專利名稱：一種slco1b3基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種SLC01B3 基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多妝0ATP1B3 (又稱 organic anion-transporting polypeptide8，0ATP8，編碼基因SLC01B3)，OATP1B3藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體在耐藥和藥代動(dòng)力學(xué)方面起到非常重要的作用，它與藥物的耐受、吸收、分布、排泄、藥效發(fā)揮、以及藥物毒性作用等密切相關(guān)。有研究表明，SLC01B3基因多態(tài)性與其編碼蛋白的活性密切相關(guān)。目前，對SLC01B3基因多態(tài)性進(jìn)行檢測和分析的方法很少，主要有直接測序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突變造成的限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的改變，如位點(diǎn)丟失或產(chǎn)生新位點(diǎn)，通過PCR擴(kuò)增某一特定片段，再用限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測酶切位點(diǎn)改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒有產(chǎn)生新酶切位點(diǎn)的基因突變檢測。再次，以上這些方法都存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。本發(fā)明目標(biāo)檢測的SLC01B3基因突變位點(diǎn)(多態(tài)性位點(diǎn))，如表所示
權(quán)利要求
1.一種SLC01B3基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有(A).針對SLC01B3基因不同多態(tài)性位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物序列組成,所述特異性引物序列為針對T182G位點(diǎn)的SEQ IDN0. 5和SEQ IDN0. 6 ;和/或針對G77A位點(diǎn)的 SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 4 ；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 12，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對；(C).用于擴(kuò)增出需要檢測的、具有相應(yīng)多態(tài)性位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC01B3基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為針對T182G位點(diǎn)的SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 14 ;和/或針對G77A位點(diǎn)的SEQ IDNO. 15 和 SEQ IDN0. 16。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC01B3基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對T182G位點(diǎn)的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 5組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDN0. 6組成的序列；和/或針對G77A位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 7組成的序列及由SEQID NO. 4和SEQ ID NO. 8組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC01B3基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是(A)所述ASPE引物為針對T182G位點(diǎn)的由SEQIDN0. I和SEQ IDN0. 5組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 6組成的序列；和/或針對G77A位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 3和SEQ IDN0. 7組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 8組成的序列；(B)有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 12，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對；(C).所述擴(kuò)增引物為:針對T182G位點(diǎn)的SEQID NO. 13和SEQ ID NO. 14 ;和針對G77A位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的SLC01B3基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個(gè)T。
6.用于SLC01B3基因多態(tài)性檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物序列為針對 T182G 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 5 和 SEQ ID NO. 6 ;和 / 或針對 G77A 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 7 和 SEQIDN0. 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種SLCO1B3基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為針對T182G位點(diǎn)的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；和/或針對G77A位點(diǎn)的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明所提供的檢測液相芯片的檢測結(jié)果與測序法的吻合率高達(dá)100％，實(shí)現(xiàn)多個(gè)突變位點(diǎn)的野生型和突變型并行檢測。
文檔編號(hào)C12N15/11GK102952872SQ20111025166
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月29日
發(fā)明者許嘉森, 何嘉英 申請人:廣州益善生物技術(shù)有限公司