此獨立地為任選被一個或多個鹵素原子取代的烷基，X選自下列的二價基團C＝Y(jié)、-N(R4)-C(＝Y(jié))-、-CH2-，R3和R4彼此獨立地為氫或烷基，Y是氧原子或硫原子，且A是芳基或雜芳基，所述基團可任選被1-3個彼此獨立地選自下列的基團取代鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基、烷氧基羰基、氨基羰基氨基、一-和二烷基氨基、氰基、氨基、一-和二烷基氨基羰基。
14.權(quán)利要求12和13的組合，其中組分B包含至少一種下式所示二氫嘧啶
或其異構(gòu)形式
和/或它們的鹽，其中R1是苯基、呋喃基、噻吩基、三唑基、吡啶基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、或下式所示基團
或
其中上述環(huán)系可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次或多次鹵素、三氟甲基、硝基、氰基、三氟甲氧基、羧基、羥基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷氧基羰基和C1-C6-烷基，其中所述烷基又可被具有6-10個碳原子的芳基或鹵素取代，并且上述環(huán)系可任選被-S-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-CF3和-A-CH2-R11取代，其中R6是任選被鹵素取代的苯基，R7-R10彼此獨立地為氫、苯基、羥基取代的苯基、羥基、C1-C6-酰基或C1-C6-烷基，其中所述烷基又可被羥基、C1-C6-烷氧基羰基、苯基或羥基取代的苯基取代，A是基團-O-、-S-、-SO-或-SO2-，R11是苯基，所述苯基任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次至多次鹵素、硝基、三氟甲基、C1-C6-烷基和C1-C6-烷氧基，R2是指式-XR12或-NR13R14所示基團，其中X是單鍵或氧，R12是氫，直鏈或支鏈C1-C6-烷氧基羰基，直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和C1-C8-烴基，所述烴基可任選含有1或2個相同或不同的選自下列的雜鏈單元-O-、-CO-、-NH-、-N-(C1-C4-烷基)-、-S-或-SO2-，并且所述烴基可任選被下列基團取代鹵素、硝基、氰基、羥基、具有6-10個碳原子的芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基、雜芳基或式-NR15R16基團，其中R15和R16彼此獨立地為氫、芐基或C1-C6-烷基，R13和R14彼此獨立地為氫、C1-C6-烷基或具有3-6個碳原子的環(huán)烷基，R3是氫、氨基或下式所示基團
或者是甲酰基、氰基、羥基取代的C1-C6-烷硫基、三氟甲基或吡啶基，或者是具有最高達(dá)8個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和烴基，所述烴基可任選被相同或不同的下列基團取代一次或多次具有6-10個碳原子的芳氧基、疊氮基、鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6-烷氧基羰基、5-元-7-元雜環(huán)、C1-C6-烷硫基或C1-C6-烷氧基(其中所述烷硫基或烷氧基又可被疊氮基、氨基、羥基取代)和/或基團-(CO)a-NR17R18，其中a是0或1，R17和R18彼此獨立地為氫或具有6-10個碳原子的芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基或C1-C6-烷基，所述基團任選被C1-C6-烷氧基羰基、氨基、羥基、苯基或芐基取代，所述苯基或芐基任選被羥基、羧基、C1-C6-烷基或C1-C6-烷氧基相同或不同地取代一次或多次，和/或C1-C6-烷基任選被-NH-CO-CH3或-NH-CO-CF3取代，或者R17和R18與它們所連接的氮原子一起是嗎啉基、哌啶基或吡咯烷基環(huán)，或者R3是任選被甲氧基取代的苯基，或者R2和R3一起是下式所示基團
R4是氫、C1-C4-烷基、C2-C4-鏈烯基、苯甲酰基或具有2-6個碳原子的?；瑑?yōu)選氫、甲基、苯甲?；駽2-C6酰基，且R5是吡啶基、嘧啶基或吡嗪基，所述基團分別可被相同或不同的下列取代基取代最高達(dá)3次鹵素、羥基、氰基、三氟甲基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷基、C1-C6-烷硫基、烷氧羰基、C1-C6-酰氧基、氨基、硝基、一-或二-C1-C6-烷基氨基。
15.權(quán)利要求14的組合，其中組分B包含至少一種下式化合物
其異構(gòu)形式和/或其鹽。
16.權(quán)利要求14的組合，其中組分B包含至少一種下式化合物
和其異構(gòu)形式
和/或它們的鹽，其中R1是苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基或下式所示基團
或
其中上述環(huán)系可任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次或多次鹵素、三氟甲基、硝基、氰基、三氟甲氧基、羧基、羥基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷氧基羰基和C1-C6-烷基，其中所述烷基又可被具有6-10個碳原子的芳基或鹵素取代，和/或上述環(huán)系任選被-S-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-CF3和-A-CH2-R11取代，其中R6是任選被鹵素取代的苯基，R7-R10彼此獨立地為氫、苯基、羥基取代的苯基、羥基、C1-C6-?；駽1-C6-烷基，其中所述烷基又可被羥基、C1-C6-烷氧基羰基、苯基或羥基取代的苯基取代，A是基團-O-、-S-、-SO-或-SO2-，R11是苯基，所述苯基任選被選自下列的相同或不同的取代基取代一次至多次鹵素、硝基、三氟甲基、C1-C6-烷基和C1-C6-烷氧基，R2是指式-OR12或-NR13R14所示基團，其中R12是氫，C1-C6-烷氧基羰基，或直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和C1-C8-烴基，所述烴基任選含有1或2個相同或不同的選自下列的雜鏈單元-O-、-CO-、-NH-、-N-(C1-C4-烷基)-、-S-和-SO2-，并且所述烴基任選被下列基團取代鹵素、硝基、氰基、羥基、具有6-10個碳原子的芳基或具有6-10個碳原子的芳烷基、雜芳基或式-NR15R16基團，其中R15和R16彼此獨立地為氫、芐基或C1-C6-烷基，R13和R14彼此獨立地為氫、C1-C6-烷基或具有3-6個碳原子的環(huán)烷基，R3是氫、氨基或下式所示基團
或者是甲?；?、氰基、羥基取代的C1-C4-烷硫基、三氟甲基，或具有最高達(dá)8個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和烴基，所述烴基任選被相同或不同的下列基團取代一次或多次具有6-10個碳原子的芳氧基、疊氮基、氰基、羥基、羧基、C1-C6-烷氧基羰基、5-元-7-元雜環(huán)、C1-C6-烷硫基或C1-C6-烷氧基(其中所述烷硫基或烷氧基又可被疊氮基、氨基或羥基取代)和/或基團-(CO)a-NR17R18，其中a是0或1，R17和R18彼此獨立地為氫或芳基、具有6-10個碳原子的芳烷基或C1-C6-烷基，所述基團任選被C1-C6-烷氧基羰基、氨基、羥基、苯基或芐基取代，所述苯基或芐基任選被羥基、羧基、C1-C6-烷基或C1-C6-烷氧基相同或不同地取代一次或多次，和/或C1-C6-烷基任選被-NH-CO-CH3或-NH-CO-CF3取代，或者R17和R18與它們所連接的氮原子一起是嗎啉基、哌啶基或吡咯烷基環(huán)，D是氧原子或硫原子，且R5是氫、鹵素或具有最高達(dá)6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
17.權(quán)利要求12-16的組合，其中組分B包含至少一種HBV聚合酶抑制劑。
18.權(quán)利要求12-16的組合，其中組分B包含拉米夫定。
19.權(quán)利要求12-16的組合，其中組分B包含至少一種下式化合物和/或其鹽
其中R1和R2彼此獨立地為C1-C4-烷基，或者與它們所連接的氮原子一起形成具有5-6個環(huán)原子、且環(huán)原子包括碳和/或氧的環(huán)，R3-R12彼此獨立地為氫、鹵素、C1-C4-烷基、任選取代的C1-C4-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基，R13是氫、C1-C4-烷基、C1-C7-?；蚍纪榛?，且X是鹵素或任選取代的C1-C4-烷基。
20.權(quán)利要求12-19的組合，其中組分B包含(i)二氫嘧啶和/或(ii)HBV聚合酶抑制劑。
21.權(quán)利要求12-19的組合，其中組分B包含至少一種下式化合物和/或其鹽
其中R1和R2彼此獨立地為C1-C4-烷基，或者與它們所連接的氮原子一起形成具有5-6個環(huán)原子、且環(huán)原子包括碳和/或氧的環(huán)，R3-R12彼此獨立地為氫、鹵素、C1-C4-烷基、任選取代的C1-C4-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基，R13是氫、C1-C4-烷基、C1-C7-酰基或芳烷基，且X是鹵素或任選取代的C1-C4-烷基。
22.權(quán)利要求21的組合，其中X是氯，A是1-哌啶基，且Y和Z分別是苯基。
23.權(quán)利要求21-22的組合，其中免疫調(diào)節(jié)劑包含干擾素。
24.下列組分的組合A)至少一種異噁唑，B)(i)至少一種二氫嘧啶化合物，(ii)拉米夫定，和必要時C)至少一種干擾素。
25.制備權(quán)利要求12-24的組合的方法，其特征在于，以合適的方式將組分A、B和必要時C組合在一起或者配制在一起。
26.用于控制疾病的權(quán)利要求1-6的化合物和權(quán)利要求12-24的組合。
27.包含至少一種權(quán)利要求1-6的化合物或至少一種權(quán)利要求12-24的組合以及必要時其它藥物活性物質(zhì)的藥物。
28.權(quán)利要求1-6的化合物或權(quán)利要求12-24的組合在制備用于治療和預(yù)防病毒性疾病的藥物中的應(yīng)用。
29.權(quán)利要求28的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是在制備用于治療和預(yù)防乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
異噁唑化合物是非常有效的抗病毒劑。異噁唑化合物、二氫嘧啶化合物和/或拉米夫定，和任選地干擾素的組合抑制HBV病毒效力好于常規(guī)治療劑。(I)R1，R2＝(鹵)烷基，X＝二價基團，A＝芳基或雜芳基和R3＝H或(鹵)烷基。
文檔編號C07D261/08GK1406233SQ0180576
公開日2003年3月26日 申請日期2001年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月28日
發(fā)明者M·布蘭茲, S·尼科利克, P·埃肯伯格, M·保澤, J·考倫, A·佩森斯, E·格雷夫, O·韋伯, S·洛特曼, K·-H·施萊默 申請人:拜爾公司