專利名稱:一株水貂源屎腸球菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一株從水貂體內(nèi)分離得到的屎腸球菌,并特別涉及其在毛皮動(dòng)物日糧 中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
微生態(tài)制劑是通過改善寄主腸道菌群平衡而發(fā)揮有益作用的活的益生菌制劑,以 其綠色安全、無毒副作用、無殘留的優(yōu)點(diǎn)逐步成為替代抗生素類添加劑的主力軍。腸球菌屬 細(xì)菌在自然界中分布很廣,在一些蔬菜和植物中常見,也是人和動(dòng)物消化道內(nèi)正常存在的 一種微生物,主要定植在回腸和結(jié)腸部位。腸球菌作為益生菌的應(yīng)用主要集中在糞腸球菌 和屎腸球菌,屎腸球菌屬于乳酸菌,由于它生長速度快,有較好的黏附能力,能產(chǎn)生乳酸及 一些抗菌物質(zhì),被廣泛的用作為益生菌制劑。研究表明屎腸球菌組成的益生菌可提高幼年 畜禽的體增重,提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率,改善飼料報(bào)酬,減少腹瀉比率,緩解應(yīng)激狀況,降低死 亡率。腸球菌除具備以上功能外,還可直接參與膽固醇的代謝,并對(duì)異常代謝進(jìn)行調(diào)整,使 之恢復(fù)正常。腸球菌作為微生態(tài)制劑被廣泛的應(yīng)用于肉雞、育肥豬、育肥牛、仔豬和奶牛生 產(chǎn)中。此外,微生態(tài)制劑對(duì)機(jī)體有明顯的免疫促進(jìn)作用,可以促進(jìn)新生兒腸道免疫系統(tǒng)的發(fā) 育,也可以促進(jìn)腸道黏膜局部和系統(tǒng)免疫功能,對(duì)特異性和非特異性免疫應(yīng)答均有調(diào)節(jié)作 用,維持機(jī)體在健康狀態(tài)時(shí)免疫功能的正常水平。盡管益生菌具有以上眾多免疫調(diào)節(jié)作用, 但對(duì)菌種來說,不僅種屬之間免疫效果有差異,而且菌株與菌株之間也有不同。此外,攝入 時(shí)間、供給方式和添加量等方面對(duì)免疫調(diào)節(jié)效果也有影響。宿主也因品種、年齡、生理狀況、 生活環(huán)境的差異,而產(chǎn)生不同的效果。屎腸球菌在環(huán)境中廣泛存在,并且屬于腸道共生菌,在很多動(dòng)物新出生的2 3d 內(nèi)占優(yōu)勢(shì)地位,并且是一種兼性厭氧的乳酸菌,非常適合于生產(chǎn)和應(yīng)用。目前市場(chǎng)上已有很 多產(chǎn)品中包含屎腸球菌菌株,如韓國的“媽咪愛”,德國和瑞典生產(chǎn)的益生菌制品Ventrux、 Bioflorin和Fiormil等,其活菌數(shù)大約為108_9個(gè)/g產(chǎn)品,目前含屎腸球菌的制品也已被 廣泛的應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中,如韓國生產(chǎn)的飼料添加劑“優(yōu)比他”等。圍產(chǎn)期奶牛飼喂含有屎 腸球菌的直接飼用微生物能夠促進(jìn)草料在瘤胃中消化,增加產(chǎn)奶量。肉牛飼喂含有屎腸球 菌的直接飼用微生物能夠促進(jìn)肉牛適應(yīng)高精料日糧,防止酸中毒。應(yīng)用得當(dāng)?shù)氖耗c球菌不 僅可以促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收,降低血清膽固醇含量,維持腸道菌群平衡,還可以調(diào)節(jié)機(jī)體 免疫功能,刺激胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官的發(fā)育,增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性,活化腸 道相關(guān)淋巴組織,促進(jìn)免疫球蛋白A的生成,調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。關(guān)于乳酸菌添加劑,在毛皮動(dòng)物生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用,國內(nèi)外研究較少,本發(fā)明基 于益生菌添加劑的益生作用效果,提出了一株來源于毛皮動(dòng)物體內(nèi)的安全,穩(wěn)定,高活性的 乳酸菌,并對(duì)其優(yōu)勢(shì)作用進(jìn)行檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容
從健康成年水貂腸道內(nèi)分離乳酸菌,取小腸內(nèi)容物20g,加入IOOml無菌水中,搖床震蕩30min,使顆粒物質(zhì)充分溶解,梯度稀釋,利用傾注培養(yǎng)法進(jìn)行分離培養(yǎng),37°C培養(yǎng) 72h選擇具有溶鈣圈的菌落,采用平板劃線的方式純化,純化3-4代,鏡檢,將純化后的乳酸 菌接入MRS液體培養(yǎng)基中,檢測(cè)其微生物學(xué)特性,如形態(tài)學(xué)、生理學(xué)特性(表1)以及糖分解 代謝(表幻的能力,檢測(cè)其體外培養(yǎng)對(duì)膽固醇的降解功能(表幻。進(jìn)行小鼠安全性(表 4)檢測(cè)以及對(duì)水貂生產(chǎn)性能(表幻的影響。該屎腸球菌MDF1104已于2010年10月21日于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普 通微生物中心(地址中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),中國科學(xué)院微生物研究所) 保藏,保藏號(hào)CGMCC No. 4237。其分類命名為屎腸球菌,拉丁名Enterococcusfaecium。
圖1屎腸球菌MDF1104在體外培養(yǎng)條件下對(duì)膽固醇的降解,橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時(shí)間 (單位小時(shí)),縱坐標(biāo)為降解率(% )。下面結(jié)合實(shí)施例和圖進(jìn)一步說明本發(fā)明實(shí)施例I屎腸球菌MDF1104形態(tài)學(xué)觀察、顯微鏡檢以及生理生化指標(biāo)檢測(cè)無菌條件下用接種環(huán)挑取培養(yǎng)18_24h的屎腸球菌MDF1104,涂于干凈的載玻片 上,制片,革蘭氏染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)及染色結(jié)果觀察。無菌條件下將屎腸球菌接種于相應(yīng)的培 養(yǎng)基或培養(yǎng)條件下,進(jìn)行生理生化指標(biāo)的檢測(cè)觀察,檢測(cè)結(jié)果見表1表1屎腸球菌MDFl 104形態(tài)學(xué)與理化試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種屎腸球菌(Enterococcus faecium)MDFl 104,保存編號(hào) CGMCC No. 4237。
2.根據(jù)權(quán)利要求1,所述的乳酸菌分離自水貂體內(nèi),體外培養(yǎng)生長迅速,可廣泛利用碳 水化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的屎腸球菌MDF1104,具有膽固醇降解功能。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的屎腸球菌MDFl104,通過小鼠安全性檢測(cè),可以提高小鼠 采食量,增加日增重及提高免疫器官指數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的屎腸球菌MDFl104,可以提高水貂日采食量,體增重及日 增重,增加免疫器官重量。
6.根據(jù)權(quán)利要求3、4所述的屎腸球菌MDF1104,可以與其他常規(guī)載體組合,具有降低動(dòng) 物血清膽固醇的功能。
7.根據(jù)權(quán)利要求4、5、6所述,屎腸球菌與其他常規(guī)載體混合后加入毛皮動(dòng)物日糧中, 具有提高動(dòng)物生產(chǎn)性能的功能。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述,一種飼料預(yù)混料,飼料預(yù)混料含有權(quán)利要求1所述屎腸球菌 MDFl104。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種屎腸球菌菌株及其應(yīng)用。具體涉及的屎腸球菌MDF1104,專利保藏號(hào)CGMCC No.4237。還涉及屎腸球菌MDF1104在碳水化合物發(fā)酵,膽固醇降解方面的應(yīng)用;尤其涉及屎腸球菌MDF1104單獨(dú)應(yīng)用或與常規(guī)載體組合可以增加水貂采食量,日增重,增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能,并且可以預(yù)防或治療水貂季節(jié)性腹瀉。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102093967SQ20101056961
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月2日
發(fā)明者劉晗璐, 劉柏陽, 孫偉麗, 常忠娟, 李丹麗, 李光玉, 楊琛杰, 王凱英, 趙家平, 趙靖波, 鐘偉 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所