專利名稱：用于檢測(cè)Chlamydophila abortus感染的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)一種或多種Chlamydophila abortus特異抗體具有結(jié)合親和力的化合物及其在Chlamydophila abortus感染的診斷中的使用。更具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及化合物用于檢測(cè)C.abortus特異抗體的使用，它可以在診斷上用于鑒定C.abortus感染。
背景技術(shù)：
衣原體目的成員是專性胞內(nèi)細(xì)菌。在現(xiàn)有4個(gè)科的基礎(chǔ)上，該目最近在分類上經(jīng)歷了較大擴(kuò)充(Everett等人，1999)。最大的科即衣原體科(Chlamydiaceae)包含2個(gè)屬即衣原體屬(Chlamydia)和Chlamydophila，而且這2個(gè)屬目前分別包含3個(gè)和5個(gè)種。衣原體科成員的感染就地理和宿主范圍而言特別廣泛；已經(jīng)由許多宿主物種(包括人、野生和馴養(yǎng)的鳥(niǎo)、有袋動(dòng)物、反芻動(dòng)物、其它哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物)分離得到了衣原體。根據(jù)所涉及的宿主和衣原體的物種和物種亞型，衣原體科成員的感染可能不同的導(dǎo)致肺炎、腸炎、腦炎、結(jié)膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、流產(chǎn)、生殖紊亂、全身性敗血病和死亡；或者可能在臨床上不明顯。
Chlamydophila屬的最重要獸醫(yī)學(xué)成員是Chlamydophilaabortus、Chlamydophila psittaci和Chlamydophila pecorum。Chlamydophila abortus在幾個(gè)國(guó)家(包括英國(guó)、希臘和法國(guó))是綿羊和山羊流產(chǎn)的最常見(jiàn)起因。C.abortus還被認(rèn)為是牛(Holliman等人，1994；Nabeya等人，1991；Piercy等人，1999)和(偶爾)豬(Wollen等人，1990)和人(Buxton，1986)的流產(chǎn)、肺炎和腦炎的起因。
Chlamydophila pecorum(以前稱為貓衣原體(Chlamydiapecorum)；Fukushi和Hirai，1992)在反芻動(dòng)物中甚至比C.abortus更廣泛，而且包含在病原性、所誘導(dǎo)的疾病和所感染的宿主方面不同的幾種亞型。C.pecorum的一種亞型與綿羊的關(guān)節(jié)炎/結(jié)膜炎綜合癥有關(guān)(Hopkins等人，1973；Stephenson等人，1973；Andrews等人，1987)；一種亞型與牛的子宮炎有關(guān)(Wittenberg等人，1993)；一種與牛的腦疹髓炎有關(guān)(Harshfield，1970)；而另一種普遍分布的亞型與綿羊無(wú)明顯癥狀的腸感染有關(guān)(Clarkson和Philips，1997)。
據(jù)報(bào)道，主要存在于鳥(niǎo)中的Chlamydophila psittaci也感染反芻動(dòng)物(Brown等人，1988)。本申請(qǐng)稍后呈現(xiàn)的血清學(xué)證據(jù)指示這種感染可能比當(dāng)前設(shè)想的更常見(jiàn)。
與其它細(xì)菌感染或甚至有些病毒相比，衣原體感染的診斷相對(duì)較難。就傳染介質(zhì)的檢測(cè)而言，采用受感染組織、排泄物或糞便中生物體的顯微鏡觀察，但是很不靈敏。培養(yǎng)需要使用組織培養(yǎng)細(xì)胞或含胚卵、許多實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有的設(shè)備，且涉及費(fèi)力費(fèi)時(shí)的流程。幾種專利方法，諸如“Clearview”(Unipath，貝德福德，英國(guó))和“IDEIA”(DakoDiagnostics，伊利，英國(guó))，是以用于檢測(cè)特定抗原的抗體(多克隆和單克隆)的使用為基礎(chǔ)的。這些方法通常是有效的，盡管可能有相對(duì)較高的假陽(yáng)性檢測(cè)率。更重要的是，它們需要由牧場(chǎng)收集高質(zhì)量的樣品，這常常是不可能的。最后，DNA檢測(cè)方法(聚合酶和連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))，盡管極其靈敏，但是也是昂貴的，因此很少應(yīng)用于獸醫(yī)領(lǐng)域。然而，抗原檢測(cè)方法在獸醫(yī)診斷中的最大缺點(diǎn)可能是它們不能在快速或自動(dòng)化系統(tǒng)中應(yīng)用于大量樣品。
相反，在獸醫(yī)應(yīng)用中，檢測(cè)特異抗體的測(cè)試相對(duì)于檢測(cè)傳染介質(zhì)的測(cè)試具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。一是所用樣品即血液(或其衍生物，血清或血漿)全年都易于獲得和收集。二是可以比較適度的花費(fèi)篩選大量動(dòng)物。最后，血清學(xué)測(cè)試能夠檢測(cè)帶菌動(dòng)物，它們?cè)诨疾『蟊３质芨腥竞蛡魅拘?，但是使用抗原檢測(cè)技術(shù)難以檢測(cè)，因?yàn)樗鼈兺ǔＶ辉谀承┥韺W(xué)狀況下小量分泌討論中的生物體。因此，抗體檢測(cè)測(cè)試是鑒定感染任何指定微生物的動(dòng)物個(gè)體或群體的最有利形式。由于通過(guò)傳染介質(zhì)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)診斷的難度，用于診斷衣原體感染的血清學(xué)測(cè)試的發(fā)展得到了許多關(guān)注，特別是綿羊和山羊(Sting和Hafez，1992；Markey等人，1993；Sanderson等人，1994；Martin，1995；Anderson等人，1995；Griffiths等人，1996；Jones等人，1997)。最常用的血清學(xué)測(cè)試是補(bǔ)體結(jié)合測(cè)試(CFT；Stamp等人，1952)，但是已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多其它測(cè)試，包括間接和競(jìng)爭(zhēng)型酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、直接和間接型免疫熒光測(cè)定法(IFA)、和Western印跡。至今描述用于衣原體抗體的大多數(shù)測(cè)試使用衣原體生物體的一些形式作為抗原，其或是完整的、相對(duì)未處理的實(shí)體(IFA)，煮沸的(CFT)，或是通過(guò)化學(xué)處理消除或大大減少了完整生物體的有些成分的提取物(有些ELISA)。一種新測(cè)試使用衣原體科主要抗原即脂多糖的重組形式(Brade等人，1994；Griffiths等人，1996)。
至今描述的測(cè)試都未能實(shí)現(xiàn)在獸醫(yī)應(yīng)用中區(qū)分C.abortus、C.pecorum和C.psittaci感染所必需的特異性。這是因?yàn)镃.pecorum和C.psittaci與C.abortus共享幾個(gè)抗原決定簇。
術(shù)語(yǔ)“抗原”指完整分子，其部分能夠在感染或注射到動(dòng)物或人體內(nèi)后誘導(dǎo)抗體的形成。術(shù)語(yǔ)“表位”指抗原中誘導(dǎo)抗體形成的精確部分。表位通常包含3-10個(gè)氨基酸，或是直線(“線性”、“順續(xù)”或“連續(xù)”)結(jié)構(gòu)或是通過(guò)完整蛋白質(zhì)分子的折疊成簇形成“構(gòu)象”(或“裝配”或“不連續(xù)”)表位。現(xiàn)在通常不可能解析構(gòu)象表位中氨基酸的三維結(jié)構(gòu)和拓?fù)鋵W(xué)關(guān)系?？乖ǔ＞哂袔讉€(gè)表位，每一個(gè)都能在受感染或受體宿主中誘導(dǎo)不同抗體亞群的形成。
在幾種重要抗原上找到了由C.abortus、C.pecorum和C.psittaci共享的表位，具體地是脂多糖、主要外膜蛋白(MOMP)和大小為大約60kDa的熱休克蛋白(“60hsp”或“hsp60”)。因而，使用包含C.abortus的MOMP、脂多糖和/或60hsp蛋白的“天然”材料(即由微生物自身生成)制劑作為抗原的常規(guī)血清學(xué)測(cè)試將在C.abortus、C.pecorum和C.psittaci之間缺乏特異性。一種解決方法是使用單克隆抗體靶向特定表位的競(jìng)爭(zhēng)形式。然而，競(jìng)爭(zhēng)性血清學(xué)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)化通常是麻煩且困難的，需要高質(zhì)量的單克隆抗體，且只靶向一種表位，除非可使用幾種單克隆抗體來(lái)檢測(cè)不同的特定表位。
血清學(xué)測(cè)試特異性的另一種解決方法使用合成肽作為抗原。例如，現(xiàn)在有商品化的基于肽的測(cè)試用于診斷涉及沙眼衣原體的人類感染(Narvanen等人，1996；Paukku等人，1996；WO 99/00414；US5，516，638；US5，629，167)。然而，使用單一表位測(cè)定法的一個(gè)缺點(diǎn)是特異性常常損害靈敏度，因?yàn)樵谥付ㄈ后w中只有一部分動(dòng)物能夠?qū)我槐砦蛔R(shí)別成異物從而生成針對(duì)它的抗體。因而它們的使用還常常導(dǎo)致顯著且無(wú)法接受的靈敏度損失，因?yàn)槊恳环N肽只在由感染性生物體誘導(dǎo)的數(shù)十、數(shù)百或數(shù)千種抗體中檢測(cè)一個(gè)抗體亞群。因此，很小的肽(20聚體分子量通常是大約2400)意味著它們不太能夠保持相對(duì)于整個(gè)抗原分子的形狀完整性。
因而，本領(lǐng)域仍然缺乏使用簡(jiǎn)單且可靠的流程并以高特異性和靈敏度檢測(cè)C.abortus感染的方法。
發(fā)明詳述依照本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了對(duì)一種或多種Chlamydophilaabortus特異抗體具有結(jié)合親和力且具有如下一般通式的化合物(X)m-[A]-(X)n-[A]v-(X)p-[A]w-(X)q-[A]y-(X)r-[A]z-(X)s其中X是接頭分子；m、n、p、q、r和s代表接頭分子的數(shù)目，且獨(dú)立地是0-15之間的任何整數(shù)；v、w、y和z獨(dú)立地是0或1；且A獨(dú)立的選自下列序列i.TAAANYKii.GTAAANYKiii.TAAANYKTv.GTAAANYKTv.KGSSIAAD
vi.KGSSIAADQ其中所述化合物不包括PTGTAAANYK，VKGSSIAADQ，LVGLIG，AFN，LP，TPT，TG，VK；且化合物不是GSSIAADQ。
本發(fā)明提供了用于檢測(cè)針對(duì)C.abortus的抗體特定亞群的化合物，它們不僅提供了特異性(特別是關(guān)于區(qū)分針對(duì)C.pecorum和C.psittaci的抗體與針對(duì)C.abortus的抗體)，還提供了可接受水平的靈敏度?；衔飪?yōu)選對(duì)C.abortus具有高度特異性的抗體。
上文定義的化合物包含表位序列，所述表位序列誘導(dǎo)針對(duì)C.abortus的抗體的形成，而且所述抗體結(jié)合所述表位序列作為天然抗原即MOMP的一部分。這些序列來(lái)自在衣原體MOMP中發(fā)現(xiàn)的4個(gè)可變區(qū)。術(shù)語(yǔ)“肽”在本文中廣義的指包含通過(guò)肽鍵連接在一起的多個(gè)氨基酸的特定分子，因此在其范圍內(nèi)包括在文獻(xiàn)中有時(shí)可能稱為肽、多肽或蛋白質(zhì)的物質(zhì)(無(wú)論是否通過(guò)共價(jià)鍵與其它模塊結(jié)合，如形成融合蛋白)。
優(yōu)選的是，本發(fā)明的化合物由18-24個(gè)氨基酸組成。與較短構(gòu)建物相比，這種長(zhǎng)度通常獲得增強(qiáng)的反應(yīng)性。更優(yōu)選的是，化合物由20-23個(gè)氨基酸組成。
可以使用一個(gè)或多個(gè)接頭分子來(lái)改變本發(fā)明化合物的長(zhǎng)度。接頭分子可以包含認(rèn)為對(duì)表位反應(yīng)性沒(méi)有直接貢獻(xiàn)的氨基酸殘基。例如，可以使用單個(gè)氨基酸，諸如絲氨酸、賴氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、酪氨酸或精氨酸。優(yōu)選甘氨酸、天冬酰胺、絲氨酸和賴氨酸?？梢允褂冒^(guò)一個(gè)氨基酸的接頭(諸如絲氨酸-甘氨酸基序)。包含接頭分子的化合物的范例是KKKKKKKKKKKGSSIAAD(對(duì)于該化合物，上文一般通式中的X是賴氨酸(K)；m是10；n、p、q、r和s是0；A是“KGSSIAAD”，且v、w、y和z是0)。
接頭分子還可以是例如生物素，它既可作為間隔物，又可作為與例如鏈霉親和素的附著連接。
本發(fā)明的化合物還可包含單個(gè)肽表位的重復(fù)或肽表位的嵌合。這些化合物可以具有上文定義的肽的不間斷序列。因而，在上述一般通式中，n、m、p、q、r和s可以都是0。這些化合物的范例是1)GTAAANYKTGTAAANYKT2)KGSSIAADQKGSSIAADQ在化合物中用接頭隔開(kāi)表位具有確保較好表位清晰度的優(yōu)點(diǎn)。接頭分子還可以是在所代表可變區(qū)段的天然序列中發(fā)現(xiàn)的氨基酸。3個(gè)或更多個(gè)這種氨基酸可以代表輔助表位。
優(yōu)選的是，本發(fā)明的化合物是二聚體；即v是1且w、y和z都是0。
優(yōu)選的是，A是上文的肽(v)(GTAAANYKT)或上文的肽(vi)(KGSSIAADQ)。
優(yōu)選的是，化合物具有通式[X]n-GTAAANYKT-[X]n-GTAAANYKT；其中X是S(絲氨酸)或K(賴氨酸)；或[X]n-KGSSIAADQ-[X]n-KGSSIAADQ；其中X是G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)。
本發(fā)明化合物的特定范例是化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT化合物#2GKGSSIAADQNKGSSIAADQ本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在上文定義的肽中可以進(jìn)行構(gòu)成化合物的一個(gè)或可能多個(gè)氨基酸的替代和/或刪除而不過(guò)多降低表位的反應(yīng)性和/或特異性。若上述肽的這些變體(在功能上等同于本發(fā)明的化合物，但是所包含的氨基酸殘基可能是非天然發(fā)生的、經(jīng)修飾的和/或合成的)受到C.abortus特異抗體的識(shí)別，則它們屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。這些衍生物/同源物形成本發(fā)明的另一個(gè)方面。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到，可以使用合適的掃描技術(shù)來(lái)測(cè)定包含例如單個(gè)氨基酸替代的表位類似物的抗體結(jié)合能力。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知道多種氨基酸具有相似特性。肽中的一個(gè)或多個(gè)這樣的氨基酸常?？梢杂靡环N或多種其它這樣的氨基酸進(jìn)行替代而不消除肽的期望活性。例如，氨基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸常常可以相互替代(具有脂肪族側(cè)鏈的氨基酸)。常常可以相互替代的其它氨基酸包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香族側(cè)鏈的氨基酸)；賴氨酸、精氨酸和組氨酸(具有堿性側(cè)鏈的氨基酸)；天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性側(cè)鏈的氨基酸)；天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺側(cè)鏈的氨基酸)；及半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫側(cè)鏈的氨基酸)。
這種性質(zhì)的替代常常稱為“保守”或“半保守”氨基酸替代。還可以相對(duì)于上文定義的肽進(jìn)行氨基酸刪除和插入。
可以使用任何合適技術(shù)來(lái)提供相對(duì)于上文定義的表位序列摻入了氨基酸變化(替代、刪除或插入)的肽。可以通過(guò)用于合成肽的常規(guī)方法(Shroder和Lubke，1966)、固相肽合成法(Merrifield和Barany，1980)、或用于合成肽的任何其它合適技術(shù)來(lái)制備本發(fā)明的化合物。
這些技術(shù)通常利用固相合成。能夠生成具有特定序列的肽的化學(xué)合成技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化?？梢杂衫鏏pplied Biosystems獲得能夠化學(xué)合成多肽的設(shè)備。如果必需，可以首先合成短肽，然后連接生成較長(zhǎng)的肽。還可以首先生成包含超過(guò)一種相同類型或不同類型的上文定義的肽的較大融合蛋白，然后通過(guò)適當(dāng)技術(shù)進(jìn)行分割，由此生成化合物。
可以將其它氨基酸或其它模塊附著在化合物的任一末端。例如，可以將化合物在氨基末端綴合生物素。如下所述，生物素對(duì)親和素和鏈霉親和素的強(qiáng)親和力能夠?qū)⒒衔锔街诠滔嘀С治镏T如微量滴定板或膠乳顆粒。這可用于下文更加充分描述的本發(fā)明的某些實(shí)施方案。對(duì)化合物的其它可能修飾包括NH2-乙?；虲OOH-末端酰胺化。
可以使用上述技術(shù)以基本純的形式提供本發(fā)明的化合物。因而，本發(fā)明還提供了包含第一個(gè)方面中所列舉的一種或多種化合物的組合物。組合物中的化合物可以是存在的主要成分(即根據(jù)重量/重量測(cè)定，化合物的存在水平超過(guò)總組合物的50％，優(yōu)選超過(guò)75％、超過(guò)90％、或超過(guò)95％)。
在存在針對(duì)其它Chlamydophila物種如Chlamydophila pecorum、Chlamydophila psittaci、沙眼衣原體和Chlamydophila pneumoniae)的抗體時(shí)，本發(fā)明的化合物可以對(duì)針對(duì)C.abortus的抗體具有特異性免疫反應(yīng)性。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠使用本文所述技術(shù)和本領(lǐng)域所知技術(shù)來(lái)確定特定化合物是否對(duì)一種或多種針對(duì)C.abortus的抗體具有結(jié)合親和力。
科學(xué)文獻(xiàn)中已經(jīng)描述了肽在針對(duì)C.abortus的抗體的ELISA中的使用，盡管尚未生產(chǎn)使用這些肽的商品化試劑盒(Kaltenboeck等人，1997；Salti-Montesanto等人，1997)。然而，這兩組工作人員都未指示所述肽的特異性或靈敏度。例如，他們都沒(méi)有使用針對(duì)Chlamydophila其它物種的抗血清來(lái)測(cè)定本文所述表位的特異性。
因而，本發(fā)明的一個(gè)特點(diǎn)是認(rèn)識(shí)到應(yīng)當(dāng)闡明用于診斷C.abortus感染的表位以排除與由Chlamydophila其它物種誘導(dǎo)的抗體具有交叉反應(yīng)性的表位。令人驚訝的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與Chlamydophila其它物種的交叉反應(yīng)性可能是由存在于本文定義的表位序列的N-或C-端的少至一個(gè)氨基酸引起的。
與先前試圖檢測(cè)C.abortus特異抗體的嘗試相反，本發(fā)明提供了特異性及靈敏度。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一個(gè)方面中所列舉的化合物在醫(yī)學(xué)中的用途。術(shù)語(yǔ)“醫(yī)學(xué)”在用于本文時(shí)包括獸醫(yī)領(lǐng)域。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了在受試者受C.abortus感染的診斷中的具體用途，更具體的說(shuō)是在衍生自受試者的生物學(xué)樣品中檢測(cè)針對(duì)C.abortus的抗體。
優(yōu)選的是，受試者是哺乳動(dòng)物，例如人、綿羊、牛、山羊、豬或馬。馴養(yǎng)的寵物也屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
生物學(xué)樣品可以是可能包含針對(duì)C.abortus的抗體的血液、唾液、粘液或其它體液、組織或任何可溶性樣品。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)生物學(xué)樣品中的針對(duì)C.abortus的抗體的方法，包括下列步驟-使樣品接觸本發(fā)明第一個(gè)或第二個(gè)方面中所定義的一種或多種化合物；并-檢測(cè)所述抗體與所述化合物的結(jié)合(如果有的話)。
在要求高度特異性時(shí)，常常使血清學(xué)測(cè)試的靈敏度降低，因?yàn)樘禺愋砸馕吨x擇和由此所用表位數(shù)目、從而所檢查抗體亞群數(shù)目的相應(yīng)減少。為了提供更大數(shù)目的反應(yīng)性位點(diǎn)，從而在維持特異性的同時(shí)提高靈敏度，優(yōu)選一起使用多種化合物。
保持附著其特定抗原(即包含至少一個(gè)表位的合成化合物)的抗體數(shù)目的檢測(cè)和測(cè)量(如果有的話)，提供了可以診斷暴露于C.abortus感染的手段?？梢詥为?dú)或聯(lián)合使用本發(fā)明的化合物。優(yōu)選使用超過(guò)一種、優(yōu)選兩種化合物。測(cè)試的靈敏度(定義為測(cè)試的陽(yáng)性結(jié)果相對(duì)于真實(shí)數(shù)目的比率)極大依賴于所用化合物的組成和數(shù)目以及將它們呈遞給樣品免疫球蛋白的方法。本文所用化合物優(yōu)選對(duì)針對(duì)C.abortus的抗體具有高度特異性。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括使樣品接觸化合物#1和化合物#2的聯(lián)合化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT化合物#2GKGSSIAADQNKGSSIAADQ本發(fā)明的化合物可用于在多種測(cè)試系統(tǒng)中檢測(cè)針對(duì)C.abortus的抗體，包括均質(zhì)和異質(zhì)結(jié)合免疫測(cè)定法。這些測(cè)定法包括酶聯(lián)免疫吸收測(cè)定法(ELISA)(間接和競(jìng)爭(zhēng)形式)、血細(xì)胞凝集測(cè)定法、放射免疫測(cè)定法、乳膠凝集測(cè)定法、熒光極化測(cè)定法、各種類型的生物傳感器(包括安培計(jì)、電化學(xué)和用于檢測(cè)抗體或其復(fù)合物(包括免疫學(xué)復(fù)合物)的其它手段)及其它。
可以將化合物偶聯(lián)其它化合物、大型載體蛋白、固相支持物、膠乳顆?；蛞粤硪环N方式結(jié)合。可以保持其抗原完整性的方式結(jié)合化合物。如上所述，為了將化合物偶聯(lián)固相支持物或另一種分子，可以將額外氨基酸或其它模塊附著于化合物的氨基末端。具體而言，優(yōu)選將化合物在氨基末端綴合生物素。通過(guò)事先用親和素或鏈霉親和素包被固相支持物諸如微量滴定板或膠乳顆粒，生物素對(duì)親和素和鏈霉親和素的強(qiáng)親和力能夠?qū)⒒衔锔街谶@些支持物。還可以通過(guò)NH2-乙?；?或COOH-末端酰胺化來(lái)修飾化合物。
可以將化合物附著于固相支持物。因而，在ELISA系統(tǒng)中，可以將化合物附著于固相支持物，修飾ELISA板用于附著化合物，從而得以維持化合物的抗原完整性。對(duì)固相支持物的附著系統(tǒng)優(yōu)選使用鏈霉親和素與生物素之間的強(qiáng)結(jié)合。依照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室流程，將鏈霉親和素包被到固相支持物如ELISA板上，并將化合物在胺基末端進(jìn)行生物素化。使用鏈霉親和素-生物素作為將化合物附著于固相的手段的一種候選方法是使用采用活化葡聚糖或相似聚合物的適當(dāng)系統(tǒng)；AquabinTM板(M&E，丹麥)代表了這樣一種系統(tǒng)。在這種情況中，優(yōu)選的是附著于固相的第一個(gè)化合物殘基(位于胺基末端)是賴氨酸。
并非文獻(xiàn)中描述的所有方法學(xué)在將本申請(qǐng)所述化合物附著于固相特別是ELISA板時(shí)都有效。例如，發(fā)現(xiàn)Niveleau等人(1995)和Ball等人(1994)描述的系統(tǒng)在結(jié)合以未修飾8聚體存在的表位2時(shí)無(wú)效。
固相包括但不限于聚苯乙烯或聚乙烯微量滴定板、玻璃管或玻璃珠、層析支持物諸如紙、纖維素、纖維素衍生物和硅膠。載體蛋白包括牛血清清蛋白和酶諸如辣根過(guò)氧化物酶。
可以將化合物間接附著于固相以維持其抗原性。因而，可以通過(guò)例如中間分子或任何其它間隔物來(lái)進(jìn)行附著。已經(jīng)描述了將化合物附著于固相表面的不同技術(shù)(Cass和Ligler，1998)。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用于C.abrotus感染的診斷試劑盒，包含-本發(fā)明第一個(gè)或第二個(gè)方面中所定義的一種或多種化合物；和-用于檢測(cè)所述抗體與所述化合物的結(jié)合的至少一種試劑(如果有的話)。
用于檢測(cè)免疫學(xué)復(fù)合物的形成的試劑可以包括下列一種或多種1.G蛋白和/或A蛋白2.單克隆抗體或其部分(Fc或Fab區(qū))和/或多克隆抗體多克隆和單克隆抗體可以是針對(duì)綿羊或山羊免疫球蛋白的?？梢栽诶缤谩⒇i或馬中制備多克隆抗體。
依照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室流程，可以將試劑綴合合適的酶諸如辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。
每個(gè)方面的優(yōu)選特征應(yīng)用于本發(fā)明的所有其它方面。
現(xiàn)在將使用非限制性實(shí)施例例示本發(fā)明。
試驗(yàn)中使用了下列方法和材料。1.肽的合成依照公認(rèn)方法(如Applied Biosystems的430A型肽合成儀的用戶手冊(cè)，1986)生成的合成肽是由提供該項(xiàng)服務(wù)的公司(如Sigma GenosysBiotechnologies(Europe)Ltd.，London Road，Pampisford，Cambs，UKCambridge Research Biochemicals，Gabdrook Park，Northwich，Cheshire，CW9 7RA)獲得的。獲得的肽是凍干形式，純度超過(guò)75％(通過(guò)質(zhì)譜和HPLC確認(rèn))，并在胺基末端進(jìn)行生物素化。2.肽儲(chǔ)液的配制通過(guò)重懸由凍干的肽配制濃度為1mg/ml的儲(chǔ)液。根據(jù)肽的不同，重懸需要去離子蒸餾水(DDW)、溶于DDW的0.1％三氟乙酸、乙酸(各種濃度)、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲亞砜、或其組合。用于化合物#1和#2的優(yōu)選溶劑是水。將儲(chǔ)液分裝成0.5ml體積并維持于-15℃以下的溫度。通過(guò)將化合物#1和#2同時(shí)溶于合適的緩沖液(優(yōu)選碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液pH9.6，見(jiàn)附錄)而獲得這兩種肽的混和液。經(jīng)測(cè)定，在此混和液中化合物#1的最佳濃度是80ng/ml，化合物#2的最佳濃度是140ng/ml。3.用于EIISA測(cè)定法的微量滴定板的制備根據(jù)申請(qǐng)人的經(jīng)驗(yàn)，至少可以使用兩種不同形式的微量滴定板。一種形式使用三苯甲游基活化的葡聚糖，它應(yīng)用于聚苯乙烯板并在板與肽之間形成層(Gregorius等人，1995)。商品化的板(“AquabindTM”)由M&E(丹麥)生產(chǎn)并通過(guò)Life Sciences的Labsystems在英國(guó)銷售。用于這種形式的板的肽未進(jìn)行生物素化或任何形式的修飾，但是根據(jù)申請(qǐng)人的經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)在胺基末端提供賴氨酸殘基可以增強(qiáng)肽與板的附著。第二種形式的板是通過(guò)鏈霉親和素包被進(jìn)行修飾。這種板可以通過(guò)商業(yè)途徑獲得，如Labsystems、Pierce和Warriner?；蛘撸梢杂面溍褂H和素處理未包被的微量滴定板，優(yōu)選其以10μg/ml的濃度溶于碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液(見(jiàn)附錄)。用于結(jié)合鏈霉親和素的優(yōu)選微量滴定板是經(jīng)修飾以提供高蛋白結(jié)合的板，如Dynex Immunlon 2、Greiner High Bind。向每個(gè)孔中加入150μl體積的鏈霉親和素。將板保溫，優(yōu)選于35-37℃達(dá)2小時(shí)，然后甩掉溶液并用PBS緩沖液pH7.4(見(jiàn)附錄)將板清洗3次。將板徹底干燥并保存于4℃直至使用。如下應(yīng)用肽混和液將選定肽的儲(chǔ)液(1mg/ml)在相同體積的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液pH9.6中稀釋至它們的最佳濃度。優(yōu)選的是，化合物#1和#2的使用濃度分別是80μg/ml和140μg/ml。向每個(gè)孔中加入150μl體積的肽混和液。在“對(duì)照化”測(cè)試中，向偶數(shù)欄的所有孔中加入肽混和液，向奇數(shù)欄的所有孔中加入相同體積的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液。在“篩選”測(cè)試中(其中不是每份樣品都使用對(duì)照孔)，向板的所有96個(gè)孔中加入肽混和液。將板保溫，優(yōu)選于4℃達(dá)4-12小時(shí)，然后用PBS/吐溫緩沖液(見(jiàn)附錄)清洗4次，并徹底干燥，優(yōu)選在通風(fēng)櫥中放置4小時(shí)。將包被后的板置于裝有干燥劑的防水袋中，將袋封口，并保存于4℃直至使用。4.ELISA方法將實(shí)施例3中用化合物#1和#2混和液(濃度分別為80ng/ml和140ng/ml)包被的板用于測(cè)試由實(shí)驗(yàn)感染C.abortus的綿羊、知道從未感染C.abortus的綿羊和接種C.abortus不同菌株或C.pecorum不同亞型的綿羊獲得的血清樣品。常規(guī)來(lái)說(shuō)，當(dāng)需要測(cè)試大量的血清時(shí)，推薦在“篩選”板(即所有孔都已經(jīng)用肽包被的板)中進(jìn)行初步測(cè)定。每個(gè)測(cè)試板上包括由接受C.abortus攻擊且隨后展示疾病臨床癥狀、伴隨針對(duì)C.abortus的高抗體效價(jià)的發(fā)展的綿羊獲得的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品。使用標(biāo)準(zhǔn)血清的兩個(gè)稀釋度。采用1/1000稀釋的一個(gè)孔用于指示測(cè)試的成功進(jìn)行(“標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性”)。采用1/7000稀釋的另一個(gè)孔用于指示陽(yáng)性反應(yīng)(“截留(cut-off)”標(biāo)準(zhǔn))將所產(chǎn)生的有色顯影(光密度或OD)高于截留標(biāo)準(zhǔn)所顯示的OD的所有動(dòng)物視作陽(yáng)性。在試劑盒中，在包含防腐劑(ProCin300；Supelco；以1/2000使用)的適當(dāng)穩(wěn)定緩沖液(Dako)中將陽(yáng)性和截留標(biāo)準(zhǔn)預(yù)稀釋至工作濃度，而且在加至測(cè)試板之前不再稀釋。
將測(cè)試血清樣品在血清綴合物稀釋劑(見(jiàn)附錄)中稀釋。測(cè)試試劑盒中提供了稀釋板，它具有很低的蛋白質(zhì)結(jié)合特性。通過(guò)在稀釋板上將15μl血清加至135μl血清綴合物稀釋劑而實(shí)現(xiàn)初步的1/10稀釋。通過(guò)由稀釋板將15μl轉(zhuǎn)移至分配在測(cè)試板每個(gè)孔中的135μl血清綴合物稀釋劑而在測(cè)試板上實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的1/100稀釋(相對(duì)于原始樣品)。這種方法顯示可提供精確且可重復(fù)的稀釋。如果優(yōu)選的話，還可以在以150μl體積加至測(cè)試板之前在螺帽小玻瓶或試管中進(jìn)行血清稀釋。
將測(cè)試和標(biāo)準(zhǔn)血清在測(cè)試板上于室溫(約20℃)保溫15分鐘，然后于37℃保溫30分鐘。然后甩掉板中的溶液并用PBS/吐溫(見(jiàn)附錄)將板清洗4次。
然后加入用于檢測(cè)免疫球蛋白的存在的探針，其上綴合了酶(“綴合物”)。優(yōu)選的是，探針由綴合了馬辣根過(guò)氧化物酶的G蛋白(重組形式，其中消除了結(jié)合清蛋白的模塊；可以由Sigma和Calbiochem獲得)組成，但是可以獲得許多形式的綴合物。這些探針包括A蛋白；針對(duì)提供測(cè)試樣品的物種的免疫球蛋白的單克隆或多克隆抗體。用于綴合探針的另一種常用酶是堿性磷酸酶。然而，就靈敏度和提供低背景顯色(即陽(yáng)性信號(hào)/噪聲”比率很高)而言，發(fā)現(xiàn)綴合了馬辣根過(guò)氧化物酶的重組G蛋白特別有效。將綴合物在血清綴合物稀釋劑(見(jiàn)附錄)中稀釋至適當(dāng)濃度(通常是1/4000-1/5000)，并以150μl體積加至所有孔。將板于37℃保溫30分鐘，然后甩掉溶液，將板用PBS/吐溫(見(jiàn)附錄)清洗4次并干燥。
然后以150μl將于室溫預(yù)熱30分鐘的底物加至所有孔。優(yōu)選的是，底物包含ABTS(2，2’-連氮-二[3-乙基-苯并噻唑啉磺酸(6)])，盡管也可以使用TMB(3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺)或OPD。這兩種底物都可以由幾個(gè)來(lái)源獲得，包括Kirkegaard and Perry Laboratories、Neogen公司和Pierce和Warriner。將板于室溫保溫30分鐘，然后將終止液(1.5％月桂基硫酸鈉用于ABTS；0.2MH2SO4用于TMB)以50μl體積加至所有孔。將板在專門(mén)設(shè)計(jì)用于該目的的分光光度計(jì)即ELISA讀數(shù)儀諸如Dynex MRX上進(jìn)行讀數(shù)(ABTS和TMB分別使用405nm或450nm濾光片)。
篩選測(cè)試之后，推薦將所產(chǎn)生的OD高于截留標(biāo)準(zhǔn)的所有動(dòng)物在對(duì)照板(即每份血清樣品加至兩個(gè)孔，一個(gè)用肽包被，一個(gè)只用碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液處理)上再次測(cè)試。這樣可指示所產(chǎn)生的血清非特異性粘附聚苯乙烯板從而引起假陽(yáng)性反應(yīng)的小部分動(dòng)物。在對(duì)照板中，由肽包被孔OD值減去對(duì)照孔OD值。5.20x PBS的配制試劑(配制5L)
流程1.使用量筒將量取的水倒入燒瓶2.加入磁力攪拌器并將燒瓶置于設(shè)成40℃的熱攪拌器上3.順序加入試劑4.將箔帽/蓋置于瓶頸/瓶口5.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期6.保存于室溫6.1x PBS/吐溫的配制試劑(配制10L)
流程1.量取20x PBS倒入容器2.加入9.5L水3.使用5ml移液管加入吐溫。用PBS沖洗移液管以除去所有的吐溫204.適當(dāng)搖動(dòng)容器5.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期(自配制起1年)6.保存于室溫7.溶液A(0.2M)的配制試劑(配制100ml)
流程1.稱取所需數(shù)量2.使用量筒將量取的水倒入燒瓶3.加入磁力攪拌器并溶解4.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期(自配制起1個(gè)月)5.保存于室溫8.溶液B(0.2M)的配制試劑(配制200ml)
流程1.稱取NaHCO3并置于燒杯中2.向燒杯中加入水3.加入磁力攪拌器并溶解4.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期(自配制起1個(gè)月)5.保存于室溫9.1x碳酸鹽/碳酸氫鹽(CO3/HCO3)緩沖液的配制試劑(配制100ml)
流程1.使用量筒量取水并倒入燒杯2.使用移液管量取所需數(shù)量的溶液A和B并加至燒杯中3.混勻4.檢查pH；若不在pH9.3-9.9的范圍內(nèi)則倒掉5.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期(自配制起1周)6.保存于4℃10.血清和綴合物稀釋劑的配制試劑(配制100ml)
流程1.使用量筒將量取的PBS/吐溫倒入瓶子2.加入奶粉并混勻3.標(biāo)明日期、批號(hào)和有效期(自配制起1周)4.保存于4℃11.用于配制20x終止液(30％月桂基硫酸鈉)的方案和記錄試劑(配制200ml)
流程1.使用量筒將量取的水倒入燒杯2.向水中加入SLS，置于56℃水浴中，并攪動(dòng)直至完全溶解3.倒入250ml量筒并用水加至200ml體積4.倒回最初的燒杯并攪動(dòng)5.以20ml體積分裝到通用瓶中6.標(biāo)明身份、批號(hào)和有效期(自配制起1年)7.保存于室溫8.使用時(shí)，將此20x儲(chǔ)液用試劑級(jí)的水1∶19稀釋至1.5％工作濃度12.化合物的溶解和處理化合物#1和#2都可溶于水。將每一種肽在優(yōu)選溶劑中重懸至濃度1mg/ml。將該儲(chǔ)液以500μl體積分裝至1ml瓶中并保存于-85℃或較不優(yōu)選的-20℃。13.標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性和“截留”血清的生成標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性和截留血清都是由相同的綿羊血清集合組成的。這些血清是由10頭母羊獲得的，這些母羊(i)衍生自經(jīng)Premium Sheep HealthScheme(優(yōu)質(zhì)綿羊健康方案)的鑒定不含C.abortus的羊群；(ii)在妊娠期實(shí)驗(yàn)感染C.abortus；且(iii)隨后經(jīng)歷流產(chǎn)或產(chǎn)生嚴(yán)重感染的胎盤(pán)。最初使用多種測(cè)試法在合并前對(duì)10份血清測(cè)試反應(yīng)性。試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性(在Dako的“加拿大”穩(wěn)定緩沖液中1/1000稀釋)和試劑盒截留標(biāo)準(zhǔn)(在Dako“加拿大”穩(wěn)定緩沖液中1/7000稀釋)的生成詳述于附錄6。14.用于特異性研究的不含特定病原體的羔羊血清
15.用于靈敏度研究的不含特定病原體的羔羊血清
實(shí)施例實(shí)施例1化合物長(zhǎng)度和主要表位以外的表位對(duì)血清學(xué)反應(yīng)性的影響表1顯示了關(guān)于化合物長(zhǎng)度和加入的輔助表位的研究結(jié)果。數(shù)據(jù)例示了化合物長(zhǎng)度對(duì)血清學(xué)反應(yīng)性具有主要影響。它們還證明了幾種表位能夠在可變區(qū)段的天然序列中順序存在。表1中所用化合物的序列化合物2-1生物素-KGSSIAAD化合物2-2生物素-KKKKKKGSSIAAD化合物2-3生物素-KKKKKKKKKKKGSSIAAD化合物2-4生物素-GLIGVKGSSAAD化合物2-5生物素-KKKKKGLIGVKGSSIAAD化合物2-6生物素-AFNLVGLIGVKGSSIAAD化合物2/L生物素-KASSAAFNLVGLIVKGSSIAADQ表1
化合物2-1(8聚體)在這些研究中無(wú)論如何不顯示反應(yīng)性，化合物2-2(13聚體，只因表位與生物素之間的5聚體間隔區(qū)而與2-1不同)顯示的反應(yīng)性是18聚體化合物2-3(因在表位的氨基側(cè)多含5個(gè)賴氨酸殘基而與2-2不同)所展示的大約70％。因而，化合物長(zhǎng)度在決定表位的反應(yīng)性時(shí)是至關(guān)重要的；這些研究指示長(zhǎng)度超過(guò)13聚體的化合物是優(yōu)選的。優(yōu)選的是，它們超過(guò)18聚體。實(shí)施例2氨基酸替代表2顯示了用亮氨酸替代表位2中的異亮氨酸的影響正如化合物2-3與2-9和2-5與2-11之間的比較所示，導(dǎo)致反應(yīng)性略有降低。因而，有可能在本發(fā)明所描述的核心表位內(nèi)進(jìn)行替代而不過(guò)多損失化合物的血清學(xué)反應(yīng)性。表2中所用化合物的序列化合物2-3生物素-KKKKKKKKKKKGSSIAAD化合物2-9生物素-KKKKKKKKKKKKGSSLAAD化合物2-5生物素-KKKKKGLIGVKGSSIAAD化合物2-11生物素-KKKKKGLIGVKGSSLAAD表2用亮氨酸替代C.abortus的MOMP可變區(qū)段2表位2中的異亮氨酸的影響
實(shí)施例3化合物的特異性表3-5概述了關(guān)于化合物(包含或不含額外序列)特異性的研究。
動(dòng)物#28和#37都展示與化合物1-5的反應(yīng)性，與化合物1-6反應(yīng)性較低，而與化合物1/AX沒(méi)有反應(yīng)性。這一觀察結(jié)果的原因更加不清楚。與動(dòng)物#19和#31起作用的TPT基序可能有牽連，但是為什么化合物1-5顯示的反應(yīng)性高于化合物1-6仍然不清楚。1-5中的GKKV區(qū)在1-6中是GKKK；在C.abortus的MOMP序列中沒(méi)有找到這些序列，但是可能存在于其它感染性生物體中。
就此項(xiàng)研究中所用的兩種可變區(qū)段肽而言，只有化合物2/L與來(lái)自動(dòng)物#5、#28和#36的血清發(fā)生反應(yīng)。這些反應(yīng)推測(cè)是由于序列KASSAAFNLVGLI的整個(gè)或部分所引起的。根據(jù)涉及表2的觀察結(jié)果和Kaltenboeck等人(1997)的發(fā)現(xiàn)，KASSA基序是非表位性的，而LVGLIG并且可能AFN都顯得對(duì)化合物的反應(yīng)性有貢獻(xiàn)。AFN和LVGLIG都存在于(鳥(niǎo)類)C.psittaci中。
化合物2-7與來(lái)自動(dòng)物#11(強(qiáng)烈)、#19和#29的血清發(fā)生反應(yīng)，而化合物2/L不發(fā)生反應(yīng)。這些反應(yīng)推測(cè)是由于存在于化合物2-7中且在C.psittaci中也找到的基序LPN引起的。
化合物2/L和化合物2-7都與來(lái)自動(dòng)物#13的血清發(fā)生反應(yīng)，推測(cè)是由于化合物2-7中的LPN基序和化合物2/L中的AFN和/或LVGLIG的雙重識(shí)別引起的。
2-9與2-10之間沒(méi)有真正的差異；因此VS4成分似乎沒(méi)有任何作用。用來(lái)自Z2600、Z2708、2948、3174、A2332的血清看到的交叉反應(yīng)推測(cè)是由于序列GVKGSSIAADQ所致。
相反，在有些方面1B與1A/1A不同，1A/1A的特異性較低。原因推測(cè)是由于兩個(gè)表位之間的TGT，或更有可能的是KTTG橋。
然而，1B顯示與2種血清有反應(yīng)性，而1A/1A不顯示與這兩種血清有反應(yīng)性，因此這種肽也具有未在1A/1A中存在的交叉反應(yīng)元件。1B中的相關(guān)區(qū)域可能與KTITGMT序列有關(guān)。實(shí)施例4化合物的靈敏度和特異性比較化合物化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT化合物#2GKGSSIAADQNKGSSIAADQ化合物2-AGSGSGSGSGSGGVKGSSIAADQ化合物2LKASSAAFNLVGLIVKGSSIAADQ化合物2-6KKKKKKKKKKGSSIAAD化合物1/AXKTITGMGAVPTGTAAANYKT表4
1x CO＝定義為OD≥截留OD的陽(yáng)性，截留標(biāo)準(zhǔn)是標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清的1/10000稀釋度2x CO＝定義為OD≥2倍截留OD的陽(yáng)性，截留標(biāo)準(zhǔn)是標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清的1/10000稀釋度特異性＝[測(cè)試為陰性的真陰性動(dòng)物的數(shù)目/真陰性動(dòng)物的總數(shù)]x100靈敏度＝[測(cè)試為陽(yáng)性的真陽(yáng)性動(dòng)物的數(shù)目/真陽(yáng)性動(dòng)物的總數(shù)]x100測(cè)試了553份血清，其中198份來(lái)自實(shí)驗(yàn)感染了Chlamydophilaabortus或接種了這種生物體的動(dòng)物。由于只有153頭動(dòng)物隨后顯示了感染的任一證據(jù)(流產(chǎn)和/或排泄Chlamydophila abortus，根據(jù)臨床樣品的培養(yǎng)和/或MZN染色的檢測(cè))，因此使用兩種形式來(lái)測(cè)定靈敏度。一種認(rèn)為所有受過(guò)攻擊的動(dòng)物都是陽(yáng)性的；另一種認(rèn)為只有顯示臨床/微生物學(xué)感染證據(jù)的那些動(dòng)物是陽(yáng)性的。
獲得的結(jié)果例示了使用依照本發(fā)明的化合物時(shí)獲得的高度特異性和靈敏度。同樣，顯然所用化合物及其組合無(wú)疑提供了用于靈敏測(cè)定法的獨(dú)特試劑，用于檢測(cè)針對(duì)C.abortus的抗體的存在情況，而不會(huì)與由C.psittaci或C.pecorum誘導(dǎo)的抗體展示假陽(yáng)性反應(yīng)。
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序 列 表序列表<110>YAbA LimitedJones，Gareth E<120>用于檢測(cè)Chlamydophila abortus感染的化合物<130>PWC/P22056WO<140>PCT/GB01/00543<141>2001-02-09<150>GB 0003217.7<151>2000-02-11<160>76<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>135<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<220><221>位點(diǎn)<222>1..15，25..39，49..63，73..87，97..111，121..135<223>Xaa是接頭分子<220><221>位點(diǎn)<222>16<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>40<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>64<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>88<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>112<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>24<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>48<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>72<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>96<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>120<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)<223>接頭分子1-15的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>25..39<223>接頭分子25-39的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>49..63<223>接頭分子49-63的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>73..87<223>接頭分子73-87的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>97..111<223>接頭分子97-111的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>121..135<223>接頭分子121-135的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(40)..(48)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(64)..(72)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(88)..(96)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(112)..(120)<223>可以存在或缺失<400>1Xaa 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20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Xaa35 40 45Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa50 55 60Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa65 70 75 80Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa115 120 125Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa130 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135<210>31<211>135<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<220><221>位點(diǎn)<222>1..15，25..39，49..63，73..87，97..111，121..135<223>Xaa是接頭分子<220><221>位點(diǎn)<222>112<223>Xaa缺失或是Gly<220><221>位點(diǎn)<222>24<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>48<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>72<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>96<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>120<223>Xaa缺失或是Thr<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)<223>接頭分子1-15的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>25..39<223>接頭分子25-39的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>49..63<223>接頭分子49-63的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>73..87<223>接頭分子73-87的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>97..111<223>接頭分子97-111的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>121..135<223>接頭分子121-135的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(40)..(48)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(64)..(72)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(88)..(96)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(112)..(120)<223>可以存在或缺失<400>31Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys1 5 10 15Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa35 40 45Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys50 55 60Gly Ser SerIle Ala Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa65 70 75 80Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa115 120 125Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa130 135<210>32<211>135<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<220><221>位點(diǎn)<222>1..15，25..39，49..63，73..87，97..111，121..135<223>Xaa是接頭分子<220><221>位點(diǎn)<222>(24)<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>48<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>72<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>96<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>120<223>Xaa缺失或是Gln<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)<223>接頭分子1-15的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>25..39<223>接頭分子25-39的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>49..63<223>接頭分子49-63的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>73..87<223>接頭分子73-87的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>97..111<223>接頭分子97-111的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>121..135<223>接頭分子121-135的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(40)..(48)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(64)..(72)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(88)..(96)<223>可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(112)..(120)<223>可以存在或缺失<400>32Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys1 5 10 15Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa35 40 45Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys50 55 60Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa65 70 75 80Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys100 105 110Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa115 120 125Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa130 135<210>33<211>7<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>33Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys1 5<210>34<211>8<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>34Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys1 5<210>35<211>8<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>35Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr1 5<210>36<211>9<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>36Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr1 5<210>37<211>8<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>37Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp1 5<210>38<211>9<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>38Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln1 5<210>39<211>10<212>PRT<213>未知生物體<220><223>未知生物體的描述序列來(lái)源不確定<400>39Pro Thr Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys1 5 10<210>40<211>10<212>PRT<213>未知生物體<220><223>未知生物體的描述序列來(lái)源不確定<400>40Val Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln1 5 10<210>41<211>6<212>PRT<213>未知生物體<220><223>未知生物體的描述序列來(lái)源不確定<400>41Leu Val Gly Leu Ile Gly1 5<210>42<211>8<212>PRT<213>未知生物體<220><223>未知生物體的描述序列來(lái)源不確定<400>42Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln1 5<210>43<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>43Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Ser Ser Ile Ala1 5 10 15Ala Asp<210>44<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>44Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr1 5 10 15Lys Thr<210>45<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>45Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala1 5 10 15Asp Gln<210>46<211>48<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)<223>氨基酸1-15的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(25)..(39)<223>氨基酸25-39的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)，(25)..(39)<223>Xaa是Ser或Lys<400>46Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly15 10 15Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr35 40 45<210>47<211>48<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)<223>氨基酸1-15的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(25)..(39)<223>氨基酸25-39的任一或所有可以存在或缺失<220><221>位點(diǎn)<222>(1)..(15)，(25)..(39)<223>Xaa is Gly or Asn<400>47Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys1 5 10 15Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln35 40 45<210>48<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>48Ser Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr Lys Gly Thr Ala Ala Ala1 5 10 15Asn Tyr Lys Thr20<210>49<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>49Gly Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln AsnLys Gly Ser Ser Ile1 5 10 15Ala Ala Asp Gln20<210>50<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>50Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp1 5 10<210>51<211>12<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>51Gly Leu Ile Gly Val Lys Gly Ser Ser Ala Ala Asp1 5 10<210>52<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>52Lys Lys Lys Lys Lys Gly Leu Ile Gly Val Lys Gly Ser Ser Ile Ala1 5 10 15Ala Asp<210>53<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>53Ala Phe Asn Leu Val Gly Leu Ile Gly Val Lys Gly Ser Ser Ile Ala15 10 15Ala Asp<210>54<211>23<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>54Lys Ala Ser Ser Ala Ala Phe Asn Leu Val Gly Leu Ile Val Lys Gly1 5 10 15Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln20<210>55<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>55Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Ser Ser Leu Ala1 5 10 15Ala Asp<210>56<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>56Lys Lys Lys Lys Lys Gly Leu Ile Gly Val Lys Gly Ser Ser Leu Ala1 5 10 15Ala Asp<210>57<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>57Lys Thr Ile Thr Gly Met Gly Ala Val Pro Thr Gly Thr Ala Ala Ala1 5 10 15Asn Tyr Lys Thr20<210>58<211>21<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>58Lys Thr Ile Thr Gly Ays Lys Val Pro Thr Gly Thr Ala Ala Ala Asn1 5 10 15Tyr Lys Thr Pro Thr20<210>59<211>21<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>59Lys Thr Ile Thr Gly Lys Lys Lys Lys Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr1 5 10 15Lys Thr Pro Thr Asp20<210>60<211>21<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>60Lys Lys Lys Lys Lys Tys Lys Gly Val Lys Gly Ser Ser Tle Ala Ala1 5 10 15Asp Gln Leu Pro Asn20<210>61<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>61Thr Pro Thr Asp1<210>62<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>62Thr Pro Thr Gln1<210>63<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>63Gly Lys Lys Val1<210>64<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>64Gly Lys Lys Lys1<210>65<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>65Lys Ala Ser Ser Ala Ala Phe Asn Leu Val Gly Leu Ile1 5 10<210>66<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>66Lys Ala Ser Ser Ala1 5<210>67<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>67Glu Ala Thr Ala Leu Asp Thr Ser Asn Gly Val Lys Gly Ser Ser Ile1 5 10 15Ala Ala Asp Gln20
20<210>68<211>22<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>68Gly Val Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln Gly Val Lys Gly Ser1 5 10 15Ser Ile Ala Ala Asp Gln20<210>69<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>69Lys Thr Ile Thr Gly Met Thr Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr1 5 10 15Ile Thr Gly Met20<210>70<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>70Thr Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Lys Thr Thr Gly Thr Ala Ala Ala1 5 10 15Asn Tyr Lys Thr20<210>71<211>21<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>71Ala Thr Ala Leu Asp Thr Ser Asn Lys Phe Ala Thr Ala Leu Asp Thr1 5 10 15Ser Asn Lys Phe Ala20<210>72<211>11<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>72Gly Val Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala Asp Gln1 5 10<210>73<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>73Lys Thr Thr Gly1<210>74<211>7<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>74Lys Thr Ile Thr Gly Met Thr1 5<210>75<211>22<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>75Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Val Lys Gly Ser1 5 10 15Ser Ile Ala Ala Asp Gln20<210>76<211>17<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成序列<400>76Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Ser Ser Ile Ala Ala1 5 10 15Asp
權(quán)利要求
1.對(duì)一種或多種Chlamydophila abortus特異抗體具有結(jié)合親和力且具有如下一般通式的化合物(X)m-[A]-(X)n-[A]v-(X)p-[A]w-(X)q-[A]y-(X)r-[A]z-(X)s其中X是接頭分子；m、n、p、q、r和s代表接頭分子的數(shù)目且是0-15之間獨(dú)立的任何整數(shù)；v、w、y和z是獨(dú)立的0和1；且A獨(dú)立的選自下列序列i.TAAANYKii.GTAAANYKiii.TAAANYKTiv.GTAAANYKTv.KGSSIAADvi.KGSSIAADQ其中化合物不包括PTGTAAANYK、VKGSSIAADQ、LVGLIG、AFN、LP、TPT、TG、VK；且化合物不是GSS IAADQ。
2.權(quán)利要求1中所要求的化合物，且由18-24個(gè)氨基酸組成。
3.權(quán)利要求1或2中所要求的化合物，且由20-23個(gè)氨基酸組成。
4.權(quán)利要求1、2或3中所要求的化合物，其中X是認(rèn)為對(duì)表位反應(yīng)性沒(méi)有直接貢獻(xiàn)的氨基酸。
5.權(quán)利要求4中所要求的化合物，其中X是絲氨酸、賴氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、酪氨酸或精氨酸。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)中所要求的化合物，其中v是1且w、y和z都是0。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)中所要求的化合物，其中A是權(quán)利要求1中所定義的肽(iv)(GTAAANYKT)或是權(quán)利要求1中所定義的肽(vi)(KGSSIAADQ)。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)中所要求的化合物，且是[X]n-GTAAANYKT-[X]n-GTAAANYKT；其中X是S(絲氨酸)或K(賴氨酸)；或[X]n-KGSSIAADQ-[X]n-KGSSIAADQ；其中X是G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)。
9.權(quán)利要求8中所要求的化合物，且是i.化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT；或ii.化合物#2GKGSS IAADQNKGSS IAADQ。
10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)中所要求的化合物，且在氨基末端綴合生物素。
11.與權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)中所定義的化合物同系的化合物。
12.包含權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)中所定義的一種或多種化合物的化合物。
13.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)中所定義的化合物在醫(yī)學(xué)中的用途。
14.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)中所定義的化合物在受試者受C.abortus感染的診斷中的用途。
15.權(quán)利要求14中所要求的用途，其中診斷是在衍生自受試者的生物學(xué)樣品上進(jìn)行的。
16.權(quán)利要求14或15中所要求的用途，其中受試者是哺乳動(dòng)物，諸如人、綿羊、牛、山羊、豬或馬。
17.權(quán)利要求15或16中所要求的用途，其中生物學(xué)樣品是可能包含針對(duì)C.abortus的抗體的血液、唾液、粘液或其它體液、組織或任何可溶性樣品。
18.權(quán)利要求13-17任一項(xiàng)中所要求的用途，其中一起使用超過(guò)一種化合物。
19.權(quán)利要求14-18任一項(xiàng)中所要求的用途，其中所用化合物是[X]n-GTAAANYKT-[X]n-GTAAANYKT；其中X是S(絲氨酸)或K(賴氨酸)和[X]n-KGSSIAADQ-[X]n-KGSSIAADQ；其中X是G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)；其中n代表0-15之間獨(dú)立的任何整數(shù)。
20.權(quán)利要求19中所要求的用途，其中化合物是i.化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT；和ii.化合物#2GKGSS IAADQNKGSS IAADQ。
21.用于檢測(cè)體液樣品中的針對(duì)C.abortus的抗體的方法，包括下列步驟-使樣品接觸權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)中所定義的一種或多種化合物；并-檢測(cè)所述抗體與所述化合物的結(jié)合(如果有的話)。
22.權(quán)利要求21中所要求的方法，其中使用超過(guò)一種化合物。
23.權(quán)利要求21或22中所要求的方法，其中使樣品接觸下列化合物[X]n-GTAAANYKT-[X]n-GTAAANYKT；其中X是S(絲氨酸)或K(賴氨酸)和[X]n-KGSSIAADQ-[X]n-KGSSIAADQ；其中X是G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)；其中n代表0-15之間獨(dú)立的任何整數(shù)。
24.權(quán)利要求23中所要求的方法，其中化合物是i.化合物#1SGTAAANYKTKGTAAANYKT；和ii.化合物#2GKGSSIAADQNKGSSIAADQ。
25.權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)中所要求的方法，其中使用酶聯(lián)免疫吸收測(cè)定法(ELISA)(間接和競(jìng)爭(zhēng)形式)、血細(xì)胞凝集測(cè)定法、放射免疫測(cè)定法、乳汁凝集測(cè)定法、熒光極化測(cè)定法、各種類型的生物傳感器(包括安培計(jì)、電化學(xué)和用于檢測(cè)抗體或其復(fù)合物(包括免疫學(xué)復(fù)合物)的其它手段)及其它。
26.用于檢測(cè)C.abortus感染的診斷試劑盒，包含-權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)中所定義的化合物；和-用于檢測(cè)針對(duì)C.abortus的抗體與化合物的結(jié)合的至少一種試劑。
27.用于醫(yī)學(xué)的權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)中所定義的化合物或組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)Chlamydophila abortus抗體的特定亞群具有結(jié)合親和力的化合物。更具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及用于檢測(cè)Chlamydophilaabortus的化合物的使用。提議的化合物序列提供了用于檢測(cè)Chlamydophila abortus抗體亞群的獨(dú)特試劑，對(duì)于與動(dòng)物諸如綿羊、山羊和牛中的Chlamydophila pecorum和Chlamydophila psittaci和人中的沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)和肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae)的可能的交叉反應(yīng)而言，它具有極高的特異性。
文檔編號(hào)C07K14/295GK1406244SQ0180582
公開(kāi)日2003年3月26日 申請(qǐng)日期2001年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月11日
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