專利名稱：從海洋放線菌中得到的新吲哚并咔唑生物堿的制作方法
技術領域：
已經從產生斯太羅斯?jié)娏?staurosporine)的放線菌(CLCO-002)的肉湯培養(yǎng)基中分離出新吲哚并咔唑生物堿。其通過在菌株的控制條件下需氧發(fā)酵，并分離和純化其產物來生產。該化合物和發(fā)酵肉湯被證明具有抗幾種癌細胞系的明顯活性。
然而，本發(fā)明的另一個目的是提供藥物組合物，供需要使用該活性化合物治療的患者用藥。
微生物產品由于當代已經建立了很好的工業(yè)生產，引起了人們的關注。因此，本發(fā)明的另一個目標是從發(fā)酵的肉湯中生產活性化合物并分離、提純。
式(1)中R1和R2的定義中，烷基和烷氧基的烷基部分是直鏈或支鏈烷基，含1到6個碳原子諸如甲基、乙烷基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。
優(yōu)選R1和R2獨立地代表氫原子或含1到4個碳原子的烷基，特別是氫原子、甲基或乙基。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及4’-N-甲基-5’-羥斯太羅斯?jié)娏?IB-97224)和5’-羥斯太羅斯?jié)娏?IB-97225)，化學結構為 本發(fā)明也描述了獲得式(1)或可藥用的鹽的方法。這個方法包括培養(yǎng)能夠產生式(1)化合物的微生物菌株，從培養(yǎng)肉湯中回收這種化合物，和可選地將所回收的化合物成鹽。
產生IB-97224和IB-97225化合物的特別優(yōu)選方法包括在水性營養(yǎng)培養(yǎng)基中和可同化的碳氮源和鹽一起在可控浸沒需氧條件下培養(yǎng)能夠產生IB-97224和IB-97225化合物的微生物菌株。IB-97224和IB-97225化合物從培養(yǎng)的肉湯中回收。
優(yōu)選的培養(yǎng)物是菌株CLCO-002，它的化學、生物化學和形態(tài)特性表明它屬于放線菌。按照本發(fā)明其他的放線菌菌株也可以在本方法中使用。
如上所述，式(1)化合物特別是IB-97224和IB97225已經發(fā)現(xiàn)有很好的抗鼠和人類瘤細胞系的活性，包括P-388D，HT-29，A-549和SK-MEL-28。
因此，本發(fā)明也提供一種治療或預防哺乳動物惡性腫瘤的方法，包括給需要這樣治療的哺乳動物一定的有效量的如上說明的式(1)的化合物或可藥用的鹽。
本發(fā)明更進一步涉及如上述定義的式(1)的化合物或可藥用的鹽在用于制備用于治療或預防哺乳動物惡性腫瘤的藥物中的用途。
本發(fā)明也涉及含有式(1)的化合物或可藥用的鹽作為活性成分以及可藥用的載體或稀釋劑的藥物制品。
藥物組合物的例子包括含有合適成分的任何固體(藥片、藥丸、膠囊、顆粒等等)或液體(溶液、懸浮液或乳狀液)，適用于口服、局部或非腸道使用，它們可以含有這種純化合物或和載體或其他藥物活性化合物相結合。當非腸道用藥時這些組合物必需是無菌的。
藥物組合物的正確的劑量按照具體的制劑，使用的模式、具體的位置、患者和細菌或被醫(yī)治的腫瘤的不同進行調整。其他的因素象年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排泄速度、患者的狀況、藥物組合、反應敏感性和疾病的嚴重程度應加以考慮。在最大的容忍劑量內能夠連續(xù)或周期性的用藥。發(fā)明詳述生產有機體用于生產新的化合物的微生物優(yōu)選放線菌菌株，特別是放線菌菌株CLCO-002，保存在西班牙的西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心，Universityof Valencia，保藏編號是CECT-3347。這項保藏符合布達佩斯條約的規(guī)定，在本申請授權時公眾即可獲得該保藏物。
生物體從加那利群島的水中收集的無定形的海綿狀物質中分離獲得。
所有的培養(yǎng)在27℃下進行并記錄21天的試驗數(shù)據有機生物體的描述如下形態(tài)本項研究所用的培養(yǎng)基是ISP培養(yǎng)基No2、4、5和6(Shirlingand Gotlieb，1966)，ATCC培養(yǎng)基No 172(美國典型培養(yǎng)物保藏中心目錄，1989)，Czapek瓊脂(Atlas，1993)，Bennet瓊脂(Atlas，1993)，1.5％水瓊脂(Luedemann)。所有的培養(yǎng)基用50％的人造海水補充。在28℃生長21天后進行研究。觀察到若干橙色陰影。非氣生型菌絲形成。隨后菌絲分支，觀察到不溶性的色素。
生理學特征用ISP-9(Shirling & Gotlieb，1966)研究碳氮的利用。由于在規(guī)定培養(yǎng)基中CLCO-002的生長速率低，碳和氮的利用試驗表明有殘余生長，因此未能獲得清晰的試驗結果。采用含提高NaCl濃度的ATTC`s 172培養(yǎng)基測量NaCl抗性。鹽的最適濃度是1％。用7％的鹽沒有觀察到生長。
細胞的化學成分氨基酸用Hasegawa等(1983)的方法測量二氨基庚二酸。菌株CLCO-002的整個細胞水解產物中出現(xiàn)內消旋二氨基庚二酸的異構體。脂肪酸采用Van der Auwera等(1986)的方法確定FAMEs。FAME成分以及與其他類似菌株的成分比較在表1進行描述。
盡管保存的生物體是優(yōu)選的，但本發(fā)明不限制或局限于這種特殊的菌株或生物體。本發(fā)明人的目的是包括在本發(fā)明范圍內的其他的生物體、菌株和突變體。
表1TABLE 1菌株CLCO-002和其他放線菌菌株的FAME組成。組成的單位是總脂肪酸含量的百分數(shù)。
130 i-140 140 i-150 a-150 150 i-161 i-160 161 160 i-171 i-170 a-170 171170 i-181 i-180 cis-181 180CLCO-002 ＜1 ＜1 ＜116.91 3.946.71 ＜1 31.83＜1 ＜13.73 ＜1 ＜1 24.333.31＜1 ＜1 4.13 ＜1STALBUS ＜1 6.52＜19.88 22.92 ＜1 5.5025.29＜1 3.75 1.283.38 8.60 ＜1 ＜1 ＜1 1.09＜1 ＜1SPAMETH 1.21 10.34 ＜11.86 ＜1 4.30 ＜1 15.515.63 8.62 1.08＜1 ＜1 24.029.437.11＜1 4.60 1.04SPVIRIDO ＜1 4.041.10 18.94 2.714.89 ＜1 26.44＜1 4.43 ＜1 2.60 1.58 11.368.587.48＜1 ＜1 1.16AMCITRE ＜1 ＜1 3.18 ＜1 ＜1 1.03 ＜1 6.37 12.62 40 ＜1 ＜1 ＜1 ＜1 1.16＜1 ＜1 14.25 2.82APBRAZIL ＜1 3.15＜115.46 18.91 2.76 ＜1 19.072.15 1.79 ＜1 2.39 9.64 11.182.82＜1 ＜1 3.38 1.06AMPDIGIT ＜1 11.57 ＜111.21 9.96＜1 2.8734.23＜1 1.08 ＜1 1.28 5.08 4.39 1.64＜1 1.767.60 1.54AMYORIE ＜1 3.402.37 19.94 4.661.17 ＜1 11.855.59 18.41 ＜1 2.99 4.44 3.09 2.73＜1 ＜1 6.21 3.04MNCHALC ＜1 1.68＜18.91 2.291.53 1.1538.23＜1 1.88 1.492.32 2.25 5.43 6.9514.58 1.311.28 2.68MNECHCA ＜1 1.17＜16.97 1.242.81 ＜1 30.88＜1 2.29 1.634.11 1.68 12.154.907.23＜1 10.05 1.69MNFUSCA ＜1 ＜1 ＜126.56 6.53＜1 ＜1 8.58 ＜1 ＜17.3011.8913.252.90 3.373.59＜1 2.33 1.94SACCAER ＜1 3.061.35 14.41 8.621.04 5.6820.0713.84 6.16 4.552.20 5.31 2.02 ＜1 ＜1 ＜1 ＜1 1.43NOAFRI 1.51 5.433.35 4.62 ＜1 7.46 3.0922.182.69 5.15 2.35＜1 ＜1 8.15 4.7517.03 ＜1 ＜1 1.23MTSALMO ＜1 1.121.28 6.75 ＜1 7.83 7.5321.581.21 1.97 1.01＜1 1.07 11.585.5317.34 ＜1 ＜1 ＜1MTRUBRA ＜1 1.401.38 4.12 ＜1 3.14 7.2725.002.63 3.89 2.171.08 ＜1 6.84 4.9715.44 1.25＜1 1.61MTROSEO 2.03 3.655.14 3.86 ＜1 9.03 3.0212.313.46 6.95 1.17＜1 ＜1 13.514.4618.67 ＜1 1.77 ＜1AMROSEO ＜1 2.191.24 6.73 1.096.94 1.4322.212.21 3.61 2.741.03 ＜1 10.974.3317.84 ＜1 ＜1 ＜1MTFERRU 1.03 1.911.19 1.94 ＜1 6.43 4.1221.502.32 2.34 ＜1 ＜1 ＜1 23.515.7112.15 1.271.43 ＜1CLCO-002＝菌株CLCO-002；AMCITRE＝Actinomadura citrea DSM43461；AMPDIGIT＝Ampullariella digitata ATCC 15349；AMROSEO＝Actinomadura roseoviolacea DSM 43144；AMYORIE＝Amycolatopsis orientais DSM 40040<#s>APBRAZIL＝Actinoplanes braziliensis ATCC25844；MNCHALC＝Micromonospora chalcea ATCC 31395；MNECHCA＝Micromonosporaechinospora calichinensis NRRL 15839；MNFUSCA＝Micromonosporafusca NRRL B-3298；MTFERRU＝Microtetrasporaferruginea DSM 43553；MTROSEO＝Microtetraspora roseolaATCC33579；MTRUBRA＝Microtetraspora rubra ATCC 27031；MTSALMO＝Microtetraspora salmoneaATCC 33580；NOAFRI＝Nocardiopsis africana DSM 43748；SACCAER＝Saccharothrixaerocolonigenes NRRL B-3298；SPAMETH＝Streptosporangiumamethystogenes DSM 43179；SPVIRIDO＝Streptosporangiumviridogriseum ATCC 25242；STALBUS＝Streptomyces albus DSM40313發(fā)酵菌株CLCO-002，在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中在受控條件下培養(yǎng)可產生化合物IB-97224和IB-97225。該菌株在有氧和中溫條件下于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，優(yōu)選在22℃至35℃，pH在6.0到8.0之間。有許多種液體培養(yǎng)基可以用于培養(yǎng)有機物，有用的培養(yǎng)基含有可同化的碳源如淀粉，糊精，糖蜜，甘油，葡萄糖等，可同化的氮源如蛋白質類，蛋白水解產物，脫脂的谷類，玉米漿等，和有用的無陰離子和陽離子如鈉，鎂，鉀，銨，硫酸鹽，氯化物，磷酸鹽，碳酸鹽等。微量元素也可以被添加到其中。通風可以將空氣補充到發(fā)酵培養(yǎng)基中。攪拌是以機械轉子提供的。常規(guī)的發(fā)酵罐非常適合培養(yǎng)該微生物。為了增加生產和避免泡沫形成，發(fā)酵過程中可能需要添加營養(yǎng)和pH控制及消泡劑。
通過優(yōu)選的有機體生產這些化合物必需的步驟是從冷凍或凍干的菌絲體開始。原始的細胞在含有如上所述的成分的培養(yǎng)基的搖瓶中于中溫和好氧的條件下培養(yǎng)獲得菌絲體，這個過程可能需要重復幾次，收集的材料作為種子接種一個或幾個含有合適培養(yǎng)基的發(fā)酵罐，需要時這些發(fā)酵罐也可以用作種子，必要時，這一步驟可以重復幾次，或者它們可以用于生產階段，這取決于所需的發(fā)酵液體積。生產階段可以持續(xù)從幾天到超過一個星期，這取決于菌株、接種階段、溫度和其他的條件。一旦發(fā)酵達到了最高的產率，就可以收集用于分離這種新的化合物。
生產階段的培養(yǎng)基可以不同于接種所使用的培養(yǎng)基。表2列出了能夠用于接種和生產這些新化合物的典型培養(yǎng)基。
表2
這些化合物的生產能夠采用通過HPLC或其他足夠敏感的方法對整個肉湯的抗A-549或任何其他敏感細胞的分析進行監(jiān)測。
分離IB-97224和IB-97225生物堿IB-97224和IB-97225能夠采用合適的溶劑混合物如CHCl3∶CH3OH∶H2O通過萃取的方法從這些菌絲體分離。在底層活性被濃縮。合并兩次重復萃取獲得的萃取物并真空干燥。
從粗活性萃取物分離和純化IB-97224和IB-97225可以采用合適的常規(guī)層析技術的組合。
分餾可以通過餾分的抗癌活性或通過用濃硫酸中的香草醛顯色的TLC或采用光電二極管探測器的分析HPLC進行指導。HPLC在室溫下進行(Waters RCM 8×10，8C18 10μm柱)，使用乙腈-磷酸氫鈉0.025M pH＝3(75∶25)作為流動相，流速2ml/min，在290nm作圖。目標化合物的保留時間為3.92和3.29分鐘，分別對應于IB-97224和IB-97225。
下面給出的光譜數(shù)據能夠確定這些化合物是IB-97224和IB-97225。不同的原子采用如下的系統(tǒng)編號。采用下列縮寫紅外光譜w弱；m中；s強；br寬核磁共振光譜s單；d雙；t三；dd雙雙 4’-N-甲基-5’-羥基斯太羅斯?jié)娏?IB-97224)(R2＝Me)IR(KBr)νmax/cm-13406(s，br)，3070(m)，2925(s)，2852(m)，1915(w，br)，1664(s)，1583(s)，1450(m)，1415(m)，1391(s)，1351(s)，1319(s)，1281(s)，1249(s)，1236(m)，1223(m)，1181(m)，1150(m)，1117(s)，1103(s)，1066(s)，1018(m)，988(m)，887(w)，835(w)，816(w)，742(s)，698(w)，664(w)，636(w)，609(w).1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ/ppm9.43(1H，d，J 7.7Hz，C4H)，7.90(1H，d，J 7.7Hz，C8H)，7.76(1H，d，J 7.7Hz，C11H)，7.64(1H，d，J 7.7Hz，C1H)，7.53(1H，t，J 7.7Hz，C2H)，7.45(1H，t，J 7.7Hz，C10H)，7.38(1H，t，J 7.7Hz，C3H)，7.34(1H，t，J 7.7Hz，C9H)，6.52(1H，s，C6’H)，6.50(1H，s，N6H)，4.99(1H，s，C7H)，4.43(1H，d，J 9.9Hz，C5’H)，3.95(1H，s，C3H)，3.02(1H，d，J 9.9Hz.C4’H)，2.48(3H.s.CH3)，2.37(6H，s，N4’(CH3)2)，2.03(3H，s，CH3O).13C NMR(75MHz，CDCl3)，173.65(C5)，137.86(C11a)，137.12(C13a)，131.94(C7a)，130.64(C12a)，126.79(C12b)，126.13(C4)，125.46(C2)，124.94(C10)，124.54(C7c)，123.22(C4a)，121.49(C8)，120.43(C9)，119.98(C3)，118.89(C4c)，115.86(C4b)，114.14(C7b)，111.46(C11)，108.97(C1)，94.92(C2’)，91.54(C6’)，79.30(C3’)，69.50(C5’)，66.75(C4’)，58.36(CH3O)，45.79(C7)，41.67(N4’(CH3)2)，28.00(CH3).UV(75∶25 CH3CN/0.025 M Na2HPO4pH 3)，λmax/nm370，354，334，320，291，242，206.m/z(快原子轟擊)497.2(MH+).5’-羥基斯太羅斯?jié)娏?IB-97225)(R2＝H)IR(KBr)νmax/cm-13415(s，br)，3070(m)，2931(m)，2851(m)，1991(w，br)，1664(s)，1583(m)，1453(s)，1416(m)，1392(m)，1352(s)，1317(s)，1280(m)，1248(m)，1236(m)，1225(m)，1151(m)，1130(m)，1118(m)，1064(m)，1036(m)，1017(m)，973(w)，927(w)，896(w)，860(w)，836(w)，814(w)，772(m)，746(s)，651(w)，638(w).1H NMR 300MHz，CDCl3)，δ/ppm9.40(1H，d，J 7.4Hz.C4H)，7.89(1H，d，J 7.4Hz，C8H)，7.85(1H，d，7.4，C11H)，7.53(1H，d.J 8.1Hz，C1H)，7.44(2H，t，J 7.4Hz，C2H & C10H)，7.31(2H，t，J 7.4Hz，C3H & C9H)，6.49(1H，d，J 1.2Hz，C6’H)，6.43(1H，s，N6H)，4.98(1H，s，C7H)，4.26(1H，dd，J 6.8Hz，1.2Hz，C5’H)，4.14(1H，d，J 2.8Hz，C3’H)，3.09(1H，dd，J 6.8Hz，2.8Hz，C4’H)，2.71(3H，s，CH3O)，2.45(3H，s，CH3)，2.17(3H，s，CH3N4’).13C NMR(75MHz，CDCl3)，8/ppm173.81(C5)，138.86(C11a)，137.05(C13a)，132.17(C7a)，130.50(C12a)，126.89(C12b)，126.13(C4)，125.33(C2)，124.67(C10)，124.52(C7c)，123.24(C4a)，121.01(C8)，120.32(C9)，119.92(C3)，118.56(C4c)，115.64(C4b)，114.19(C7b)，113.50(C11)，108.10(C1)，92.37(C2’)，88.38(C6’)，80.14(C3’)，70.03(C5’)，60.11(C4’)，59.02(CH3O)，45.88(C7)，33.68(CH3N4’)，28.96(CH3).UV(75∶25 CH3CN/0.025 M Na2HPO4 pH 3)，λmax/nm370，354，334，320，291，242，206.m/z(快原子轟擊)483.2(MH+).
生物活性在小鼠白血病P-388DI，人類肺癌A-549，人類結腸癌HT-29和人類黑色素瘤SK-MEL-28的細胞培養(yǎng)物中體外測定了IB-97224和IB-97225的抗癌活性。測定采用了Bergeron，等(1984)，和Schroeder等(1981)描述的方法進行。
本發(fā)明將參照下述實施例進一步說明，這些實施例是為了理解本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。這里所報告的百分數(shù)除非特別指定，都是重量百分數(shù)。所有溫度用攝氏溫度。所有的培養(yǎng)都是在28℃和在搖床上的搖瓶中進行的。所有的培養(yǎng)基和容器都是已滅菌的，所有的培養(yǎng)過程都是無菌的。
種子向含有如前所述的100ml種子培養(yǎng)基的250cc搖瓶中接種冰凍培養(yǎng)物或斜面培養(yǎng)物(5％體積)。溫育48小時。用10％的第一階段種子接種含有500毫升相同培養(yǎng)基的2L燒瓶。再溫育48小時。
發(fā)酵用第二階段培養(yǎng)的2.5L在75L發(fā)酵罐中接種50L的生產用的培養(yǎng)基。用400rpm的攪拌速度和0.5V/V.M通氣發(fā)酵96小時。
通過對全肉湯的抗A-549分析或采用HPLC來監(jiān)測第二階段代謝生產。
分離收集的10L全肉湯過濾分離生物物質和其他固體。菌絲體被CHCl3∶CH3OH∶H2O(2∶1∶1)溶劑混合物(2.4l)萃取兩次，在低層濃縮活性物質。有機溶劑真空濃縮、干燥獲得3.2g的粗萃取物。萃取物在硅膠凝膠“真空反射”柱上層析。在用正乙烷-乙酸乙酯按1∶1混合洗脫后，這根柱用乙酸乙酯-甲醇梯度展開。洗脫過程通過抗A-539細胞的細胞毒性檢測，并用TLC(氯仿-甲醇9∶1)和分析反相HPLC-光電二極管分析進行監(jiān)測。采用硅膠柱層析進一步提純活性部分(250mg)并用氯仿-甲醇92∶8和95∶5洗脫活性物質。在C18柱反相上層析分離，并用甲醇-水65∶35洗脫得到12mg的斯太羅斯?jié)娏郑?mg的IB-97224和8mg的IB-97225。
生物活性所使用的抗癌細胞是P-388D1(從DBA/2小鼠中得到的淋巴瘤懸浮培養(yǎng)物)，A-549(人類大紅細胞肺癌單層培養(yǎng)物)，HT-29(人類結腸癌的單層培養(yǎng)物)，和SK-MEL-28(人類黑色素瘤的單層培養(yǎng)物)。P-388D1細胞以每孔1×104細胞在1ml含有指定濃度藥物的MEM 5FCS中接種于16mm的孔中。沒有藥物的培養(yǎng)物接種作為對照生長，以確保細胞保持在指數(shù)生長階段。所有的檢測被重復。在37℃含10％CO2，濕度為98％的氣氛中培養(yǎng)三天后，比較有藥的孔和沒有藥的對照生長情況來計算IC50。在1ml的指定濃度藥物MEM5FCS中的A-549，HT-29和SK-MEL-28細胞以每孔2×104細胞接種16mm的孔中。沒有藥物的一組培養(yǎng)基接種作為對照生長，以確保細胞處于指數(shù)生長階段。所有的檢測被重復。在37℃含10％CO2，濕度為98％的氣氛中培養(yǎng)三天后，各孔用0.1％的結晶紫染色。通過比較有藥物的孔和沒有藥物的對照孔的生長情況來計算IC50。表3是IC50(μM)表示的活性。
表3細胞系 IC50(μM)IB-97224IB-97225P388D10.040.02A-549 0.002 0.002HT-29 0.004 0.004SK-MEL-28 0.004 0.002參考文獻本文引用下述參考資料，它們被引用作為參考。Nishizuka，Y.，Nature 334661-665，1988Nishizuka，Y.，Nature 308693-698，1984Shirling B.E.，and Gotlieb D.，Int.J Syst.Bacteriol.16313-340，1966American Type Culture Catalog 17th edition，1989.Rockville，Maryland.U.S.A.Atlas R.M.，Handbook of Microbiological Media，1993 CRC Inc.Boca Raton，F(xiàn)lorida.USALuedemann G.M.Personal CommunicationHasegawa T.，Takizawa M.，and Tanida S.，J.Gen.Appl.Microbiol.29319-322，1983Van der Auwera P.，Labbe M.，Mayberry W.R.，F(xiàn)erguson K.P.，and Lambe D.W.Jr.，J.Microbiol.Methods 4265-275，1986Bergeron et al.，Biochem.Biophys.Res.Comm.，121848-854，1984Schroeder et al.，J.Med.Chem.，241078，198權利要求
1.式(1)的化合物和其可藥用的鹽 其中R1是氫原子、含1到6個碳原子的烷基或含1到6個碳原子的烷氧基；R2是氫原子，含1到6個碳原子的烷基或含1到6個碳原子的烷氧基。
2.權利要求1的化合物，其中R1是氫原子或含1到4個碳原子的烷基。
3.權利要求2的化合物，其中R1是氫原子、甲基或乙基。
4.權利要求3的化合物，其中R1是氫原子。
5.權利要求1的化合物，其中R2是氫原子或含1到4個碳原子的烷基。
6.權利要求5的化合物，其中R2是氫原子、甲基或乙基。
7.權利要求6的化合物，其中R2是氫原子或甲基。
8.權利要求1的化合物，其中R1是氫原子或含1到4個碳原子的烷基，R2是氫原子或含1到4個碳原子的烷基。
9.權利要求8的化合物，其中R1是氫原子、甲基或乙基R2是氫原子、甲基或乙基。
10.權利要求1的化合物，其中R1是氫原子，R2是甲基。
11.權利要求1的化合物，其中R1和R2都是氫原子。
12.生產權利要求1到11任一項中的式(1)的化合物或其可藥用的鹽的方法，包括培養(yǎng)培養(yǎng)能夠產生式(1)化合物的微生物菌株，從培養(yǎng)肉湯中回收式(1)化合物，和可選地使回收的化合物成鹽。
13.權利要求12的方法，其中微生物是一種放線菌菌株。
14.權利要求13的方法，其中微生物是放線菌菌株CLCO-002(CECT-3347)。
15.含有權利要求1到11任一項中的式(1)化合物或其可藥用的鹽作為活性成分以及可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物。
16 權利要求1到11任一項的式(1)化合物或其可藥用的鹽作為藥物的用途。
17 權利要求1到11任一項的式(1)化合物或其可藥用的鹽用于制備治療或預防哺乳動物惡性腫瘤的藥物中的用途。
18 治療或預防哺乳動物惡性腫瘤的方法，包括向需要治療的哺乳動物給藥有效量的權利要求1到11任一項定義的式(1)化合物或其可藥用的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供式(1)的化合物和其可藥用鹽,其中R
文檔編號C07D498/22GK1371379SQ00812158
公開日2002年9月25日 申請日期2000年6月28日 優(yōu)先權日1999年6月28日
發(fā)明者D·加西亞格拉瓦洛斯, J·佩茲, L·M·坎多, F·羅梅洛, F·埃斯普里戈 申請人:拜奧馬研究所有限公司