具有抑菌能力的益生菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及屬于微生物病害控制領(lǐng)域，具體的說是一種具有抑菌能力的益生菌。益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacter?ludwigii-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCC?No:7814。本發(fā)明益生菌均從健康牙鲆的腸道內(nèi)分離獲得。益生菌的純培養(yǎng)物對水產(chǎn)病原菌如燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、鰻弧菌具有較強的抑制效果。亦可抑制已知為人類病原菌的白色念球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的生長。對氨芐青霉素具有抗性。其純培養(yǎng)物或組合物可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖類病害的防控及新型抗菌物質(zhì)的開發(fā)，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】具有抑菌能力的益生菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及屬于微生物病害控制領(lǐng)域，具體的說是一種具有抑菌能力的益生菌?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]益生菌(Probiotics)是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體或動物腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。其主要通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用。它具有改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，抑制病原菌，生成營養(yǎng)物質(zhì)，提高機體免疫力，消除致癌因子，降低膽固醇和血壓，改善乳糖消化性等功能。Fuller于1989年首次給益生菌下定義:“益生菌是通過改善腸道菌群平衡而對宿主健康產(chǎn)生有益作用的活菌添加劑”。
[0003]人類生活中早已廣泛應(yīng)用的益生菌包括醋酸梭菌、乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、放線菌、酵母菌等。隨著微生物防害的方法的發(fā)展，特別是益生菌在取代傳統(tǒng)抗生素的使用的前景，使得益生菌及其制劑越來越多的被應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖類的益生菌及其制劑主要分為共兩類:①單一制劑，如酵母菌、光合細(xì)菌、乳酸菌、乳酸桿菌、乳酸乳球菌、熒光假單胞菌、芽孢桿菌等。②復(fù)合制劑，如美菌方、復(fù)合型活性生物凈水劑等，主要有硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌、枯草桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、假單胞菌、糞鏈球菌、酵母菌等菌株組成。該類益生菌群由定向篩選的有益菌株配合而成，能夠改善水產(chǎn)動物體內(nèi)的微生態(tài)平衡，刺激機體的免疫系統(tǒng)，拮抗致病微生物，降解有機廢物，從而減少疾病發(fā)生，促進(jìn)水產(chǎn)動物生長發(fā)育，改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境。大量研究與實踐證明，益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖的應(yīng)用中起到了良好的效果，如從蝦、牙鲆等動物體內(nèi)分離得到的多株益生菌，從而制成的微生物復(fù)合菌液可以改良底質(zhì)，穩(wěn)定水質(zhì)，是保證養(yǎng)殖成功的重要技術(shù)。由于沒有再施用化學(xué)藥劑，因而生產(chǎn)出來的水產(chǎn)品是比較完全和無污染的綠色食品，并可避免水產(chǎn)品產(chǎn)生所謂的抗藥性。多年連續(xù)使用菌液的水體必定能形成有效微生物菌群的生態(tài)優(yōu)勢，達(dá)到水環(huán)境的良性循環(huán)，保證對水產(chǎn)品養(yǎng)殖的持續(xù)發(fā)展。
[0004]益生菌的分離一般是通過采集大量不同的菌株，在體外進(jìn)行選擇性培養(yǎng)或抗菌實驗獲得。Gatesoupe的綜述中詳細(xì)地列出了乳酸菌選擇性培養(yǎng)基的原則和方法。Sugita等人在7種近海魚類腸道中分離出10055株菌株進(jìn)行抗菌實驗，并選擇出優(yōu)良的益生菌株芽孢桿菌。后來也出現(xiàn)了分離鑒定的新技術(shù)，例如，Vandenberghe等人對在凡納濱對奸養(yǎng)殖中常見的菌株Vibro harveyi進(jìn)行了全序列的AFLP指紋圖譜分析,從而對其遺傳特征進(jìn)行分析。Spanggard等人同時采用了傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)分離與16s rDNA序列測定法對虹鱒腸道菌群進(jìn)行鑒別。
[0005]隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展。工廠化、高密度養(yǎng)殖造成的病害問題日益突出。每年因水產(chǎn)病害造成的損失多大數(shù)百億元。而治療水產(chǎn)動物的疾病，常規(guī)仍廣泛采用化學(xué)治療法，抗生素的濫用使水體細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性及藥物殘留，間接危害了人類的健康。因此，越來越多的專家開始關(guān)注于利用自然環(huán)境中有益微生物對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的生物修復(fù)，以此來取代抗生素的使用，這樣不僅節(jié)約了費用，還不會產(chǎn)生二次污染，而且還能將剩余餌料、排泄物及其他有害物質(zhì)分解轉(zhuǎn)化，使水質(zhì)保持良好的狀態(tài)，使養(yǎng)殖生物處于健康水平。因此，有益微生物對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的生物修復(fù)技術(shù)的研究和開發(fā)具有極其廣闊的前景，在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用也會越來越廣泛，同時帶來更大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的在于提供一種具有抑菌能力的益生菌及其應(yīng)用。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0008]一種具有抑菌能力的益生菌，益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacterludwigi1-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCCNo:7814 ;保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
[0009]所述益生菌可用于制備水產(chǎn)病原菌或人類細(xì)菌的抗菌藥物。
[0010]所述水產(chǎn)病原菌為燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌或鰻弧菌；人類細(xì)菌為人類病原菌如白色念球菌、金黃色葡萄球菌或肺炎克雷伯氏菌。
[0011]一種抑制有害治病細(xì)菌生長組合物，抑制有害治病細(xì)菌生長組合物為權(quán)利要求1所述的益生菌或是益生菌的培養(yǎng)物。
[0012]所述組合物可用于制備水產(chǎn)病原菌或人類細(xì)菌的抗菌藥物。
[0013]本發(fā)明所具有的優(yōu)點:
[0014]本發(fā)明益生菌均從健康牙鲆的腸道內(nèi)分離獲得。益生菌的純培養(yǎng)物對水產(chǎn)病原菌如燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、鰻弧菌具有較強的抑制效果。亦可抑制已知為人類病原菌的白色念球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的生長。對氨芐青霉素具有抗性。其純培養(yǎng)物或組合物可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖類病害的防控及新型抗菌物質(zhì)的開發(fā)，具有良好的應(yīng)用前景。
[0015]路德維希腸桿菌(Enterobacter ludwigii)PC88,在TSB固體平板上,單菌落直徑為1.5_左右，圓形，淺黃色，半透明，凸出培養(yǎng)基表面，有光澤。其主要抑菌活性參見表1?？股乜剐詤⒁姳?。
[0016]表1抑菌活性分析
【權(quán)利要求】
1.一種具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacterludwigi1-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCCNo:7814。
2.按權(quán)利要求1所述的具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:所述益生菌可用于制備水產(chǎn)病原菌或人類細(xì)菌的抗菌藥物。
3.按權(quán)利要求2所述的具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:所述水產(chǎn)病原菌為燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌或鰻弧菌；人類細(xì)菌為人類病原菌如白色念球菌、金黃色葡萄球菌或肺炎克雷伯氏菌。
4.一種抑制有害治病細(xì)菌生長組合物，其特征在于:抑制有害治病細(xì)菌生長組合物為權(quán)利要求1所述的益生菌或是益生菌的培養(yǎng)物。
5.按權(quán)利要求4所述的抑制有害治病細(xì)菌生長組合物的應(yīng)用，其特征在于:所述組合物可用于制備水產(chǎn)病原菌或人`類細(xì)菌的抗菌藥物。
【文檔編號】A61P31/10GK103525721SQ201310404743
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】焦緒棟, 楊少麗, 秦松 申請人:中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所