Rad51l1基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種RAD51L1基因突變檢測(cè)液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對(duì)C167T位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，針對(duì)A76T位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，針對(duì)T187G位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或針對(duì)T99G位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明所提供的檢測(cè)液相芯片的檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序法的吻合率高達(dá)100％，實(shí)現(xiàn)多個(gè)突變位點(diǎn)的野生型和突變型并行檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】RAD51L1基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種RAD51L1基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片。
【背景技術(shù)】
[0002]RAD51 樣 I (RAD51_likel，RAD51L1)也稱(chēng)為 hREC2 或者 RAD51B，位于 14 號(hào)染色體14q23-24的長(zhǎng)臂上，具體位于14號(hào)染色體68286495到69062737堿基對(duì)之間，RAD51L1基因是編碼修復(fù)雙鏈DNA斷裂的一種酶，但是這種基因的過(guò)度表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞周期Gl延遲和細(xì)胞凋亡，這表明這種蛋白質(zhì)在DNA損傷時(shí)發(fā)揮一定的作用。RAD51L1編碼的蛋白質(zhì)是Rad51蛋白家族的成員。RAD51家族成員對(duì)于同源重組DNA修復(fù)是不可缺少的保守蛋白，在DNA復(fù)制過(guò)程中，參與雙鏈DNA斷裂的同源重組修復(fù)途徑。另外，RAD51L1基因發(fā)生的染色體變異與肺軟骨樣錯(cuò)構(gòu)瘤和子宮平滑肌瘤的發(fā)生有相關(guān)性，而且RAD51L1基因多態(tài)性會(huì)增加乳腺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。
[0003]目前，RAD51L1基因突變檢測(cè)方法主要有=Illumina光纖微珠芯片技術(shù)、微陣列技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù)，雖然Illumina光纖微珠芯片技術(shù)是高靈敏度和精確性的高通量檢測(cè)系統(tǒng)，但是自動(dòng)化程度低，手工操作比較多，難以滿足實(shí)際應(yīng)用的需要，微陣列技術(shù)存在成本昂貴、復(fù)雜、檢測(cè)靈敏度較低、重復(fù)性差、分析范圍較狹窄，探針的合成與固定比較復(fù)雜等問(wèn)題，另外，由于雜交位于固相表面，有一定程度的空間阻礙作用。熒光定量PCR技術(shù)靈敏度高、特異性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高的特點(diǎn)，但存在樣品易污染、假陽(yáng)性率高的缺點(diǎn)，且每次只能檢測(cè)一種突變類(lèi)型，同樣不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。
[0004]本發(fā)明目標(biāo)檢測(cè)的RAD51L1基因突變位點(diǎn)，如表所示:
【權(quán)利要求】
1.一種RAD51L1基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征是，包括有: (A).針對(duì)RAD51L1基因不同突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物對(duì):每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對(duì)C167T位點(diǎn)的SEQ ID N0.9及SEQ ID N0.10，針對(duì)A76T位點(diǎn)的SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，針對(duì) T187G 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或針對(duì) T99G 位點(diǎn)的 SEQID N0.15 及 SEQ ID N0.16 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID N0.1 ~SEQID N0.8 ； (B).有不同ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID N0.17~SEQ ID N0.24，且所述ant1-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)； (C).用于擴(kuò)增出需要檢測(cè)的、具有相應(yīng)突變位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的RAD51L1基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為:針對(duì) C167T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.25 及 SEQ ID N0.26，針對(duì) A76T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.27 及SEQ ID N0.28，針對(duì) T187G位點(diǎn)的 SEQ ID N0.29 及 SEQ ID N0.30，和 / 或針對(duì) T99G位點(diǎn)的SEQ ID N0.31 R SEQ IDN0.32。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的RAD51L1基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述ASPE引物對(duì)為:針對(duì)C167T位點(diǎn)的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.9組成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ IDN0.10組成的序列，針對(duì)A76T位點(diǎn)的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.11組成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.12組成的序列，針對(duì)T187G位點(diǎn)的由SEQ ID N0.5和SEQID N0.13組成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.14組成的序列，和/或針對(duì)T99G位點(diǎn)的由SEQ ID N0.7和SEQ IDN0.15組`成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.16組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的RAD51L1基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征在于，所述間隔臂為5 — 10個(gè)T。
5.用于RAD51L1基因突變檢測(cè)的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物為:針對(duì)C167T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，針對(duì) A76T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.11 及 SEQ IDN0.12，針對(duì) T187G 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或針對(duì) T99G 位點(diǎn)的 SEQ IDN0.15 及 SEQID N016。
【文檔編號(hào)】C40B40/06GK103849939SQ201210512190
【公開(kāi)日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月4日
【發(fā)明者】陳昌華, 許昌有 申請(qǐng)人:益善生物技術(shù)股份有限公司